Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.07) на тему:Защитное действие антиспермоагглютинирующих сывороток в средах для замораживания спермы барана
- Ученая степень
- ВАК РФ
- 16.00.07
Оглавление диссертации Дьякова, Светлана Петровна :: 1984 :: Ставрополь
БВВДНИЕ.
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1. Иммунобиологические свойства спермиев.
1.2. Локализация антигенов в спермиях.
1.3. Роль иммунных факторов в снижении оплодотворяющей способности спермы.
1.4. Пути нейтрализации спермоантител.
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1. Материалы и методы.
2.2. Результаты исследований.
2.2.1. Лабораторные опыты.
2.2.1.1. Иммунологическая активность специфических кроличьих антисывороток в зависимости от способов их получения.
2.2.1.2. Изучение локализации антигенов в спермиях после глубокого охлаждения.
2.2.1.3. Изучение защитного действия антиспермоагглютинирую-щих сывороток при замораживании спермы барана.
2.2.1.4. Замораживание спермы барана в синтетической среде с антисывороткой кролика.
2.2.2. Научно-производственные опыты.
2.2.2.1. Расчёт экономической эффективности использования в средах для замораживания спермы барана специфической кроличьей антисыворотки.
2.3. Обсуждение результатов опытов.
3. ВЫВОДЫ.
4. ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРАКТИКИ.
Введение диссертации по теме "Ветеринарное акушерство и биотехника репродукции животных", Дьякова, Светлана Петровна, автореферат
Новые задачи дальнейшего развития животноводства и повышения его продуктивности поставил ХХУ1 съезд КПСС. "Добиться значительного увеличения выхода продукции с каждой головы скота. Решительно улучшить воспроизводство стада и сохранность поголовья" - записано в Основных направлениях экономического и социального развития СССР на I98I-I985 и на период до 1990 года.
На важное значение дальнейшего совершенствования методов селекционно-племенной работы и воспроизводства стада, как основы роста продуктивности животноводства, указывается также в решениях майского и ноябрьского (1982) Пленумов ЦК КПСС.
Одним из важнейших условий выполнения этих задач в овцеводстве является совершенствование технологии искусственного осеменения и, в частности, методов длительного хранения спермы барана, позволяющих наиболее рационально использовать ценных производителей. Однако метод длительного хранения спермы барана в замороженном виде не нашёл ещё широкого применения в связи с низкой оплодотворяемо стью овец.
Одной из главных причин снижения оплодотворяющей способности спермы барана некоторые авторы считают нарушение энергетики спер-миев (Е.М.Платов, 1969), другие (В.К.Милованов с соавт., 1970; В.А.Наук, В.К.Скворцова, 1970 и др.) - повреждение ферментных систем акросомы и других участков половых клеток, в результате чего подвергнутые замораживанию и оттаиванию спермии барана теряют способность к оплодотворению. Следует, однако, заметить, что при внутритрубном и внутриматочном осеменении замороженной спермой оплодотворяется большинство выделившихся яйцеклеток ( s> salamon, R. Lightfoot , f 1967; P. Mattner et al ., 1969; Н.А.Желтобрюх, 1972 и др.). Это свидетельствует о том, что основная причина снижения оплодотворяющей способности подвергнутой замораживанию-оттаиванию спермы барана связана с нарушением способности у спермиев проникать в краниальные отделы полового тракта овцы. Поэтому в решении проблемы повышения оплодотворяющей способности замороженной спермы барана, наряду с совершенствованием синтетических сред и режимов замораживания, важно выяснить причины инактивации спермиев в половом тракте овец.
Организм самки, обладая в период половой зрелости вполне развитой иммунной системой, реагирует на спермии иммунными реакциями разного типа - выходом в просвет половых путей сегментоядерных нейтрофиллов и процессом фагоцитоза спермиев. Процесс этот совпадает с появлением бактерицидных, либо бактериостатических свойств шеечной слизи (И.И.Соколовская с соавт., 1972). Кроме того, реакция организма самки в ответ на введение в её половые пути спермиев может выражаться возникновением специфических циркулирующих антител в ■ крови с одновременным появлением их во влагалище, маточной и трубной секреции.
Учитывая, что у 50-60% спермиев барана, сохранивших подвижность после замораживания и оттаивания, наблюдается структурное повреждение цитоплазматических оболочек и мембран акросомы (А.Н. Варнавский, 1970; p. Hyley , 1969 и др.), логично предположить, что у спермиев с такими морфологическими нарушениями изменяются антигенные свойства и они элиминируются в половых путях овцы как за счёт проявления клвточных и гуморальных реакций, так и за счёт воздействия специфических антител.
Имеются также сообщения (Л.А.Тутова, 1979), в которых показана возможность снижения ингибирующего действия спермоантител на ослабленные замораживанием спермии применением специфических антисывороток. Однако сведения по этому вопросу весьма ограничены. В то же время изучение его важно для разработки более эффективных способов замораживания спермы барана.
Поэтому целью настоящих исследований являлось получение моноспецифических антиспермоагглютинирующих сывороток, изучение их активности и определение наиболее эффективного способа замораживания спермы барана с введением в состав разбавителя указанных сывороток.
В результате проведённых исследований детально изучена анти-спермоагглютинирующая активность моноспецифических антисывороток к иммуноглобулинам классов А, М и & . При этом было установлено, что наиболее выраженным защитным действием обладают антисыворотки, полученные путём иммунизации кроликов иммуноглобулинами класса М. Применение указанных сывороток в средах для замораживания спермы барана позволило повысить оплодотворяемость овец с 24-30% до 52-60%, то есть на 28-30%.
На защиту выносятся следующие положения: получение моновалентных антиспермоагглютинирующих сывороток к иммуноглобулинам классов А, М и G и способы определения их активности и специфичности; применение моноспецифических антиспермоагглютинирующих сывороток в синтетических средах для замораживания спермы барана.
I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
I.I. Иммунобиологические свойства спермиев
Разработка эффективных методов регуляции репродукции человека и животных связана с изучением специфических антигенов спермиев, влияющих на особенности межклеточных взаимодействий при оплодотворении. Вопросы анализа антигенов спермиев и их роли в процессах размножения изучены ещё недостаточно (К.С.Братанов, 1973; И.И.Соколовская с соавт., 1977), хотя накоплен значительный материал в этом направлении.
Изучение иммунобиологических факторов воспроизведения показало, что спермии обладают высокоантигенным действием.
Впервые антигенную специфичность спермиев описали Land-Steiner (1889) и И.И.Мечников (1900).
Исследуя кровь иммунизированных лабораторных животных С.Ме-тальников (1900), И.Д.Стрельников (1923) установили положительную реакцию сыворотки крови не только со спермой донора, но и других животных, не участвующих в иммунизации.
Образование специфических спермоантител в ответ на введение в организм самок гомологичных спермиев у различных видов животных затем было установлено и другими авторами (А.Д.Бернштейн, Г.И.Лазарев, 1933; И.И.Соколовская, 1938; В.Бойд, 1963; А.А.Осетров, А.П.Марчук, 1969; М.А.Кунин, 1970; Е.В.Ильинский, 1971; W.
Henle » I938; R. Edwards » I960^ A.C.Menge » 1967 и ДР'*'
Эти антитела, вырабатываемые на целый комплекс спермальных антигенов, при определённых условиях могут стать причиной нарушений оплодотворения и эмбрионального развития (К.С.Братанов с соавт. 1962; E.G.Edwards , 1969 и др.).
Сравнивая эффективность иммунизации крольчих гомо- и гетерологичными спермиями, И.И.Соколовская, Н.М.Решетникова, А.В.Вронская (1972), и М.К.Дибиров (1978) установили, что возрастание титра спермоантител у иммунизированных крольчих находится в прямой зависимости от кратности иммунизации и антигенной силы спер-миев. Как после внутримышечной, так и после внутривенной иммунизации крольчих гомологичными спермиями, титр спермоагглютининов в сыворотке крови повышается в 10-100 раз.
К.С.Братановым с соавт. (1949), И.И.Соколовской (I960) отмечено наличие спермоантител в невысоких титрах у интактных самок, а также у самцов. Это указывает на выработку в организме животных изо- и аутоантител против спермиев без предварительной иммунизации их антигенами спермы.
Исследуя иммунобиологическое состояние бесплодных коров, А.А.Осетров и А.Т.Марчук (1969) пришли к выводу, что спермоанти-тела, находясь в организме в малом титре, не создают препятствий для процесса оплодотворения и не нарушают плодовитость. Однако при определённых условиях титр спермоантител в сыворотке крови самок может значительно возрастать и тогда они становятся причиной нарушения процессов размножения, что обусловливает бесплодие коров.
Необходимость выявления причин низкой оплодотворяемости животных при многократном искусственном осеменении их свежей спермой и особенно спермой, хранившейся в замороженном состоянии, определило задачу по подробному изучению спермиев, как антигенов.
По выражению К.С.Братанова (1968), спермии представляют собой "мозаичный" комплекс антигенов. Н.Н.Шуков-Вережников (1949) связывает образование антител с антигенными свойствами белков спермиев.
Г.В.Зверевой, В.А.Яблонскому (1971) методом электрофореза на агаровом геле удалось разделить белки спермы быка на 9-13, а барана на 7-8 электрофоретических фракций, мигрирующих в электрическом поле как к аноду, так и к катоду. Белки спермы хряка разделились на 5 фракций, мигрирующих только к катоду. Авторы установили, что крупномолекулярные компоненты протеинов спермы представляют собой комплексные соединения с липидами и углеводами.
Обработкой сухих, промытых спермиев хряка трихлоруксусной кислотой а.Boivi.il , ь.МезгоЪеапи (1933) выделили углевод-но-белково-липоидный комплекс из спермиев, обладающий антигенными свойствами.
М.А.Пешков А.Н.Белозёрский (1948) выделили нуклеопротеид-ный антиген из сухих, предварительно многократно промытых спермиев хряка и обосновали ядерное происхождение выделенного нуклео-протеида.
Опытами перекрёстной реакции преципитации А.А.Шутовой (1955) установлено, что нуклеопротеидный и углеводно-белково-липоидный комплексы, выделенные из спермиев данного вида животного, отражают его биологическую специфичность и являются надёжными антигенами для выявления специфических антител. Биохимический анализ выделенных из спермиев антигенных комплексов позволил установить их природу. Нуклеопротеид имеет ядерное происхождение и содержит 16,7% азота. Комплекс Буавена (углеводно-белково-липоидный) содержит полисахариды, азотистую и липоидную фракции. В опытах по иммунизации животных комплекс Буавена проявил более сильные им-муногенные свойства, чем нуклеопротеид.
V.Gordon » A. Hunter <I96I> указывают, что в спермиях быка имеется не менее 7 антигенов, a A. Tyler (1967) считает, что их у спермиев по меньшей мере четыре.
Исследуя антигенные свойства спермы барана, К.Братанов с соавт. (1974) выявили при иммунохимическом анализе и проведённом специфическом насыщении антисывороток присутствие двух специфических для спермальных клеток и двух общих для спермиев и спер-мальной плазмы барана антигенных компонентов.
В.П.Кононов, Р.И.Горбунова (1975) установили, что специфическими для спермиев антигенами являются альбумины. Антигены спермальной плазмы представлены в основном альбуминами и глобулинами. Исходя из этого, общими антигенами для спермы и спермальной плазмы, по их данным, оказались альбумины.
На основании результатов сравнительных исследований на быках, баранах и хряках по установлению антигенной характеристики спермиев К.Братанов, В.Диков (1967) обнаружили в спермиях наличие ор-ганотканевых антигенов. Ими установлена чёткая корреляция агглю-тинабильности клеток селезёнки, печени, почек, матки и семенника в изоантиспермальной сыворотке. В качестве подтверждения авторы приводят тот факт, что клетки органов абсорбируют часть антител в изосеменных сыворотках. В результате этого титр этих сывороток уменьшается после абсорбции с соответствующими клетками органов.
При различных заболеваниях семенников, а также при парэнте-ральном введении спермии способны вызывать образование аутоспер-моантител в организме хозяина (Л.В.Антонова, К.Н.Прозоровская, 1968; С.С.Райцина, 1970; В.Диков, А.Торнев, 1971; И.И.Соколовская, 1976; М.Ш.Вербицкий, 1977 и др.).
При наличии в организме аутоиммунных (против спермы) реакций спермии представляют собой комплекс антиген-антитело. В.В. Жаркин (1977) установил обратную связь между нагруженностью спермиев аутоантителами и результатами осеменения коров.
Иммунологические исследования a.i. Smith (1949) позволили ему установить различия в антигенных свойствах спермиев различных видов животных. Автор наблюдал сильное антигенное сходство между спермиями лабораторных грызунов и собаки и отсутствие родства со спермиями быка, козла и петуха. w. Henle (1938) утверждает о наличии антигенного сходства меж,пу бычьими и бараньими спермиями.
Согласно данным К. Братанова (1969) плазма спермы отличается большей антигенной активностью, чем спермии. Анализируя антигенный состав спермальной плазмы человека, С.Шульман, Тьен Шун Ли (1973) показали наличие 12 составных частей плазмы.
При контакте со спермальной плазмой спермии получают обволакивающие (маскирующие) антигены, которые покрывают их с поверхности и легко смываются трёхкратным промыванием физиологическим раствором, в то время как собственные антигены прочно связаны со спермиями (В.П.Кононов, А.К.Бутаков, 1971).
Опытами В.П.Кононова и Р.И.Горбуновой (1975) установлено, что секреты извитых канальцев не содержат антигенов общих с антигенами сыворотки крови, а эякулированные спермии уже покрыты этими антигенами.
А.Торнев (1969) отметил наличие общих или близко сходных антигенов в плазме спермы и экстрактах из семенников. И.И.Соколовская, В.П.Кононов (1972) установили, что антигенные свойства . спермии приобретают первоначально в семенных канальцах, а затем во время созревания в канале придатка семенника. После эякуляции на поверхности спермиев абсорбируются антигены, происходящие из придатка половых желёз. Созревание спермиев в придатке семенника обеспечивает им оплодотворяющую способность за счёт покрытия их белками сыворотки крови, обладающей сильной антигенностыо. Эти же авторы сообщают, что специфичные для плазмы спермы антигены содержатся в придатке семенника, эякулированных спермиях, в нормальной гомологичной сыворотке крови, но отсутствуют в семеннике.
Исследуя антигены цервикальной слизи, В.Х.Вылчанов с соавт. (1973) установили, что цервикальная слизь обладает антигенами общими с антигенами спермальной плазмы, но не показывает антигенной общности с промытыми человеческими спермиями. Человеческая спермальная плазма обладает антигенами общими как с антигенами цервикальной слизи, так и с антигенами промытых спермиев. Антитела против цервикальной слизи женщин с группой крови А не показывают специфичности по группам крови в их отношении к А- и В-цер-викальной слизи и А- и Вспермальной плазме. В согласии с известными данными об антигенной мозаике спермальной плазмы человека авторы приходят к выводу, что она содержит две различные системы антигенов - систему антигенов, являющихся общими только с антигенами цервикальной слизи, и систему антигенов общих только с антигенами спермиев (предположительно, с их "сперматозоидно-пок-рывающими" антигенами).
В.А.Яблонский, В.П.Гищук (1978), исследуя секреты придаточных половых желёз быков, сыворотку крови и секреты гениталий коров и тёлок, также установили наличие общих или близких по своей природе антигенов. Эти же авторы пришли к выводу, что из секретов придаточных половых желёз быка наибольшее антигенное сходство с секретами гениталий коров и тёлок проявляют антигены придатка семенника. r. Gupta, в. Wilson <1975> отмечают, что некоторые антигены спермальной плазмы сходны или идентичны с антигенами эритроцитов животных этого вида. Ссылаясь на отсутствие положительных реакций эритроцитов овец, кроликов и кур с антисывороткой против бычьей спермы, авторы указывают на видовую специфичность антигенов спермиев.
Л.С.Наков с соавт. (1977) получали антигены спермы человека, быка, хряка и барана в растворимой форме путём воздействия некоторыми детергентами и исследовали их двойной иммунодиффузи-ей в агаровом геле и в реакции иммуноэлектрофореза с кроличьими антиспермальными сыворотками. Полученные ими результаты подтвердили наличие сходных сперматогенных антигенов у человека и ряда млекопитающих (видонеспецифического характера), а также показали, что эти антигены могут быть растворены с помощью подходящих детергентов и идентифицированы преципитацией в геле.
Изучая роль антигенов и антител в размножении животных, П. Матоушек (1969) пришёл к выводу, что антигены групп крови, первично доказанные на эритроцитах, в спермиях не содержатся. Он считает, что единственное исключение составляют, так называемые, нормальные растворимые антигены, которые проникают из семенной плазмы на спермии.
Для оплодотворения большое значение имеют ферменты спермиев. Как выяснилось в опытах ряда авторов (И.И.Соколовская с соавт., 1976, 1977), основу иммуногенности спермиев животных всех видов составляет их акросомный фермент гиалуронидаза.
Гиалуронидаза участвует в оплодотворении как энзим, рассеивающий клетки яйценосного бугорка и разрыхляющий лучистый венец овоцита. Изучение действия обработки спермиев ксеногенными и ал-логенными антигиалуронидазными сыворотками на рассеяние клеток яйценосного бугорка свежеовулировавших овоцитов кролика показало, что антигенные свойства энзима причастны к этому процессу (И.И.Соколовская, 1948, 1953, 1957; И.И.Соколовская, Л.П.Дроздова, 1963; с#в; Metz , 1972, 1973 и др.).
Иммунохимический подход позволил обнаружить в спермиях и другие вещества, оказывающие специфическое антигенное действие. Раскрытие природы этих веществ - путь к использованию антигенных свойств спермиев в целях регулирования процесса оплодотворения. Пока известны следующие точно определённые вещества спермиев : лактатдегидрогеназа, локализованная в средней части спермиев, ги-алуронидаза, сорбитол-дегидрогеназа и трипсиноподобная протеина-за (акрозин), локализованные в акросоме. В экспериментальных условиях выявлено, что эти энзимы способны индуцировать образование ауто- и изоантител (И.И.Соколовская с соавт., 1975; Л.Кожу-харова, 1975 и др.). Согласно исследованиям указанных авторов, гиалуронидаза спермиев обладает отчётливой антигенной активностью и является одной из основных причин снижения результативности осеменений после нарочитой или непредвиденной иммунизации самок избыточным числом спермиев. Попадая в организм самок, гиалуронидаза вызывает значительную антигиалуронидазную активность, блокирующую энзимы головки спермиев. Исходя из этих данных, авторы указывают на необходимость контролирования содержания гиалурони-дазы в спермиях, как фактора их биологической полноценности.
Приведённые данные литературы говорят о сложном и многообразном строении спермальных антигенов, о необычайном разнообразии проявления их антигенных свойств, показывают несомненное влияние спермальных антигенов на процесс оплодотворения, что требует дальнейшего изучения и представляет большой практический и теоретический интерес.
Заключение диссертационного исследования на тему "Защитное действие антиспермоагглютинирующих сывороток в средах для замораживания спермы барана"
3. В Ы В 0 Д Ы
1. Иммунизация кроликов очищенными иммуноглобулинами различных классов (А, М и G ) обеспечивает более высокую активность и специфичность кроличьих антиспермоагглютинирующих сывороток по сравнению с применением для этой цели нативной овечьей сыворотки и её глобулиновой фракции. При этом наиболее высокой способностью подавлять спермоагглютинацию иммунных овечьих сывороток в 9,0+2,5 раза) обладали антисыворотки к иммуноглобулинам класса М.
2. Титры полных гемагглютининов в процессе иммунизации кроликов не изменялись и колебались в пределах от 0 до 1:4. Титры неполных гемагглютининов, выявляемых в реакции пассивной гемагглютинации возрастали после иммунизации от 1:3072+1024 до 1:3413 +623.
3. Преципитирующие антитела появлялись в сыворотке крови кроликов только в результате иммунизации на 10—II день после введения антигена. Наиболее высокие титры преципитинов зарегистрированы у кроликов, иммунизированных очищенными иммуноглобулинами класса g, иммуноглобулинами классов м+ g » абсорбированными на эритроцитах и спермоагглютинирующей овечьей сывороткой (соответственно 8,0+0; 7,7+1,7; 7,6+1,5).
4. Иммуноглобулины классов А,М и g , полученные из молозива овец, в иммунную реакцию со спермальными антигенами не вступали и специфического свечения в реакции непрямой иммунофлюоресценции не вызывали.
5. Антигены спермиев барана в результате иммунной реакции связываются специфическими спермальными антителами (спермоагглю-тининами), которые могут быть представлены иммуноглобулинами трёх классов А, М и G.
6. В связи с изменением проницаемости цитоплазматических оболочек антигены спермиев барана становятся доступными для неспецифических гетеро- антител антиспермоагглютинирующих кроличьих сывороток.
7. Предварительная инкубация спермоагглютинирующей овечьей сыворотки с антиглобулиновыми сыворотками полностью или частично снимала ингибирующее действие спермоантител. При этом наиболее сильным защитным действием в лабораторных опытах по внутриматоч-ному осеменению овец обладала антисыворотка к иммуноглобулинам М.
8. Добавление 30-50% антисыворотки кролика в лактозо-желточ-но-глицериновую синтетическую среду не оказывает отрицательного влияния ни на подвижность спермиев после оттаивания, ни на их выживаемость при температуре + 38° С.
9. Замораживание спермы барана в лактозо-желточно-глицерино-вой среде с антисывороткой обеспечивает значительное повышение оплодотворяющей способности спермиев. При этом наиболее высокая оплодотворяемость овец (52-60% против 24-30% в контроле) зарегистрирована при введении в состав синтетической среды антисыворотки к иммуноглобулинам классов М+ G . Введение такой антисыворотки в состав лактозо-желточно-гуммиарабико-трис-цитратно-глицери-нового разбавителя обеспечило повышение оплодотворяющей способности оттаянной после замораживания спермы барана на 19,8% (55,9% против 34,1% в контроле).
4. ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРАКТИКИ
1. Предлагается получать высокоактивные антиспермоагглюти-нирующие сыворотки методом абсорбции на эритроцитах кроликов иммуноглобулинов классов M+G овечьих сывороток.
2. Специфичность антиспермоагглютинирующих сывороток предлагается оценивать по реакции подавления спермоагглютинации. Оценку реактивности кроликов-продуцентов проводить по реакции преципитации в любой модификации.
3. Для повышения оплодотворяющей способности замороженной спермы барана предлагается вводить в состав синтетической среды для её разбавления антисыворотку против иммуноглобулинов классов M+G в количестве 40%.
Список использованной литературы по ветеринарии, диссертация 1984 года, Дьякова, Светлана Петровна
1. Продовольственная программа СССР на период до 1990 года и меры по её реализации.-Материалы майского Пленума ЦК КПСС. М.: Правда, 1982, 112 с.
2. Материалы Пленума Центрального Комитета КПСС, 22 ноября 1982 года. М.: Политиздат, 1982, 30 с.
3. Антонова Л.В., Прозоровская К.Н. Некоторые клинико-иммуно-логические особенности воспалительных заболеваний женской половой сферы.- Акушерство и гинекология. 1968, № 8, с. 28-31.
4. Бернштейн А.Д., Лазарев Г.И. 0 влиянии крови на жизнедеятельность сперматозоидов.- В кн.: Этюды по физиологии сперматозоидов. Самара, 1923, т.1, с. 73-96.
5. Братанов К. Иммунология оплодотворения новая область исследований в биологии размножения. Труды Международного симпозиума "Иммунология сперматозоидов и оплодотворения". Варна, Болгария, 1969, с. 15-26.
6. Братанов К. Международный конгресс по размножению и искусственному осеменению животных.- Животноводство. 1969, № 9, с. 90.
7. Братанов К. Иммунология размножения современное состояние, проблемы и перспективы. - Труды второго Международного симпозиума по иммунологии размножения. Болгария, София, 1973, с. 3845.
8. Братанов К. Иммунные антитела в женском организме в процессе размножения.- Акушерство и гинекология. 1975, № I, с. 9.
9. Братанов К., Диков В. Антигенная характеристика сперматозоидов, семенной плазмы и некоторых органо-тканевых клеток.- В кн.: Международный симпозиум по иммунологии сперматозоидов и оплодотворения. Болгария, София, 1967, с. 8.
10. Братанов К., Диков В., Колинкоева А. Исследования антигенной сущности живчиков.- Ветеринарно-медицинские науки. 1967, № 6, с.4.
11. Бойд В.В. Введение в иммунохимическую специфичность. М., 1963.
12. Варнавский А.Н. Ультраструктура живчиков быка и барана после глубокого замораживания в жидком азоте.- Сельскохозяйственная биология. 1969, т. 4, № 3,. с. 469-472.
13. Варнавский А.Н. Влияние методов заморадивания на подвижность и ультраструктуру живчиков быка и барана.- Животноводство. 1970, № 9, с. 53.
14. Вербицкий М.Ш. Роль иммунных реакций женского организма на алло и аутоантигены сперматозоидов в развитии бесплодия в браке. Тезисы I Всесоюзного симпозиума "Современные проблемы иммунологии репродукции". Новосибирск. 1977, с. 172-173.
15. Веселов В.И. Значение иммунобиологической совместимости спариваемых животных в процессе воспроизведения у крупного рогатого скота.- В кн.: Сборник научных трудов Ивановского сельскохозяйственного института. Иваново, 1980, вып. 22, с. 311.
16. Волкова JI.C. Иммунологические аспекты бесплодия в браке. Акушерство и гинекология. 1972, № 6, с. 6-10.
17. Вылчанов В., Поливанов Р., Штыркалев И. и др. Исследования антигенов цервикальной слизи.- Труды второго Международного симпозиума по иммунологии размножения. Болгария, София, 1973,с. 160-165.
18. Временные рекомендации по глубокому замораживанию и использованию спермы баранов-производителей. ВНИИ племенного дела. М., 1978, II с.
19. Германн Б.П. Энзиматически активные антигены семеннойплазмы человека,- Труды второго Международного симпозиума по иммунологии размножения. Болгария, София, 1973, с. 147.
20. Грабар П., Бутрен П. Иммуноэлектрофоретический анализ. М.: Изд-во иностр. лит. 1969, 209 с.
21. Гриценко В.И., Дахно Ф.В., Набиль Сейфеин Мохариб. Роль цервикального фактора в репродукции человека.- Акушерство и гинекология. 1981, № 10, с. 3-6.
22. Дибиров М.К. Зависимость титра спермоагглютининов в сыворотке крови коров от их физиологического состояния.- Научно-технический бюллетень. Харьков, 1977, с. 71-76.
23. Дибиров М.К. Иммунологические свойства спермиев быка.-В кн.: Материалы советско-американского семинара по физиологии сельскозозяйственных животных. Харьков, 1977, с. 242-244.
24. Дибиров М.К. Иммунобиологические свойства спермиев и оплодотворяемость самок.- Дис. . канд. биол. наук. Харьков, 1978, 153 с.
25. Диков В., Торнев А. Изучение аутоспермоантител у баран-ов. -Труды второго Международного симпозиума по иммунологии размножения. Болгария, София, 1973, с. I19-122.
26. Дорожилов А., Дулуб. Спермоагглютинины в сыворотке крови коров и их связь с бесплодием.- Молчное и мясное скотоводство. 1975, № 7, с. 37.
27. Жаркин В.В., Осипова Н.В. Иммунизация коров антигенами живчиков при осеменении и её последствия.- В кн.: Сборник трудов Белорусского научно-исследовательского института животноводства. 1975, № 16, с. 4-7.
28. Жаркин В.В. Связь между нагруженностью живчиков аутоанти-телами и оплодотворяемостью самок.- Тезисы Всесоюзного симпозиума "Современные проблемы иммунологии репродукции". Новосибирсск, 1977,с. 162-163.
29. Желтобрюх Н.А. Нарушения в спермиях барана в процессе эквилибрации и замораживания.- Овцеводство. 1972, № 10, с. 33-35.
30. Желтобрюх Н.А., Ивахненко В.К., Тутова Л.А. Роль иммунологических факторов в снижении оплодотворяющей способности замороженной спермы барана.- Труды ВНИИОК. Проблемы интенсификации овцеводства. 1976, вып. 38, т. I, с. 108-109.
31. Желтобрюх Н.А.,Ивахненко В.К., Тутова Л.А. Необходимо совершенствовать методы замораживания спермы барана.- Овцеводство. 1977, № д, с. 37-38.
32. Жуков-Вережников Н.Н. Современное учение о антигенах.-Труды XII Всесоюзного съезда гигиенистов, эпидемиологов, микробиологов и инфекционистов. М., № 2, с. 45-49.
33. Зверева Г.В. Профилактику бесплодия животных на научную основу.- Ветеринария. 1969, № 3, с. 76-80.
34. Зверева Г.В., Яблонский В.А. Видовые особенности электро-форетической картины спермы быка, барана и хряка.- Доклады ВАСХНИЛ. 1971, № 3, с. 30-32.
35. Зилбер Л.А. Иммунохимический анализ. М., Медицина, 1968, с. 16.
36. Ильинский Е.В., Сальников Г.С. Роль иммунных факторов в воспроизводстве крупного рогатого скота.- Ветеринария. 1970, № II, с. 97-99.
37. Ильинский Е.В. Влияние иммунных факторов на воспроизводительную функцию крупного рогатого скота.- В кн.: Профилактика бесплодия сельскохозяйственных животных на Северном Кавказе. Материалы конференции. Новочеркасск. 1974, с. 43-47.
38. Кожухарова JI. Иммунологические исследования спермальной гиалуронидазы.- Труды третьего Международного симпозиума по иммунологии размножения. Варна, Болгария, с. 303.
39. Кононов В.П. Локализация антигенов разной химической природы в живчиках быков.- Доклады ВАСХНИЛ. 1973, № 8, с. 35-37.
40. Кононов В.П. Локализация антигенов разной химической природы в живчиках быков и хряков.-III Международный симпозиум по иммунологии размножения. Тезисы докладов. Варна, Болгария, 1975, с. 25.
41. Кононов В.П. Распределение спермиев по иммунологическим свойствам в связи с качеством спермы быков.- Доклады ВАСХНИЛ. 1978, № 6, с. 29-30.
42. Кононов В.П., Бутаков А.К. Антигенные свойства живчиков быка.- Доклады ВАСХНИЛ. 1971, № II, с. 37-39.
43. Кононов В.П., Горбунова Р.И. Антигенные свойства живчиков в процессе сперматогенеза и созревания в организме у кроликов.- Сельскохозяйственная биология. М., 1973, т. 8, № 3, с. 338 -343.
44. Кононов В.П., Горбунова Р.И. Изменение антигенных своств живчиков быков при созревании в придатке семенника и эякуляция.-Сельскохозяйственная биология. 1975, т. 10, № I, с. 70-77.
45. Кунин М.А. Иммунологические реакции при бесплодном браке.- Акушерство и гинекология. 1970, № б,- с. 43-47.
46. Кузнецов М.П., Волков А.С. Осеменение овец глубокозамо-роженной спермой барана.- Доклады советских учёных к У1 Международному конгрессу по размножению и искусственному осеменению животных. М., 1968,-с. 92-94.
47. Логинова Н.В. Причины низкой оплодотворяемости овец, осеменённых замороженным семенем.- Овцеводство. 1962, № 8, с. 20 -23.
48. Лопырин А.И. Повышение плодовитости овец и коз.- М.: Сельхозгиз, 1953.
49. Ляшенко В.А., Воробьёв А.А. Молекулярные основы иммуно-генности антигенов.- М.: Медицина, 1982, 272 с.
50. Максимов В.И. Титр спермоагглютининов в сыворотке крови коров при различной кратности осеменения в одну охоту.- В кн.: Материалы научно-производственной конференции. Донской СХИ. Пер-сиановка. 1970, с. 154-155.
51. Максимов В.И. Иммунологические реакции при бесплодии коров.- В кн.: Профилактика бесплодия на Северном Кавказе. Материалы конференции. Новочеркасск. 1974, с. 50-52.
52. Малиновский И.Ф. Сроки элиминации иммунных спермоантител в организме бесплодных коров.- В кн.: Достижения ветеринарной науки и передового опыта производству. Межведомственный сборник. Минск,: Ураджай, 1976, вып. 2, с. 75-77.
53. Матоушек П. Антигены и антитела в размножении животных.-Международный сельскохозяйственный журнал. 1969, № I, с. 57-61.
54. Метальников С. Учение о спермотоксинах.- Париж, 1900.
55. Мечников И.И. Об иммунитете.- Русский архив паталогии и клинической медицины и бактериологии. 1900, с. 10.
56. Милованов В.К. Биологические и зоотехнические аспекты проблемы оплодотворяемости и плодовитости сельскохозяйственных животных.- Животноводство. 1967, № 4, с. 62-70.
57. Милованов В.К. Внутриматочное и глубокоцервикальное осеменение овец замороженным семенем.- Сельское хозяйство за рубежом. Животноводство. 1974, № 6, с. 27-28.
58. Милованов В.К., Варнавский А.Н., Наук В.А. О природе криогенных повреждений живчиков барана.- Вестник сельскохозяйственной науки. 1970, № 10, с. 86-93.
59. Мищенко Б.А., Подоплелов И.И., Глинский И.А. и др. Иммунобиологическое изучение антигенов сперматозоидов.- Тезисы I Всесоюзного симпозиума. "Современные проблемы иммунологии репродукции". Новосибирсск. 1977, с. 155.
60. Наук В.А. Скворцова В.К. К вопросу о малой устойчивости живчиков барана при глубоком замораживании семени.- Овцеводство. 1970, № 8, с. 23-24.
61. Ойвин И.А. Статистическая обработка экспериментальных исследований.- Паталогическая физиология и терапия. I960, № 4, с. 76-78.
62. Ойвадис Р.Н., Бронская А.В., Осадчук B.C. Действие изо-гетерологичных сывороток на ультраструктуры и антигенность живчиков.- Тезисы I Всесоюзного симпозиума . "Современные проблемы иммунологии репродукции". Новосибирсск. 1977, с. 158-159.
63. Ойвадис Р.Н., Горбунова Р.И., Бронская А.В. и др. Ультраструктура и антигенность спермиев под действием изо- и гетеро-антител.- Доклады ВАСХНИЛ. 1978, № II, с. 31-34.
64. Осетров А.А., Марчук А.Т. Иммунобиологическое состояние организма бесплодных коров.- Ветеринария. 1969, № 10, с. 75-77.
65. Осетров А.А., Марчук А.Т. Влияние спермоантител на оплодотворяемость коров.- Молочное и мясное скотоводство. 1970, вып 21, с. 32-35.
66. Осташко Ф.И., Дибиров М.К. Антигенные свойства живчиков быка.- Тезисы II Всесоюзного симпозиума по иммунологии воспроизведения. М., 1980, с. 19.
67. Павличенко В.П., Дорожилов А.Е., Шевченко Н.П и др. Спермоагглютинины в сыворотке крови коров и их связь с нарушением воспроизводства.- Тезисы 3 Международного симпозиума по иммунологии размножения. Варна, Болгария, 1975, с. 124-125.
68. Пантелеев Э.И., Кашкин К.П. Т и В клетки и проблема конкуренции антигенов.- В кн.: Клеточный иммунитет. Биологическая активность Т и В лимфоцитов. М., 1977, С. 81-100.
69. Петров Р.В. Иммунология и иммуногенетика.- М.: Медицина, 1976, 365 с.
70. Петров Р.В. Иммунология.- М.: Медицина, 1983, 368 с.
71. Пешков М.А., Белозёрский А.Н. Опыт цитологической и иммунологической характеристики протопласта дизентерийной бактерии Флекснера.- Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 1948, № 2, с. 27-33.
72. Платов Е.М. Замораживание семени барана в лактозо-жел-точно-этилен-гликолевой среде.- Овцеводство. 1965, № 9, с. II—12.
73. Платов Е.М. Действие замораживания на уровень аденозин-полифосфатов семени.- Овцеводство. 1968, № 8, с. 14-16.
74. Платов Е.М. Наурушение синтеза АТФ основное отрицательное последствие холодового удара.- Овцеводство, 1969, № 9, с. 32-34.
75. Платов Е.М., Волков А.С. Эффективность замораживания спермы барана.- Животноводство. 1979, № 5, с. 52-56.
76. Полянцев Н.И. Практические советы по борьбе с яловостьюкоров.- М., 1974, 128 с.
77. Прейскурант цен № 70-09 Закупочные цены на сельскохозяйственные продукты и сырьё. М., 1973, с. 195-201.
78. Райцина С.С. Травма семенника и аутокммунитет.- М.: Медицина. 1970.
79. Решетникова Н.М. Реакция организма самок на желток куриного яйца, как компонент среды, разбавляющей семя.- Труды ВНИИЖ. Технология искусственного осеменения и биология воспроизведения сельскохозяйственных животных. М.: Колос, 1972, т. 33, с. 267 -269.
80. Решетникова Н.М. Действие иммунизации самок живчиками и некоторыми компонентами разбавляющей среды на воспроизводство кроликов.- Труды второго Международного симпозиума по иммунологии размножения. Болгария, София, 1973, с. 160-165.
81. Сираждинов Р.С. Агглютинация живчиков в сыворотке крови коров в связи с подбором пар, эффективностью осеменения и послеродовыми осложнениями.- Животноводство. 1972, № 6, с. 74-75.
82. Соколовская И.И. Серологические исследования при отдалённой гибридизации.- Известия АН СССР. 1938, № I, с. 249-276.
83. Соколовская И.И. Проблемы оплодотворения млекопитающих.-М.: Советская наука. 1957, с. 311.
84. Соколовская И.И. 0 рациональных сроках осеменения коров. Животноводство. 1967, № 12, с. 57 и 1968, № I, с. 67-73.
85. Соколовская И.И. Гематогенитальные барьеры в воспроизведении животных.- Животноводство. 1976, № I, с. 52-61.
86. Соколовская И.И., Дроздова Л.Д. Действие некоторых факторов на оплодотворение и соотношение полов у млекопитающих.- Труды ВНИИЖ. 1963, т. 25, с. 109-122.
87. Соколовская И.И., Решетникова Н.М. Иммунные факторы воплодотворении и пренатальном развитии.- Животноводство. 1968, №6, с. 65-67.
88. Соколовская И.И., Решетникова Н.М. Иммунологические реакции в воспроизведении млекопитающих.- М., 1969.
89. Соколовская И.И., Кононов В.П. Динамика антигенных свойств живчиков в половых путях самок.- Доклады ВАСХНИЛ. 1972, № 10, с. 33-35.
90. Соколовская И.И., Решетникова Н.М., Вронская А.В. СравIнение эффективности внутривенной и внутриматочной иммунизации.-Труды ВНИИЖ. Дубровицы, 1973, т. 33, с. 262-269.
91. Соколовская И.И., Кононов В.П., Бабичева Л.Я. и др. Изучение действия трубной жидкости на живчики методом агглютинации и иммунофлюоресценции.- Труды второго Международного симпозиума по иммунологии размножения. Болгария, София, 1973, с. 148159.
92. Соколовская И.И., Горбунова Р.И., Вронская А.В. и др. Антигенность гиалуронидазы и воспроизведение.- Труды третьего Международного симпозиума по иммунологии размножения. Болгария, София, 1975, с. 287.
93. Соколовская И.И., Субботин А.Д., Вронская А.В. и др. Иммунные свойства прозрачной зоны.- Тезисы I Всесоюзного симпозиума. "Современные проблемы иммунологии репродукции". Новоси-бирсск. 1977, с. 152-153.
94. Стрельников И.Д. Известия научного института имени1. Лесгафта. 1923.
95. Сысоев А.А. Физиология размножения сельскохозяйственных животных.- М.: Колос. 1978, 359 с.
96. Тихонов В.П. Группы крови у животных и их применение в животноводстве.- М.: Колос. 1967.
97. Тутова Л.А. Некоторые причины инактивации замороженной спермы в половых путях овец.- Труды Ставропольского СХИ. Совершенствование пород сельскохозяйственных животных и повышение их продуктивности. Ставрополь. 1977, вып. 40, т. 4, с. 30-32.
98. Тутова Л.А. Спермоантитела в сыворотке крови и секретах полового аппарата овец.- Труды Ставропольского СХИ. Ставрополь. 1978, вып. 41, т. 5, с. 97-99.
99. Тутова Л.А. Фагоцитарная, лизоцимная и спермоагглютини-рующая активность крови и секретов полового аппарата овец.- Авто-реф. дис. . канд. вет. наук. Ставрополь, 1979, 23 с.
100. Тушнов М.П. Проблема сперматоксинов и лизинов.- Сборник научных трудов. Сельхозгиз, 1923, с. 414.
101. Шутова А.А. Антигенные свойства сперматозоидов.- Журнал общей биологии. 1955, т. 16, № 4, с. 263.
102. Beck J.s., Edwards R.G., Yong M.R.G. Immune fluorescence technikque and the isoantigenicity of mammalian spermatozoa.-J, Re-prod., 1962, 4, p. 103.
103. Boivin A. et Mesrobeaim L. Contribucions a 1'etude de la composition chimique des Bacteries. Substances azotees et phospho-rees "acido-soluble". Сотр. rend, Soc. biol., 1933, 112, 76.
104. Bravo C. Freezing of ram semen. VII intern. Kongr. fur Tierische Fortpflanzung und Haustierbesammung. Munchen, 1972,p. 297.
105. Братанов К., Диков В., Попов Ю. Върху някои аглутина-ционни явления на говяждите сперматозоиди при разреждане с жъел-точни разредители и консервирането им с антибиотици.- Изв. н. и "Ин-т биол. и патал. размнож. сельскостопан. жив",1962,с. II-I8.
106. Brandtzaeg P. Two types of Ig A immunocytes in man.-"Nature New biol.", 1973 , v. 243, p. 142-143.
107. Chang M.C. Development of fertilizing capacity of rabbit spermatozoa in the uterus. Nature, 1955» 175, 4467.
108. Chipperfield E., Evans B. The influence of lokal infection on immunoglobulin formation in the human endocervix. Clin. a. Exp. Immunol., 1972, v. 12, p. 219-223.
109. Coeling Bennink H.J.T. Spermatozoal Antibodies in Cervikal Mucus Showh by Immunofluorescense. Immunology of Reproduction, proceedings of the Third International Symposium Yarna, Bulgaria, September 21-25, 1975, p. 261.
110. Coons А.Н. Fluorescent antibody method is general cy-tochemical methods. Ed. J, Danieliti. Acad. Press, N I, p. 399, 1958.
111. Curtain C.C., Clark R.L., Dufty J.H. The origins of the immunoglobulins in the mucois secretions of cattle. Clin, and Exp. Immunol., 1971, 8, N 2, p. 335-344.
112. Edwards R.G. Antigenicity of rabbit semen bull sperm and egg yolk after intervaginal or intermuscular injections of in female rabbits. J. Reprod. Fertil., i960, 385.
113. Edwards R.G. Immunology of conception and pregnancy. Brit. Med. Bull., 1970, 26, I, 72-78.
114. Eyquem A. Mecanisme de 1*immunite lokale dans l'appareil genital. Immunology of Reproduction. Proceeding of the Third International Symposium Varna, Bulgaria, September 21-25, 1975,p. 88.
115. Fey H., Messerli J., Sturzenegger N., Grolimund F. Methods of Isolation, Purifikation and Quantitation of Bovine Immunoglobulins. Zbl. Vet. Med., 1976, B. 23, p. 269-300.
116. Flechon Ja eques-Edmond, Dubois Maurice P, Localisation immunocytochimique de la hyaluronidase dans les spermatozoides de mammiferes domestiques. C.r. Acad. Sci., 1975,B. 280, N 7, 877880.
117. Gordon M., Hunter A. J. Amer. Dairy Sci. Assoc., I961, 56, 67.
118. Griffin J.F.F., Hartigan P.J. , Nuirn W.K. Antibodies to eggy oik semen diluent and bovine infertility, a preliminari report. Vet. Res., 1973, 92, N 18, 481-482.
119. Gupta R., Wilson E. Relationship of bovine seminal and erythrocyte antigens. Indian J. Dairy Sc. 1975, 28, 3, 201-205.
120. Henle W. Tlie specificity of some mammalian spermatozoa. J. Immunol., 1953, 34, 325.
121. Henle 17., Henle G., Chambers L.A. Studies on the antigenic structure of some mammalian spermatozoa. J. Exp. Med., 1938,68, 335.
122. Healey p. Действие замораживания на ультраструктуру живчиков некоторых домашних животных. J. Reproduct. and
123. Fertility, 1969, 18, N I, 21-27. Отдельный выпуск РЖБ, 1969, № 8, 58, 227.
124. Heremans J,F. , Vaerman J. Antigen titration bу simple radial immunodiffusion in plates. In Williams C.A. and Chase M.W. Methods in immunology and immunochemistry. Academic Press New York, I971, 213-224.
125. Heremans J.F. Immunoglobulin Formation in Different tissues.- "Curr. Topic. Microbiol. Immunol.", 1968, v. p. 132 -203.
126. Hunter A.G., Hafs H.D. J. Reprod. Fertil., 1964, 7, p. 357-365.
127. Isoo'ima s., Koyama K. , Kamata T. Presence of sperm Immobilizing Factor in the cervikal Mucus of Unexplained Sterile Women, Immunologi of Reproduction, Proceedings of the Third International' Symposium Varna, Bulgaria, September 21-25 , 1975, p.104.
128. Landsteiner K. Zur Kenntnis der specifisch auf В1иЬк6£-perchen wirkenden. Zentrslblat fur Bacteriologie, 25, 1899.
129. Mach J.-P., Pachud J.-J. Secretory Ig A, a major immunoglobulin in most bovine external secretions. J.Immunology, 1971, 106, 552-563.
130. Mattner P.E., Braden A.W.H. Comparison of the distribution of motile spermatozoa in the ovine cervix. Austral J. Biol.
131. Sci., 1969, 22,N 4, p. 1069-Ю70.156, Menge A.C. J. Reprod. Fertil., London, 1962, 3, p. 331-341.
132. Menge A.C. Induced infertility in cattle by insemination with semen and testis. J, Reprod. a Fertil., 1967* 13, 3, 445456.
133. Menge A.C., Schweitzer V., Rosenberg A., Westhoff C. Local Immunity of Female Reproductive Tract and Infertility in Rabbits. Immunology of Reproduction, Proceedings of the Third International Symposium Varna, Bulgaria, September 21-25, 1975,p. 492.
134. Metz C.B. Biol. Repr. 1972, 6, 358.
135. Metz C.B. J. Reprod. Fertil., 1973, 32, p. 2057-2064.
136. Milgroom F., luszczynski Т., Dubislci S. Preparation of Antiglobulin Sera. Nature, 1956, v. 177, N 4503, p. 329.
137. Roldan Raul Roberto, Montuori Esteban. El empleo deldextrano para prevencion de la aglutination del esperma del tora.i
138. Rev. med. vet., 1970, 51. N 2, 81-85,
139. Salamon S, Observations on fertility if ram semen fro-sen by different methods.- Austral. J. Exp. Agr. Anim. Husb., 1967, 7, 29, p. 555-561.
140. Salamons s., Lightfoot R,E, Влияние холодового шока, хранение в жидком виде и замораживание на последовательно полученные эякуляты барана. Austral т. Agric. Res., 1967, 18, N 6, 959-972. Отдельный выпуск РЖБ, 1968, № 8, 58.
141. Smith A.I. Some antigenic properties of mammalian spermatozoa. The antigenic relation of some mammalian spermatozoa. Proceed, roual Soc. Ser. В., 1949» 136, 882-884.
142. Шварцман Я.С., Хазенсон JI. Местный иммунитет. Л.: Местный иммунитет. Л.: Медицина, 1978, 224 с.
143. Шульман С., Тьен Шун Ли. Анализ антигенов семенной плазмы человека. Тезисы второго Международного симпозиума по иммунологии размножения. Болгария, София, 1973, с. 141—142.
144. Tyler A. World Health organisation Scient. Group on Immunological Aspects of Human Reproduction, Geneva, 1965.153» Tyler A., et al. Concepts and Experiments in immunore-production.-Fertility, 1967, 18, 153-166.
145. Williams M.R., Maxwell D.A.G., Spooner R.L. Quantitative