Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Выявление больных бруцеллезом животных среди крупного рогатого скота, иммунизированного вакциной из штамма 19

КАЗАХСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК Казанский научно-исследовательский ветеринарный институт

РГ8 ОД

На правах рукописи УДК 619:616.981:42:636.2

2 7 т Ш

КУТТУКОВ БАУЫРЖАН ЧАНЗАТОВИЧ

ВЫЯВЛЕНИЕ БОЛЬНЫХ БРУЦЕЛЛЕЗОМ ЖИВОТНЫХ СРЕДИ КРУПНОГО РОГАТО*.'О СКОТА, ИММУНИЗИРОВАННОГО ВАКЦИНОЙ ИЗ ШТАММА 19

16.00.03 - ветеринарная микробиология, иммунология,

эпизоотология и инфекционные болезни животных

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Алматы, 1996

Работа выполнена в отделе бруцеллеза Казахского научно-

исследовательского ветеринарного института Казахской академии сельскохозяйственных наук

Научный руководитель - кандидат ветеринарных наук, старший

научный сотрудник К.И.МШЩС08

Ведущая организация - университет "Семей"

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Н.Н.ГИЗИТДИНОВ

доктор ветеринарных наук, профессор Г.И.ЛОПАТНИКОВ

Защита диссертации состоится ¿¿Л&^-Ц 1*336 г. в

/О часов на заседании специализированного совета Д 55.03.01 при Казахском научно-исследовательском ветеринарном институте по адресу: 480016, г.Алматы, пр-т Райымбека, 223.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института Автореферат разослан " "__ГЭ96г.

Ученый секретарь

-

специализированного совета,

доктор ветеринарных наук ? / У ~ Б.Ф.Керимканова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность, .темы. Важным звеном в системе лро^илактичес-х мероприятий против бруцеллеза служит вакцинация. В настоя-е время во многих странах мира, а том числе и в Казахстане, рско используется вакцина из штамма 19 (в СНГ с 1354 года).

Для иммунизации телок и коров применяет дозу 80 млрд м.к. кцины из штамма 19, при этом в сыворотке крови взрослых житных длительное время удерживаются поствакцинальные антитела, |Торые препятствуют проведению диагностических исследований и ;ределенив состояния животных по бруцеллезу. В связи с пробле-1Й длительной серопозитивкости был рекомендован ряд методов [•^еренциации пост вакцинальных реакций от реакций у больных (вотных, однако этя проблема до сих пор не решена. В последние |дн за рубегом появились сообщения об зф}ектавности малых доз .кцинн из штамма 19 при иммунизации крупного рогатого скота отив бруцеллеза. При этом серологические реакции исчезают яьгае, чем при использовании полной дозы, что позволяет зкачи-льно раньше проводить диагностические исследования, а создавали при этом иммунитет не уступает таковому при введении полной >эы препарата. 3 последние годы большое внимание ученых прив-кает явление иммунологической толерантности, которую судят, на :нове следуюп?« признаков - отсутствие или уменьшение образова-!я антител на обычный антигенный стимул.

Механизм иммунологической толерантности во многом остается ! выясненным. Учитывая, возможность индуцирования толерантнос-I у взрослых животных путем введения больяих доз антигена, 'ере-I ученых имеется мнение, что возникновение такого состояния тлано с избыточным количеством антигена в организме животного.

Легче всего создать иммунологическую толерантность вводя антиген плоду или новоровденному животному, иммунная система ко торого менее реактивна, чем у взрослого. Иммунная система должна достичь определенной зрелости, чтобы самые малые дозы антиге нов вызывали наибольший э$$ект. Иммунологическую толерантность мошно вызвать высокими дозами антигена (толерантность высокой дозы), а такке очень низкими (толерантность низкой дозы). Эго зависит от иммуногенных доз антигена.

При отборе телок для воспроизводства от коров неблагополз Ньгх с гад используют феномен иммунологической толерантности, который основан на том, что у телят, зараженных в раннем возраст* бруцеллезом, отсутствует реакция как на введение вакцины, так i на повторное заражение бруцеллезом (толерантные телята). Этот показатель является единственным, указываиды на заранение тел

Согласно существующим законодательниц пояогонипу специ^и ческая реактивность организма животных на бруцз-Едезный антиген проверяется путем исследования сывороток кроки через 15-20 хне на титр в РА, после введения вакцина из втадаа 12. При атом в числе отрицательно реагирусдах могу? бигь гивотнда, иызгщав тс лерантное состояние к бруцзллам к ареактисное в результата им* нодефицитности.

Выявл ше большого количества толерантных »авотнкх в прг тических условйяк, сдергивает оздоровление хозяйств от бpyцeлJ за, так как хозяйства несут большиэ потери, связанные прегде i го с недополучением телок, необходимых $лп воспроизводства стг

Нами была поставлена задача в экспериментальных и произ! ственнык условиях определять причины выявления отрицательно р, гирующих телят ка введение вакцины из итамма 19 в хозяйствах

Республики Казахстан.

Цель^и .задачи исследования. Цэлыо настоящих исследований . является определение сущности явления иммунологической толерантности при бруцеллезе крупного рогатого скота в экспериментальных и производственных условиях после иммунизации их вакциной из штамма 1У в стандартной дозе (80 млрд м.х.) и определить метод дифференциации вакцинированных кивотныя от спонтанно больных.

При этом на разреаение были поставлен» слэдув^э задачи: .

- выявить- закономерность выявления при бруцеллезе отрицательно реагнрукадх телят, телок и коров при исследовании на титр в РА после иммунизации вакциной из втамма 19;

- изучить эффективность использования гистамина а ПЦС для ; определения реактивности организма крупного рогатого скота;

- определять эффективность повторного введения вакцины из штамма 19 отрицательно реагкрукщм телятам на первичное введение препарата;

- определить оптимальную схему для выявления специфической толерантности при бруцеллезе крупного рогатого скота с помоев вакцины из отамма 19;

- определить эффективность РИД с О-ПС антигеном КаэНИВИ при диагностике бруцеллеза крупного рогатого скота в производственных условиях.

Научная новизна. Впервые при бруцеллезе крупного рогатого

ф

скота определена сухость выявления отрицательно реагирувг^х телят на введение вакцины из итамма 19.

Впервга при>_ бруцеллезе, показана возможность использования ПЦС путем внутрикокного введения с целью определения общзй реактивности организма телят.

Показана эффективность повторного введения вакцины из штамма 1У для иммунизации телят с целью дифференциации слабореактивных животных от толерантных.

Определена эффективность РИД с 0-ПС антигеном КазНИЗЙ для дифференциации вакцинированных животных от спонтанно больных в ■ сравнении с общзприняткми методами исследования на бруцеллез (РА, РС1С, РБП).

Практическая ценность работы. Способ выявления толерантных к бруцеллезу телят посла иммунизации вакциной из штамма 1У дает, возможность повысить эффективность вакцинопрофилактики путем сохранения маточного поголовья и предотвратить неправильную выбраковку вивотных на откорм, а исследование сыворотки крови телок перед случкой на титр в РА посла реиммункзации вакциной из втамма 19 в малой дозе (3 мАрд м.к.) позволит путем создания единого противобруцзллезного иммунного фона предотвратить аборты бруцеллезной этиологии и способствовать защите их от заболевания.

-Выявление больных «авотных после иммунизации вакциной из штамма 19 и 82 в РИД с 0-ПС антигеном КазНИВИ дает возможность в кратчайшие сроки проводить оздоровление хозяйств от бруцеллезной инфекции путем систематических исследований и изоляции больных вивотцых, тем самым позволит повысить эффективность вактшо-профилактикк при бруцеллезе крупного рогатого скота.

Осцовиуэ ■Полоу.екчя. _внносимые на эажиту:

- результаты определения реактивности организма крупного рогатого скота путем использования гистанина или ПЦС;

- закономерности выявления отрицательно реагирующих телят, телок и коров при исследовании на титр в РА после иммунизации их г-акциной из штамма 19 в полной и малой дозе (80-3 млрд м.к.);

проективность повторного введения вакцину из птамма 19 отрицательно реагирующим животным на первичное ввохонпе препарата;

- возможность диф*ерекцяацин вакцинированных животных от спонтанно больных в реакции РИЛ с помоп&ю О-ПС антигена КаэНИЗИ при диагностике бруцеллеза крупного рогатого скота в произаодс-венных условиях.

Апробация работы.Основные положения диссертации доловены на научной конференции молодых ученых КазНИйИ' (Алматы, 1УУ1), на областной конференции по вопросу борьбы с бруцеллезом й туберкулезом сельскохозяйственных животных №амбвл, 1989), секции ветеринарии НТС МСХ'РН (1991) Ученом совете КазНИВИ (1990-1991) и на меклабораторном совев^ании сотрудников Казахского НИВИ (1995).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 4 статьи, в том числе получен ЯУЭЛ1К АИНСО № 252 при Казпатенте и положительное решение на выдачу патента Республики Казахстан по заявке V 950296.1.

Объем и структура диссертации, диссертация изложена на 104 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, заключение, выводы, практические предложения, список использованной литературы включает 75 источников, в том числе иностранных 46.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материал и методы исследований

Опыты в экспериментальных условиях проводили в ЭПО Жалга-мыс КазНИВД и в производственных условиях в хозяйствах Кордай-ского района Жамбылской области с 1988 по 1992 г.г. Для опреде-' яения обдзй реактивности организма телят использовали гистамин и ПЦС полученной на кафедре оперативной хирургии АЗВИ. Реактивность определяли путем внутрикояного введения ПЦС и гистамина в дозе 0,1 мл в среднюю треть шеи. Читку реакции проводили штангенциркулем по истечении 3-х часов после введения ПЦС и гистамина по утолщении кокной складки. Критерием сценки для телят 4-5 месячного возраста служили следующие показатели: ареактивные -I мм, слабсреактивные - 2-5 мм, средне - 5-8 мм, высокореактивные. - свизе 8 мм. Затем по-степени реактивности животные были разделены на 4 группы: ареактивные, слабо, средне и высокореак-тивнда. Для выявления толерантных к бруцеллезу вивотных использовали вакцину из штамма 19 в дозе 80 млрд м.к. Вакцина из штамма 19 изготавливалась в Алматинском биокомбинате. Перед введением вакцина проверялась на содержание количества визнеспособных клеток. Исследования на титр сыворотки крови иммунизированных животных проводились в РА на 15-20 день после вакцинации вакциной из штамма 19 в дозе 80 млрд м.к. в титрах 1:50, 1:100, 1:200, 1:400 и выше. Для дифференциации вакцинированных вивотных от спонтанно больных при бруцеллезе крупного рогатого скота после иммунизации их вакциной из штамма 19 и 82 использовали РИД с

0-ПС антигеном КазНИВИ. *

Сыворотки крови реиммунизированных животных вакциной из штамма 19 в малой дозе (3 млрд м.к.) в РИД с .0-ПС антигеном проверялись на коровах в указанных хозяйствах Кордайского района

Камбнлской области. Постановка серологических реакций РА, РСК и РБП ставилась по обп^принятш методам исследования.

Нами (К.И.Минжасов, Н.П.Иванов, З.И.Придатченко, 1994) бил получен 0-ПС антиген п реакции РИД для дифференциации вакцинированных уивогних от спонтанно больных при бруцеллезе крупного рогатого скота (по новой более доступной по простоте техно-логик получения) на что получен(Куэлм< при Каэпатенто № 252 и патент Республики Казахстан по заявке № 9502961).

Эта цель достигается путем культивирования бруцелл на питательной среде из сои, технология разработана авторами и в дальнейшем способ получения антигена основан на фракционировании спиртом и фенолом вырапрнной культуры бруцелл и ультрацентрифугированием промытого первичного осадка, а насадочная жидкость используется как антиген.

Полученный антиген расфасовывают по 200 доз в.1 мл и используется для постановки реакции иммунодиффузии ° гело агара (РИЛ) полуавтоматическим дозатором в дозе 20 мкл. Основой'полученного антигена является О-полисахарид полностью ливенннй полисахаридов. Это позволяет исключить иеспецифическке реакции, так как не дает перекрестных реакций с антителами, синтезируюпямися в ответ на другие бактериальные клетки и дает возможность дифференцировать инфицированных бруцеллезом животных от вакцинированных вакциной .из итаммов 19 и 82, через 2 месяца поело очередной реиммунизации.

Полученный авторами антиген апробирован на чувствительность и специфичность в РИЛ, в сравнении с РА и РСК, в качестве контроля использовали антиген ИЭЗЦ и ЛВ, с сыворотками крови пологитель-ных животных.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Выявить закономерность выявления при бруцеллезе отрицательно реагирующих телят, телок и коров при исследовании на титр в РА поело иммунизации вакциной из штамма 19

Согласно суцзствующим законодательным положениям специфическая реактивность организма кивотных на бруцеллезный антиген проверяется путем исследования сыворотки крови через 15-20 дней на титр в РА после введения вакцины из штамма 19. При этом в числе отрицательно реагирующих могут быть животные, имеющие толерантное состояние-к бруцеллам, ареактивные в результате иммуио-дефицитности.

Выявление большого количества толерантных животных в практических условиях, сдергивает оздоровление хозяйств от бруцеллеза, так как хозяйства несут большие потери, связанные прежде всего с недополучением телок, необходимых для воспроизводства стада.

Анализ результатов исследования сыворотки крови животных через' 15 дней после введения вакцины из штамма 19 в ряде хозяйств республики показывает, что число отрицательно реагирующих колеблется от 2,2 до 22,5 %.

Нами была поставлена задача в экспериментальных условиях выяснить частоту случаев выявления иммунологически толерантных к бруцеллезу телят в хозяйствах Республики Казахстан с помощью вакцины из штамма 19, так как это имеет большое практическое значение.

С этой целью нами в экспериментальных условиях в ЭПО 1Кал-к

гамыс Казахского НИВИ совместно с К.И.Минжасовда, В.И.Белобабом проведена вакцинация телят 3-5 месячного возраста вакциной из штамма 19 в дозе 80 млрд м.к. согласно существующему наставлению.

& опыта вез вивотные были исследованы на бруцеллез в PA, FCK и РБП. При этом были получены отрицательные результаты.

До введения вакцины кивотнш предтарительио были исследованы на реактивность организма путем внутрикогаого введения с правой стороны в области средней трети йен ПЦС (пнеамотропная' цитотоксическая сыворотка), а с левой стороны - гнстшлик. ПЦС была разработана и получена на кафедрз хирургии и основ ветеринарии Алматинского зооветеринарного шстнтутп^ нами использована в разведении 1:320 я дозе 0,2 мл.

Учзт реакции проводили через 3 часа поело введения сыворотки и гпстамина путем измерения толщины котной складки при помопя штангенциркуля я сравнении её а величиной до введения препарата.

По результатам этих исследований животные были разделены на 4 группы: ареактивные, слабо-рзактивнкз, средне-реактипнцэ и ввсако-реактивныэ.

Критерии оценки, телят, на реактипиость

Критерии для телят 2-3 Критерии для телят 4-5

месячного возраста: месячного возраст а:

ареактивные - I юл ареактивные - I мм

слабо-реактивные 2-3 мм слабореактивныз 2-5 мм

средне-реактивные 4-5 мм срадне-раакткенне 5-8 мм

высоко-реактивные 6-8 мм высоко-реактивкш свыше 8 мм

Согласно наставлений по применению вакцины из штамма 19, предусмотрено на 20-е сутки исследовать вакцинированных телят на наличие антител (агглютининов) с целью' выявления толерантных животных.

"v ,

В случае получения при серологических реакциях (РА, РСЮ отрицательных результатов, животные считаются толерантными и

согласно инструкции их необходимо поставить на откорм для дальнейшего воспроизводства они не используются.

Спустя 20 дней после вакцин ели и у животных была взята кровь для исследования на величину титров агглютининов и выявления толерантных вивотных. При исследовании сыворотки крови от 36 иммунизированных телят, установлено, что в РБП но реагировало 16 голов, что составило 44,4 %% в РДСК - 19 голов, что составило 52,7 в РА - 13 голов, что составило 27,6 % (таблица I).

Согласно наставлению мы должны их считать толерантными и принять меры к их изоляции. Однако, указанные зивотнш были подвергнуты повторному,исследовали» через 7 дней. При этом из 13 ранее-отрицательно реагирующих клпотных 5 имели позитивные показания в РДСК и РЕП и РА I голова, а 8 оставшихся реагировали негативно. Данные отнх исследований показаны в таблице 2.

При последующем исследовании.через 59 суток после вакцинации из 8 кивотных епр 3 дали положительные реакции на бруцеллез в РБП, РДСК, а в РА всо показали отрицательный результат. Данное явление связано с тем, что при исследовании животных на титр необходимо кроме РА, использовать в комплексе РДСК и РБП, тше кал они взаимно дополняет друг друга.

Таким образом, отрицательными остались 5 телят, из них 2 ареактивны- (6107,-6133) и 3 слабо-реактнвнкэ (6652 , 6013 , 6680).

Определить эффективность повторного введения вакцины из втамма 19 отрицательно реагирув-тщал телятам на первичное введение препарата

Хапее,по примененным нами тестам, не реагирующим гивотным в серологических реакциях вкзли аллерген 8ИЭВ, при этом результаты были отрицательными.

Из этих групп животных сформировали две группы, одной группе в количестве 4-х голов ввели повторно вакцину из штамма 19 в принятой дозе, другой группе в этом же. количестве ввели ПЦС для стимуляции анамнестических реакций на ранее введенную дозу вакцины.

Бустер-доза-вакцины - дополнительная доза, которая вводится через несколько недель после начала вакцинации. Она обеспечивает соответствующую завету путем стимуляции вторичного иммунного ответа.

Большинство живых вакцин стимулирует надеишй иммунитет при введении одной дозы, так,что бустер-доза не "требуется. Время введения последующ доз зависит от длительности возникшего иммунитета.

Для большинства яивых вакцин этот период составляет несколько лет, а иногда вызванный ими иммунитет сохраняется на всю жизнь. Однако, из-за неправильного хранения или недостаточной дозировки живые вакцины могут инактивироваться сразу после введения. Если реакции нет на введенный антиген, то установить трудно. В связи с чем, для усиления иммунного ответа организма гелят мы решили повторно ввести антиген, то есть так называемую Зустер-дозу, чтобы исключить у указанных животных явления толерантности. Хотя нам известно, согласно литературным данным, что три введении•дополнительной дозы антигена толерогенное состояла удлиняется и независимо от•этого вивотннз не реагируют, если эш! толерантный. В случае ро наличия в сыворотке крови имчуниэи-:оэаннь;х »ивотных антител, явление толерантное?!! исключается.

Таблица I

Результаты исследования сыворотки крови телят на 20 день пост иммунизации вакциной из штамма 19 в дозе 8 млрд. м.к.

I

Инвен. ? Реактив-] Р А ! Р'С К 1 |Р1

ПП! 1 № | ность • 50 (юо |200|400 !5 «10 ! 5 !

ЗТ 2 -L-.3-.-i 4 1 ¡3 t 6 г У У г

I 1361 сл.р. -

2 6045 сл.р. -

3 6680 сл. р.

4 665?. сл.р. - - - - - - - -

5 6174 сл.р. -

6. 182?. сл. р. - - - - - - - -

7 5У17 сл.р. 44 4+ « - - +44 44 - +

8 ■ 1549 сл.р. П 44 44 4-Ы- -^44 44 - 4

У 56У8 сл. р. » Й 44 44 44 4

5066 сл.р. 44: п п 44 44 44 - 4

II 6892 сл.р. # 444 - - - - -

12 5856 сл.р. ++ ++ 444 44 44 - - - 4

13 6071 сл.р. ++ ++ 444 444 444 44+ 444 _ 4

14- 686У сл.р. +++ 444 444 444 444 444 - 4

15 6292 сл.р. п +++ 4+4 +44 44+ 44 - 4

16 1510 сл.р. п п 4+ 444 44 44 _ 4

17 5422 сл.р. 44 44 и 44 - 44 44 - 4

18 682.7 сл.р. 44 44 44 44 44 4+4 - 4

ГУ 6133 ареак. - - - - - - - -

20 6107 ареакт. - - - - - - - -

21 6580 ср.р. « я 44 н 4-4 444 +4 - -

22 6739 ср. р. ++ 4+ 44 444 444 +4 - 4

23 6837 ср.р. « 444 444 444 444 44 4

24 6367 , ср.р. 44 44 44 44 44 44 - 4

25 В/н ср.р. 444 444 444 - 4 - - -

26 6738 ср.р. 444 44+ 444 - 444 44 - 4

27 6148 ср.р. 44 44 +4 44 44 444 - 4

28 5996 ср.р. 44 44 •и- 44+ 44 •44 4++ -

29 6169 ср.р. п 44 4+ 444 - - - -

30 6Г53 в.р. 4+ 44 4+4 44 4 4 1.

Продолжение таблицы I

/!>!/) I I.

"Г х;х т ~ - 3 - I ~<ГТ 5 Т "7'1 "ВТ 'Г г ГйЛГЛГ.

31 6700 в.р. +++ -Н-+ + - - + -

32 6592 в.р. П # +++ + ++ +

33 5672 в.р. ■нч- -н- ++ +++ ++ +

34 5684 в.р. ++ -и- -и- ++ +

35 6612 в.р. ++ +++ + ++ ++ +

36 В/и в.р. ** +++• ++ ++ +++ - +

Таблица.2

Результаты исследования сыэороткн крови отрицательно реагирующих телят на 27-е сутки после имг«уннзпции вакциной из атаман 1У

1'йвэнт. !Реак- ! РА 1 Р Л С К ' Р Б П.

ППI }? 1ТЙЕН. ,50 ,100 ,100 »400 5 5 'По 1 "гГ7

1Т — -и--- с 'Г Т" " Г4- Г 5 Г Б т в -Г^Г -!'Г0 т 'ГГ --

I 6107 ареакт. - - -

2 6133 ареакт.

3 6174 сл. р. - _ - -

4 6112 сл. р. ++ •м- ■Н- -И- +

5 1822 сл.р. - - - • -

6 1361 сл.р. - - -

7 6652 сл.р.

8 6680 сл. р. - - -

9 6292 сл.р. ++ +4- + +

Ю 6045 сл. р. - - -

И 68У2 - сл.р. -Н-+ ++ +

12 6580 . сл.р. 4-Н- +4- ■ - - +++ -Н-+ +

13 6592 в.р. ++ - 4-4- ++ +

Таблица 3

Показания серологических реакций у телят отрицательно реагирующих на 39-е сутки после иммунизации вакциной из штамма 19

S 'Реактив. 1_РА_РДСК ! РВП

_____.1_______I ¿00 J. 400 i 5 JIQJ.J»^. i___

1 6174 сл.р. - +++ -м-

2 . 182?. сл.р. ....

3 1361 сл.р. ++ + - - -ни- -и- +

В некоторых случаях введение антигена адъюванта Фрейда толерантным животным может вызвать выраженный иммунный ответ или способствует выходу из состояния толерантности имеются и противоречивые данные.

В связи с вывеуказанными факторами, мы решили проверить влияние ПЦС-сыворотку учитывая, что она готовилась на основе не

полного адъюванта Фрейда использовать в качестве стимулятора для подстегивания иммунного ответа. В результате наших исследований, нами при введении ПЦС были получены противоречивые данные, -то есть ПЦС - не стимулировал дополнительно выработку антител, в то же время во 2-й группе, где вводили вакцину из штамма 19 в полной дозе (80 млрд. м.к.) способствовало у слабореактивных животных выработку антител в сыворотке крови у всех иммунизи рованных .телят.

По ист».-гении семи дней животных подвергли обследованию с помощью РА, РДСК и РЕП. . При этом получены результаты, которые отражены в таблице 4.

Из данных таблицы видно, что при повторном введении вакцины из штаммА 19 ранее отрицательно реагирующим животным наблюдается выработка антител, улавливаемых в иммунологических реакциях с био^абричными антигенами.

Таблица 4

Результаты исследования сыворотки крови телят после повторного введения вакцины из штамма и ПЦС ___________ •____:___1_ и - I___1__I---1---

М 'инвент '__^_™_!Ж!-А5Д§ЕЕ§н_-.

пп ' » |50 !Ю0 »100-400 »5 ! 10 \ 5 > гБ 1 К Г 104-М .

ТГ --<с. — 121 ОС 121ВI 5 335 зшш.зз

I 1361 +++ +++ + ++ - + - ++ -Н-+

г« <- 6133 +++ +++ +++ + ++ ++ + - ++■*• +

3 6652 ++ -м- -н- ++ - +■ - +•+ ++

4 6174 м- -М- +4- + -

5 6045 - - -

б 6107

7 6680 -

8 1822- - ++ 4-+ + +

Эти данные исключили наличие толерантных животных среди отрицательно реагируюпдах животных в поствакцинальный период.

Как было сказано выше, согласно известной классификации, животные по реактивности делятся на 4 группы: ареактивные, слабореактивные и высоко-реактивные. В этой связи при определении.толерантности животных в отношении возбудителя бруцеллеза необходимо учитывать их индивидуальную реактивность на введенный антиген.

На 20-е сутки после вакцинации некоторые иэ них не проявляют иммунологический ответ. В эти сроки исследования реагируют только в основном средне и высоко-реактивные животные, в то же время ареактивныэ и слабо-реактивные животные дают отрицательные результаты или проявляют иммунологические реакции в более поздние сроки (30-35 день).

Спустя 6 месяцев мы дополнительно исследовали сыворотки крови 4-х отрицательно реагирующих телят в предыдущих исследованиях (6045,6107,6680,1922), при этом получены отрицательные

результаты (срок нлбятуекип).

В результате проверенных нами исследований установлено, что в неблагополучных хозяйствах отрицательно реагирующие на первичное введение бруцеллезного антигена животные,не всегда являются толерантными, что вызывает необходимость дополнительного исследования их на реактивность или допривить и исследовать через 7 дней с целью выявления истинных толерантных животных, тем самым сохранить телок, необходимых для воспроизводства стада.

Определить оптимальную схему для выявления специфической толерантности при бруцеллезе крупного рогатого скота с помощью вакцины из штамма 19

Мнныо, полученные нами, подтверждены в эксперименте и в производственных условиях при исследовании животных на титр в РА по истечению 2.0 дней после иммунизации.

В Нордайском районе ¡Какбылской области э совхозе Кок-Кайнар-ский за IV87 год было привито 544 телят 4-5 месячного возраста, которые были предварительно исследованы на бруцеллез и после получения отрицательных результатов серологических реакций (РА.РСК) была иммунизированы вакциной из итамма 19 в дозе 80 млрд.м.к.

По истечении 21 дня были исследованы на титр в РА. При этом было установлено, что из 544 телят в РА реагировали положительно- III, отрицательно- 76, что составило 13,7 %.

Сборная сыворотки крови отрицательно реагирующих телок в количестве 55 голов была дополнительно иммунизированы вакциной из штамма 1У в стандартной дозе, то есть полной и по истечении •21 дня исследованы повторно на титр. При этом установлено, что из 35 положительно реагировали 32, отрицательно только 3 животных, что подтверждает о достоверности данных, подученных нами ране в экспериментальных условиях.

Аналогичные данные получены и по другим хозяйствам Корейского района Жамбылской области. В совхозе км.Розы Люксембург за 1991 год проведена вакцинация телят противобруцеллезной вакциной из штамма 19 в количестве 312. Исследовано на титр в РА 309, положительно реагировали - 294, отрицательно - 15, что составило 4,8 %. 3 совхозе Георгиевский привито 351, исследовано на титр - 350, положительно реагировали - 2У0, отрицательно- 60 голов, что составило 17 %, ноторь® были дополнительно привиты и исследованы. При этом из 58 реагировали яоломтольно псе 58, то есть 100

Всего по совхозу исслздосано на титр п РА 517 голов, яз них реагировали положительно - 511, -отрицательно- 66, что составило 12,7 %.

3 совхозе "Трудовик" исследовано на тптр в РА 510 телят, ка них реагировали положительно - отрицательно - 64, что составило 12,3 %.

3 совхозе "Путь Ленина" исследовано на титр о РА 231, положительно реагировали - 180, отрицательно - 51, что составило 22 %.

3 совхозе "Таланты" исследовало в РА 245 голов, положительно реагировали - 116, отрицательно - 38, что составило 15,5 %.

В совхоза им.К.Азербаева исследовано в РА 182, положител. ю реагировали - 174, отрицательно - 18, что составило - 9,8

Итого по району за 1991 год было привито телят 4-5 месячного возраста в количестве - 3185, из них исследовано на титр в РА 2956, реагировали положительно - 2478, отрицательно - 389, что составило - 13,4 %.

Телята, отрицательно реагирующие в РА при исследовании на

1У

титр, после повторной иммунизации вакциной из штамма 1Э, при дополнительном исследовании выявились единичные случаи отрицательно-реагирующих телок (из ИЗ телок реагировали отрицательно 3).

Таким образом, нами в производственных условиях установлено, что принять® сроки исследования животных на титр согласно сущэст-вуюв$зй инструкции являются недостаточно обоснованными, так как в них не учтены индивидуальные особенности реактивности организма особей, способных по-раоному отвечать на введение указанного препарата, которые могут реагировать в более поздние сроки на введенный антиген.

В связи с этим, мы рекомендуем при выявлении значительного количества отрицательно реагирующих телят на введение вакцины (свкяе 2 %) допривить и исследовать повторно та титр.

Решение этого вопроса позволит предотвратить существенный экономический ущерб, наносимый хозяйствам в результате неправильного определения толерантных животных и их необоснованной зыбра-ковки.

Эффективность ликвидации бруцеллеза зависит от своевременной .диагностики и полноты выявления больных животных в неблагополучных стадах, особенно перед вакцинацией. Несмотря ка количество методов диагностики бруцеллеза, в практических условиях основным методом является серологический. Применяя названный метод, даже при многократных комплексных исследованиях часто не удается выявить всех больных животных.

Такио гивотныо, оставаясь В'-стаде продолжают заражать здоровых. Особенно велика опасность массового перезарая.зкия, копа нгвияолагпыа skoothko gv.gctc с условно здороги.?! пэлнергэ&тси вакцинации нро-и-i бруцеллеза..

Из перечисленных факторов в иммуногенезе бруцелеза пашее значение придается половозрастной и физиологической реактивности, которую необходимо учитывать перед иммунизацией и при пост-вакцмнальных исследованиях.

По вопросу реактивности и ареактивностн крупного рогатого скота при бруцеллезе среди ученых имеются разноречивые мнения. Одни авторы утверждают, что молодняк, полученный от коров неблагополучных стад, до наступления полового созревания и беременности отрицательно реагируют в РА и РСК.

Б работах других исследователей сообвпется, что молодняк аналогичных групп мотет лапать положительные РА и РСК а любом возрасте.

3 неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах яивоттда могут приобрести толерантность я антигенам бруцелл. У гизотных, заря- • венных бруцеллани, первая беременность алшичяалвтся абортом, а-последующие завершаются благополучно, ~отл плод и подвергается воздействию весьма больной дозы бруцеллезного антигена и моксТ приобрести к нему толерантность.

Телята от таких матерей рождаются зараженными. При серологических исследованиях эта зараженность на выявляется. По достижении половой зрелости, после оплодотворения в беременном организме инфекция активизируется и вызывает аборты. Из организма плода выделяются бруцеллн.

Если такие телята до осеменения были иммунизированы против бруцеллеза живыми вакцинами, то при исследовании абортирооаш«-го плода одновременно будут обнарув-ипаться как эпизоотический, так и вакцинные штаммы. Такое заключение согласуется с том, что в хозяйствах с затяяикм течением эпизоотии при сераяогичэскях

«"л т

исследованиях ареактивные швотныо выявляются больше, чем при остром проявлении бруцеллеза. Животные с иммунологической толерантностью будучи зараженными остаются ареактивными при серологических исследованиях на бруцеллез.

. Основным условном индуцирования иммунологической толерантности является внутриутробный контакт бруцелл с развивающимся эмбрионом, что имеет место при бруцеллезе.

Учитывая, что при бруцеллезе в основном у телок происходит заражение перед осеменением, которое затем проявляется в виде аборта, № решили исследовать телок на титр в РА после реиммуни-зации вакциной из штамма 19 в (/алой дозе (3 млрд. м.к.), с целью определения ареактивных, толерантных, а такте скрытых латентных •?орм бруцеллеза среди крупного рогатого скота и созданием у всех животных одновременного иммунного фона, что будет профилактиро-сать как от заболевания, так и от аборта.

В 1у*2. году при обследовании ревакцинированных телок на титр а разрезе хозяйств Кордайского района Кямбылской области были получены следующие результаты:

Совхоз "Коммунистический" ревакцинировано 313 телок, исследовано на титр в РА - 312, реагировали положительно- 305, 7 - пока-' зали отрицательный результат, что составило 2,2 %.

В совхозе "Кок-Кайнарский" ревакцинировано 2.65 телок, исследовано на титр 86, реагировало полокительно-86, отрицательно реагирующих не выявлено.

В совхозе "Сары-Булакский" ревакцинировано 404 телок, исследовано на титр в РА - 126, реагировало положительно- 114, отрицательных - 12, что составило 9,3 %,

В совхозе им.Розы Люксембург ревакцинировано телок 203, исследовало на титр в РА - 159, из них реагировали положительно-67,

отрицательно - 92, что составило 57,8 %.

В совхозе "Георгиевский" ревакцинировано 494 телок, исследовано на титр в РА 485, из них реагировали полошительно-471, отрицательно- 14, что составило 2,8 %.

В совхозе "Таланты" ревакцинировано 141, исследовано телок на титр в РА 471, реагировало положительно- 109, отрицательно-31, что составило 23,4 %.

В совхозе "Жала-Турмцс" ревакцинировано телок 265, исследовано на титр в РА 205, реагировало положительно- 192, отрицательно- 13, что составило 6,3 %.

Итого: по району ревакцинировано телок перед случкой вакциной из штамма 19 в малой дозе 2086, исследовано на титр в РА - 1505,-реагировало положительно - 1344, отрицательно - 169, что составило 11,2 %.

Всем отрицательно реагирующим телкам на вакцину из атамма 19 было повторно штьекцирована вакцина и дополнительно исследованы на титр. При этом были выявлены лишь единичные случаи, которые были изолированы из стада.

Таким образом, все телки перед осеменением имели единый про-тивобруцеллезный иммунный фон, который был создан вакциной из атамма 19, что в свою очередь профилактировала развитие инфекции и предохранила указанных животных от аборта бруцеллезной этиологии.

Определить эффективность РИД с О-Пв антигеном КаэНИЗИ при диагностике бруцеллеза крупного рогатого скота в производственных условиях

Нами была поставлена задача проверить чувствительность и специфичность РИД с 0-ПС антигеном КаэНИВЙ в производственных условиях в сравнении с обдапринять-ми серологическими методами

исследования (РСК, РА).

3 работе использованы сыворотки крови крупного рогатого скота из хозяйств Кордайского района й&мбылской области иммунизированных вакциной из штамма 1У в малой дозе (3 млрд. м.к.).

По истечении года после реиммуниэации вакциной из штамма ГУ в малой дозе (3 млрд. м.к.) коровы были исследованы в РА, РСК и в РЩ с целью дифференциация вакцинированных животных от спонтанно больных в разрезе района, при этом были установлены следующие результаты.

В хозяйстве "Коммунистический" при исследовании на бруцеллез из 72У коров было выделено 2 головы положительно реагирующих, которые были исследованы дополнительно в РЩ, с 0-ПС с антигеном КазНИВИ, где также был получен аналогичный результат. Указанные животные были изолированы из стада и выбракованы как больные животные. В хозяйстве им."Путь Ленина" при исследовании 1083 коров положительно реагировало 6 голов, в то же время в РЩ было выявлено лишь 5 голов. В "Трудовике" при исследовании в РИЛ из У51 корон не выявлено положительно реагируюздох животных на бруцеллез, в "Алмалы" из 365 голов выделено положительно реагирующих 4 головы. В "Нана-Турмысе" из 274 голов выявлено лишь 2 головы положительно реагирующих в РИЛ с 0-ПС антигеном Казахского НИВИ. В совхозе"Кок-Кайнарский" из 257 положительно реагировали 4 головы как в РИЛ, так и в серологических исследованиях (РА,РСК). 3 "Сарыбулакском" из 600 исследованных коров положительно реагировало 7 голов, которые были также изолированы и выбракованы как больные животные.

В хозяйствах "Талапты" и"Кокпатас" при исследовании короя соответственно из 4У8 и 364 не выявлено ни одной голопы положительно реагирующих на бруцеллез.

Итого: при исследовании из 6810 коров пояснительно реагировали а РИД лишь 17 голов. Таким образом, нами установлено, что при помощи ГОД с 0-ПС антигенам КазНИВИ представляется возможным выявлять спонтанно больных бруцеллезом «говотных и дифференцировать в свою очередь их от вакцинированных вивотных вакциной Из штамма.19.

ВЫВОДЫ

1.Лля определения обп»й реактивности организма телят, необходимо использовать ПЦС путем внутрикокного введения и дозе 0,1 мл в среднюю треть шеи.

2. Принятые сроки исследования на титр в РА на 15-20 день язляются необоснованными и их необходимо исследовать на 30-35 день с учетом индивидуальной реактивности вивотных на вводимый антиген.

3. Для телят 4-5 месячного возраста определена схе»,э. введения вакцины из втаммд 1У, с целью выявления толерантных к бруцеллезу животных путем повторного введения вакцины, что позволяет дифференцировать слаборепктисных от толерантных.

4. Реиммунизация крупного рогатого скота вакциной из штамма 1У в малой дозе (3 млрд. м.к.) с последующи исследованием в РА на наличие антител способствует повьетению иммунного статуса и предохраняет вивотных от бруцеллеза.

5. Исследование сыворотки крови реиммунизированных телок вакциной из штамма 19 в дозе 3 млрд. м.к. с 0-ПС антигеном КазНИВИ

в РИД, позволяет дифференцировать вакцинированных тавотных от спонтанно больных при бруцеллезе крупного рогатого скота.

ПРАКТИЧЕСКИЙ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

При выявлении значительного количества отрицательно реагнруг-чх телят на введение вакцины из птамма 1У (от 2 до Ю %) необходимо их дополнительно иммунизировать и исследовать по истечения 7-15

днзй. В случае выявления отрицательно реагирующих телят, считать их толерантными.

Реиммуиизированных телок вакциной из штамма 1У с малой дозе (3 млрд.м.к.) нзобходимо исследовать на выработку агглютининов по истечении 15-20 дней в РА для создания единого иммунного фона с целью профилактики аборта бруцеллезной этиологии.

Для дифферегщиации вакцинированных животных от спонтанно больных, необходимо исследовать сыворотки крови иммунизированных животных в РИД с 0-ПС антигеном КазНИВИ.

РИД с О-НС антигеном позволяет контролировать и следить за эпизоотической ситуацией, а таккэ способствует проведению оздоровления хозяйств от бруцеллезной инфекции.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ РАБОТ

1.Минкасов К.И..Антюхов В.М..Куттуков Б.Ч..Нурабаев Д.А. Применение вакцгшы из штамма 1У в связи с различной реактивностью «квотных.// Труды КазНИВИ-1994.-С.51-58.

2.Минкасов К.И..Куттуков Б.Ч. Эффективность вакцины из штамма 19 с целью выявления толерантных и латентных форм течения бруцеллеза у крупного рогатого скота. // Курнал "Аграрная наука для стран СНГ"-1985. № 5-СЛ7.

3.Миниасов К.И..Куттуков Б.Ч.,Антюхов В.М. Метод предотвращения аборта бруцеллезной этиологии у первотелок.Куэл»к АШСО № 252.

4.Минрасов К.И. .Иванов Н.П. .Придатченко 8.И. .Куттуков Б.Ч., Антюхов В.М. Способ получения антигена для серологической диагностики бруцеллеза крупногц рогатого скота. Предварительный па- -тент Республики Казахстан по заявке № 950296.1.

KïïturçOB Ёауыряан Пайзатулы

19 птаииалы вакцинамеи ¡шмундаяган 1 р 1 rçapa арасынан бруцеллезбен ауирран иалдарды аньцтау

Ветеринария гтымдарины^ кандидаты дареяес1н rçoppay

16.00.09 - иалдзр1герд1к микробиология, иинунояогяя,

эпизоотология жэие малдардыц жу^пали aypysapu

Зерттеу тв^црнбы: цакцикаларди жана 19 итаммани долдана

отирып 1р1 {¡ара бруцоялеэ»не диагноз цоя хоне алдынала са^таидару яолдари зерттзлд1

Бузауларди 19 штвималц вакцинаиен таиундаганиая к®й1н йру-целлезге твэшдшпн аньцтау ад1с\ ваг.цинанм егу ареалы аурудаи са^тандиру т и i м д t л I г I и арттнрады, сэуии налиннц Q,,aH егц»алугш цвмтацаеш етвд1, бордаг,ыланатнн малды бракца ангарранда агаттиг^а хол бермеЯд1. ал 19 птаммалы ваяцинаазн азыала дозада 3 млрд.».к. ^аДта иииумдаганнан кей1н цаяарлардыц j^qh сарысуын агрля»инацня ргакциясыизн титрлел зерттегенде бруцеллвзге rçapcu Ötpun.raR икау-нитет тугыэу ар^нлы бруцаллездеи болатмн $птастау?а зол бвриоуге, оларды аурудаи са^тандыруга кумк1нд1к туади.

19 жэне 82 птаммалм ваяциналармсн иммундиц диЭДузия реакциями, Г,аэ'!ГЗИ-д1:-', 0-ЛЗ антигвн1н ^олдану арциян иниундалРйннан яей-íh ауру н«*ди аныцтау паруааилицта бруцеллез ауруы СаЯцалран иалдарды двргу о^яауяап еидеугв, соя арцияи бруцеллезгэ налдиццап 1рГцарара цояданыяатнн гакцинаныц тиП!д1л1г1и арттчруга uyuictH-д!я Йервд!.

RESUME

Kuttukov Baurjan Chaysatovlch. "Reveval 111 brucellosis omnia Is aaong horned cattle,tnnunlty vaccine in shtaois 19."

To look for academic degree the candidate of the veterinary science.

IS.06.03. VetorInary.slcroblology,lonunology and Infection Illness of anloals.

Subject of Investigation:

Hays of reveval tolerable to b.rucellosls heifer after tnsiunl-;y vaccine In shtaaa 19 give iis chance to raise effective vacclne-nrophylactlc by Beans of reservation Bothers live-stock and prevent srong choose antaals to fatten.so investigation serua of heifers blood before the sex on ,tltr In RA after rc-tamunlsatlon vaccine' in shtanc 19 In little dose /3 000 000 000 n.k. / give chance by oeans to creation the only entlbrucel lesls lsmunlty background to prevent abortion brucellosis toauntty etiology and assist they about 111.

Reveval 111 anloals after issaunlty vaccine In shtaaa 19 and 32 In HID with 0-PC antigen KazNIVI give us chance In short tltse conduct loprove sanitary conditions of econooy about brucellosis . infection by oeans systematic Investigations and isolation ill anl-nals.so ouch alio« raise the effective vacclnoprophllactlc by brucellosis horned cattle.