Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Инактивированные адъювант-вакцины из штаммов Br. abortus 45/20 и Br. melitensis 53H38 при бруцеллезе крупного рогатого скота

ГОСУДАРСТВЕННАЯ КОМИССИЯ СОВЕТА МИНИСТРОВ СССР ГО ПРОДОВОЛЬСТВИЮ И ЗАКУПКАМ

ВСЕСОЮЗНЫЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАЖНИ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НАУЧНО-КОНТРОЛЬНА ИНСТИТУТ ВЕТЕРИНАРНЫХ ПРЕПАРАТОВ

На правах рукописи КАСЬЯНОВА ЛЮДМИЛА ОВДОРОВНА УЖ 619:616.90:579.841.93.5:615.371:636.22/28

ИНАКТИВИРОВАННЫЕ АДЬЮВАНТ-ВАКЦИНЫ ИЗ" ШТАММОВ Вг.аЬог1118 45/20 и Вг.теШ:епав ззнза ПРИ БРУЦЕЛЛЁЗЕ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

16.00.03. - Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

;У / / ) / >

Москва - 1991

Работа выполнена во Всесоюзном ордена Трудового Красного Знамени государственном научно-контрольном институте ветеринарных препаратов, Северо-Кавказском зональном научно-исследовательском ветеринарном институте, Узбекском ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательском ветеринарном институте и хозяйствах .Октябрьского района Ростовской области.

Научный руководитель - доктор ветеринарных наук

профессор tii'MHJIOB K.B,.

Официальные оппоненты - заслуженный деятель науки РСЙСР,

доктор ветеринарных наук, профессор Селиванов A.B.

кандидат ветеринарных наук, доцент Кузьмин Г.Н.

Ведущая организация - Всесоюзный научно-исследовательский

институт бруцеллеза и туберкулеза животных

Защита состоится -ЯЬ Щ-<?НЛ 1991 г. в часов

на заседании Специализированного совета Д.120.85.01 при Всесоюзном государственном научно-контрольном институте ветеринарных препаратов

Адрес: 123022, Москва, Звенигородское шоссе, 5, ВГНКИ

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВГНКИ вет-препарагив »

Автореферат разослан "ЛЬ" J99J г#

Ученый секретарь Специализированного совета, кандидат ветеринарных наук

зырев Ю'.А.

I.' ВВЕДЕНИЕ

1.1. Актуальность темы. Увеличение производства животноводческих продуктов в стране будет зависеть от интенсивности развития животноводства. Главной причиной, сдерживающей развитие этой отрасли сельского хозяйства является неблагополучие по бруцеллезу сельскохозяйственных животных. Ликвидация бруцеллеза - это не только дополнительный резерв увеличения животноводческой продукции, но и охрана здоровья людей.

Успех борьбы с бруцеллезом во многом определяется наличием высокоэффективных сред и методов диагностики и специфической профилактики, а также своевременным применением комплекса организационно-хозяйственных и ветеринарно-санигарных мероприятий.

В современных условиях для специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота как у нас в стране, гак и за рубежом широкое распространение получила живая вакцина из штамма Вг. вЬохЧив 19 с пениженной вирулентностью, обладающая выраженными иммуногенными свойствами. Однако, у привитых этой вакциной животных в крови длительное время персисгиругог специфические антитела, что создает трудности в оценке эпизоотической ситуации по, бруцеллезу гуртов.

В связи с этим изыскание вакцин без йоствакцинальной или слабой серопозигивносгью и высокой иммуногенносгью является одной из важных задач ветеринарной науки. В этом плане практический интерес представляют две французские вакцины производства фирмы "Рон-Мерье" - инактивированная адъюванг-вакцина из 'штамма Вг. аЪогЧиз 45/20 /АВОВТОХ / и инакгивир0ванная адьювант-вакцина из штамма вг • «е11Лвпэ1а 53Н38 / АВОВЬАЯЕ Д •

По литературным данным указанные вакцины характеризуются достаточной иммуногенносгью. Их можно использовать в неблагополучных по бруцеллезу стадах, а также применять независимо от физиологического состояния животного. Кроме того, отмечается, что при исследовании сывороток крови от привитых животных вакциной из штамма 45/20 поствакцинальные реакции отсутствуют.

Все вышеуказанное послужило основанием для изучения в экспериментальных и производственных условиях на крупном рогатом скоте биологических свойств вакцин из штаммов 45/20 и 53Н38 в сравнении с вакциной из штамма Вг. аЬоггиа 19.

1.2. Цель к пазаш: гссчелсвт'к° Целы) ь&его/це* работ р.ьляог-ся дать "■р&Енл- тельчуо сценку ккпкгивкрсванныы адмовант-ЕИ.-цянам француз.-"'ого 11г)оцяео,п,стг;о £ир?.аг "Рон-Мерье", лзгогсБЛяек:ым из штаммов Вг.бЬоггив ¡3/20 и Зг.те11Лепе1а бСМЗЗ с тем, чтобы определить целесосбгз¿ноеть приобретения их дль ликвидации бруцеллеза крупного рогатого скота в напей стране.

В связи с этим были поставлены следующие задачи:

- изучить иммуногэньые свойства вакцин на морских свинках;

- изучить ь .о;:сп&р>.ментальных и производственных условиях на телках, нетепл х и корогах реакгогенныэ <экг;:генные ,сенрибилиэирутие и иммуногенные снойстпа указанных вячцПн;

- определит", эгпзоогологичзскую эффективность применения вакцин из штаммов 45/20 и 53Н38 при бруцеллезе крупного рогатого скота в производственных условиях; . ■

- на основании полученных данных дать заключение Главному управлению ветеринарии о целесообразности применения изучаемых вакцин в целях оздоровления неблагополучных хозяйств от бруцеллеза ' крупного рогатого скота.

1.3. Научная новизна. Впервые в нашей стране в сравнительных опытах на крупном рогатом скоте показана высокая иммуногенноегь инактивированных адаюьант-вакцин из штаммов Кр^аЬсиЧив 45/20

и аг.та11гвпб1в 53Н38; установлена эпкзсотологическая эффективность использовании инактивщюванной адвявант-вакцины из стамма 45/20 при оздоровлении хозяйств, неблагополучных по бруцеллезу крупного рогатого скота и даны научнсобоснованные рекомендации по ёе применению; показана перспективность конструированич в нашей стране подобных вакцин с использованием неагглюгиногенных или слабоагглюти-

ногеншх лгаммов бруцелл.

1.4. Ппзкги.'-ескак ценность. На осног.ании полученных данных ре-

ко.чендопгнг Главц. му управлению ветеринарии в целях специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота использовать инак-тиг.ирсьаниум ядь^Бапт-вакцину из штамма Вг.вЬоггив 45/2.0.

Ре'фаботано "Наставление по применению адмовант-вакцины инакти-РИС огм чоИ из штамма -15/20 бруцепла абортус (Аборгокс) против бруцел-лгг-.е, крупкегл реггтого скота (Утв. Главным управлением ветеринарии Реестр с пу нг. СССР 15 июля 1989 г.).

Т.;5. ¿л;* ~|У!я. ряботк. Материалы диссертации доложены на:

- Учоюгчэ Совета ЕГСХ.! ветпрепарагов 1984, 1985, -

1986, 1987, 1988 гг.;

- конференции молодых ученых ВГНКМ вегпрепаратов - 1985, 1986, 1987, 1988 гг.;

- межлаборагорном совещании научных сотрудников ВПИИ.

1.6. Публикации. По материалам диссертации опубликовано три статьи и две сданы в печать.

1.7. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 166 страницах машинописного текста и включает введение, об-аор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы, практические предло;/зния, список литературы и приложение. Работа иллюстрирована таблицами и 8 рисунками. Библиографический список включает в себя 372 наименования, в том числе 146 иностранных.

1.8. Основные положения диссертационной работы,выносимые на защиту

- Результаты экспериментального изучения на телках, нетелях и коровах реакгогенных, аллергенных, антигенных и иммуногенных свойств инактивированных адьюванг-вакцин из штаммов Зг. еЪохЧив 45/20 и Вг. ае11Чвпе1з 53Н38 производства фирмы "Рон-Мерье" /Франция/ в сравнении с вакциной из штамма вЪогЧиа

- Эпизоотологическая эффективность применения инактивированных адьюванг-вакцин из штаммов 45/20 и 53Н38 при оздоровлении хозяйств, неблагополучных по бруцеллезу крупного рогатого скота.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследований

Работа выполнена по заданию Главного управления ветеринарии Союза ССР в лаборатории контроля и стандартизации препаратов против бруцеллеза, кампилобактериоза и иерсиниоза ВГШ(И вегпрепарагов, в лабораториях по изучению бруцеллеза Северо-Кавказского зонального научно-исследовательского ветеринарного института /СКЗНИВИ/ и Узбекского научно-исследовательского ветеринарного института /УзНИВИ/, Шахгинской райветлаборатории, в колхозах им. круизе, им. Кирова и "Родина" Октябрьского района Ростовской эбласти. Работа проводилась при содействии научных сотрудников

указанных институтов, а также практических ветеринарных врачей хозяйств и ветеринарной лаборатории в течение 1984-1989 гг.

В экспериментальной работе было использовано 310 морских свинок, 262 телки, нетели и коровы.

В производственных условиях работа проводилась на 4364 головах крупного рогатого скота /среднегодовое поголовье/.

Всего было проведено 30061 серологических и 1214 аллергических исследований. Бакисследованию подвергнуто 258 морских свидак /2580 объектов/ и 264 головы крупного рогатого скота /7920 объектов/.

Вся экспериментальная работа была проведена по методикам МО/ВСЗ, которые применяются при изучении штаммов бруцелл и бруцеллезных вакцин.■Лабораторная диагностика бруцеллеза, в частности, роз бенгал проба /РБП/, реакция агглютинации /РА/, реакция связывания комплемента /Р&С/, реакция длительного связывания комплемента /РДСК/ и бактериологические исследования проводили согласно "Наставлению по диагностике бруцеллеза животных",утвержденному Главным управлением ветеринарии ЫСХ СССР 30 декабря 1982 г.

При работе было использовано 6 серий вакцин французского производства фирмы "Рон-Мерье", из них: адыовант-вакцина ABOBTOi из штамма ¿r.ebortus 45/20 - четыре серии / З*1, 29I.40A3II, Ö0B321, 70Е352/ и адыованг-вакцина lBOHLAHE из штамма Вг . molltaneia . 53Н38 две серии /0081Р и 40A09I/.'

В качестве контроля были взяты эталонные штаммы Вг .«bor» tue 19 и Ю414 и Вг. mellteneis Рев-1, а также, вакцины из этих штаммов, изготовленных Алма-Атинским и Целковским био-комбинагами.

■ Крупному рогатому скоту вакцину вводили в объеме 3 мл в дозе 450 млрд м.к. - из штамма 45/20 подкожно или внутримышечно, а из штамма Ь (Н38 - только подкожно в области подгрудка.

Вакцину a30rt0x при первичной иммунизации вводили

дважды с интервалом в 30-50 дней, а затем ревакцинировали животных ежегодно. Что касается вакцины A30RLAHE , го введение ее было однократное.

Вакцины советского производства вводили животным в соот-

ветствии с наставлениями по их применению,

2.1. Изучение иммуногенных свойств адъовант-вакцин из штаммов 45/20 и 53Н38 на морских свинках.

На 310 морских свинках массой 350-400 г было проведено 4 опыта.

В первом опыте из 75 морских свинок было сформировано пять групп, которых иммунизировали вакцинами из штаммов 45/20, 53H3S, 19 и I04M, пятая группа служила контролем. Егорой опыт поставлен на 105 морских свинкэх, им^ннзир авали животных теми же вакцинами, что и в первом опыте.

В третьем опыте на 70 морских свинках изучали иммуногенные свойства адыованг-Еакцин из штаммов 45/20 и 53Н38 и две группы служили контролем - одна группа была привита вакциной из штамма I04M и вторая оставалась ьсиммунизированной.

Четвертый опыт был поставлен на 60 морских, свинках. Первую группу привили адьюванг-вакциной из штамма 45/20, вторую - штаммом 19 и третья группа оставалась непривитоЯ /контроль/.

Через 70-90 дней после иммунизации морских свинок заражали заранее оттитрованной культурой вирулентного штамма Вг . ebortue 54 в дозе 50-80 м.к. /10-16 МВД/» а спустя после заражения 3540 дней убивали для бактериологического исследования. При этом из каждого объекта /10 объектов/ делали посевы на одну пробирку бульона и две агара. Посевы учитывали в течение 20 дней.

2.2. Изучение реакгогенных, аллергенных, антигенных и иммуногенных свойств адыовант-вакцин на крупном рогатом скоте в экспериментальных условиях.

Опыты проводили в колхозе им. Фрунзе Октябрьского района Ростовской области. При этом были использованы 139 телок крас-' ной степной породы, ранее не подвергавшихся вакцинации против . бруцеллеза. Для заражения телок переводили в лабораторию по изучению бруцеллеза СхСНИВИ. Убой животных проводили на санитарной бойне Шахтинского мясокомбината.

Схема опыта приведена в таблице I.

Вакцину авонтох телкам вводили в объеме 3 мл в дозе 450 млрд м.к. внутримышечно в области крупа или подкожно в области подгрудка, a adrians в той же дозе и в том же объеме, но только подкожно.

Вакцину из штамма 3r . abortus 19 применяли в соответствии с наставлением по ее применению.

Через 2 месяца после ревакцинации всех телок, в том числе и контрольных, случали с быками-производителями.

2.2.1. Изучение реактогенных свойств вакцин

После вакцинации в течение 10-15 дней ежедневно у животных измеряли температуру тела и регистрировали общее их состояние, измеряли также припухлость тканей на места введения вакцины и путем'пальпирования ее консистенцию в течение года.

2.2.2. Изучение аллергенных свойств вакцин

Для определения аллергической перестройки организма привитых животных проводили ежеквартальные исследования методом паль-пебрального введения бруцеллина ВИЭВ. Аллерген вводили под кожу нижнего века в дозе I мл. Учет реакции проводили в крестах визуально и путем пальпеции через 48 часов после введения диагнос-тикума.

2.2.3. Изучение антигенных свойств вакцин

Динамику накопления антител определяли путем исследования сыворотки крови животных в РБП, РА, РСК и РДСК по общепринятым методикам на 7-й, 15-й, 30-й дни после вакцинации, далее один раз в месяц в течение года, затем с интервалом 1-2 месяца до конца опыта.

2.2.4. Изучение иммуногенных свойств вакцин на крупном рогатом скоте

Иммуногенные свойства инактивированных адьювант-вакцин из штаммов 45/20 и 53Н38 изучали в сравнении с живыми вакцинами из штаммов (/tortus и ^044 в 5Рех опытах на 262 телках, не-

телях и коровах.

Проверку "алряженносги иммунитета проводили путем заражения иммунизированш к животных заранее оттитрованной на аналогичных телках /нетелях/ вирулентной культурой.

Культуру вводили коньюнктивально в дозах 2,5-5 млн м.к.

После иммунизации телок и нетелей заражали через 12 месяцев /354 дня/ и 21 месяц /638 дне^ после вакцинации или 273 дня после реракцннации/.

В одном опыте на коровах иммуногенные свойства вакцин изучали в неблагополучном по бруцеляову стаде без экспериментального раражоиия.

Таблица I

Схема опыта

Ж Название Проверка иммунитета

груп- вакцины вакци- ция циЯ через через

пы вот- нация за 2 в 10 ме- ' 2 йе-

нах. в воз- мес. день сяцев сяца

в расге перед ревак- после после

груп- 3-8 осеме- цина- вак- отела

пе мес. нением ции цина-

ции

/гол/ /гол/ /гсл/ /гол/ /гол/ /гол/

I АЗОНТОА 10 10 - - 10 -

2 10 10 10 - - 10

Я (шт.45/20) 10 10 [ц' 10

4 10 10 - 10

5 А30Ы.АЛЕ 10 10 _ 10 _

6 10 10 10 - - 10

7 (ШГ.53Н38) 10 10 10

е 10 •и 10 10

9 10 10 - - 10 -

Ю Вакцина 10 10 10 - - 10

II из 10 10 - - — 10

12 штамма 19 10 - - 10 - 10

13 Контроль 10 - - - 10 -

14 Контроль 10 - - - - 10'

ИТОГО 140 . 90 30 30 40 100

После заражения для бактериологического исследования гелок и нетелей убивали через 45-49 дней. При убое для бак-высевов отбирали по 25-28 объектов (лимфатические узлы, внугрен-

ние органы, плоды).

Из каждого объекта делали посевы на одну пробирку ШПГГБ и 2 пробирки ШПГГА. Бактериологические высевы ввдерживаяи в термостате при температуре 37-38°С в течение 20 дней.

2.2.5. Изучение эффективности иммунизации коров адьовант-вакцинами из штаммов 45/20 ( азойтох ) и 53КЗ8 ( азоеьаяе ) в контролируемом опыте

Опыт проведен на 123 коровах колхоза "Родина" Октябрьского р-на' Ростовской области, неблагополучного по бруцеллезу крупного рогатого скота. Для этого по 25 коров иммунизировали вакцинами из штаммов 5г .аьогшв 45/20, .тв1Пвпэ1в 53Н38, Зг .вЪоггив 82 и 24 - вакциной из штамма .ьЪоггиа хд, 24 коровы оставили невакцинированными /контроль/. После иммунизации данное стадо исследовали на бруцеллез ежемесячно серологическими методами и через 3,9 и 12 месяцев - аллергическим методом. Через 16 месяцев после вакцинации все коровы были убиты для бакисследования.

2.2.6. Определение эффективности адыовант-вакцин при оздоровлении крупного рогатого скота от бруцеллеза в производственных условиях

Эффективность адыовант-вакцин изучали в двух хозяйствах с ограниченным и массовым распространением бруцеллеза /колхоз "Родина" и колхоз им. Кирова/.

Перед началом испытания вакцин из штаммов 45/20 и 5ЭН38 было сделано обследование всего поголовья крупного рогатого скота на бруцеллез. После чего был разработан комплексный план оздоровительных мероприятий. В плане предусматривали проведение ветеринарно-санитарных и организационно-хозяйственных мероприятий, направлеьшх на ликвидацию бруцеллеза. В общем комплексе противобруцелл ¡зных мероприятий проводили иммунизацию всего крупного рогатого скота адьювант-вакцинами из штаммов 4Е/20 и 53Н38.

После первого введения вакцины из штамма 45/20 через 30 дней поголовье исследовали на бруцеллез в РА и РОТ. Животных, •давших положительные реакции.удаляли из стада и сдавали на убой, а остальных прививали повторно в той же дозе.

Животных, привитых вакциной из штамма 53138 исследовали на бруцеллез не ранее чем через 12 месяцев после вакцинации.

Реиммунизацию проводили вакциной из штамма 45/20 через 12 месяцев после вакцинации и далее ежегодно до 1988 года.

Серологические исследования проводили ежеквартально.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ ,

3.1. Результаты экспериментального изучения инакгивированных адьювант-вакцин из штамма ~г. аЬсиЧиэ 45/20 и Зг .тв1Нвпв1а

53Н38 на телках, нетелях и коровах

3.1.1. Реакягенные свойства вакцин

Установлено, что после введения телкам вакцины из штамма 45/20 температура тела животных повысилась в среднем по группе на 1,7°С. Причем, повышенная температура тела у всех животных удерживалась в течение б дней и только на 7-й день, за исключением отдельных животных, она пришла в норму.

Что касается этого показателя у телок, привитых вакциной из штамма 53Н38, го в целом по группе она была несколько ниже, чем у животных, привитых вакциной из штамма 45/20, однако приходила в норму позднее.

Следует отметить, что температурная реакция у телок на введение живой вакцины из штамма 19 была более выраженной, чем у первых двух групп животных, иммунизированных адыованг-вакцинами. Так, в первые 2 дня после вакцинации температура тела у телок была вше нормы на 1,8-2°С.

При изучении местной реакции на введение адьювант-вакцин, в сравнении с живой вакциной из штамма 19, было установлено, что вакцина из штамма 45/20, введенная телкам внутримышечно, на месте инъекции в первые б дней вызывает незначительную припухлость в размере 11,2-15,1 с кг и к 10-му дню она составляет всего лишь 0,6 см*". Совсем другая картина наблюдается при подкожном введении телкам вакцины из штамма 53Н38. Так, уже через день после иммунизации припухлость у животных на места введения достигает 45,7 см*% на 3-й день увеличивается до 79,3 см^, затем идет некоторое снижение.

При изучении реакгогенных свойств вакцины на нетелях, ре-вакцинированных адьюванг-вакциной 45/20 через 12 месяцев после

вакцинации подкожно в области подгрудка, не было установлено существенной разницы е реакции на введение препарата как по фону пакцт ы из штамма 53Н38, гак и по ссбсггенному фону. Следует отметить, что у некоторых животных припухлость размером в куриное яйцо удерживается больше года.

3.1.3. Антигенные свойства пат,:-;1

Антигенные свойства адъ^ванг-ракцин били изучены в сравнении с вакциной изуттамма 19 на телках к нетелях. В результате "его было уогановленс, чгс вакцина из штамма 45/20 '.ткет вызывать у животных появление агглютининов и комплементсЕКЭЫРаюцих антител в • низких тиграх и непродолжительное время.

Чго касается вакцины ез штамма 53Н38, го по указанным свойствам она несколько превосходит агглюгиногенную вакцину из штамма 19. Так, если при исследовании сывороток крови жиестных в первые 7 дней после инмунизаци/. количество положительно реагирующих и содержание агглютининов б крови было больше у телок, привитых штаммом 19 - соогвегсггенно 66,7 и 95,7^, а средний титр РА - 110,5 и 597,3 МЕ/мл /Р < С ,01/, то уже при исследовании через 15 дней все телки обеих гр^пл ргагирогал:' положительно.

Е дальнейшем при исследовании телок, привитых вакциной из штамма 5?Н38 в РА, /через 92 дня/ дали -положительную реакцию

животных, в го рремя как в группе иммукизкрсг-аниых вакциной из штамма 19 только ''0%.

При последующих исследованиях в группе животных, привитых вакциной из штампа £~Н38, как правило, титры РА были вы'ле, чем к контрольной группе телок, иммунизированных ракциной из штамма 19. Достоверная разница по количеству реагирующих животных была зарегистрирована о 92 дня после иммунизации и до конца опыта, а по количеству "одержанин антител /средние титры/ - с 92 по 156-й I и на 247-Р. дет /? < С,01/.

Чго кеглетел динамики содержания ксмплеменгсвязыванщих антител у сироти,.чммунизироеанных вакциной из штамма 53НС6, го мож-н' о:'.'.,5г,1гь, «го уже на 7-й день после введения вакцины они были см «Ч'угены у 10* телок и н~ 1С—й день - у СОТ?, но количество нивот-! пх, д-'^'-их пс лок./,тег.ьнук1 РС.Ч в с^оки было ниже, чем у иммуни-?Г{ :х г-т-цпч Г' к? г гамма 19 / X. " На 30-Г. и С4-Й дни

-II, положительно реагирующих телок р опытной группе было соответственно 90,0-83,2^, т.е. этот показатель был несколько выше, чем у контрольной группы, привитых вакциной из штамма 19 - 82,8 - 79,37? /Р <. 0,05/;

X 2 = 3,25 и 1,2.

При исследовании животных в этой реакции через 92, 122 и 156 дней после иммунизации количество положительных реакций в обеих группах было почти одинаковым, затем оно начало постепенно снижать-' с? и к. 494 днч> положительно реагирорали 20* животных. Достоверная разница между опытной и контрольной группами в числе животных, давших положительную PC.Í, зарегистрирована с 92 дня и до конца опыта.

При сравнительном изучении антигенных свойств вакцин из штамма 53Н38 и 19 на телках различного возраста и с разным иммунным фоном было установлено, что иммунный ответ у'однократно вакцинированных гелок з 4-8 и 16-20 месячном возрасте более выражен у животных, привитых Е молодом возрасте /на 18,8-49,ч%/.

3.1.2. Сенсибилизирующие свойства вакцин . ■ •

Сенсибилизирующие свойства адг-'срант-ракцин в сравнении с вакциной из шга?.з.:а 19 были изучены на 00 телках, пририткх в '"-Н местном розрясте " "п 'JO - иммунизированных и реиммункзнрованннх в IG—20 месячном возрасте. В первом случае животных исследовали ежеквартально в течение 18 месяцев и во втором - через 102 к 195 дnef? /табл.2/.

Результаты исследований показали, что наиболее выраженными сенсибилизирующими свойствами обладала ватина из тптамма 45/20. Так, при исследовании телок через 92 дня после иммунизации положительно реагировало 06,75 животных, в то время как из группы телок, иммунизированных вакциной из птямт ЬЗНЗЗ - только 10% и значительно меньший процент положительно реагирующих был в группе животных,, при-' витых вакциной из штамма 19 - 25,7% /Р < 0,05/. Также и в последующие сроки исследования наибольшее число положительно реагирующих живот- . ннт бняо выявлено из группы, иммунизированных вакциной из штамма 45/20 /Р < 0,05/. Следует отметить, что живая вакцина из итямма 19 по своим сенсибилизирующим свойствам значительно уступает /? < 0,05/ ннактивированнш адьквант-вакциням.

Что касается влияния ревакцинации на аллергическое состоянии жкротнкх, привитых разными вакцинами, го при исследовании через 102 дня -было установлено, что вакцина из штамма 45/20 как у рова^цинппо-

Таблица 2

Результаты аллергических ас следований телок, иммунипкрованных вакцинами из штаммов 19, ¿3:138 и 45/20

Дни Исе- Реа- % в том ч/олэ

после вак- ле- • ДО- ва- но ги- ро-ва-ло сценка реакции

ци-на- + Н-+ ++++

ции х-х по-лож. ж- •х % ж- ■х % : к-х % ж-х %

вакцина из шташа 45/20

92 30 26 Во,7 I ГЗ '3 и , 0 0 20,0 4 13,4 15 50

176 30 17 56,7 2 6,7 3 10,0 5 16,7 7 23,3

278 30 16 5313 3 10,0 2 6,7 6 20,0 5 17,5

354 30 14 46,7 4 13,3 3 10,0 I 3,3 6 20,0

428 10 5 50,0 I 10,0 1 10,0 I 10,0 2 6,7

562 10 3 30,0 - - 2 20,0 I 10,0 - -

вакцина из I штамма 53Н38

92 30 8 26,7 3 10,0 2 6.7, 2 6,7 I 3,3

176 29 5 17,2 2 6,9 I 3,5 2 6,9 ■ - -

278 30 5 16,7 2 6,7 I 3,3 I 5,5 - -

354 29 ■ 5 17,2 4 13,8 - - - • - . - -

428 10 3 30,0 I 10,0 2 20,0 - - - -

вакцина из 1 штамма 19

92 .30 . 8 26,7 3 10,0 2 6,7 2 6,7 I 3,3

176 29 V > 17,2 2 6,9 I 3,5 2 6,9 - -

278 30 - 16,7 2 6,7 I 3,3 I 5,5 - —

354 29 5 17,2 4 13,8 - - — - - —

•128 10 3 30,0 I 10,0 г 20,0 _ - _ —

562 10 - - - - - - т - - -

ванных, так и однократно вакцингрованных телок вызывала почти одинаковую аллергическую перестройку организма. Чт^ касается вакцин из штатов 53К23 и 15,. то здесь наблюдали другуп картину. Так, число положительно реагирующих животных, ревакцлнированних адьювант-вакцинсй из зтамма 53Н38 и иг. 19 было выше на сО% по сравнению с 'однократно иммунизированные/.

Что касается результатов исследований животных в более поздний срок/195 дней/ после введения r-акцин, то значительной разницы по группам не установлено.

Отмечено также, что имеется прямая зависимость между количеством положительно реагирующих животных в группе и выраженностью реакций на введение вакцин. Так, если в группах телок, привитых вакциной из штамма <5/20 почти во все сроки исследования было выделено больте положительно реагирующих животных на 20-ñ0%, чем на кгамм 19, то и по силе выраженности реакции / с учетом 4-х крестовой оценки/ первая вакиина значительно превосхолит вторую.

По своим сенсибилизирующим свойствам вакцина ип штамма 53Н38 занимает промежуточное положение между Е.акц:шами из тгам.га 45/20

и 19.

3.1.4. Иммуног'снние свойства вакцин

Сггыты на морских свинках. При проверка иммуногонных свойств адт-юванг-вакцики из штата 45/20 в 4 опытах иммунитет был установлен у 5."?,0-91,7л,- животных и у иммунизированных вакциной из штамма 53Е36 - у 35,7 - 100^ /указанная наицпна проверена в 3-х опытах/'. Следует при отом укапать, что взятые для контроле живые вакцины из штаммов Br.abortua 19 и' I04M показали более высокую иммуногенноегь. Так, в 3-х опытах на иммун/лированных вакциной из штамма 19 было иммунных 92,3-100$ морских свинок. Еакцпна.пз игш-

1лэ 10 4М была из всех вакцин наиболее ишлуногечной, т.к. во всех 3-х опытах противостояли экспериментальному запаяем«. 1С0/. животных.

В четырех опытах из 51 неприг.игой /контрольной/ м'.р^коЯ тин-не заразилась только одна.

Опыты на телках и нетелях, пммуногекнь» своГ.сгра имлгп'Г.иро-

ванных адьювант-вакцин французского производства фирмы "Рон-Мерьо" из штаммов 45/20 и 53Н38 изучали в экспериментальных условиях на телках и нетелях в сравнении с живой вакциной из штамма 19 и в контролируемом опыте на коровах, но уже в сравнении с двумя вакцинами из штаммов 19 и 82. Результаты исследования приведены в таблицах 2 и 3.

Таблица 2

Результаты проверки иммунитета у телок,иммунизированных адьювант-вакцинами из штаммов 45/20 и 53Н38,в сравнении с живой вакциной из штамма 19

Наименование вакцины

Кол-во Зара- Индекс

телок зи- инфици-

в лось рован-

группе . телок носги

Процент иммунных

АЗОЛТОХ ю

АВОМ,АМБ Ю

вг,аьоги1а 19 ю

КОНТРОЛЬ 10

8 11,3

100 100 100

ПРИМЕЧАНИЕ. В связи с тем, что в контрольной группе заразилось только 80% телок, го и в опытных группах следует уменьшить число иммунных животных на 20%.

Данные таблицы 2 показывают, чго_в опыте при 80%-ном заражении контрольных животных, во всех 3-х опытных грушах устояли * экспериментальному заражению 100% привитых телок, иммунизированных в 4-8 месячном возрасте. Следует указать, что в данном опыте проведено довольно щадящее заражение, т.к. из 10 контрольных животных заразилось только восемь. Однако из этого опыта видно, что сбе адьювант-вакцины при заражении телок через 12 месяцев после вакцинации обладали высокими иммуногенными свойствами, не уступающими вакцине из штамма 19.

Во втором опыте /табл.2/ иммуногенные свойства адьюванг-

вакцин были изучены путем заражения телок через г38 дней после однократной вакцинации в 4-8 мес. возрасте, ревакцинированных через 273 дня после вакцинации, а также впервые вакцинированных в 16-20 месячном возрасте в день ревакцинации однократно иммунизированных телок.

Таблица 3

Результаты проверки иммуногенных свойств адьювант-вакцин на телках и нетелях

Номер Наименование

груп- вакцин пы

Срок заражения /дней/

вак-ци-нации

ревак-ци-нации

Животных в

группе

всего

в

т.ч.

стельных

За-рази-лось'

Индекс

инфи-

циро-

ван-

ности

Процент иммунных

I лзояхох 638 - 7 5 2 6 3,21 71,4

2 273 - 7 3 I 2 1,09 85,7

3 638 273 7 6 I 5 2,66 85,7

4 А2 0Н1< А-'Е 638 - 7 6 2 А 2,08 71,4

5 - 273 - 8 4 2 4 1,95 75,0

6 638 273 7 6 0 0 0 100,0

>7 Зг. оЬог^ив г^638 - 8 •8 I I 0,45 87,5

8 273 - 6 3 I 1 0,63 83,3

9 638 273 8 6 0 0 0 100,0

10 КОНТРОЛЬ - - 8 I 8 39 19,7 -

Как видно из таблицы 3 все вакцины у иммунизированных телок и нетелей при проверке иммунитета через 633 дней после вакцинации вызвали довольно высокий иммунитет. Отмочено, что во всех группах животных реиммунизация способствовала усилению иммунитете на 12,5-28,6%, особенно это касается вакцины из штанмз 53НЗП. 6 связи с этим просматривается целесообразность ревакцинации через сд/н

~ -10-год после иммунизации.

3.1.5. Изучение эффективности иммунизации крупного рогатого • скота адьюванг-вакцинами в условиях контролируемого опыта

Опыт поставлен на 123 коровах, из которых было укомплектовано 5 групп. Животные первых четырех групп были привиты вакцинами из штаммов 45/20, 53Н38, 19 и 82, пятая группа служила контролем. В результате данного опыта представилось возможным изучить дополнительно антигенные свойства вакцин, а также эпизоо-тологическуго их эффективность'. Опыт поставлен на животных неблагополучного отделения колхоза по бруцеллезу крупного рогатого скота.

Установлено, что вакцина из штамма 45/20 обладает слабыми антигенными свойствами. Так, во все сроки исследования компле-менгсвязывающих антител не было вццелено, в го же время отдельные животные давали положительную РА в невысоких тиграх в течение 4 месяцев, аналогичная каргина наблюдалась и при исследовании коров, привитых вакциной из штамма 82.

Совсем другую каргину наблюдали при исследовании коров, привитых вакцинами из штаммов 53Н38 и 19. В РА на 30-й день после введения вакцины из штамма 19 реагировало 79,2$ животных и на штамм 53Н38 - 92,0%. При исследовании коров через 60 дней после иммунизации тигры РА в обеих группах резко снизились. Так, если на 30-й день среднее геометрическое.значение количества антител в I мл сыворотки крови у животных, привитых вакциной из штамма 19 было 30 ЫЕ/мл /11-692/ и шгаммом 53Н38 126 МЕУмл /67-239/, го на 60-й день соответственно - 26 МЕ/мл /3-364/ и 24 МЕ/мл /2-274/".

В дальнейшем на протяжении всего времени исследования /475 дней/ титры РА у животных были ниже диагностических, хотя отдельные животные /4-12%/. давали положительные реакции. Отмечено также, что 56-60$ привитых животных могут давать после вакцинации положительные реакции до 14 месяцев и 16 месяцев - 1055 привитых шгамом 19 и 20% - адьаванг-вакциной из штамма 53Н38 в разведении сывороток 1:100.

При исследовании всех групп животных в РСК через 2 месяца после иммунизации, наибольшее количество коров, давших,положи-

гельный результат; было среди привитых вакцинами из штаммов 19 и 53H3 - соответственно 92,0$ и 87,а при проверке через год - 41,7$ и 3¡Ж- При исследовании всех групп животных в РСК через 16 месяцев наличия комплементсвязывающих антител не регистрировали.

Что касается результатов проверки коров контрольной группы, го следует сказать, что при исследовании их в те же сроки, как и коров опытных групп, положительно реагировали единичные животные. Так, в течение 475 дней при 15-ти кратном исследовании дали положительные реакции 5 коров, которые были убиты для бактериологического исследования и путем посевов патматериала культуру бру-целл не выделили.

По окончании опыта, т.е. через 475 дней после иммунизации все коровы опытных и контрольной групп Д02 головц/ были убиты на санбойне Шахгинского мясокомбината, а из лимфатических узлов и внутренних органов сделали бактериологические высевы. При этом ни в одном случае культура бруцелл не была вьщелена.

Таким образом, результаты бактериологических и серологических исследований подопытных и контрольной групп коров позволяют сказать, что вакцины из штаммов Br .abortus 45/20 и 82 являются слабоагглютиногенными, в то время как из' штаммов Зг . Btortu3 19 и Br. aellton3is 53Н38 - высокоагглюгиногенными.

Можно полагать, что все изучаемые вакцины в данном опыте защищали животных от заражения бруцеллезом, однако учитывая тот факт,что и среди контрольной группы коров не было заразившихся, то по данному опыту не представляется, возможным сделать убедительное утверждение.

3. Результаты испытания инактивированных ах^вант-вакцин из штаммов Зг . abortus 45/20 и^г . ««lltenevs 53Н38 на крупном рогатом скоте в производствешмс условиях

Изучение эффективности применения инактивированных адь*,вант-вакцин при оздоровлении- крупного рогатого скота от бруцеллеза было проведено в двух колхозах Октябрьского района Ростовской области - им. Кирова и "Родина".

¿{олхоз им. Кирова. Работа проводилась с 1984 по 1989 год. На день работы в колхозе имелось 1910 голов крупного рогатого скота, е т.ч. 907 коров. Хозяйство неблагополучно по бруцеллезу крупного рогатого скота фактически с момента его организации /1955/. В 1959 г. колхоз, был оздоровлен от указанной инфекции с применением вакцины из штамма 19, однако фактически хозяйство оставалось неблагополучным и по 1982 год наблюдали вспышки бруцеллеза, в связи с чем на хозяйство вновь были наложены ограничения по бруцеллезу.

В качестве сродства специфической профилактики бруцеллеза с 1975 г. использовалась вакцина из штамма Вг . abortus 82.

В 1982 г. при плановом исследовании крупного рогатого скота на бруцеллез было ввделено 30 голов положительно реагирующих, а хозяйгсво объявлено неблагополучным. В этом же году проведена иммунизация поголовья вакциной из штамма 82. Всего в 1982 году было Еыязлено 175 положительно реагирующих на бруцеллез животных. В 1983 году число больных бруцеллезом было аналогичным, что и в 1982 г. /166 голов/. Зарегистрировано 30 абортов.

С июля 1984 года в колхозе начали применять инакгивирован-ные адьгаванг-вакцины фирмы "Рон-Мерье".

С 1984 по 1939 годы в хозяйстве было иммунизировано вакциной А30ВТ0Х . 4823 голшы и A30RLAKE - 521 . За указанное время выделено положительно реагирующих 182 головы. Для оздоровления колхоза or бруцеллеза потребовалось более 2-х лег. В настоящее время хозяйство является благополучным по бруцеллезу крупного рогатого скота.

Колхоз "Родина". Как и в колхозе им. Кирова работа проводилась с 1984 по 1989 год.

На начало испытания вакцин в колхозе имелось 2454 головы крупного рогатого скота, в т.ч. 839 коров. Колхоз был неблагополучен по бруцеллезу крупного рогатого скота с момента его организации, т.е. с 1955 года. Для борьбы и профилактики с данным заболеванием в хозяйстве с 1957 по 1975 год применялась вакцина из штамма 19. В 1973 г. хозяйство от бруцеллеза было оздоровлено. С 1975 г. для иммунизации поголовья стали применять вакцину из штамма Зг . abortus 82.

При плановом исследовании в марте 1982 года на форме № I были зарегистрированы положительно реагирующие киьотнке. Всего за год было выделено 24 больных бруцеллезом коровы, а в 1983 году - 77 /19,7%/. При бактериологическом исследовании ис абортированного плода была получена вирулентная культура Чг . abortua . В июле 1983 года все поголовье было иммунизировано вакциной из штамма 82. За 6 мес. 1934 года при исследовании животных на бруцеллез было выделено 70 /23,7%/ положительно реагируопих коров.

Колхоз в сентябре 1983 года был объявлен неблагополучным по бруцеллезу крупного рогатого скота.

В мае 1984 года три гурта коров, размещенных на данной ферме, были объединены в один гурт, из которого продолжали выделять больных животных. Этот гурт был использован нами в дальнейшем для постановки контролируемого опыта по сравнительному изучения эффективности адьюванг-вакцин при оздоровлении стада от данной иьфекции.

В марте 1984 года при исследовании коров других 4-х гуртов было выделено 7' голов /1,3%/ положительно реагирующих на бруцеллез. В частном секторе, а также на ферме среди коров и нетелей регистрировали аборты.

После исследования животных на бруцеллез и сдачи больных на мясокомбинат коров и нетелей иммунизировали вакциной из штамма 45/20 и телок всех возрастов - 53Н38. С 1985 по 1989 год вакцинировали и ревакцинировали все маточное поголовье крупного рогатого скота только вакциной из штамма 45/20.

С 1984 по 1989 год было привито вакциной из штамма 45/20 4319 голов и 53Н38 - 439.

В четвертом квартале 1985 г. и в 1986 г. было проведено 3 серологических исследования, при этом из 530 исследованных голов, привитых вакциной из штамма 45/20 реагировало 16 или 3% и иммунизированных штаммом 53Н38 416 голов/20,9%/ Животных, привитых вакциной из штамма 45/20, давших положительные реакции сдзли на убой, а привитых штаммом 531138 оставили в хозяйстве и так поступали в последующем.

В сентябре 1986 года, через год после ревакцинации я через два года после вакцинации,при исследовании 794 коров гыяияено

IQ голов положительно реагирующих. Все реагирующие молодые коровы телками перец случкой бычи нг.г.г/низированы вакциной из штз:,п.:а 5-Н38. Вакцина мг- указанного штамма является Еысокоагглют:'ногенкой, как нами установлено в экспериментальных условиях на телках.

В 1957 го"у при четырехкратном исследовании из 1025 коров выявлено с8 /С,Сл/, доящих сомнительную и 19 /1,65?/ положительную РА, а та>гже 3 керогы дали положительную PCX. Положительные реакции обнаружены у коров, ранее привитых вакциной из штамма 53Н38.

Б I9SB году при 4-х кратном исследовании 1041 коровы выявлено 26 /2,0%/ с. титрами только 1:50.

При ппнновом исследовании на бруцеллез в 1989 году 2300 голов крупного рогатого скота было установлено, что ситуация по данному заболеванию характеризуется как благополучная. Так, при первичном и повторных исследованиях 834 коров отрицательная реакция на бруцеллез установлена у 816 /97,84,?/, 17 коров дали сомнительную реакцие, /2,07%/, и только у одной коровы установлена положительная РА в разведении сьшоротки I:100.

Что касается телок всех возрастов, то полученные данные не вызывают никаких сомнений об их благополучии по бруцеллезу, т.к. только одна телка из 1456 исследованных дала сомнительную РА в разведении сыворотки 1:50 /0,07$/.

Сомнительные реакции, как правило, обнаруживали у коров ранее иммунизированных адьювант-вакциной из штамма 53Н38. Однако следует ртмогигь, что многократные прививки вакциной из штамма 45/20 могут вызывать появление агглютининов в крови иммунизированных животных в низких титрах длительное время.

Хозяйство оддоровлено от бруцеллеза_крупного рогатого скота и в данное время является благополучным .

БЫЕ0£Д

1. Установлена высокая эпизоогологическая эффективность применения адьювант-вакцины" из штамма Br.ebortua .45/20 при оздоровлении неблагополучных'хозяйств по бруцеллезу крупного рогатого скота. Т.°.к, за 2-3 года ее применения были оздоровлены от бруцеллеза колхо-эк- 1-м. Кирова и "Родина" Октябрьского района Ростовской области.

2. Лдьвнпнг-ванцкна штамма Br.ebortua 45/20 обладая вы-p.t'tiü-ими ги^'ногешпми свойствами и будучи слабоагглютиногенной ¡■.ли ейгггм нслгг."?!г:шоре»шой, позволяет проводить оздоровление не-

^ :-г.-;,чгь:х хозяйств по бруцеллезу крупного рогатого скота и может

быть рекомендована для практического применения.

2. Результаты испытания инакгивированных адьмвант-вакцин из штаммов Зг.вЬоггив 45/20 и Зг.яв11*еав1в 53Н38 указывают на перспективность конструирования и применения в нашей стране подобных препаратов с использованием неагглютиногенных или слабоаггл.. гиногенных штаммов бруцелл.

4. В опыте на телках иммунизированных в 4-8 месячном возраст« инакгивированкнми адьюванг-вакцинами из штаммов Вг.вЬоггиа 40/20 •и Вг.шв1Ив!181в 53Н28,установлен 80% иммунитет при заражении их вирулентной культурой бруцелл через 12 месяцев после пммунизац.м.

5. Установлено, что инакгивированные яд^-ювант-еакцины из штаммов Зг.вЬоггаа 43/20 и Вг.та11Лепа1з С2Н38, как и живая вакцина из штамма Вг.еЬохЧив 19, создаю? у иммунизированных телок длительный и стойкий иммунитет /71,4-87,5/3 в течение 038 дней/, а ревакцинация их через 12 месяцев после иммунизации усиливает иммунное состояние организма на 12,5-29,6/3 и является целесообразной.

6. 'Лнактивированные адьюванг-сакцины из штаммов Зг.еЪотЧиа 45/20 и Вг.:пв1ивп01э 52Н38 в сравнительных опытах с живши агглптиногенными вакцинами из штаммов Зг.»ЬохЧив 19 и Ю4М создавали у вакцинированных морских свинок иммунитет достаточно высокой напряженности /69,2-100$?/. Однако отдельные серии вакцины из птаимл 45/20 могут по этому показателю значительно уступать живым енкциням.

7. Инактивированные адъювант-вакцины из штаммов Зг.вЬоггив 45/20 и 13г.тв11Лвпв1а 53Н38 обладают для крупного рогатого г.'.-тч высокими реактогенными свойствами, выражающимися в повышении тс-мпг--рагуры тела и сильной местной реакцией в виде припухлости на м^сто подкожного введения вакцины.

8. Обе адъювант-вакцины вызывают в организме привитых жи^огнл сильную аллергическую перестройку, однако вакцина из штамма иЬ/УО обладает более выраженными сенсибилизирующими свойствами, чем 1'.-> -штамма 53Н38. Кивая сухая вакцина из штамма 19 по своим е.енсиби рующим свойствам значительно уступает первым двум вакцинам.

9. Адхяванг-вакцина из штамма Цг.еЬогЧиа 43/20 ячлу-ется нч-агглютиногенной. Однако отдельные ее серии могут тгшг-лть у имч^,. ванных телок б единичных случаях появление агглютининов и ¡ишг-.-связывающих антител в н.-.зких титрах и не продг.луигелме.о пгог.гл {

3 - бруцеллезным антигеном/.

10. Адьмванг-вакцина из шгамма Br.melitensiB 53Н38,как и w.iF.'-iH сухая вакцина из шгамма Br.abortus 19, обладает выраженными антигенными свойствами. У иммунизированных гелок агглютинины и ;тмппеменгсвязываюв;ие антигела могут регистрироваться более года.

11. Поскольку адьюввнт-вакцина из штамма Br.eellteneie 53Н38 обладает высокими реактогенными и антигенными свойствами для круп-'.•рго рогатого скота, а ее иммуногенность не превышает таковую вакцины ;:з шгамма Br.»bortue 19, она не может быть рекомендована для практического применения.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Наставление по применению адыованг-вакцины инактивированной ко штамма 45/20 бруцелла аборгус /Аборгокс/ против бруцеллеза крупного рогатого скота / в порядке производственного опыта/.

Утверждено Главным управлением ветеринарии Государственного ' Агропромышленного комитета СССР 15 июня 1989 года.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Касьянова Л.5. Результаты сравнительного изучения реакгоген-

ннх и иммуногеннык свойств адьюванг-вакцин из штаммов Br.ebortuo <15/20 и rir.saeliteaelB 53Н28 на морских свинках и телках. /Всесоюзн. гос.научн.-контрольный ин-т вегпрепарагов. /Сб. науч. гр. - М.,1985. -C.C7-7I.

2. Касьянова Л.Ф. Антигенные, аллергенные и иммуногенные свойст-rü убитых адьюванг-вакцин из штаммов Br,»bortua 45/20 и Br.molitenela • СГ!'38. .//Всессюзн. го с. науч.-контрольный ин-т вегпрепарагов. /Сб. ичуч. тр. -М., 1966. -С. 24-26.

3. Шумилов К.В., Шихалеев D.H., Касьянова Л.5., Бондаренко В.З., /гц.пиченко Л.П., Малышева Л.А., Щипко С.Г., Харченко A.A./ • >:\улм'пты изучения иммуногенных свойств убигых прогивобруцеллезных /л: гагг-вакцин на крупном рогатом скоте//Сев.Кавк. зональн. н.-и. •"г. ин-т /Сб, науч. гр. - Новочеркасск, 1988. -С.49-53.