Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Инактивированные адьювант-вакцины из штаммов Br. abortus 45/20 и Br.meltensis 53Y38 при бруцеллезе крупного рогатого скота

и -и? О ^ -ГОСУДАРСТВЕННАЯ КОМИССИЯ СОВЕТА МИНИСТРОВ СССР ГО ПРОДОВОЛЬСТВИЮ И ЗАКУГКАМ

ВСЕСОЮЗНЫЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НАУЧНО-КОНТРОЛШЙ ИНСТИТУТ ВЕТЕРИНАРНЫХ ПРЕПАРАТОВ

На правах рукописи КАСЬЯНОВА ЛЮДША ЩОРОВНА УДК 619:616.98:579.841.93.5:615.371:636.22/28

ЙНАКТИВИРОВАНШЕ АДЬШАНТ-ВАКЦЙНЫ ИЗ ШТАШ03 Вг.аЪсгЬиа 45/20 и Вг,тё1д£епэш 53Н38 ПРИ БРУЦЕЛЛЕЗЕ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

16.00.03. - Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология й иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Москва - 1991

Работа выполнена во Всесоюзном ордена Трудового Красного Знамени государственном научно-контрольном институте ветеринарных препаратов, Северо-Кавказском зональном каучно-исследовагельс ком ветеринарном институте, Узбекском ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательском ветеринарном институте и хозяйствах .Октябрьского района Ростовской области.

Научный руководитель - доктор ветеринарных наук

профессор ШУМИЛОВ К.Е„

Официальные оппоненты - заслуженный деятель науки Р05СР,

доктор ветеринарных наук, профессор Селиванов A.B.

кандидат ветеринарных наук, доцент Кузьмин Г.Н.

Ведущая организация - Всесоюзный научно-исследовательский

институт бруцеллеза и туберкулеза животных

Защита состоится (МОН& 1991 г. вчасов

на заседании Специализированного совета Д.120.85.01 при Всесоюзном государственном научно-контрольном институте ветеринарных препаратов

Адрес: 123022, Москва, Звенигородское шоссе, 5, ВГНКИ

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВГНКИ вет-препаратвв «

Автореферат разослан "*Z3" I99J г.

Учений секретарь Специализированного совета кандидат регеринарлых наук

' Jf/TUb+fffioзырев DJ

h-ЛШЛШ

- ■ - I. ВВЕДЕНИЕ

i.'iAoi.I. Актуальность темы. Увеличение производства животновод-здуктов в стране будет зависеть от интенсивности раэви-ия животноводства. Главкой причиной, сдерживающей развитие этой траели сельского хозяйства является неблагополучие по бруцеллезу ельскохозяйственных животных. Ликвидация бруцеллеза - это не олько дополнительный резерв увеличения животноводческой продук-ии, но и охрана здоровья людей.

Успех борьбы с бруцеллезом во многом определяется наличием асокоэффекгивных сред и методов диагностики и специфической рофилактики, а также своевременным применением комплекса органи-ационно-хозяйственных и ветеринарно-санитарных мероприятий.

В современных условиях для специфической профилактики бру-гллеза крупного рогатого, скота как у нас в стране, так и за ручном широкое распространение получила живая вакцина из штамма г. abortus 19 о пениженной вирулентностью, обладающая выражении иммуногенными свойствами. Однако, у привитых этой вакциной тогных в крови длительное время персисгируют специфические ангела, что создает трудности в оценке эпизоотической ситуации по, уцеллезу гуртов.

В связи с этим изыскание вакцин без йоствакцинальной или со абой серопозитивностью и высокой иммуногенностью является од-й из важных задач ветеринарной науки. В этом плане практичес-Й интерес представляют две французские вакцины производства рда "Рон-Мерье" - инактивированная адьювант-вакцина из штамма г. abortus 45/20 /АВОВТОХ у и инакгивированная адыованг-кцина из штамма Br- melitensia 53H33 / ABOBLAJS Д

По литературным данным указанные вакцины характеризуются згаточной иммуногенностью. Их можно использовать в неблагопо-даых по бруцеллезу стадах, а также применять независимо от фи-элогического состояния животного. Кроме того, отмечается, что 1 исследовании сывороток крови от привитых животных вакциной из 1мма 45/20 постванцинальные реакции отсутствуют.

Все вышеуказанное послужило основанием для изучения в экс-тменгальных и производственных условиях на крупном рогатом ire биологических свойств вакцин из штаммов 45/20 и 53Н38 в 1внении с вакциной из штамма Br. abortus 19.

1.2. Цель / з-ззавд .-ссчедсванк' Цельп ьасто.-цеГ работы якчяет-ся дать •■•раг тельник» оценку ккпкгквирсЕбнным адьюеант-ЕОкцикнм француз ■"•"■ого ироиэродства £иркы "Рон-Мерье", изготовляемым из игам-мов Вг. ььогЧив 15/20 и Зг.теИЛап81а 5СН23 с тем, чтобы определить целесообразность присбпетения их дл?; ликвидации бруцеллеза крупного рогатого скота в напей страна.

В связи с &тим бмли поставлены следующие задач/.:

- изучить мммуногеньке свойства вакцин на морских свинках;

- изучить б экспериментальных и производственных условиях на телках, нетелях к кооггах реантогеннке £кп:гонь-ые.сеярибилизирующие кммуногеньые свойства указанных вакцин;

- определи?'.« эггиэоогологическу» ¡¿ффектквг.осгь применения вакцин из штаммов 45/20 и 53!!33 ¡три бруцеллезе крупного рогатого скота в производственных условиях; • . •

- на основании полученных данных дать заключение Главному управлению ветеринарии о целесообразности применения изучаемых вакцин в целях оздоровления неблагополучных хозяйств от бруцеллеза ' крупного рогатого скота.

1.3. Научнпн новизна, Впервые в нашей стране в сравнительных опытах на крупном рогатом скоте показана высокая имыуногенность инактивированных аднзьант-вакцин из штаммов %»«Ьоггиа 45/20

и Вг.тв11Лапв1в 53Н38; установлена эпизоотологическая эффективность использования инактивированной адаованг-вакцины из штамма 45/20 при оздоровлении хозяйств, неблагополучных по бруцеллезу крупного рогатого скота и даны научнсобоснованные рекомендации по ее пр! ыепенш; показана перспективность конструирования в нашей стране полойннх вакцин г использованием неагглютиногенных или слэбоагглюти-

ногеннмх шрбмков бруцелл.

1.<1. Практи.' с.окзя ценность. На осист.ании полученных: данных ре-

ко'»ндсгук«т Плавя- му управлению ветеринарии в целях специфической пргф'.ла!.тики бруцеллеза крупного рогатого скота использовать инак-т.ирот анну») «дьг.Бьиг-вагцкну из штамма Вг.»ЬогШв 45/20.

Ре-фг.йотнно "Нас-гбьЛБние по-применению адьввант-вакцины инакти-р$Ч от ы »ой из штамма 15/20 бруцепла абортус (Абортокс) против бруце; яг-:?, крулксгл ргп.гого скота (Утв. Главным управлением ветеринарии Гсг'.м'рс.пр' ьг. СССР 15 »тля 1909 г.).

1,;5. ¿,л; ;'.чботь:. Материалы - диссертации доложены на:

- Ученого Совета ВГН'С! вегпрепчрйтое 1984, 1985,

1986, 1987, 1988 гг.;

- конференций молодых ученых ВГНКИ ветпрепарагов - 1985, 1986, 1987, 1988 гг.;

- межлабораторнсм совещании научных сотрудников ВГНКИ.

1.6. Публикации. По материалам диссертации опубликовано три статьи и две сданы в печать.

1.7. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 166 страницах машинописного текста и включает введение, об-аор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы, практические предложения, список литературы и приложение. Работа иллюстрирована таблицами и В рисунками. Библиографический список включает в себя 372 наименования, в том числе иностранных.

1.8. Основные положения диссертационной работы,выносимые на защиту

- Результаты экспериментального изучения на телках, нетелях и коровах реакгогенных, аллергенных, антигенных и иммуногенных свойств инактивированных адыовант-вакцин из штаммов Зг. аЬот^в 45/20 и Вг. веПгвг^в 53Н38 производства фирмы "Рон-Мерье" /Франция/ в сравнении с вакциной из штамма вг. аЪог*ио

- Эпиэоотологическая эффективность применения инактивированных адыовант-вакцин из штаммов 45/20 и 53Н38 при оздоровлении хозяйств, неблагополучных по бруцеллезу крупного рогатого скота.

г. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и метода исследований

Работа выполнена по заданию Главного управления ветеринарии Союза ССР в лаборатории контроля и стандартизации препаратов против бруцеллеза,"кампилобакгериоза и иерсиниоза ВГНКИ ветпра-пардгов, в лабораториях по изучению бруцеллеза Северо-Кавказского зонального научно-исследовательского ветеринарного института /СКЗНИВИ/ и Узбекского научно-исследовательского ветеринарного института /УзНИЕИ/, Шахгинской райветлаборатории, в колхозах им. Фрунзе, им. Кирова и "Родина" Октябрьского района Ростовской области. Работа проводилась при содействии научных сотрудников

указанных институтов, а также практических ветеринарных врачей хозяйств и ветеринарной лаборатории в течение 1984-1989 гг.

В экспериментальной работе было использовано 310 морских свинок, 262 телки, негели и норовы.

В производственных условиях работа лровсдилась на 4364 головах крупного рогатого скога /среднегодовое поголовье/.

Всего было проведено 30061 серологических и 1214 аллергических исследований. Бакисследованию подвергнуто 258 морских свияок /2580 объектов/ и 2о4 головы крупного рогатого скога /7920 объектов/.

Вся экспериментальная работа была проведена по методикам ФАО/ВСЗ, которые применяются при изучении штаммов бруцелл и бру целлезных вакцин. Лабораторная диагностика бруцеллеза, в частности, роз бенгал проба /РБП/, реакция агглютинации /РА/, реакция связывания комплемента /РйС/, реакция длительного связывали: комплемента /РДС;(/ и бактериологические исследования проводили согласно "Наставлению по диагностике бруцеллеза животных",утвержденному Главным управлением ветеринарии ЫСХ СССР 30 декабря 1982 г.

При работе было использовано 6 серий вакцин французского производства фирмы "Рон-Мерье", из них: адьавант-вакцина AB0R1Q3 из штамма -r.abortue 45/20 - четыре серии / З^ 291/,0АЗН, Ö0B32I, 70Е352/ и адыованг-вакцина АВОйЬАДБ из штамма Вх . melitaneie . 53Н38 две серии /0081Р и 40A09I/.'

В качестве контроля были взяты эталонные штаммы .вЬог" tue ig и X04I^i и Вг, mollteneis Рев-I, а также, вакцины ш отих штаммов, изготовленных Алма-Атинским и Целковским био-комбииатами.

■ Крупному рогатому скоту вакцину вводили в объеме 3 мл в дозе 450 млрл м.к. - из штамма 45/20 подкожно или внутримышечно, а из шг'аюа Ь Ш38 - только подкожно в области подгрудка.

Вакцину ABORTOi при первичной иммунизации вводили

дважды о интервалом в 30-50 дней, а затем ревакцииирсвали живот-пах ежегодно. Что касается вакцины АВОШДЯЕ , то введение ее било однократное.

Вакцины советского производства вводили животным-в соог-

ветствии с наставлениями по их применению.

2.1. Изучение иммуногенных свойств адьованг-вакцин из штаммов 45/20 и 53Н38 на морских свинках.

На 310 морских свинках массой 350-400 г было проведено 4 опыта.

В первом опыте из 75 морских свинок было сформировано пять групп, которых иммунизировали вакцинами из штаммов 45/20, 53Н38, 19 и I04M, пятая группа служила контролем. Второй опыт поставлен на 105 морских свинн-зх, иммунизировали животных теми же вакцинами, что и в первом опыте.

В третьем опыте на 70 морских свинках изучали иммуногенные свойства адагавант-вакцин из штаммов 45/20 и 53Н38 и две группы служили контролем - одна группа была привита вакциной из штамма I04M и вторая оставалась ьгиммунизированной.

Четвертый опыт был поставлен на 60 морских свинках. Первую группу привили адьювант-вакциной из штамма 45/20, вторую - штаммом 19 и третья группа оставалась непривитой /контроль/.

Через 70-90 дней после иммунизации морских свинок заражали заранее оттитрованной культурой вирулентного штамма Вг .abortue 54 в дозе 50-80 м.к. /10-16 МВД/, а спустя после заражения 3540 дней убивали для бактериологического исследования. При этом из наждого объекта /10 объектов/ делали посевы на одну пробирку Зульона и две агара. Посевы учитывали в течение 20 дней.

2.2. Изучение реактогенных, аллергенных, антигенных и иммуногенных свойств адыовант-вакцин на крупном рогатом скоте в экспериментальных условиях.

Опыты проводили в колхозе им. Фрунзе Октябрьского района эостовской области. При этом были использованы 139 телок крас-* той степной породы, ранее не подвергавшихся вакцинации против бруцеллеза. Для заражения телок переводили в лабораторию по изучению бруцеллеза СгСЗНЙВИ. Убой животных проводили на санитарной бойне Шахгинского мясокомбината.

Схема опыта приведена в таблице I.

Вакцину ABORXOi телкам вводили в объеме 3 мл в дозе 43) «лрд м.к. внутримышечно в области крупа или подкожно в области юдгрудка, a AliORLAtfS в той же дозе и в том же объеме, но только подкожно.

Вакцину из штамма Зг . eboxtua J9 применяли в соответствии с наставлением по ее применению.

Через 2 месяца после ревакцинации всех гелок, в том числе и контрольных, случали с быками-производителями.

2.2.1. Изучение реактогенных свойств вакцин

После вакцинации в течение 10-15 дней ежедневно у животных измерили температуру тела и регистрировали общее иг состояние, измеряли также припухлость тканей на места введения вакцины и путем •пальпирования ее консистенцию в течение года.

2.2.2. Изучение аллергенных свойств вакцин

Для определения аллергической перестройки организма привитых животных проводили ежеквартальные исследования методом паль-пебрального введения бруцеллина ВИЭВ. Аллерген вводили под кожу нижнего века в дозе I мл. Учет реакции проводили в крестах визуально и путем пальпрции через 48 часов после введения диагнос-тикума.

2.2.3. Изучение антигенных свойств вакцин

Динамику накопления антител определяли путем исследования сыворотки крови животных в РЕП, РА, РСК и РДСК по общепринятым методикам на 7-й, 15-й, 30-й дни после вакцинации, далее один раз в месяц в течение года, затем с интервалом 1-2 месяца до конца опыта.

2.2.4. Изучение иммуногекных свойств вакцин на крупном рога том скоте

Имыуногенные свойства инактнвированных адьювант-вакцин из штаммов 45/20 и 53Н38 изучали в сравнении с живыми вакцинами из штаммов u-„crt\iü и I04M в трех опытах на 262 телках, н(

гелях и коровах.

Проверку чапряженности иммунитета проводили путем заражения иммунизирован« ос животных заранее оттитрованной на аналогичных телках /нетелях/ вирулентной культурой.

Культуру вводили конгюнкгивально в дозах 2,5-5 млн м.к.

После иммунизации телок и нетелей заражали через 12 месяцев /354 дня/ и 21 месяц /638 дней/после вакцинации или 273 дня после ревакцинации/,

В одном опыте на коровах иммуногенныэ свойства вакцин изучали в неблагополучном по бруцеллезу стаде без экспериментального раракйння»

Схема опыта

Таблица I

№ Название в0 руп- вакцины ы

Первич- Ревак- Вак-

цина-

ная

жи- вакци- ция вот- нация за 2 в воз- мес. рас те

ци нация в

день сяцев

^----- перед ревак- после

груп- 3-8 осеме- цина- вак-пе мес. нением ции цина-

ции

/гол/ /гол/ /гсл/ /гол/ /гол/

Проверка иммунитета

через 10 ме-

ных в

через 2 месяца после отела

/гол/

азоятол 10 10 - - 10 -

10 10 10 - - 10

(шг.45/20) 10 10 10 • 10 10 10

лзошт 10 10 м 10 _

10 10 10 - - 10

(пг.53Н38) 10 10 10 - 10 — 10 10

10 10 - - 10 -

0 Вакцина 10 10 10 - - 10

I из 10 10 - - - 10

2 штамма 19 10 - - 10 - 10

3 Конгроль 10 - - - 10 -

4 Контроль 10 - - - - 10'

гого 140 90 30 30 40 100

После заражения для бактериологического исследования елок и нетелей убивали через 45-49 дней. При убое для бак-ысевов отбирали по 25-28 объектов (лимфатические узлы, внутрен-

ние органы, плоды).

Из каждого обгекта делали посевы на одну пробирку МШ1ГГБ и 2 пробирки ШПГГА. Бактериологические высевы выдерживали в термостате при температуре 37-38°С в течение 20 дней.

2.2.5. Изучение эффективности иммунизации коров адыэвант-вакцинами из штаммов 45/20 ( азозтох ) и 53н38 < лг>ое1,а:те

в контролируемом опыте

Опыт проведен на 123 коровах колхоза "Родина" Октябрьского р-на'Ростовской области, неблагополучного по бруцеллезу крупного рогатого скота. Для этого по 25 коров иммунизировали вакцина ми из штаммов .abortus 45/20, Зг ,аш1Непэ1а 53Н38,

Зг .abortuB 82 и 24 - вакциной из штамма -3*- .tbortua jg 24 коровы оставили невакцииированными /контроль/. После иммунизации данное стадо исследовали на бруцеллез ежемесячно серологи ческими методами и через 3,9 и 12 месяцев - аллергическим методом. Через 16 месяцев после вакцинации все коровы были убиты да бакисследования.

2.2.6. Определение эффективности адьювант-вакцин при оздоровлении крупного рогатого скота от бруцеллеза в производственных условиях

Эффективность адьювант-вакцин изучали в двух хозяйствах с ограниченным и массовым распространением бруцеллеза /колхоз "Родина" и колхоз им. Кирова/.

Перед началом испытания вакцин из штаммов 45/20 и 53Н38 было сделано обследование всего поголовья крупного рогатого снога на бруцеллез. После чего был разработан комплексный план оздоровительных мероприятий. В плане предусматривали проведение ветеринарно-санитарных и организационно-хозяйственных мероприятий, направлен 1ых на ликвидацию бруцеллеза. В общем комплексе противобруцелл ;зных мероприятий проводили иммунизацию всего круп иого рогатого скота адаювант-вакцинами из втаммов 45/20 и 53Н38.

После первого введения вакцины из штамма 45/20 через 30 дней поголовье исследовали на бруцеллез в РА и РСК. Животных, давших положительные реакции,удаляли из стада и сдавали на убой, о остальных прививали повторно в той хе дозе.

Животных, привитых вакциной из штамма 531133 исследовали на бруцеллез не ранее чем через 12 месяцев после вакцинации.

Реиммунизацию проводили вакциной из штамма 45/20 через 12 зяцев после вакцинации и далее ежегодно до 1988 года.

Серологические исследования проводили ежеквартально.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Результаты экспериментального изучения инактивированных ыовант-вакцин из штамма 2г. аЬсиЧиз 45/20 и Зг .гае11^епа1э

Н38 на телках, нетелях и коровах

3.1.1. Реаклгенные свойства вакцин

Установлено, что после введения телкам вакцины из штамма /20 температура тела животных повысилась в среднем по группе на 7°С. Причем, повышенная температура тела у всех животных удержи-лась в течение б дней и только на 7-й день, за исключением от-льных животных, она пришла в норму.

Что касается этого показателя у гелок, привитых вакциной из амма 53Н38, го в целом по группе она была несколько ниже, чем животных, привитых вакциной из штамма 45/20, однако приходила норму позднее.

Следует отметить, что температурная реакция у гелок на вве-ниэ живой вакцины из штамма 19 была более выраженной, чем у рвых двух групп животных, иммунизированных адьюванг-вакцинами. к, в первые 2 дня после вакцинации температура тела у гелок была ше нормы на 1,8-2°С.

При изучении местной реакции на введение адыовант-вакцин, сравнении с живой вакциной из штамма 19, было установлено,, чт.о кцина из штамма 45/20, введенная телкам внутримышечно, на мес-иньекции в первые 6 дней вызывает незначительную припухлость размере 11,2-15,1 см^ и к 10-му дно она составляет всего лишь 6 см^. Совсем другая картина наблюдается при подкожном введе-и телкам вакцины из шгамма 53Н38. Так, уже через день после им-низации припухлость у животных на места введения достигает 45,7

на 3-й день увеличивается до 79,3 см*% затеы идет некоторое [ижение.

При изучении реакгогенных свойств вакцины на нетелях, ре-(кцинированных адьюванг-вакциной 45/20 через 12 месяцев после

вакцинации подкомно в области подгрудка, не было установлено существенной разницы в реакции на введение препарата как по фону вакци! ы из штамма ЕЗН28, гак и по собственному фону. Следует от метить, что у некоторых животных припухлость размером в куриное яГ'цо удерживается больше года.

3.1.3. Антигенные свойства ка-п:;:;1

Антигенные свойства адьчванг-вакцин били изучены в сравнении с вакциной из игам« 19 на телках и негелях. 3 результате че было уотановленс, что вакцина из штамма 45/20 "ютег вызывать у животных появление аггл-".гин::ноБ и комплеменгсЕЯЭЫРамцих антител • низких титрах и непродолжительное время.

Что касается вакцины рз штамма 53Н38, го по указанным свойс вам она несколько превосходит агглютииогеикую вакцину из штамма 19. Так, если при исследовании сывороток крови животных в первые 7 дней после иммунизацг/. количество положительно реагирующих и а держание агглютининов в крови было больше у телок, привитых итам-мом 19 - соответственно £6,7 и 9о,7л, а средний титр РА - 110,5 1 507,3 МЕ/мл /Р < 0,01/, то уже при исследовании через 15 дней вс< телки обеих групп ¿гагуроралп .~олошгельно.

Е дальнейшем при исследовании телок, привитых вакциной из штамма 53Ц36 в РА, /через 92 дня/ дали-положительную реакцию С3,3д животных, в го время как в группе иммунизированных вакцино! из штамма 19 только <105».

При последующих исследованиях в группе ;кивотных, привитых вакциной из штамма СЗНЭ8, как правило, тигры РА были вьше, чем в контрольной группе телок, иммунизированных вакциной из пгамма 19. Достоверная разница по количеству реагирующих животных была зарегистрирована с 92 для после'иммунизации и до конца опыта, а по количеству "одержания антител /средние титры/ - с 92 по 256-й , и на 247-й дет /Г-< 0,01/.

Что капается, динамики содержания ксуплеменгспязывжицих антител у липг>т>'ых, /<мму цитированных вакциной из пгамма 53НС6, го моя но о?:.-,ег.т-, "то уже на 7-й день после введения вакцины они были оого.руА'е-нн у 10? телок и н- 15-й день - у 80!?, но количество живо 1 их, дчм'их положительную РОК в эти сцоки было ниже, чем у имцуни э»«1 ргч'-мэс из ртамма 19 / X' -5,:; 4/. На 30-й и 04-й дни

(ложиге.чъно реагирующих телок р опытной группе было соответственно >,0-83,3Tí, т.е. этот показатель бил несколько выше, чем у контроль->й группы, привитых вакциной из штамма 19 - 82,8 -'79,/Р <. 0,05/; С 2 = 2,26 и 1,2.

При исследовании животных в этой реакции через 92, 122 и 156 ей после иммунизации количество положительных реакций в обеих уппах было почти одинаковым, затем оно начало постепенно снижать-*

и к 494 дн-о положительно реагировали 20? животных. Достоверная эница между опытной и контрольной группами в числе животных, дав-х положительную РС.ч, зарегистрирована с 92 дня и до конца опыта.

При сравнительном изучении антигенных свойств вакцин из аммя 53Н38 и 19 на телках различного возраста к с разным иммун-м фоном было установлено, что иммунный ответ у'однократно вакцини-ваниых телок н -'—8 и 15-20 месячном возрасте более выражен у яи-тных, привитых в молодом возрасте /на 18,8-49,'$/.

3.1.2. Сенсибилкзирупдие свойства вакцин •

Сенсибилизирующие свойства адг-ювант-вакцин в сравнении с ванной из гагам.® 19 были изучены на 90 телках, прквнгьтх в Л-8 м возрасте " 'О - ет.мункяирсванных и реиммунизпрованнт: в 10-20 c?"HO(.f возрасте. В первом случае животных исследован:! еяеквярталь-в течение 18 месяцев и во втором - через I02 к 195 дней /табл.2/.

Результаты исследований показали, что наиболее выраженными неябилияирутщими свойствами обладала ваклина из штамме 45/20. Так, и исследован™ телок через 92 дня после иммуниэяттии положительно чгировало животных, в то время как из группы телок, иммунй-

ровянных вакцивой из итяммя Ь?Н38 - только 60* и значительно чьшй процент положительно реагирующих бил в группе животных,, при-. гых вакциной из штамма 19 - 25,7?$ /Р < 0,05/. Также и в последующие 1кп исследования наибольшее одело положительно реагирующих живот- . к Лнло выявлено из группы, иммунизированиях вакциной из штамма '20 /Р < 0,05/, Следует отметить, что живя." вакцина из штамма 19 своим сенсибилизирующим свойствам значительно уступает /Р< 0,05/ 1ктивированнда адьввант-вакциням.

Что касается влияния ревакцинации на аллергическое состояние потных, привитых разными вакцинами, то при исследовании через 102 > было установлено, что вакцина из штамма 45/20 как у ровакцинпро-

Таблица 2

Рв.эульгагы аллергических исследований телок, иммунизированных,вакцинами из штаммов 19, 53Н36 и 45/20

Дни Исс- Реа- % в том числе

после вак- ле-•до-ва- но ги~ ро-ва-ло сценка реакции

цина - + ++ ■Г-Н- ++++

ции к-х по-лож. ж-х % ж- X % ж-х % ж-х !

вакцина из шташа 45/20

92 30 25 86,7 I 3,3 6 20,0 4 13,4 15 а

176 30 17 56,7 2 6,7 3 10,0 5 16,7 7 г:

278 30 1с &3,3 3 10,0 2 6,7 6 20,0 5 Г.

354 30 14 46,7 4 13,3 3 10,0 I 3,3 6 я

428 10 5 50,0 I 10,0 I 10,0 I . 10,0 2 (

562 10 3 30,0 - 2 20,0 I 10,0 -

вакцина т штамма 53Н38

92 30 8 26,7 3 10,0 2 6,7 2 6,7 I г

176 29 5 17,2 2 6,9 X 3,5 2 6,9 -

278 30 5 16,7 2 6,7 I 3,3 1 5,5 -

354 29 5 17,2 4 13,8 - - - • - . -

428 10 3 30,0 I 10,0 2 20,0 - - -

вакцина из штамма 19

92 30 , .8 26,7 3 10,0 2 6,7 2 6,7

176 29 17,2 2 6.9 I 3,5 2 6,9

278 30 - о 16,7 2 6,7 I 3,3 1 5,5

354 29 5 17.2 4 13,8 - - - _

•128 10 3 30,0 I 10,0 2 20,0 — —

562 10 — - я. —

ванных, так и сднскр.эгно вакцинированных тел«; вызирала почги одинаковую аллергическую перестройку организма. Чт^ касается вакцин из штаммов ЕЗЬ'ЗЗ и 15,. го зд^съ наблюдали другу*, картину. Так, число положительно реагирующих животных, ревакцлнированних адтювант-вакциной из штамма 5?!1Го и пт. 19 было нышо на 307< по сравнению с 'однократно имнунизированнымх■

Что касается результатов исследований животных в более поздний срок/196 дней/ пссле введения гакцнн, го значительной разницы по группам не установлено.

Отмечено также, что икеегсп прямая зависимость между количеством положительно реагирующих жипотных я группе и выраженностью реакций на введение вакцин. Так, если в группах гелок, привитых вакциной из птамма <5/20 почти во все сроки исследования было выделено ботыте положительно реагирующих•¡тавотных на 20-60%, чем на ■ штамм 19, го и по силе выраженное?:! реакции / с учетом 4-х крестовой оценки/ первая вакцина значительно превосходит вторую.

По сроим сенсибилизирующим свойствяу вакцина из ыганма 53Н38 занимает промежуточное полотенце между вакцинами из штамма 45/20

и 19.

3.1.4. '/ммуног'енные свойства вакцин

Опыты на морских свинках. При проверка м/муногеиных свойств адтюранг-вакцкны из штамма 45/20 в 4 опытах иммунитет бил установлен у 53,8-91,7» животных и у иммунизированных вакциной из штампа 53К38 - у 35,7 - 100% /указанная вакцина проверена в 3-х опытах/. Следует при отом укапать, что взятые для контроля жигыл вакцины из штаммов Вг,«Ьог1иа Ю и 104М исказаги более высокую иммуногенность. Так, в ?-х опытах на иммунизированных вакциной из шгамма 19 было иммунных 92,3-100* морских свинок. Вакцина,из штампа 104М была из всех вакцин наиболее иммуногечной, г.к. во всех 3-х опытах противостояли экспериментальному заражение 100,'5 .«квотных.

В четырех опытах из 51 непригитой /контрольной/ морокой кн не заразилась только одна.

Опыты не телках и нетелях, ¡йлмуногекнт етЯсгрэ инаггнпи^ю-

ванных адьювант-ванцин французского производства фирмы "Рон-Мерьо" из штеммов 45/20 и 53Н38 изучали в экспериментальных условиях на телках и нетелях в сравнении с живой вакциной из штамма 19 и в контролируемом опыте на коровах, но уже в сравнении с двумя вакцинами из шхашов 19 и 82, Результаты исследования приведены в таблицах 2 и 3.

Таблица 2

Результаты проверки иммунитета у телок,иммунизированных адьюванг-вакцинаш из штаммов 45/20 и 53Н38,в сравнении с живой вакциной из штамма 19

Наименование вакцины

Кол-во Зара- Индекс

телок зи- инфици-

в лось рован-

группе . гелок носги

Процент иммунных

азомох 20

азоньане ю Вг.аЬогкие 19 до

КОНТРОЛЬ 10

11,3

100 100 100

ПРИМЕЧАНИЕ. В связи с тем, что в контрольной группе заразилось только 80% гелок, го и в опытных группах следует уменьшить число иммунных животных на 20%.

Данные таблицы 2 показывают, что„в опыте при 80^-ном заражении контрольных животных, во всех 3-х опытных группах устояли * экспериментальному заражению 100% привитых гелок, иммунизированных в 4-8 месячном возрасте. Следует указать, что в данном опыте проведено довольно щадящее заражение, т.к. из 10 контрольных животных заразилось только восемь. Однако из этого опыта видно, что обе адьюванг-вакцины при заражении гелок через 12 месяцев после вакцинации обладали высокими иммуногенными свойствами, не уступающими вакцине из штамма 19.

Во втором опыте /табл.2/ иммуногенныв свойства адыовант-

вакцин были изучены путем заражения гелок через ;"38 дней после однократной вакцинации в 4-8 мес. возрасте, ревакцинированных через 273 дня после вакцинации, а гакжо впервые вакцинированных в 16-20 месячном возрасте в день ревакцинации однократно иммунизированных гелок.

Таблица 3

Результаты проверки иммуногешых свойств адоювант-вакцин на телках и негелях

Номео Наименова- Срок зара- г ние жения труп- вакчин /дней/ Животных в группе За-рази- •к :ь Л.'щекс инфи- циро- Процент иммунных

пы вак-ци-нации - i ре; вак: ци-: на; ции всего в т.ч. стельных • лось' :У ван-нссги

I Азонаш 638 7 5 2 б 3,21 71,4

2 273 - 7 3 I 2 1,09 85,7

3 633 273 7 6 I 5 2,66 8Ь,7

4 АЗОКЬАЛЕ 638 - 7 6 2 А 2,08 71,4

5 273 - 8 4 2 4 1,95 75,0

6 7 Jr. abortus 638 «638 273 7 8 6 •8 0 I 0 I О 0,45 100,0 87,5

8 273 - 6 3 I I 0,63 83,3

9 638 273 8 6 0 0 0 100,0

10 КОНТРОЛЬ - - 8 I 8 39 19,7 -

Как видно из таблицы 3 всэ ввкцины у иммунизированных гелок и негелей при проверке иммунитета через 638 дней после вакцинации вызвали довольно высокий иммунитет. Отмочено, что во ксех группах животных реиммунизация способствовала усилению ю/мунитета на 12,5-28,6%, особенно это касаотся вакцины иэ штамт оЗНЗВ. В связи с этим просматривается целесообразность ревакцинации чорез един

~ -16-год после иммунизации.

3.1.5. Изучение эффективности иммунизации крупного рогатого • скота адьювант-вакцинами в условиях контролируемого опыта

Опыт поставлен на 123 коровах, из которых было укомплектовано 5 групп. Животные первых четырех групп были привиты вакцинами из штаммов 45/20, 53Н38, 19 и 82, пятая группа служила контролем. В результате данного опыта представилось возможным изучить дополнительно антигенные свойства вакцин, а также эпизоо-гологическую их эффективность. Опыт поставлен на животных неблагополучного отделения колхоза по бруцеллезу крупного рогатого скота.

Установлено, что вакцина из штамма 45/20 обладает слабыми антигенными свойствами. Так, во все сроки исследования компле-ментсвязывающих антител не было выделено, в то же время отдельные животные давали положительную РА в невысоких титрах в течение 4 месяцев, аналогичная картина наблюдалась и при исследовании коров, привитых вакциной из штамма 82.

Совсем другую картину наблюдали при исследовании коров, привитых вакцинами из штампов 53Н38 и 19. В РА на 30-й день после введения вакцины из штамма 19 реагировало 79,2$ животных и на штамм 53Н38 - 92,0%. При исследовании коров через 60 дней после иммунизации тигры РА в обеих группах резко снизились. Так, если на 30-й день среднее геометрическое значение количества антител в I мл сыворотки крови у животных, привитых вакциной из штамма 19 было 30 Ж/мл /12-692/ и штаммом 53Н38 126 Ш/ш /67-239/, го на 60-й день соответственно - 26 Ш/ш /Зг364/ и 24 МЕ/мл /2-274/.

В дальнейшем на протяжении всего времени исследования /475 дней/ титры РА у животных были ниже диагностических, хотя отдельные животные /4-12%/. давали положительные реакции. Отмечено также, что 56-60$ привитых животных могут давать после вакцинации положительные реакции до 14 месяцев и 16 месяцев - 10% привитых шгамом 19 и 20% - адьявант-вакциной из штамма 53Н38 в разведении сывороток 1:100.

При исследовании всех групп животных в РСК через 2 месяца после иммунизации, наибольшее количество коров, давших положи-

гельный результат; было среди привитых вакцинами из штаммов 19 и 53Н38 - соответственно 92tQ% и 87 >3fat а при проверке через год - 41,7?о и При исследовании всех групп животных в РСК .через 16 месяцев наличия кошлементсвязывакмцих антител не регистрировали.

Что касается результатов проверки коров контрольной группы, то следует сказать, что при исследовании их в те же сроки, как и коров опытных групп, положительно реагировали единичные животные. Так, в течение 475 дней при 15-ги кратном исследовании дали положительные реакции 5 коров, которые были убиты для бактериологического исследования и путем посевов пагмагериала культуру бру-целл не выделили.

По окончании опыта, т.е. через 475 дней после иммунизации все коровы опытных и контрольной групп /102 головы/ были убиты на еанбойне Шахтинского мясокомбината, а из лимфатических узлов и внутренних органов сделали бактериологические высевы. При этом ни в одном случае культура бруцелл не была выделена.

Таким образом, результаты бактериологических и серологических исследований подопытных и контрольной групп коров позволяют сказать, что вакцины из штаммов Br .aborfua 45/20 и 82 являются слабоагглютиногенными, в го время как из штаммов 3r . e'cortu3 19 и Вг , aelitetiaie 53Н38 - внеокоагглнгиногепными.

Можно полагать, что все изучаемые вакцины в данном опыте защищали животных от заражения бруцеллезом, однако учитывая гот факт,что и среди контрольной группы коров не было заразившихся, то по данному опыту не представляется, возможным сделать убедительное утверждение.

3. Результаты испытания инактивированккх адмаант-вакцин из штаммов ¿г, abortuB 45/20 и** . «"llte.iels 53Н38 на крупном рогатом скоте в производственных условиях

Изучение эффективности применения инагаивирооанных ад1л;ввнт~ вакцин при оздоровлении- крупного рогатого скота от бруцеллеза было проведено в двух колхозах Октябрьского района Ростовской области - им. Кирова и "Родина".

Лолхоз ям. Кирова. Работа проводилась с 1984 по 1989 год. На день работы в колхозе имелось 1910 голов крупного рогатого скота, в т.ч. 907 коров. Хозяйство неблагополучно по бруцеллезу крупного рогатого скота фактически с момента его организации /1955/. В 1959 г. колхоз был оздоровлен от указанной инфекции с применением вакцины из иташа 19, однако фактически хозяйство оставалось неблагополучным и по 1982 год наблюдали вспышки бруцеллеза, в связи с чем на хозяйство вновь были наложены ограничения по бруцеллезу.

В качестве средства специфической профилактики бруцеллеза с 1975 г. использовалась вакцина из штамма Вг . sbortua ' 82.

В 1982 г. при плановом исследовании крупного рогатого скота на бруцеллез было выделено 30 голов положительно реагирующих, а хозяйтсво объявлено неблагополучным. В этом же году проведена ' иммунизация поголовья вакциной из штамма 82. Всего в 1982 году было выявлено 175 положительно реагирующих на бруцеллез животных. В 1983 году число больных бруцеллезом было аналогичным, что и в 1982 г. /166 голов/. Зарегистрировано 30 абортов.

С июля 1984 года в колхозе начали применять инакгивирован-ные адьювант-вакцины фирмы "Рон-Мерье".

С 1984 по Х989 годы в хозяйстве было иммунизировано вакциной ABOHTOi . 4823 г0л(вы и A30KUAKS - 521 . За указанное время выделено положительно реагирующих 182 головы. Для оздоровления колхоза от бруцеллеза потребовалось более 2-х лет. В настоящее время хозяйство является благополучным по бруцеллезу крупного рогатого скота.

Колхоз "Родина". Как и в колхозе им. Кирова работа проводилась с 1984 по 1989 год.

На начало испытания вакцин в колхозе имелось 2454 головы крупного рогатого скота, в т.ч. 839 коров. Колхоз был неблагополучен по бруцеллезу крупного рогатого скота с момента его организации, т.е. с 1955 года. Для борьбы и профилактики с данным заболеванием в хозяйстве с 1957 по 1975 год применялась вакцина из штамма 19. В 1973 г. хозяйство от бруцеллеза было оздоровлено. С 1975 г. для иммунизации поголовья стали применять вакцину из пггамма Зг . ebortus 82.

При плановом исследовании в марге 1982 года на ферме 5? 1 били зарегистрированы положительно реагирующие киьотные. Всего за год было выделено 24 больных бруцеллезом корови, а в 1983 году - 77 /19,7%/. При бактериологическом исследовании но абортированного плода была получена вирулентная культура в г . sbortaa . В июле 1983 года все поголовье было иммунизировано вакциной из штамма 82. Зя 6 мес. 1934 года при исследовании животных на бруцеллез было выделено 70 /23,7%/ положительно реагируших коров.

Колхоз в сентябре 1983 года был объявлен неблагополучным по бруцеллезу крупного рогатого скота.

В мае 1984 года три гурта коров, размещенных на данной ферме, были объединены в. один гурт, из которого продолжали выделять больных животных. Этот гурт был использован нами в дальнейшем для постановки контролируемого опыта по сравнительному изучения эффективности адьювант-вакцин при оздоровления стада от данной иьфекции.

В марте 1984 года при исследовании коров других 4-х гуртов было выделено 7' голов /1,3%/ положительно реагирующих на бруцеллез. В частном секторе, а тате на ферме среди коров и нетелей регистрировали аборты.

После исследования животных на бруцеллез и сдачи больных на мясокомбинат коров и нетелей иммунизировали вакциной из штамма 45/20 и телок всех возрастов - 53Н38. С 1985 по 1989 год вакцинировали и ревакцинировали все маточное поголовье крупного рогатого скота только вакциной из шгаммл 45/20.

С 1984 по 1989 год было привито вакциной из штамма 45/20 4319 голов и 53Н38 - 439.

В четвертом квартале 1985 г. и в 1985 г. было проведено 3 серологических исследования, при этом из 530 исследованных голов, привитых вакциной из штамма 45/20 реагировало 16 или 3% и иммунизированных штаммом 53Н38 416 голоь/20,9%/ Животных, привитых вакциной из штамма 45/20, даЕших положительные реакции сддли на убой, а привитых штаммом 531138 оставили в хозяйстве и гш поступали в последующем.

В сентябре 1986 года, через год после ревакцинации и черна два года после вакцинации,при исследовании 794 коров «етвлено

10 голое положительно реагирующих. Все реагирующие ?лолодне коро-гы телками перец случкой бичи иг.г.!унизированы вакциной из и гамма 53Н38. Вакцина яг- указанного штамма является высокоагглюг.'ногенкой, как нами установлено е экспериментальных условиях на телках.

Б 1987 го,-^' при четырехкратном исследовании из 1025 коров выявлено 68 /6,и%/, дачицих сомнительную и 19 /1,6%/ положительную РА, а также 3 керогы дали положительную РСК. Положительные реакции об-нарушены у коров, ранее привитых вакциной из штамма 531138.

Б 1988 году при 4-х кратном исследовании 1041 коровы выявлено 26 /2,С&/ с тиграми только 1:50.

При плановом исследовании на бруцеллез в 1989 году 2300 голов крупного рогатого скота было установлено, что ситуация по данному заболеванию характеризуется как благополучная, Так, при первичном и повторных исследованиях 834 коров отрицательная реакция на бруцеллез установлена у 816 /97,8455/, 17 коров дали сомнительную реакции, /2,07%/, и только у одной-коровы установлена положительная РА в разведении сыворотки 1:100.

Что касается телок всех возрастов, го полученные данные не иызнЕаэг никаких сомнений об их благополучии по бруцеллезу, т.к. только одна телка из 1466 исследованных дала сомнительную РА в разведении сыворотки 1:50 /0,075?/.

Сомнительные реакции, как правило, обнаруживали у коров ранее иммунизированных адьювант-вакциной из штамма 53Н38. Однако следует ргмогигь, что многократные прививки вакциной из штамма 45/20 могут вызывать появление агглютининов в крови иммунизированных животных в низких титрах длительное Еремя.

Хозяйство оздоровлено ог бруцеллеза_крупного рогатого скота и в данное время является благополучным .

ВКЕ0ДЫ

1. Установлена высокая эпизоогологичеек» г>ффе*г/?чосгь применения адаованг-рякцкм» из штамма Вг.вЬсиЧив .45/20 при оздоровлении неблагополучных'хозяйств по бруцеллезу крупного рогатого скота. Так, за 2-3 года ее применения были оздоровлены ог бруцеллеза колхо-г>м гм. Киром и "Родина" Октябрьского района ростовской-области.

2. Ад^лакт-вакцина из штамма Зг.еЬоггиа 45/20 обладая вн-ргг'-рнспми им)«уноген1гши свойствами и будучи слабоагглгагкногенной ¡•.ли ссгсем нсагт.)гинорекно8, поввояявг проводить оздоровление не-

< ^гг-яо/'учгкх хозяйств по бруцеллезу крупного рогатого скота и монет

быть рекомендована для практического применения.

3. Результаты испытания инактивированных адъавант-вакцин из шташов Br.ebortue 45/20 и Br.mellteaala ЗЗНЗС указывают

на перспективность конструирования и применения в нашеЛ стране подобных препаратов с использованием неагглютиногенных или слабоаггл.. гиногенных штаммов бруцелл.

4. Б опыте на телках,тонизированных в 4-8 месяшом возрасти инактиэирозаннкми адьювант-ваяцинаки из штаммов Br.»bortua lr:/PG •и Br.melltensia 53Н38 установлен 80$ иммунитет при заражении кх вирулентной культурой бруцслл через 12 месяцев после пммумиоац.-.!.

5. Установлено, что кнакглвировпнные адмовянт-еакцины из штям-мов 3r.»bortus 45/20 и ^r.oaaHtenaia D2H28, как и живая вакцина уз штамма Br.ebortue 19, создают у иммунизированных телок длительный и стойкий иммунитет /71,4-87,5$ в течение 038 дней/, а ревакцинация их через 12 месяцев после иммунизации усиливает иммунное состояние организма на 12,5-29,6$ и является целесообразной.

о. Инактивированные адьювпнг-вакциньг из шташов Br.pbortue 45/20 и Sr.aelltenaia 52Н38 в сравнительных опытах с живыми агглютиногенными вакцинами из шташов Br.ebortua J9 и Ю4М создавали у вакцинированных морских свинок иммунитет достаточно высокой напряженности /С9,2-100^/. Однако отдельные серии вакцины из ттанмп 45/20 могут по этому показателю значительно уступать жмгым Еакцннам.

7. Инактивированные адьппант-вакцины из штаммов Jr.ebortus 45/20 и or.meiltenaia 53Н38 обладают для крупного рогатого r.<vr> высокими реактогешыми свойствами, выражающимися в повышении тоьшг • ратуры тела и сильной местной реакцией в виде припухлости на место подкожного введения вакцины.

8. Обе адьювант-вакцины вызывают в организме привитых яси'отыл сильную аллергическую перестройку, однако вакцина из пташа 45/20 обладает более выраженными сенсибилизнруюцими свойствами, чем i«:,^ штамма 53Н38. Кивая сухая вакцина из штамма 19 по своим сенслби.и-.ьи--рующим свойствам значительно уступает первым дяум вакцинам.

9. Адмовянт-вакцинл из штамма itr.ebortua 45/20 япл>-с>:ея нч-згглютиногенной. Однако отдельные ее сер,ни нчгут вшивать у »глч> занных телок в единичных случаях появление агглютининов и к<шг*--звязивающих антител в н:-.эких гиграх и не продо.тунтсльн'.е pp.»!»« (

S - бруцеллезным антигеном/.

10. Адьивамт-вакцина из штамма Вг.ие11Лвпе1в 53Н38, как и

• I<зк сухая вакцина из штамма Вг.аЬсг*иа 19, обладает выраженны-антигенными свойствами. У иммунизированных телок агглютинины и "омпче'/енгсвязывающие антитела могут регистрироваться более года.

11. Поскольку адьюванг-вакцина из штампа Зг.тв11Л«п81а 53Н38 ■¡бладает высокими реактогенндаи и антигенными свойствами для круп-чгго рогатого скота, а ее иммуногенность не превышает таковую вакцины из штамма Вг.*Ьо1Чив 29, она не может быть рекомендована для практического применения.

Наставление по применению адыованг-вакцины инактивированной кз и,таима 45/20 бруцелла абортус /Абортокс/ против бруцеллеза крупного рогатого скога / в порядке производственного опыта/.

Утверждено Главным управлением ветеринарии Государственного -чгролромышленного комитета'СССР 15 июня 1989 года.

1. Касьянова JI.5. Результаты сравнительного изучения реакгоген-

ннх и иммуногеннкк свойств адьюванг-вакцян из штаммов Br.ebortua 45/20 и ör.ngliteixale 531138 на морских свинках и телках. /Всесоюзн. кое.ниучн.-контрольный ин-r ветпрепаратов. /Сб. науч. тр. - М.,1985. -C.C7-7I. ' '

2. Касьянова Л.Ф. Антигенные, аллергенные и иммуногенные свойства убитых адъюванг-вакцин из штаммов Br.*teortua 45/20 и Br.melltenaia "Г'ч'З. .//Всессгок. гос.науч.-контрольный ин-т вегпрепаратов. /Сб. ' науч. тр. -М., 1986. -С. 24-26.

3. Шумилов К.В., Шихалеев D.H., Касьянова Л.1., Бондаренко Б.З., Мельниченко Л.П., Малышева I.A., Ципко С.Г., Харченко A.A./ гТ'.-'ульгпгк изучения иммуногенньос свойств убитых противобруцеллезных

.'■•м'рцсг-вакцин на крупном рогатом скоте/ //Сев.Навк. зональн. н.-и. г.«-г /Сб, науч. тр. - Новочеркасск, 1988. -С.49-53.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕКЛОНЕНИЯ

СПИСОК 0ПУШН0ВАИ1ЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ