Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Токсикологическая характеристика некоторых пироплазмоцидных и трипаноцидных препаратов и лечебная эффективность аллопуринола

ГОСУДАРСТВЕ!йШ КОМИССИЯ СОВЕТА Ш111ИСТР0В СССР ПО ПРОДОВОЛЬСТВИЮ И ЗАКУПКАМ

МОСКОВСКАЯ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ БЕ'1<ЕРН£1АР1Ш1

АКАДЕМИЯ шени К. И. С № ШИНА >

На правах руко1П!':н

РАХЫАТУЛЛИН Эииль Касшович

УДК 619:615.2 615.9:616.937.6

Т01ШШ0П1ЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА НЕКОТОРЫХ ПИРШАЗШЩННХ И ТРШАНОЦИДНЫХ ПРЕПАРАТОВ И ЛЕЧЕБНАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ АЛЛОНУРИНОЛА

16.00.04 - взтеринариая фармакология с токсикологией

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Москва - 1990

Работа выполнена со Всесоюзном ордена Трудового Красного Знамени государственном научно-контрольном институте ветеринар-них препаратов.

Научный руководитель - доктор ветеринарных наук,

профессор Тимофеев Б.А.

Официальные огуюненты:

Доктор ветеринарных наук, профессор Веселова Т.П.(ВИГИС) Кандидат ветеринарных наук, с.н.с. Кохтюк Ф.П. (ВИЗВ)

Ведущая организация - Витебский ветеринарный институт.

Защита состоится " "_ 1990 г. в " " часов

Hi заседании специализированного совета Д.120.36.04 по защите диссертаций па соискание ученой степени доктора наук при Московской ордена Трудового Красного Знамени ветеринарной акадеым имени К.И.Скрябина (109-172, Москва, ул.Академика'Скрябина, 23, тел.377-93-83).

С диссертацией можно ознакомиться вбиблИОТеКбИосков-г.кой ветеринарной академии им.К,И.Скрябина.

Автореферат разослан " "_ 1990г.

Учений -секретарь специализированного совета

Забалуев Г.И.

ВВЕДЕНИЕ

В эпоху научно-технического прогресса становится все более неоспорим,'м, что его побочным эффектом является проблема загрязнения жружашей средн. Все живые организмы, включая и человека подвержены воздействию невьрс химических веществ. С каждым годом увеличивается список химических веществ и масштабы их применения в отдельна странах. В Канаде ассортимент пестицидов весьма разнообразен и насчитывает свыше IООО наименований. В сельским хозяйстве Англии используется более 100 различных химических соединений, в том числе более 40 инсектицидов и ака-рицидов, около 2Ь фунгицидов и оксло 40 гербецидов и регуляторов роста." К 1986 году в СССР на гектар пашни на обработанных химической защитой площадях пришлось в среднем по 2 кг пестицидов (1,4 - на дугау населения). К 1990 году это количество должно удвоиться. Уже сейчас есть районы, где их применение . достигает 230 кг на гектар.

Эффекты от воздействия химических веществ трудно предвидеть. Это особенно касается возникновения наследственных болезней, индукции опухолей, проявления тератогенных эффектов у человека и животных. Проблема возможных отрицательных биологических и генетических последствий лекарственных препаратов и химических соединений волнует не только ученых, но и общественность правительство многих стран, международные организации и ООН, учредившую специальную программу( ШЕР- United Eatione Envi-

гот entai Progrenune) в которой этим вопросам уделено первостепенное внимание.

Учитывая, что пироплаэмоцидные и трипаноцидныг? препараты -азидин, диамидин и растворенные формы аллопуринола недостаточно изучены в отношении возможных отдаленных последствий их влияния на организм, перед нами для исследования были поставлены следующие задачи:

1.Изучение эмбриотоксического и тератогенного действия азидина, диамидина и растворенных форм аллопуринола.

2. Изучение мутагенного действия азидина, диамидина и pact воренной формы аллопуринола.

3. Определенно лечебной дозы растворенных форм аллопуринола при случной болезни лопадей.

4. Изучение возможности тестирования токсических свойств азидина, диамидина и растворенной формы аллопуринола н евчбо-дноживуцих амебах.

Няучная новизна. Показано отсутствие г>мбриотоксических,тератогенных и мутагенных свойств азидина, диамидина и растворенной формы аллопуринола,

Практическая ценность работы. Аэидин, диамидин и растворенная форма аллопуринола не влияют на эмбрион льное развитие у крыс, коров, овец, что делает их применение безопасным в ветеринарной практике. Разработано временное наставление по применение растворенной формы аллопуринола при случной болезни лошадей (утверждено Главным управлением ветеринарии Государственной ко миссии Совета Министров СССР по продовольствию и закупкам 1Ь марта 1990 г.).

Основные положения диссертации, выносимые на защиту.

1. Изучение эмбриотоксических, тератогенных и мутагенных свойств азидина, диамидина и растворенной ферм аллопуринола.

2. Определение лечебной дозы растворенной формы аллопурино ла при случной болезни лошадей,

3. Изучение возможности тестирования токсических свойств' азидина, диамидина и растворенной формы аллопуринола на свобод-нотивущгас амебах.

Апробация результатов исследований. Материалы диссертации доложены и обсуждены на:

X конференции молодых ученых ВГНКИ ветпрепаратов (Москва, январь 1988 г,);

XI конференции молодых ученых ВГНКИ ветпрепаратов (Москва, январь 1939 г.);

■Конференции молодых ученых БНИИВС (Москва,январь 1939г.)

Научной конференции молодых ученых "Актуальные проблемы ин фокционноП патологии животных и ветеринарной биотехнологии" (Москва, 198в-1989 гг.);

Ученом совете ВГНКИ ветпрепаратов (Москва, ноябрь, декабрь 1936-1989 гг.);

Межлабораторном совещании научных сотрудников ВГНКИ ветпре паратов (Москва, ноябрь 1939 г.);

Меккафодральной научной конференции сотрудников НБА (М-сквп, 1990г.).

Публикации результатов исследований. По теме диссертации спубличованч три научнче статьи и одна сдана в печать.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложни на 140 страницах мажинописного текста и включает: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы и практические предложения. Работа содержит 19 таблиц и 10 рнсунк-в. Список литературы насчитывает 261 источник, из которых Мб -течоственньпс и 113 иностраншлс,

2. собственнее исследования

2.1. Материалы и методы

Ракета выполнялась в лаборатории контроля и стандартизации лекарственных препаратов и кормовых добавок ВГНКИ ветпрепарятив. Под опытом находилось 1200 бРлих беспородных крыс, 19 лошадей, 1000 белых мшс-fl и -10 морских саинок.

В работе были использованы азидин, диамидин, аллопуринол, аллопуринол растворенный на к -метил-2-пирролидоне, аллопуринол, растворенный на диметилсульфоксиде.

Азидин - серия 20137, выпущен в январе 1987 г.

Диамидин - серия 10387, выпущен в марте 1987 г.

Аллопуринол, растворенный в н -метил-2-пирролидоне, 2%-ни.'А опытной серии, изготовлен в январе 1988г.

Аллопуринол, растворенный в диметилсульфоксиде,-5'Х-ный, опытной серии, изготовлен в январе 1988 г.

Изучение острой токсичности азидина, диамлдина и растворенных форм аллопурлнола проводили на белых беепьродных крысах с массой тела 180-200 г. Испытуемые препараты вводили подкожно. Расчет ЛДдр и другие показатели осуществляли методом пробит-ана-лиза, предложенного Литчфилдом и Уилкоксоном в модификации Э.Рота (М.Л.Беленький, 1963). Наблюдения за экспериментальными животными после однократного введения препарата проводили в течение 14 дне й.

Определение лечебной дозы азидина и растворенных форм алло-пуринола для белых крыс проводили при их заражении лабораторными штаммом Trypanosoma frquiperdum Doflein.

Для определения лечебной дозы диамидина для белых крыс использовали лабораторный штамм Babesia rodh&ini.

Поскольку взрослые крысы не заражаются Babesia rodhaini. для определения лечебной дозы указанного препарата мы ааратили крысят месячного возраста массой 30-35 г. На каждую дозу брали по 5 крысят. Заражение крыс проводили путем вмутрибрюшннного

-G-

введения крови, разведенной солевым цитратом.

Для заражения при определении лечебной дозы азидина и растворенных форм аллопуринола готовили взвесь, содержащую в раздавленной капле 3-4 трипаносомы в одном поле зрения (40 х 10).

Зараженных трипаносомами крыс разбивали на группы по 5 крыс. Препараты вводили подкожно как однократно, так и многокра-' тнэ. В каедом опыте была группа нелеченных крыс, которая служила контролем.

В основу изучения эмбр:го токсического и тератогенного действия препаратов были положены "Методические указания по изучении эмбриотоксического действия фармакологических веществ и влияния их на репродуктивную функцию", одобренные фармакологическим комитетом МЗ СССР 10 января 1986 г. Опыты проводили на белнх беспородных крысах-самках массой 180-220 г и самцах массой 230-250 г, которые являются общепринятым тестом для такого рода исследований (крнсы были получены из питомника "Крюково" АМН СССР). Для опытов брали крыс только с нормальным эстральным циклом, который является показателем нормального функционирования репродуктивной системы.

Препараты (азчцин, диамидин, аллопуринол, растворенный в диметилсульфоксице 5^-ный и в а-метил-2-пирролид.не 2^-ный), вводили самкам один раз в сутки подкояно, в одно и то же время с 1-го по 6-й, с 6-го по 16-й, и с 16-го по 19-й дни беременности. Результаты опытов учитывали на 20-й день беременности. После внешнего осмотра плоды в помете от каждой самки делили на две равные грулпные группы для исследования на наличие аномалий внутренних органов по методу Вильсона ( j.G.wileon , 1965) в модификации отдела эмбриологии НИИЭМ АМН СССР (А.П.Дыбан и др., 1970) и костной системы после ее окрашивания по методу Даусона (A.B.Dawson , 1926).

Изучение мутагенного действия азидина, диамидина и аллопуринола проводили в соответствии с "Методическими рекомендациями по определению мутагенной активности ветеринарных препаратов", утверищенными отделением ветеринарии ВАСХНШ (Москва, 1983г.). Дл.ч изучения ыитотическсго индекса и анализа хромосомных аберраций на стадии анателофазы использовали метод Japa (1942). Мутагенную активность препаратов определяли совместно с м.н.с. ВШеИ ветпрепаратов Цветковой H.H. Исследование мутагенных

свойств азидина, диамидина, аллопуринола проведено на болых лес-псроднкх крысах (первоначальная масса тела 120-140 г), подвергавшихся воздействию препаратов в условиях субхронического эксперимента в течение 30 дней. Препараты вводили: азидин и диани-дин - внутримышечно, аллопуринол—подкожно. Эксперимент проведен на 1С? жнеотных, которые были разделены н:л 16 групп,

по 10 голов в каждой. Препараты дозировали в миллиграммах на килограмм массы тела животных. Животным контрольной группы вводили растворитель в соответствующем объеме.

Для изучения возможности использования свободноживущих амеб .для токсикологической оценки пирэплазмоцидных и трипано-цидных препаратов мы использовали свободноживущ}» амебу Hart— monella rhysodes Singh (1952), выделенную Ю.Г.Гель-цером из почв Московской области. Указанную культуру амеб мк получили от сотрудника кафедры почвоведения МГУ им.Ломоносова Ю.Г.Гельцера. При анализе действия химиотерапевтических препаратов на амеб мы учитывали следующие показатели: I) влияние на движение; 2) действие на работу сократительной вакуоли; 3) образование сокгчтцих стадий; 4) влияние на эксцистирование.

Результаты исследований подвергались статистической обработке по методам, рекомендуемым И.А.Чистяковым (I9G6), И.В.Поляковым, Н.С.Соколовым (197b). Статистическую значимость различий устанавливали по величине " -t " критерия Стьюдента.

Различия считались существенными (достоверными) при Р < 0,05, вероятными при 0,05 < Р <0,1 и несущественными при Р > 0,05.

2.2. Изучение острой токсичности и лечебной эффективности азидина, диамидина и растворенных форм аллопуринола на белых крысах

2.2.1. Опыты по определению острой токсичности

В результате изучения токсических свойств при подкокном введении азидина, диамидина и растворенных форм аллопуринола установили,что среднесмертельная доза для крыс (ЛД^0) для ази- . дина составляет 20G (195,6-216,9), для диамидина 52,7 (43,71 -57,02), для аллопуринола, растворенного в диметнлеульфпкеиде (550-- 524,5 ( 521,9 - 527,1) иг/кг, для аллопуринола, раствагенп

го в м-метил-2-пирролидоне (2 %) - 54,0 (43,8-66,3) мг/кг.

2.2.2. Опыты по изучению лечебной эффективности препаратов

Результаты исследования показали, что минимальной дозой, обеспечивающей стерилизующий эффект, являет; т 6 мг/кг. Биологическая проверка, поставленная от крыс, лечившихся этой дозой, дала отрицательный результат.

Опыты по определению лечебной дозы диамидина для белых крас, как уже указывалось ваше, проводили на крысятах месячного возраста массой тела 30-35 г. В результате исследований установлено, что лечебной дозой диамидина для крысят является 8 мг/кг массы тела.

Изучение лечебной и профилактической активности 5 5С-ного аллопуринола, растворенного в диметилсульфоксиде, проводили на 70-ти белых крысах. Результаты опыта показали, что минимальной эффективной дозой для аллопуринола, растворенного в диметилсульфоксиде (5 %), является 25 мг/кг. Лечебный эффект проявлялся удлинением срока жизни по сравнению с контрольной группой. Однако через 19,2 дней после лечения наступали рецидивы и животные погибали. И только при введении доз 300 мг/кг кассы тела в лечебном опыте и 200 мг/кг массы тела в профилактическом опыте происходила полная стерилизация организма животных от паразита. Биологическая проверка от крыс, лечившихся этими дозами, дала отрицательный результат.

Лечебно-профилактическую активность 2 л-него аллопуринола, растворенного и -матил-2-пирролидоне, изучали на 40 белых крысах как в профилактическом, так и лечебном опыте. В результате исследований установлено, что минимальной эффективной дозой длл аллопуринола, растворенного в н-метил-2-пирролидоне (2 является 5 мг/кг. Лечебный эффект проявлялся удлинением срока кияни по сравнению с контрольной группой. Даже введение дозы 30 мг/кг, то есть максимально переносимой дозы полностью не стерилизовало организм крыс от паразита.

2.3. Изучение эмбриотоксической и тератогенной активности азидина, диамидина и растворенных форы аллопуринола

В результате исследований установлено, что многократное псдкояное введение азидина, диамидина, 5 %-ного аллопуринола,

растворенного а диметнлсульфокеидо, 2 %-ного аллопуринола, растворенного в я-иетил-2-пирролидоне, соответственно в-дозах 12 мг/кг, 5 нг'кг, 50 мг/кг и 10 мг/кг массы тела с 1-го по б-й дни беременности не вызывает у крыс шраяенних токсических явлений. При вскрытии крыс на 20-й день беременности установили, что животные, получившие вышеуказанное препараты, по числу желтых тел в яичнике, числу «ест имплантаций и резорбций в матке, а также по числу живых и мертвых плодов существенно не отличались от контрольных животных. Показатели предимплантационний, постимплал-тационнсЯ и обшей эмбриональной смертности в подопытных группах, получивших азидин, диамидин и растворенные формы аллопуринола, на отличались от контрольных 0,05). Средняя предимплантацион-

ная смертность при введении азидина, диамидина, аллопуринола, растворенного в диметилсульфоксиде (5 %), и аллопуринола, растворенного в н-ыетил-2-пирролидоне, равнялась соответственно 9,IÍ0,51; 8,6*1,48; 9,9±I,25; 10,2^1,5 %■,. постимплантационная -1,7*0,91; 2,2-1,62; 2,2*0,98; 2,9*1,11 % и общая - 10,7*0,14; 10,6*1,9; 12,0*1,06; 12,9*1,23 %; в контроле эти показатели были соответственно равны - 9,2*0,86; 2,5*1,16; 11,5*1,51 %.

При исследовании внутренних органов и костной системы плодов дефектов развития не выявлено.

Введение азидина, диамидина, 5 %-ного аллопуринола, растворенного в н-метил-2-пирролидоне, соответственно в дозах 6 и 12 мг/кг, 8 мг/кг, 25 и 50 мг/кг', 5 и 10 мг/кг массы тела с 6-го по 16-й дни беременности не вызывало у крыс выраженных токсических явлений. При вскрытии крыс на 20-Й день беременности установили, что животные, получившие вышеуказанные препараты, по числу желтых тел в яичнике, числу мест имплантаций и резорбций в матка, а также по числу яивых и мертвых плодов существенно на отличались от контрольных животных. Показатели предимплантационной, постим-плантационной и общей эмбриональной смертности в подопытных группах, получавших азидин, диамидин и растворенные формы аллопуринола, при вышеуказанных дозах и выбранном режиме введения, и* отличались от контрольных.

Средняя пре диыпл ант елди о иная смертность при введении азидина, диамидина, 5 í-ного аллопуринола, растворенного в н-мвтил-2-пир-ролидоне, с 6-го по Гб-й дни беременности соответственно в дозах 12 мг/кг, 8 мг/кг, 50 мг/кг и 10 мг/кг равнялась соответственно

9,6+0,99, 9,8+1,45, 9,9+0,91, 9,0+0,91 постимпланташгнная -2,7+0,15, 2,4+1,65, 3,04*0,2, 2,6*0,21 % и общая - 12,1+0,49,

II,<3+2,64, 12,7^0,87, 12,3+0,96*, в контроле эти показатели со-оответственно для азидина и диамидина равны 9,0+0,94, 2,5+0,14 и 11,4+0,87 %, а для контроля у растворенных форм аллопуринола эти показатели соответственно следующие - 9,7+0,99, 2,6+0,09 и 11,5+0,92 %. Различия в массе пл:дов, их длине, массе плацент, их диаметре и плодоллацентарных коэффициентах не достоверны. При исследовании внутренних .органов и костной системы плодов дефектов развития не выявлено.

Введение азидина, диамидина, Ь^-ного аллопуринола, растворенного в диметилсульфоксиде, и 2сС-ного аллопуринола, растворенного в //-мегил-2-пирролццсне, соответственно в дозах 12 мг/ кг, 8 мг/кг, 50 мг/кг, и 10 мг/кг массы тела с 16-го по 19-Й дни беременности также не вызывало у крыс токсических явлений.. При вскрытии крыс на 20-й день беременности установили, что животные, получиш-ие вышеуказанные препараты, по числу желтых тел п яичнике, числу мест имплантаций и резорбций в матке, а также по числу живых и мертвых плодов существенно не отличались от контрольных животных. Показатели предимплантационной, постим-плантационной и общей эмбриональной смертности в гюдопытных группах, получивших азидин, диамидин и растворенные формы аллопуринола, не отличались от контрольных. Различия в массе плодов, их длине, массе плацент, их диаметре и плодоплацентарных коэффициентах не достоверны. При исследовании внутренних органов и костной системы плодов дефектов развития не выявлено.

Вскрытие животных, получивших цнклофосфан в один из дней (13) беременности показано, что в яичнике имеются желтые тела, в матке - плацента с остатками мертвой ткани, размеры плаценты значительно меньше таковых у контрольных животных того же срока развития.

Изучение эмбрионального материала показало, что введение, циклофосфзда крысам в дозе 30 мг/кг массы тела в один из дней беременности (13) высылало увеличение предимплантационной смертности до II ,5<3+0,9й?,гости,'.плантационной смертности до 62,6+ £,63 общей эмбриональной смертности до 67', 1+4,83 в контроле (дисткллировлннач иода) эти показатели составили соответствии- 10,03+0,23 %, 2/г:\1С, %, 12,5чС,23 «,.

Изучение краниокаудальннх размеров показало задержку роста у плодов. Так, среднее значение краниокаудального размера плодов в группах крыс, получивших циклофосфан на 13-й день беременности в дозе 30 мг'кг (подкожно), не превыяало 17,4^0,62, в то время как в контроле (дистиллированная вода) - 31,4^0,06 мм.

В дальнейшем мы однократно вводили диамидин в дозе 2 мг/кг. массы тела двум коровам со сроком стельности 4 месяца, а также аэидин в дозе 3 мг'кг массы тела трем оацам со сроком сунгко'сти 3 месяца. У этих животных абортов не отмечали, постнатальное развитие телят и ягнят било в пределах физиологической нор.м,

2.4. Изучение мутагенного действия азидина, диамидина и растворенной формы аллопурлнола

Изучение мутагенного действия азидина, диамидина и 2 %-норб аллопуринола, растворенного в н-метил-2-пирролидоне, преследует цель - определить отдаленные последствия применения данных препаратов в животноводстве. В результате проведенных исследований установили, что аэидин не влияет на митотический индекс клеток костного мозга и не увеличивает статистически достоверно частоту хромосомных аберраций. Подкожное введение суспензии порошка алло-пуринола и внутримышечное введение диамидина в терапевтической и 5-кратной терапевтической дозах не вызывает изменений митотичес~ кого индекса клеток костного мозга и не индуцирует хромосомные аберрации. Внутришшечное введение диамидина в 10-кратной терапевтической дозе и подкожное введение аллопуринола порошка в виде суспензии в 10-кратной дозе в течение 30 дней приводило к возрастанию частоты хромосомных аберраций для диамидина до 7,04-1,02 %, а для аллопуринола до 7,4^1,01 % по сравнению с контрольной группой 3,88^1,33 % (Р<0,05), митотический индекс оставался в пределах физиологической норял (Р^> 0,05). При подкожном введении аллопуринола, растворенного в И -мэтил-2-пирролидоне, в лечебной и двукратно превышающей количество (то есть 5 и 10 мг/кг) в течение 15 дней существенно не влияло на митотический индекс и на частоту хромосомных а'эрраций клеток костного мозга белых крыс. Лишь при повышении дозы до 20 мг/кг (4-кратно превышающая лечебную для белых крыс) происходило увеличение частоты хромосомных аберраций до 7,58^1,28 %. Другие результаты били получены при подкожном введении бельм крысам циклофосфана р дозах 10, 20 и

40 ш'./кг массы тела в течение 15 дней, в частности при инъекции дозы 10 мг/кг частота хромосомных аберраций увеличивалась до 32,3*0,97 %, в дозе 20 мг/кг до 38,9*1,04 %, а при 40 мг/кг массы тела происходил распад клеток, у контрольной группы она составляла 4,00*1,03 %.

Обобщая вышеуказанные данные, необходимо отметить отсут. вие у азидина, диамидина и растворенной формы аллопуринола повреждающего действия на клетки костного мозга белых крыс.

2.5. Определение лечебной дозы растворенных форм аллопуринола при экспериментальном трипаносомозе лошадей

Учитывая положительные результаты лечения растворенными формами аллопуринола лабораторных животных при экспериментальном трипаносомозе белых крыс, наыи были проведены опыты по проверке лечебной эффективности растворенных форл аллопуринола на больных случной болезнью лошадях. В своей работе мы использовали адаптированный к лабораторным животным штамм Тгурапоаака в^и!рег<1ш1 Doflai.il

Заражение лошадей проводили путем подкожного введения взвеси трипаносом в объеме 5 мл, полученной из крови больных трипаносомозом белых мышей. Кровь разводили в соотношении 1:2. Биопробы, поставленные на белых мышах, через 20-26 дней после заражения были положительными. О лечебном действии испытуемых препаратов судили по эффекту, который характеризовался отсутствием трипаносом в периферической крови животных в период 23-42 дней после лечения, а также отрицательной биологической пробой и клиническим состоянием животных.

Опыт I. Двум лошадям был введен внутривенно аллопуринол, растворенный в диметилсульфоксиде, в форме 5 %-ного раствора в дозе 10 мг'кг массы тела. Инъекция животным 5 %-аого аллопуринола в этом же количестве не вызывала у лошадей изменения состояния. Биопроба, поставленная через 23 дня после лечения, была отрицательная, через 42 дня после лечения была положительной.

Дополнительно на двух лошадях испытывали вышеуказанный препарат » дозе 20 мг/кг. Через 1-1,5 мин : еле введения препарата клиническое состояние животных ухудшилось, появились шаткость походам, тремор мышц конечностей и тела, мочеисцуекание, после чего

животные легли. Через 20-30 мин указанные клинические признаки у животных прошли. Биопроба, поставленная через 23 дня после лечения была отрипательной, а через 42 дня - положительной.

Опыт 2. Восьми лошадям экспериментально зараженным тгзршюво-гаа ечи!рвг(1шп внутривенно вводили аллопуринол в форме 2 %-ного раствора на Н-мэтил-2-пирролидоне в дозах 10 мг/кг, 5 мг/кг, • 2,5 мг'кг и 0,7 мг'кг массы тела. На каждую дозу брили по две лошади. После введения 5 мг'кг и 2,5 мг/кг массы тела появлялись шаткость походки, обильнее мочеиспускание, а после введения 10 мг/кг массы тела - тремор мускула1уры конечностей и лошади ложились. Указанные признаки через 20-30 мин проходили, а через 6-12 ч клиническое состояние у животных приходило в норму.

Биопробы, поставленные через 23 и 42 дня после введения 10 мг/кг, 5 мг/кг и 2,5 мг/кг массы тела, били отрицательные.

Биопробы, поставленные через 23 дня после введения 2 ^-ного раствора аллопуринола на в -метил-2-пирролидоне в дозе 0,7 мг/кг массы тела, были положительны. Дополнительно двум лошадям, экспериментально зараженным Ггураповота вди1рвгаига двукратно внутривенно вводили аллопуринол о форме 2 '^-ного раствора на В -метил-2-пирролидоне в дозе I мг/кг массы тела. После двукратного введения с интервалом 7 дней аллопуринола (2 %), растворенного в д-метил--2-пирролидсне, в количества I мг/кг массы тела осложнений у животных не отмечалось. Клиническое состояние большее случной болезнью лояедей улучшилось. Впоследствие в организме лошадей трипаносомы не обнаруживались.

Результаты исследований по определению лечебной дозы растворенных фор* аллопуринола при экспериментальном трипаносомозе лошд-дей свидетельствует о том, что наиболее эффективны при случной болезни лошадей является аллопуринол, растворенный в N -метил-2---пирролидоне.

2.6. Изучение лечебной эффективности 2 !&-ного аллопуринола, растворенного на В-метил-£-пирролидоне при зкепершен чльном нутталлиоэе лошадей

Учитывая положителыые результаты лечения 2 %-иш аллопурино-лом на л-метил-2-пирролидоне больных случной болезнь« лошадей, бил проведен опыт по изучению лечебной эффективности денного прв-

пврата на больных нутталлиозом лошадях. Через 30 дней после заражения внутривенно ввели 2 %-ный аллопуринол на н-метил-£-пирро-лидоне в дозе I мг/кг массы тела, двукратно с интервале^ 7 дней.

По результатам исследований установлено, что 2 £-ный аллопу-ринол, растворенный на ц-метил-2-пирролидоне, при двукратном введении в дозе I мг'кг массы тела с интервалом 7 дней не с. ри~ лизует организм лошадей от jiuttalli-a equi.

2.7. Изучение возможности использования свсбсднмкивущих амеб для тестирования токсических свойств азидина, диамидина и растворенной формы аллопуринола

Проведенные исследования по изучению действия азидина, диамидина и аллопуринола, растворенного в м-метил-2-пирролидоне (2 %), на СЕободнокивущую амебу Hartacuiella rhysodes Sirigb свидетельствует о том, что изменения, происходящие под действием испытуемых препаратов - однотипные. Следует отметить, что основным недостатком выбранного объекта исследования является культивирование амеб в среде с добавлением в качестве пищевого источника Azotobaot«r drroococum . И любое соединение или фактор внешней среды, влияющие на рост, или развитие азотобактера оказывает косвенное воздействие и на амебу. Даже снижение температуры, ниже которой прекращается рост азотобактера, влияет и на амебу. В результате нехватки пищевого источника амебы переходят в стадию покоя, а затем инсцистируются.

Таким образом, свободноживущие почвенные амебы Hartmocella rhycodea Singh по нашецу мнению, не могут быть использованы в качестве лабораторной модели при тестировании активности хиыиоте-раиевтических препаратов.

ВЫВОДЫ

I. Величина Д^д у азидина для белых крыс составляет 206 (195,6-216,9) мг/кг, JlflgQ у диамидина 52,7 ( 48,7-57,02), Л%0 2 i-ного раствора аллопуринола на к -метил-2-пирролидоне составляет 54,0 (43,8-66,3) мг/кг, что позволяет отнести его согласно ГОСТ 12.1.007.76 ко' второму классу опа^юсти.

?.. Пирюпл! моцидные и трипаноцидные препараты: азидин, диа-мндин и растворенные фор/ы аллопуринола при многократном введении

с 1-го по 6-й, с 6-го по 16-й и с 16-го по 19-й дни беременности в лечебной и двукратно превышающей лечебную дозу для крыс, и при однократном введении в один из дней беременности (1,7,9,11,13 и 19) в дозах, пятикратно превышавших лечебную дозу для крыс у азидина, 4 раза - у растворенных форм аллопуринола и 2 раза - у дианидина не увеличивают эмбриональной смертности, на вызывают врожденных пороков развития и не оказывают отрицательного влияния на постнатальное развитие крысят.

3. Азидии на влияет на митотический индекс и не увеличивает частоту хромосомных аберраций клеток костного мозга белых беспородных крыс. Аллопурииол и диамидин в терапевтической и 5-кратной терапевтической дозах не вызывает изменения ыитотического индекса и не индуцируют хромосомные аберрации к клетках костного мозга белых крыс. Аллопуринол на и-метил-2.-пирролидонв не влияет на митотический индекс и не увеличивает частоту хромосомных аберраций в клетках костного мозга белых крыс.

4. Наиболее эффективным при случной болезни лошадей является 2 %-ный раствор аллопуринола на н-метил-2-пирролидоне. Двукратное внутривенное введение данного препарата в дозе I мг/кг массы тела с интервалом 7 дней приводит к полной стерилизации лошадей от возбудителя случной болезни лошадей. Эффективным для белых крыс, зараженных трипаносомозом, является аллопуринол, растворенный в диметилсульфоксиде (5 %), поскольку при введении в дозах 300 иг/кг в лечебном и 200 иг/кг в профилактическом опыте происходила полная стерилизация организма крыс от паразита; при введении аллопуринола на н-метил-2-пирролидонв даже максимально переносимая доза не обладала стерилизующими свойствами.

5. Двукратное введение 2 %-ного аллопуринола, растворенного на н-метил-2-пирролидоне, в дозе I мг/кг массы тела с интервалом 7 дней не стерилизует организм лошадей от Еи^аШа в(ц11»

6. Стерилизующий эффект растворенных (форм аллопуринола для лабораторных и сельскохозяйственных животных не сопровождается корреляцией.

7. Свободноясивушие почвенные амебы по своим биологическим свойствам: зависимость роста от наличия азотобактера и недостаточ-' ного их количества в популяции в фазе экспоненциального роста не могут быть использованы для тестирования биологической активности азидина, диамидина и растворенной формы аллопуринола.

практические пвддсшш

I. Результаты токсикологических исследований 2 я-ного алло-пуридала, растворенного на в -иатил-2-пирродидоне, явились основанием для его внедрения в ветеринарную практику. Разработано временное наставление по применению растворенной форцы аллог -ри-нола для профилактики и лечения случной болезни лошадей (утверк-дено Главным управлением ветеринарии Государственной комиссии Совета Министров СССР по продовольствию и закупкам 15 марта 1990 г.).'

Список работ, опубликованных по тема диссертации

1. Рахматуллин Э.1С. Влияние азидина и диамидина на репродуктивные функции организма животных //Ветеринария, 1989 г,-

№ 6. - С.52.

2. Рахматуллин Э.К., Цветкова H.H. Изучение мутагенного действия азидина, диамидина и аллопуринола //Ветеринария, 1989 г. - » 9. - С.60.

3. Рахматуллин З.К. Показатели острой токсичности и эффективности растворенных форм аллопуринола для крыс //Реф. за. Ветеринария, 1989 г. - № 7. - С.112, Деп. ВНИиТЭИ 07.04.89. » 203 ВС-89 ДСП.

1) f

Л - 40244 Подписано е j чать 6.04.90г. Формат 60x64/16 Заказ 551 Тирах 1X0

Москва. Типография ВЛСХНИЛ