Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Течение туберкулеза у морских свинок на фоне инфицирования атипичными микобактериями

ВСЕРОССИЙСКИ НАУЧНО-ИССВДОМШЬСКИЙ ИНСТИТУТ о ИШх^И&ШЬНОЙ ВЕТЕРИНАРИИ пм.Я.Р.КОЗЛЖКО

(ВКЭВ)

. ' РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК (FACXH)

Иа правах рукописи

ШКОВА Светлана Юрьевна

ТЕЧЕНИЕ ТУБЕРКУЛЕЗА 7 ЮРСКИХ СВИНОК НА ФОНЕ ИНФИЦИРОВАНИЯ АТИПИЧНЫМИ 1ЖОШТЕШШ '

16.00.03. - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук.

Москва - 1994

Работа выполнена в лабораториях эпизоотологии, диагностики и профилактики туберкулеза и паратуберкулеза, лаборатории патологической анатомии и Вышневолоцком отделе БКЗВ.

Научный руководитель - доктор ветеринарных наук, профессор Н.П.Овдиенко

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук А.Н.Шаров (ЕГНКЩ

кандидат ветеринарных наук Н.А.Масимов (ША)

Ведущее учреждение - Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза (г.Омск)

Защита диссертации состоится " ¥~ V _■ 199-^г.

в час. на заседании Специализированного Совета К 020.28.01

по запита кандидатских диссертаций по Всероссийском научно-исследовательском, институте экспериментальной ветеринарии имени Я.Р.Ковалонко.

Адрес: 109472 Москва, Кузьминки, БЙЭВ

С диссертацией модно ознакомиться в научной библиотеке ЕйЭВ. Автореферат разослан " З' " 199/^ г.

Ученый секретарь . Специализированного Совам, кандидат ветеринарных наук

Ф.Г.Терешков

общая ш^терис'ляса работы

актуальность теми. Туберкулаз и микобактериозы занимают одно из первых мест в структура иифекционнон патологии крупного рогатого скота.

Лроявлание эпизоотического процесса туберкулеза варьирует от случаев латентной инфекции до широкого распространения активного туберкулеза с выраженными патологоанатомическига изменениями органов. Участилось выявления микобактериозов, обусловленных атипичными микобактериями. Без чаща встречаются случаи одновременного выделения патогенных и атипичных микобактерий из патологического материала от животных. В некоторых хозяйствах стало необходимой дифференциация туберкулеза и микобактериозов.

Однако еще наг единства взглядов по вопросам этиологии, патогенеза и эпизоотологии микобактериозов. Недостаточно изучено взаимовлияние микобактерий разных видов при смешанных инфекциях животных и человека.

В некоторых регионах страны в комплексе профилактических и озд' ровительных противотуберкулезных мероприятий проводят иммунизацию телят вакциной БЦН. Результаты довольно противоречивы.

В последние годы н а медицинской практике дискутируется проблема эффективности вакцинации детей этой вакциной. Научная группа ИСШ/ВОЗ ( 1982 ) полагает, что атипичные микобактарии, которые превалируют -в региона, где применяют вакцину, способны конкурировать с БЦ2 и самостоятельно индуцировать иммунитет к туберкулезу. Большинство этих микроорганизмов являются скотохромогенамя или принадлежат к комплексу'!!, avium - intracellulare-eorofulaoeuni ( группы Яиаупи II н III). Рэяэ в эту группу входят быстрорастущие микобактерии и, совсем редко, фотохромогены. Остается неясным, в какой степени предшествующая микобактериальная инфекция влияет на

защитный эффект ЕЦД при вакцинации людей и кивоткых. Предложено провести научные исследования для выспения этого вопроса.

I. Sutherland (IS7I), C.C.ShapardC соавт. (1381), U.Sengupta с соавт. (Iüei) и др. подтвердили, что региональные различия в -эффективности вакцинации БЦд связаны с неодинаюшм распределением популяций отдельных видов млкобактерий в окружающей среде. В ветеринарной медицина этот вопрос пока не изучен.

Цель и задачи исследовании. Цель работы - изучение влияния инфи-цированности монокультурами и ассоциациями атипичных микобактери! на проявление инфекционного процесса у морских свинок, иммунизированных и неиммунизированных вакциной БЦЖ.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить видовой состав микобактерий, выделяемых из патологического материала крупного рогатого скота и из объектов внешней среды.

2. Изучить культурально-морфологическио свойствам.bovis им.avium при их совместном культивировании с а типичными микобактериями.

,3. Изучить проявление инфекционного процесса туберкулеза у морских свинок на фоне их инфицированноети монокультурами атипичных микобактерий.

4. Изучить проявление инфекционного процесса туберкулеза у морских свинок на фона их инфицированности ассоциациями атипичных шкобактерий.

5. Изучить проявление инфекционного процесса туберкулеза у иммунизированных вакциной ЩХ морских свинок, на фоне их инфицирования ассоциациями атипичных микобактерий.

Научная но-зчзца. Впервые представлены данные о культуралъно-мор^ологичосклх свойствах и.bovis и u.avi ил при их совместном культивировании с монокультураш и ассоциациями атипичных шкобактерий.

Впервые изучены ( в сравнительном аспекте ) патоморфологпчос-::па изменения и динамика аллергических реакций у иммунизированных

и пеишунизированяых вакциной БДИ морских свинок, зараженных ;з. bovij. на (Johq ищицировшности монокультурами и ассоциациями а тиипчных мпк обакторий.

Лрзктдчоская тонкость работ. Результаты экспериментов по совместному культивированию ".т. bovi.T и 'л. avioj.i с монокультурами и ассоциациями атипичных шкобактерий рекомендуется использовать в ветеринарных лабораториях при диагностике туберкулеза и в научных учреждениях при проведении научг.о-исследовательокоК. работы.

Данные о влиянии шкобактэриального фона на профилактическую эффективность вакцины БЦК при экспериментальном туберкулезе морских свинок могут быть использованы научными сотрудниками при проведении аналогичных экспериментов на молодняке крупного рогатого скота. Но исключается возможность прогнозирования эффективности иммунизации крупного рогатого скота вакциной БЦК с учетом региональных особенностей состава микобакгериальной флоры.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены на заседании Ученого Совета (1994) и на межлабораторном совещании сотрудников ВДЭВ (1994).

Лубликатаи результатов исследований.ilo материалам диссертационной работы опубликовано два статьи и дя. находятся в печати.

Основные полокэния диссертационной работы, выносимые на защиту:

- результаты совместного культивировашяи. bovis и атипичных мико-бактерий;

- материалы по изучении проявления инфекционного процесса .у морских евппок, заракешшх и. Ьсглз на фона икХвдированноста монокультурами атипичных микобактарий;

- материалы по 'цзучониэ проявления инфекционного процесса у морских свинок, зарахзншх гл. Ъот±з на фоне инфицированности ассоциациями атипичных шкобактерий;

- материалы но изучению проявления инфекционного процесса у иммунизированных морских свинок, зараженных i-.oov.i-j на фоне ин^ицирован-мости ассоциацией атипичных микобакторий.

Обьем и структура диссертации, диссертация изложена на страницах машинописного текста и включает: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, вывода, практические предложения, список литературы.Работа иллюстрировала 25 таблицами. 15 фотографиями. Список литературы включает 260 работ отечественных и зарубежных авторов.

собстненные кясшовши

Материалы и методы. Работа выполнена в 1391 - 1994 гг. в лаборатории эпизоотологии, диагностики и профилактики туберкулеза и паратуберкулеза ВИЭВ, Вышневолоцком отделе ЕПЭВ.

Аллергическое исследование на туберкулез крупного рогатого скота проводили в колхозе им.Чапаева Оренбургской области. Исследовали туберкулиновой пробой 630 голов крупного рогатого скота, осмотру патологоанагошческих изменений подвергли 136 туш убитых животных. В этом хозяйство и колхозе "Россия" Оренбургской области отбирали пробы воды и почвы, согласно "Методических рекомендаций но проведению лабораторных исследований при туберкулезе животных" ( 1,1., 1992 ). Всего исследовано 38 проб кормов, 14 проб воды и 7 проб ошвов с кормушек и пода животноводческих помещений, ,, .

Дополнительно исследовали биоматориал ог 38 голов крупного рогатого скота и 12 проб кормов, 5 проб подстилочного материала, 4 ' роб^швоза, II проб смывов с полов, стен и предметов ухода за хи-вотнш.и из хозяйств Волгоградской а Калужской областей.

Предпосевную обработку биоматериала проводили по методу А.Д.Алика а вой (1963), проб кормов, почвы, других объектов внешней среды по методу Л.л.Аликаовой (1979) д высевали на твердую питательную среду

Дваднштойнз-Йанаэна» ¿íoooau культивировали при 370-3!3°G, Лоршо 20 дней пооевы просматривали огоднавно, затем один раз в нодолю.

Окончательный рост культур учиташли чороз три месяца, Из выросших культур готовили мазки и красили их по Цилю-Кильсану.

Определение вида возбудителя губоркулоза проводили путом заро-аенял чистой культурой 2-х морских свинок и 2-х кроликов по общепринятой методана. Кроме баоиробы, шдолошшо культура исследовали тест-системой иммунофермонтного анализа на основе моноклоналышх антител для идентификации возбудителя туберкулеза бычъого вида, разработанной Всероссийским научно-исследовательским институтом • бруцеллеза и туберкулеза нивотшх и Московским научно-нсследова-тольским институтов туберкулеза ИЗ РФ, совместно с к.биол.наук М.В.Андросовой.

Оценка иммуноферментного анализа проводалаоь на спектрофотометре по показателю оптической "плотности при длине волны 492 нм и настройка прибора на "О" по пустому планшету и визуально согласно методических рекомендаций.

Ддя изучения культурально-дарфологических свойств возбудителя туберкулеза бычьего вида при совместном культивировании с атипичными ыикобактериями были взяты музейные штаммьш.Ьот/мз ( шт ЦВ-1 ), lí.phlai ^il.fortuitais ,И.калзазИ ,M.aorofulaoauia ,ií.bo Л.з(шт-780).

Из каждой культуры готовили суспензию.из расчета I мг культуры в I ш стерильного физиологического раствора. Выращивание культур микобактерий.проводили на твердой питательной среде Левеншгейна-Йенсена. Посев проводили стерильной пастеровской пипеткой, равномерно втирая по всей поверхности среды. Пробирка с посевами просматривали ежедневно-до 20 суток, а затем раз в пять дней до 3-х месяцев.

Для изучения роли моноштамшшх культур микобактерий и их ассоциаций на течение туберкулеза'у морских свинок, провели экспериментальное исследование.

На первом этапе изучали влияние моноштаммов различных культур атипичных микобактерий на течение туберкулеза у морских свинок. Для ЭТОГО использовали культурна.rorfcui-fcma .¿I.plildi .Ы.зогоЛОаст, ii.bovia(mT-780), которые выращивали на среде Левенштейна-йенсена, картофельной среде Павловского и безбелковой синтетической среде Сотона.

На втором этапе изучали влияние культур ассоциаций атипичных микобактерий на течение туберкулеза морских свинок.

Для изучения влияния ассоциаций атипичных микобактерий на течение туберкулеза у морских свинок, иммунизированных вакциной БЦЕ поставили второй эксперимент.

В состав ассоциации входили атипичные микобактерии, влияние которых, как монокультур, на течение туберкулеза изучали в первом опыте.

Морских сванок зарааали алиментарным методом и содержали в течение 109 дней,- _ ;

Подопытных животных исследовали каждые• 30 дней симультанной едаергической пробой ЩД-туберкулином для млекопитавдах и комплексным аллергеном из атипичных микобактерий (KAM) действующего "Наставления по диагностике туберкулеза животных", утверзденного Главным управлением ветеринарии Госагропрома СССР 25.02.86 г.

По окончанию сроков экспериментов животных убили. Материал от зараженных животных исследовали бактериологическим, культуральным и гистологическим методами.

Гистологическое исследование патологического материала ог уба-

г

тых морских свинок проведено совместно о канд. вет.наук B.C.Суворовы»;, докт.ват.наук В.А.Ыубиным, канд.ват.наук О.В.Якушевой.

Полученные в процессе работы цифровые показатели обрабатывали методом вариационной статистики ( Й.Я.Ашарин,. А.А.Воробьев,I9G2).-

Рассчитывали средние арифметические. Достоверность различий между средними арифметическими определяли с помощью критерия Стьюден-та ( 1шйдт В.М. ,1984- ).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССВДОВАШЙ Результаты исследования tfo оматериала крупного рогатого скота и объектов внешней среды на наличие микобактерий. Всего исследовали 38 проб биоматориала от животных и 71 пробу объектов внешной среда. В результате бактериологических исследований вьделили 39 культур гч-.о микобактзрий. Из них 25 культур из биоматериала и 14 культур из проб объектов внешней средн. Из брыжеечных лимфоузлов выделили II культур микобактзрий, в том числе M.iuberoulo.<u;;,- I, ¿1. 'oovj ,-i - 2 и атипичных микобактерий - 9 культур ( II гр. по Раньону -5, III - 2, 1У - I). из лимфоузлов голо;£- выделили 8 культур (w.bori* -I, II и 1У групп но Раньону - 8). Из средостонннх лимфоузлов - 6 культур-( I, II группы - 2, 1У - 3 ). Из кормов выдёлили 4 культуры (M.aviüa- 2, II группы - I, III - I), из про почвы 2 культуры II и

III группы. Из воды - 9 культур.

Из двух биоматериалов выделила одновременно три культуры различных микобактерий; атипичные микобактерии II и III групп по Раньону п м. 'bovis ;H.bovio и атипичные микобактерии II группы. В шести случаях пз бвоматориала и двух проб воды выделили по два ' культуры мивобал.тарлй, в трах случаях, выделили культуры патогенных микобактерий и атипичные микобактерии 1У группы по Раньону - пз биома териалаj а из проб водд — Li, aviun и атипичные микобазтерии

IV группы.

Таким образом, из 39 выделенных культур 5 относились' к-патогенным видам ( 4 -и. bovis ,1 -н. tubarouiosi^.остальные II, - III 1У групп по классификации Раньона.

Идентификация М.bovis подтверждена результатами биопробы и имму-ноферментншл анализом с помощью монокдональных антител кц. bovis ,

ч.

проведанный в Московском научно-исследовательском институте туйар-кулеза 113 PS.

Розтаьтаты совместного культивирования; г.'u,у; Р и к-л-и^с атипичными микобактериями. Для исследований взяли культуры M.bovla (шг ЦВ-I), К.avium (шт-780), M.acrofulaceun,M.f orliuitum^i.phLei, M.ksjisasii Культуры микобактарий были взяты из коллекции музейных иташов лаборатории эпизоотологии, диагностики и профилактики туберкулеза и паратуберкулеза Е1ЭВ.

Суспензию разных видов микобактерий для посева готовили exte® рога . I мг культуры кавдого вида шкобактерий вносили а стерильт-ный флакон, тщательно растирали с I мл физиологичекого 'раствора. £ зависимости от количества видов микобаятерд£ вес сырой кассы в I мл физиологического раствора колебался от I мг (для контрольных культур) до 6 мг в полной ассоциации.

Посев проводили на твердую питательную сроду Левенштейна-йенсека и инкубировали в термостате при 37°С. Лервне 20 дней посевы просматривали ежедневно, затем каждые пять дней. За посевами наблюдали в течанае 3 месяцев. Культивирование u.bovie в ассоциации с одним или несколькими видами атипичных микобактерий харктеразуется рядом особенностей роста и формирования колоний»

Рост смешанной культуры ".bovic и iV-.viima твердой дитатедьной среде Левенштейяа-Йенсена замедляется на 5 суток по отношению к монокультуре м.bovis и на 8 суток по отношению к M.avium

Лри совместном культивировании М. bovis »U.aviuia и :J»fortuxtun к одиннадцати суткам формируются мелкие колонии» дающие характерную

с

только для этого сочетания культур картину "Цлечного пути^ч Соче-таьная культура u.bovis,iiaviuni,ii.piiLosxpaHHBT пигмент колоний быстрорастущих, а форму :i»aviun ("тюрбана" или "бубликов'л)»Рост в сочетании с ^.^-uia^oii первоначально отмечается в виде сухих колоний, которые к 15 дню начинают сливаться. Для смешанной куль-

туры характерно расплавление коло-

ний к II. суткам и изменение цвота среды. При сондестном культивировании И.Ьот1а,М.ат1ии,К.рЫв1,И.кап8ао11 И 1:.£ог-Ьид.-ЬиЖ0Л0ШШ ППО-ют желтый или орашяовый пигмент, что характерно для 1:.рЫе± , суховатость, крошковатостъ от м.Ьот1в, а кратерообразпую форму, присущую к.ауаиш без изменения цвета среды.

При совместном культивировании культуры сохраняют изменившуюся форму колоний и пигментацию в течение двух пасоакей (срок наблюдения). Влияние моноатаммннх культур атипичных микобактерий на проявление инфекционного процесса туберкулеза морских свинок. Изучение роли' моноштаммных культур атипичных минобактерий на течение туберкулеза у морских свинок провели в эксперименте.

■На первом этапе этого опыта было использовано 55 морских свинок, •сгруппированных по 10 животных в пяти группах, 5 морских свинок в контрольной, шестой группе.

Морским свинкам первой группы вводили взвесь культуры ы.:Гог1;иЛ_ •Ьит в дозе I мг вТ мл физиологического раствора алиментарно. Выпаивание атипичных микобактерий всем группам морских свинок проводили каждые 14 дней на протяжении всего опыта.

Второй группе животных выпаивали взвесь культуры к.рЫе! ( I мг влажной массы в I мл растворителя).'

Третью группу инфицировали взвесью культуры М.всго:Ги1асеит пврорально в той же дозе.

Пятая и шестая группы были контрольными. Атипичные мивобактерии им на выпаивали.

На 30 день опыта животных всех групп заразили патогенной культурой м. Ьот1в ( шт-8 ). Заражеш^йуовели аналогичной дозой, тоже перорально. Морских свинок кастой группы заражали подкожно М.Ьоу1з - I мг в I мл физиологического раствора.

При аллергическом исследовании морских свинок симультанной

пробой о Щц-туберкулияом для млекопитающих и KAM через 30 дней ни одно животное не реагировало на ±ВД-ту<5ериулин для млекопитающих, а на KAM - 9 морских свинок с диаметром папул от 2 до 5 мм.

Через 60 дней 5 морских свинок первой группы .(инфицирование м. fortultum ) реагировали на оба аллергена, 2 только на KAM, а 2 животных оставались энергичными. Интенсивность внутрикожных реакций на KAM была более выраженной, чем на 1Щ-туберкулин для млекопитающих.

Через 94 дня все животные реагировали на оба аллергена о большей интенсивностью реакций на KAM.

Во второй группе через 60 дней на оба аллергена реагировало только трое животных, остальные реагировали только на KAM.

На S4 день на ШЩ-туберкулин для млекопитающих реагируют 7 животных, интенсивность на KAM при вгих исследованиях сохраняется.

В третьей группе на 60 день, на оба аллергена реагировали 2 морские свинки, только на KAM - 4, реакция на KAM была выраженнее, чем на шД-туберкулин для млекопитающих.

' Через 94 дня все реагировали на оба аллергена, но на KAM реакция была более выраженная.

В четвертой группе на 60 день на оба аллергена реагировали 4 морских свинки, только на KAM - три.

На 94 день 6 моских свинок реагировали на KAM и ШЩ-туберкулин для млекопитающих. На KAM интенсивность кожных реакций была более выраженной как на 60'день, так и на 94 день опыта.

В пятой группе на 60 день реагировали на оба аллергена 7 живог-

г

ных, только на KAM - одна морская свинка. Папулы были примерно равными на оба аллергена. К 34 дню на оба аллергена реагировали 3 морские свинки. Только на KAU - 4 животных, причем интенсивность кожных реакций была больше на KAM, чем на ЛЦЕ-туберкулин для млекопитающих.

У морских свинок контрольной группы интенсивность инутрииож-!шх реакций была достоверно шражина на ШЩ-тубэркулин для млекопитающих на протяжении всого опита.

Таким образом, при исследованиях морских свинок симультанной аллергической пробой о 1Щ-туборкулняом для млекопитающих и KAM животные реагируют более интенсивно ни КАЛ!.

При датологоанатомичоском исследовании павших и убитых морских овинок в первой группе ( инфицирование монокультурой Miortaitaa ) отмечали гипертрофию или дистрофию почони у пяти животных, явления отока стенки желудка у шести, дистрофию селезенки у трех морских овинок.

Во второй группе ( инфицирование М. рЧ1э1 ) изменений в грудной полости и желудочно-кишечном тракте на выявили. У трех морских свинок отмечены дистрофия печени а солозенки.

Кз десяти морских свинок 3 группы ( заражение M.'iovis на фоне инфицирования M.-jcroiuli.ctiu) у 9 животных отмечали некротические очаги, окруженные плотной капсулой, иногда обызвествленные, имевшие локализацию в серозной оболочке селезенки, печени, кишечника, мочевого пузыря, а также лимфатических узлах.

У морских свинок 4 группы ( заражение М. bovis на фоне инфицирования IL avium), отмечала воспаление сальника во всех случаях. Как правило, у каждой морской свинки констатировали сужение илео-цекалыюго соединения. У 8 из 10 морских свинок наблюдали явления гастрита. У трех животных в нечоня отмечены некротические очаги размером о маковое зерно.

В 5 группе (заражали только ¡,1. bovis ), в 6 из 9 случаев, регистрировали утолденпз и складчатость желудка. У 3 животных наблюдали типичные туберкулезные гранулемы под капсулой печени и селезенки.

■ Гистологическим исследованиям подвергнуто чотыр'е материала

от аивотных первой группы. 3 3 случаях подтворздаш" изш8н¥ния*~в желудочно-кишечном тракта, отмечено слущивание эпителия в кишечнике. Гиперемия печени установлена у 3 животных.

В одном случае из 3 биоматериалов второй группы установили слу-щивание эпителия желудка.

При исследовании 7 материалов от морских свинок третьей группы установили образование отдельных гранулем в лимфоузлах, селезенке, печени и мочевом пузыре.

В 3 их 4 биоматериалов морских свинок четвертой группы обнаружили гиперемию печени, слабое скопление лимфоидных пролифератов по триадам в печени.

В биоматериале морских свинок пятой группы выявили скопление лимфоидных пролифератов по триадам в печени и селезенке„а также завязи гранулем в брыжеечных лимфоузлах и печени.

В двух случаях шестой (контрольной группы) констатировали наличие специфических гранулем в печени и селезенке.

Таким образом, в основном поражения локализовывались в брюаной полости и выявляли их в серозной оболочке печени, селезенки, мочевого пузыря, некрозы в брыжеечных лимфоузлах, в серозной оболочке тонкого отдела кишечника в области илеоцекального клапана. Общим натогномоничным симптомом для павших и убитых животных был отек стенки желудка, грубая складчатость и наличие слизи серого цвета в просвете желудка.

В результате культуральных исследований биоматериала морских свинок первого опыта выделено семь культур.

Одна культура из внутренних органов морской свинки, зараженной Ц.Ъоу1з На фоне инфицирования М.±ог1;иг1;ид. .

Одна культура из биоыатериала морской свинки второй группы ( инфицирование «I. pii.ii ).

Три культуры выделены из биоматериала животных третьей группы (2 культуры пз яолудка, одна из селезенки).

" - 13 -

Из биоматериала морских свинок четвертой группы выделили две культуры - одна из желудка, другая из внутренних органов. Вяиянпо ассоциаций культур атипичных шкобакгерпй на проявления инфекционного процесса туберкулеза у морских свинок. Зкспоршшгтальш исследования провели на "20 морских свинках, из.которых сформировали две грушш, подобрав животных по методу аналогов. Кпвотных "обеих групп инфицировали взвесью атипичных микобактерий, состоящую из 4-х ВИДОВ : M.fortuitaB,U.phlei, Л. 3croj?v.l£-Ceum, Ы. avium •

Выпаивание ассоциации атипичных микобактерий проводили каждые 14 дней на протяжении, всего ош'.'а.

При выпаивании каждое животное получало общую'дозу 4 мг ( по Ыг каждого вида микобактерий,'составляющих ассоциацию)- Морских свирок первой грушш заразили культурой ¡vi. bovis на 30 день, перорально а дозе I мг влажной массы в I мл физиологического раствора.

Морских свинок второй группы не заражали.

Контрольные грушш были общими с предыдущим,экспериментом.

При аллергическом исследовании морских свинок через 30 дней после начала опыта, т. е. двукратного выпаивания взвеси ассоциаций атипичных микобактерий, реагировала только одна морская свинка' из ■ _ второй группына KAM.

На 60 день после начала опыта, т.е. на 29 день .после заражения M.bovis И четырехкратного инфицирования взвесью атипичных микобактерий, в первой группе на оба аллергена реагировали 6 морских свинок, из них у пяти интенсивность на'KAM была ярче выражена, чем на ППД-губеряулин для млекопитающих. Две морские свинки реагировала только на KAM, а одна только на хЩ-туберкулин для млекопитающих.

При последнем аллергическом исследовании у 3 животных внутрикож-ная реакция на оба аллергена была одинаковой, у 5 она была интенсивное выражена на ГЩ-туберкулин для млекопитающих. \

Во второй группа через 60 дней поело заражения результаты исследования были почти аналогичны таковым у животных первой группы. При последнем исследовании интенсивность реакций на KAM биля аналогичной.

По-видимому заражение морских свинок wl. bovis повлияло на общий оесибилизирутаций фон подоштных животных, но не явилось настолько серьезным, чтобы внутрикозшая реактивность морских свинок на НЦД-туберкулин дляЧиюкопятающих у них была бы преобладающей.

За время опыта пало в первой группе дво морских свинки. Одна от посторонних причин. Другая, павшая на 41 день опыта, имела по- ■ ражения в виде б^орков в серозной оболочке мочевого пузиря. Бугорок бил плотной коноистенции, окружен соединительнотканой капсулой.

. У вдвотшх этой группы лишь у 2 наблюдали явления гастрита, отека желудочной отенки,

Во второй группе, которым выпаивали только взвесь ассоциаций атипичных микобактерий, на 109 день убито восемь морских свинок, два пали раньше. У одной павшей отмечали картину перитонита, возникшего вследствие кишечной непроходимости из-за наличия граиулом в'вкде па$гяжки в области илеоцокального соединения. У остальных убитых только у одного животного обнаружены некрозы в брыжеечном лимфоузле, а у трех - изменения дистрофического характера в печени.

Гиогологичепки исследовала 6 бяшатериалов из обеих групп ( 2 из иорвой а 4 из второй). В баша терзало морских евпиок первой группы найдено только слувдвзнио эдптолпя киаечника, а в материалах гл'оро«. группы констатирована гиперплазия селезенки в одном случае я олабые скопления лл-йовднше пролифератов по'триадам в печени у одного животного.

Таким образо:,;, при патологоанатодичэском исследовании морских ошшок установили, что органические поражения локализовалась в сороо-

ной оболочка органов брюшной полости.

При культуралъном исследовании биоматериала морских свинок ввдоледо тотыро культуры. Одна культура выделена из бршгеечяого лимфоузла морской свинки дервой группы, остальные три культуры от животных второй группы (по одной культура из жэлудкз, лимфоузла и внутренних органов). ■ • . .

Влияние ассоциации культур атипичных микобактемЦ да подчинение лекционного процесса морских .свинок, иммунизированных вакциной ЕМ. Провели эксперимент на 60 морских свинках, которых разделили на 6 групп по десять в каждой.•

Винаиванио культур атипичных микобактерий} дозы а срока введения культур микобактерий приведены в таблице I.

Таблица I

Дна иммунизации, дозы и сроки введения культур атипичных микобактерий морским свивкам

№16 : Иммунизация í /¡ни введения_ : Доза и способ

групп : БЦа (дни) : атипичные : . введения

I . микобактерии. M.bcwíj : . .

первая первый

вторая-, пятый третья ' первый Четвертая первый

' на 5-10 дни на 30 день I мг вдакной массы бактерий кавдого вида в I мл физиологического • раствора, алиментарно

на 1-10 дндх на 30 день -"-

на 30 день

на 1-10" дни

х

пятая Нд вакцинировали на 5-10 дних на 30 день -"-

шестая первый

Примечание: знак х - затем.один ра,з в недели до конна опыта.

Состав ассоциации атипичных микобактерий включал ;,¡.?ortuiti:ir,' Ujhlel, ¡¿. sorofulaceum и úl. aviun. N

КульгуроЛ M. borle животных заражали перорально, через

я

03 дней после первого инфицирования атипичными микобактериями.

Иммунизировали морских свинок вакциной БЦЕ внугрикоглго в объеме ОД мл а концентрации 0,5 мг.

Гротья группа была контрольной. Ыорских свинок этой группы только шйуннияровали вакциной EI& и на 30 день зарааали взвесью M.bovIs однократно, перорально. Шестая группа тоже контрольная. -Животных этой трушш только иммунизировали вакциной БЦЕ.

перед проведением аллергической пробы у каждой морской свинки учитывали наличие послепрививочного рубца. У восьми животных-первой группы имелся послепрлвивочный рубец, у одной из них он был едва заметен. Па 30 день опыта все животные первой группы реагировали на оба аллергена, причем интенсивность реакции была одинаковой.Спустя еще 30,дней животные также реагировали на оба аллергена,, но на 1Щ-туберкулин для млекопитающих интенсивнее. У морской свинки, у которой был едва заметен иослепрививочный рубец, реакция на KAil была.ка 6-им больше, чем на 1ВД-туберкулин для млекопитающих. На 94 дань реагировали все иивотные. Одна морская свинка реагировала только на ГЩ-тзгберкулин для. млекопитающих. У семи животных внутрикожная реакция'была интенсивнее на ДДД-туберкулин Для млеком таицих, чем -на КАМ..

Во второй группе на, 30 день реагировали восемь из десяти тавотных, Интенсивность внутрикожных реакций была примерно одинаковой на оба аллергена. ' - ' '

На 60 день все десять морских свинок реагировали на оба аллергена о более выраженной реакциои на ПЦЦ-губеркулин для млекопитающих. '

На 94 день опыта вое морские свинки реагировали на оба аллергена с большей интенсивностью на ДЦП,'-туберкулин для млекопитающих.

. В Третьей группе при исследовании животных через 30 дней на

оба аллергена.реагировала 2 животных, остальные реагировали только на КАМ.

Через месяц посла введения Ц.Ьоу1а все тавотные реагировали на оба аллергена. Причем у 3 морских свинок интенсивность реакции была одинаковой на оба аллергена. У 5 папулы были больше на 1Щ-туберкулдн дда млекопитающих.

Лри последнем аллергическом исследовании все морские свинки реагировали на оба аллергена. Три морские свинки интенсивное реагировали на 1Ш, чем на ШЩ-туберкулин для гае$опитавцпх. У остальных животных реакция была интенсивнее выражена на ЛЩ-туборкулпн для млекопитающих.

Две морские свинки 4 группы реагировали на оба аллергена па 30 день. Одна - только на ТЬЩ-туберкулин для млекопитающих. На КАМ реагировали 3 морские сванки» К 60 дню в этой группе животных осталось 2 морские свинки, они реагировали на оба аллергена с больней шатшейЕНостыо на ¿Щ-туберкулин для шгакапйгатацих. Такие же результаты были и при исследовании на 94 день.

Пять из семи морских свинок 5 группы на 30 день ошгта реагировали только на КАМ, чорез месяц после заражения на оба аллергена реагировало только одно животное. Остальные 3 реагировали только на КАП. К 94 дню все морские свинки реагировали на'оба аллергена, но интенсивность на КАМ оставалась.выае.

Еивотные 6 группы к 60 днЬ, все реагировали на ДГЩ-туберкугага ддямлакопитающих,, на 94 день результаты были аналогичными. На эа вэоб период опыта реагировало только 4 животных с величиной дг-•цуды ос 2 до 3 ш.

•Во время ■эксперимента пало от интёркуррентных заболеваний 8 морских свинок»

У морских сванок I и 2 групп не отмечено специфических пора-

жений внутренних органов, за исключением гипертрофии печени у 3 животных второй группы.

У морских свинок 3 группы отнэчено образование единичных очагов, расположенных под капсулой печени, селезенки. У одной морской свинки наблюдали обширные гранулемы на рогах матки.• j

У всех животных констатировано частичное нарушение кишечной : непроходимости., вследствии сужения илеоцэкального соединения.

поражения внутренних органов морских' свинок 4 группы локализо- , вались в брыжеечных лимфоузлах, в печени, селезенке и носили диф- j

фузный характер,. Разшры некрозов варьировали от макового зерна до \ л ' i

горошины. Бугорки были твердые на ощупь, окружены плотной соедини- \

твлъноткатож капсулой, некоторые крепи тировали, содержимое этих ■

образований составляла сметанообразная масса. В одном случае уста- !

i

новили образование гранулеш под серозной оболочкой мочевого пузыря. ]

В 5 группе у морских сванок, зараженных М. bovis на фоне инфицирования ассоциацией атипичных микобактерий (животные не иммунизированы БЦН),-. отмечали поражения сальника и перитонит.

В 6 (контрольной) группа морские свинки только иммунизированы вакциной ЕЦК. Пало в процессе опыта 2 морские свинки на ранних сроках эксперимента от посторонних причин. При патологоанатощческом осмотре убитых на 109 день опыта, поражений внутренних органов на нашли.

Гистологическим исследованиям подвергли 16 биоматериалов морских свинок. У 3 исследованных биоматериалов морских свинок I группы не отмечено какой-либо патологии. Из 3 материалов морских свинок 2 группы у 2 отмечено слабое скопление лшфбпдшх элементов по триадам. У морских свинок 3 группы регистрировали завязи, иногда отдельные гранулеш,• обширные некрозы в матке, шльное повреждение . ворсинок в желудке.

В 5 группе из трех исследованных биоматериалов р 2 случаях отмечено слабое скопление лимфоидных дролифератов в печени двух морских свинок и некроз брыжеечного лимфоузла.

В маториало от животных 6 группы патллогии не выявили.

Таким образом, морские свинки, иммунизированные вакциной БЩ и зараженные 1Л. bovis на фона инфицирования атипичными шкобактерпямп,' не имели поражений внутренних органов. У остальных животных (кроме 6, контрольной) преобладали поражения органов брюшной полости, а ■ очаги локализовались преимущественно в серозной оболочка внутренних ' органов. ' ' .

При культуральном исследовании биоматериала морских свинок 5 грудой выделили две культуры (одна из аелудка, другая из внутренних органов).

Сравнительная опенка результатов гистологического исследование патологического материала морских свинок. От 9Ъ убитой и 35 павшей ' морской свинки провели выборочные гистологические исследования (50) для .уточнения характера патологии. 1

При пероральном методе заражения у морских свинок всех групп в том числе контрольной, зараженной Ы.bovis , преобладали поражения органов брюшной полости. •

i

Изменения отмечали по ходу серозной оболочки печени, селезенки,' матки, мочевого пузыря,-брыжейка* кишечника.

, Наиболее части инкапсулированные некрозы различной величины, от макового зерна до горошины находили по ходу брыжейки в области влеоцекального соединения. Во всех группах отмечали в разной 'степени единичные или множественные некрозы без .тенденции образования конгломератов а слиянию под капсулой печени, селезенки, матки, мочевого пузыря, брыжеечного лимфоузла. Центральная часть-некроза представляла собой творожистую массу, частично обызвестзленную. У

отдельных морских свинок некрозы были окружоны фибринозной массой.

Выявленные изменения насоли однотипный характер.

В проведенном первом эксперименте наиболее выраженная и закономерная патология выявлена у морских свинок третьей группы, инфицированной 1Л.есго^и1асеш1 , с последующим заражением ¡Л.Ьоу1а.

Так, в селезенке и лимфатических узлах находили различно!! величины некрозы, декавдв изолированно друг от друга, о хорошо оформленной капсулой.

Центральная-часть некроза, состояния из распавшихся путам кариорексиса клеток в лимфатическом узле, частично обызваствлена и окружена зоной макрофагов, местами образовавшие скопления. ■

Однако преобладающими в воспалительной реакции являлась пролиферация фибройяастическвх элементов и формирование отчетливой соединительнотканной капсулы вокруг некрозов.

В серозных оболочках печени, селезенки, на фоне их утолщения за счет отека, полиморфшклегочной инфильтрации, выпота фибрина выявлена пролиферация фибробластических элементов. Наиболее выраженное формирование фиброзных спаек установлено в капсуле селезенки, в серозной оболочке кишечника.

У отдельных животных в .воспалительной реакции преобладал аль-•теративный компонент: клетки пролиферата подвергались кариорексису на значительных участках, в этих олучаях заметно острое течение -кровенаполнение кровеносных сосудов, клеточная инфильтрация подло-

4

жащах тканей. Подобные отмеченные изменения носили очаговый характер и протекали, как правило, на фоне имеющейся соединительнотканой пролиферации, отделяющей очаги воспаления от оотальной части органа.

Следовательно, заражение Ц.ЬотЛо на фоне инфицирования атипичными микобактерияш, использованными в эксперименте, воссоздает патологию преимущественно серозных оболочек органов брюшной полости.

Сравнительная оценка результатов бактериологических исследора-ШйЬ— Биоматориал от каздой морской свинки исследовали бактериологически. Провели 146 бактериологических исследований ит 128 морских свинок.

При бактериоскопичосном исследовании биоматсриала морских свинок из 298 мазков-отпечатков (по два мазка-отпечатка на каждый

биокаториал) в 238 (79£) наблюдали единичные кислотоустойчивые

палочки. Как правило, это были мазки-отпечатки из печени и соскобы

из тонкого отдела кишечника.

При культуральном исследовании 146 биоматер^алов' получили 13 культур. _ ,

Из биоматериалов морских свинок выделать культуру М.Ьот1в не удалось ни в одном случае. Такта не выделили с характерным ростом моноштаммннх культур атипичных микобактерий. Выделенные культуры микобакторий соответствовали культурам, наблюдаемил при совместном • культивировали разных видов микобактерий. Так,' культура, выросшая из биоматериала морских свинок, зараженных М.ЬотЮ на фона инфицирования монокультурой 14.ph.lsi, имела оранжевый пигмент,. сроки роста в порвитщой культуре 20 дней, по характеру суховатые, 3?-формн.

Культуры из биоматериала морских свинок, зараженных Н.Ьот1а на фоне инфицирования атипичными микобактерилш, имели В-форму колоний, желтый пигмент, агличались модленным ростом, как в первичной, так п субкультуре, слабо накапливали бактериальную массу.

ВЫВОДЫ

1. Из биоматериала от крупного рогатого скота, тэагировавиего на туберкулин для млзкопатающих, из проб объектов вкооией среды нередко одновременно выделяются патогенные п атипичные мпнобактерни -г как в виде монокультур, тан и в различных ассоциациях. '

2. При совместном культивировании атипичных микобактерий разных

ВИДОВ (i.I.fortuitua, ¡J.sorofulaceum , Ы. phlei, M.kaneaeii ) 11 M.b&vi'Ö 1,<1.аг1ио изменяются некоторые свойства колоний (сроки первичного роста, форгла, характер поверхности, консистенция, цвот колоний). Эти изменения сохраняются в течение двух пассажей (срок наблюдения).

3. Яри заражении морских свинок LI. bovis на фоне инфицирования этих животных монокультурами иди ассоциация® атипичных микобактерий развивается гииерсенсибилизация, выражающаяся макроскопически серозитаыи органов брюшной полости, а гистологически обширными участками кариорэксиса нейтрофилов и выпота фибрина в местах воспалительных реаксщй.

л *

4. Инфицированность морских свинок ассоциациями атипичных

микобактерий сдерживает развитие патологического процесса, вызванного ¡J.bovip.

5. При алиментарном заражении морских свинок 1,1. bovis на фона инфкцировашюсги ассоциацией Ii.fortuitua, i.i.Borofulaoemy.'.I.phlai, M.avtaa установлено повышение защитных свойств вакцины БЩ1.

G. При смешанных инфекциях, вызванных у морских свинок патогенными и атипичными макобактерияш симультанная проба с 1Щ-тубер-кулиноы для млекопитающих и KAM дает Определенные результаты.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ШВДНЖЕНИЯ

1. Выделяемые культуры медленнорастущих микобактерий, независимо от формы, характера и цвета колоний, необходимо исследовать биологическим методом.

Предложение включено в проект "¡.Зегодичзскпх указаний по диагностике туберкулеза животных", продставлешшх Департаменту ветеринарии Минсельхозпрода PS (1994 г.). .

2. Данные о' влиянии щкобактзриального фона на профплактичэс-кую эффективность вакцины БЩ при экспериментальном утуберкулезе морских свинок рекомендуется использовать при проведении .экспериментов на молодняке крупного рогатого скота.

СПИСОК РАБОТ, ОПШПйШШШХ ЛО К.Е ДКССЯРТАЦК!

1. Быкова С.Ю.- ¡фльтурально-морфологические свойства. 11. Ьо\-1в и Ни с.лгз.ши при совместном культивировании их с монокультурами и в ассоциации с атипичными микобактерияш. //ВИЗВ, Москва, 1934 - Дан. в ВШШТЭИагрспром.

2. Быкова С.В. О влиянии атипичных микобакторий на течение туберкулеза у морских свинок, иммунизированных вакциной БЦК. _ ' //ВКЗВ, Москва, 1994 - дед. в ВШЖТЭКагроиром. '

3. Н.Г.Толатенко, Н.и.Овдиенко, В.К.Косенко, И.Е..Зельшскин, ' В.С.Суворов, С.Ю.Еыкова, ВИЗВ, РАС2Н. Экспериментальное изучение патогенности атипичных микобактерий. /Тезисы докладов//Х11'съезд фтизиатров. Саратов, 1994.

4. Быкова С.Ю. Течение туберкулеза у морских свинок на .фоне инфицирования ассоциацией атипичных микобактерий. //;,1атариалы научной конференции, посвященной 70-летию Вигэбдкого вот.института. г.Витебск. 1994.

Подписано в печать

О}, О ШЭ^г. Формат 60X84/16 Бум. офс Печать офс. Тира ж/СО

МП «ПЕТИТ»

837564, Москва, Богатырский мост, !7, корп. 5