Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Роль патогенных, атипичных и L-форм микробактерий в эпизоотологии туберкулеза крупного рогатого скота

ГОСУДАРСТВЕННАЯ КОМИССИЯ СОВЕТА МИНИСТРОВ СССР ПО ПРОДОВОЛЬСТВИЮ И ЗАКУПКАМ

ЛЕНИНГРАДСКИЙ ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ

На правах рукоииои

КЕРИМКАНОВА Бахытжан Фазшгаановна

УЛ1С 619:616.90:379.073.21Т:¡779.23

РОЛЬ ПАТОГНПШХ, АТИПИШШХ И Ь-ФОРМ ШКОЕАКТШЙ в эпизоотологии ТУБЕРКУЛЕЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология н иммунология

Автореферат диссертации на соиокание ученой степени доктора ветеринарных наук

Ленинград - 1991

Работа выполнена в Ленинградском ветеринарном институти п в Казахском научно-исследовательском ветеринарном институте.

Научный консультант - доктор ветеринарных наук, профессор,

академик ВАСХНИЛ В.П.УРБАН.

Официальные огяоненты: доктор ветеринарных наук,

профессор А.Г.ШАХОВ.

доктор ветеринарных наук, профессор А.И.КУЗИН,

доктор ветеринарных наук, профессор Н.Н.КОЗЛОВ

Ведущее учреждение - Украинский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии.

Защита диссертации состоится " 4 " ¿C/€>Ujt 1991 г. в 13 часов на заседании специализированного совета Д 120.20.0, по защите докторских диссертаций при Ленинградском ветеринарном институте (196084,• Ленинград, Московский проспект, 112).

С диссертацией могло ознакомиться в библиотеке Ленинградского ветеринарного института.

Автореферат разослан

j

Ученый секретарь совета, доцент

Т.М.КИНДРАС

' I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

• -'Актуальность. В отдельных регионах нашей страны туберкулез .крупного рогатого скота до сях пор имеет широкое распространенна, что является тормозом развития и совершенствования интенсивных методов ведения животноводства,препятствует увеличению численности поголовья,псвютешаа продуктивности,улучшению ее качества и представляет опасность для заражения людей. Первостепенное значение в успешной борьбе с данной болезнью имеет • своевременная и эффективная диагностика заболевания,особенно лабораторная. Применяемые в практике метода лабораторного исследования по выделению возбудителя не всегда дают объективную оценку, что обусловлено воздействием различных биологических, химических препаратов и факторов как на организм животных, так и на самого возбудителя.

Успешная профилактика инфекционных болезней требует глубокого знания всех закономерностей возникновения,течения икфек- ■ ционного и эпизоотического процессов. С этих позиций особи» интерес вызывает учение о микробном персистпровании. На основании экспериментальных и клинических наблюдений, И.Р.Дорохова, З.С.Земскова (1974) установили, что т,-форг« шгкобактерш! туберкулеза являются оптимальным вариантом псрсистирущего мипроортшшзма. Это открытие в науке послужило основанием для проведения исследований по изучению в данном няправле-пии возбудителя туберкулеза бычьего вида.

Исследования ряда авторов (Урбан ВЛ1.Д9В2; Федосеев B.Ü., IS85; Бакулоп И.А., Макаров В.В.,1986; Допченко А.С.о соавт., 1986; Кузга! А.И.,1971,1537; Колычев Н.М.,1Э87;_ Кассич Ю.Я., 1990 и др.) дают основание предположить, что одной из причал длительного неблагополучия хозяйств по туберкулезу крупного рогатого слота может быть латентной микробкзм, обусловленный пероистенциий мшсобактарий туберкулеза б L-форма. В то же вре ип.отсутствие достаточных знаний об условиях образования,неводов выделения ие позволяет оценить значение ь-фпрм М» bovis а эпизоотическом процессе и з эффективности противотуберкулезных профилактических мероприятий.

Цель и задачи исследований. Ограниченность научных свадеикй о видовом распространении микобактерий в разных зонах Казахстана и изучению L-фсрм М. bovin, отсутствие штодол выделения пес-ледних из патологического материала от яиэотшк побудили пао провести комплексные исследования Ь-трансформаш:»,оггределеида степени распространения мнкобпктераП и па основа получгнны*

данных разработать рекомендации и практические предложения по диагностике и профилактике туберкулеза крупного рогатого скота

Для достижения намеченной цели были поставлены следующие вадачи:

1. Изучить Е экспериментальных условиях in vitro и In vivo возможность L-трансформации М. bovis и определить их свойства.

2. Доказать возможность реверсии Ь-форм М. bovis в исходную бактериальную форму в экспериментальных условиях in vitro и в организме крупного рогатого скота.

3. Разработать методику исследований патологического материала от животных'на выделение L-форм жкобактерий туберкулеза, доступную для практически?: ветеринарных лабораторий.

4. Изучить в условиях Восточного Казахстана выживаемость М. bovis в объектах внешней среды.

5. Определить видовой состав, степень распространения атипичных шкобактерий в зонах Казахстана у зараженных животных и в объектах внешней среды с различной эпизоотической ситуацией по туберкулезу.

Научная новизна. В экспериментальных условиях из патогенных штаммов М. bovis in vitro и in vivo под влиянием разлив ных антибактериальных препаратов получены L-формы.

Установлено, что изониазид, применяемый для профилактики туберкулеза крупного рогатого скота,вызывает L-трансформацию №. bovis.

Доказана в эксперименте на лабораторных животных и в пронг водственных условиях возможность реверсии L-форм М. bovia в исходную форму.

С помощью электронной микроскопии получены новые научные данные, расширяющие представление о динамике и характере морфогенеза при L-трансформации М. bovis.

Предложена методика исследований материала от животных на ъ-форш ыикобактерий туберкулеза и способ предпосевной обработки.

• Разработана на уровне изобретения питательная среда душ п< лучения сферопластов [жкобактерий туберкулеза.

Установлено,что одной из причин стационарности эпизоотиче кого' очага является выживаемость микобактерий туберкулеза бы чьзто впда в навозе и стоячих водоемах в условиях Восточного Казахстана до 20 мосяцзв.

изучен видовой состав атипичных шкобактерий, распростра-

ценных в разных природно-экономических зонах Казахстана;.

Усовершенствован метод выделения микобактерий из объектов внешней среда.

Практическая значимость. Результаты исследования дагот основание для введения нового элемента в бактериологическую диагностику, критериев оценки и прогнозирования эпизоотической ситуации по туберкулезу крупного рогатого скота.

_ Полученные данные, с учетом исследований других ученых, послужили основанием для разработки рекомендаций и предложений к действующим инструкции и наставлению по диагностике туберкулеза животных.

Основные положения, выносимые на защиту:

- характеристика биологических свойств Ь-форм Н.Ьоу1а, • методы, средства их получения и выделения;

- современные представления об изменчивости микобактерий в процессе химиопрофилактики туберкулеза крупного рогатого скота и пути совершенствования бактериологической диагностики.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на НТО Госагропрома НЧЗ РСФСР (1330); Президиуме отделения ВАСХНИЛ НЧЗ; ГУВ Г.'СХ СССР и КазССР (1982, 1989); Всесоюзной научной конференции ВАСХНИЛ по проблемам туберкулеза и бруцеллеза (Омск,1980); Всесоюзных координационных конференциях по проблеме туберкулеза (1989, 1990); Всесоюзном координационном совещании исполнителей НИР по изменчивости ми- ■ кобактерий туберкулеза (Омск,1987); научных конференциях Леша-градского ветеринарного института (1983, 1989, 1990, 1991).

Основные положения, швода и практические предложения, изложенные в диссертации, обсуждены и одобрены на межкафедральном совещании профессорско-преподавательского состава Ленинградского ветеринарного института (1991).

Публикация результатов исследований. По теме диссертации' опубликовано 43 работы в сборниках научных трудов Ленинградского ветеринарного и Казахского научно-исоледоатгольского ветеринарного институтов, Вестника с.-х. науки ВАСХНИЛ и Казахстана, в материалах Всесоюзных научных конференций и в других паучзшх изданиях. По результатам да/ оертацнонной работы получено авторское свидетельство на изобретение, два рационализаторских предложения.

Объем и структура диссертации. .Диссертация изложена на 413 страницах мапикописи, илластрироианэ 43 таблицами - 82 рисунками, оссгсат чз вьздения, обзора литературы, результатов соо-

ствонных исследований, обсуждения результатов исследований,выводов, практических предлокенгй и приложения. Список литературы включает '197 источников, в том числе 384 отечественных и 113 инострашшх.

2. МАТЕРИМ и мнтода ИССЛ:ВД0ВЛ1Б:й

, Изучение морфологии и биологических свойств микобактерий проводил;! по методикам и рекомендации Центрального научно-исследовательского института туберкулеза МЗ СССР (1374, 1984, 1938), приказу 1,13 СССР £ 553 ог 08.06.78 г. "Об унификации микробиологических методов исследования туберкулеза", Методической рекомендации Т.Б.Ильиной (1975), руководствовались "Методическим! указаниями по диагностике туберкулеза животных", утвержденных ГУВ МСХ СССР от II февраля 1976 г., "Наставлением по диагностике туберкулеза животных", утвержденным ГУВ Гос-агропрома СССР от 2а февраля 1986 г. Это бактериологический метод, куда входили: бактериоскопия, скорость роста на яичной среде при температуре 20-22,37,45 и 52°С; морфология колоний: величина, форма, поверхность, консистенция; тинктори' алше свойства, способность к пигменгообраэовашш на свету и в темноте; вирулентные свойства на лабораторных животных; лекарственная чувствительность к г'уберкулостатическим препаратам I и П ряда; сенсибилизирующие свойства на морских свинках К биохимический: каталазная активность и ее термостабильность, амидазная и формамидазная активности; реакция гидролиз твин-ВО; цитохимическая реакция -с нейтральным красным, аура-мино-дисковая проба, редукция нитратов, салицилатный эффект.

Изучение продолжительности сохранения патогенных свойств у микобактерий туберкулеза бычьего вида в объектах внешней сред проведено в одном из хозяйств Восточно-Казахстанской области. С втой целью навоз крупного рогатого скота из ферм вывозили н навозохранилище и штабелировали с помощью бульдозеров по техи логик,применяемой в хозяйствах республики,шириной 3.5 м, дойной.10 м, высотой 2.3-2.5 м. В качестве тест-объекта использс вали навески стерилизованного навоза крупного рогатого скота, контаминированнох'о 2 млрд взвесью микобактерий туберкулеза бь чьего вида из расчета I г на I мл стерильного физиологического раствора и затем помещенного в двойную целлофановую оболочку. Тост-объекты были заложены в различные слои бурта. Активность протекающих биотермическкх процессов изучали путев

измерения температуры в бурте с помощью максимальных термометров, расположенных на тех же уровнях, что и тест-объекты. Тост-объекты извлекали в первые два месяца ежемесячно, затем один раз а два месяца в течение 20 месяцев. Жизнеспособность культур микобактерий определяли путем предпосевной обработки тест-объектов с последующими посевами на яичные среда Гельбер-га и Левзнштейна-Иенсена и обязательной постановкой биологической пробы на кроликах и морских свинках. Контролем при этом служили тест-объекты из холодильника (+4°С).

С целью изучения выживаемости шкобактерий туберкулеза бычьего вида в водоемах аналогичные тест-объекты заложили в контейнеры из металлической сетки и опустили на глубину X м в водоем непосредственно в участке водопоя скота. Перед постановкой данного опита провели исследование проб вода на наличие микобактерий.

В работе были использованы эталонные штаммы шкобактерий туберкулеза бычьего вида (.Ravenel.Valle'e, №8), птичьего- W80» "р").человеческого Ш37 Hv, Academia ), M.&aneasii, M.acrofula-сеша, M.fortuitum, M.terrae, M.gordonae, M.phlei, M. sinagiaatie, M.battey, полученные с паспортами из музеев ЕГНКИ, ВИЭВ, ЦНИИГ МЗ СССР.

Всего исследовано 334 пробы материала от животных и птиц; 235 проб из объектов внешней среда; 139 тест-объектов, в т.п. 65 тест-объектоэ в целлофане, 53 - во флаконах и 21 - из водоема. Выделено к дифференцировано 451 культура шкобактерий.Использовано в данных опытах 810 морских свинок, 311 кроликов и 15 кур.

Индукцию и изучение динамики L-трансформации in vitro осуществляли на питательной среде с добавлением нормальной сыворотки крови крупного рогатого скота и сахарозы согласно прописи И.Р.Дорожковой (1974). 3 качестве L-трансформирующего агента испытали дигидрострептомщин, пенициллин, изониазид, лизо-цим. Дозу воздействия указанных факторов выбирали с учетом данных МЗ ССОР (1974,1984), кафедры микробиологии I ШИ им.Се-ченова (1968,1970,1971) и собственных оезультатов,полученных в ориентировочных опытах.

Бактериоскопию мазков проводили в световом и фазовоконтрас-гном микроскопах. В зависимости от цели окраску проводили по Цилю-Нильсену, Лаку, Муху.

Микробиологические исследования на Ь-формч патологического

о

материала от крупного рогатого скота включали бактериоскопию окршзеш'их по Цилю-Нлльсену мазков-отпечатков, серию гультура-лышх исследований на различных питателышх средах и микроскопии выд'зленшх культур микобактерий .в световом и фазовом контрасте .

С целью изучения степени вирулентности и стабильности свойств персистируюших вариантов микобактерий проведены многократные биологические пробы на морских свинках. Для учета сте-■¡ччи пораженности туберкулезом органов у данных животных применили цифровой индекс О.К.Вейсфейлера (1975) - четырехбитную систему с максимальным индексом поражения- 22.

Органы животных (кусочки печени, селезенки, легких, паховые лимфатические узлы) исследовали бактериологическим и гистологическими методами.

Получение ревертантов из выделенных культур L-форм микобактерий проводили методам пассажа на питателышх средах,через организм морских свинок по И.Р.Дорожковой (1974,1980) и на куриных эмбрионах по В.С.Федосееву с соавт-. (1984).

Опыты по изучению L-трансформпрующего действия изониазида in vivo на микобактерии туберкулеза бычьего вида были проведены на ВЗ беспородных белых мышах, 118 морских свинках и 70 телятах. При проведении опыта на телятах использовали аллергическую диагностическую пробу, иммунологический статус организма определяли гистаминовой пробой по Д.Д.Новак (1965), лизо-цишгой активностью и содержанием иммуноглобулинов в сыворотке крови.

Исследован патологический материал ка носительство L-форм микобактерий от 50 голов крупного рогатого скота, подвергавшегося химиопрофилактике изониазидом.

'Ультратонкие срезы L-форм микобактерий туберкулеза бычьего вида получали на ультратоме Д(Б и изучали методом просвечивания в электронном микроскопе УЕМ IC0CX японской фирм при ускоряющем напряжении 80 кВ и инструментальном увеличении от 6.6 до 50 тыс. Ультраструктуру L-форм микобактерий бычьего вида изучали и методом сканирования при увеличении от I до 20 тыс.

Методики отдельных экспериментов, научло-нроизиодственных опытов и эпизоотологичеекпх исследований изложены в соответствующих разделах диссертации.

Статистическую обработку экспериментальных данных проводили по методикам П.И.Уколова (ГЭ88) с применением; электронко-

вычислительной техники (ЭВМ) и М.Г.Тарлиса (1975).

За основу выводов и предложений были взята результаты контролируемых опытов в лабораторных и производственных условиях.

Отдельные исследования выполнены в соавторстве с сотрудниками отдела по изучению эпизоотологии, диагностики и профилактики туберкулеза животных Казахского НИШ.

Автор выражает глубокую признательность и благодарность сотрудникам Центрального научно-исследовательского института туберкулеза ИЗ СССР, лауреатам Государственной премии СССР, докторам медицинских наук И.Р.Дорожковой, З.С.Земсковой, оказавшим большую помощь при проведении исследований с ь-фор-маыи иикобактерий туберкулеза бычьего вида.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Источники, частота выделения и видово'е. распространение патогенных и атипичных ьикобактерий -

В период с 1976 no 1980 гг. исследовали материал от животных из 12 областей Казахстана с различными природными условиями. Упомянутые животные были убиты с диагностической целью по показаниям положительной аллергической пробы из благополучных и неблагополучных по туберкулезу хозяйств. Проведенные культурально-морфологическио исследования, а также биологическая проба на лабораторных животных дали возможность дифференцировать культуры как микобактерии туберкулеза бычьего видя -57, птичьего - 9 и атипичные - 18. Последние предварительно разделены на группы по Рипьону: ко П-й группе отнесет! культуры 59, 100; к Ш-й - 185, 233 и к 1У~й - 93, 171, 235, 251, 207, 150 , 246, -101, -102, 405, 403, 409, 5-36, 2S3.

Результат;! определения лекарственной чувствительности показали, что из Ъ'7 культур митсобактериА туберкулеза бичьего видя 43 - чувствительные ко всем разведениям отрсптемицина, ПА®, тубози.т. Полпрезисгентиы л препаратам I ряда 5 культур (Ш!, 175, 99, 903, 29). Выявлены культуры, устойчивые % друм препаратом: стрептомицину и тубазиду - 3 (211, 80, 182).

к тубазиду и ПАСК - 2 (199 , 204).

Из препаратов П ряда культура 427 кз Северо-КазахстанскоЯ облаоти резистентна к етионамиду, циклосерину, этамбутолу. Культуры 398 - из Тургьйской области, 378 - из Северо-Казахстанской и 186 - из Алма-Атинской областей резистентны только к циклосерину.

Из 9 культур микобактерий туберкулеза птичьего вида - 7 резистентны ко всэм препаратам I ряда, одна культура 36 чувствительная к ним, а культура 63 - только к тубазиду и рэзис тентна к стрептомицину и ПАСК.

Из 18 штаммов, атипичных микобактерий 13 культур оказание! резистентными к туберкулостатическим препаратам I ряда. Tpi культуры устойчивы к этионамиду, циклосерину, рифампицину, £ культура 546 - еще к к этамбутолу. Три культуры-158 , 59 и 405 полирезистентны к препаратам I ряда. Культура 185 устойчива к двум препаратам - стрептомицину и тубазиду, но чувствительна к ПАСК.

Установлено, что возбудитель туберкулеза бычъого впда.га-деленный от крупного рогатого скота в хозяйствах различных зон Казахстана, в большинстве случаев обладает чувствптельж стъп к туберкулостатическим препаратам. Так, 75.4% из общей числа микобактерий туберкулеза бычьего вида чувствительны к< всем препаратам I и П ряда. В то же время 14 культур, или 24.6%, оказались резистентными к ним.

По отношению к отдельным антибиотикам, как стрептомицин, пенициллин, изоняазид, лекарственная устойчивость гтриобрета' ет в последние годы такое распространение, что не без ochobi ния вызывает тревогу, разделяемую многими исследователями. Увеличение числа заболеваний, вызванных резистентными возбу дителями, ведет к увеличению носителей их в организме живот шх. Это диктует необходимость оценки эпизоотологического значения лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза, выявленной бактериологическим методами.

. В данной работе ш применили определение лекарственной чувствительности как тест для дифференциации микобактерий. Вместе с тем, с иироким внедрением антибактериальной терапии в ветеринарную практику при лечении с раннего возраста крупного рогатого скота, заставляет обратить внимание на фе номен приспособляемости микроорганизмов к действию вводимых препаратов и способность их "переливать" или "персистироват

в этих условиях. Поэтому, дугазтся, что ле:?лрствеЕйоя устойчивость микробов займет одно из ведущих мест в эпизоотологии ряда инфекций, в том числе туберкулеза. "История химиотерапии является одновременно историей устойчивости микроорганизмов к лекарственным веществам" (Р.Шнитцер, Э.Грунберг, i960).

Необходимо отметить, что перечисленные выше метода, включая заражение лабораторных животных, на дают возможность определить видовую принадлежность не только у атипичных мико-' бактерий, но и у слабо вирулентных миксбактерий туберкулеза. Для точной идентификации выделенных, культур, микобактерий необходимо использовать биохимические тесты. Только комплексные исследования позволяют правильно дифференццировать выделенные культуры микобактерий.

Анализ проведенных исследований по изучении биологичес-. ких свойств выделенных культур микобактерий от крупного рогатого скота, реагировавшего на туберкулин, показал, что такие животные заражены не только мккобактеркями туберкулеза бычьего вида, но и микобактериями туберкулеза птичьего вида, атипичными. ' ■

В областях с широким распространением туберкулеза в основном выделяют микобактерии бычьего вида. Так, из исследованных проб материала Северо-Казахстанской области микобактерии туберкулеза бычьего вида составляют 85,1; 1.0% - атипичные микобактерии и % - микобактерии туберкулеза птичьего вида.

Из исследованного материала от животных Кустанайской области микобактерии туберкулеза бычьего вида составляют 1Ь% и по 12.5$ микобактерии туберкулеза птичьего вида и атипичные.

Из материала Кокчетавской области 60^ составили микобактерии туберкулеза бычьего вида.

Аналогичная картина по процентному выделению микобактерий туберкулеза бычьего вида отмечена при исследовании материалов из Актюбинской, Кзкл-Ординской и Джезказганской областей, относящихся также к зоне о широким распространением туберкулеза.

Анализ результатов исследований также показал, что из материала отреагировавших на туберкулин животных без видижх

изменений при вскрытии, выделены культуры микобактерий туберкулеза бычьего вида в 15 случаях из 81 (18.5$). При этом проведенные биологические пробы на лабораторных животных, зараженных эмульсией из патологического материала, были отрицательными, и только изучение выделенных культур с биохимическими исследованиями дало возможность правильной постановки диагноза. В то же время из патологического материала с изменениями в органах в виде гиперемии и гиперплазии в лимфатических узлах, выделены культуры микобактерий туберкулеза птичьего вида и атипичные микобактерии..

Если исходить из общего числа идентифицированных культур ■ 57 составили микобактерии туберкулеза бычьего вида, 9 - птичьего и 18 - атипичных.

Из числа выделенных культур атипичных микобактерий на дола Алма-Атинской и Тургайской областей приходится - 38.8 и 27.7$ соответственно; Северо-Казахстанской и.Кокчетавской -11.1%; Восточно-Казахстанской и Кустанайской - 5.5%.

Полученные результаты изучения выделенных культур позволяют сделать заключение о том, что в эпизоотологии туберкулеза крупного рогатого скота в различных зонах Казахстана, основную роль играют микобактерии туберкулеза бычьего вида (67.8%). Сенсибилизация крупного рогатого скота микобакте-риями туберкулеза птичьего зида и атипичными наблюдается довольно часто в зоне с ограниченным распространением туберкулеза, как Алма-Атинской, Восточно-Казахстанской.

При этом установлены следующие вида атипичных микобактерий: M.phlei, М.smegmatis, M.fortuitum, Ii. terrae ,' комплекс U.nonehroaogenicura-tаrrao-triviale , f.'. aviura-intracellulare. Довольно редко выделяли - M.scrofulaceura, M.gordonae. И ни в одном случае при бактериологическом исследовании как патологического материала, так и проб из объектов внешней среды, не было выделено культур атипичных микобактерий I группы по Раньону ( M.kanaasii).

В Алма-Атинской области, где эпизоотическая ситуация по туберкулезу на период проведения исследований была благополучной, выделенные культуры микобактерий отнесены к видам: М.nonchromogenicupj-terrae-triviale, М. terrae, M.amegraatis, U.scrofulaoeum, M.gordonae, M.fortuitum, M.avium-intracel-lulare, M.phlei.

3 Талдн-Курганской области - M.öcrofulaeeum, M.gordonae, M.nonchromogenicuiu-terruo-triviale (complex), M.castri, M.f ortuiturn, M.araogmatla , M.phlei, M.terrae.

В Восточно-Казахстанской области - м.avium-intracellu-lare, M.gaatri, M.fortuitum, M.phlei.

В Кокчетавской области наиболее часто встречаются ми-кобактерии туберкулеза птичьего вида, а также - M.avium-in-tracellulara, ll.nonchrcmogenicum-terrae-triviale , ll.gastri, M.fortuitum, M.fimegmatia, M.phlei.

В северных областях республики, где эпизоотическая обстановка по туберкулезу остается напряженной, из патологического материала от крупного рогатого скота, а также из фекалий, проб из объектов внешней среды выделены микобак-терии туберкулеза бычьего вида в большинстве случаев. Атипичные иикобактерии выделены в 7 случаях.

Широкое распространение микобактерий в природе (вода,, почва) обусловливает их попадание в организм животного и значительный удельный вес этих микроорганизмов среди культур. выделяемых из патологического, материала от крупного рогатого скота, реагировавших при аллергических исследованиях на туберкулин. Столь частое выделение нетуберкулеэных микобактерий от крупного рогатого скота в благополучных хозяйствах несоглненно является существенным обстоятельством, говорящим в пользу саирофической природы многих атипичных микобактерий.

На основании сравнения видового спектра микобактерий, выделенных от крупного рогатого скота и объектов среды обитания их, можно заключить, что атипичные иикобактерии относятся к убиквитарным видам микроорганизмов, распространенные повсеместно в различных условиях, тогда как у микобактерий туберкулеза естественной средой обитания, развития и размножения может быть организм животного и человека, а объекты окружающей среды служат лишь факторами передачи.

Наши исследования совпадают с результата™ О.В.Мартма и • К.К.Тяхнас (1978) и Ю.Я.Кассич с соавт.(1986).

Передача возбудителя туберкулеза осуществляется путем выделения патогенного начала из организма больного животного во внешнюю среду, пребывания его в ней, затем внедрения в организм здорового животного (И.А.Бакулов с ооявт.,1979).

Длительное сохранение возбудителя во внешней среде создает угрозу заражения и распространения инфекции. При этом роль навоза и открытых водоемов в распространения туберкулеза значительна.

Многими исследователями показана высокая эффективность обеззараживания контаминированного навоза биотермическим методом (В.С.Ярных с соавт.,1966; И.Д.Гришаев, 1970; Н.П.Лю-йаков, T97I; А.А.Самололов, 1Э72), однако авторы проводили исследования в европейской части и западной Сибири. В большинстве неблагополучных по туберкулезу хозяйств Казахстана буртование навоза осуществляется бульдозерами с нарушением требований бнотермии. При такой технологии утилизации навоза не изучены интенсивность проходящих в последнем биотермических процессов, выживаемость шкобактерий с учетом природ-но-экономических условий различных зон республики. Исходя из этого провели изучение выживаемости шкобактерий туберкулеза бычьего вида в навозе и непроточных водоемах в неблагополучном совхозе "Донской" Глубоковского района Восточно-Казахстанской области. Опыт был заложен 22.04.82 г. Второй опыт - 4.02.1983 г.

В результате проведенных опытов установлено, что биотер-шческио процессы в штабеле уложенной в летне-осенний период в условиях Восточного Казахстана протекали со средней максимальной температурой до 5>°С, что не обеспечивает обеззараживания навоза, зараженного микобактериями туберкулеза бычьего вида.

Бактериологическими исследованиями из штабеля навоза выделено 69 культур, в том числе 45 безпкгментшх, 12 культур из водоема. Наряду с исходными культурами шкобактерий туберкулеза бычьего вида нами выделены 12 пигментированных культур атипичных шкобактерий. Изучение культурально-морфэ-логических и биохимических свойств о постановкой биологической пробы на лабораторных животных позволило идентифицировать их до вида. Так, выделенно 45 культур шкобактерий туберкулеза бычьего вида и 12 культур атипичных шкобактерий. Среди последних отмечены M.nacgmatiB, II.avium-intracellulars, M.gaatri, M.phlei, M.gordcnae. Биотермичэские процессы, прохрдшкаие в бурте навоза, не оказали дезинфицирующего действия на последних, о чем говорит параллельное выделение их

с микобактериями туберкулеза бычьего вида дайэ в последней пробе через 20 месяцев.

Результата второго опыта показали, что до установления плюсовой температуры воздуха навоз в штабеле находился в замерзшем виде до наступления теплой погода. О повышением температуры окружающей среды через 5.6 месяцев после закладки опыта, налоз разогревался до 43°С. D этот момент среднемесячная температура была 21°, почвы - 27°С вйше нуля. Это было максимальным повышением температуры за весь период исследований. Следовательно, в штабеле, складированном из замерзшего навоза, при минусовых температурах воздуха ускоренные и усиленные биологические процессы не развивались в течение 15.5 месяцев (срок наблюдения). А исследования теот-объектоэ, извлеченных из бурта з разные сроки, показали, что при такой низкой температуре в штабеле навоза микобактерии туберкулеза бычьего вида оставались жизнеспособными в течение срока наблюдения и вирулентными дня лабораторных животных.-

Всего исследовано 139 тест-объектов, в том числе 53 - за-лсженше в бурты навоза зимнего периода и 65 - летне-осеннего периода года, и 21 - из водоема. Выделено и изучено IIS культур микобактерий, в том числе 34 из штабеля, складированного в зимний период, 69 - в летне-осенний период и 12 -из водоема. Биологическая проба прозедена на 49 кроликах, 98 морских свинках путем постановки общей пробы исследуемого материала и дифференциации 10 культур микобактерий.

Результаты проведенных сравнительных исследований по изучению выживаемости микобактерий туберкулеза в навозе при длительных сроках выдерживания показали, что предпосевная обработка таст-объектоз флотационным способом мало приемлема.

Способ обработки тест-объектов методом седиментации в сравнении с флотационным оказался более чувствительным и более результативным. При центрифугировании и седиментации происходит более эффективное концентрирование и высвобождение микобактерий, чем при флотации, чго повышает их высеваемо сть .

Наши результаты исследований подтверждены работой, проведенной А.С.Донченко (1989), который показал, что высезаемость

микобактерий туберкулеза из патологического материала от животных на питательных средах, обработанного способом седиментации в 3.7-3.9 раз выше, чем метод Гона и Ллпкаевой, и в 7.5 раза была меньше загрязненность посевов.

Необходимо отметить, что посев на две различные среды ■увеличивает процент высеваемостк культур микобактерий. Так, культуры микобактерий из проб И и 8 были выделены в 3-4 пробирках на среде Гольберга, тогда как на яичной среде Ле-венштейна-Иенсена ни в одной пробирке роста микобактерий не получили независимо от концентрации едкого натра. В то же время, из пробы & 5 культура микобактерий туберкулеза м.bovis была выделена в I и 2 пробирках на среде Левенштейна-Иенсена, тогда как на Гельберга не выделены культуры. При этом питательные личные среды готовили перед постановкой опыта параллельно в- одгш' день и сказать, что могло повлиять качество яиц и других- компонентов среда - исключено. По куль-турально-морфологическим, биохимическим свойствам, а также по результатам- биологической пробы выделенные культуры идентифицирована как- n.bovia (.проба № I, пробы 3,5,8,10), li.ainsgmaiis (2, 6), u.ghlei, (3>«, 4, 6). Результаты сравнительной оценки исследуемух концентраций на высеваемость микобактерий более подробно калечены в диссертации.

Эффективна предпосевная: обработка проб усовершенствованным методом седиментации,.

Проведенные исследования показали, что увеличение процентного содержания щелочи в растворе при предварительной обработке с объектов внешней среды влияние па пысзваемость микобактерий не оказывает. На обработку одной пробы тратится на 25-30 ыинуг ыеньае, при этом соблюдается техника безопасности оператора. На данное совершенствование метода седиментации оформлено рационализаторское предложение, на которое получено свидетельство й 4Э от 18 декабря 1934 г.

Из приведенных данных видно, что проблема правильной оценки культур, выделенных от животных,является важной для ветеринарной практики и е целом для животноводства. Они далзт ос- . нование считать, что при первичной диагностике и оздоровлении хозяйств от туберкулеза крупного рогатого скота, необходимо учитывать возможность сенсибилизации организма жиьотныу Другнмл видами микобактерий.

Pius в 1968 году зсИНезоег сказал: "... значение заражения свободного от туберкулеза крупного рогатого скота другими видами mycobaot не следует ни■недооценивать, ни переоценивать. Выводы о проявлении сапро&пческой природа реакций ш осмелимся сделать только спустя Н-ое время, когда откроем полностью эволюцию возбудителя туберкулеза. Движущей силой эволюционного процесса является взаимодействие наслед-ствешюсти, изменчивости д естественного отбора":

Современная ептуал?« еткобактерин требует повышения, бдительности к этиологическим агентам туберкулеза, для чего необходимо проведение регулярных исследований, выявление выделителей инфекции и определение вида возбудителей.

3.2. L - трансформация М.bovis, in. vitro и in vivo Биологические свойства L-форм M.bovis

Изучение L-трансформации мккобактерий. туберкулеза бычьего вида и образующихся при этом морфологических реакций показало, что данный процесс является закономерным явлением, возникающим in vitro и in vivo, под действием самих разнообразных фактороз. Применение в экспериментах длгидрострептомицина, пенициллина позволило, определить считающиеся универсальным! L-трансформирующими агентами у большинства грам-полонительннх и грамотрицателыдах бактерий вполне пригодными для получения L-форм t.i. bovis,

L -трансформация может активно происходить под влиянием противотуберкулезного препарата - изощшид Стубазид) - широко применяемого в ветеринарной практике с профилактической целью.

Индукция L-форм М.bovis может осуществляться под влиянием антибиотика широкого спектра действия, противотуберкулезного препарата Г1 ряда - -циклосерии, химических веществ, как хлоргекейдинглкконат натрия и лизоцика - фермента, постоянно присутствующего в организме животного и играющего определенную роль в процессах иммунитета.

Изучение динамики последовательных морфологических реакций гжкобактерий туберкулеза бычьего вида в процессе начального этапа I.-трансформации под влиянием дигкдрострептомици-

на (iTC), пенициллина, иэониазида, лизоцима позволило установить принципиальное их сходство. Оно заключалось в'появле-нии несбалансированного роста микобактерий.в результате которого возникали различные варианты (формы) незавершенного деления'клетки.

Последующие этапы морфологических преобразований мико-бактерий туберкулеза бычьего вида в процессе L-трансформации отличались друг от друга и определялись характером •и механизмом воздействия прегарагов.

Завершающий этап процесса L- трансформации характеризовался формированием ь-колоний, морфологически состоящих из шаровидных образований различных размеров и оптической плотности( бнл тождествен для всех взятых в экспе-

рименты npetiapatcB >

Анализ морфологических реакций, развивающихся у микобак-терий туберкулеза бычьего вида при длительном пассировании с дагидрострептомицином (ДГС) и серикшх фотоснимков, сделанных при э?ом, позволил'установить, что стадия йесбалан сированного роста характеризуется образованием в виде гигантских структур самых разнообразных форм и размеров,суб--ыикроскопических зерен (гранул), некиолотоустойчивых палочек. Далее, в последующих пассадах наступает дезинтеграция их на зернистые скопления, различные по величине к форме, служивших основной структурой для формирования ъ- колоний.

Вместе с ten, необходимо отметить, что динамика морфа логических реакций в процессе L- трансформации микобакта-рий туберкулзза бычьего вида под действием ДГС волнообразная, на последовательная, об этом свидетельствует появление начальных форм незавершенного деления в процессе XI и ХП пассирования, однако, . роста исходных бактери-

альных форм на твердой яичной питательной среде не установили.

Изучение динамики последоватеиьшх морфологических реакций под влиянием ДГС у микобактерий туберкулеза бычьего вида в процессе 1>-трансформации эталонных штаммов в сравнении с Епизоотической культурой этого же вида, свежошлелен-ного из организма крупного рогатого скота показало принципи-

альпоа сходство реакций морфогенеза L-форм.

Проведенные исследования показа.™. что цикл L-трансформации М. bovin под влиянием пенициллина, так же Kaie и ДГС, довольно дчннннй. Сн проходил так же, как при ДГС, через стадию несбалансированного роста. В последующем наблюдались формирования сфзропластоподобинх образований и сбетопрелом-ляющчх тел.

Промежуточная стадия морфогенеза L-трансформации характеризовалась при дальнейшем воздействии изониазэда фрогмен-тацией и частичным распадом форм несбалансированного роста на массы аморфной зернистости, из которой затем формировались элементы х-колоний И. bovis. Вначале в виде неправильной форш скопления зернистости, далее образование шаровидных тел различной величины и оптической плотности, состоящих из мелко-гранулярной или аморфной зернистости.

ь-трансформация М. bovis под воздействием фермента ли-зоцим после начальной стадии характеризовалась фрагментацией и распадом увеличенных и разбухших бактерий, в результате которых зернистое содержимое выходило за пределы клетки. Наступало скопление зернистой массы разной гомогенности. В дальнейшем формировались сфероплаотоподобные образования и светопреломляющие тела различной величины и форш. Затем наступал завертакций отап 1-трансформации.

Морфологические реакции при воздействии хлоргексидаяглю-конат натрия, аналогично изониазиду и пенициллину, проходили через стадно сферопластосбразования. Укаэашшй препарат при воздействии на микобактерии туберкулеза в 1-2% растворе вызывает 100$ образование сфзропластов. Это послужило основанием разработки питательней среда для йндукции сфероплас-тов, на что получено авторское свидетельство.

Проведенные исследования in vivo показали, что кзониа-зид в профилактической дозе для крупного рогатого скота вызывает L-трансформацию ютсобахтерий бычьего вида.

В организме белых мышей 1-трансформация начинается ужа через I час после введения "в брзетгую полость микобактерпЯ туберкулеза бычьего вида и воздействии изонлазида.

У морских евинск первые исследования, проведенные через 15 дней после заражения, показали начальную стадию L-транс-

формации. При этом морфологические реакции не отличались от реакций, наблюдаемых нами in vitro под действием данного препарата. Начальная стадия также характеризовалась формированием форм несбалансированного роста различных размеров. Микобак^ории увеличивались в размерах, постепенно приобретали различную форму раздутых структур. Длина таких кдзток колебалась от 10 до 60 f.ta. а ширина - от 2 до 40 Шц в центральной части в поперечном разрезе размеры достигали 10-25 Km.

Формирование L-колоний наступало через 30 дней после заражения и начала дачи препарата. И продолжало нарастать в течение 45-60 дней (I группа, где дача препарата продолжалась 2 месяца) и 45-90 дней (П группа - 3 месяца).

Б организме у телят под действием профилактической дозы иэониазида также происходит L-трансформация М.bovis. Наличие вариантов несбалансированной роста, зернистости, сферо-пластоподобных образований, а также завершенных мелких и больших шаров - Ь-колоний отмечено у животных, убитых сразу после прекращения двухмесячной дачи иэониазида.

Условно стабильные L-формы, полученные путем длительного паосана вирулентных культур микобактерий туберкулеза бычьего вида на питательной среде с L -трансформирующим агентом ДГС при заражении лабораторных животных не вызывали характерных туберкулезных изменений с образованием бугорков инкапсуляцией и обызвествлением их, как исходные культуры. При этом они вызывали выраженные клеточные изменения, характеризующиеся пролиферацией полиморфно-ядерных лейкоцитов, гистиоцитов и фибробластов в легочной ткани. Среди клеток песпецифического пролиферата тлеются единичные эпителиоидные клетки; лимфо-идше реакции вокруг крупных сосудов и крупно-клеточной ги-перплязией иеждольковой соединительной ткани печени. Данные клеточной реакции, отмеченные в печени, легких, как у кролика, так и у морских свинок носили продуктивный характер.

1- формы сохраняли способность переживать и размножаться, о чем свидетельствуют выделеннае культуры на синтетической среде при бактериологических исследованиях патологического материала от этих животных.

У морских свинок, зараженных L-формами, развивается сенсибилизация к туберкулину через 30 дней и сохраняется на

протяжении их персиотонцнк. Интенсивность реакций эначите-лыю слабее, нем зарпженних исходной бактериальной культурой.

При электронной микроскопии установлены разнообразные морфологические реакции у микобактерий туберкулеза бычьего вида на различных последовательных этапах L- трансформации. Отмечен полиморфизм микроструктур, составляющих L-колонии в виде гигантских тел и субмикроскопических ультрамелких форм без клеточной оболочки, окруженные мембраной, состоящие из цепочек гранул, а также простых элементов -шаровидных тел, покрытых тонкими нитями. В процессе образования L - форм утрачиваются помимо клеточной стенки и мезо-сомы. Отсутствие последних не препятствует, однако, делению и образовании новых жизнеспособных клеток.

Существенные изменения, претерпеваемые микобактериями в ходе индукции i-форм отражаются и на процессе размножения. Размножение ь -форм происходит по принципу поперечного деления бактериальной клетки, вакуолизацией больших тел с образованием ультрамелких включений и почкованием.

Таким образом, полученные данные показали, что L - формы возбудителя туберкулеза бычьего вида способны вызывать заражение отеотных, создавать сенсибилизацию организма к туберкулину и вызывать некоторые морфологические изменения в органах .

Одним из основных биологических свойств L - форм микобактерий туберкулеза бычьего вида является способность их к реверсии в исходный бактериальный вид.

При изучении в динамике реверсии- L-форм возбудителя туберкулеза крупного рогатого скота in vitro и m vivo было установлено, что процесс характеризовался последовательной сиеной морфологических изменений, аналогично процессу L-трансформации в обратном порядке.

Патологоанатомические изменения, наблюдаемые при реверсии, характеризовались нарастанием индекса пораяенностп органов у животных. Так, через 30 дней после прекращения дачи изониазида животным индекс поражениести составил 3.3, а через 45 - 4.6, 60 дней - 13.0, а через 120 - 21.0, то есть инфекционный туберкулезный процесс получал активное развитие.

Результата бактериологических исследований патологического материала от телят, убитых в разные сроки поело начала опыта с мзониазидом показали, что L- форш микобактерий туберкулеза бычьего вида в организме диссемикируют во всех органах, как и при заражении исходной бактериальной культурой.

3.8. Методы выделения и идентификация L - форм Ы.bovie

Проведенная серия культуральных исследований патологического материала от лабораторных киеотных и телят показала, что бактериологические исследования, включающие бактериоскопию окрашенных по Цилю-Нильсену мазков-отпечатков, предпосевную обработку 5-6-ым раствором серной кислоты с последующим центрифугированием и промыванием физиологическим раствором, серию посевов на елективнне питательные среда, микроскопию в световом и фазовом контрасте выделенных культур микобактерий позволяют обнаружить и выделить Ь-форш микобактерий.

Идентификация L-форм микобактерий может быть проведена путем многократных пересевов на питательные среды без индуцирующего агента, пассажа через организм лабораторных животных и куриные эмбрионы.

Так, прозеденные исследования патологического материала от крупного рогатого окота из оздоровленных и оздоравливае-мых хозяйств от туберкулеза с применением изониазида пока-8али возможность путем вышеуказанных бактериологических исследований выделение L-вариантов в 22-х случаях из 50-ти исследованных проб.

При отсутствии роста культур микобактерий на яичных средах (кроме одной пробы) на элективной питательной среда И.Р.Дорожковой (ДИР) выделены измененные L-варианты микобактерий туберкулеза бычьего вида.

Полученные результаты бактериологических исследований в указанном случае показали причину рецидива и задержку оздоровления в хозяйствах за счет персистенции возбудителя туберкулеза в измененном L-варианте. Это свидетельствует о том, что профилактика изояиазидом в эпизоотическом очаге не

может обеспечить оздоровление хозяйств о-.1 туберкулеза.

В организма уже зараженных животных возбудитель под действием профилактических доз иэониагида трансформируется в ь- форму. Прекращение дачи нрепяряга па том или другом этапе приводит к активизации инфекционного процесса и заболеванию животных эа счет реверсии возбудителя туберкулеза.

Указанные исследования на носительство Ь-форм у крупного рогатого скота полностью подтверждают результаты экспериментов, описанных шке.

вывода

1. В экспериментах на лабораторных животных и крупном рогатом скоте, зараженных заведомо известной культурой патогенного штамма м.ъоу1з под воздействием профилактической дозы изониаэида,доказана Ь-трансформация возбудителя и при прекращении дачл препарата реверсия их в исхода?» бактериальную форму.

2. В производственных условиях в оздоровленных и оздо-равлдваемых хозяйствах у крупного рогатого скота, ранее подвергавшегося химиопрофялактике изониазвдом, установлены рецидивы инфекции с выделением возбудителя туберкулеза и бактериальной и ь- фермах.

3. (,Морфогенез ь - форм микобактерий бычьего вида под воздействием дигидрострептомяцина и пзонназида проходит через стадию несбалансированного роста, а под действием пенициллина и лпзоцима - через сфероплаотообразование я светопреломляющих тел.

4. Методом электронной микроскопии установлен полиморфизм микроструктур Ь-колонии, состоящих и^ гигантских парообразных или эллипсоидных тел и субмикроскопических, удь-трамелких форм без клеточной стенки, мезосош, окруженных тонкой мембраной.

Процесс размножения измененных вариантов происходит по принципу поперечного деления бактериальной клетки, ззкуолн-зацией больших тел с образовании ультрагелких ьклэченпй,

в. также почкованием.

5. Разработанная питательная среда с 1-2*-ним раствором хлоргексидин глюконата натрия позволяет поучить сфероплас-ты из исходной бактериальной форм M.bovio за 3-4 часа с выходом 95-98%.

6. Воздействие 5-{$-ного раствора серной кислоты в предпосевной обработке материала от животных не оказывает влияния на высеваемость Ъ-форм микобактерий.

7. Диссеминация возбудителя туберкулеза бычьего вида в L- форме в организме животных, прошедших курс хишопрофилак-глки, наблюдается во всех органах.

8. У реагировавших на туберкулин крупного рогатого скота без видимых патологоанатомических изменений при вскрытии выделены в 97.5% случаев L-фюрмы микобактерий туберкулеза бычьего вида.

9. Одной из форм латентного микробизма являются ь-форш микобактерий туберкулеза бычьего вида в организме крупного рогатого скота.

10. Дигидрострептомицин, лизоцим, изониазид, хлоргекси-динглюконаЛюгут быть L - трансформирующим агентом для получения l-форм ИЗ H.bovio In vitro.

11. Аллергическая диагностическая проба на туберкулин может быть обусловлена атипичными микобактериями. В различных природно-экономических зонах Казахстана виделени атипичные мизсобактерии П, Ш и 1У групп по Раньону из патологического материала от иссдедоэашшх животных и проб из объектов внешней среды в 75.7$ случаев.

Из материала от животных и из объектов внешней среды в условиях одного хозяйства выделяют одни и те же вида микобактернй, в зависимости от эпизоотической ситуации по туберкулезу. В зонах с высокой заболеваемостью уровень внсопае-мости атипичных иикобактерий составлчет 17.5$ случаев. В оздоравливаемых и благополучных хозяйства уровень высевае-цооти атипичных микобактерий составил С2.Wo.

12. Еодыш1с*во культур ьакобактерпй туберкулеза бычьего вида (£G£) чувствительны к пштивогубер1;улезным препара-

там, б то время как атипичные микобактерии (85%) резистентны ко всем препаратам I и П ряда.

13. Предложенная схема дифференциации микобактерий легко выполнима, удобна и доступна для производственных лабораторий.

14. Стационарность эпизоотических очагов по туберкулезу крупного рогатого скота в значительной степени поддерживается длительным сохранением возбудителя во внешней среде. При применявшемся методе биотермического обеззараживания навоза в условиях Восточного Казахстана возбудитель туберкулеза бычьего вида выживает к сохраняет свои патогенные свойства

в течение 20 месяцев.

15. Разработанный модифицированный метод седиментации о целью выделения культур микобактерий из тест-объектов при • длительных сроках выдерживания в буртах навоза позволяет получить результаты, сокращает затрату времени на обработку пробы в 1.5-2 раза, ©дотационный метод в данном случае не эффективен.

ПРОШЕНИЯ Д1Я ПРАКТИКИ

1. Рекомендации "Выделение Ь-форм микобактерий туберкулеза кз патологического материала от животных. З^тверяде-ны отделением ВЛСШШ Нечерноземной зоны РСФСР от 17.01.

1989 г. и НТС Госагропрома Нечерноземной зоны РСФСР от 23.04.1990 г'., протокол № 4.

2. Рекомендации "Постановка .диагноза на туберкулез в ранее благополучной ферме крупного рогатого скота". Утверждены НТС Госагропрома Нечерноземной зоны РСФСР от 23.04.

1990 г., протокол № 4.

3. Рекомендации "План основных профилактических и оздоровительных мероприятий по туберкулезу крупного рогатого скота в совхозе (колхозе), районе, области". Утверждены НТС Госагропрома Нечерноземной зоны РСФСР от 23.04.1990 г., протокол $ 4.

4. Авторское свидетельство на изобретение "Питательная среда для получения сферопластов ыакобакхерий". Гос.комитет по делам изобретений и открытий при СМ СССР, № 1620481 от 03.02,1939 г.

5. "Наставление по диагностике туберкулеза животных". Утверждено 17В Госагропрома СССР от 25.02.1986 г.

6. Внесены дополнения в проект нового "Наставления по диагностике туберкулеза животных". Переданы на утверждение

• в Ш Госагропрома СССР, 1990 г.

7. "Научно обоснованная программа по оздоровлению -животноводческих хозяйств Казахстана от туберкулеза крупного рогатого скота". Включены в перспективный комплексный план борьбы с туберкулезом и бруцеллезом в республике на 19821987 гг. и утверждены Минсельхозом К^ССР и протокольно одобрены СМ КазССР за № 1/24 от 23.-y4.I982 г.

б. Рекомендации "Обеззараживание навоза в неблагополучных по туберкулезу хозяйствах Казахской ССР". Утверждены НТО Госагропрома Казахской ССР от 25.01.1989 г., протокол й 5.

9; Усовершенствованный метод седиментации для предпосевной обработки проб ив объектов внешней среды. Рационализаторское предложение аа # 49 от 18.12.1984 г.

10. Способ, предпосевной обработки материала от животных при бактериальных исследованиях. Рационализаторское лреддожение за № 51 от 25.03.85 г.

СПИССК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ, ОТРАЖАЮЩИХ ОСНОВНОЙ СОДЕШПИЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Керимжанова Б,Ф. Некоторые биохимические свойства атипичных микобакторий, выделенных от крупного рогатого скота в Казахстане // Сб.науч.тр. КазНИВИ / Алма-Ата. -1980. - Т.П.. - С.85-88.

2. Керямжанова Б.Ф. Характеристика микобактерий, виде-

ленных от крупного рогатого скота в Казахстана // Тез. докл.Всзсоюз. конф. RVCXHM. - Омск. - IS80. - G.57-53.

3. Керимжанова Б.Ф., Макаревич Н.М. Лекарственная чувствительность мшсобактерий, выделенных от крупного рогатого скота и свиней в Казахстане // Сб.науч.тр. КозШВИ. -Т.ХХП / Алма-Ата. - 1981. - С.22-29,

4. Керимжанова Б.О., Таубаев O.A. Идентификация культур мшсобактерий, выделенных от животных и из объектов внрошей среды // Вестник с.-х. науки Казахстана / Алма-Лта. - 1982. - № 8. - С.64-67.

5. Керимжанова Б.Ф., Шейко Г.Т. Влияние дпгадростреп-томицина на образование х-форм мшсобактерий туберкулеза бычьего вида in vitro // Вестник о.-х. науки Казахотана/ Алма-Ата. - 1983. - J5 9. - С.72-78.

6. Таубаев С.А., Керимжанова Б.О. Туберкулиновые реакции у крупного рогатого скота, инфицированного мипобакте- • рияки туберкулеза птичьего вида и атипичными // Сб.науч. тр. КазНИВИ / Ал1.1а-Ата.- 1985. - С.58-64.

7. Керимжанова Б.О., Таубаев O.A., Нагуманов Б.М. Выживаемость микобактернй в навозе и непроточных водоемах в условиях Восточного Казахстана // Вестник с.-х. науки Казахстана / Алма-Ата.- 1986. - Л 3.- С.73-76.

8. Керимжанова Б.Ф. Антимикробные препараты как факторы индукции L -форм шкобактерий туберкулеза бычьего вида

// Тр.КазНИВИ / Алма-Ата. - 1986.-. C.I27-IÖI, t

9. Макаревич Н.М., Рудой Н.М., Ильина Т.Б., Керимжанова Б.Ф. и др. Распространение нстуберкулезных мшсобактерий в отдельных регионах Советского Совза и роль их в заболеваемости человека // Сб.науч.тр. КиргизНИИТ / Фрунзе» -1985. - С.73-79.

10. Тургенбаев К., Керимжанова Б.Ф. Предпосевная обработка навоза прч изучении выживаемости в нем микобактерий туберкулеза бычьего вида // Тр. КазНЙВИ / Алма-Ата. -1986.-С. 40-45.

11. Керимжанова Б.Ф. Морфогенез L- трансформации мико-

бактерий туберкулеза бычьего вида под влиянием мзониаэида in vivo у морских свинок // Вестник с.-х. науки Казахстана / Алма-Ата. - 1987. - JI 9. - С.86-87.

12. Дорожкова И.Р., Федосеев B.C., Керимжаноаа Б.Ф., Айтжанов Б.Д. О персиотонции L-форм микобактерий в организме инфицированных животных // Тезисы докл. Ш республ. науч.-произв. конф, / Минск. - IÖ07. - С.84.

13. Керимжанова Б.Ф., Бнмскова З.С L-трансформация микобактерий туберкулеза бычьего вида под действием изо-циазида в профилактической дозе в организме морских свинок // Сб.науч.тр.ЛШ / Л.- 1989. - C.77-8I.

14. Керииканова В.Ф, Продпооавная обработка материала от животных с целью выделения Ь-форы микобактерий // Тан же.. - С.71-73.

16. Керкмжанова В.Ф., Данко Ю.Ю., Киндрао Т.М., Дескова В.А. Результаты бактериологических исследований Проб патологического материала от реагирующего на туберкулин крупного рогатого скота и объектов внешней среды // Tau же. - 0.74-77.

16. Керямжанова Б.Ф,- Совершенствование бактериологического метода диагностики на туберкулез животных // Сб. науч.тр. ЛВИ / Д.- 1990. - С. 46-50.

17. Дорожкова И.Р., Керимжанова Б.Ф. A.c. Jí I62048I.-1989. - Питательная ореда для получения сферопластов микобактерий.

18. Керишсанова Б.Ф., Урбан В.П. Эпизоотологическое значение i-форм микобактерий туберкулеза бычьего вида // Тезисы Всероссийского совещ. / Л.-Пушкин. - 1990. - С.2-3.

19. Керчмжанова Б.Ф. Значение Ь-форм микобактерий В эпизоотологии туберкулеза крупного рогатого скота // Тезисы докл. науч. конф. ЛВИ / Л.-19Э1. - С.41-42.

20. Керишанова Б.Ф. Индукция х,- форм микобактерий туберкулеза бычьего вида под влиянием лкзоцима // Там ¡и; - С. 42-43.