Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Патоморфологические изменения у животных, зараженных разными видами микобактерий

На правах рукописи

Колоскова Элеонора Леоиидовна

Патоморфологнческие изменения у животных, зараженных разными видами микобактерий

16.00.02 - патология, онкология и морфология животных

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

■2

ООЗОТ1121

Москва - 2007

003071121

Работа выполнена в лаборатории микобактериозов ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им Я Р Коваленко Российской академии сельскохозяйственных наук

Научные руководители:

- доктор ветеринарных наук, профессор, заслуженный

деятель науки Российской Федерации Овдиенко Николай Павлович

- доктор ветеринарных наук Альбертян Мкртич Погосович

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук

Стрельников Алексей Павлович (МГАВМ и Б)

Ведущая организация - ФАО ГОУ ВПО Московский государственный

университет прикладной биотехнологии

Защита состоится « 30» мая 2007 г в 14 00 часов на заседании диссертационного совета Д 006 033.01 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук при ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им Я Р Коваленко по адресу 109428, Москва, Рязанский проспект, 24, корп 1

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИЭВ

Автореферат разослан «^У» апреля 2007г

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат ветеринарных наук Барабанов Иван Иванович (ВИЭВ)

профессор

Н П Овдиенко

1. Общая характеристика работы

1 1 Актуальность темы Задачи, стоящие в области ликвидации туберкулеза человека и животных, зависят от полноты учета всех возможных источников возбудителей туберкулеза и тесно связаны с видами микобактерий, патогенетическая роль которых привлекает все большее внимание медицинских и ветеринарных исследователей (Я А Благодарный, 1980, К А Туркебаева, Я А Благодарный, 1981, Н П Овдиенко с соавт , 1990, Т Ф Оттен, А В Васильев, 2005, и др)

После открытия возбудителя туберкулеза (РКох, 1882) и установления антропозоонозной природы заболевания встал вопрос о взаимоотношении между восприимчивыми видами животных и определенными видами микобактерий

Заражение людей и животных обычно происходит свойственным для них видами возбудителя туберкулеза, но возможна и межвидовая миграция микобактерий (I БщшчЗэоп, 1945, В Се\и1с1ег, 1966, А И Каграманов, 1967, Я А Благодарный, 1972, Д Д Новак, 1977, В Е Щуревский, 1980, и др )

Наряду с совершенствованием мер по ликвидации туберкулеза сельскохозяйственных животных, возрастает роль различных видов нетуберкулезных микобактерий, и вызываемых ими микобактериозов, которые нередко принимают за туберкулезную инфекцию (Б1о11, 1972) Это объясняют тем, что при определенных условиях нетуберкулезные микобактерии могут проявлять патогенные свойства (С Р Ха1аЬагс1ег, 1961, О В Мартма, 1982, ТФ Оттен, А В Васильев, 2005, и др ) Установить этиологическую значимость нетуберкулезных микобактерий чрезвычайно сложно Дискутабельна причастность их к патологическому процессу

Научными исследованиями доказано клинико-анатомическое многообразие проявления туберкулеза и микобактериозов у людей, вызванные разными видами микобактерий (К.ММаскеев, 1972, Е.П Ченских, 1972, К А Туркебаева, Я А Благодарный, 1981, Т.Ф Оттен,

А В Васильев, 2005) В ветеринарии этот вопрос недостаточно изучен, в частности патологическая анатомия и патогенез Разноречивы данные о том, как реагируют животные на микобактерии разных видов, изменяется ли стереотип защитной тканевой реакции при заражении возбудителем несвойственного вида, это порождает противоречивые суждения о патологическом процессе, вызванном различными видами туберкулезных и нетуберкулезных микобактерии, недооценку роли инфицированных животных в эпизоотологии туберкулеза и микобактериозов

СИ Антипова и соавторы (1987) полагают, что проблема эпидемиологической и эпизоотологической значимости микобактериозов может быть решена с учетом вида микобактерии, так как в организме животных биологическая активность микобактерий разных видов неодинакова (МП Зыков, Т.Б Ильина, 1978, ТФ.Отген, А В Васильев , 2005)

Для определения вирулентности нетуберкулезных микобактерий используют лабораторных животных, совершенствуют методы заражения, изменяя реактивность организма животных (О В Мартма, Э И Тюри, 1968, МП Зыков, Т Б Ильина, 1978, ЕАФинкель, Л В Михайлова, 1978,Э И Тюри и соавт, 1986, ТФОттен, А В Васильев, 2005, Н Г Толстенко, 2006, F Kuze, К Lee, 1984, М Palvas et all, 1991, A Saenz et all, 1985 идр)

В ветеринарной практике основным моментом является определение вида возбудителя туберкулеза Для этого применяется биологическая проба с использованием морских свинок, кроликов и кур

Для сокращения срока биопробы совершенствуют методы и дозы заражения, изменяют реактивность организма животных

При оценке результатов биопробы у морских свинок, кроликов и кур иногда обнаруживают узелковые изменения, которые являются основополагающими в определении вида возбудителя туберкулеза Некоторые исследователи склонны объяснять возникновение таких

изменений инфицированностью животных нетуберкулезными (атипичными) микобактериями

В последнее время в качестве экспериментальной модели для изучения патогенеза туберкулеза, а также определения специфичности и активности туберкулина используют коз Если туберкулез крупного рогатого скота изучен довольно полно (Н А Налетов, 1949, П И Кокуричев, 1953; В Е Щуревский с соавт., 1991), то сведения о козах малочисленны и противоречивы

Исходя из вышеизложенного, изучение патологоанатомических и гистологических изменений у морских свинок, кроликов, кур и коз, является актуальной задачей и представляет значительный научный и практический интерес

1 2 Целью исследований являлось сравнительное изучение в динамике патологоанатомических и гистологических изменений у морских свинок, кроликов, кур и коз, зараженных в эксперименте разными видами микобактерий

1 3 Основные задачи исследований

изучить патологоанатомические и патоморфологические изменения у морских свинок экспериментально зараженных подкожно М phlei, М smegmatis, М avium в сравнении с М bovis, М tuberculosis,

изучить патологоанатомические и гистологические изменения в динамике у морских свинок, зараженных разными методами М kansasn, М fortuitum, М xenopi в сравнительном аспекте с зараженными М bovis,

изучить патоморфологические изменения у кроликов, зараженных M.phlei и М smegmatis в сравнении с зараженными М bovis, М tuberculosis и М avium,

изучить патоморфологических изменений у кур, зараженных Mphlei, М smegmatis и М tuberculosis в сравнении с зараженными М avium,

определить характер и локализацию патологоанатомических и патоморфологических изменений у коз, экспериментально зараженных М bovis, М tuberculosis, М avium

1 4 Научная новизна Показаны в динамике патоморфологические изменения у морских свинок, экспериментально зараженных разными методами М kansasu, M.fortuitum, М xenopi, М phlei, М smegmatis и М avium в сравнении с изменениями при заражении М bovis и М tuberculosis Установлено, что отмеченные изменения, вызванные нетуберкулезными микобактериями, характерны для хронически текущих воспалений, в том числе и туберкулеза Однако отсутствие обострения процесса и последующая склонность к редукции отличают их от патологии, наблюдаемой у морских свинок при заражении М bovis и М tuberculosis

У кур, зараженных микобактериями М phlei, М smegmatis и М tuberculosis, на ранних стадиях развиваются единичные изменения, гистологически сходные с туберкулезными, которые не склонны к прогрессированию и с увеличением сроков содержания животных, в отличие от патологии, вызванной M.avium, подвергаются редукции У единичных кур, зараженных М smegmatis и М phlei в поздние сроки патоморфологические изменения имеют значительное сходство с туберкулезной патологией, однако подобные гранулематозные поражения могут быть полиэтиологичны, либо обусловлены другим возбудителем

Показано, что у кроликов, зараженных М smegmatis и М phlei, на 21 день возникает клеточная реакция в органах, склонная к редукции в течение 3 месяцев, в отличие от туберкулезной патологии, вызванной М bovis, М tuberculosis, М avium

Охарактеризованы патологоанатомические и гистологические изменения у коз, экспериментально зараженных М bovis, М tuberculosis, М avium Показана чувствительность коз ко всем вышеперечисленным

микобактериям и отмечены различия в степени выраженности патологического процесса

1 5 Практическая значимость Результаты исследований включены в «Методические рекомендации по диагностике микобактериальных инфекций у животных», утвержденные директором ВИЭВ, академиком Россельхозакадемии М И Гулюкиным 22 марта 2007 г 1 6 Личный вклад соискателя заключается в организации и проведении опытов на морских свинках, кроликах и курах, послеубойной оценке патанатомических изменений, экспериментально зараженных лабораторных животных и коз, а также приготовлении и изучении гистологических препаратов из тканей и органов животных, сравнительном анализе и обобщении результатов исследований 1 7 Апробация работы Материалы работы доложены на Международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения Я Р.Коваленко (М, 200бг), Международной научно-практической конференции «Эпизоотология и профилактика инфекционных болезней крупного рогатого скота» (Киев, 2006г), на заседании ученого совета ВИЭВ (2005, 2006гг) Основные положения, выводы и практические предложения, изложенные в диссертации, обсуждены и одобрены на межлабораторном совещании научных сотрудников ВИЭВ (2007 г)

1 8 Основные положения, выносимые на защиту Полученные экспериментальные данные позволяют вынести на защиту следующие основные положения

- результаты патологоанатомических и гистологических исследований морских свинок, кроликов и кур, зараженных нетуберкулезными микобактериями разными методами в сравнении с изменениями, вызванными возбудителями туберкулеза,

- результаты патологоанатомических и гистологических исследований коз, зараженных М bovis, М tuberculosis, М avium,

- использование в дифференциальной диагностике туберкулеза результатов сравнительного изучения патологоанатомических и гистологических особенностей у разных животных при заражении туберкулезными и нетуберкулезными микобактериями 19 Публикация результатов исследований По материалам диссертационной работы опубликовано семь научных статей. 1 10 Структура и объем диссертации Диссертация изложена на /¿У страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы Работа иллюстрирована 35 фотографиями и ■77 таблицами Список литературы включает источника, в том числе ^^"иностранных авторов

2.Собственные исследования.

2.1. Материалы и методы. Работа выполнена в период с 2002 г. по 2005 г в лаборатории микобактериозов и секторе патоморфологии Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им ЯР Коваленко и на опытной базе острова Лисий Вышневолоцкого отдела ВИЭВ, в рамках Российской научно-технической программы фундаментальных и прикладных исследований по заданию 02 01 01

Патологоанатомическому и гистологическому исследованию подвергнут материал от 368 морских свинок, 32 кроликов, 42 кур и 12 коз Животные находились в комплексных опытах в лаборатории микобактериозов ВИЭВ с целью изучения патогенности нетуберкулезных микобактерий для лабораторных животных и восприимчивости коз в эксперименте к М bovis, М tuberculosis и М avium

В соответствии с задачами исследований, изучали в динамике патологоанатомические и морфологические изменения у морских свинок,

зараженных подкожно разными дозами М phlei, М smegmatis и М avium в сравнении с зараженными М tuberculosis и М bovis 48 морских свинок разделили на 8 групп и заразили подкожно Первую группу - Mphlei, вторую - М smegmatis, третью - М avium, четвертую - М tuberculosis, пятую - М bovis - в дозе 1мг/мл, шестую - М phlei, седьмую - М smegmatis

- в дозе 10 мг/мл, восьмая группа была контрольной

Животных содержали в течение 90 дней в отдельных боксах блока № 3 Вышневолоцкого отдела ВИЭВ Через 15 дней после заражения была проведена туберкулинизация морских свинок согласно узаконенной методики Убивали животных через 21 и 90 дней после заражения, с последующим вскрытием и взятием патологического материала для гистологических, бактериологических и ПЦР исследований

Во втором опыте использовали 320 морских свинок, которых разделили на группы по 80 голов

Животных первой группы (80 голов) подразделили на 4 подгруппы (по 20 голов) Первой подгруппе ввели культуру М kansasn подкожно в дозе 1 мг/мл, второй - внутрибрюшинно в той же дозе и третьей -интратестикулярно в дозе 1 мг в 0,2 мл физиологического раствора, 4 подгруппа была контролем Аналогичными методами и дозами заразили вторую, третью и четвертую подгруппы морских свинок культурами М fortuitum, М xenopi и М bovis соответственно

Через 10, 20, 30 и 60 дней после заражения убивали по 5 морских свинок, с последующим взятием патологического материала для патоморфологических и бактериологических исследований

В третьем опыте использовали 32 кролика, которые были разделены на 8 групп Первая группа была заражена М phlei, вторая -М smegmatis, третья - M.bovis, четвертая - М tuberculosis, пятая - М avium

- все в дозе по 1 мг/мл. В шестой группе животных заражали Mphlei, в седьмой - M.smegmatis - увеличив заражающую дозу до Юмг/мл, восьмая группа служила контролем Аллергическое исследование было проведено

через 15 дней после заражения, согласно существующей методике

Животных убивали через 21 и 90 дней после заражения, с последующим взятием патологического материала для патоморфологических, бактериологических и ПЦР исследований

В четвертом опыте были взяты 42 курицы, которых разделили на 7 групп и заразили внутривенно в дозе по 1 мг/мл. Первую группу -М phlei, вторую - М smegmatis, третью - М tuberculosis, четвертую -М avium, пятая — контроль Аналогичные две группы кур (шестую и седьмую) заразили десятикратной дозой М phlei и М smegmatis соответственно Через 15 дней после заражения кур подвергли аллергическому исследованию по общепринятым методикам

Птицу убивали через 21 и 90 дней после заражения с последующим исследованием патологического материала патоморфологическим, бактериологическим и ПЦР методами

В пятом комплексном опыте, который провели совместно с аспирантом лаборатории микобактериозов В И Строгановым на 12 козах в возрасте 1 года, животных разделили на 4 группы по 3 головы

Первую группу животных (№ 1,2,3) заразили орально вначале взвесью патологического материала павшей от туберкулеза курицы (печень, селезенка) и павшего кролика (печень, селезенка), которые ранее были заражены культурой М avium (шт. К) Затем через 18 дней каждой козе так же орально ввели взвесь культуры М avium (шт. К) в дозе 1 мг на кг живой массы

Вторая группа (№ 4,5,6) была заражена орально М bovis Сначала каждой козе вводили через зонд суспензию печени и селезенки одной морской свинки, павшей от генерализованной формы туберкулеза и суспендированные печень и селезенку одного кролика с аналогичными поражениями Через 18 дней каждую козу так же орально заражали культурой М bovis (шт «С») в дозе 1 мг на 1 кг живой массы.

Третью группу коз (№ 7,8,9) заражали аналогично М tuberculosis Первоначально взвесью материала павшей от туберкулеза морской свинки (селезенка, печень), ранее зараженной культурой М tuberculosis (штамм H37Rv) Через 18 дней каждая коза была заражена повторно орально этой ' же культурой в дозе 1мг на 1 кг живой массы

Четвертая группа животных (№ 10, 16, 17) была контрольной Животных содержали в отдельных боксах в течение 9 месяцев Одна коза пала через 2,5 месяца, остальные животные убиты по окончанию опыта

Животных в процессе опыта через каждые 30 - 60 дней исследовали пальпебральной туберкулиновой пробой, ППД-туберкулин вводили в нижнее веко глаза, отступя от его края 1,5 - 2 см

Для бактериологического исследования патматериал обрабатывали по методу А П Аликаевой, с последующим посевом на среды ФАСТ-ЗЛ и Левенштейна-Иенсена От 210 животных материал обрабатывала кандидат ветеринарных наук Н Г Толстенко, а от 15 животных - самостоятельно Из этого же центрифугата (при обработке материала по Аликаевой) брали пробы для ПНР - исследований, которые были проведены научным сотрудником М С Калмыковой и кандидатом ветеринарных наук Е П Вангели

При проведении гистологических исследований использовали «Методические указания по патогистологнческой технике» (Москва, 2005) Кусочки органов и тканей фиксировали в 10 % растворе формалина Гистологические препараты были изготовлены методом заливки в целлоидин и парафин В ходе гистологических исследований использовали стандартный метод окраски гематоксилин-эозином, а также сложные окраски на соединительную ткань по Ван-Гизону и по Маллори, на выявление микобактерий в срезах по Циль-Нильсену Работа была проведена при консультативной помощи кандидатов ветеринарных наук О В Якушевой и В С Суворова

2.2. Результаты исследований.

2.2.1. Результаты изучения в динамике патологоанатомических и патоморфологических изменений у морских свинок, зараженных подкожно разными дозами M.phlei, M.smegmatis, M.avium в сравнении , с M.tuberculosis и M.bovis.

На 21 день патоморфологические изменения у морских свинок, вызванные М bovis и М tuberculosis, характеризовались образованием язвы на месте введения, дно которой было покрыто казеозными массами, увеличением регионарных лимфатических узлов, с формированием некроза Селезенка и печень увеличены, с множеством серых милиарных узелков В легких серые бугорки на фоне катарально-гнойной пневмонии Трахеобронхиальные лимфоузлы увеличенные, плотные с участками некроза Гистологически в паренхиматозных органах и лимфоузлах отмечали образование множественных гранулем с центральным некрозом и распадом ядер путем кариорексиса

У морских свинок, зараженных М avium в дозе 10 мг/мл, на 21 день на месте введения находили уплотнение подкожной клетчатки, увеличение регионарного лимфатического узла У одной свинки в селезенке гистологически находили единичные скопления из ретикулярного типа клеток, формирующих гранулему, в печени - пролиферацию клеток Купфера, лимфоидных и ретикулоэндотелиальных в виде мелких . скоплений, в легких - утолщение стенок альвеол за счет пролиферации клеток стромы

У морских свинок, зараженных М phlei, М smegmatis в дозе 10 мг/мл, и убитых на 21 день, на месте заражения обнаружен участок уплотнения, регионарный лимфоузел немного увеличен Только гистологически в печени отмечали не резко выраженную пролиферацию гистиоцитов и

лимфоидных клеток по триадам, в селезенке гиперплазию фолликулов В легких стенки альвеол утолщены за счет пролиферации ретикулярного типа клеток, встречались и небольшие очаги лимфоидной инфильтрации К 90 дню патанатомические и гистологические изменения у животных отсутствовали

Все морские свинки, зараженные М bovis, пали в течение месяца от генерализованной формы туберкулеза Свинки, зараженные М tuberculosis, убиты по окончанию опыта с генерализованной формой туберкулеза У животных, зараженных М avium, кроме некроза в месте заражения, иногда обнаруживали увеличение селезенки, в печени и селезенке находили единичные казеозные узелки

Таким образом, морфологически реакция у морских свинок на заражение Mphlei и Msmegmatis к 21 дню проявлялась пролиферацией ретикулоэндотелиалыюй стромы органы, а с удлинением срока содержания практически исчезала Изменения у свинок, зараженных десятикратной дозой М avium, к 21 дню проявлялись в виде уплотнения в месте заражения, увеличения регионарного лимфатического узла и единичных узелков в печени и селезенке, не имеющие тенденции к усугублению патологии, в отличие от патологии, вызванной М tuberculosis и М bovis

2.2.2. Патологоанатомические и патоморфологические изменения в динамике у морских свинок, зараженных M.kansasii, M.fortuitum, M.xenopi подкожным, внутрибргошинным и интратестикулярным методами.

Изменения у животных, зараженных подкожно нетуберкулезными микобактериями, в начальные сроки были идентичны с минимальной разницей в степени выраженности по видам микобактерий - это уплотнение в месте заражения размером с горошину, незначительное

увеличение регионарного лимфатического узла и селезенки, а иногда единичные узелки в печени

При заражении интратестикулярно на ранних сроках отмечали увеличенный и гиперемированный семенник, в который вводили культуру, увеличенный регионарный правый паховый лимфатический узел, иногда единичные узелки в печени

У свинок, зараженных внутрибрюшинно, иногда в брюшной полости содержалось повышенное количество транссудата, а стенка брюшины и сальник очагово уплотнены В печени и селезенке встречались единичные, милиарные очажки. К 60 дню у большинства животных изменений не обнаруживали У отдельных особей обнаруживали в печени или селезенке единичные узелки В то время как у морских свинок, зараженных М bovis, отмечали характерные туберкулезные изменения во всех органах

Высеваемость культур М xenopi и М kansasn на ранних сроках составляла от 70 до 100 %, а с увеличением сроков содержания снижалась до 4 %

Полученные результаты по сравнению в динамике

патоморфологических изменений в органах морских свинок, зараженных нетуберкулезными микобактериями подкожно, интратестикулярно и внутрибрюшинно, выявили однотипность морфологической реакции В месте введения культур, регионарных им лимфатических узлах и органах отмечены выраженные в разной степени альтеративные процессы с ранним инкапсулированием В печени, селезенке и лимфатических узлах выявлена активация мезенхимальных элементов органов, выраженная в пролиферации ретикулоэндотелиальных клеток. Эти процессы более выражены и дольше сохраняются при интратестикулярном и внутрибрюшинном заражении М kansasn и М xenopi

Отмеченные изменения характерны для хронически текущих воспалений, в том числе и туберкулеза Однако отсутствие склонности к

обострению процесса с формированием дочерних некрозов не позволяет провести полной аналогии с туберкулезной патологией

2.2.3. Патоморфологические изменения у кроликов, зараженных M.phlei и M.smegmatis, в сравнении с зараженными M.tuberculosis, M.bovis и M.avium

Патоморфологические изменения у кроликов, зараженных М phlei и М smegmatis дозой 1 мг/мл были незначительны и мало специфичны, а через 90 дней отсутствовали При увеличении заражающей дозы в 10 раз, к 21 дню в печени находили пролиферацию ретикулоэндотелиальных и лимфоидных клеток по триадам, в легких - единичные лимфомы, в почках лимфоидную инфильтрацию К 90 дню у большинства кроликов изменения редуцировались, а у одного кролика в селезенке находили скопления эпителиоидных клеток, в легких единичные гранулемы, в почках единичные лимфомы, в печени пролиферацию ретикулоэндотелиальных и лимфоидных клеток по триадам Кролики, зараженные М avium, пали от туберкулезного сепсиса, принятого как болезнь Иерсена, в течение месяца Животные, зараженные М bovis, пали с генерализованной формой туберкулеза У кроликов, зараженных М tuberculosis и убитых по окончанию опыта, находили единичные гранулемы в печени, легких и почках и очаги эпителиоидных клеток в селезенке.

2.2.4. Патоморфологические изменения у кур, зараженных M.phlei, M.smegmatis и M.tuberculosis, в сравнении с зараженными M.avium

Куры, зараженные М avium пали в течение месяца от туберкулезного сепсиса Селезенка и печень были резко увеличены, с четко выраженной зернистостью На поверхности легких множественные белые очаги Гистологически структура печени, селезенки и легких плохо просматривалась из-за множественных неограниченных,

конгломерированных гранулем, состоящих из эпителиоидных клеток

При окраске срезов по Циль-Нильсену выявлено обилие микобактерий в цитоплазме.

У кур, зараженных М tuberculosis, в дозе 10 мг/мл на 21 день после заражения отмечено незначительное увеличение селезенки, в легких единичные белесоватые узелки гистологически гранулемы, состоящие из макрофагов, окруженные лимфоидными клетками, без тенденции к распаду К 90 дню данные изменения редуцировались, у 2 кур гистологически находили единичные гранулемы с некрозом и инкапсуляцией в легких, печени и селезенке

В группе кур, зараженных 10 мг/мл М phlei и М smegmatis, к 21 дню после заражения гистологически у 2 особей наблюдали в печени лимфоидную пролиферацию, в селезенке - гиперплазию фолликулов У одной курицы в легком единичные узелки по ходу сосудов, состоящие из макрофагов с некрозом в центре, окруженные лимфоидными клетками

К 90 дню у отдельных птиц при вскрытии обнаружили в печени и селезенке единичные белесоватые узелки Гистологически эти поражения представляли собой некротизированные массы, состоящие из фибрина, и небольшого количества распавшихся кариорексисом ядер Некрозы окружены в одних случаях широкой зоной макрофагов типа эпителиоидных клеток, гигантских клеток с вытянутыми темно окрашенными ядрами Некроз, соприкасающийся с гигантскими клетками,

подвергался рассасыванию путем вакуолизации

Окраска по-Маллори выявила наличие вокруг некрозов мощной соединительнотканной капсулы, фибриноидное пропитывание стенок сосудов

Окраска срезов по Циль-Нильсену выявила наличие кислотоустойчивых палочек

Таким образом, заражение кур Msmegmatis и Mphlei на ранних стадиях вызывает пролиферацию ретикулярной стромы органов в виде утолщения стенок альвеол легких, увеличение количества ретикулярных клеток в селезенке, образование мелких скоплений лимфоидных и гистиоцитарных клеток в печени Чаще эти изменения исчезают с удлинением срока наблюдения Однако у отдельных животных процесс завершается образованием мелких гранулем с некрозом в центре, имеющий сходство с туберкулезной патологией, но без тенденции к усугублению, наблюдаемому при заражении М avium

2.2.5. Патологоанатомические и гистологические изменения у коз, экспериментально зараженных алиментарно M.bovis, M.tuberculosis и M.avium.

Все экспериментальные козы оказались чувствительны к использованным в опыте микобактериям Но степень выраженности патологического процесса была различной

У коз, зараженных М bovis, одна пала, другая убита в агональном состоянии На вскрытии отмечены генерализованный туберкулез с поражением плевры, легких, печени, селезенки и региональных им лимфатических узлов, миндалин, стенки тонкого отдела кишечника с тотальным поражением всех лимфатических узлов брыжейки с образованием лучистого казеоза

Гистологически структура легких едва различима, выявлена тяжелейшая казеозная крупозная пневмония, туберкулезный плеврит, лучистый казеоз лимфатических узлов В легких большая часть альвеол заполнена фибрином и клеточным детритом, границы альвеол едва заметны, множественные некрозы по всему полю зрения с выпотом фибрина и с кариорексисом, не имеющие отложений извести Участки остро текущей крупозной пневмонии соседствуют с катаральным воспалением В очагах поражения отсутствует свойственная хронической туберкулезной пневмонии воспалительная специфическая клеточная реакция отсутствуют гранулемы, эпителиоидные и гигантские клетки В печени и селезенке - множественные гранулемы с центральным некрозом и слабо выраженной или отсутствующей специфической капсулой

У коз, зараженных М tuberculosis, изменения носили более локальный характер Туберкулезные поражения находили в лимфатических узлах, легких, печени, кишечнике, селезенке Гранулемы были ограничены мощной соединительнотканной капсулой

Гистологически в легких отмечали образование гранулем, окруженных фиброзной капсулой и зоной специфической для туберкулеза грануляционной ткани из эпителиоидных и гигантских клеток В центре гранулем некроз с обломками ядер, распадающихся кариорексисом, в некоторых некрозах содержится большое количество извести Участки пневмонии небольшие, вокруг гранулем небольшие участки реактивного воспаления Сохранившиеся участки легочной ткани в состоянии ателектаза

В группе коз, зараженных M.avium, изменения характеризовались наличием мелких, единичных гранулем в легких, селезенке, печени и лимфатических узлах, отграниченные выраженной соединительнотканной капсулой Гистологически гранулемы отличались продуктивностью и перемежались с паразитарными поражениями

Результаты проведенных ПЦР-исследований патологического

материала от коз и лабораторных животных полностью коррелируют с данными патологоанатомических и гистологических исследований.

Выводы

1 Патоморфологически установлена однотипная клеточная воспалительная реакция в месте введения культуры, регионарных лимфатических узлах и паренхиматозных органах, выраженная в развитии катарально-гнойного воспаления в месте введения культуры, пролиферации ретикуло-эндотелиальных элементов стромы в лимфатических узлах, селезенке, легких, печени

2. Степень выраженности компонентов воспаления зависела от патогенности культуры нетуберкулезных микобактерий для данного вида животных, метода заражения, дозы, и во всех случаях не соответствовала туберкулезной патологии

3. Изменения у морских свинок, зараженных Mkansasn, Mfortuitum, М xenopi, различными способами, не имеют тенденцию к распространению, не привели к гибели животного, наиболее выражены при заражении М kansasn и М xenopi внутрибрюшинно и интратестикулярно, чаще встречаются в виде лимфоидной инфильтрации или небольших гранулем, состоящих из макрофагов, окруженных лимфоидными элементами, реже с некрозом в центре, в печени, селезенке легких

4 Заражение кур М smegmatis и М phlei на ранних стадиях вызывает пролиферацию ретикулярной стромы органов в виде утолщения стенок альвеол легких, увеличение количества ретикулярных клеток в селезенке, образование мелких скоплений лимфоидных и гистиоцитарных клеток в печени Чаще эти изменения исчезают с удлинением срока наблюдения Однако у отдельных животных процесс завершается образованием мелких гранулем с некрозом в центре, имеющий сходство с туберкулезной патологией, но без тенденции к усугублению, наблюдаемому при

заражении М avium В поздние сроки отмечены гранулемы, имеющих большое сходство с туберкулезными, наличие в которых кислотоустойчивых палочек в некрозах при окраске срезов по Циль-Нильсену, предполагает определение патогенности этих микобактерий для птиц до установления диагноза на туберкулез

5 Данные проведенных патоморфологических, аллергических, бактериологических и ПЦР исследований в комплексных опытах с использованием различных видов микобактерий предостерегают от преждевременного ложноположительного диагноза туберкулеза

6 Заражением в эксперименте коз М bovis, М tuberculosis и М avium, воспроизведены патоморфологические изменения, характерные для туберкулеза Наиболее тяжелые с выраженным альтеративным компонентом, ведущие к гибели при заражении М bovis, с преобладанием продуктивного компонента воспаления с петрификацией и инкапсулированием некрозов - при заражении М tuberculosis и образованием мелких, единичных, инкапсулированных узелков при заражении М avium

Практические предложения:

1 По окончании срока биопробы рекомендуем в любом случае проведение гистологических исследований В случае гибели морской свинки и независимо от наличия видимых изменений на вскрытии, предлагаем брать регионарные лимфатические узлы, а также кусочки печени, селезенки и легких для гистологических и культурально-морфологических исследований

2 При постановке диагноза на туберкулез птиц учитывать, что обнаружение кислотоустойчивых палочек в некрозах при окраске

срезов по Циль-Нильсену, предполагает определение патогенности этих микобактерий в биологической пробе

3 Использовать результаты исследований в лекциях и семинарах повышения квалификации ветеринарных специалистов, по проблеме туберкулеза и микобактериозов животных

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1 Колоскова Э.Л К оценке патологоанатомических изменений в диагностике туберкулеза/Якушева О В , Суворов В С , Колоскова Э Л //Ветеринарная патология. № 1-2. 2004 С. 79-80

2 Колоскова ЭЛ. О патогенности атипичных микобакетрий для лабораторных животных/ Овдиенко Н П, Косенко В И, Толстенко Н Г, Суворов В С , Якушева О В , Колоскова Э Л // Ветеринарная патология № 1-2 2004 С 150-153

3 Колоскова Э Л Патоморфологические изменения у лабораторных животных, зараженными нетуберкулезными микобактериями/ Колоскова Э Л, Якушева О В , Суворов В С , Толстенко Н Г, Соколова Е.Э // Материалы международной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения Я Р.Коваленко Актуальные проблемы инфекционной патологии и иммунологии животных - М , 2006 С 252

4 Колоскова Э Л Туберкулез коз// Овдиенко Н П, Найманов А X., Осипова Е П, Калмыкова М С , Строганов В И, Толстенко Н Г , Якушева О В , Суворов В С , Степнова С Н , Колоскова Э Л // Материалы международной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения Я Р Коваленко Актуальные проблемы инфекционной патологии и иммунологии животных - М , 2006 С 312

5 Колоскова Э Л О патогенности нетуберкулезных микобактерий для морских свинок и белых мышей//Толстенко Н Г , Колоскова Э Л, Суворов В С, Касьянова Е А, Соколова Е Э // Материалы международной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения Я Р Коваленко. Актуальные проблемы инфекционной патологии и иммунологии животных - М , 2006 С 390

6 Колоскова Э Л Экспериментальный туберкулез коз// Овдиенко Н П , Найманов А X, Якушева О В , Строганов В И , Строганов И В , Суворов В С , Осипова Е П, Калмыкова М С , Толстенко Н Г , Чебан С С, Колоскова Э Л // Мшнародна наук -практ конф «Эпизоот 1 профшактика шфекц хвороб велико1 рогато1 худоби», Тези доповщей, 14-17 березня 2006 року, НАУ, КигВ, Украша, 2006 г,стр 64

7 Колоскова Э Л Результаты патоморфологического исследования подопытных животных, зараженных М рЫег и М яте^тайз// Мпкнародна наук-практ конф «Эпизоот 1 профшактика шфекц хвороб велико1 рогато1 худоби», Тези доповщей, 14-17 березня 2006 року, НАУ, Киш, Украша, 2006 г., стр

Отпечатано в ООО «Компания Спутник+» ПД № 1-00007 от 25 09.2000 г Подписано в печать 25 04 07. Тираж 100 экз Усл. пл 1,38 Печать авторефератов (495) 730-47-74,778-45-60

1.1 .Актуальность темы. Задачи, стоящие в области ликвидации туберкулеза человека и животных, зависят от полноты учета всех возможных источников возбудителя туберкулеза и тесно связаны с видами микобактерий. Проблема видов микобактерий и их патогенетическая роль привлекает все большее внимание медицинских и ветеринарных исследователей (Я.А.Благодарный, 1980; К.А.Туркебаева, Я.А.Благодарный, 1981; Н.П.Овдиенко с соавт., 1990; Т.Ф.Оттен, А.В.Васильев, 2005, и др.).

После открытия возбудителя туберкулеза (Р.Кох, 1882) и установления антропозоонозной природы заболевания встал вопрос о взаимоотношении между восприимчивыми видами животных к туберкулезу.

Заражение туберкулезом людей и животных обычно происходит свойственным для них видом возбудителя, но возможна и межвидовая миграция микобактерий (J.Sigurdson, 1945; B.Devulder, 1966;

A.И.Каграманов, 1967; Я.А.Благодарный, 1972; Д.Д.Новак, 1977;

B.Е.Щуревский, 1980, и др.).

По мере ликвидации туберкулеза сельскохозяйственных животных все более возрастает роль нетуберкулезных микобактерий и различных видов микобактериозов, которые нередко путают с туберкулезной инфекцией (L.StoII, 1972). Это объясняется тем, что при определенных условиях нетуберкулезные микобактерии могут проявлять патогенные свойства (C.Xalabarder, 1961; О.В.Мартма, 1982; Т.Ф.Оттен, А.В.Васильев, 2005, и др.). Установить этиологическую значимость нетуберкулезных микобактерий чрезвычайно сложно. Дискутабельна причастность их к патологическому процессу.

Научными исследованиями доказано клинико-анатомическое своеобразие проявления туберкулеза и микобактериозов у людей, вызванные разными видами микобактерий (К.М.Маскеев, 1972; Е.П.Ченских, 1972; К.А.Туркебаева, Я.А.Благодарный, 1981; Т.Ф.Оттен, А.В.Васильев, 2005). В ветеринарии этот вопрос недостаточно изучен, особенно патологическая анатомия и патогенез. Отсутствуют четкие данные о том, как реагируют животные на микобактерии разных видов, изменяется ли стереотип защитной тканевой реакции при заражении возбудителем несвойственного вида. Незнание этого порождает противоречивые суждения о патологическом процессе, вызванного различными видами туберкулезных и нетуберкулезных микобактерии, недооценку роли инфицированных животных в эпизоотологии туберкулеза и микобактериозов.

С.И. Антипова и соавторы (1987) полагают, что проблема эпидемиологической и эпизоотологической значимости микобактериозов может быть решена с учетом вида микобактерий, так как в организме животных биологическая активность микобактерий разных видов неодинакова (М.П.Зыков, Т.Б.Ильина, 1978; Т.Ф.Оттен, А.В.Васильев , 2005).

Для выявления вирулентности нетуберкулезных микобактерий используют различные виды лабораторных животных, исследователи совершенствуют методы заражения, изменяют реактивность организма животных (О.В.Мартма, Э.И.Тюри, 1968; М.П.Зыков, Т.Б.Ильина, 1978; Е.А.Финкель, Л.В.Михайлова, 1978;Э.И.Тюри и соавт., 1986; Т.Ф.Оттен, А.В.Васильев, 2005; Н.Г.Толстенко, 2006; Б.Киге, К.Ьее, 1984; М.РауЬэ а а1., 1991; А.Баепг а а1., 1985 и др.).

В ветеринарной практике очень важным моментом является определение вида возбудителя туберкулеза. Для этого применяется биологическая проба с использованием морских свинок, кроликов и кур.

Для сокращения срока биопробы, совершенствуют методы и дозы заражения, изменяют реактивность организма животных.

При бактериологическом исследовании с использованием биологического метода иногда обнаруживают узелковые изменения, которые затрудняют определение вида возбудителя туберкулеза. Некоторые исследователи склонны объяснять возникновение таких изменений инфицированностыо животных нетуберкулезными (атипичными) микобактериями.

В последнее время в качестве экспериментальной модели для изучения патогенеза туберкулеза, а также определения специфичности и активности туберкулина используют коз. Если туберкулез крупного рогатого скота изучен довольно полно (Н.А.Налетов, 1949; П.И.Кокуричев, 1953; В.Е.Щуревский с соавт., 1991), то сведения о козах малочисленны и противоречивы.

Исходя из вышеизложенного, изучение патологоанатомических и гистологических изменений у морских свинок, кроликов, кур и особенно коз, является актуальной задачей и представляет значительный научный и практический интерес.

1.2. Целью исследований являлось изучение патологоанатомических и гистологических изменений у морских свинок, кроликов, кур и коз, зараженных в эксперименте разными видами микобактерий.

1.3. Основные задачи исследований: изучить патологоанатомические и гистологические изменения у морских свинок экспериментально зараженных подкожно М.рЫеь МБп^та^Б, М.аушт в сравнении с зараженными М.Ьоу1з, М.шЬегси1оз1з; изучить патологоанатомические и гистологические изменения в динамике у морских свинок, зараженных разными методами М.капзази, М.ГогШкиш, М.хепор! в сравнении с зараженными М.Ьсмв; изучить патоморфологические изменения у кроликов, зараженных М.рЬЫ и М.Бгг^таиз в сравнении с зараженными М.Ымб, МЛиЬегси^Б и М.аушт; изучить патоморфологических изменений у кур, зараженных М.рЫе1, М.Бгг^таиз и М.ШЬегси1оз18 в сравнении с зараженными М.аушт; определить характер и локализацию патологоанатомических и гистологических изменений у коз, экспериментально зараженных М.Ьоу1б, М.шЬегси1оз1з, М.аушт.

1.4. Научная новизна: Показаны в динамике патологоанатомические и гистологические изменения у морских свинок, экспериментально зараженных разными методами М.капзаБИ, М.АэгйпШт, М.хепор1, М.рЫе1, Мяп^тайя и М.аушт в сравнении с М.Ьоу1з и М.ШЬегси1оз18. Показано, что отмеченные изменения, вызванные нетуберкулезными микобактериями, характерны для хронически текущих воспалений, в том числе и туберкулеза. Однако отсутствие склонности к обострению процесса и последующая склонность к редукции не позволяет провести полной аналогии с туберкулезной патологией.

Описаны патоморфологические изменения органов кур, экспериментально зараженных М.рЫе1, М.зп^тайз и МЛиЬегси1оз18, в сравнительном аспекте с зараженными М.аушт. Показано, что у кур, зараженных микобактериями М.рЬЫ, М.8те§та1:18 и МЛиЬегси1о818, к 21 дню развиваются единичные изменения, гистологически сходные с туберкулезными, которые не склонны к прогрессированию и чаще редуцируются с увеличением сроков содержания птицы, в отличие от патологии, вызванной М.аушт.

Описаны патоморфологические изменения у кроликов, зараженных М.зп^таЙБ и М.рЫе1, на 21 и 90 день после заражения в сравнении с М.Ьоу1б, МЛиЬегси1оз18, М.аушт. Показано, что у кроликов, зараженных М.зп^таЙБ и М.рЬЫ, на 21 день возникает неспецифическая реакция в органах, которая чаще исчезает через 3 месяца, в отличие от туберкулезной патологии, вызываемой М.Ьоу1б, М.ШЬегси1оз{8 и М.аушт.

Определен характер и локализация патоморфологических изменений у коз, экспериментально зараженных М.Ьоу1б, МЛиЬегси1о81з и М.аушт соответственно. Показана чувствительность коз ко всем вышеперечисленным микобактериям и выявлена различная степень выраженности патологического процесса.

1.5. Практическая значимость. Результаты исследований включены в «Методические рекомендации по диагностике микобактериальных инфекций у животных», утвержденные директором ВИЭВ, академиком Россельхозакадемии М.И.Гулюкиным 22 марта 2007 г.

1.6. Личный вклад соискателя заключается в организации и проведении опытов на морских свинках, кроликах и курах, патологоанатомических исследований экспериментально зараженных лабораторных животных и коз, а также в приготовлении и изучении гистологических препаратов из тканей и органов животных, сравнительном анализе и обобщении результатов исследований, в подготовке научных публикаций.

1.7. Апробация работы. Материалы работы доложены на Международной научно-практической конференции «Современные проблемы диагностики и профилактики туберкулеза животных» (Москва, 2003 г), на Международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения Я.Р.Коваленко (М., 2006г), Международной научно-практической конференции «Эпизоотология и профилактика инфекционных болезней крупного рогатого скота» (Киев, 2006г.), на заседании ученого совета ВИЭВ (2005, 2006гг.). Основные положения, выводы и практические предложения, изложенные в диссертации, обсуждены и одобрены на межлабораторном совещании научных сотрудников ВИЭВ (2007 г.).

1.8. Основные положения, выносимые на защиту. Полученные экспериментальные данные позволяют вынести на защиту следующие основные положения:

- результаты патологоанатомических и гистологических исследований морских свинок, кроликов и кур, зараженных некоторыми видами нетуберкулезных микобактерий разными методами в сравнении с возбудителями туберкулеза;

- результаты патологоанатомических и гистологических исследований коз, зараженных М.Ьоу1б, МЛиЬегси1оз1з, М.аушт;

- применение результатов сравнительного изучения патологоанатомических и гистологических особенностей у разных животных при заражении туберкулезными и нетуберкулезными микобактериями в дифференциальной диагностике туберкулезе.

1.9. Публикация результатов исследований. По материалам диссертационной работы опубликовано семь научных статей.

1.10. Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 157 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Работа иллюстрирована 57 фотографиями и 7 таблицами. Список литературы включает 236 источников, в том числе 41 иностранных авторов.

132 5. Выводы.

1. Патоморфологически установлена однотипная клеточная воспалительная реакция на ранние сроки у морских свинок, зараженных разными видами микобактерий в месте введения культуры, регионарных лимфатических узлах и паренхиматозных органах, выраженная в развитии катарально-гнойного воспаления в месте введения культуры, пролиферации ретикуло-эндотелиальных элементов стромы в лимфатических узлах, селезенке, легких, печени.

2. Степень выраженности компонентов воспаления зависела от патогенности культуры нетуберкулезных микобактерий для данного вида животных, метода заражения, дозы, и во всех случаях не соответствовала туберкулезной патологии.

3. Изменения у морских свинок, зараженных М.кшшзп, М.АэгШкит, М.хепорц различными способами, не имеют тенденцию к распространению, не привели к гибели животного, наиболее выражены при заражении М.капзаБп, М.хепор! внутрибрюшинно и интратестикулярно, чаще встречаются в виде лимфоидной инфильтрации или небольших гранулем, состоящих из макрофагов, окруженных лимфоидными элементами, реже с некрозом в центре - в печени, селезенке и легких.

4. Заражение кур М.БП^тайз и М.рЬЫ на ранних стадиях вызывает пролиферацию ретикулярной стромы органов в виде утолщения стенок альвеол легких, увеличение количества ретикулярных клеток в селезенке, образование мелких скоплений лимфоидных и гистиоцитарных клеток в печени. Чаще эти изменения исчезают с удлинением срока наблюдения. Однако у отдельных животных процесс завершается образованием мелких гранулем с некрозом в центре, имеющий сходство с туберкулезной патологией, но без тенденции к усугублению, наблюдаемому при заражении М.аушт. В поздние сроки отмечены гранулемы, имеющих большое сходство с туберкулезными, наличие в которых кислотоустойчивых палочек в некрозах при окраске срезов по Цилю-Нильсену, предполагает определение патогенности этих микобактерий для птиц до установления диагноза на туберкулез.

5. Данные проведенных патоморфологических, аллергических, бактериологических и ПЦР исследований в опытах с использованием различных видов микобактерий подтверждают обязательность комплексного подхода при постановке диагноза на туберкулез и предостерегают от преждевременного ложноположительного диагноза туберкулеза.

6. Заражением в эксперименте коз М.Ьоу1з, МЛиЬегси^э и М.аушт, воспроизведены патоморфологические изменения, характерные для туберкулеза. Наиболее тяжелые с выраженным альтеративным компонентом воспаления, ведущие к гибели при заражении М.Ымб, с преобладанием продуктивного компонента воспаления с петрификацией и инкапсулированием некрозов - при заражении МЛиЬегси1о81з, и образованием мелких, единичных, инкапсулированных узелков при заражении М.аушт.

6. Практические предложения.

1. По окончании срока биопробы рекомендуем проведение гистологических исследований. В случае гибели морской свинки и независимо от наличия видимых изменений на вскрытии, предлагаем брать регионарные лимфатические узлы, а также кусочки печени, селезенки и легких для гистологических и культуральных исследований.

2. При постановке диагноза на туберкулез птиц учитывать, что обнаружение кислотоустойчивых палочек в некрозах при окраске срезов по Цилю-Нильсену, предполагает определение патогенности этих микобактерий в биологической пробе.

3. Использовать результаты исследований в лекциях и семинарах повышения квалификации ветеринарных специалистов, по проблеме туберкулеза и микобактериозов животных.

2.1.5. Заключение

Приведенные литературные данные показывают, что, несмотря на проведение профилактических и оздоровительных мероприятий, проблема туберкулеза человека и животных продолжает оставаться актуальной. В начале XXI века эпизоотическая ситуация в России, проявляя тенденцию улучшения в целом, остается напряженной.

После открытия Р.Кохом в 1882 г. возбудителя туберкулеза человеческого вида, Rivolta в 1889, а затем Strauss и Н.Ф.Гамалея в 1891 г. и Mafucci в 1892 подробно изучили птичий вид туберкулезных микобактерий. В 1896 г. T.Smith описал бычий вид, а спустя 40 лет в 1937 г. Wells обнаружил мышиный вид возбудителя туберкулеза. Однако проблема видов и микобактерий и их патогенетическая роль для людей и животных все больше привлекает внимание медицинских и ветеринарных исследований.

Выделенные виды M.africanum, M.canettii и более 50 видов нетуберкулезных микобактерий свидетельствуют о том, что род микобактерий недостаточно изучен. Нетуберкулезные микобактерии при определенных условиях могут проявлять патогенные свойства для человека и животных. За последние годы установлена этиологическая роль для человека M.avium, M.kansasii, M.battey, M.fortuitum, M.xenopi, M.ulcerance. они вызывают у человека заболевания, клинически не отличимые от различных форм туберкулеза легких.

Микобактерии комплекса аушт-т1гасе11и1аге часто оказываются возбудителями микобактериозов у свиней, а иногда и у крупного рогатого скота. Доказана патогенность этих микобактерий для цыплят.

Однако этот вопрос в ветеринарии недостаточно изучен. Разноречивы данные о реакции животных на микобактерии разных видов. Это порождает противоречивые суждения о патологическом процессе, вызываемом возбудителем туберкулеза несвойственного для животного вида. Если туберкулез крупного рогатого скота изучен довольно полно, то сведения о патологии у других видов животных, обусловленной несвойственным видом или нетуберкулезными микобактериями, малочисленны и противоречивы.

Поэтому, изучение патологоанатомических и гистологических изменений у различных видов животных, включая лабораторных, является актуальной задачей и имеет научную и практическую значимость.

3. Собственные исследования. 3.1. Материалы и методы.

Работа выполнена в период с 2002 г. по 2005 г. в лаборатории микобактериозов Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. Я.Р.Коваленко и на опытной базе острова Лисий Вышневолоцкого отдела ВИЭВ, в рамках Российской научно-технической программы фундаментальных и прикладных исследований по заданию 02.01.01.

Всего было исследовано 466 животных. Патологоанатомическому и гистологическому исследованию подвергнут материал от 374 морских свинок, 32 кроликов, 48 кур и 12 коз. Животные находились в комплексных опытах в лаборатории микобактериозов ВИЭВ с целью изучения патогенности нетуберкулезных микобактерий для лабораторных животных и восприимчивости коз к М.Ьоу1б, МЛиЬегси1оз18 и М.аушт в эксперименте.

Исследования проводили согласно «Наставления по диагностике туберкулеза животных», утвержденного Департаментом ветеринарии РФ в 2001 г.

Все животные были заражены культурами микобактерий, поделены на группы и выдерживались в отдельных боксах на базе Вышневолоцкого отдела ВИЭВ. Всех животных, по истечении нужных сроков, убивали и подвергали вскрытию. От убитых и павших животных брали патологический материал для проведения гистологического, бактериологического и ПЦР исследований. Для бактериологического исследования патологический материал (кусочки печени, селезенки, легких, иногда лимфатических узлов) обрабатывали по методу А.П.Аликаевой, с последующим посевом на среды ФАСТ-ЗЛ и Левенштейна-Иенсена. Материал обрабатывали совместно с кандидатом ветеринарных наук Н.Г.Толстенко. Из этого же центрифугата (при обработке материала по Аликаевой) брали пробы для

ПЦР - исследований, которые были проведены научным сотрудником М.С.Калмыковой и кандидатом ветеринарных наук Е.П.Вангели.

При проведении гистологических исследований использовали «Методические указания по патогистологической технике» (Москва, 2005). Кусочки органов и тканей фиксировали в 10 % растворе формалина. Гистологические препараты были изготовлены методом заливки в целлоидин и парафин. В ходе гистологических исследований использовали стандартный метод окраски гематоксилин-эозином, а также сложные окраски: на соединительную ткань по Ван-Гизону и по Маллори, на выявление микобактерий в срезах по Цилю-Нильсену. Работа была проведена при консультативной помощи кандидатов ветеринарных наук О.В.Якушевой и В.С.Суворова.

Всего провели 5 опытов.

В первом опыте, в соответствии с задачами исследований, изучали в динамике патологоанатомические и гистологические изменения у морских свинок, зараженных подкожно разными дозами М.рЫе1, М.БП^таЙБ и М.аушт, в сравнении, с зараженными МЛиЬегси1о81Б и М.Ьчмб. 54 морские свинки разделили на 9 групп и заразили подкожно. Первую группу - М.рЫе1, вторую - М-зп^таЙБ, третью - М.аушт, четвертую -М.ШЬегси1оз1з, пятую - М.Ымб - в дозе по 1мг/мл, остальные: шестую -М.рЫе1, седьмую - М-Бп^тапв , восьмую - М.аушт в дозе по 10мг/мл, девятая группа была контрольной.

Животных содержали в течение 90 дней в отдельных боксах блока № 3 Вышневолоцкого отдела ВИЭВ. Через 15 дней после заражения была проведена туберкулинизация морских свинок согласно узаконенной методики. Убивали животных через 21 и 90 дней после заражения.

Во втором опыте использовали 320 морских свинок, которых разделили на группы по 80 голов.

Животных первой группы (80 голов) подразделили на 4 подгруппы (по 20 голов). Первой подгруппе ввели культуру М.капБази подкожно в дозе

1 мг/мл, второй - внутрибрюшинно в той же дозе и третьей -интратестикулярно в дозе 1 мг в 0,2 мл физиологического раствора, 4 подгруппа была контролем. Аналогичными методами и дозами заразили вторую, третью и четвертую подгруппы морских свинок культурами М.АэгШкит, М.хепор1 и М.Ьоу1з соответственно.

Через 10, 20, 30 и 60 дней после заражения убивали по 5 морских свинок, с последующим взятием патологического материала для гистологических и бактериологических исследований.

В третьем опыте использовали 32 кролика, которые были разделены на 8 групп. Первая группа была заражена М.рЫе!, вторая - М-Бп^таЙБ, третья - М.Ымб, четвертая - МЛиЬегси1оз18, пятая - М.аушт - все в дозе по 1 мг/мл. В шестой группе животных заражали М.рЫе1, в седьмой -М.БГГ^таЙБ - увеличив заражающую дозу до 10мг/мл, восьмая группа служила контролем. Аллергическое исследование было проведено через 15 дней после заражения, согласно существующей методике.

Животных убивали через 21 и 90 дней после заражения.

В четвертом опыте были взяты 48 кур, которых разделили на 8 групп и заразили внутривенно. Первую группу - М.рЫе1, вторую -М.БГГ^та^Б, третью - МЛиЬегси^Б, четвертую - М.аушт - в дозе по 1 мг/мл, пятая группа была контрольной. Аналогичные три группы кур (шестую, седьмую и восьмую) заразили десятикратной дозой М.рЫе1, М.БГГ^та^Б и М.шЬегси1оз18 соответственно. Через 15 дней после заражения кур подвергли аллергическому исследованию по общепринятым методикам.

Птицу убивали через 21 и 90 дней после заражения.

В пятом комплексном опыте, который провели совместно с аспирантом лаборатории микобактериозов В.И.Строгоновым на 12 козах в возрасте 1 года, животных разделили на 4 группы по 3 головы.

Первую группу животных (№ 1,2,3) заразили орально вначале взвесью патологического материала павшей от туберкулеза курицы (печень, селезенка) и павшего кролика (печень, селезенка), которые ранее были заражены культурой М.аушт (шт. К). Затем через 18 дней каждой козе так же орально ввели взвесь культуры М.аушт (шт. К) в дозе 1 мг на кг живой массы.

Вторая группа (№ 4,5,6) была заражена орально М.Ьоу1б. Сначала каждой козе вводили орально через зонд суспензию печени и селезенки морской свинки с генерализованной формой туберкулеза и суспендированные печень и селезенку одного кролика с аналогичными поражениями, павших после заражения М.Ьоу1з. Через 18 дней каждую козу так же орально'заражали культурой М.Ьоу1з (шт. «С») в дозе 1 мг на 1 кг живой массы.

Третью группу коз (№ 7,8,9) заражали аналогично МЛиЬегси1оз18. Первоначально взвесью материала павшей от туберкулеза морской свинки (селезенка, печень), ранее зараженной культурой МЛиЬегси^Б (штамм Н37Яу). Через 18 дней каждая коза была заражена повторно орально этой же культурой в дозе 1мг на 1 кг живой массы.

Четвертая группа животных (№ 10, 16, 17) была контрольной.

Животных содержали в отдельных боксах в течение 9 месяцев. Одна коза пала через 2,5 месяца, остальные животные убиты по окончанию опыта.

Животных в процессе опыта через каждые 30 - 60 дней исследовали пальпебральной туберкулиновой пробой, ППД-туберкулин вводили в нижнее веко глаза, отступя от его края 1,5-2 см.

Реакцию учитывали через 48 часов после введения туберкулина и оценивали по величине припухлости в месте инъекции препарата в плюсах: + - небольшая припухлость; ++ - выраженную припухлость, +++ -припухлость с грецкий орех, ++++ - припухлость, величиной больше грецкого ореха, иногда с куриное яйцо диаметром не менее 30 мм.