Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Патоморфологические изменения у животных, зараженных разными видами микобактерий

ДИССЕРТАЦИЯ
Патоморфологические изменения у животных, зараженных разными видами микобактерий - диссертация, тема по ветеринарии
АВТОРЕФЕРАТ
Патоморфологические изменения у животных, зараженных разными видами микобактерий - тема автореферата по ветеринарии
Колоскова, Элеонора Леонидовна Москва 2007 г.
Ученая степень
кандидата ветеринарных наук
ВАК РФ
16.00.02
 
 

Автореферат диссертации по ветеринарии на тему Патоморфологические изменения у животных, зараженных разными видами микобактерий

На правах рукописи

Колоскова Элеонора Леоиидовна

Патоморфологнческие изменения у животных, зараженных разными видами микобактерий

16.00.02 - патология, онкология и морфология животных

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

■2

ООЗОТ1121

Москва - 2007

003071121

Работа выполнена в лаборатории микобактериозов ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им Я Р Коваленко Российской академии сельскохозяйственных наук

Научные руководители:

- доктор ветеринарных наук, профессор, заслуженный

деятель науки Российской Федерации Овдиенко Николай Павлович

- доктор ветеринарных наук Альбертян Мкртич Погосович

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук

Стрельников Алексей Павлович (МГАВМ и Б)

Ведущая организация - ФАО ГОУ ВПО Московский государственный

университет прикладной биотехнологии

Защита состоится « 30» мая 2007 г в 14 00 часов на заседании диссертационного совета Д 006 033.01 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук при ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им Я Р Коваленко по адресу 109428, Москва, Рязанский проспект, 24, корп 1

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИЭВ

Автореферат разослан «^У» апреля 2007г

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат ветеринарных наук Барабанов Иван Иванович (ВИЭВ)

профессор

Н П Овдиенко

1. Общая характеристика работы

1 1 Актуальность темы Задачи, стоящие в области ликвидации туберкулеза человека и животных, зависят от полноты учета всех возможных источников возбудителей туберкулеза и тесно связаны с видами микобактерий, патогенетическая роль которых привлекает все большее внимание медицинских и ветеринарных исследователей (Я А Благодарный, 1980, К А Туркебаева, Я А Благодарный, 1981, Н П Овдиенко с соавт , 1990, Т Ф Оттен, А В Васильев, 2005, и др)

После открытия возбудителя туберкулеза (РКох, 1882) и установления антропозоонозной природы заболевания встал вопрос о взаимоотношении между восприимчивыми видами животных и определенными видами микобактерий

Заражение людей и животных обычно происходит свойственным для них видами возбудителя туберкулеза, но возможна и межвидовая миграция микобактерий (I БщшчЗэоп, 1945, В Се\и1с1ег, 1966, А И Каграманов, 1967, Я А Благодарный, 1972, Д Д Новак, 1977, В Е Щуревский, 1980, и др )

Наряду с совершенствованием мер по ликвидации туберкулеза сельскохозяйственных животных, возрастает роль различных видов нетуберкулезных микобактерий, и вызываемых ими микобактериозов, которые нередко принимают за туберкулезную инфекцию (Б1о11, 1972) Это объясняют тем, что при определенных условиях нетуберкулезные микобактерии могут проявлять патогенные свойства (С Р Ха1аЬагс1ег, 1961, О В Мартма, 1982, ТФ Оттен, А В Васильев, 2005, и др ) Установить этиологическую значимость нетуберкулезных микобактерий чрезвычайно сложно Дискутабельна причастность их к патологическому процессу

Научными исследованиями доказано клинико-анатомическое многообразие проявления туберкулеза и микобактериозов у людей, вызванные разными видами микобактерий (К.ММаскеев, 1972, Е.П Ченских, 1972, К А Туркебаева, Я А Благодарный, 1981, Т.Ф Оттен,

А В Васильев, 2005) В ветеринарии этот вопрос недостаточно изучен, в частности патологическая анатомия и патогенез Разноречивы данные о том, как реагируют животные на микобактерии разных видов, изменяется ли стереотип защитной тканевой реакции при заражении возбудителем несвойственного вида, это порождает противоречивые суждения о патологическом процессе, вызванном различными видами туберкулезных и нетуберкулезных микобактерии, недооценку роли инфицированных животных в эпизоотологии туберкулеза и микобактериозов

СИ Антипова и соавторы (1987) полагают, что проблема эпидемиологической и эпизоотологической значимости микобактериозов может быть решена с учетом вида микобактерии, так как в организме животных биологическая активность микобактерий разных видов неодинакова (МП Зыков, Т.Б Ильина, 1978, ТФ.Отген, А В Васильев , 2005)

Для определения вирулентности нетуберкулезных микобактерий используют лабораторных животных, совершенствуют методы заражения, изменяя реактивность организма животных (О В Мартма, Э И Тюри, 1968, МП Зыков, Т Б Ильина, 1978, ЕАФинкель, Л В Михайлова, 1978,Э И Тюри и соавт, 1986, ТФОттен, А В Васильев, 2005, Н Г Толстенко, 2006, F Kuze, К Lee, 1984, М Palvas et all, 1991, A Saenz et all, 1985 идр)

В ветеринарной практике основным моментом является определение вида возбудителя туберкулеза Для этого применяется биологическая проба с использованием морских свинок, кроликов и кур

Для сокращения срока биопробы совершенствуют методы и дозы заражения, изменяют реактивность организма животных

При оценке результатов биопробы у морских свинок, кроликов и кур иногда обнаруживают узелковые изменения, которые являются основополагающими в определении вида возбудителя туберкулеза Некоторые исследователи склонны объяснять возникновение таких

изменений инфицированностью животных нетуберкулезными (атипичными) микобактериями

В последнее время в качестве экспериментальной модели для изучения патогенеза туберкулеза, а также определения специфичности и активности туберкулина используют коз Если туберкулез крупного рогатого скота изучен довольно полно (Н А Налетов, 1949, П И Кокуричев, 1953; В Е Щуревский с соавт., 1991), то сведения о козах малочисленны и противоречивы

Исходя из вышеизложенного, изучение патологоанатомических и гистологических изменений у морских свинок, кроликов, кур и коз, является актуальной задачей и представляет значительный научный и практический интерес

1 2 Целью исследований являлось сравнительное изучение в динамике патологоанатомических и гистологических изменений у морских свинок, кроликов, кур и коз, зараженных в эксперименте разными видами микобактерий

1 3 Основные задачи исследований

изучить патологоанатомические и патоморфологические изменения у морских свинок экспериментально зараженных подкожно М phlei, М smegmatis, М avium в сравнении с М bovis, М tuberculosis,

изучить патологоанатомические и гистологические изменения в динамике у морских свинок, зараженных разными методами М kansasn, М fortuitum, М xenopi в сравнительном аспекте с зараженными М bovis,

изучить патоморфологические изменения у кроликов, зараженных M.phlei и М smegmatis в сравнении с зараженными М bovis, М tuberculosis и М avium,

изучить патоморфологических изменений у кур, зараженных Mphlei, М smegmatis и М tuberculosis в сравнении с зараженными М avium,

определить характер и локализацию патологоанатомических и патоморфологических изменений у коз, экспериментально зараженных М bovis, М tuberculosis, М avium

1 4 Научная новизна Показаны в динамике патоморфологические изменения у морских свинок, экспериментально зараженных разными методами М kansasu, M.fortuitum, М xenopi, М phlei, М smegmatis и М avium в сравнении с изменениями при заражении М bovis и М tuberculosis Установлено, что отмеченные изменения, вызванные нетуберкулезными микобактериями, характерны для хронически текущих воспалений, в том числе и туберкулеза Однако отсутствие обострения процесса и последующая склонность к редукции отличают их от патологии, наблюдаемой у морских свинок при заражении М bovis и М tuberculosis

У кур, зараженных микобактериями М phlei, М smegmatis и М tuberculosis, на ранних стадиях развиваются единичные изменения, гистологически сходные с туберкулезными, которые не склонны к прогрессированию и с увеличением сроков содержания животных, в отличие от патологии, вызванной M.avium, подвергаются редукции У единичных кур, зараженных М smegmatis и М phlei в поздние сроки патоморфологические изменения имеют значительное сходство с туберкулезной патологией, однако подобные гранулематозные поражения могут быть полиэтиологичны, либо обусловлены другим возбудителем

Показано, что у кроликов, зараженных М smegmatis и М phlei, на 21 день возникает клеточная реакция в органах, склонная к редукции в течение 3 месяцев, в отличие от туберкулезной патологии, вызванной М bovis, М tuberculosis, М avium

Охарактеризованы патологоанатомические и гистологические изменения у коз, экспериментально зараженных М bovis, М tuberculosis, М avium Показана чувствительность коз ко всем вышеперечисленным

микобактериям и отмечены различия в степени выраженности патологического процесса

1 5 Практическая значимость Результаты исследований включены в «Методические рекомендации по диагностике микобактериальных инфекций у животных», утвержденные директором ВИЭВ, академиком Россельхозакадемии М И Гулюкиным 22 марта 2007 г 1 6 Личный вклад соискателя заключается в организации и проведении опытов на морских свинках, кроликах и курах, послеубойной оценке патанатомических изменений, экспериментально зараженных лабораторных животных и коз, а также приготовлении и изучении гистологических препаратов из тканей и органов животных, сравнительном анализе и обобщении результатов исследований 1 7 Апробация работы Материалы работы доложены на Международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения Я Р.Коваленко (М, 200бг), Международной научно-практической конференции «Эпизоотология и профилактика инфекционных болезней крупного рогатого скота» (Киев, 2006г), на заседании ученого совета ВИЭВ (2005, 2006гг) Основные положения, выводы и практические предложения, изложенные в диссертации, обсуждены и одобрены на межлабораторном совещании научных сотрудников ВИЭВ (2007 г)

1 8 Основные положения, выносимые на защиту Полученные экспериментальные данные позволяют вынести на защиту следующие основные положения

- результаты патологоанатомических и гистологических исследований морских свинок, кроликов и кур, зараженных нетуберкулезными микобактериями разными методами в сравнении с изменениями, вызванными возбудителями туберкулеза,

- результаты патологоанатомических и гистологических исследований коз, зараженных М bovis, М tuberculosis, М avium,

- использование в дифференциальной диагностике туберкулеза результатов сравнительного изучения патологоанатомических и гистологических особенностей у разных животных при заражении туберкулезными и нетуберкулезными микобактериями 19 Публикация результатов исследований По материалам диссертационной работы опубликовано семь научных статей. 1 10 Структура и объем диссертации Диссертация изложена на /¿У страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы Работа иллюстрирована 35 фотографиями и ■77 таблицами Список литературы включает источника, в том числе ^^"иностранных авторов

2.Собственные исследования.

2.1. Материалы и методы. Работа выполнена в период с 2002 г. по 2005 г в лаборатории микобактериозов и секторе патоморфологии Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им ЯР Коваленко и на опытной базе острова Лисий Вышневолоцкого отдела ВИЭВ, в рамках Российской научно-технической программы фундаментальных и прикладных исследований по заданию 02 01 01

Патологоанатомическому и гистологическому исследованию подвергнут материал от 368 морских свинок, 32 кроликов, 42 кур и 12 коз Животные находились в комплексных опытах в лаборатории микобактериозов ВИЭВ с целью изучения патогенности нетуберкулезных микобактерий для лабораторных животных и восприимчивости коз в эксперименте к М bovis, М tuberculosis и М avium

В соответствии с задачами исследований, изучали в динамике патологоанатомические и морфологические изменения у морских свинок,

зараженных подкожно разными дозами М phlei, М smegmatis и М avium в сравнении с зараженными М tuberculosis и М bovis 48 морских свинок разделили на 8 групп и заразили подкожно Первую группу - Mphlei, вторую - М smegmatis, третью - М avium, четвертую - М tuberculosis, пятую - М bovis - в дозе 1мг/мл, шестую - М phlei, седьмую - М smegmatis

- в дозе 10 мг/мл, восьмая группа была контрольной

Животных содержали в течение 90 дней в отдельных боксах блока № 3 Вышневолоцкого отдела ВИЭВ Через 15 дней после заражения была проведена туберкулинизация морских свинок согласно узаконенной методики Убивали животных через 21 и 90 дней после заражения, с последующим вскрытием и взятием патологического материала для гистологических, бактериологических и ПЦР исследований

Во втором опыте использовали 320 морских свинок, которых разделили на группы по 80 голов

Животных первой группы (80 голов) подразделили на 4 подгруппы (по 20 голов) Первой подгруппе ввели культуру М kansasn подкожно в дозе 1 мг/мл, второй - внутрибрюшинно в той же дозе и третьей -интратестикулярно в дозе 1 мг в 0,2 мл физиологического раствора, 4 подгруппа была контролем Аналогичными методами и дозами заразили вторую, третью и четвертую подгруппы морских свинок культурами М fortuitum, М xenopi и М bovis соответственно

Через 10, 20, 30 и 60 дней после заражения убивали по 5 морских свинок, с последующим взятием патологического материала для патоморфологических и бактериологических исследований

В третьем опыте использовали 32 кролика, которые были разделены на 8 групп Первая группа была заражена М phlei, вторая -М smegmatis, третья - M.bovis, четвертая - М tuberculosis, пятая - М avium

- все в дозе по 1 мг/мл. В шестой группе животных заражали Mphlei, в седьмой - M.smegmatis - увеличив заражающую дозу до Юмг/мл, восьмая группа служила контролем Аллергическое исследование было проведено

через 15 дней после заражения, согласно существующей методике

Животных убивали через 21 и 90 дней после заражения, с последующим взятием патологического материала для патоморфологических, бактериологических и ПЦР исследований

В четвертом опыте были взяты 42 курицы, которых разделили на 7 групп и заразили внутривенно в дозе по 1 мг/мл. Первую группу -М phlei, вторую - М smegmatis, третью - М tuberculosis, четвертую -М avium, пятая — контроль Аналогичные две группы кур (шестую и седьмую) заразили десятикратной дозой М phlei и М smegmatis соответственно Через 15 дней после заражения кур подвергли аллергическому исследованию по общепринятым методикам

Птицу убивали через 21 и 90 дней после заражения с последующим исследованием патологического материала патоморфологическим, бактериологическим и ПЦР методами

В пятом комплексном опыте, который провели совместно с аспирантом лаборатории микобактериозов В И Строгановым на 12 козах в возрасте 1 года, животных разделили на 4 группы по 3 головы

Первую группу животных (№ 1,2,3) заразили орально вначале взвесью патологического материала павшей от туберкулеза курицы (печень, селезенка) и павшего кролика (печень, селезенка), которые ранее были заражены культурой М avium (шт. К) Затем через 18 дней каждой козе так же орально ввели взвесь культуры М avium (шт. К) в дозе 1 мг на кг живой массы

Вторая группа (№ 4,5,6) была заражена орально М bovis Сначала каждой козе вводили через зонд суспензию печени и селезенки одной морской свинки, павшей от генерализованной формы туберкулеза и суспендированные печень и селезенку одного кролика с аналогичными поражениями Через 18 дней каждую козу так же орально заражали культурой М bovis (шт «С») в дозе 1 мг на 1 кг живой массы.

Третью группу коз (№ 7,8,9) заражали аналогично М tuberculosis Первоначально взвесью материала павшей от туберкулеза морской свинки (селезенка, печень), ранее зараженной культурой М tuberculosis (штамм H37Rv) Через 18 дней каждая коза была заражена повторно орально этой ' же культурой в дозе 1мг на 1 кг живой массы

Четвертая группа животных (№ 10, 16, 17) была контрольной Животных содержали в отдельных боксах в течение 9 месяцев Одна коза пала через 2,5 месяца, остальные животные убиты по окончанию опыта

Животных в процессе опыта через каждые 30 - 60 дней исследовали пальпебральной туберкулиновой пробой, ППД-туберкулин вводили в нижнее веко глаза, отступя от его края 1,5 - 2 см

Для бактериологического исследования патматериал обрабатывали по методу А П Аликаевой, с последующим посевом на среды ФАСТ-ЗЛ и Левенштейна-Иенсена От 210 животных материал обрабатывала кандидат ветеринарных наук Н Г Толстенко, а от 15 животных - самостоятельно Из этого же центрифугата (при обработке материала по Аликаевой) брали пробы для ПНР - исследований, которые были проведены научным сотрудником М С Калмыковой и кандидатом ветеринарных наук Е П Вангели

При проведении гистологических исследований использовали «Методические указания по патогистологнческой технике» (Москва, 2005) Кусочки органов и тканей фиксировали в 10 % растворе формалина Гистологические препараты были изготовлены методом заливки в целлоидин и парафин В ходе гистологических исследований использовали стандартный метод окраски гематоксилин-эозином, а также сложные окраски на соединительную ткань по Ван-Гизону и по Маллори, на выявление микобактерий в срезах по Циль-Нильсену Работа была проведена при консультативной помощи кандидатов ветеринарных наук О В Якушевой и В С Суворова

2.2. Результаты исследований.

2.2.1. Результаты изучения в динамике патологоанатомических и патоморфологических изменений у морских свинок, зараженных подкожно разными дозами M.phlei, M.smegmatis, M.avium в сравнении , с M.tuberculosis и M.bovis.

На 21 день патоморфологические изменения у морских свинок, вызванные М bovis и М tuberculosis, характеризовались образованием язвы на месте введения, дно которой было покрыто казеозными массами, увеличением регионарных лимфатических узлов, с формированием некроза Селезенка и печень увеличены, с множеством серых милиарных узелков В легких серые бугорки на фоне катарально-гнойной пневмонии Трахеобронхиальные лимфоузлы увеличенные, плотные с участками некроза Гистологически в паренхиматозных органах и лимфоузлах отмечали образование множественных гранулем с центральным некрозом и распадом ядер путем кариорексиса

У морских свинок, зараженных М avium в дозе 10 мг/мл, на 21 день на месте введения находили уплотнение подкожной клетчатки, увеличение регионарного лимфатического узла У одной свинки в селезенке гистологически находили единичные скопления из ретикулярного типа клеток, формирующих гранулему, в печени - пролиферацию клеток Купфера, лимфоидных и ретикулоэндотелиальных в виде мелких . скоплений, в легких - утолщение стенок альвеол за счет пролиферации клеток стромы

У морских свинок, зараженных М phlei, М smegmatis в дозе 10 мг/мл, и убитых на 21 день, на месте заражения обнаружен участок уплотнения, регионарный лимфоузел немного увеличен Только гистологически в печени отмечали не резко выраженную пролиферацию гистиоцитов и

лимфоидных клеток по триадам, в селезенке гиперплазию фолликулов В легких стенки альвеол утолщены за счет пролиферации ретикулярного типа клеток, встречались и небольшие очаги лимфоидной инфильтрации К 90 дню патанатомические и гистологические изменения у животных отсутствовали

Все морские свинки, зараженные М bovis, пали в течение месяца от генерализованной формы туберкулеза Свинки, зараженные М tuberculosis, убиты по окончанию опыта с генерализованной формой туберкулеза У животных, зараженных М avium, кроме некроза в месте заражения, иногда обнаруживали увеличение селезенки, в печени и селезенке находили единичные казеозные узелки

Таким образом, морфологически реакция у морских свинок на заражение Mphlei и Msmegmatis к 21 дню проявлялась пролиферацией ретикулоэндотелиалыюй стромы органы, а с удлинением срока содержания практически исчезала Изменения у свинок, зараженных десятикратной дозой М avium, к 21 дню проявлялись в виде уплотнения в месте заражения, увеличения регионарного лимфатического узла и единичных узелков в печени и селезенке, не имеющие тенденции к усугублению патологии, в отличие от патологии, вызванной М tuberculosis и М bovis

2.2.2. Патологоанатомические и патоморфологические изменения в динамике у морских свинок, зараженных M.kansasii, M.fortuitum, M.xenopi подкожным, внутрибргошинным и интратестикулярным методами.

Изменения у животных, зараженных подкожно нетуберкулезными микобактериями, в начальные сроки были идентичны с минимальной разницей в степени выраженности по видам микобактерий - это уплотнение в месте заражения размером с горошину, незначительное

увеличение регионарного лимфатического узла и селезенки, а иногда единичные узелки в печени

При заражении интратестикулярно на ранних сроках отмечали увеличенный и гиперемированный семенник, в который вводили культуру, увеличенный регионарный правый паховый лимфатический узел, иногда единичные узелки в печени

У свинок, зараженных внутрибрюшинно, иногда в брюшной полости содержалось повышенное количество транссудата, а стенка брюшины и сальник очагово уплотнены В печени и селезенке встречались единичные, милиарные очажки. К 60 дню у большинства животных изменений не обнаруживали У отдельных особей обнаруживали в печени или селезенке единичные узелки В то время как у морских свинок, зараженных М bovis, отмечали характерные туберкулезные изменения во всех органах

Высеваемость культур М xenopi и М kansasn на ранних сроках составляла от 70 до 100 %, а с увеличением сроков содержания снижалась до 4 %

Полученные результаты по сравнению в динамике

патоморфологических изменений в органах морских свинок, зараженных нетуберкулезными микобактериями подкожно, интратестикулярно и внутрибрюшинно, выявили однотипность морфологической реакции В месте введения культур, регионарных им лимфатических узлах и органах отмечены выраженные в разной степени альтеративные процессы с ранним инкапсулированием В печени, селезенке и лимфатических узлах выявлена активация мезенхимальных элементов органов, выраженная в пролиферации ретикулоэндотелиальных клеток. Эти процессы более выражены и дольше сохраняются при интратестикулярном и внутрибрюшинном заражении М kansasn и М xenopi

Отмеченные изменения характерны для хронически текущих воспалений, в том числе и туберкулеза Однако отсутствие склонности к

обострению процесса с формированием дочерних некрозов не позволяет провести полной аналогии с туберкулезной патологией

2.2.3. Патоморфологические изменения у кроликов, зараженных M.phlei и M.smegmatis, в сравнении с зараженными M.tuberculosis, M.bovis и M.avium

Патоморфологические изменения у кроликов, зараженных М phlei и М smegmatis дозой 1 мг/мл были незначительны и мало специфичны, а через 90 дней отсутствовали При увеличении заражающей дозы в 10 раз, к 21 дню в печени находили пролиферацию ретикулоэндотелиальных и лимфоидных клеток по триадам, в легких - единичные лимфомы, в почках лимфоидную инфильтрацию К 90 дню у большинства кроликов изменения редуцировались, а у одного кролика в селезенке находили скопления эпителиоидных клеток, в легких единичные гранулемы, в почках единичные лимфомы, в печени пролиферацию ретикулоэндотелиальных и лимфоидных клеток по триадам Кролики, зараженные М avium, пали от туберкулезного сепсиса, принятого как болезнь Иерсена, в течение месяца Животные, зараженные М bovis, пали с генерализованной формой туберкулеза У кроликов, зараженных М tuberculosis и убитых по окончанию опыта, находили единичные гранулемы в печени, легких и почках и очаги эпителиоидных клеток в селезенке.

2.2.4. Патоморфологические изменения у кур, зараженных M.phlei, M.smegmatis и M.tuberculosis, в сравнении с зараженными M.avium

Куры, зараженные М avium пали в течение месяца от туберкулезного сепсиса Селезенка и печень были резко увеличены, с четко выраженной зернистостью На поверхности легких множественные белые очаги Гистологически структура печени, селезенки и легких плохо просматривалась из-за множественных неограниченных,

конгломерированных гранулем, состоящих из эпителиоидных клеток

При окраске срезов по Циль-Нильсену выявлено обилие микобактерий в цитоплазме.

У кур, зараженных М tuberculosis, в дозе 10 мг/мл на 21 день после заражения отмечено незначительное увеличение селезенки, в легких единичные белесоватые узелки гистологически гранулемы, состоящие из макрофагов, окруженные лимфоидными клетками, без тенденции к распаду К 90 дню данные изменения редуцировались, у 2 кур гистологически находили единичные гранулемы с некрозом и инкапсуляцией в легких, печени и селезенке

В группе кур, зараженных 10 мг/мл М phlei и М smegmatis, к 21 дню после заражения гистологически у 2 особей наблюдали в печени лимфоидную пролиферацию, в селезенке - гиперплазию фолликулов У одной курицы в легком единичные узелки по ходу сосудов, состоящие из макрофагов с некрозом в центре, окруженные лимфоидными клетками

К 90 дню у отдельных птиц при вскрытии обнаружили в печени и селезенке единичные белесоватые узелки Гистологически эти поражения представляли собой некротизированные массы, состоящие из фибрина, и небольшого количества распавшихся кариорексисом ядер Некрозы окружены в одних случаях широкой зоной макрофагов типа эпителиоидных клеток, гигантских клеток с вытянутыми темно окрашенными ядрами Некроз, соприкасающийся с гигантскими клетками,

подвергался рассасыванию путем вакуолизации

Окраска по-Маллори выявила наличие вокруг некрозов мощной соединительнотканной капсулы, фибриноидное пропитывание стенок сосудов

Окраска срезов по Циль-Нильсену выявила наличие кислотоустойчивых палочек

Таким образом, заражение кур Msmegmatis и Mphlei на ранних стадиях вызывает пролиферацию ретикулярной стромы органов в виде утолщения стенок альвеол легких, увеличение количества ретикулярных клеток в селезенке, образование мелких скоплений лимфоидных и гистиоцитарных клеток в печени Чаще эти изменения исчезают с удлинением срока наблюдения Однако у отдельных животных процесс завершается образованием мелких гранулем с некрозом в центре, имеющий сходство с туберкулезной патологией, но без тенденции к усугублению, наблюдаемому при заражении М avium

2.2.5. Патологоанатомические и гистологические изменения у коз, экспериментально зараженных алиментарно M.bovis, M.tuberculosis и M.avium.

Все экспериментальные козы оказались чувствительны к использованным в опыте микобактериям Но степень выраженности патологического процесса была различной

У коз, зараженных М bovis, одна пала, другая убита в агональном состоянии На вскрытии отмечены генерализованный туберкулез с поражением плевры, легких, печени, селезенки и региональных им лимфатических узлов, миндалин, стенки тонкого отдела кишечника с тотальным поражением всех лимфатических узлов брыжейки с образованием лучистого казеоза

Гистологически структура легких едва различима, выявлена тяжелейшая казеозная крупозная пневмония, туберкулезный плеврит, лучистый казеоз лимфатических узлов В легких большая часть альвеол заполнена фибрином и клеточным детритом, границы альвеол едва заметны, множественные некрозы по всему полю зрения с выпотом фибрина и с кариорексисом, не имеющие отложений извести Участки остро текущей крупозной пневмонии соседствуют с катаральным воспалением В очагах поражения отсутствует свойственная хронической туберкулезной пневмонии воспалительная специфическая клеточная реакция отсутствуют гранулемы, эпителиоидные и гигантские клетки В печени и селезенке - множественные гранулемы с центральным некрозом и слабо выраженной или отсутствующей специфической капсулой

У коз, зараженных М tuberculosis, изменения носили более локальный характер Туберкулезные поражения находили в лимфатических узлах, легких, печени, кишечнике, селезенке Гранулемы были ограничены мощной соединительнотканной капсулой

Гистологически в легких отмечали образование гранулем, окруженных фиброзной капсулой и зоной специфической для туберкулеза грануляционной ткани из эпителиоидных и гигантских клеток В центре гранулем некроз с обломками ядер, распадающихся кариорексисом, в некоторых некрозах содержится большое количество извести Участки пневмонии небольшие, вокруг гранулем небольшие участки реактивного воспаления Сохранившиеся участки легочной ткани в состоянии ателектаза

В группе коз, зараженных M.avium, изменения характеризовались наличием мелких, единичных гранулем в легких, селезенке, печени и лимфатических узлах, отграниченные выраженной соединительнотканной капсулой Гистологически гранулемы отличались продуктивностью и перемежались с паразитарными поражениями

Результаты проведенных ПЦР-исследований патологического

материала от коз и лабораторных животных полностью коррелируют с данными патологоанатомических и гистологических исследований.

Выводы

1 Патоморфологически установлена однотипная клеточная воспалительная реакция в месте введения культуры, регионарных лимфатических узлах и паренхиматозных органах, выраженная в развитии катарально-гнойного воспаления в месте введения культуры, пролиферации ретикуло-эндотелиальных элементов стромы в лимфатических узлах, селезенке, легких, печени

2. Степень выраженности компонентов воспаления зависела от патогенности культуры нетуберкулезных микобактерий для данного вида животных, метода заражения, дозы, и во всех случаях не соответствовала туберкулезной патологии

3. Изменения у морских свинок, зараженных Mkansasn, Mfortuitum, М xenopi, различными способами, не имеют тенденцию к распространению, не привели к гибели животного, наиболее выражены при заражении М kansasn и М xenopi внутрибрюшинно и интратестикулярно, чаще встречаются в виде лимфоидной инфильтрации или небольших гранулем, состоящих из макрофагов, окруженных лимфоидными элементами, реже с некрозом в центре, в печени, селезенке легких

4 Заражение кур М smegmatis и М phlei на ранних стадиях вызывает пролиферацию ретикулярной стромы органов в виде утолщения стенок альвеол легких, увеличение количества ретикулярных клеток в селезенке, образование мелких скоплений лимфоидных и гистиоцитарных клеток в печени Чаще эти изменения исчезают с удлинением срока наблюдения Однако у отдельных животных процесс завершается образованием мелких гранулем с некрозом в центре, имеющий сходство с туберкулезной патологией, но без тенденции к усугублению, наблюдаемому при

заражении М avium В поздние сроки отмечены гранулемы, имеющих большое сходство с туберкулезными, наличие в которых кислотоустойчивых палочек в некрозах при окраске срезов по Циль-Нильсену, предполагает определение патогенности этих микобактерий для птиц до установления диагноза на туберкулез

5 Данные проведенных патоморфологических, аллергических, бактериологических и ПЦР исследований в комплексных опытах с использованием различных видов микобактерий предостерегают от преждевременного ложноположительного диагноза туберкулеза

6 Заражением в эксперименте коз М bovis, М tuberculosis и М avium, воспроизведены патоморфологические изменения, характерные для туберкулеза Наиболее тяжелые с выраженным альтеративным компонентом, ведущие к гибели при заражении М bovis, с преобладанием продуктивного компонента воспаления с петрификацией и инкапсулированием некрозов - при заражении М tuberculosis и образованием мелких, единичных, инкапсулированных узелков при заражении М avium

Практические предложения:

1 По окончании срока биопробы рекомендуем в любом случае проведение гистологических исследований В случае гибели морской свинки и независимо от наличия видимых изменений на вскрытии, предлагаем брать регионарные лимфатические узлы, а также кусочки печени, селезенки и легких для гистологических и культурально-морфологических исследований

2 При постановке диагноза на туберкулез птиц учитывать, что обнаружение кислотоустойчивых палочек в некрозах при окраске

срезов по Циль-Нильсену, предполагает определение патогенности этих микобактерий в биологической пробе

3 Использовать результаты исследований в лекциях и семинарах повышения квалификации ветеринарных специалистов, по проблеме туберкулеза и микобактериозов животных

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1 Колоскова Э.Л К оценке патологоанатомических изменений в диагностике туберкулеза/Якушева О В , Суворов В С , Колоскова Э Л //Ветеринарная патология. № 1-2. 2004 С. 79-80

2 Колоскова ЭЛ. О патогенности атипичных микобакетрий для лабораторных животных/ Овдиенко Н П, Косенко В И, Толстенко Н Г, Суворов В С , Якушева О В , Колоскова Э Л // Ветеринарная патология № 1-2 2004 С 150-153

3 Колоскова Э Л Патоморфологические изменения у лабораторных животных, зараженными нетуберкулезными микобактериями/ Колоскова Э Л, Якушева О В , Суворов В С , Толстенко Н Г, Соколова Е.Э // Материалы международной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения Я Р.Коваленко Актуальные проблемы инфекционной патологии и иммунологии животных - М , 2006 С 252

4 Колоскова Э Л Туберкулез коз// Овдиенко Н П, Найманов А X., Осипова Е П, Калмыкова М С , Строганов В И, Толстенко Н Г , Якушева О В , Суворов В С , Степнова С Н , Колоскова Э Л // Материалы международной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения Я Р Коваленко Актуальные проблемы инфекционной патологии и иммунологии животных - М , 2006 С 312

5 Колоскова Э Л О патогенности нетуберкулезных микобактерий для морских свинок и белых мышей//Толстенко Н Г , Колоскова Э Л, Суворов В С, Касьянова Е А, Соколова Е Э // Материалы международной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения Я Р Коваленко. Актуальные проблемы инфекционной патологии и иммунологии животных - М , 2006 С 390

6 Колоскова Э Л Экспериментальный туберкулез коз// Овдиенко Н П , Найманов А X, Якушева О В , Строганов В И , Строганов И В , Суворов В С , Осипова Е П, Калмыкова М С , Толстенко Н Г , Чебан С С, Колоскова Э Л // Мшнародна наук -практ конф «Эпизоот 1 профшактика шфекц хвороб велико1 рогато1 худоби», Тези доповщей, 14-17 березня 2006 року, НАУ, КигВ, Украша, 2006 г,стр 64

7 Колоскова Э Л Результаты патоморфологического исследования подопытных животных, зараженных М рЫег и М яте^тайз// Мпкнародна наук-практ конф «Эпизоот 1 профшактика шфекц хвороб велико1 рогато1 худоби», Тези доповщей, 14-17 березня 2006 року, НАУ, Киш, Украша, 2006 г., стр

Отпечатано в ООО «Компания Спутник+» ПД № 1-00007 от 25 09.2000 г Подписано в печать 25 04 07. Тираж 100 экз Усл. пл 1,38 Печать авторефератов (495) 730-47-74,778-45-60

 
 

Оглавление диссертации Колоскова, Элеонора Леонидовна :: 2007 :: Москва

1.Введение.

2.0бзор литературы.

2.1. Патогенность разных видов микобактерий. для животных и человека.

2.1.1. Микобактерии туберкулезного комплекса.

2.1.2. Нетуберкулезные микобактерии.

2.1.3. Патологоанатомические и гистологические. изменения при туберкулезе.

2.1.4. Экспериментальный туберкулез.

 
 

Введение диссертации по теме "Патология, онкология и морфология животных", Колоскова, Элеонора Леонидовна, автореферат

1.1 .Актуальность темы. Задачи, стоящие в области ликвидации туберкулеза человека и животных, зависят от полноты учета всех возможных источников возбудителя туберкулеза и тесно связаны с видами микобактерий. Проблема видов микобактерий и их патогенетическая роль привлекает все большее внимание медицинских и ветеринарных исследователей (Я.А.Благодарный, 1980; К.А.Туркебаева, Я.А.Благодарный, 1981; Н.П.Овдиенко с соавт., 1990; Т.Ф.Оттен, А.В.Васильев, 2005, и др.).

После открытия возбудителя туберкулеза (Р.Кох, 1882) и установления антропозоонозной природы заболевания встал вопрос о взаимоотношении между восприимчивыми видами животных к туберкулезу.

Заражение туберкулезом людей и животных обычно происходит свойственным для них видом возбудителя, но возможна и межвидовая миграция микобактерий (J.Sigurdson, 1945; B.Devulder, 1966;

A.И.Каграманов, 1967; Я.А.Благодарный, 1972; Д.Д.Новак, 1977;

B.Е.Щуревский, 1980, и др.).

По мере ликвидации туберкулеза сельскохозяйственных животных все более возрастает роль нетуберкулезных микобактерий и различных видов микобактериозов, которые нередко путают с туберкулезной инфекцией (L.StoII, 1972). Это объясняется тем, что при определенных условиях нетуберкулезные микобактерии могут проявлять патогенные свойства (C.Xalabarder, 1961; О.В.Мартма, 1982; Т.Ф.Оттен, А.В.Васильев, 2005, и др.). Установить этиологическую значимость нетуберкулезных микобактерий чрезвычайно сложно. Дискутабельна причастность их к патологическому процессу.

Научными исследованиями доказано клинико-анатомическое своеобразие проявления туберкулеза и микобактериозов у людей, вызванные разными видами микобактерий (К.М.Маскеев, 1972; Е.П.Ченских, 1972; К.А.Туркебаева, Я.А.Благодарный, 1981; Т.Ф.Оттен, А.В.Васильев, 2005). В ветеринарии этот вопрос недостаточно изучен, особенно патологическая анатомия и патогенез. Отсутствуют четкие данные о том, как реагируют животные на микобактерии разных видов, изменяется ли стереотип защитной тканевой реакции при заражении возбудителем несвойственного вида. Незнание этого порождает противоречивые суждения о патологическом процессе, вызванного различными видами туберкулезных и нетуберкулезных микобактерии, недооценку роли инфицированных животных в эпизоотологии туберкулеза и микобактериозов.

С.И. Антипова и соавторы (1987) полагают, что проблема эпидемиологической и эпизоотологической значимости микобактериозов может быть решена с учетом вида микобактерий, так как в организме животных биологическая активность микобактерий разных видов неодинакова (М.П.Зыков, Т.Б.Ильина, 1978; Т.Ф.Оттен, А.В.Васильев , 2005).

Для выявления вирулентности нетуберкулезных микобактерий используют различные виды лабораторных животных, исследователи совершенствуют методы заражения, изменяют реактивность организма животных (О.В.Мартма, Э.И.Тюри, 1968; М.П.Зыков, Т.Б.Ильина, 1978; Е.А.Финкель, Л.В.Михайлова, 1978;Э.И.Тюри и соавт., 1986; Т.Ф.Оттен, А.В.Васильев, 2005; Н.Г.Толстенко, 2006; Б.Киге, К.Ьее, 1984; М.РауЬэ а а1., 1991; А.Баепг а а1., 1985 и др.).

В ветеринарной практике очень важным моментом является определение вида возбудителя туберкулеза. Для этого применяется биологическая проба с использованием морских свинок, кроликов и кур.

Для сокращения срока биопробы, совершенствуют методы и дозы заражения, изменяют реактивность организма животных.

При бактериологическом исследовании с использованием биологического метода иногда обнаруживают узелковые изменения, которые затрудняют определение вида возбудителя туберкулеза. Некоторые исследователи склонны объяснять возникновение таких изменений инфицированностыо животных нетуберкулезными (атипичными) микобактериями.

В последнее время в качестве экспериментальной модели для изучения патогенеза туберкулеза, а также определения специфичности и активности туберкулина используют коз. Если туберкулез крупного рогатого скота изучен довольно полно (Н.А.Налетов, 1949; П.И.Кокуричев, 1953; В.Е.Щуревский с соавт., 1991), то сведения о козах малочисленны и противоречивы.

Исходя из вышеизложенного, изучение патологоанатомических и гистологических изменений у морских свинок, кроликов, кур и особенно коз, является актуальной задачей и представляет значительный научный и практический интерес.

1.2. Целью исследований являлось изучение патологоанатомических и гистологических изменений у морских свинок, кроликов, кур и коз, зараженных в эксперименте разными видами микобактерий.

1.3. Основные задачи исследований: изучить патологоанатомические и гистологические изменения у морских свинок экспериментально зараженных подкожно М.рЫеь МБп^та^Б, М.аушт в сравнении с зараженными М.Ьоу1з, М.шЬегси1оз1з; изучить патологоанатомические и гистологические изменения в динамике у морских свинок, зараженных разными методами М.капзази, М.ГогШкиш, М.хепор! в сравнении с зараженными М.Ьсмв; изучить патоморфологические изменения у кроликов, зараженных М.рЬЫ и М.Бгг^таиз в сравнении с зараженными М.Ымб, МЛиЬегси^Б и М.аушт; изучить патоморфологических изменений у кур, зараженных М.рЫе1, М.Бгг^таиз и М.ШЬегси1оз18 в сравнении с зараженными М.аушт; определить характер и локализацию патологоанатомических и гистологических изменений у коз, экспериментально зараженных М.Ьоу1б, М.шЬегси1оз1з, М.аушт.

1.4. Научная новизна: Показаны в динамике патологоанатомические и гистологические изменения у морских свинок, экспериментально зараженных разными методами М.капзаБИ, М.АэгйпШт, М.хепор1, М.рЫе1, Мяп^тайя и М.аушт в сравнении с М.Ьоу1з и М.ШЬегси1оз18. Показано, что отмеченные изменения, вызванные нетуберкулезными микобактериями, характерны для хронически текущих воспалений, в том числе и туберкулеза. Однако отсутствие склонности к обострению процесса и последующая склонность к редукции не позволяет провести полной аналогии с туберкулезной патологией.

Описаны патоморфологические изменения органов кур, экспериментально зараженных М.рЫе1, М.зп^тайз и МЛиЬегси1оз18, в сравнительном аспекте с зараженными М.аушт. Показано, что у кур, зараженных микобактериями М.рЬЫ, М.8те§та1:18 и МЛиЬегси1о818, к 21 дню развиваются единичные изменения, гистологически сходные с туберкулезными, которые не склонны к прогрессированию и чаще редуцируются с увеличением сроков содержания птицы, в отличие от патологии, вызванной М.аушт.

Описаны патоморфологические изменения у кроликов, зараженных М.зп^таЙБ и М.рЫе1, на 21 и 90 день после заражения в сравнении с М.Ьоу1б, МЛиЬегси1оз18, М.аушт. Показано, что у кроликов, зараженных М.зп^таЙБ и М.рЬЫ, на 21 день возникает неспецифическая реакция в органах, которая чаще исчезает через 3 месяца, в отличие от туберкулезной патологии, вызываемой М.Ьоу1б, М.ШЬегси1оз{8 и М.аушт.

Определен характер и локализация патоморфологических изменений у коз, экспериментально зараженных М.Ьоу1б, МЛиЬегси1о81з и М.аушт соответственно. Показана чувствительность коз ко всем вышеперечисленным микобактериям и выявлена различная степень выраженности патологического процесса.

1.5. Практическая значимость. Результаты исследований включены в «Методические рекомендации по диагностике микобактериальных инфекций у животных», утвержденные директором ВИЭВ, академиком Россельхозакадемии М.И.Гулюкиным 22 марта 2007 г.

1.6. Личный вклад соискателя заключается в организации и проведении опытов на морских свинках, кроликах и курах, патологоанатомических исследований экспериментально зараженных лабораторных животных и коз, а также в приготовлении и изучении гистологических препаратов из тканей и органов животных, сравнительном анализе и обобщении результатов исследований, в подготовке научных публикаций.

1.7. Апробация работы. Материалы работы доложены на Международной научно-практической конференции «Современные проблемы диагностики и профилактики туберкулеза животных» (Москва, 2003 г), на Международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения Я.Р.Коваленко (М., 2006г), Международной научно-практической конференции «Эпизоотология и профилактика инфекционных болезней крупного рогатого скота» (Киев, 2006г.), на заседании ученого совета ВИЭВ (2005, 2006гг.). Основные положения, выводы и практические предложения, изложенные в диссертации, обсуждены и одобрены на межлабораторном совещании научных сотрудников ВИЭВ (2007 г.).

1.8. Основные положения, выносимые на защиту. Полученные экспериментальные данные позволяют вынести на защиту следующие основные положения:

- результаты патологоанатомических и гистологических исследований морских свинок, кроликов и кур, зараженных некоторыми видами нетуберкулезных микобактерий разными методами в сравнении с возбудителями туберкулеза;

- результаты патологоанатомических и гистологических исследований коз, зараженных М.Ьоу1б, МЛиЬегси1оз1з, М.аушт;

- применение результатов сравнительного изучения патологоанатомических и гистологических особенностей у разных животных при заражении туберкулезными и нетуберкулезными микобактериями в дифференциальной диагностике туберкулезе.

1.9. Публикация результатов исследований. По материалам диссертационной работы опубликовано семь научных статей.

1.10. Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 157 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Работа иллюстрирована 57 фотографиями и 7 таблицами. Список литературы включает 236 источников, в том числе 41 иностранных авторов.

 
 

Заключение диссертационного исследования на тему "Патоморфологические изменения у животных, зараженных разными видами микобактерий"

132 5. Выводы.

1. Патоморфологически установлена однотипная клеточная воспалительная реакция на ранние сроки у морских свинок, зараженных разными видами микобактерий в месте введения культуры, регионарных лимфатических узлах и паренхиматозных органах, выраженная в развитии катарально-гнойного воспаления в месте введения культуры, пролиферации ретикуло-эндотелиальных элементов стромы в лимфатических узлах, селезенке, легких, печени.

2. Степень выраженности компонентов воспаления зависела от патогенности культуры нетуберкулезных микобактерий для данного вида животных, метода заражения, дозы, и во всех случаях не соответствовала туберкулезной патологии.

3. Изменения у морских свинок, зараженных М.кшшзп, М.АэгШкит, М.хепорц различными способами, не имеют тенденцию к распространению, не привели к гибели животного, наиболее выражены при заражении М.капзаБп, М.хепор! внутрибрюшинно и интратестикулярно, чаще встречаются в виде лимфоидной инфильтрации или небольших гранулем, состоящих из макрофагов, окруженных лимфоидными элементами, реже с некрозом в центре - в печени, селезенке и легких.

4. Заражение кур М.БП^тайз и М.рЬЫ на ранних стадиях вызывает пролиферацию ретикулярной стромы органов в виде утолщения стенок альвеол легких, увеличение количества ретикулярных клеток в селезенке, образование мелких скоплений лимфоидных и гистиоцитарных клеток в печени. Чаще эти изменения исчезают с удлинением срока наблюдения. Однако у отдельных животных процесс завершается образованием мелких гранулем с некрозом в центре, имеющий сходство с туберкулезной патологией, но без тенденции к усугублению, наблюдаемому при заражении М.аушт. В поздние сроки отмечены гранулемы, имеющих большое сходство с туберкулезными, наличие в которых кислотоустойчивых палочек в некрозах при окраске срезов по Цилю-Нильсену, предполагает определение патогенности этих микобактерий для птиц до установления диагноза на туберкулез.

5. Данные проведенных патоморфологических, аллергических, бактериологических и ПЦР исследований в опытах с использованием различных видов микобактерий подтверждают обязательность комплексного подхода при постановке диагноза на туберкулез и предостерегают от преждевременного ложноположительного диагноза туберкулеза.

6. Заражением в эксперименте коз М.Ьоу1з, МЛиЬегси^э и М.аушт, воспроизведены патоморфологические изменения, характерные для туберкулеза. Наиболее тяжелые с выраженным альтеративным компонентом воспаления, ведущие к гибели при заражении М.Ымб, с преобладанием продуктивного компонента воспаления с петрификацией и инкапсулированием некрозов - при заражении МЛиЬегси1о81з, и образованием мелких, единичных, инкапсулированных узелков при заражении М.аушт.

6. Практические предложения.

1. По окончании срока биопробы рекомендуем проведение гистологических исследований. В случае гибели морской свинки и независимо от наличия видимых изменений на вскрытии, предлагаем брать регионарные лимфатические узлы, а также кусочки печени, селезенки и легких для гистологических и культуральных исследований.

2. При постановке диагноза на туберкулез птиц учитывать, что обнаружение кислотоустойчивых палочек в некрозах при окраске срезов по Цилю-Нильсену, предполагает определение патогенности этих микобактерий в биологической пробе.

3. Использовать результаты исследований в лекциях и семинарах повышения квалификации ветеринарных специалистов, по проблеме туберкулеза и микобактериозов животных.

2.1.5. Заключение

Приведенные литературные данные показывают, что, несмотря на проведение профилактических и оздоровительных мероприятий, проблема туберкулеза человека и животных продолжает оставаться актуальной. В начале XXI века эпизоотическая ситуация в России, проявляя тенденцию улучшения в целом, остается напряженной.

После открытия Р.Кохом в 1882 г. возбудителя туберкулеза человеческого вида, Rivolta в 1889, а затем Strauss и Н.Ф.Гамалея в 1891 г. и Mafucci в 1892 подробно изучили птичий вид туберкулезных микобактерий. В 1896 г. T.Smith описал бычий вид, а спустя 40 лет в 1937 г. Wells обнаружил мышиный вид возбудителя туберкулеза. Однако проблема видов и микобактерий и их патогенетическая роль для людей и животных все больше привлекает внимание медицинских и ветеринарных исследований.

Выделенные виды M.africanum, M.canettii и более 50 видов нетуберкулезных микобактерий свидетельствуют о том, что род микобактерий недостаточно изучен. Нетуберкулезные микобактерии при определенных условиях могут проявлять патогенные свойства для человека и животных. За последние годы установлена этиологическая роль для человека M.avium, M.kansasii, M.battey, M.fortuitum, M.xenopi, M.ulcerance. они вызывают у человека заболевания, клинически не отличимые от различных форм туберкулеза легких.

Микобактерии комплекса аушт-т1гасе11и1аге часто оказываются возбудителями микобактериозов у свиней, а иногда и у крупного рогатого скота. Доказана патогенность этих микобактерий для цыплят.

Однако этот вопрос в ветеринарии недостаточно изучен. Разноречивы данные о реакции животных на микобактерии разных видов. Это порождает противоречивые суждения о патологическом процессе, вызываемом возбудителем туберкулеза несвойственного для животного вида. Если туберкулез крупного рогатого скота изучен довольно полно, то сведения о патологии у других видов животных, обусловленной несвойственным видом или нетуберкулезными микобактериями, малочисленны и противоречивы.

Поэтому, изучение патологоанатомических и гистологических изменений у различных видов животных, включая лабораторных, является актуальной задачей и имеет научную и практическую значимость.

3. Собственные исследования. 3.1. Материалы и методы.

Работа выполнена в период с 2002 г. по 2005 г. в лаборатории микобактериозов Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. Я.Р.Коваленко и на опытной базе острова Лисий Вышневолоцкого отдела ВИЭВ, в рамках Российской научно-технической программы фундаментальных и прикладных исследований по заданию 02.01.01.

Всего было исследовано 466 животных. Патологоанатомическому и гистологическому исследованию подвергнут материал от 374 морских свинок, 32 кроликов, 48 кур и 12 коз. Животные находились в комплексных опытах в лаборатории микобактериозов ВИЭВ с целью изучения патогенности нетуберкулезных микобактерий для лабораторных животных и восприимчивости коз к М.Ьоу1б, МЛиЬегси1оз18 и М.аушт в эксперименте.

Исследования проводили согласно «Наставления по диагностике туберкулеза животных», утвержденного Департаментом ветеринарии РФ в 2001 г.

Все животные были заражены культурами микобактерий, поделены на группы и выдерживались в отдельных боксах на базе Вышневолоцкого отдела ВИЭВ. Всех животных, по истечении нужных сроков, убивали и подвергали вскрытию. От убитых и павших животных брали патологический материал для проведения гистологического, бактериологического и ПЦР исследований. Для бактериологического исследования патологический материал (кусочки печени, селезенки, легких, иногда лимфатических узлов) обрабатывали по методу А.П.Аликаевой, с последующим посевом на среды ФАСТ-ЗЛ и Левенштейна-Иенсена. Материал обрабатывали совместно с кандидатом ветеринарных наук Н.Г.Толстенко. Из этого же центрифугата (при обработке материала по Аликаевой) брали пробы для

ПЦР - исследований, которые были проведены научным сотрудником М.С.Калмыковой и кандидатом ветеринарных наук Е.П.Вангели.

При проведении гистологических исследований использовали «Методические указания по патогистологической технике» (Москва, 2005). Кусочки органов и тканей фиксировали в 10 % растворе формалина. Гистологические препараты были изготовлены методом заливки в целлоидин и парафин. В ходе гистологических исследований использовали стандартный метод окраски гематоксилин-эозином, а также сложные окраски: на соединительную ткань по Ван-Гизону и по Маллори, на выявление микобактерий в срезах по Цилю-Нильсену. Работа была проведена при консультативной помощи кандидатов ветеринарных наук О.В.Якушевой и В.С.Суворова.

Всего провели 5 опытов.

В первом опыте, в соответствии с задачами исследований, изучали в динамике патологоанатомические и гистологические изменения у морских свинок, зараженных подкожно разными дозами М.рЫе1, М.БП^таЙБ и М.аушт, в сравнении, с зараженными МЛиЬегси1о81Б и М.Ьчмб. 54 морские свинки разделили на 9 групп и заразили подкожно. Первую группу - М.рЫе1, вторую - М-зп^таЙБ, третью - М.аушт, четвертую -М.ШЬегси1оз1з, пятую - М.Ымб - в дозе по 1мг/мл, остальные: шестую -М.рЫе1, седьмую - М-Бп^тапв , восьмую - М.аушт в дозе по 10мг/мл, девятая группа была контрольной.

Животных содержали в течение 90 дней в отдельных боксах блока № 3 Вышневолоцкого отдела ВИЭВ. Через 15 дней после заражения была проведена туберкулинизация морских свинок согласно узаконенной методики. Убивали животных через 21 и 90 дней после заражения.

Во втором опыте использовали 320 морских свинок, которых разделили на группы по 80 голов.

Животных первой группы (80 голов) подразделили на 4 подгруппы (по 20 голов). Первой подгруппе ввели культуру М.капБази подкожно в дозе

1 мг/мл, второй - внутрибрюшинно в той же дозе и третьей -интратестикулярно в дозе 1 мг в 0,2 мл физиологического раствора, 4 подгруппа была контролем. Аналогичными методами и дозами заразили вторую, третью и четвертую подгруппы морских свинок культурами М.АэгШкит, М.хепор1 и М.Ьоу1з соответственно.

Через 10, 20, 30 и 60 дней после заражения убивали по 5 морских свинок, с последующим взятием патологического материала для гистологических и бактериологических исследований.

В третьем опыте использовали 32 кролика, которые были разделены на 8 групп. Первая группа была заражена М.рЫе!, вторая - М-Бп^таЙБ, третья - М.Ымб, четвертая - МЛиЬегси1оз18, пятая - М.аушт - все в дозе по 1 мг/мл. В шестой группе животных заражали М.рЫе1, в седьмой -М.БГГ^таЙБ - увеличив заражающую дозу до 10мг/мл, восьмая группа служила контролем. Аллергическое исследование было проведено через 15 дней после заражения, согласно существующей методике.

Животных убивали через 21 и 90 дней после заражения.

В четвертом опыте были взяты 48 кур, которых разделили на 8 групп и заразили внутривенно. Первую группу - М.рЫе1, вторую -М.БГГ^та^Б, третью - МЛиЬегси^Б, четвертую - М.аушт - в дозе по 1 мг/мл, пятая группа была контрольной. Аналогичные три группы кур (шестую, седьмую и восьмую) заразили десятикратной дозой М.рЫе1, М.БГГ^та^Б и М.шЬегси1оз18 соответственно. Через 15 дней после заражения кур подвергли аллергическому исследованию по общепринятым методикам.

Птицу убивали через 21 и 90 дней после заражения.

В пятом комплексном опыте, который провели совместно с аспирантом лаборатории микобактериозов В.И.Строгоновым на 12 козах в возрасте 1 года, животных разделили на 4 группы по 3 головы.

Первую группу животных (№ 1,2,3) заразили орально вначале взвесью патологического материала павшей от туберкулеза курицы (печень, селезенка) и павшего кролика (печень, селезенка), которые ранее были заражены культурой М.аушт (шт. К). Затем через 18 дней каждой козе так же орально ввели взвесь культуры М.аушт (шт. К) в дозе 1 мг на кг живой массы.

Вторая группа (№ 4,5,6) была заражена орально М.Ьоу1б. Сначала каждой козе вводили орально через зонд суспензию печени и селезенки морской свинки с генерализованной формой туберкулеза и суспендированные печень и селезенку одного кролика с аналогичными поражениями, павших после заражения М.Ьоу1з. Через 18 дней каждую козу так же орально'заражали культурой М.Ьоу1з (шт. «С») в дозе 1 мг на 1 кг живой массы.

Третью группу коз (№ 7,8,9) заражали аналогично МЛиЬегси1оз18. Первоначально взвесью материала павшей от туберкулеза морской свинки (селезенка, печень), ранее зараженной культурой МЛиЬегси^Б (штамм Н37Яу). Через 18 дней каждая коза была заражена повторно орально этой же культурой в дозе 1мг на 1 кг живой массы.

Четвертая группа животных (№ 10, 16, 17) была контрольной.

Животных содержали в отдельных боксах в течение 9 месяцев. Одна коза пала через 2,5 месяца, остальные животные убиты по окончанию опыта.

Животных в процессе опыта через каждые 30 - 60 дней исследовали пальпебральной туберкулиновой пробой, ППД-туберкулин вводили в нижнее веко глаза, отступя от его края 1,5-2 см.

Реакцию учитывали через 48 часов после введения туберкулина и оценивали по величине припухлости в месте инъекции препарата в плюсах: + - небольшая припухлость; ++ - выраженную припухлость, +++ -припухлость с грецкий орех, ++++ - припухлость, величиной больше грецкого ореха, иногда с куриное яйцо диаметром не менее 30 мм.

 
 

Список использованной литературы по ветеринарии, диссертация 2007 года, Колоскова, Элеонора Леонидовна

1. Абрамова С.М. Патоморфология генерализованного туберкулеза крупного рогатого скота. Кировобад: 1985, С. 14-18.

2. Авербах М.М. Иммунология и иммунопатология туберкулеза. М.: Медицина, 1976, 312 С.

3. Акулов A.B. Патоморфология и патогенез туберкулеза кур.// Автореф. дисс. . докт. вет наук. М., 1960,180 С.

4. Акулов A.B., Юдин Г.А., Земскова З.С. Морфологические реакции у животных, вызванные кислотоустойчивыми сапрофитами.// Ветеринария, 1967, №9, С. 43-45.

5. Авилов E.H. Инфицированность туберкулезом домашних животных и птиц и ее взаимосвязь с туберкулезом человека.// Проблемы туберкулеза. 1967. №4. С. 20-22.

6. Агзамова P.A. Особенности течения туберкулеза, вызванного бычьим видом возбудителя// Организация противотуберкулезных мероприятий на эпизоотически неблагополучных территориях// Тезисы доклада зонального совещания. Новосибирск. 1987. С. 66 - 67.

7. Александров H.A. Выделение кислотоустойчивых сапрофитных микроорганизмов из некоторых объектов окружающей среды.// Труды Саратовской н.-и. ветеринарной станции. 1967. т. 7. С. 90-95.

8. Александров H.A., Баринов В. Дифференцирующие различия между туберкулами и гранулемами микозной этиологии у телят// Труды саратовской НИВС.1978. т. 12, С. 49 54.

9. Аликаева А.П. Типовая специфичность возбудителя туберкулеза животных и рационализация борьбы с ним// Ветеринария.1950. № 9.

10. Аликаева А.П., Жерносек Т.П. Упрощенный метод типирования туберкулезных культур// Ветеринария. 1950.№ 4. С. 56.

11. Аликаева А.П. Методика исследования кормов, фекалий, почвы и другогоматериала из внешней среды для выявления микобактерий// Бюлл. ин-та ВИЭВ. Вып. 34, методы научных исследований в ветеринарии. - 1979. С. 29-30.

12. Антипова С.И. Бактериологическая диагностика ранних проявлений туберкулеза// Здравоохранение Белоруссии. 1987. № 10. С. 21 -22.

13. Ариэль М.Б. О первичном комплексе при экспериментальном туберкулезе кролика// Архив патологии. 1947. № 3. С. 58 66.

14. Айганов А.Р., Ткалева Л. А. Патоморфология экспериментального туберкулеза телят. В кн.: Система мер борьбы с туберкулезом сельскохозяйственных животных. Новосибирск. 1991. С. 56 62.

15. Ашимова К.К. Патоморфологические изменения у морских свинок, зараженных туберкулезом// Вестник сельскохозяйственной науки Казахстана. 1990. № 8.С. 84 87.

16. Батуро А.П. Особенности туберкулезного воспаления и защитных реакций в зависимости от вирулентности и дозы возбудителя. Автореф. дисс. . канд. вет. наук. Н. 1963.

17. Батуро А.П. Дифференциация атипичных штаммов микобактерий и кислотоустойчивых сапрофитов при помощи внутрикожной пробы на морских свинках.// Проблемы туберкулеза. 1964. № 6. С. 71 74.

18. Белякова О.И., Шлапак Л.Т., Корж Б.А. К вопросу о патогенности резистентных и атипичных микобактерий для кроликов и кур// Проблемы туберкулеза. 1968. № 3. С. 56.

19. Берджи Д. Определитель микробов. Киев. 1936.

20. Определитель бактерий Берджи. 9-е изд. - В 2 т. - М.: Мир, 1997.

21. Бессарабов Б.Ф. Болезни сельскохозяйственной птицы. М.: Колос, 1970. 183 С.

22. Благодарный Я.Р. Туберкулез как антропозооноз. Алма-Ата, 1972. 199 С.

23. Благодарный Я.Р., Хамракулов Р.Ш. Актуальные вопросы проблемы взаимосвязи туберкулеза человека и животных. В кн.: Вопросы борьбы стуберкулезом людей и животных. Ташкент, 1990. С.9 17.

24. Быкова С.Ю. Культурально морфологические свойства М.Ьоу1з и М.аушт при совместном культивировании их с монокультурами и в ассоциации с атипичными микобактериями // ВИЭВ, М. - С. 8.

25. Василенко К.Ф. О миграции возбудителей туберкулеза птиц на крупном рогатом скоте// Ветеринария. 1964. № 3. С.26 28.

26. Василев В. Микобактериозы и микозы легких// София, 1971. Медицина и физкультура. С. 65,202 212.

27. Вейсфейлер Ю.К. Биология и изменчивость микобактерий туберкулеза// Будапешт. Академия наук Венгрии. 1975. С.335.

28. Ветеринарные и медицинские аспекты зооантропонозов. Покров. 2003. ч. 1.ч. 2.

29. Вишневский П.П. Туберкулез крупного рогатого скота. М.: Сельхозгиз, 1935. С. 106.

30. Вишневский П.П. Туберкулез. В кн.: Болезни птиц. Сельхозгиз, 1951, С. 56.

31. Вуль С.М. О диагностическом значении пробы на морских свинках в клинике туберкулеза// Лабораторное дело. 1968. № 7. С. 444.

32. Ганюшкин В.Я., Козин А.И. Распространение и роль атипичных микобактерий в животноводческих хозяйствах// Вопросы ветеринарной микробиологии, эпизоотологии и вет-сан. экспертизы. Ульяновск, 1990. С.29 32.

33. Гаспарян И.Г. Проблемы типов туберкулезной палочки в Узбекистане. -АН Уз. СССР, Ташкент, 1950, С.87 95.

34. Гелетюк В.З. Сравнительное изучение микобактерий, выделенных из торфа и М.аушт// Ветеринария. 1967. 12. С.106 107.

35. Гладков Б.А. Некоторые морфологические и возрастные особенности иммунной системы кур// Диагностика, патоморфология, патогенез и профилактика болезней в промышленном животноводстве. Межвузовскийнаучный сборник. Саратов. 1990. С.132-135.

36. Давыдовский И.В. Общая патология человека. М.: Медицина, 1969. С.40-41, С.398-403.

37. Давыдовский И.В. Учение об инфекции (биологические аспекты проблемы). М.: Медгиз, 1956. С. 107.

38. Донченко A.C., Брижатова В.А., Воробьева Н.И., Савченко Г.А. Усовершенствование биопробы на морских свинках при туберкулезе// Научно-технический бюллетень ВАСХНИЛ, Новосибирск, 1985. Вып.ЗО. С. 30-33.

39. Донченко В.Н., Воробьева Н.И., Донченко A.C. Экология различных видов микобактерий, изолированных от животных их объектов внешней среды, на территории Сибири и Дальнего Востока// Тез. докл. зонального совещания. Новосибирск, 1987. С. 52-53.

40. Домнин Б.Г. Влияние кислотоустойчивых микобактерий на организм крупного рогатого скота// Ветеринария.1967. С. 4, 33 35.

41. Домнин Б.Г. Реакция на туберкулин и патоморфологические изменения у кур и телят, инфицированных кислотоустойчивыми бактериями, выделенными из торфа// Автореф. дисс. канд. вет. наук. Л., 1967, 25 с.

42. Драбкина P.O., Марова М.С. Антигенные особенности и природа атипичных кислотоупорных микобактерий, выделенных от больных туберкулезом // Проблемы туберкулеза. 1965. № 10. С. 63 68.

43. Дрогун А.Г., Пышко И.И., Григорьев М.М. Патоморфологические особенности туберкулеза крупного рогатого скота. В кн.: Современные проблемы профилактики зоонозных болезней и пути их решения. Гродно, 1987. С.86-87.

44. Дыхно И.М. Сравнительное изучение и методы дифференциации туберкулеза микобактерий, атипичных штаммов и кислотоупорных сапрофитов: Автореф. дисс. канд. вет. наук. 1964.

45. Емельяненко П.А. Учение об инфекции и иммунитете. В кн. «Ветеринарная микробиология». М., Колос, 1982. С. 82 138,304.

46. Загородняя Л.И., Калмыкова Г.Н., Тесля Л.М. Типы микобактерий и пораженность туберкулезом// Проблема туберкулеза. 1977. № 5. С. 78 81.

47. Зыков М.П. Всемирное распространение, выделение и классификация микобактерий // ЖМЭИ. 1966. № 4. С. 115 121.

48. Зыков М.П., Ильина Т.Б. Потенциально-патогенные микобактерии и лабораторная диагностика микобактериозов. М.: Медицина, 1978. С. 5, 13, 20-23.

49. Ильина Т.Б. О патогенности так называемых атипичных микобактерий // Проблемы туберкулеза. 1967. № 1. 72.

50. Ильина Т.Б., Данко Ю.Ю. Микобактериозы человека, вызываемые M.xenopi, и источники этих микобактерий// Проблемы туберкулеза. 1983.-№ 11.- 52-55.

51. Иртуганова O.A. Современные возможности микобактериологической лаборатории// Клиническая лабораторная диагностика. М., 2006. № 1. С. 2135.

52. Ищенко Л.А. Связи между типичными и атипичными микобактериями, выделяемыми от крупного рогатого скота// Проблемы туберкулеза. 1973. 10. С. 72-75.

53. Каграманов А.И. О взаимоотношении туберкулеза человека исельскохозяйственных животных // Проблемы туберкулеза. 1968. N° 2. С. 69 -74.

54. Каграманов А.И. Об атипичных кислотоустойчивых микобактериях// Проблемы туберкулеза. 1963. № 7. С. 69 74.

55. Кадочкин A.M., Макаревич Н.М., Ткачев-Кузьмин A.B., Якушева О.В. Потенциально-патогенные микобактерии, выделенные от людей, больных микобактериозами, и их значение для крупного рогатого скота.// Труды ВИЭВ. 1984. С. 61, 62 67, 147.

56. Кадочкин A.M. Изучение атипичных нефотохромогенных микобактерий комплекса avium-intracellulare. Их патогенность для лабораторных животных и КРС: Автореф. дисс. канд. вет. наук. М. 1979. 12 С.

57. Кадочкин A.M., Ткачев Кузьмин A.B. Атипичные микобактерии и их роль в сенсибилизации животных к туберкулину// Бюлл. ВИЭВ. 1983. Вып. 51. С. 50-52.

58. Каримова JI.M. Дифференциация микобактерий на питательных средах. -Омск, 1997. С. 88-91.

59. Кассич Ю.Я., Кочмарский В.А., Завгородний А.И., Григорьев А.Я. Патологоанатомические изменения у баранов, привитых живыми атипичными и убитыми патогенными микобактериями.// Ветеринария (Киев). 1986. №61. С. 11-13.

60. Кельдыбаев С. Распространение туберкулеза среди овец и коз// Ветеринария. 1969. - № 9. С. 38.

61. Клебанова A.A. Частота выделения атипичных вариантов микобактерий туберкулеза// Труды 7 Всесоюзного съезда фтизиаторов. М. 1966. С. 537 -541.

62. Клебанова A.A. Атипичные варианты микобактерий туберкулеза// Лабораторное дело. 1966. № 9. С. 542 545.

63. Киселев B.C. Туберкулез// Инфекционные и инвазионные болезни крупного рогатого скота. М., 1956. С. 87 - 107.

64. Киселев B.C., Аликаева А.П., Якушева O.B. Усовершенствование аллергического метода диагностики туберкулеза коз и свиней// Сб. реф. ВИЭВ.-М., 1960.-Вып. 1.С. 38-40.

65. Клименко М.Т., Гинсбург Т.С., Сокало C.B. Результативность биологического и культурального методов исследования при диагностике туберкулеза// Проблемы туберкулеза. 1987. № 8. С. 70 73.

66. Козлов H.H. О микобактериозах у свиней. В кн.: Достижения науки и практики в области микробиологии и эпизоотологии. Тарту. 1973. С. 155 -158.

67. Кокуричев П.И. Туберкулез сельскохозяйственных животных и меры борьбы с ним. М.: Сельхозгиз. 1954. - 106 С.

68. Кокуричев П.И. О восприимчивости кур к различным типам туберкулезных бактерий// Доклад ВАСХНИЛ. 1957. № 3. С. 45 48.

69. Кокуричев П.И., Судаченков В.В. Об экспериментальном туберкулезе крупного рогатого скота, вызванном микобактериями птичьего типа// Сборник работ Ленинградского вет. института. 1964. в. XXVI. С. 7 14.

70. Кокуричев П.И. Об опасности изоляторов туберкулезного крупного рогатого скота для птиц// Сборник работ Ленинградского вет.института. Вып. XXIII. Л.1964.С.5 -12.

71. Кокуричев П.И. Влияние типа туберкулезных микробов и вида животных на характер патологоанатомических изменений при туберкулезе// Труды Всесоюзной межвузов, научно-методическ. конф. по патанатомии с.-х. животных. Воронеж, 1961. С. 3 11.

72. Кокуричев П.И., Налетов H.A. Патологоанатомическая диагностика болезней крупного рогатого скота. М.: Агропромиздат., 1987. С. 83 - 87.

73. Кондюрин Н.Г., Лакман Э.Д. О чувствительности метода культивирования микроколоний возбудителя туберкулеза при экспериментальном заражении почвы// Науч. тр. Омского вет. ин-та. Омск, 1965. - Т. 23. - Вып. 2. С. 63 -65.

74. Клебанова A.A., Брауде В.И. Изучение динамики морфологических изменений в коже морских свинок для дифференциации кислотоустойчивых микобактерий// Проблемы туберкулеза. 1964. № 6. С. 64 71.

75. Ковалев JI.B., Аликаева А.П., Надточий Г.А. Дезинтегрирующие действие на M.flei и M.paratuberculosis// Труды ВИЭВ, 1975, № 43, с. 181 186.

76. Козулицына П.И. Морфологические реакции в организме морских свинок на введение некоторых ослабленных штаммов туберкулезных микобактерий// Труды инст. туб. АМН СССР. 1957. 9. С. 17-28.

77. Косенко В.И., Павлович J1.A. Изучение этиологии туберкулезоподобных заболеваний у свиней// Ветеринария. 1978. 7. С. 51-53.

78. Красников Г., Харченко А., Наумова Н. Некоторые критерии патогистологической оценки патогенности атипичных микобактерий// Ветеринария. К. 1977. № 46. С. 20 23.

79. Красников Г.А., Харченко А.М., Наумова Н.В. Изучение патогенности атипичных микобактерий по гистологическим изменениям// Ветеринария. 1977. №6. С. 43-48.

80. Красников Г.А., Тертышник В.И., Лисицын В.Н., Черная Л.Д. Количественные методы учета биопробы при определении вида возбудителя туберкулеза.// Ветеринария (Киев). 1986. № 61. С. 7 11.

81. Ксендзов Е.М., Фабрикант П.Х. Течение экспериментального туберкулеза у морских свинок. Минск. 1940. С. 23 - 41.

82. Кривцова А.Е., Туркебаева К.А. Экспериментальный туберкулез у крупного и мелкого рогатого скота// Ветеринария. 1980. № 1. С. 29-30.

83. Кудяков В.Н. Атипичные быстрорастущие микобактерии и их роль в патологии крупного рогатого скота: Авторереф. дисс. . канд. вет. наук. М.,1984. 24С.

84. Кузьмин H.A., Карташова В.М., Исаев M.K. Об идентификации возбудителей туберкулеза// Ветеринария. 1971. № 3. С. 44.

85. Кузяев В.А. Сравнительное изучение патогенности туберкулезных и атипичных микобактерий при пассажах на телятах: Автореф. дисс. .канд. вет. наук. JI, 1972.

86. Лаанес С.Х., Тюри Э.И. Ранние изменения в органах морских свинок при экспериментальном туберкулезе// Проблемы туберкулеза. 1958. № 6. С. 94 -97.

87. Лаанес С.Х., Тюри Э.И. Развитие экспериментального туберкулеза при заражении морских свинок в яичко// Проблема туберкулеза. 1961. № 5. С. 90.

88. Лазовская А.Л., Блохина И.Н. Патогенные и условно патогенные микобактерии. Горький, 1976.113 С.

89. Лазовская А.Л., Смирнова Л.В., Гончарова Т.В. Быстрорастущие микобактерии, вызывающие микобактериозы у людей и животных// Успехи современной биологии. 1989. т. 107. № 1, С. 121 130.

90. Леонтьев И.Ф. Птичий туберкулез у человека// Природа. 1950. № 2.

91. Литвинов В.И., Мороз A.M. Лабораторная диагностика туберкулеза. М. -2001.-203 С.

92. Лотоцкая P.A., Кузнецова Е.Е., Саулите В.М., Зеберга А.К., Илькена Л.Я, Лащетко Е.Л., Фрейдман Б.Н., Залесский P.P. К вопросу о нетуберкулезных микобактериях и микобактериозе // Проблемы туберкулеза. 1979. № 9. С. 58 -61.

93. Макаров В.В., Сафин М.А. Сравнительное изучениепатоморфологических изменений у телят, зараженных различными микобактериями// Ученые заметки Казанского ветеринарного института. 1972. С. 113, 128- 133.

94. Макаревич Н.М. Атипичные микобактерии, методы идентификации, источники выделения, значение в клинике туберкулеза: Автореф. дисс. . докт. мед. наук. М.,1973.

95. Мартма О.В. Патогенность атипичных микобактерий для морских свинок //Ветеринария. 1958. № 3. С. 21.

96. Мартма О.В. Характеристика и патогенность для крупного рогатого скота микобактерий, выделенных из торфа // Ветеринария. 1967. № 6. С. 35 38.

97. Мартма О.В., Лепп Э.Э. О патоморфологических изменениях у лабораторых животных, зараженных атипичными микобактериями. В кн.: Теоретические и практические вопросы ветеринарии. Тарту, 1983. Т.2. С. 16 -20.

98. Мартма О.В. Наследственная устойчивость семейств коров к микобактериозу. В кн.: Теоретические и практические вопросы ветеринарии. Тарту, 1978. С. 186- 187.

99. Мартма О.В., Тяхнас К.К. О возбудителях и течении микобактериоза. В кн.: Туберкулез крупного рогатого скота и меры борьбы с ним// Новосибирск, 1986, С. 96-100.

100. Мартма О.В. Современное состояние проблемы атипичных микобактерий// Ветеринария. 1982. № 5. С. 22 27.

101. Маскеев K.M. Особенности периферического туберкулезного лимфаденита у сельских жителей Казахстана: Автореф. дисс. . д.м.н. М.1972,38 С.

102. Менкин В. Динамика воспаления. Анализ механизмов инфекционных процессов/ Медгиз. Москва - 1948. С. 150 - 158.

103. Молев А.И. Патологические изменения при экспериментальном туберкулезе крупного рогатого скота// Труды института Алтайской СХИ. Барнаул, 1971. Выпуск 25. С. 28-32.

104. Молев А.И. Патоморфологические изменения у крупного рогатого скота симментальской породы при пероральном способе заражения возбудителем туберкулеза// Научные труды Омского ветеринарного института. 1975. Т.31. Выпуск 2. С. 205-216.

105. Найманов А.Х. Аллергическая диагностика микобактериальных инфекций крупного рогатого скота: автореф. дисс. доктора вет. наук. М., 1993. 29 С.

106. ИЗ. Налетов Н.А. Развитие патоморфологических изменений при туберкулезе крупного рогатого скота// Труды 1-й межреспубликанской конференции по вопросам ликвидации туберкулеза и бруцеллеза в животноводстве. Минск, 1959. С. 42-46.

107. Нехотяев М.В. Патоморфология при туберкулезе кишечника у коров// Ветеринария. 1972. № 7. С. 60 62.

108. Никаноров Б.А. Роль возбудителя туберкулеза птиц в эпизоотологии туберкулеза крупного рогатого скота// Ветеринария. 1961. № 6. С.32.

109. Новак Д.Д. Туберкулез сельскохозяйственных животных. Алма-Ата: Кайнар, 1977. С. 142.

110. Овдиенко Н.П. Профилактика и ликвидация туберкулеза крупного рогатого скота// Ветеринария. 1986. № 9. С. 15 20.

111. ОвдиенкоН.П., Косенко В.И., Найманов А.Х. и др. Видовая принадлежность микобактерий, выделяемых от крупного рогатого скота и из объектов внешней среды// Проблемы туберкулеза. 1990. - № 2. С. 46 - 48.

112. Одаренко К.И. О некоторых вопросах микробиологии, типовой принадлежности микобактерий и диагностики туберкулеза сельскохозяйственных животных. Автореф. дисс. . канд. вет. наук. Фрунзе. 1964,21 С.

113. Оттен Т.Ф., Васильев A.B. Микобактериоз. С-П.: Медицинская пресса, 2005. 218 С.

114. Перегудов Е.А. Влияние кислотоустойчивых микобактерий торфа на течение туберкулезной инфекции у кур// Ветеринария. 1967. № 9.

115. Погуляева Л.В., Ильиных Л.А. Выделение и характеристика атипичных микобактерий в неблагополучных по туберкулезу хозяйствах// Ветеринарный реферативный журнал. 1989. № 4. С.34.

116. Поддубский И.П. Методы борьбы с туберкулезом крупного рогатого скота в СССР// Вестник сельскохозяйственных наук. 1957. № 5. С. 67 78.

117. Полетаев С.Д., Коган Н.Д, Блонская Л.И., Введенская Г.М. Клинико-рентгенологические особенности туберкулеза легких, вызванного микобактериями бычьего типа. В кн.: Эпидемиология, клиника и терапия туберкулеза в Казахстане, Алма-Ата, 1963, С.57-61.

118. Попов И.Н., Зельманович П.П. Течение и исход туберкулезного процесса у крольчих, вызванного разными микобактериями туберкулеза// Проблемы туберкулеза. № 1. 1977. С. 75 78.

119. Прокофьева М.Т. Диагностика туберкулеза коз с помощью туберкулина // Ветеринария. 1949. № 10. С. 31.

120. Пузик В.И., Патоморфология начальных форм первичного туберкулеза у человека.// Труды 3-й сессии АМН СССР

121. Пузик В.И. Морфология приобретенной резистентности при туберкулезе. В кн.: Вопросы усиления организации борьбы с туберкулезом и развитие научных исследований во фтизиатрии. М., 1977. С. 141 142.

122. Рабухин А.Е., Макаревич Н.М. Микобактериоз, вызванный М.Аэйикит// Проблемы туберкулеза. 1972. № 10. С. 58 61.

123. Ридала В.И. О морфологических изменениях кожи у крупного рогатого скота на месте введения туберкулина. Труды Всесоюзной межвузовской научно-методической конференции по патанатомии сельскохозяйственных животньгоУВоронеж, 1961, т. 4, С. 23-26.

124. Ридала В.И. О туберкулезе свиней в Эстонской ССР// Труды 2-й Всесоюзной конференции по патанатомии животных. 1964, С. 338.

125. Рокшайн Д.Р. О типовой принадлежности туберкулезных микобактерий при разных формах туберкулеза в Бурятской ССР// Проблемы туберкулеза, 1961, №8, С. 86-91.

126. Ротов В.И., Кокуричев П.И., Савченко П.Е. Туберкулез сельскохозяйственных животных.- Киев: Урожай, 1973. 382 С.

127. Ротов В.И. Савченко П.Е. Степень опасности М.аушт для сельскохозяйственных животных и человека// Проблемы туберкулеза. 1975. №9. С. 72-74.

128. Румачик И.И. Туберкулезные изменения у свиней и их этиология// РК. Минск, 1980.

129. Савченко П.Е. Атипичные микобактерии и их значение в патологиитуберкулеза//Ветеринария. № 39. Киев, 1974. С.6-7.

130. Садиков Э.С., Каримова М.Х., Омонова И.О. Распространенность различных видов туберкулезных и атипичных микобактерий и их значение в эпидемиологии туберкулеза в разных географических зонах Уз.ССР// Труды XI съезда фтизиатров. С. 248.

131. Сапин М.Р., Юрина H.A., Этинген JI.E. Лимфатический узел. М.: Медицина, 1978. С.268.

132. Сафин М.А., Гизатуллин Х.Г., Мазур Б.Л., Галкина Е.Б. Характер туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота, сенсибилизированного атипичными микобактериями// Ученые записки Казанского ветеринарного института. 1972. С. 105 106, 112.

133. Свиридов В.Д., Федорова В.М. Патологические и патоморфологические изменения у телят, инфицированных атипичными микобактериями// Ветеринария. 1987. № 62. С. 25 27.

134. Слепова Р. Специфическая и неспецифическая микрофлора в современной клинике туберкулеза: Автореф. дисс. канд. мед. наук. Казань, 1967.

135. Соколова A.C., Иванова H.A., Красота Л.А. Интратестикулярный метод заражения морских свинок в биопробе при диагностике туберкулеза.// Бюллетень ВИЭВ. 1987. № 64. С.27-31.

136. Соколова A.C., Цапко P.A. Патоморфологические изменения у морских свинок, зараженных M.bovis 8 в различных дозах.// Бюллетень ВИЭВ. 1985. №59. С. 19-20.

137. Солонеко A.A., Руманчик И.И. Микобактериоз свиней. Минск: Урожай, 1988. С. 5.

138. Стериопуло С.С. О туберкулезных бациллах и других кислото- и спиртоустойчивых бациллах и о их взаимном соотношении. Дис.М., 1908. -765 С.

139. Стрельников А.П. Морфология органов иммунной системы кур при инфекционном бронхите// Диагностика, патоморфология, патогенез ипрофилактика болезней в промышленном животноводстве.- И. Саратовского университета, 1990. выпуск II, С.97-98.

140. Струков А.И., Соловьева И.П. Морфология туберкулеза в современных условиях. М.: Медицина, 1976. С. 34 - 38.

141. Суворов Е.А. Наблюдения по миграции атипичных микобактерий в условиях эксперимента лабораторных животных// Сборник научных трудов Куйбышевской научно-исследовательской ветеринарной станции. 1977. выпуск 7. С. 26 28.

142. Судаченков В.В. Экспериментальный туберкулез птичьего вида у крупного рогатого скота// Труды Латвийского НИИ ЖВ. 1963. С. 15, 79 86.

143. Тарасова A.C., Яковлева Т.А., Донченко A.C., Лисиченко Г.М., Сандлер Б.Б. Значение различных видов микобактерий в эпидемиологии туберкулеза// Проблемы туберкулеза. 1987. № 4. С. 44-45.

144. Татарский Н.В., Цигельник А.Я. Смешанная инфекция при туберкулезе легких. Л.: Медицина. Ленинградский отдел, 1968. С. 37 - 39.

145. Ткачев A.B., Кадочкин А.М. Серологическая идентификация атипичных скотохромогенных микобактерий// Бюллетень ВИЭВ. 1983. № 50. С. 24 25.

146. Ткачев-Кузьмин A.B. Роль некоторых видов атипичных микобактерий в сенсибилизации крупного рогатого скота к туберкулинам.// Бюллетень ВИЭВ. 1981. №43. С. 27-29.

147. Толстенко Н.Г. Патогенные свойства некоторых видов микобактерий, выделенных от животных и объектов внешней среды: автореф. дисс. .канд. вет. наук. М., 2006, 27 С.

148. Туркебаева К.А., Благодарный Я.А. Патанатомия туберкулеза млекопитающих и виды микобактерий. Алма-Ата: Кайнар, 1981. С. 118 -221.

149. Туркебаева К.А. Роль атипичных микобактерий в патанатомии туберкулеза. В кн.: Современные вопросы эпидемиологии выявления туберкулеза. Алма-Ата, 1979. С. 70-73.

150. Тырина B.C. Сравнительное изучение различных групп кислотоустойчивых микобактерий и методы их дифференциации: Автореф. дисс. канд. биолог, наук. М, 1969. 20 С.

151. Тюри Э.И., Тюри М.Э. Патогенность различных микобактерий для морских свинок при интратестикулярном и подкожном заражении// Проблемы туберкулеза. 1964. № 10. С. 74 79.

152. Тюри Э.И., Барло А.Э. О чувствительности лабораторных методов диагностики туберкулеза при исследовании больных, леченых фтивазидом// Ученые записки Тартуского университета. Выпуск 171. Труды по медицине. 1965. № 10. С. 10-12.

153. Тюри Э.И. Способ интратестикулярного заражения морских свинок и применения его при определении патогенности атипичных микобактерий: Автореф. дисс. . канд.мед.наук. Тарту, 1966.

154. Тяхнас К.К. О наличии атипичных микобактерий в молоке// Ветеринария. Таллин, 1970. ЮС.

155. Федосеев B.C., Рубцова И.Н., Кириленко Н.Г., Байгазанов А.Н., Мусин А.Ж. Микобактерионосительство у животных как резервуар и источник возбудителя. Новосибирск, 1986. С.51 -56.

156. Филиппов В.В., Смирнов A.M. Экологические проблемы ветеринарной санитарии. В кн.: Экологические проблемы ветеринарной санитарии. -М.1993.С.7.

157. Финкель Е.А., Михайлова JI.B. Биологический метод исследования при туберкулезе. Кыргызстан. Фрунзе, 1976. С. 80 - 89.

158. Финкель Е.А., Михайлова JI.B. Гидрокартизонный метод в биологических исследованиях при туберкулезе. Кыргызстан. Фрунзе, 1978. С. 5-1.

159. Фролов А.Ф., Зарецкий A.M., Фельдман Ю.М. Новые принципы и критерии оценки патогенных и условно-патогенных микроорганизмов// ЖМЭИ. 1986. №9. С. 93-97.

160. Харченко A.M. Патоморфологические изменения у животных приподкожном и внутрикожном заражении патогенными и атипичными микобактериями: Автореф. дисс. канд. вет. наук. Киев, 1986. 24 С.

161. Хазипов Н.З., Сафин М.А., Идрисов Г.З., Туберкулез крупного рогатого скота. М.: Агропроиздат, 1985. С. 52 - 82.

162. Хитрина Г.В. Влияние гиалуронидазы на морфологические реакции при экспериментальном туберкулезе// Проблемы туберкулеза. 1971. № 12. С. 68 -73.

163. Хома-Лемешко A.M. Атипичные пигментные штаммы микобактерий в клинике туберкулеза// Проблемы туберкулеза. 1961. № 3. С. 93 96.

164. Ченских Е.П. Особенности костно-суставного туберкулеза в Казахстане. Автореф. дисс. . докт. мед. наук. М., 1972, 34 С.

165. Чистович А.И. Экспериментальный туберкулез. М.: Медгиз. T.I. С.97 -113.

166. Шоршнев В.И. Изучение кислотоустойчивых бактерий, выделенных из неиспользованного подстилочного торфа// Ветеринария. 1965. № 10. С. 41 -43.

167. Шишков В.П., Налетов H.A. Патологическая анатомия. М., 1980. 332 С.

168. Шишков В.П., Налетов H.A., Якушева О.В. Патогенез и патоморфологиятуберкулеза. В кн.: Туберкулез сельскохозяйственных животных. Под редакцией В.П.Шишкова и В.П.Урбана. М., 1991. С. 64 73.

169. Шмелев H.A., Макаревич Н.М., Дюканова М.А. Поражения легких и лимфатических узлов, вызванные M.avium// Проблемы туберкулеза. 1973. № З.С. 19-23.

170. Щуревский В.Е. Диагностика и организация борьбы с туберкулезом сельскохозяйственных животных. В кн.: Проблемы зоогигиены и ветеринарной санитарии в животноводческих фермах. М., 1970. С. 199 205.

171. Щуревский В.Е., Шаров В.А., Тырина B.C. О туберкулезе свиней// Ветеринария. 1972. № 7. С. 66 68.

172. Щуревский В.Е., Якушева О.В., Шаров В.А., Сычев М.М. Патоморфологические изменения у свиней, зараженных атипичными микобактериями// Бюллетень ВИЭВ. 1981. № 43. С. 30 32.

173. Щуревский В.Е., Овдиенко Н.П., Кадочкин A.M., Кудяков В.И. Быстрорастущие атипичные микобактерии и их значение в патологии крупного рогатого скота// Ветеринария. 1984. № 9. С. 29 30.

174. Щуревский В.Е., Овдиенко Н.П., Кадочкин A.M. Атипичные микобактерии и их патогенность для сельскохозяйственных животных// Ветеринария. 1978. № 4. С. 32 35.

175. Щуревский В.Е., Якушева О.В., Овдиенко Н.П., Шаров В.А. Патологоанатомическая диагностика туберкулеза// Ветеринария. 1980. № 10. С.31-33.

176. Щуревский В.Е. Туберкулез крупного рогатого скота и его взаимосвязь с туберкулезом человека. В кн.: Вопросы взаимосвязи туберкулеза человека и животных. Алма-Ата, 1981. С. 8 13.

177. Щуревский В.Е., Шаров А.Н., Кассич Ю.Я., Мартма О.В. Диагностика туберкулеза. В кн.: Туберкулез животных и меры борьбы с ним. Под редакцией Ю.Я.Кассича. Киев. Урожай, 1990. С. 76- 149.

178. Щуцкая Е.И. О взаимосвязи туберкулеза сельскохозяйственныхживотных, птиц и человека. Организация противотуберкулезных мероприятий на эпизоотически неблагополучных территориях.// Тезисы доклада зонального совещания. 1987. Новосибирск. С. 7 9.

179. Юдин Г.А. Методы дифференциации и сенсибилизирующие свойства различных штаммов микобактерий // Ветеринария. 1966. № 5. С Л 0 13.

180. Юдин Г.А., Якушева О.В. Дифференциация атипичных нефотохромогенных микобактерий и M.avium// Проблемы туберкулеза. 1978. № 3. С. 59-61.

181. Юдин Г.А., Акулов Н.В., Земскова З.С. Патогенные свойства кислотоупорных сапрофитов, выделенных от реагирующих на туберкулин животных// Проблемы туберкулеза. 1968. № 6. С.60 64.

182. Юсковец М.К. К вопросу борьбы с туберкулезом сельскохозяйственных животных//Ветеринария. 1953. № 3. С. 10-17.

183. Юсковец М.К., Тузова Р.В. Заражаемость крупного рогатого скота туберкулезом птичьего типа// Ветеринария. 1960. № 4. С. 29 31.

184. Юсковец М.К. Туберкулез сельскохозяйственных животных и птиц. -Минск, 1963. 444 С.

185. Якушева О.В, Кадочкин A.M. Патогенность микобактерий avium и intracellulare для лабораторных животных.// Бюллетень ВИЭВ.1987. 64. С.49 -51.

186. Якушева О.В. Патологоанатомическая диагностика туберкулеза животных// Труды НИВС. Саратов, 1990. ч.1. С. 123 125.

187. Яначкова Д. Атипичные микобактерии// Труды ВНИХ. София, 1970. С. 412.

188. Bergey's manual of determinative bacteriologiy.- Baltimore, Williams and Wilkins, 1974, 8 ed.- 1246p.

189. Damsker В., Bottone E.J., Schneierson S.S. Заболевания людей, вызванные Mycobacterium bovis (Human Infections with Mycobacterium bovis). Amer. Rev. resp. Dis., 1974. 110.4. С. 446 449.

190. Devulder В. La tuberculose pulmonaire a bacilles bovins dans le nord de la France. Poumon, 1966, 22, 10, 1163 - 1175.

191. Devulder В., Debruyne A., Tacguet A., Gernez-Rieux Ch. Микобактериозы человека, клинические формы и лечение// Труды XXI Международной конференции по туберкулезу. М., 1972. 135 147.

192. Foster Ellen S., Scavelli Thomas D., Greenlee Paul G., Gilbertson Steven H. Cutaneous lesion caused by Mycobacterium tuberculosis in a dog.// J. Amer. Vet. Med. Assoc., 1986,188, № 10, 1188 1190.

193. Grande J.M. Mycobacterium avium// Europ. J. Respir. Dis., 1984, 65, 6, 399 -401.

194. Grunberg B. Tuberc. 1935. -V. 74. № 3. - P. 194.

195. Helm R. Восприимчивость морских свинок к птичьему туберкулезу. (Deutsche tierarztl. Wochenschr. т.42, 1934, № 46, С. 735 736).

196. Janowiec Tierexperimentelle Untersuchungen mit atypischen Mykobakterien// Zeitschrift TBC. 1967. Bd 127. S. 9 12.

197. Kochi Azata, Manager, Bumgarner Richard. Tuberculosis the secret health crisis // Drugs made Jer. - 1993. - 36, № 2, C. 44.

198. Kubica G.P. Classification and nomenclature of the mycobacteria. "Ann. mycrobiol." 1978. A 129. № 1. C. 7 12.

199. Kubica G.R. Comission de bactériologie et immunologie. La Nomenclature actuelle des Mycobacteries. 1978 Bull. Un. Int. Tuberc., 1979, vol. 54, № 2, p.217-223.

200. Kubin M., Svandova E. Soucasnost a perspektivy mykobakteriologicke diagnosticky v Ceske socialisticke republice// Stud. Pneumol. Cechoslov. 1984.-Vol. 44, №7.-P. 435-442.

201. Kuze F., Lee K., Mackawa N., Susuki I. Изучение экспериментального микобактериоза, вызванного атипичными микобактериями (M.fortuitum). -Kekkaku. Gornal Kyoto Iniverti. 1983. 58. № 7. 385 394.

202. Kuze F., Lee К. A study on experimental mycobaterioses provoked by atypicalmycobacteria/ Pathogenicity of Mycobacterium avium-intracellulare complex for mice. Selection of a mouse virulent strain// Kekkaku. 1984. - Vol. 59, № 1. - P. 13-25.

203. Lowrie D.B. Macrofagia and Mycobacterian Infection// Trans Rog. Soc. Grop. Mtd. Hyq. 1983. 77, 5, 646 655.

204. Musak S. Антагонизм между St.aureus и некоторыми быстрорастущими микобактериями// Stud, pneumd. phtisial sech. 1983. 43. № 1, 2,96 102.

205. Nassal J., Breunig W., Schnedeibach U. Atypische Mykobakterien in Obst, Gemüse und Getreide // Prax. Pheum. 1974. 28, 12, C. 667 674.

206. Pavlas M., Ibril J. et. al. Virulence of Mycobacterium johnei in experimentally infected calves// Acta vet. (Brno). 1991. - № 4.- P. 367 - 373.

207. Runyon E. Différenciation des mycobakteries anongmes et des bacilles tuberculosis des momileres Bull. Union. Intern. Tuberc. 1959, 29,1-2, 72-83.

208. Sakatani M. Nontuberculous mycobacteriosis: the present status of epidemiology and clinical studies// Kekkaku. 1999. - Vol. 74, № 4. - P. 377 — 384.

209. Schinsky M.F., Mc Neil M.M., Whithey A.M. et al. Mycobacterium septicum sp. nov., a new rapidly growing species associated with catheter related bacteraemia// Int. J. syst. Evol. Microbiolog. - 2000. - Vol. 50, № 2. - P. 575 -581.

210. Schlisser Th. Atypische Mykobakterien bei Tieren L.Tuberk., 1967, S, 127, 101-108.

211. Schroder K.H. Die problematik atypischen mykobakterien // Klin. Lab. 1992. - 38, № 7, 8, C. 345 - 346/ - нем, рез. англ.

212. Sigurdson J. Studies on the risk of infection with bovine tuberculosis as to the rural population. Tubercle. 1945. 250.

213. Stoll L. Die Anwendung von Sensitiven bei mycobakterien Infektionen des Menschen und der Tiere. Pneumonologie, 1972,146, 4, 269 - 274.

214. Stuart P., Harvey P. Bovine mastitis resembling tuberculosis caused by M.lacticola and other rapidly growing acid-fast bacteria//Vet. Ree. 1951. - 63, 52 -881-885.

215. Tarnok J. Stoffwechsel der mycobakterien// Mycobakterien und mycobakteriella Krankheiten. Jena: Veb Gustav Fischer. Verlag, 1980. — S. 41 — 224.

216. Thorel M.F/ Nuberculose de la chevre. Mise au point et synthese// Les colioques de I INRA Institut national de larcherche agronomique, 1984. 28, C. 551 -556.

217. Tsukamura M., Kita N., Kawakami К. Эпидемиологическое и бактериологическое изучение атипичного микобактериоза в Японии. Kikkaku, 1980, 55, № 6, 273 280.

218. Tsukamura M. Классификация и номенклатура микобактерий. Kekkaku, 1977. 52. №9. 455-457.

219. Veran P. Freguence et gravite de la tuberculose bovine en Loire Atlantigue. -Poumon et Coeur, 1966,22, 10. p. 1157- 1162.

220. Lyon, 1976, 78, 5: С. 273 276 (франц.)

221. Walters О нахождении M.avium в молоке коров// B.t.Wschr. 1933. N

222. Wolinsky Е. Micobacterial diseases osther rhan tuberculosis// Clin. Infect. Dis. 1992.-Vol. 15.-P. 1-12.

223. Xalabarder C. Am. Rev. resp. Dis., 1961, 83,1.

224. Yates M.D., Poznia K.A., Uttloy A.H Isolation of envizonmental mycobacteria from clinical spesiments in South East England: 1973-1993// Int. J. Tuberc. Lung Dis.-1997.-Vol. l.-P. 75-80.