Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:ЭПИЗООТОЛОГИЯ ТУБЕРКУЛЕЗА И БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ МИКОБАКТЕРИЙ, ВЫДЕЛЯЕМЫХ ОТ ЖИВОТНЫХ В КРАСНОДАРСКОМ КРАЕ

ВСЕСОЮЗНЫЙОРДЁЙА ЛЕНИНА ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ВЕТЕРИНАРИИ Всесоюзной ордена Ленина академии сельскохозяйственных наук имени В. И. Ленина

На правах рукописи

ИЩЕНКО Людмила Алексеевна

ЭПИЗООТОЛОГИЯ ТУБЕРКУЛЕЗА И БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ МИКОБАКТЕРИИ. ВЫДЕЛЯЕМЫХ ОТ ЖИВОТНЫХ В КРАСНОДАРСКОМ КРАЕ

(16.00.02 — ветеринарная микробиология)

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Москва —

1&75 г.

ВСЕСОЮЗНЫЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ВЕТЕРИНАРИИ Всесоюзной ордена Ленина академии сельскохозяйственных наук имени В. И. Ленина

На правах рукописи

ИЩЕНКО Людмила Алексеевна

ЭПИЗООТОЛОГИЯ ТУБЕРКУЛЕЗА И БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ МИКОБАК'ГЕРИИ, ВЫДЕЛЯЕМЫХ ОТ ЖИВОТНЫХ В КРАСНОДАРСКОМ КРАЕ

(16.00.02 — ветеринарная микробиология)

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветерннарных наук

, ________Ьи! .

; Л £

Москва —

1975 г,

Работа ШПолйейа в животноводческих ходя Яствах -Красно дарского края и в лаборатории по изучению туберкулёза Краснодарской научно-исследовательской ветеринарной станции (директор —кандидат биологических наук В.'Г. БАРАНОВ).

Диссертация изложена на' 165'страницах машинописи и состоит из введения — 3 стр., обзора литературы—36 стр., собственных исследований—93 стр., обсуждения'полученных результатов— 15 стр. выводов — 2 стр., литературного указателя — 29 стр.

Работа иллюстрирована 19 таблицами, 2 графиками.

В списке использованной литературы содержится 257 наименований работ, из них 32 иностранных.

Научный руководитель — доктор ветеринарных наук, профессор Д- Д. НОВАК.

Официальные оппоненты;

1. Доктор ветеринарных наук, профессор М. М. ИВАНОВ.

2- Доктор ветеринарных наук О. А. ПОЛЯКОВА.

, Ведущее учреждение — Украинский ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии.

Автореферат разослан « % » 1975 г.

■ Защита диссертации состоится ъЛ^^ 1975 г.

на заседании Ученого совета Всесоюзного ордена Ленина института экспериментальной ветеринарии по адресу. 109472, Москва, Кузьминки, ВИЭВ.

Ученый секретарь ВИЭВ кандидат биологических наук В. В. КАЛУГИН.

Решениями XXIV съезда Коммунистической партии Советского Союза по пятилетнему плану развития народного хозяйства СССР на 1971—1975 гг. предусмотрено значительное увеличение поголовья скота при одновременном повышении его продуктивности. Среднегодовой прирост производства молока должен составлять 11,8 млн. тонн, .мяса 2,7 млн- тонн.

Выполнение поставленной задачи будет более успешным при условии ликвидации инфекционных болезней и в частности туберкулеза сельскохозяйственных животных, который представляет особую опасность для крупных молочных ферм и животноводческих комплексов.

Плановые мероприятия, выполняемые в пашей стране, позволили в значительной степени снизить заболеваемость скота туберкулезом, однако эта хроническая инфекция еще имеет место в отдельных зонах и наносит экономический уще^б животноводству. Так, например, в Краснодарском крае только за последние шесть лет по причине заболевания туберкулезом убили 18 тыс. голов крупного рогатого скота, в том числе 10,5 тыс- коров. В проблеме профилактики'и ликвидации туберкулеза крупного рогатого скота особенно важное значение имеет своевременная диагностика этой болезни, которая осуществляется в основном аллергическим методом с использованием сухого очищенного туберкулина и альттуберкулнна.

Исследованиями ряда авторов (Ь, Меуп, 1961; X Ыаэза!, 1961, .1963; Т11. БсГШеввег, 1965; Д. Д. Новак, 1965, 1968, 1973; Г. А; Юдин, 1966, 1973; Г1. И. Кокуричев, 1967; О. В, Мартма, 1967, 1968 н др.) установлено, что у животных в благополуч-ных'по туберкулезу хозяйствах могут наблюдаться реакции на туберкулин для млекопитающих при сенсибилизации нх мико-бактериямн птичьего типа, паратуберкулеза, атипичными мн-кобактериямн н кислотоустойчивыми сапрофптамп- Частота этих реакций в хозяйствах может колебаться в значительных пределах (от 1,6 до 60,2%). В Краснодарском крае причины появления реакций на туберкулин для млекопитающих в благополучных по туберкулезу хозяйствах н возможное значение при этом атипичных и сапрофитных микобактерий не были выяснены-

Вопрос о происхождении атипичных микобактерий остается

еще недостаточно ясным. Р. О, Драбкппа (1937, I9G6), G. Mei-bsner, 1960), Л. И. Каграманов (1972) считают атипичных микобактерий мутантами возбудителя туберкулеза, R. Wayne, 1972; В. Devulder с соавторами (1972) относят их к различным самостоятельным видам.

Недостаточно разработаны достоверные методы лабораторной дифференциации атипичных микобактерий от типичных туберкулезных.

В связи с изложенным перед нами были л оставлены для разрешения следующие вопросы:

выяснить типовую принадлежность микобактерий, выделенных от больных и реагировавших на туберкулин сельскохозяйственных животных и значение атипичных в сапрофитных микобактерий в сенсибилизации крупного рогатого скота на туберкулчлы;

изучить культуральные, морфологические, тннкториальные, биохимические свойства атипичных и сапрофитных микобактерий и их устойчивость к туберкулостатнческнм препаратам в сравнении с типичными туберкулезными;

изучить патогенные н сенсибилизирующие свойства атипичных микобактерий для лабораторных животных и телят;

выявить возможные генетические связи, выделенных нами штаммов, атипичных микобактерий, с типичными туберкулезными микобактернямн и кислотоустойчивыми сапрофитамн.

Материал и методы исследования

Работу выполняли в лаборатории по изучению туберкулеза Краснодарской научно-исследовательской ветеринарной станции, экспериментальном хозяйстве «Северское», а также в биофизической лаборатории ВНИИ—рнса. Исследования проводили в 44 хозяйствах Краснодарского края. С целью выяснения причин, вызывающих сенсибилизацию животных к туберкулину для млекопитающих, произведем убой 527 голов крупного рогатого скота, 25 свиней п проведено лабораторное исследование 310 проб патологического материала от крупного рогатого скота, 6 проб от свиней и 3 пробы от кур.

В работе изучены 88 культур кислотоустойчивых микобактерий, на которых 73 выделили от животных н одну от человека, а также М эталонных штаммов, полученных из Центрального института туберкулеза и ВИЭВ. Диагностический материал подвергали бактериологическому исследованию по общепринятым методикам. Мазки — отпечатки для бактериоскопии окрашивал!! но Цнль-Ннльсеиу. Перед посевом патологический материал в 1970—1971 годах подвергали обработке по методике Гона в модификации Л. П. Алнкаевой (J940), а с 1972—5%-4

ним раствором щавелевой кислоты (Д. Д, Новак, 1968). Посевы выдерживали при температуре 27, 37 н 42°. Тканевой суспензией заражали морских свинок и кроликов из расчета I г ткани в 1 мл физиологического раствора. Гистологическое нс-следования проводили научные сотрудники па то морфологической лаборатории- Краснодарской НИВС.

Для изучения связен атипичных мпкобактерпй с типичными туберкулезными и для выбора наиболее приемлемых методов нх дифференциации нами изучены:

1. Культурально-морфологпческне свойства мпкобактерин;

2. Ферментативные свойства; а) каталазно-перокендазная активность но Богену в модификации Н, М. Макаревнч и Ю. П. Афанасьевой ((968); б) амндазная активность с полным амндным рядом (Бенпке, 1960), дополнительно к которому включили и форм а мид (Нагаяма с соавт., 1964).

3. Бнохемклюмкнесцснция мпкобактернй (К. М. Цон и Л. А. Ищенко, 1974) н ее термостабнльпость при 70°, 100°, 120° и 134°;

4. Лекарственная устойчивость мпкобактерин к ПАСКу, нзонназпду н стрептомицину по общепринятой методике;

5. Образование корд-фактора в мнкрокультурах после посева их в синтетическую среду Курской бнофабрнкн с последующим просмотром через 10—14 дней мазков, окрашенных по Цнль-Нильсену;

6. Патогенные свойства на морских свинках, кроликах, курах, белых мышах н телятах.

Морских свинок заражали подкожно, а кроликов н кур внутривенно в дозах 0,1 — 1 мг/мл культуры. Белых .мышей заражали микобактернямн человеческого и бычьего типов виутрн-брюшинно в дозе 0,5 мг'мл бактериальной массы, а микобактернямн птичьего типа, атипичными н сапрофитными — трехкратно по методу М. М. Дыхно с соавт. (1963).

После заражения за животными пели наблюдение в течение 3-х месяцев. По истечении этого срока животных, оставшихся в живых, убивали и от них отбирали материал для бактериологического и гистологического исследований.

18 морских свинок заражали' ннтратестнкулярио атипичными микобактернямн по 0,2 мг бактериальной массы в каждый семенник (О- В. Мартма, Э. И. Тюрн, 1968). На 20 день после заражения этих самцов убнлн. Кур, зараженных атипичными микобактернямн, убивали через 1, 2, 3 и 4 месяца после заражения.

Телят пяти—шести месячного возраста заражали подкожным введением, 100 мг бактериальной массы следующих мнко-бактернй:

2 теленка мпкобактерпямн туберкулеза бычьего типа

3 теленка мнкобактернями туберкулеза птичьего типа

3 теленка—фотохромогенным атипичным штаммом 16-Ж

3 теленка нефотохромогенным атипичным штаммом № 20

7 телят 3-мя штаммами кислотоустойчивых сапрофитов.

Контролем служили два здоровых теленка такого же возраста^ Экспериментальных телят содержали изолированно в течение 4-х месяцев. Их исследовали туберкулинамн для млекопитающих и птиц, через 30, 80 и 114 дней методом глазной и внутрнкожпой проб. Одновременно вводили безальбумозные аллергены из атипичных мнкобактернй и кислотоустойчивых сапрофитов. Перед каждой туберкулнкпзацией у телят, брали кровь для серологического исследования в РСК и РНГА. Телят, зараженных мнкобактернями бычьего типа, убили через 2 месяца, а остальных животных через 4 месяца после заражения. После убоя их подвергали патологоанатомическому осмотру, а ¡.материал от них — комплексному лабораторному исследованию.

7. Антигенные взаимосвязи изучали в перекрестных аллергических реакциях на телятах, морских свинках и курах с туберкулинамн для млекопитающих и птиц, сенснтниамн из атипичных мнкобактернй и сапрофитов, а также в серологических реакциях — связывания комплемента, непрямой гемагглюти-нации, реакции диффузной преципитации в геле, которую про водили с сыворотками кроликов, пшериммунизнрованных по схеме А. И. Тогуновой н В. М. Должанского (1964).

Для гпиерпммунизации кроликов использовали вакцинный штамм БЦЖ, фотохромогенный штамм 16-Ж, штамм В-2 возбудителя птичьего типа и кислотоустойчивый сапрофит М-рЫег Антигены получали путем дезинтеграции культур мнкобактернй ультразвуком. При изучении связей между типичными и атипичными мнкобактернями, выделенными от крупного рогатого скота, одного штамма, выделенного от человека, сравнивали патогенные свойства атипичных мнкобактернй до их пассажей и после девяти пассажей на восприимчивых жи-с-отных с впрулептнымп туберкулезными. Дополнительно определяли пммукогенные свойства атипичных мнкобактернй.

Собственные исследования Эпизоотические данные по туберкулезу сельскохозяйственных животных в Краснодарском крае

На основании полученных нами данных по изучению эпизоотического состоя ни я 42 хозяйств установили, что 13 хозяйств были неблагополучными по туберкулезу крупного рогатого скота В одном из них туберкулез, вызванный возбудите-6

лем бычьего типа, установили и у свиней. В хозяйствах, где заболеваемость животных туберкулезом достигала свыше 20%, реакции на внутрпкожиое введение туберкулина были хорошо выражены, протекали типично и часто совпадали с наличием положительной глазной пробы. После убоя 286 коров и 6телят, реагировавших на туберкулин, у 105 из них обнаружили выраженный туберкулезный процесс. При бактериологическом исследовании материала от этих животных выделили 31 культуру мнкобактерпй туберкулеза бычьего типа. В остальных 29 хозяйствах, где среди крупного рогатого скота отмечали реакции на туберкулин, при патологоанатом и чес ком вскрытии 235 животных изменений, наблюдаемых при туберкулезе, не обнаружили и бактериологическим исследованием мпкобакте-рнй туберкулеза бычьего и человеческого типов не выделили. У жнвотных этих хозяйств офтальмореакция всегда была отрицательной.

Из 29 хозяйств, в 11 хозяйствах, из лимфоузлов крупного рогатого скота выделили культуры возбудителя туберкулеза птичьего типа, атипичных мнкобактерий и кислотоустойчивых санрофнтов. В колхозе «Октябрь» Кущевского района, колхозе им. Ленина Красноармейского района выделили одновременно культуры мнкобактерпй туберкулеза птичьего типа и атипичных мнкобактерий. В 18 хозяйствах из лимфоузлов от крупного рогатого скота мнкобактерий не выделили. В этих П хозяйствах у животных туберкулиновые реакции были слабо выражены и часто выпадали при повторных исследованиях.

В колхозах и совхозах края по туберкулезу птиц достигнуто эпизоотическое благополучие и в них заболевание птиц туберкулезом регистрируется спорадически- Птицу личного пользования не туберкулез не исследуют. Владельцы содержат переярых птиц. В ряде хозяйств имеется доступ птиц на молоч-но-товариые фермы. Это создает условия для контакта крупного рогатого скота с больной туберкулезом птицей и вызывает сенсибилизацию животных к туберкулпнам.

Туберкулез свиней, вызванный возбудителем туберкулеза человеческого типа зарегистрировали в госплемзаводе «Венцы Заря» Кавказского района. Заражение животных произошло от больных туберкулезом людей. Среди свиноматок на одной ферме процент заражения достигал до 46,7%, а па другой— 28,4% и хряков соответственно 14,8% и 26,2^/0. После изоляции источника инфекции (больных люден), проведения 4—5 тубер-кулшшзацнй с интервалом 30—45 дней п удаления реагирующих животных с последующим проведением ветерпнарно-сани-тарных 'мероприятии хозяйство оздоровили в течение 7 месяцев.

Таким образом, из патологического материала, реагировавших на туберкулгш животных выделил» к типнровали 73 культуры кислотоустойчивых микобактерпй, в том числе:

31 культуру микобактерпй туберкулеза бычьего типа

5 культур микобактерпй туберкулеза человеческого типа

8 культур микобактерпй туберкулеза птичьего типа

2 культуры атипичных фотохромогетшых микобактерпй

2 культуры атипичных скотохромогенных »

6 культур атипичных пефотохромогешшх »

19 кислотоустойчивых сапрофитов.

На основании комплексных исследований установили, что 13 хозяйств (31%) были неблагополучны по туберкулезу крупного рогатого скота и в одном из них выявили туберкулез у свиней, вызванный М. bovis. В 11 хозяйствах (24%) установили сенсибилизацию крупного рогатого скота обусловленную возбудителем туберкулеза птичьего типа и атипичными мнко-бактериямн группы Battey и частично кислотоупорными са-профптамп. В одном хозяйстве, неблагополучном по туберкулезу свиней, заболевание было вызвано возбудителем туберкулеза человеческого типа. На одной ПТФ установили туберкулез кур.

Культуральноморфологические свойства микобактерий

Нами изучены культуралыю-морфологнческне п тннктори-альные свойства 73 штаммов микобактерпй, выделенных от животных, в сравнении с 14 штаммами, полученными нз ЦИ'Г и ВИЭВ, и одного штамма, выделенного от человека, который отнесли к атипичным фотохромогеиньш микробактерням.

Выделенные нами мпкобактерпп туберкулеза человеческого н бычьего типов представляли собой типичные палочки средней длины- Иногда мпкобактерпп туберкулеза бычьего типа, в мазках из первичных культур располагались в виде ветвящихся форм со значительной зернистостью. Возбудитель туберкулеза птичьего типа, в мазках из органов крупного рогатого скота, представлял собой тонкие палочки. В культурах же он принимал коккоподобную форму. В мазках нз органов кур микобактерпй птичьего типа отличались несколько своеобразной формой, в виде запятых, а в культурах—в виде длинных гранулированных палочек. Атипичные микобактерии но морфологическим свойствам характеризовались полиморфизмом. Так в мазках из культур фотохромогенных микобактерий наблюдал» длинные, средней толщины палочки с выраженной зернистостью. Ското — н пефотохромогепные атипичные мпкобактерпп представляли собой короткие и средней S

длины палочки. Для сапрофнтов характерным являлось наличие толстых грубоватых палочек и овоидных форм.

Тппнчпые туберкулезные мпкобактерпи окрашивались по методу Цнль-Нпльсепа в красный цвет. Под воздействием. 0,01%-ного раствора гнпохлорнта, lOVo-iioro раствора сульфата натрия в течение десяти—сорока минут они не обесцвечивались, атипичные мпкобактерпи— приобретали сиреневый цвет, а кислотоупорные санрофиты обесцвечивались почти ИОЛ] гостыо.

Рост возбудителя туберкулеза бычьего тина па твердых средах Гельберга, Левепштенна-Пепсена появлялся на 25— 35 день в виде мелких гладких Серова то-белых колоний. Па средах Стонебрпнка и ПГ-30 (Г- К. Ковалев н Н. А. Александров, 1969) их рост регистрировали на 18—25 день. За месяц роста колонии становились более шероховатыми и крупнее, чем па средах Гельберга и Левенштейна-Йеисепа- При первичном осмотре наиболее удобной оказалась среда Стонебрпнка, TiiK как на синем фоне среды отчетливо выделялись серо-белые колонии. В наших исследованиях лучшими средами для роста возбудителя туберкулеза бычьего типа были среды Стонебрпнка, ПГ-30, а также синтетическая среда Курской бнофабрнки с лимонной кислотой Возбудитель туберкулеза бычьего типа рос в виде изолированных колоний, а затем на поверхности среды образовывалась тонкая пленка. Мпкобактерпи туберкулеза человеческого типа росли па твердых средах в внде сухих шероховатых колоний, появление которых регистрировали на 15—18 день. На жидких питательных средах образовывалась толстая морщинистая пленка. Возбудитель туберкулеза щпчьего типа на твердых средах в первичных культурах рос в виде кольцеобразных колоний с валнксобразнымп краями. Начало роста регистрировали на 10—20 день. В жидких средах рост был мутным, с осадком на дне.

Из восьми штаммов туберкулеза птичьего типа — два росли на среде с толунднновым синим, а одни штамм рос и на мя-сопептонном бульоне. Оптимальной температурой роста для возбудителя туберкулеза бычьего и человеческого типов является 37—38а, Фотохромогепные атипичные микобактернн росли на элективных средах как в внде влажных, гладких, так н шероховатых колоний. Пигмент появлялся только после 10-тн часовой экспозиции на свету. На жидких питательных средах культуры росли в внде хлопьевидного осадка. На ЛША рост в внде мелких скудных колонии наблюдали только у скотохро-могениых культур и у одного штамма из группы нефотохромо-геиных мпкобактерпи. Скорость роста атипичных мнкобакте-рпй (15—20 дней) приближался к скорости роста типичных туберкулезных культур, по в отличие от последних они росли

при температуре 27°. Кислотоустойчивые сапрофнты в отличие от туберкулезных п атипичных микобактернй обладали наибольшей скоростью роста (3—5 дней), росли иа всех специальных твердых и жидких питательных средах и на среде с толунднновым синим, МПА, МПБ.

Сравнительное изучение кулыурально-морфологнческих и тннкторпальных свойств различных микобактернй позволяет идентифицировать их использованными нами методами, от возбудителя туберкулеза бычьего типа, который обладает меньшей скоростью роста п растет только на специальных жидких и твердых средах. Не растет на среде с толунднновым синим, МПА и МПБ и не способен размножаться при температуре 27

Ферментативные свойства микобактернй

Нами исследованы пероксидазно-каталазная, амндазная активность, а также лекарственная чувствительность у 56 штаммов. Наибольшее количество выделенного кислорода при определении каталазной активности нами отмечено у еапрофи-тов. Высота столбика образовавшейся пены была Ьт 100 до 150 мм у кислотоустойчивых сапрофнтов, у атипичных — от 35 до 100 мм и у типичных туберкулезных микобактернй 3— 10 мм.

Пероксидазная активность у 17 штаммов микобактернй туберкулеза бычьего типа, 5-ти — человеческого н 3-х птичьего типа, а также у 2-х фотохромогенпых микобактернй была положительной. У всех же остальных атипичных микобактернй и и кислотоустойчивых сапрофшов .пероксндазная активность была отрицательной. При изучении амндазисй активности получили следующие результаты: микобактерин туберкулеза бычьего типа разлагали мочевину, микобактерин туберкулеза человеческого типа — мочевину и «»котикамид, микобактерин туберкулеза птичьего — ннкотннамнд и пнразннамнд. Из атипичных штаммов, фотохромогепный штамм, выделенный ог человека, разлагал мочевину и ннкотннамнд, т. е. подобно возбудителю туберкулеза человеческого типа. Два других фотохромогенпых штамма, выделенных от крупного рогатого скога, разлагали как и три нефотохромогенпых штамма — никотина-мид, пнразннамнд и мочезпну. Три других нефотохромогенных штамма разлагали только ннкотннамнд и пнразъшамнд.' Ско-тохромогенные штаммы амидов не разлагали. Наибольшей амидазной активностью обладали кислотоустойчивые сапрофпты. Они разлагали значительное количество амидов, но все штаммы разлагали формамид и при этом выделялось от 15 до 39 мкг/мл аммиака. По амидазной активности атипичный

Штамм, выделенный от человека, был близким, к возбудителю туберкулеза человеческого типа.. Восемь штаммов были близкими к возбудителю туберкулеза птичьего типа, хотя 5 нз них дополнительно разлагала мочевину и два были хромогеннымн. Эти штаммы отнесены нами к группе лтичьеподобных.

Из санрофитов М. рЫе! разлагал ацетамид, мочевину, нн-котинамид и пнраминамнд. Из 19 полевых штаммов — 2 отнесены,к М. эп^таНз и один к М. Гог1шЫт. Остальные штаьчмы разлагали амиды по разному и идентифицировать их по амидазной активности не представлялось возможным.

Лекарственная .чувствительность мнкобактерий

Нами проведено определение лекарственной чувствительности к первому ряду противотуберкулезных препаратов с концентрацией тубазида—: 1, 5, 25 мкг/мл, стрептомицина — 5,'10, 50, 100 мкг/мл, ПАСК — 5, 10, 25 мкг/мл. В наших опытах все 18 штаммов возбудителя туберкулеза бычьего типа были чувствительны ко всем трем лекарственным средствам. Пять штаммов возбудителя туберкулеза человеческого типа были устойчивы к ПАСКу. Отмечена частичная чувствительность к стрептомицину в концентрации 50—100 мкг/мл у 3-х штаммов возбудителя птичьего тина, у двух атипичных фото-хромогенных штаммов и у 4-х санрофитов, при этом рост наблюдали только в виде единичных колоний. Все другие штаммы возбудителя туберкулеза птичьего типа, атипичных н сапрофитных мнкобактерий' были устойчивы ко всем трем препаратам, '

• Индуцированная.хемилюминесценция

В настоящее время для получения информации о характере окислительных процессов в биологических системах широко используется обнаруженное Б.= Н, Тарусовым и А. И. Журавлевым (1969) явление сверхслабого свечения, испускаемого клетками животного и растительного происхождения. Сверхслабое свечение живых объектов — процесс, свойственный клеткам аэробных организмов' (Т. Г, Мамедов с соавторами, 1969).; Интенсивность этого свечения колеблется от типа и вида клеток и <может изменяться различными квантометричес-кими установками. Показатели интенсивности свечения не зависят при этом от наблюдателя. Для изучения хемнлюминес-ценции у различных групп мнкобактерий нами проведено исследование окислительных реакций, индуцированных перекисью водорода в биосубстрате. Интенсивность свечения измеряли при помощи квантометрнческой установки, собранной на основе ^фотоумножителя .ФЭУ-42. Фототок усиливался на

П

электронном потенциометре ЭПП-0,9, па котором автоматически регистрировались кинетические кривые свечения, возникающего после добавления к суспензпп мпкобактерин одного мл перекиси водорода в концентрации 10~4 М. Температуру реакционного сосуда поддерживали с помощью ультратермостата.

Следует отметить, что собственное излучение у всех штаммов мпкобактернй оказалось практически одинаковым и равнялось 100 нмп/сек. После добавления перекиси водорода отметили четкое различие: у патогенных туберкулезных культур наблюдали незначительное усиление хемнлюмннесценцип в пределах 120 нмп/сек., у атипичных микобактерии 250— 400 нмп'гсек. В то же время у кислотоустойчивых саирофнтов она превышала 500 нмп/сек. *

Одновременно провели изучение термостабильности хемн-люминесценции после инкубации микобактернй при 70, 100, 120 и 134° в течение 30 минут. При 70° хемплюмпиесценцня была наибольшей у туберкулезных культур н наименьшей у саирофнтов, Атипичные мпкобактерин занимали про межуточное положение. При воздействии температуры в 100°, наблюдали снижение хамелюминесценщш у типичных туберкулезных культур, которая совсем отсутствовала при 120°- У атипичных мпкобактерин хемплюминесценцпи била наибольшей при 120° и уменьшалась при 134°. У кислотоустойчивых санрофнтоа интенсивность свечения была наибольшей при 134°. Эти данные свидетельствуют о различном структурно-функциональном состоянии всей бноснстемы патогенпых и непатогенных микобактернй.

Патогенные и сенсибилизирующие свойства микобактернй

При сравнительном изучении 73 штаммов микобактернй отмечено: типичные туберкулезные мпкобактерин всех 3-х типов при введении в организм морских свинок, кроликов и кур, в дозе 0,1 мг, обладали натогепностью свойственной этим ти-и а м.

Два атипичных фотохромогенных штамма, выделенные от крупного ргатого скота, при внутривенном заражении в дозе 1 мг, вызывали гибель кроликов от бактериального сепсиса. У кур, через 30—45 дней после заражения таким же методом, наблюдали гиперплазию печени, в мазках находили микобактернй. При гистологическом исследовании отмечали отдельные эпптелнондные гранулемы. Через 90—120 дней изменения отсутствовали. Для морских свинок эти культуры были непато-геннымн.

Фотохромогенный штамм (В—И), выделенный от человека, при парентеральном введении морским свинкам приживался в 12

регионарном лимфатическом узле и высевался из него через 30—45 дней. На месте введения культуры возникал абсцесс. Скотохромогенные п нефотохромогенные штаммы атипичных ыикобактерпй, а также кислотоустойчивые сэпрофиты у лабораторных животных и кур, зараженных в дозе 1 мг, видимых изменений не вызывали. При гистологическом исследовании у кроликов в печени {два штамма из шести нефотохромогенных и один из 19 сапрофитов) вызывали образование узелков, состоящих из эпителиоидных и лимфоидных клеток, расположенных преимущественна вокруг кровеносных сосудов. Подобные изменения обнаружили у морских свинок, зараженных мнтра-тестикулярно атипичными мпкобактернями. Для белых мышей атипичные микобактерки оказались патогенными только после однократного внутрибрюшинного и двукратного внутривенного введения культуры в дозе 0,5 мг. Наиболее часто изменения в форме мелких сероватых продуктивных узелков находили в селезенке п легких. Кислотоустойчивые сапрофиты для белых мышей были непатогеннымп. '

Атипичные фото н — нефотохромсгенчые микобактерии сенсибилизировали организм морских свинок и кур к туберкулп-нам для млекопитающих и птиц. Реакции были более выраженными к туберкулину для птиц и к гомологичному аллергену. У морских свинок и кур, зараженных атипичным штаммом, выделенным от человека, наступала выраженная сенсибилизация к туберкулину для млекопитающих и медицинскому,

Скотохромогенные атипичные микобактерии и кислотоупорные сапрофиты сенсибилизирующими свойствами не обладали, за исключением двух штаммов сапрофитов.

В опыте на 18 телятах, зараженных подкожно в дозе по 100 мг бактериальной массы, получены следующие результаты: возбудитель туберкулеза бычьего типа у двух телят через два месяца после заражения вызывал образование типичных туберкулезных гранулем б различной стадии развития в сре-достениых и бронхиальных лимфоузлах. Часть из них представлена эпнтелноиднымп и гигантскими клетками, другие были продуктивно-экссудативпымн, а некоторые в состоянии казеоз-ного распада.

У телят, зараженных возбудителем птичьего туберкулеза, через 4 месяца после заражения при вскрытии находили в заглоточных и брыжеечных лимфоузлах инкапсулированные очажки с творожистым содержимым в центре, из которых выделили исходные культуры.

Атипичные фото и — нефотохромогенные микобактерии и кислотоупорные сапрофиты для телят оказались неиатогенны-м и,

Офтальмореаюшя у всех экспериментально зараженных те-

лят была отрицательной. Телята, зараженные микобактериями туберкулеза бычьего т>ша, реагировали через 30 и 60 дней только на внутрнкожное введение туберкулина для млекопитающих (срок наблюдения). Отечность была размером 140Х Х120 и 70X40 мм, с утолщением кожной складки до 21 мм. Телята, зараженные возбудителем туберкулеза птичьего типа, атипичными фото — п нефотохромогеннымн микобактериями, реагировали на туберкулин для млекопитающих и птиц, на гомологичный аллерген и сенситнн из сапрофитных мпкобакте-рнй. Реакции на туберкулин для млекопитающих сохранялись до 80 дней, на гомологичные аллергены реакции сохранялись до 116 дней. Из 7 телят, зараженных различными штаммами кислотоустойчивых сапрофнтов, на типовые губеркулины реагировали только три теленка, зараженные штаммом № 10' Припухлости были твердыми, безболезненными, размером )0Х 15 мм, 15X20 мм. Через 80 дней эти реакции выпали.

Антигенные связи атипичных микобактерин и кислотоустойчивых сапрофнтов с микобактериями туберкулеза

Для боЛее полного изучения антигенных связей атпппчных микобактерий с типичными туберкулезными микобактериями нами использован иммунобиологический метод, н в частности, реакции непрямой гемагглютинацин, связывания комплемента и диффузионной преципитации в агаровом геле. Всего взяли в опыт 16 штаммов мнкобактерий туберкулеза бычьего, человеческого, атпппчных птпчьеподобных н кислотоустойчивого сапрофита М. рЫек

Результаты исследования сывороток, полученных от морских свинок н телят, в РИГА и РСК показали, что сыворотки крови телят, зараженных различными микобактериями, реагируют с гомологичными антигенами в разведениях 1 :64 и 1 : !28, с гетерологлчными I : 8 и 1 ; 16. С туберкулезными антигенами, из микобактерин туберкулеза человеческого и бычьего типов, сыворотки ог животных, зараженных микобактериями туберкулеза птичьего типа давали тптры ниже на одно, два разведения в сравнении с гомологичным. Наибольшую антигенную близость имеют фотохромогенные атипичные микобактерин, выделенные от крупного рогатого скота, с возбудителем туберкулеза птиц. Как атипичные микобактерин, так и кислотоустойчивые сапрофнгы далеки в антигенном отношении ог возбудителей туберкулеза человеческого и бычьего типов. Это положение подтвердила п РДП в геле.

К туберкулезному антигену образовалось две прецппита-цпонпые лннпн с гппернммунпон сывороткой БЦЖ н одна сла-14

бая лшшя преципитации с гнпернммуниой сывороткой атипичного фотохромоген кого штамма. К антигену пз возбудителя туберкулеза птичьего типа наблюдали три четко выраженные липни преципитации как с гомологичной сывороткой, так п с сывороткой птнчьеподобного атипичного штамма и чуть заметную линию преципитации с сывороткой кислотоустойчивого сапрофита M. phîeï.

К антигену из кислотоустойчивого сапрофита M. phlei наблюдали одну толстую линию преципитации, только с гомологичной сывороткой.

Родственные связи между атипичными и типичными туберкулезными микобактериими .

Использование тестов но оценке культурально — морфологических, биохимических свойств, а также антигенной связи дало возможность предположить о близости некоторых атипичных мнкобактернй к туберкулезным. Для подтверждения этого положения нами дополнительно проведено исследование путем сравнительного научения патогенных свойств атипичных мнкобактернй после 9 пассажей на восприимчивых животных с типичными туберкулезными. Два фотохромо-генных штамма близких к возбудителю туберкулеза птичьего типа и один иефотохромогенный пассажпровали на курах. Атипичный фотохромогениый штамм, выделенный от человека, близкий по своим свойствам к возбудителю туберкулеза человеческого типа, пассажировалн в течение того же времени ira морских свинках. Патогенные свойства их заметно усилились. Атипичный штамм, выделенный от человека, через 9 пассажей стал вызывать у кроликов образование в легких единичных туберкулезных"очажков, чего раньше не наблюдали. Пассированные штаммы атипичных птичьеподобных мнкобактернй стали вызывать у кур продуктивные реакции в печени, в виде очаговых, реже диффузных пролифератов эпн-телнондных, гигантских и лнмфондных клеток, в отдельных случаях с некрозом в центре. Типичные мнкобактернй туберкулеза птичьего типа вызывали у кур дисснмннированный ту-туберкулез с образованием различных по величине туберкулов. Гигантские и эпителноидные клетки окружали казеоз-ную массу в виде частокола. У морских свинок пассированные штаммы, за исключением нефотохромогеиного штамма, вызывали в регионарных лимфоузлах гиперплазию н некроз ткани с гнойным'расплавлением. В органах морских свинок эти штаммы стали вызывать однотипные морфологические изменения с наибольшей выраженностью на 21 день. Эти из-

мснспия характеризовались наличием в легких очагов ацн-познон гшевмоили п лнмфопдиоэпителпондных гранулем с них, а также в бронхиальных лимфатических узлах, печенп п селезенке. Изменения исчезали на 36—42 дни сначала в селезенке н лимфоузлах, а затем в легких.

В органах морских свинок, зараженных мпкобактернямп туберкулеза птичьего типа, подобные патоморфологические изменения наблюдали в те же сроки, однако они были более выраженными с наличием распавшихся клеток в центре гранулем. Аллергическая реакция ка туберкулин для птиц стала более выраженной. Титр антител в РСК увеличился на одно—два разведения.

Таким образом, морфологические изменения, вызванные у кур, морских свинок и кроликов пассированными атипичными мпкобактернямп дополнительно подтверждают их близость к возбудителю туберкулеза птиц и находят свое выражение в аллергических реакциях на туберкулин.

ВЫВОДЫ '

1. В хозяйствах Краснодарского края в этнологии туберкулеза крупного рогатого скота основную роль играет возбудитель' туберкулеза бычьего типа.

2. В 24% проверенных хозяйств отмечена сенсибилизация крупного рогатого скота, обусловленная возбудителем туберкулеза птичьего типа и атипичными микобактернямн из группы птнчьеподобных- Эта сенсибилизация длится непродолжительное время, У экспериментально зараженных телят этими микобактернямн, выраженные аллергические реакции на внутрпкожнее введение туберкулина для млекопитающих сохраняются только до 80 дней, а па гомологичные аллергены — до 116 дней.

3. Большинство штаммов кислотоустойчивых сапрофитов не сенсибилизируют организм крупного рогатого скота и только некоторые из ннх вызывают слабовыраженные реакции, сохраняющиеся до 30 дней.

4. От больных туберкулезом свиней выделены возбудители бычьего н человеческого тппов, последний при контакте свиней с больными людьми иногда приобретает широкое распространение (46,69'/*).

5. Культуралыю-морфологнческне .тннкторпальпые, патогенные свойства н лекарственная чувствительность позволяют дифференцировать атипичных мнкобактерпй только ог возбудителя туберкулеза бычьего типа. Для дифференциации от других тппов туберкулеза необходимо дополнительно определять каталазную и ампдазную активность.

6. Применение метода хемплюмппесцепшш, индуцированной перекисью водорода, позволяет дифференцировать патогенных мнкобактерин от непатогенных и указывает на различную структуру бпоспстемы этих мпкобактерий.

7. Прп многократном пассированнн через организм кур (до 9 пассажей) атипичные птпчьепсдобные мнкобактерин, выделенные от крупного рогатого скота, усиливают свою па-тогенностъ и вызывают патологические изменения у кур и кроликов.

8.Выделе:чше от крупного рогатого скота атипичные пгичьеподобные мнкобактерин имеют антигенные связи С возбудителем туберкулеза птиц. Эти данные с учетом культура л ьно-морфологических, биохимических п патогенных свойств позволяют предположить наличие генетической близости между этими мпкобактериями,

ПРЕДЛОЖЕНИЯ

При дифференциальной диагностике реакций на туберкулин для млекопитающих у крупного рогатого скота для исключения туберкулеза, вызванного возбудителем бычьего типа необходимо:

1- При отсутствии на зскрытпн латологоанатомическнх изменений — применить симультанный тест (введение в кожу с одной стороны туберкулина для млекопитающих и с другой стороны — туберкулина для птиц), с последующим лабораторным исследованием материала из лимфатических узлов и органов убитых с диагностической целью реагирующих жпвот-1 [ы х:

2. У выделенных микобактернй изучить культурально-мор-фологнческне, тпнкториалыгые, патогенные свойства и амндаз-ную активность.

Слисок работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Связи между типичными [I атипичными микобактсрнями, выделяемыми от крупного рогатого скога. Проблемы туберкулеза, 1973, 10, 72—75.

2. Хемплюмннесцентныи метод дифференциальной диагностики мнкобактерин.

В кн. «Биофизика растений». Материалы первого всесоюзного симпозиума по молекулярной и прикладной биофизике растении. 1974, 196—¡97 (в соавторстве с К- М.Цон).

3. Оздоровление племенного хозяйства от туберкулеза свиней, вызванного мпкобактериями человеческого типа. Сборник

научиых трудов Северо-Кавказского зонального НИВИ. 1975, 02—05 (в соавторстве).

4. Характеристика микобактерии, выделенных в Краснодарском крае от животных, положительно реагировавших на туберкулин. Сб. научных трудов Северо-Кавказского зонального НИВИ. 1975, 65—68.

5. Материалы к изучению антигенных- взаимосвязей атипичных микобактерии с другими представителям рода. Сб. научных трудов Северо-Кавказского зонального НИВИ. .1975, 68—70. * -

6. Амидазная активность микобактерии. Сб. научных трудов Северо-Кавказского зонального НИВИ, 1975, 70—72.

7. Исследование индуцированной хемнлюмннесценции микобактерии. Сб. научных трудов Северо-Кавказского зонального НИВИ. 1975, 72—74 (в соавторстве).

Материалы диссертации доложены;

1.. На зональной межвузовской конференции, посвященной памяти первого ректора Донского ветеринарного института профессора Н. Н. Мари, в 1972 году.

2. На научной конференции профессорско-преподавательского состава Воронежского сельскохозяйственного института, посвященной 50-летпю образования СССР в 1973 году.

3. На ученом совете Краснодарской НИВС, в 1972, 1973, 1975 г.г.

Ответственный за выпуск доктор ветеринарных паук, профессор Д. Д. НОВАК.

Зак. 632 Тир, 150

Типография Московской ордена Трудового Красного Знамени цетерикарнои академии им. К. И. Скрябина