Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Стрептококкозы свиней

1 е.- ™ ',) (1 ч - -

ВСЕСОЮЗНЫЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ

ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ВЕТЕРИНАРИИ

имени Я.Р. КОВАЛЕНКО

На правах рукописи

ПАНИН Александр Николаевич

СТРЕПТСКК0К03Ы СВИНЕЙ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, зпизотология, микробиология и иммунология

Диссертация на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук в Форме научного доклада

Москва - 1992

Работа выполнена во Всесоюзном государственном научно-контрольном институте ветеринарных препаратов

Официальные оппоненты

1. Доктор ветеринарных наук, профессор Лучко М.А.

2. Доктор ветеринарных наук, профессор Сидоров М.А.

3. Доктор ветеринарных наук Куликовский A.B.

Ведущая организация - Московская ветеринарная академия им. К.И.Скрябина

Защита диссертации состоится 1992 г.

в 4¿j часов на заседании специализированного совета Д.020,28.01 по защите диссертаций на соискание'ученой степени Доктора ветеринарных наук при Всесоюзном ордена Ленина научно-исследовательском институте экспериментальной ветеринарии им. Я.Р.Коваленко (109472, Москва, Кузьминки, ВИЭВ).

С диссертацией в форме научного доклада и опубликованными работами можно ознакомиться в библиотеке института.

Диссертация разослана "5 " куСС^О^Р И, Q 1992 г.

Ученый секретарь специализированного совета, к.вет.н.

Ф.Г.Терешков

г.'-.'СХ'Ш

!

»1

' Б Щ A Я ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблем. Снижение потерь животных от инфекционных болезней, среди которых в последние годы значительно возрос удельный вес стрептококкозов, является одной из актуальных проблем ветеринарной науки и практики.

Наши исследования посвящены изучению стрептококкозов свиней.

Стрептококк впервые описан как возбудитель гнойных процессов Т.Бильротом еще в 1874 году. В наши дни основными, уже известными болезнями свиней, вызываемыми стрептококками и имеющими существенную эпизоотическую значимость являются артрозо-ар-трит (Андреев П.Н., Андреев К.П., 1954; Collier J.R. , Но el J., 1971); менингоэнцефалит ( Lamont м.н. с соавт., 1980;ciirton-Hadley P.A., Alexander T.J.L. , 1981); лимфаденит ( Woods K.D., Ross R.F. , 1977); септицемия ( Rissing H.J. с соавт., 1976); метрит, мастит, агалактия ( Robs r.f. с соавт., 1981); Williams А.Е. , Blaokmore W.F. , 1990).

В неблагополучных по стрептококкозу хозяйствах могут заболевать артрозо-артритом до 30, а менингоэнцефалитом - до 70$ поросят. Летальность при этом достигает 70-80$. Кроме того, у поросят в подсосный период переболевших артрозо-артритом масса тела при отъеме на 14-20$ ниже, чем у здоровых. Свиньи, болеющие стрептококковым менингоэнцефалитом, в дальнейшем оказываются нежизнеспособными.

Таким образом, при стрептококкозах, помимо прямого ущерба вследствие гибели больных животных, затрат на проведение лечебных и оздоровительных мероприятий, значительны и косвенные потери, обусловленные уменьшением привесов и потерей переболевшими животными племенной ценности.

Велика и социальная значимость стрептококков. Больные стрептококковом животные и продукты их переработки являются источником возбудителя инфекции для человека, часто имеющей летальный исход.

Некоторые стрептококкозы безусловно должны быть отнесены к группе зоонозов.

После выделения в 1883 г. стрептококков в чистой культуре для их систематизации предлагался целый ряд критериев.

К настоящему времени существуют две классификации. В соответствии с одной из них, основанной на ферментативных свойствах микроорганизмов, насчитывается 21 вид стрептококков. Согласно другой, базирующейся на антигенной структуре, существует более 20 серологических групп стрептококков, обозначенных заглавными буквами латинского алфавита ( 1апсеПе1(1 н.э. , 1933). Классификация, основанная на антигенной структуре, становится превалирующей и заменяет видовые наименования стрептококков.

Эпизоотическая значимость стрептококков'различных серологических групп в подавляющем большинстве стран изучена недостаточно, что объясняется как недооценкой значимости проблемы, так и отсутствием коммерческих диагностических сывороток, необходимых для идентификации изолятов стрептококков.

В ветеринарной отчетности в СНГ (СССР) стрептококкозы как нозологические единицы не учитываются. Все еще остаются неизу-. ченными этиологическая структура стрептококкозов свиней и животных других видов, зависимость клинических проявлений болезни от серогрупповой принадлежности возбудителя. Недостаточность знаний этиологии заболевания не позволяла предложить и эффективные средства для специфической профилактики инфекций, вызываемых стрептококками различных серологических групп.

Цель работы - изучить распространенность и этиологическую структуру, разработать средства и методы диагностики и специфической профилактики стрептококкозов свиней.

Основные задачи исследований:

- изучить эпизоотическую ситуацию по стрептококкозам в свиноводческих хозяйствах;

- изучить свойства стрептококков, выделенные от свиней;

- изучить зависимость клинических проявлений стрептококко-зов у свиней от серогрупповой принадлежности возбудителя;

- выделить и селекционировать штаммы стрептококков для изготовления специфических диагностических и профилактических препаратов;

- разработать средства и методы идентификации стрептококков;

- разработать средства специфической профилактики стрептококкозов;

- разработать систему мероприятий по борьбе со стрептокок-козачи свиней.

Научная новизна. Установлено, что на территории СНГ (СССР) среда свиней.циркулируют стрептококки серогрупп В, С, Д, Е, G, L, P,'-v , а также серотипы 2, 3, 4, 5, 7, 8, 10 Streptococcus suis.

Установлено, что наибольшую эпизоотическую значимость тлеют стрептококки серологических групп С, R ( Streptococcus suis , серотип 2), Д., L, G.

Сформулировано положение, что свинья как вид животных является одним из основных хозяев стрептококков Си я в природе.

Выделены и селекционированы производственные штаммы стрептококков серогрупп С и R для изготовления диагностических сывороток и вакцины против стрептококкозов свиней.

Дано научное обоснование системы мер борьбы со стрэптокок-

козами, основанное на знании взаимосвязи клинических и патолого-анатомических проявлений стрептококкозэв и серогрупповой принадлежности возбудителя.

Научная новизна работы подтверждена авторскими свидетельствами:

- Ji 1240053 "Штамм бактерий Streptococcus zooepidemicus, используемый дня изготовления диагностических и профилактических препаратов против стрептококкоза свиней";

- ¡i 1293883 "Способ получения вакцины для профилактики стрептококкоза С свиней";

- JS 1390837 "Способ получения сыворотки против энтерокок-ковых (дшыококковых) заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных";

- Л I4I2283 "Питательная среда для культивирования бактерий вида Streptococcus faecalis ";

- J£ I4I2284 "Питательная среда доя культивирования бактерий вида Streptococcus faecalia

- № I55436I "Штамм, бактерий Streptococcus suis , type 2 серогруппы R, используемый доя изготовления диагностикума";

- В 1564789 "Способ изготовления вакцины даш профилактики стрептококкозов свиней".

Практическая значимость. Разработана и внедрена вакцина депонированная против стрептококкозов свиней (серогруппы С и"), Разработана новая технология изготовления сыворотки против энте-рококковой инфекции сельскохозяйственных животных.

Предложена и внедрена система мер' борьбы со стрептококко-зами свиней, включающая:

- лабораторную диагностику стрептококкоза, обеспечивающую идентификацию возбудителя до серогруппы;

- применение средств специфической профилактики и лечения стрептококкозов, соответствующих их этиологической, структуре;

- проведение оздоровительных ветеринарно-санитарных мероприятий в неблагополучных хозяйствах..

Перечисленные мероприятия узаконены соответствующими документами, утвержденными Главным управлением ветеринарии.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на конференциях и симпозиумах:

- Всесоюзной научной конференции "Разработка, апробация и государственный контроль ветеринарных препаратов", Москва, 1981 г;

- Всесоюзной научной конференции "Актуальные вопоосы эпизоотологии", Казань, 1983 г;

- Всесоюзной конференции "Эпизоотология, эпидемиология, средства Диагностики, терапии и специфической профилактики посекционных болезней, общих для человека и животных", Львов, 1988 г;

- рабочей комиссии ОНКвет. по эпизоотологии и профилактике инфекционных болезней, Москва, 1989 г;

- ХПУ Всемирном ветеринарном конгрессе, Рио-де-Канейрэ, 1991 г;

- Ученых советах ВИКИ в 1984-1991 годах.

Разработки по материалам диссертационной работы демонстрировались на ВДНХ СССР и удостоены Диплома Почета, золотой, серебряной и двух бронзовых медалей (удостоверения КК 178, 5677, 16012, 41397-и 42316).

Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликована 41 работа, в т.ч. 7 авторских свидетельств.

Основные положения ,диссертации, выносимые на защиту: результаты изучения этиологической структуры стрептококкозов свиней, создание средств и системы мер борьбы со стрептококкозами свиней в СНГ (СССР).

Объем и структура научного доклада. Научный доклад изложен на 43 страницах, содержит 6 таблиц, 3 рисунка и включает следующие разделы: общая характеристика работы, материалы и методы исследований, результаты исследований, выводы, практические предложения, список работ,опубликованных по теме диссертационного доклада.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Работа выполнена в I980-I99I гг. во Всесоюзном государственном научно-контрольном институте ветеринарных препаратов.

Эпизоотологические исследования проведены в 15 свиноводческих комплексах Белгородской, Владимирской, Горьковской, Новосибирской, Рязанской, Свердловской, Смоленской, Челябинской областей, Хабаровского и Красноярского краев, Казахской, Узбекской и Украинской республик, Башкирии и Удмуртии, в которых под наблюдением находилось около I млн свиней.

В каждом хозяйстве анализировали эпизоотическую ситуацию, условия содержания и корлления животных, данные производственной деятельности, сохранность приплода на участках опороса, фиксировали клинические признаки, предшествовавшие гибели поросят.

Проведены патологоморфологические исследования мозга и внутренних органов 10 вынужденно убитых поросят с .признаками менингоэнцефалита, от которых выделены стропуококки серологической группы В. ( Streptococcus suis , серотип 2). Срезы окрашивали гематоксилин-эозином и азур-эозином по Палпенгейму в модификации Твердынина и Чернышовой.

Материалом для бактериологического исследования служили головной мозг, кровь из сердца, печень, селезенка, почки, сус- • тавная жидкость вынужденно убитых и павших с клиническими признаками 'стрептококкоза поросят, абортированное плоды, влагалищная слизь и истечения из шейки матки, молоко свиноматок, сперма хряков-производителей.

Использовали для выделения стрептококков мясопептонный агар с 1% глюкозы; и 5% дефибринированной крови барана и для дифференциальной диагностики МПБ, МПА, МППА с кусочками печени,

среду Эндо и селинитовый бульон.

У изолятов стрептококков изучали морфологические, культу-ральные, ферментативные свойства, способность расти на средах с теллуритом калия, 10 и 40%-ным содержанием желчи, 6,5$ хлористого натрия, расщеплять гилпурат натрия и аргинина, а также ка-талазную активность и характер гемолиза на кровяном агаре.

Часть исследований, связанных с идентификацией выделенных культур стрептококков, осуществлена в Государственном институте сывороток в Дании.

Антигенные свойства стрептококков определяли в реакции преципитации в капилляре с диагностическими сыворотками 20 серологических групп и 19 серотипов Streptococcus suis.

В качестве антигена использовали соляно-кислый экстракт изучаемых стрептококков.

Диагностические сыворотки получали гипериммунизацией кроликов антигенами, приготовленными из эталонных штаммов стрептококков, предоставленных нам Датским Государственным институтом сывороток (Табл. I).

Способ приготовления антигена зависел от серогрупповой принадлежности стрептококков.

Стрептококки серогруппы Д и всех серотипов Streptococcus suis выращивали 6-10 ч в бульоне Хоттингера, инактивиро-

вали формалином и концентрировали центрифугированием до 30-50 млрд/см3.

Стрептококки всех остальных серогрупп выращивали в бульоне Хоттингера 16-18 ч и концентрировали центрифугированием. К половине объема каждого антигена добавляли 0,25^-ный раствор трипсина, выдерживали 24 ч при комнатной температуре, прогревали 30 мин в водяной бане при 56 °С и снова концентрировали до 30-50 млрд/см3. Другую половину объема кавдого антигена

Таблица I

Штаммы стрептококков, используемые для изготовления диагностических сывороток

Серологическая груша Наименование штамма Серологическая группа Наименование штамма

А 2432 M CJÍ 1085 ru

В . 848/64 .К 605 ЛСДО

С с 74 О б/н

Д Кйш р 34 st

Е K-I29 а Е6844

? ois 57 R 735 Str.suisтип 2

S Д I66I3 S 428 Str.suisTHn I

H 5337 Т 639 етс

к б/н и- 1У 69 Thal

ь S НС 16 W б/н

Str. suis ¡ типы 3-21 б/н

прогревали не обрабатывая трипсином.

Все антигены проверяли на стерильность и хранили при температуре 4-6 °С.

При получении диагностических преципитирующих сывороток-использовали две схемы внутривенной гипериммунизации кроликов.

По схеме, рекомендованной ВОЗ, гипериммунизация продолка- • лась 5 недель. В I неделю вводили однократно' 2 млрд микробных клеток, затем еженедельно трехкратно по 4 млрд микробнах клеток. Предложенная нами схема предусматривала не более 12 инъекций в течение четырех недель. В первую неделю антигены вводили через день в дозах 4, 8 и 16 млрд, затем по три раза в неделю по 4 млрд микробнцх клеток.

Титр антител в крови иммунизированных кроликов определяли в реакции преципитации в капилляре через каждые три инъекции.

Вакцину против стрептококкозов свиней изготавливали из селекционированных нами штаммов стрептококков ВГНКИ JE 161/20 (серогруппа С) И Касли (серогруппа R - Streptococcus suis ,

сероткл 2).

Промышленная технология изготовления вакцины отрабатывалась на Омском биокомбинате. Способ получения вакцины•описан в результатах собственных исследований.

С целью разработки новой технологии изготовления энтерокок-ковой гипериммунной лечебной сыворотки прозедены подбор наиболее иммуногенных штаммов энтерококков и оптимальной среды для их культивирования, разработка схемы получения концентрированного антигена и гипериммунизации волов-продуцентов сыворотки.

Для изучения иммуногенной активности штаммов энтерококков проводили иммунизацию кроликов антигенами исследуемых штаммов.

Превентивную активность сыворотки определяли по следующей методике: белым мышам массой 12-14 г однократно вводили гипериммунную сыворотку в дозах 0,075; 0,15; 0,3; 0,6 см3. На каждую дозу использовали по 10 белых мышей.

После внутрибрюшинного введения мышам иммунных сывороток, через 24 ч проводили перекрестное заражение путем введения внут-рибрюшинно соответствующих испытуемых культур в смертельной дозе (3 ЛДзд). Полученные результаты обрабатывали статистически по методу Кербера-Ашмарина.

Ростовые свойства питательных сред для культивирования энтерококков оценивали по накоплению бакмассы.

Различные схемы гипериммунизации испытаны на Гожульской биофабрикэ, где были сформированы 5 групп волов по 3 животных в кавдой.

Нивотным четырех опытных груш вводили концентрированный энтерококковый антиген-из штаммов энтерококков. Волам контрольной группы вводили неконцентрированный антиген по действующей инструкции.

Животным I группы вводили инактивированный антиген в дозе 5 млрд микробных клеток на I кг массы тела 13 раз с интервалом 5-7 дней. За цикл гипериммунизации волу инъецировали 28000 вдрд.

Волам П группы семикратно вводили инактивированный антиген в дозе 1,25 млрд на I кг массы тела в сочетании с гидроксалом с интервалом 10-14 дней. За цикл гипериммунизации волу введено 3750 млрд микробных клеток.

Волам Ш группы сделали по 14 инъекций антигена, используемого душ гипериммунизации животных П группы, в той же дозе с интервалом 5-7 дней. За цикл гипериммунизации волу введено 7500 млрд микробных клеток.

Ролам 1У группы трижды вводили инактивированный антиген с интервалом 5-7 дней и пятикратно - живой антиген с интервалом 10-14 дней по 1,2 млрд микробных клеток на I кг массы тела. В обоих случаях; использовали антиген в сочетании с гидроксалом. За цикл гипериммунизации волу вводилось 4500 млрд микробных клеток.

Гипериммунизацию животных контрольной группы проводили по схеме, изложенной в действующей инструкции. За цикл гипериммунизации из 16 инъекций волу введено 10687 млрд микробных клеток.

Пробное крововзятие проводили во всех группах через 7 дней после последнего введения антигена.

Активность сыворотки оценивали по титру сывороточных антител и ЕД50 для белых мышей.

Технологическая схема получения коагглютинирующих сывороток включала получение группоспецифических стрептококковых гипер-

иммунных сывороток серогрупп А, В, С, Д, Е, приготовление протеина А стафилококкового происхождения (икмуносорбента) и собственно получение коагглютинирующей сыворотки путем соединения гипериммунной сыворотки и протеина А стафилококков.

В экспериментальной работе использовали 6500 белых беспородных мышей массой 12-18 г, 146 кроликов породы шиншилла, 86 поросят I-40-дневного возраста, 15 волов.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Разработка средств идентификации стрептококков

Бактериологическая диагностика стрептококкозов разработана сравнительно неплохо. Однако, выделение стрептококков без последующего определения серогрупповой и серотиповой принадлежности изолятов недостаточно ни для эффективной организации протнвоэпи-зоотических и противоэпидемических мероприятий, ни для успешной специфической профилактики. Иначе говоря, идентификация изолятов стрептококков по антигенной структуре до серотипа и серогруппы в современных условиях является необходимой.

Учитывая международный опыт в решении этой проблемы, мы начали свои исследования с получения диагностических сывороток, пригодных дая идентификации стрептококков различных серогрупп в реакциях преципитации и коагглютинации.

Установлено, что антигены для получения преципитирующих сывороток необходимо готовить различными методами.

Так, культуры стрептококков серогруппы Д и Str. suis следует инактивировать формалином; культуры стрептококков серогрупп А, В, С, Е, G, Н, L, М, Л обрабатывать трипсином и подвергать тепловому воздействию, а серогрупп Р , К, О, Р, Q., Т, и только инактивировать теплом.

Иммунизация кроликов по схеме, рекомендованной ВОЗ, позволяла получать активные- преципитируюцие сыворотки после 13-16 инъекций. В результате использования схемы гипериммунизации кроликов, предложенной нами, сыворотки, пригодные для идентификации стрептококков серогрупп В, ?, Р,б ,и были получены уже через 5-7 инъекций антигена, а для остальных серогрупп число инъекций не превышало 12.

Полученные сыворотки были высокоактивными и специфичными и не давали перекрестных реакций преципитации с гетерологичными антигенами всех известных серологических групп.

Разработанное нами наставление по применению стрептококковых групповых диагностических сывороток утверждено Главным управлением ветеринарии.

Идентификация стрептококков проводится в реакции преципитации в капилляре, а за рубежом, кроме того, в реакции коагглютинации.

Реакция преципитации общеизвестна и использовалась нами в качестве эталонной. Реакция коагглютинации для идентификации стрептококков в нашей стране не разработана.

Мы поставили задачу приготовить необходимые компоненты и разработать способ идентификации стрептококков в реакции•коагглютинации.

Нами разработана технология изготовления диагностикума для определения серогрупповой принадлежности стрептококков в реакции коагглютинации.

Схема гипериммунизации кроликов антигенами стрептококков серогрупп А, В, С, Д, Е предусматривает 5-6 внутривенных инъекций и позволяет получать сыворотки с титром антител не менее 1:3200. Однако, сыворотки к стрептококкам всех серологических групп давали перекрестную реакцию агглютинации в титре 50-10$ гомологичного.

Для извлечения гетерологичных антител проводили адсорбции сывороток. В качестве сорбента использовали взвесь стрептококков из серогруппы, с которой реагировала сыворотка. Для полного извлечения гетерологичных антител из 100 см3 сыворотки требовалось I00-3000 млрд микробных клеток стрептококков различных серологических групп.

Адсорбированные сыворотки после проверки специфичности брали для изготовления диагностикума.

С целью извлечения из сыворотки иммуноглобулинов класса С использовали стафилококковый иммуносорбент, представляющий собой 10 млрд взвесь staph, aureus штамма ЕИ-625, характеризующийся высоким содержанием протеина А.

Перед сорбцией активность (титр) протеина А определяли в РНГА с 1$-ной взвесью эритроцитов барана, сенсибилизированных гемолитической сывороткой и для изготовления диагностикума брали взвесь стафилококков, дающую в РНГА титр 1:512-1:1024.

Для изготовления диагностикума к 10 млрд взвеси стафилококков добавляли равный объем стрептококковой гипериммунной сыворотки в разведении от 1:2 до 1:10 (в зависимости от активности), инактивированной при 56 °С в течение 30 минут. Полученную смесь тщательно перемешивали, выдерживали при температуре 37-38 °С в течение часа, после чего центрифугировали.

Осадок, содержащий специфические иммуноглобулины класса G , блокированные протеином А стафилококков, промывали буферным раствором, окрашивали метиленовой синью, ресуспендировали в буферном растворе с 0,2$ желатина и консервировали 0,01$ мертиолята.

Полученный диагностикум проверяли на специфичность и активность с гомологичным и гетерэлогичными антигенами.

Инструкция по изготовлению, контролю и применению диагностикума для идентификации стрептококков в реакции коагглютинации

утверждена Главным управлением ветеринарии.

Реакция коагглютинации проста в исполнении, однако сложная технология изготовления коагглютиниругощкх сывороток сдерживает их промышленное производство.

Умелое сочетание преципитируищих и коагглютинирующих сывороток позволит проводить идентификацию изолятов стрептококков в лабораториях всех уровней.

Этиологическая структура стрептококкозов свиней

В хозяйствах промышленного типа различных зон от свиней различных возрастных групп выделено 7875 изолятов стрептококков различных серологических групп и серотипов з^гер-ьососсиа ви1а, перечень которых приведен в таблице 2.

Таблица 2

Этиологическая структура стрептококкозов свиней

Наименование серологической Количество

группы изолятов

В 2 0,03

с 4266 54,17

д 456 5,79

Е 53 0,67

S 75 0,95

1 259 3,29

р 3 0,04

V I 0,01

R (str. suis , серотип 2) - 2732 34,69

str. suis (другие серотипы) 28 0,36

Итого: 7875

Как следует из материалов таблицы, наибольшее количество

изолятов отнесено к серогруппам С, Р, Д и Ъ; при этом 54,17% всех изолятов отнесено к серогруппе С.

Источники выделения стрептококков серогруппы С показаны в таблице 3.

Таблица 3

Источники выделения стрептококков серогруппы С

Объект исследования Исследовано проб Выделены ки сеоогг стрептокок-¡утшы С

Всего %

Головной мозг больных поросят 4552 4266 93,4

Кровь из сердца больных поросят 1 4562 4131 90,6

Суставная жидкость больных

поросят 4562 4193 91,9

Абортированные плоды 23 15 65,2'

Влагалищная слизь свиноматок 156 97 62,2

Молоко свиноматок 87 56 64,4

Сперма хряков 35 21 60,0

Из материалов таблицы следует, что от поросят с клиникой поражения суставов постоянно выделяются стрептококки серогруппы С, причем одновременно из головного мозга, крови и суставной жидкости. Это позволяет констатировать наличие септической формы заболевания.

Обращает на себя внимание высокий процент выделения стрептококков серогруппы С из молока, влагалищной слизи клинически здоровых свиноматок и спермы хряков, что дает основание рассматривать их как один из основных источников возбудителя.

Изучение ферментативных свойств стрептококков серогруппы С показало, что 78,9% изолятов по своим свойствам соответствуют виду Streptococcus equisinilis и 21,2$ - Streptococcus zooepi-demicus.

Подавляющее большинство сообщений о стрептококкозе свиней серологической группы С- содержит информацию, что возбудителями инфекции является Str. equisimilis.

Однако* если сравнивать свойства микроорганизмов видов Str. equisimilis и Str. zooepidesiicus , то .оказывается, ЧТО единственным различием медду ними служит способность ферментировать трегалозу и сорбит.

Каких-либо различий в проявлении инфекционного и эпизоотического процессов, вызываемых названными видами стрептококков, нами не установлено. При этом стрептококки обоих видов выделены при вспышке заболевания на одной и той же ферме.

По нашему мнению нецелесообразно заниматься дифференциацией видов стрептококков серологической группы С, выделяемых от свиней, поскольку это трудоемкая процедура, требующая разнообразных реактивов и занимающая продолжительное время, не позволяет получать практически значимых результатов.

Наш выделено 2760 культур стрептококков, обладающих свой-, ствами, характерными для Str. suis . Они вызывали с»—гемолиз эритроцитов барана, не росли на средах с теллуритом калия, 40$ желчи и в Ъ% хлористого натрия, расщепляли аргинин, ферментировали глюкозу, мальтозу, лактозу, сахарозу, раффинозу, инулин, салицин, эс^улин, гликоген, трегалозу и не ферментировали гиппу-рат натрия, маннит, сорбит, глицин, арабинозу, мелизитозу и ме-. либиозу.

В реакции преципитации они'отнесены к 7 серологическим типам (табл.4).

В связи с высокой смертностью поросят в неблагополучных хозяйствах количество выделяемых культур стрептококков ограничивалось лишь нашими физическими и материальными (питательные среды) возможностями. В этой связи идентификации мы подвергали

ЛИШЬ ОКОЛО 10% И3 0ЛЯТ0В.

Результаты, представленные в таблице 4, свидетельствуют об этиологической значимости Str. suis , сероткп 2 как возбудителя менингоэнцефалита свиней.

Таблица 4

Серотипы str. suis, выделенные в СССР

Номер серотипа Кол-во штаммов Клинический диагноз Возраст свиней (дни)

2 2732 Менингоэнцефалит 30-60

3 2 Сепсис 41, 43

4 3 Сепсис 43, 45, 48

5 I Сепсис 38

7 ' 3 Сепсис 37, 41, 43

8 ' . 2 Ме нинг о энцефалит 35, 37

10 2 Менинго энцефалит 39, 42

Нетипированы 15 Сепсис 35-59

Стрептококки других типов выделены нами в четырех хозяйствах от поросят, павших с признаками сепсиса. Причем важно отметить, что стрептококки типов 4, 5, 7, 8 изолированы в одном хозяйстве.

Все изоляты, отнесенные к серогруппе С , получены в одном хозяйстве при эпизоотической вспышке стрептококкоза.

То же самое относится и к стрептококкам серогруппы Ь.

До наших исследований заболевания, вызываемые стрептококками серогрупп 5 и Ь, а также зи^а в отечественной литературе не бшш описаны.

Стрептококки серогруппы Д, а тленно гаесаНз , имеют наиболее широкое распространение и изолированы нами в 10 хозяйствах. Однако их эпизоотическая значимость не столь существенна,

а эпизоотический процесс протекая з более локальной форме.

Роль стрептококков других серологических групп и типов в инфекционной патологии свиней нуждается в дальнейшем изучении.

Эпизоотологические данные

Стрептококкоз свиней серогруппы С. Массовое заболевание новорожденных поросят, характеризующееся артритом различной степени выраженности, впервые зарегистрировано наш в 1981 г., в хозяйстве промышленного типа на 108 тыс.свиней. В последствии болезнь отмечена еще в нескольких свиноводческих комплексах.

Заболевали поросята на 1-30 дни после рождения. У больных ' поросят отмечали повышение температуры тела до 41 °С, вялость, шаткую походку, отек век, иеи, подгрудка, суставов конечностей, в первую очередь задних, гиперемию в виде кольцевидных пятен на подгрудке и брюшной части тела. На 2-4 дни после появления первых клинических признаков при отсутствии лечения развивался парез задних конечностей.и поросята погибали. Количество павших и вынужденно убитых поросят с упомянутыми симптомами достигало 6,25% от числа полученного приплода.

Применение антибиотиков пенициллинового ряда немедленно после проявления симптомов болезни было эффективными позволяло снимать клинические признаки, хотя переболевшие поросята значительно отставали в росте.

Как правило, заболевали поросята в гнездах свиноматок, больных маститом и метритом.

Количество павших и вынужденно убитых поросят с артрозо-артритом в различных хозяйствах варьировало от 5,73 до 9,36% от полученного приплода. При этом нами не было отмечено ни одного случая заболевания всех поросят в одном гнезде, также как-

и случаев поражения всех гнезд в одном секторе.

Установлена прямая корреляция между заболеваемостью поросят стрептококкозом группы С и наличием у свиноматок симптомокомплек-са мастит-метрит-агалактия.

Стрептококковая этиология артрозэ-артритов подтверждена бактериологическими исследованиями в 93,4$ случаев. При этом вероятность выделения стрептококков из патологического материала зависела от того, применяли ли для лечения .тавотных антибиотики.

Предопределяющими факторами появления стрептококковых артро-зо-артритов во всех случаях были нарушения параметров микроклимата, повышенная концентрация животных, адинамия, отсутствие солнечного света, высокая концентрация пыли и бактериальная загрязненность помещений. Вспышки артрозо-артритов стрептококковой этиологии не ¡мели выраженной сезонности.

Специальные исследования позволили определить основные источники возбудителя стрептококкоза серогруппы С. Таковыми являются больные и павшие от стрептококкоза животные, свиноматки больные метритом и маститом, хряки-стрептококконосители.

Заслуживают внимания случаи выделения стрептококков серогруппы С из головного мозга и сердца абортированных поросят. При исследовании 23 плодов, абортированных за 20-15 дней до рождения в 15 случаях выделены стрептококки серогруппы С.

При вскрытии у этих поросят обнаружены отеки головы, подгрудка, суставов, множественные точечные кровоизлияния в миокарде и почках, в подкожной клетчатке, на эпикарде и оболочке кишечника серовато-золотистый налет, представляющий собой под микроскопом множественные колонии стрептококков. Все это позволяет отнести стрептококки серогруппы С к числу абортогенных возбудителей.

Этиологическая значимость стрептококков серогруппы С как возбудителей артрозо-артритов подтверждена экспериментальным заражением.

Культуру стрептококков в дозе 20 млрд микробных клеток ввели внутривенно шести поросятам 15-23-дневного возраста. У всех поросят на третий день после заражения отметили вялость, отсутствие аппетита. На 6-7 дни у пяти поросят развился артрит задних конечностей.

При патологоанатомическэм вскрытии поросят установлено гнойное и серозно-фибринозное воспаление суставов, гиперемия сосудов головного мозга. Стрептококки серогруппы С выделены из головного мозга и суставной жидкости у всех поросят.

В последующих опытах клиническая картина стрептококкоза серогруппы С воспроизведена нами также после внутрибрюшинного и перорального заражения поросят 1-29-дневного возраста.

Стрептококкоз серогруппы Я ( з-Ьгер-Ьососсиз ви1о , серотип 2) Стрептококкоз поросят серогруппы И впервые в СССР зарегистрирован нами в 1982 г. в свинокомплексе и в последующие годы еще в трех свиноводческих хозяйствах промышленного типа.

В большинстве случаев наблюдали острое течение болезни, при которой у поросят 30-60-дневного возраста развивался менингоэдае-фалит, проявляющийся нарушением координации движения, клоническим дрожанием мускулов глаз. Животные падали с судорожными движения-, ми, пытались подняться, совершали плавательные движения конечностями. При прикосновении к ним реагировали сильным визжанием. Через 12-24 ч после появления первых клинических признаков наступал паралич конечностей, а затем животные погибали.

Иногда, в случае профилактической антибиотикотерапии, наблюдали и хроническое течение болезни, характеризующееся поражением суставов (артриты), потерей слуха и зрения.

В различных хозяйствах заболевало 30-70$ поросят, летальность достигала 80-100$.

В отдельных случаях болезнь протекала молниеносно, характеризовалась септицемией, высокой температурой (до 42 °С) и всегда заканчивалась летально в течение нескольких часов.

При патологоанатомическом осмотре специфических изменений в паренхиматозных органах не наблюдали и обнаруживали их лишь в головном мозге. Мозговые оболочки были гиперемированы, отечны, пропитаны гноем.

- Ткань мозга больных животных на разрезе имела дряблый вид, желудочки расширены и заполнены мутной геморрагического характера жидкостью.

Гистологические исследования показали наличие типичного серозного или гнойного менингита различной степени выраженности.

• При серозном менингите с начальными явлениями гнойного воспаления выявили резкое расширение и полнокровие сосудов с краевым стоянием лейкоцитов, а также очаговую миграцию их за пределы сосудов с образованием отдельных инфильтратов.

В ткани мозга отмечали явления перинуклеарного и перицеллго-лярного отека.

При гнойном менингите наблюдали полнокровие и резкое утолщение мягких мозговых оболочек. Наряду со значительной лейкоцитарной инфильтрацией . наблюдалась пролиферация соединительнотканных элементов оболочек. В области дна борозд лейкоцитарная инфильтрация переходила на мозговую ткань, где имелась различной степени дистрофогения, изменения нейронов в виде глыбчатого распада цитоплазмы или гидрофобии, лизиса ядра. Зафиксирован некроз нервных клеток.

Местами в очагах деструкции мозговой ткани обнаружены колонии стрептококков.

Таким образом, во всех случаях наблюдали менингит и менин-гоэнцефалит различной интенсивности, являющиеся причиной гибели животных.

Культуры стрептококков удавалось выделить с наибольшим постоянством из головного мозга и крови сердца.

Гистологические исследования показали, что в головном мозге инфицированных животных развились необратимые процессы уже при первом проявлении клинической картины заболевания, что делает малоэффективным какую-либо антибиотико- и химиотерапию.

Полученные нами данные о патологоморфологических изменениях в мозге животных на ранней стадии болезни послужили основанием Для рекомендации о выбраковке всех клинически больных стрептокок-козом свиней и об использовании антибиотиков только в группах животных, подозреваемых в заражении.

Стрептококкоз серогруппы Д (энтерококковая инфекция).Этот стрептококкоз хорошо описан в отечественной литературе как дип-лококковая инфекция.

Возбудитель болезни - Streptococcus faecalis имеет форму попарно расположенных кокков, или диплококков, что и обусловило наименование инфекции. Однако' форма диплококков характерна для многих представителей рода Streptococcus , в частности, и для широко распространенных среди свиней Str. suis.

Учитывая, что постановка диагноза на стрептококкоз прово- . Лилась без изучения антигенных свойств возбудителя, диагноз "диплококковая инфекция" не отражал этиологию болезни и не позволял правильно организовать лечебные и профилактические мероприятия.

Наименование болезни приведено нами в соответствие с современной номенклатурой возбудителя.

Стрептококкоз серогруппы Ь. Впервые в стране диагностирован нами в 1986 году. Наиболее восприимчивы поросята первых дней жизни, у заболевших животных развиваются отеки, а затем артриты коленного, скакательного, венчикового суставов, нарушается двигательная функция. Животные угнетены, однако аппетит сохранен, температура в норме или не превышает 40,5-40,8 °С. Обычно в гнезде заболевают 1-3 поросенка, иногда поражается весь приплод.

Лечение эффективно лишь на ранней стадии развития болезни.

При отсутствии лечения на 2-5 день болезни животные, как правило, погибают. В ряде случаев болезнь принимает хронический характер. Животные с хроническим течением болезни отстают в росте, нежизнеспособны.

Из сердца, головного мозга, суставной жидкости павших поросят 3-9-дневного возраста выделены культуры стрептококков серо-группы Ь, вызывающие сильный £-гемолиз на кровяном агаре.

Стрептококкоз серогруппы Зарегистрирован нами впервые в 1987 г. у поросят перЕых дней жизни. Заболевали поросята, в основном, в гнездах .свиноматок с агалактией.

Клинические проявления стрептококковой инфекции наступали в результате снижения резистентности организма поросят, главной причиной чего являлась агалактия свиноматок. Лечение было эффективным лишь на ранней статей заболевания, что.связано с высокой устойчивостью стрептококков к антибиотикам.

Результаты наших исследований и данные литературы, свидетельствующие об интенсивности течения инфекций, вызываемых стрептококками серогрупп Д, Ь и С, высокой летальности, о резистентности возбудителей к антибиотикам, позволяют сделать заключение об экономической целесообразности использования специфических средств лечения и профилактики упомянутых инфекций.

Что касается стрептококков сёрогрупп В, Е, Р hW , то случаи их выделения от свиней, в настоящее время не имеют серьезной эпизоотической значимости. Однако, обращает на себя внимание факт выделения от поросят стрептококков серогруппы В, идентифицированных нами как серотипы 1а и Ш, известных в медицине как наиболее частые возбудители госпитальных инфекций.

Анализ патологоанатомических изменений у павших и вынувден-но убитых свиней показал, что эти изменения у животных, выращиваемых в условиях свиноводческих комплексов, не могут быть положены в основу при постановке диагноза на стрептококкоз.

Специальные исследования проведены по оценке свиней как одного из основных хозяев стрептококков серогрупп С и R в природе.

Установлено практически поголовное стрептококконосительство на неблагополучных по стрептококкозам фермах у клинически здоровых хряков и свиноматок и до 90$ среди поросят неблагополучных групп.

Широкая инфицированность свиней стрептококками, условная их патогенность для свиней, обусловленность эпизоотических вспышек эндогенными источниками, а не заносом возбудителя из вне, позволяют утверждать, что свинья как вид ( sus scropha domestica ) является одним из основных хозяев стрептококков серогрупп С и R ( streptococcus suis , серотип 2) в природе.

РАЗРАБОТКА СРВДСТВ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ СТРЕПТ0К0КК030В

Широкое носительство стрептококков серологических групп С и R здоровыми свиньями, нарушение санитарно-гигиенических норм

содержания животных, имеющее место в большинстве наших свиноводческих комплексов, создают постоянную угрозу возникновения стрептококковой инфекции.

Данные зарубежной литературы и результаты наших исследований показывают, что летальность при стрептококковом мениягоэнцо-фалите достигает 80-1005» при высокой контагиозности (по нашел наблюдениям в хозяйстве может поражаться до 30-70^ поголовья).

Таким образом, перечисленные факторы обосновывают необходимость разработки средств специфической профилактики стрептококко-зов серогрупп С и R.

Нами выделены и селекционированы штаммы стрептококков серо- • групп С и В. для изготовления специфических препаратов.

Штамм бактерий Streptococcus suis , С900ТИП 2 КаСЛИ ВЫДелен из головного мозга больного менингоэнцефалитсм поросенка, пассирован через организм поросенка и белых мышей, адаптирован и культивируется на среде Хоттингера с 1% глюкозы.

В результате проведенной работы достигнута стабильность свойств штамма Хасли. Он обладает достаточной энергией роста (лаг фаза не превышает двух часов), стабильной способностью к капсулообразованию, а ЛДзд мя белых мышей не превышает 0,5 х 10® микробных клеток.

'Поддержание штамма в s-форме достигается.хранением при температуре 4-6 °С в лиофилизированном состоянии и клонированием.

Штамм Streptococcus zooepidemicus П-2082 серогруппы С выделен из суставной, жидкости больного стрептококкозом поросенка.

В результате пассажей через организм белых мышей штата обладает стабильными ростовыми свойствами и вирулентностью.

Вирулентные свойства штамма П-2082 характеризуются ЛД^д для белых мышей, не превышающей 0,1 х 10® микробных клеток.

При культивировании на жидких питательных средах его виру-

лентность снижается, но восстанавливается путем пассажей через организм белых мышей массой 13-14 т.

При изготовлении вакцины вели раздельное культивирование производственных штаммов стрептококков серогрупп С и Е.

При этом штамм 161/20 выращивали в течение 4-6 ч, а Касли -6-9 часов.

Известно, что иммуногенные свойства Streptococcus suis обусловлены полисахаридным компонентом микробной клетки, локализующимся в капсуле. Установлена прямая корреляционная зависимость между степенью развития капсулы и иммуногенными свойствами культуры.

Таким образом, степень капсулообразования позволяет судить об иммуногенности культуры, что может быть использовано при промышленном культивировании стрептококков.

Нами изучена электронной микроскопией и в реакции Нейфельда .динамика капсулообразования при культивировании штамма Касли.

Установлено, что кривые динамики роста и капсулообразования стрептококков штамма Касли не совпадают. Если пик роста микроорганизмов регистрировали в конце экспоненциальной фазы, т.е. через 12-18 ч культивирования, то наиболее развитая капсула наблюдалась у стрептококков после 3-9 ч выращивания (столь значительный разброс времени в обоих случаях объясняется нестандартностью питательной среды).

Наиболее развитая капсула наблюдается у стрептококков через 6-9 ч выращивания. Дальнейшее культивирование ведет к постепенной деградации капсулы (Рис. I, 2, 3, ув. ЗЮООх).

Кроме того, в тесте Нейфельда установлено, что практически все клетки стрептококков 6-9-часового роста обладают выраженной капсулой, в отличие от более "молодых" и более "старых" культур.

Рис.1 Клетка стрептококка Рис.2 Клетка стрептококка 3-часового роста 6-часового роста

Рис.3 Клетка стрептококка 9-часового роста

Контроль динамики капсулообразования с использованием реакции Нейфельда внесен в Технологический регламент изготовления вакцины в качестве отдельной операции.

Во вре.мя выращивания культур штаммов Касли и П-2082 в реакторах контролировали динамику роста штамма П-2082 и динамику капсулообразования штамма Касли.

Для этого начиная с третьего часа культивирования определяли концентрацию культуры штамма П-2082. Выращивание прекращали в конце экспоненциальной фазы роста добавлением формалина. Накопление бакмассы не должно было быть менее 4 млрд/см3.

У стрептококков штамма Касли определяли степень капсулооб-

разования через каждый час культивирования (начиная с четвертого) в реакции Нейфельда с гомологичной'сывороткой.

Рост культуры останавливали добавлением формалина при наличии в препарате не менее 75% стрептококков с набухшей капсулой.

После окончания культивирования при типичной для стрептококков морфологии и отсутствии посторонней микрофлоры культуры из обоих реакторов перекачивали в третий, где их смешивали в соотношении 1:1 и при включенной мешалке добавляли 10%-ный раствор ЛаОН, которым устанавливали рН 7,6-7,8, а затем вносили формалин до концентрации 0,3-0,4% и перемешивали культуры в течение часа.

Инактивацию смеси культур стрептококков проводили в течение 7-12 сут при температуре 39-40 °С.

После установления стерильности в реактор добавляли стерильный 3%-ный гель алшиния гидрата окиси в количестве 20% к общему объему, определенное как оптимальное. Сорбцию вели при 18-20 °С в течение 3-5 сут до полного просветления надосадочной жидкости, после чего декантировали 1/4-1/5 объема надосадочной жидкости.

Адсорбированную культуру подщелачивали 10%-ным раствором ЛаОН до рН 7,2-7,6 и расфасовывали готовую вакцину во флаконы.

Вакцину контролировали в соответствии с разработанными нами ТУ на стерильность, безвредность и иммуногенность.

Вакцина безвредна. В дозе 0,5 см3 при внутримышечном введении пяти белым мышам массой 14-16 г она не вызывает их заболевания и гибели в течение 10 сут наблюдения.

Вакцина активна. После контрольного заражения смертельной дозой культуры каждого штамма стрептококков серогрупп С и К. погибает не более двух из 10 вакцинированных мышей при гибели не менее восьми контрольных.

Вакцину применяют с профилактической целью в хозяйствах, неблагополучных по стрептококкозу серогрупп С или Я.

С целью проверки эффективности вакцины в отношении стрепто-серогруппы С иммунизировали двукратно иэсть свиноматок, соответственно за 30 и 20 дней до предполагаемого опороса. Полученных от вакцинированных свиноматок 48 .поросят 3-29-дневного возраста (по три поросенка каждого возраста) заражали внутривенно и внутрибркшнно вирулентной культурой стрептококков серогруппы С.

После внутривенного заражения клинические признаки стрепто-коккоза серогруппы С (артрозо-артрит) отмечены на 7-9 день у двух 12-дневкых и двух 14-дневных поросят. Один 10-дневный поросенок пал на 6-ой день после заражения. Остальные 19 поросят оставались здоровыми в течение 20 дней после заражения.

После вяутрибрюяинного заражения все 24 поросенка в течение этого срока оставались здоровыми.

В контрольных группах все поросята заболели на 6-8 дни-после заражения.

В неблагополучном по стрептококкозу серогруппы С хозяйстве провели наблюдение за поросятами, полученными как от вакцинированных против стрептококкзза серогруппы С свиноматок, так и от невакцинированных (табл.5).,

Таблица 5

Результаты испытания вакцины в хозяйстве, ' неблагополучном по стрептококкозу серогруппы С

-г потных Поросят Пало поросят с приз- <*

-руппа ..квотных _ в опыте наками стрептококкоза "

Невакцинированные поросята, полученные от вакцинированных свиноматок

^Дродолжение таблицы 5

Вакцинированные поросята, полученные от вакцинированных свиноматок 759 8 1,1

Невакцинированные поросята, полученные от невакциниро-

ванных свиноматок 798 45 5,63

Вакцину вводили внутримышечно двукратно свиноматкам за 25-30 и 15-20 дней до опороса по 7 см3, а поросятам в возрасте 18-22 и 25-29 дней по 5 см3.

Наблюдение за поросятами вели в течение 35-40 дней до передачи их на участок доращивания.

Как свидетельствуют данные таблица, вакцинация животных в неблагополучном хозяйстве позволяет снизить потери поросят от стрептококкоза серогруппы С до минимума.

Результаты последующего широкого применения вакцины на поголовье I млн 200 тыс свиней подтвердили результаты производственных испытаний. При этом установлено, что вакцинация свиноматок за 25-30 и 15-20 дней до осеменения профилактирует развитие симптомокомплекса метрит-мастит-агалактия и аборты, вызываемые стрептококками серогруппы С.

С целью профилактики стрептококкового менингоэнцефалита, также как и при стрептококкозе серогруппы С, вакцину вводили внутримышечно двукратно взрослым животным в дозе 7 см3, поросятам - 5 см3.

В связи с нестабильностью возможности воспроизведения стрептококкоза серогруппы В. при экспериментальном заражении свиней, эффективность вакцины оценивали по результатам ее применения в неблагополучном хозяйстве (табл.6), а также по превентивной „активности сыворотки вакцинированных животных.

Таблица 6

Результаты испытания вакцины в хозяйстве, неблагополучном по стрептококкозу серогруппы Я .

Группы животных

Поросят Пало поросят с клиникой в группе ме нинго э ицевпяята_

Всего

Вакцинированные поросята, полученные от невакцинированных свиноматок 2482 89 ' 3,53

Вакцинированные поросята, полученные от вакцинированных свиноматок 1235 0

НевЭкцинированные поросята, полученные от невакцинированных свиноматок 2710 147 5,42

Результаты испытания, представленные в таблице 6, показывают существенную разницу между сохранностью вакцинированных и невакцинированных поросят в неблагополучном по стрептококкозу серогруппы И хозяйстве. Обращает также на себя внимание более высокая сохранность вакцинированных поросят, полученных от вакцинированных свиноматок.

В опыте на белых мышах установлено, что двукратное введение разработанной нами вакцины свиньям стимулирует у них образование антител, определяющих превентивную активность сыворотки. Сыворотка крови свиней, взятая через 7-10 дней после второго введения вакцины, предохраняет мышей от гибели после заражения смертельной дозой культуры стрептококков серогруппы И.

Активность сыворотки характеризуется ЕД-д, равным 0,11 + + 0,024 см3.

После подтверждения экономического эффекта от применения

вакцины на поголовье 350820 свиней',-она принята к промышленному производству.

Разработка новой технологии изготовления сыворотки против энтерококковой инфекции начата с отбора из четырех имеющихся в нашем распоряжении производственных штаммов энтерококков, выделенных от свиней, наиболее иммуногенного и подбора оптимальной среды для культивирования энтерококков.

В опыте по сравнительной оценке превентивной активности кроличьих сывороток, полученных к штаммам энтерококков, установлено, что наиболее высокой активностью обладает сыворотка к штамму 189.

Активность этой сыворотки, предохранявшей белых мышей от гибели после заражения смертельной дозой культур штаммов 189, 83, 136 и 192, характеризовалась значением Щ5д, равным соответственно 0,13 и 0,20, 0,25 и 0,16 см3. Среднее значение ЕД^ сыворотки, равное 0,185 + 0,0085 см3, существенно отличалось от таковой сыворотки к штамму 83 и несущественно - других сывороток.

На этом основании штамм 189 выбран нами для производства сыворотки против энтерококковой инфекции.

Для выращивания энтерококков предложена питательная среда, содержащая панкреатический гидролизат серопротеина или альбумина, полученных из отходов глобулинового производства. Ростовые качества этой среды не уступают таковым бульона Хоттингера и позволяют получать 10 млрд микробных клеток/см3 уже через 8-9 ч культивирования.

В опыте на волах были испытаны 4 схемы гипериммунизации, различающиеся количеством вводимого антигена, числом инъекций и продолжительностью интервала между ними.

Гипериммунизация волов П, Ш, 1У и ¥ (контрольной) групп приводила к постепенному накоплению антител в сыворотке крови

животных. В конце гипериммунизации титр антител в сыворотке крови этих животных поддерживался на уровне 1:3200. Обнаруженные незначительные изменения в величине титров между этими группами недостоверны.

Введение больших доз антигена волам I группы способствовало быстрому накоплению антител в сыворотке крови животных. Через Две недели титр составил 1:6400, в последующие дни наблюдаюсь дальнейшее повышение титра до 1:12800, который поддерживался на этом уровне в течение двух недель, затем быстро снижался до 1:1600. Начиная с 50-го дня динамика накопления антител в крови волов I группы существенно не отличатась от динамики накопления антител у волов опытных и контрольной групп. В конце гипериммунизации у волов I группы титр антител был даже несколько ниже соответствующих титров у волов П, III, 1У и У групп.

Таким образом, введение больших доз антигена способствует быстрому накоплению антител в крови опытных волов. Дальнейшее введение антигена приводит к торможению процесса антителообра-зования. ■

На основании полученных результатов составлена новая схема гипериммунизацяи, которая была испытана на волах в сравнении со схемой, используемой в производстве.

Предложенная схема гипериммунизации позволяет получать сыворотку с высоким титром антител (1:5400-1:12800) при уменьшении общего количества вводимого антигена з 5 раз, количества инъекций в 1,4 раза и длительности гипериммунизации на 2 недели.

Сыворотка, изготовленная по усовершенствованной технологии, принята к серийному производству.

Результаты собственных исследований положены в основу рекомендаций о мероприятиях по профилактике и ликвидации стрептококкозов

свиней.

В соответствии с разработанными нами рекомендациями диагноз на стрептококкоз устанавливают по результатам лабораторных исследований с учетом эпизоотологических и клинических данных. В основу лабораторной диагностики положена серолчгическая идентификация возбудителя.

На основании результатов определения серогрупповэй принадлежности выделенной культуры стрептококков выбирают специфические средства лечения или профилактики.

При стрептококкозе сеоогруппы Е клинически больных свиней выбраковывают.

Подозреваемым в заражении животным проводят курс антибиотик отерапии.

Всех клинически здоровых животных иммунизируют депонированной вакциной против стрептококкозов свиней (серогруппы С и И).

При стрептококкозе серогруппы С больных и подозрительных по заболеванию свиней лечат, проводя курс антибиотикотерапии.

Всех клинически здоровых животных иммунизируют депонированной вакциной против стрептококкозов свиней (серогруппы С и В.).

При стрептококкозе серогруппы Д больным и подозрительным по заболеванию свиньям вводят с лечебной целью энтерококковую сыворотку и антибиотики.

Подозреваемым в заражении животным вводят энтерококковую сыворотку с профилактической целью, а через 2 недели после ее введения как и всем клинически здоровым животным вводят вакцину против энтерококковой инфекции.

Вакцину и сыворотку применяют в соответствии с наставлениями по их применению.

В случае возникновения стрептококкозов других серологических групп применяют антибиотики.

Антибиотики используют руководствуясь рекомендациями ветеринарной лаборатории после определения к ним чувствительности выделенных в неблагополучном хозяйстве стрептококков.

В помещении, где содержались больные или подозрительные по заболеванию животные, проводят комплекс ветерннарно-саяитарннх мероприятий.

Для дезинфекции применяют:

- хлорную известь, нейтральный гипохлорит кальция, содержащие А% активного хлора;

- 20% взвесь свежегашеной извести;

- 2% раствор формальдегида;

- горячий 2% раствор едкого натра.

Поросят, переболевших строптококкозом, содержат изолированно от здоровых животных в течение .двух месяцев.

В хозяйствах, ранее неблагополучных по стрептококкозу, и угрожаемых хозяйствах проводят плановую иммунизацию свиней соответствующей противострептококковой вакциной.

Профилактика стрептококкозов основывается на строгом соблюдении технологических и ветеринарно-санитарных норм содержания животных. Ведется строгий учет всех случаев абортов, мертворон-дения, падежа животных, клинических признаков болезни. Проводится систематическое лечение животных, больных маститом и эндометритом, являющихся основным источником возбудителя инфекции. Малоценных животных и хряков-стрептококконосителей выбраковывают.

ВЫВОДЫ

I. Стрептококкозы свиней убиквитарны, что определяет стационарное неблагополучие промышленных свиноводческих комплексов СНГ (СССР) по названным инфекциям.

2. На территории СНГ (СССР)''среда свиней циркулируют стрептококки серогрупл Б, С, Д, Е, G, Ь, Р, w и серотипов 2, 3, 4, 5, 7, 8, 10 Streptococcus suis.

3. Стрептококки серогрупп C,û> L,G, R ( Streptococcus suis, серотип 2) вызывают эпизоотические вспышки заболеваний у свиней, характеризующиеся большим охватом поголовья, высокими смертностью и летальностью.

Стрептококки серогрупп в, Е, р, w и серотипов 3, 4, 5, 7, 8, 10 Streptococcus suis являются возбудителями спорадических заболеваний свиней.

4. Основными возбудителями стрептококкозов свиней являются стрептококки С и К (Streptococcus suis , серотип 2). Из числа изолятов стрептококков, выделенных от свиней, 88,86$ отнесены

к названным серогруппач.

5. Свинья ( SUS scropha donestica ) является одним из основных хозяев стрептококков серогрупп С ий ( Streptococcus suis , серотип 2) в природе и основным источником возбудителя инфекции для здорового поголовья.

6. Обоснована роль стрептококков серогруппы С как одного из абортогенных факторов у свиноматок. Стрептококки этой серогруппы выделены в 65,2$ случаев из головного мозга абортированных поросят.

7. Впервые в СНГ (СССР) установлен и описан менингоэнцефа-лит поросят, вызываемый Streptococcus suis , серотип 2, протекающий в септической форме и сопровождающийся необратимыми поражениями головного мозга.

8. Селекционированы производственные штаммы стрептококков серогрупп С hR ( Streptococcus suis , тип 2) используемые при изготовлении препаратов для диагностики и специфической профилактики стрептококкозов свиней.

9. Специфическая профилактика стрептококкозов свиней, обусловленных стрептококками серогрупп С и Э, достигается двукрат'ым введением предложенной нами депонированной вакцины из штаммов Касли (серогруппа Н) и П-2082 (серогрутша С), выращиваемых соответственно 6-9 и 4-7 ч, что обеспечивает в первом случае наличие в вакцине стрептококков серогруппы 3. с хорошо зараженной капсулой, в другом максимальное накопление стрептококков серогруппы С, и в конечном счете - иммуногенность вакцины.

10. Новая технология изготовления лечебно-профилактической сыворотки против энтерококковой инфекции молодняка сельскохозяйственных животных предусматривает сокращение цикла гипериммунизации волов на 2 недели, количество вводимого антигена в 5 раз

и число инъекций в 1,4 раза.

11. Предложенный для практического применения набор групповых диагностических сывороток позволяет идентифицировать в реакции преципитации стрептококки серогрупп А, В, С, Д, Е, 0-, ь , и,

р, к, э .

12. Разработанный нами диагностикум обеспечивает идентификацию изолятов стрептококков серогрупп А, В, С, Д, 5 в реакции коагглютинации.

13. Система мер борьбы со стрептококкозами свиней, включающая лабораторную диагностику с идентификацией возбудителя, применение этиологически обоснованных средств специфической профилактики и проведение общих ветеринарно-санитарных мероприятий, разработанная нами, обеспечивает сокращение до минимума отхода поросят от стрептококкозов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕД102Е-НИЯ

На основе результатов проведенных исследований разработаны, утверждены Главным управлением ветеринарии и вне,фены в ветери-

нарную практику:

Рекомендации о мероприятиях по профилактике и ликвидации стрептококкоза свиней (утв. II.03.1990).

Вакцина депонированная против стрептэкоккозов свиней (серогруппы С ий ):

- наставление по применению (утв. 28.И.1988 г.);

- технические условия 10.19.46-88 (утв. 28.II.1988 г.);

- инструкция по изготовлению и контролю (утв. 28.II.1988 г.);

- приказ ГУВ Госагропрома СССР на внедрение К 147 от 29.II.1988 г.

Сыворотка против энтерококковой инфекции молодняка сельскохозяйственных животных:

- наставление по применению (утв. II.06.1986 г.);

- технические условия 10-07-590-88 (утв. 06.01.1986 г.);

- инструкция по изготовлению и контролю (утв. 06.07.1986 г.).

Наставление по применению стрептококковых групповых диагностических сывороток (утв. 30.07.1987 г.)

Инструкция по изготовлению, контролю и применению диагнос-тикума для идентификации стрептококков в реакции коагглтатинации (утв. 01.12.1989 г.).

Методические указания по лабораторной диагностике стрептококкоза животных (утв. 30.09.1983 г.).

Методические указания по лабораторным исследования на пневмококковую (диплококковую) инфекцию животных (утв. 05.01.1984 г.).

Методические указания по лабораторной диагностике стрептококкоза животных (утв. 28.09.1990 г.).

СПИСОК работ, опубликованных по теме .диссертации I. Панин А.Н., Цветков Е.И., Бошьян Е.Г. Методика получения диагностических антипневмококковых агглютинирующих сывэро-

ток // Разработка, апробация и государственный контроль ветеринарных препаратов. Тез. докл. Всесоюзн. научн. конф. - М., 1981, с. 107-108.

2. Панин А.Н. Диагностика стрзптококкоза свиней // Актуальные проблем ветеринарии в промышленном животноводстве. Тез. докл. Зсесоюзн. школы молод, учен. - М., 1983, с. IGI-I62.

3. Панин А.Н., Цветков Е.И. Эпизоотологическпо особенности стрептококкоза свиней в условиях промышленного ведения животноводства // Актуальные вопросы эпизоотологии. Тез. докл. Зсесоюзн. научн. конф. - Казань, 1983, с. 116.

4. Панин А.Н., Цветков З.И., Бошьян Е.Г. Свойства штаммов стрептококков, выделенных от свиней в условиях промышленных комплексов // Вет. проблеет промышленного животноводства. Тез. докл. научн. конф. - Киев, 1983, с. 121-122.

5. Панин А.Н., Гущин В.Н. Методические указания по лабораторной диагностике стрептококкоза животных // Ветеринария, 1984, )' 7, с. 73-74.

6. Панин А.Н., Гущин В.Н. Методические указания по лабораторным исследованиям на пневмококковую (диплококковую) инфекцию животных // Ветеринария, 1984, J£ 7, с. 74-75.

7. Школьников Е.Э., Коломнина Г.Ф., Орлов В.А., Кравцова Л.А., Першин В.А., Цветков.Е.И., Панин А.Н., Павлюк В.Н., Коваленко И.П., Павлюк- H.A., Бошьян Е.Г. Сравнительная оценка различных схем гипериммунизации волов-продуцентов диклококковой сывороткой // Передовой научно-произзодств. опыт в биологической промышленности. Экспресс-информация. - М., 1984, с. 1-3.

8. Панин А.Н., Цветков Е.И. Штамм бактерий Streptococcus zooepidenicus , используемый для изготовления диагностических и профилактических препаратов против стрептококкоза свиней // Авторское свидетельство !1 1240053, 1984 г.

9. Панин А.Н., Засепский Н.Х.>- Цветков Е.И. Способ получения вакцины для профилактики стрептококкоза С свиней // Авторское свидетельство tf 1293883, 1984 г.

10. Цветков Е.И., Панин А.Н., Бошьян Е.Г. Селекционировать штаммы, усовершенствовать методы контроля и стандартизации вакцины против диплококковой септицемии сельскохозяйственных животных // Заключительный отчет. - 1985, В госрегистрации 81080224.

11. Школьников Е.З., Коломника Г.Ф., Орлов В.А., Кравцова Л.А., Першин В.А., Цветков Е.И., Панин А.Н., Павлюк В.Н., Коваленко И.П., Романова М.В., Филиппова Г.Н., Ярцев М.Я., Бошьян Е.Г., Павлюк H.A. Усовершенствовать промышленную технологию получения сыворотки против диплококковой инфекции телят, ягнят и поросят // Заключительный отчет. - 1985, JE госрегистрации 81074423.

12. Панин А.Н. Стрептококкозы свиней // Ветеринария, 1986, JE 5, с. 42-44.

13. Школьников Е.Э., Коломнина Г.Ф., Хорьков И.А. Ярцев М.Я., Антонова Н.И., Цветков Е.И., Панин А.Н., Коваленко Н.П., Павлюк В.Н. Способ получения сыворотки против энтерококковых (диплококковых) заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных // Авторское свидетельство JE 1390837, 1986 г.

14. Бошьян Е.Г., Цыганкова С.И., Цветков Е.И., Простяков А.П., Яковлев Ю.С., Панин А.Н., Седов В.А. Питательная среда для культивирования бактерий вида Streptococcus faecalis // Авторское свидетельство JE I4I2283, 1986 г.

15. Бошьян Е.Г., Цыганкова С.И., Цветков Е.И., Простяков А.П., Великанова Т.А., Трусова Л.И., Яковлев Ю.С., Панин А.Н. Питательная среда для культивирования бактерий вида Streptococcus faecalis // Авторское свидетельство J5 I4I2284, 1986 г.

16. Панин А.Н. Стрептококкозы свиней // Справочник. Инфек-

ционкые болезни животных,ВО Агропрэмиздат, 1987, с. 249-250.

17. Школьников S.3., Цветков Е.И., Павлкзк В.Н., Коломни-на Г.Ф., Панин А.Н., Коваленко И.П., Бошьян Е.Г., Орлов З.А., Романова М.В., Кравцова Л.А., Блехерман Б.Е., Бойко A.A., Немчинов H.H., Нежута Л.Е., Ярцев М.Я. Усовершенствование промышленной технологии изготовления сыворотки против энтерококковой (диплококковой) инфекции молодняка сельскохозяйственных животных // Передовой научно-производств. опыт в биологической промышленности. Экспресс информация. - М., 1987, )1 9, с. 1-3.

18. Панин А.Н. Наставление по применении стрептококковых групповых диагностических сывороток // Ветеринария, 1988, Jf 10, с. 78.

19. Панин А.Н. Наставление по применению сыворотки против энтерококковой инфекции телят, ягнят и поросят // Ветеринария, 1988, $ 10, с. 78-79.

20. Панин А.Н., Цветков Е.И., Малик Е.В., Бошьян Е.Г. Штамм бактерий Streptococcus suis , тип 2 серогруппы R , используемый для изготовления диагностикума // Авторское свидетельство К I55436I, 1988 г.

. 21. Панин А.Н., Засепский Н.Х., Цветков Е.И., Бошьян Е.Г., Малик Е.В., Тямкина Т.Л., Ловцоза H.A., Захаров В.Б. Способ изготовления вакцины для профилактики стрептококкозов свиней // Авторское свидетельство 1564789, 1988 г.

22. Панин А.-Н., Малик Е.В. Разработка методов получения стрептококковых диагностических сывороток // Усовершенствование методов изготовления, контроль качества и стандартизация бактериальных препаратов. Сб. научн. тр. ВГНКИ ветпрепаратов. - М., 1988, о. 28-31.

23. Панин А.Н. Стрептококковые инфекции у свиней в промышленных комплексах // Эпизоотология, эпидемиологияг-средства

диагностики, терапии и специфической профилактики инфекционных болезней, общих для человека и животных. Тез. докл. Всесоюзн. конф. - Львов, 1983, с. 29-30.

24. Засепский Н.Х., Тямкина Т.Л., Ловцова H.A., Роот В.А., Панин А.Н., Цветков Е.И. Профилактика стрептококкоза свиней серогруппы С // Там же - с. 438.

25. Малик Е.В., Панин А.Н., Цветков E.H., Бошьян Е.Г.

К вопросу об этиологической структуре стрептококкозов свиней // Там же - с. 447.

26. Панин А.Н., Малик Е.В., Романенко А.Н., Борисов В.Н. Роль стрептококков серогруппы L в инфекционной патологии свиней // Там же - с. 449-450.

27. Панин А.Н. Стрептококкоз свиней серогруппы & // Там же - с. 450-451.

28. Панин А.Н., Астафьева В.К. Усовершенствовать и внедрить методы контроля и стандартизации препаратов против кокковых инфекций сельскохозяйственных животных // Заключительный отчет - 1989, Je госрегистрации 01860043377.

29. Панин А.Н. Рекомендации о мероприятиях по профилактике и ликвидации стрептококкоза свиней // Ветеринария, 1990, Jf II, С. 78-79.

30. Панин А.Н., Астафьева В.К. Идентификация стрептококков в реакции коагглютинации // Биопрепараты, методы их стандартизации и контроля. Сб. научн. тр. ВГНКИ ветпрепаратов. - М., 1990, с. 3-6.

31. Панин А.Н. К вопросу об энтерококковой инфекции // Ветеринария, 1991, J? I, с. 25-26.

32. Панин А.Н. Методические указания по лабораторной диагностике стрептококкоза животных // Ветеринария, 1991, Ji 2, с.79.

33. Панин А.Н., Малик Е.В. Биологические свойства стрептококков, выделенных от свиней // Востник сельхоз. науки, 1991,

Я 3, с.139-142.

34. Панин А.Н., Котлова Л.А. Контроль иммуногенных свойств стрептококков серогруппы к // Совершенствование методов государственного контроля ветеринарных препаратов. Тез. докл. Всесоюзн. научн. конф. - М., 1991, с. 163.

35. Панин А.Н., Астафьева З.К. Диагностику:,! для идентификации стрептококков в реакции коагглютинации // Там же -

с. 165-168.

36. Панин А.Н., Астафьева В.К. Методика и условия постановки реакции коагглютинации для определения серогрупповой принадлежности стрептококков // Там же - с. 168-170.

37. Панин А.Н., Малик Е.В. Стрептококковый менингоонцефа-лит свиней // Ветеринария, 1991, Л 7, с. 35-39.

38. Streptococcus suis infection in swine in the USSH //Abstracts of ХНУ Yiorld Veterinary Congress , Rio de Janeiro , I991, p. 122.

39. Панин А.Н. Номенклатура стрептококковых инфекций // Тез. докл. И Всесоюзн. конф. по эпизоотологии. - Новосибирск, 1991, с. 386-387.

40. Панин А.Н. Стрептококкоз свиней серогруппы С // Вестник сельхоз. науки, 1991, Л 10, с. 142-147.

41. Панин А.'Н., Хенриксен Е. Характеристика streptococcus suis , выделенных от свиней в СССР // Доклады ВАСХКИЛ, 1991, .4 10, с. 45-48.