Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Ассоциированная инактивированная вакцина против парвовирусной болезни, стрептококкоза и сальмонеллеза свиней, оценка ее иммуногенных свойств

На правах рукописи

НУРГАЛИЕВ ФАРИТ МУЛЛАГАЛИЕВИЧ

'ич

АССОЦИИРОВАННАЯ ИНАКТИВИРОВАННАЯ ВАКЦИНА ПРОТИВ ПАРВОВИРУСНОЙ БОЛЕЗНИ, СТРЕПТОКОККОЗА И САЛЬМОНЕЛЛЕЗА СВИНЕЙ, ОЦЕНКА ЕЕ ИММУНОГЕННЫХ СВОЙСТВ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология 03.00.07 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Казань - 2006

Работа выполнялась на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии в ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э Баумана» и в лаборатории по изучению болезней молодняка сельскохозяйственных животных ФГУ «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности -ВНИВИ» (г. Казань)

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор

Госманов Рауис Госманович

Научный консультант: доктор ветеринарных наук, профессор

Гаффаров Харнс Зарипович

Официальные оппоненты: — доктор ветеринарных наук, профессор

Сафин Марат Абдрахмановнч

— доктор ветеринарных наук, Фомин Алексей Максимович

Ведущая организация: Институт ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Омский государственный аграрный университет»

Защита состоится «2?» <¿/¿1 2006 г. в /V. часов на заседании

диссертационного совета Д — 220.0034.01 при ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э Баумана» (420074, Казань, ул. Сибирский тракт, 35)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э Баумана»

Автореферат разослан «_»_2006 г.

Учёный секретарь диссертационного совета, профессор

М.С. Ежкова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Нарушения воспроизводительной способности свиноматок могут вызывать различные микроорганизмы и приводить к гибели плода на различных стадиях внутриутробного развития. Бактериальные и вирусные болезни являются причиной до 40% всех нарушений функций органов репродуктивной системы свиней. Причиной этой патологии у животных может, быть инфицирование парвовирусом свиней, вирусом репродуктивно-респираторного синдрома, хламидиями, стрептококками, сальмонеллами, бруцеллами, кишечной палочкой, лептоспирами и микоплазмами. Влияние на нарушения в воспроизводстве потомства оказывают также ящур, чума свиней, болезнь Ауески, грипп свиней, трансмиссивный гастроэнтерит свиней, африканская чума свиней, японский В-энцефалит, везикулярный стоматит и другие инфекции (Х.З. Гаффаров и др. 2004; Б. СуеЫб 1984; Т. ОгапсЫеп е1 а1. 1986).

Почти повсеместное распространение парвовирусной болезни свиней (ПВБС) в странах с интенсивно развитым свиноводством, в том числе и в Российской Федерации делает борьбу с. ней одним из основных условий, необходимых для обеспечения ■ нормального процесса воспроизводства свинопоголовья (Б.Г. Орлянкин и др. 1989; Т.З. Байбиков и др. 2005).

На сегодняшний день установлено наиболее важное значение условно-патогенной микрофлоры (стрептококков, сальмонелл) в этиологии инфекционных заболеваний, характеризующихся гибелью эмбрионов и плодов. Так, например, частота выделения патогенных стрептококков различных серологических групп. от маститных свиноматок из вагинального секрета и абортированных плодов составляет в среднем 51,6.%, 51,5 % и 15,9 % случаев соответственно. (Е.В.Малик 2000).

Большое значение в профилактике смешанных форм инфекционных болезней у свиноматок имеет вакцинолрофилактика. При иммунизации животных моновалентными вакцинными препаратами сложно охватить весь спектр микроорганизмов, участвующих в данной патологии свиноматок. В связи с этим наибольшее значение приобретают разработка и применение ассоциированных (комплексных) вакцин (Х.З. Гаффаров и др. 2003).

В этой связи представляется весьма актуальной разработка ассоциированной вакцины против парвовирусной болезни, стрептококкоза и сальмонеллеза свиней, которая одновременно обеспечивала бы защиту животных от этих инфекционных заболеваний.

Цель и задачи исследований. Целью данной работы явилась разработка лабораторного регламента технологии изготовления и оценка эффективности применения ассоциированной инактивированной вакцины против парвовирусной болезни, стрептококкоза и сальмонеллеза свиней.

В соответствии с целью работы были поставлены следующие задачи:

— изучить этиологическую структуру наблюдаемых нарушений воспроизводительной функции свиноматок в хозяйствах зоны Среднего Поволжья и Предуралья;

— выделить возбудителей парвовирусной болезни, сальмонеллеза и стрептококкоза, вызывающих поражения репродуктивной системы свиноматок и изучить основные биологические свойства выделенных микроорганизмов;

— отобрать наиболее перспективные штаммы для изготовления вакцины, отличающиеся высокой иммуногенной активностью;

— изготовить и изучить антигенные свойства ассоциированных сорбированной и эмульгированной вакцин против парвовируса, стрептококкоза и сальмонеллеза в лабораторных и производственных условиях;

— испытать профилактическую эффективность изготовленной вакцины против парвовирусной болезни, стрегггококкоза и сальмонеллеза свиней;

— разработать нормативно-техническую документацию на ассоциированную вакцину против парвовирусной болезни, стрептококкоза и сальмонеллеза свиней.

Научная новизна. Впервые на основе результатов клинико-эпизоотологичского мониторинга .и лабораторных исследований при инфекционных заболеваниях свиноматок, вызывающих нарушения воспроизводительной функции в ряде свиноводческих комплексов регионов Среднего Поволжья и Предуралья, показаны преимущественное распространение и циркуляция среди поголовья свиней возбудителей парвовирусной болезни, стрептококкоза и сальмонеллеза, проявляющиеся как моноинфекции так и в ассоциации.

Выделены и отобраны штаммы сальмонелл и стрептококков по степени патогенности для восприимчивых лабораторных животных, морфологическим, биохимическим и антигенным свойствам, а парвовируса «У-13» - по способности репродуцироваться в культуре клеток с характерными цитопатическими изменениями и антигенной идентичности его с референтными штаммами. Отобранные штаммы соответствуют основным требованиям, предъявляемым к штаммам микроорганизмов, пригодных для изготовления биопрепаратов.

На лабораторных и естественно восприимчивых животных установлены оптимальные концентрации и соотношение инактивированных антигенов микроорганизмов каждого штамма в вакцинном препарате, определена прививная доза для свиноматок.

Получены экспериментальные данные, указывающие на высокую антигенную и иммуногенную активность ассоциированной вакцины.

Испытание разработанной вакцины как в лабораторных, так и в производственных условиях показали ее эффективность.

Практическое значение.' На основе проведенных исследований разработана и предложена для внедрения в ветеринарную практику «Ассоциированная инактивированная гидроокисьалюминиевая вакцина против парвовирусной болезни, стрептококкоза и сальмонеллеза свиней». На основе полученных результатов разработаны нормативно-технические документы: инструкция по 'изготовлению и контролю, технические условия, инструкция по применению.

. Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на: Всероссийской 'научно-практической конференции, посвященной ' 45-летию ФГУ' ВНИВИ «Проблемы экотоксикологического, радиационного и эпизоотологического мониторинга» (Казань, 2005); Международном симпозиуме «Научные основы обеспечения защиты животных от экотоксикантов, радионуклеотидов и возбудителей опасных инфекционных заболеваний» (Казань, 2005); Международной научно-производственной конференции ФГОУ ВПО «КГАВМ» (Казань, 2006); конференции молодых ученых и специалистов КГАВМ им. Н.Э. Баумана (Казань 2006);

Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 научных работ, в том числе в «Ученых записках КГАВМ» (в списке изданий ВАК).

Основные положения диссертационной работы, выдвигаемые для защиты:

— этиологическая структура инфекционных заболеваний свиноматок с патологией органов репродуктивной системы в свинокомплексах регионов Среднего Поволжья и Предуралья; ' ■

— научное обоснование целесообразности создания ассоциированной вакцины против парвовирусной болезни, стрептококкоза и сальмонеллеза свиней; ■

— лабораторный регламент технологии изготовления, контроля и применения ассоциированной вакцины;

— . установление антигенной и иммуногениой ' активности ассоциированной вакцины на лабораторных животных и свиноматках;

- показатели профилактической эффективности ассоциированной вакцины в производственных условиях.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на' 158 страницах машинописного текста и включает: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения и список использованной литературы, состоящий из 200 источников, в том числе 92 иностранных. Диссертация иллюстрирована 12 таблицами и 3 рисунками.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы исследований

Работа выполнялась на'кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии в ! ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины им Н.Э. Баумана» и в лаборатории по изучению возбудителей болезней молодняка сельскохозяйственных животных ФГУ «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности -ВНИВИ» (г. Казань) и в ряде свиноводческих хозяйств, расположенных в регионах Среднего Поволжья и Предуралья, в соответствии с тематическим планом НИР ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ». ' > ,

Этиологию инфекционных болезней свиноматок с нарушением воспроизводительной функции изучали в 35 сельскохозяйственных предприятиях, расположенных в регионах Среднего Поволжья и Предуралья, из них 24 — в Республике Татарстан (РТ), 2 — в Республике Башкортостан (РБ), 6 - в Республике Марий Эл (РМ), 1 - Республике Чувашия, 1 — Кировской области, 1 — Ульяновской области.

Эпизоотологическое '-обследование и анализ ситуации в неблагополучных хозяйствах проводили согласно рекомендациям,

разработанным Бакуловым И. А. с соавт, (1975) .и Джупиной С. И. (1991). .,.,. . ■ ■

.Изучение этиологии данной формы патологии проводилось бактериологическим, вирусологическим и серологическим исследованиями 96 абортированных плодов, мертворожденных и новорожденных, поросят до . приема молозива, 937 сывороток крови свиноматок и хряков с целью .выявления возбудителей ПВБС, хламидиоза свиней, репродуктивно-, респираторного синдрома свиней. (РРСС), стрептококкоза, сальмонеллеза и .бруцеллеза., .. ...... ■•.-.. .

В процессе выполнения диссертационной работы были выделены из абортированных плодов свиноматок, отобраны, депонированы и использованы в качестве производственных штамм "У-13" парвовируса, штамм "С-05" стрептококкоза,, щтамм "К-03" сальмонеллеза.

При проведении ; экспериментов использовали лабораторных и естественно восприимчивых животных: свиноматки - 4515 голов, кролики — 18,голов; морские свинки — 5 голов; белые крысы —25 голов;,белые мыши -100 голов;. .. .. , • ■

Диагностика ПВБС осуществлялась . в соответствии с «Методическими указаниями по диагностике • парвовирусной болезни свиней», утверждены ГУВ Госагропрома СССР. 24.01.89. Выделение и изучение биологических свойств; культур " стрептококков из биоматериала проводили в соответствии с «Методическими указания по лабораторной диагностике стрептококкоза: животных», утверждены ГУВ МСХ СССР 30.08.83 г. Серологическую идентификацию и определение принадлежности стрептококков к группам по Лэнсфильду проводили в реакции латексной агглютинации с использованием набора 8Нс1ех Б1гери>. Выделение и изучение биологических свойств культур сальмонелл проводили в соответствии с «Методическими указаниями по бактериологической, диагнретике -сальмонеллезов животных» рекомендованы ГУВ МСХ СССР 30.12.71 г и «Лабораторная

диагностика сальмонеллезов человека и животных, обнаружение сальмонелл в кормах, продуктах питания и объектах внешней среды». Методические указания, утверждены ГУВ при ГК СМ СССР по продовольствию и закупкам (1990).

При изготовлении лабораторных; образцов ассоциированной вакцины; использовали инактивированные формалином бактёриальные' взвеси стрептококков, сальмонелл и парвовирусную суспензию:'' Составление ассоциированной вакцины проводили с таким расчетом, чтобы в 1 мл готового препарата содержалось 0,33 мл парвовирусной суспензии с геммагглютинирующей активностью 512 ГАЕ, З.ЗИо9 м.к. штамма стрептококков, 3,3x109 м.к. штамма сальмонелл, а также гель гидрата окиси алюминия, полученный' из ФГУП' «Щелковский биокомбинат», из расчета 10%' к общему объему ' вакцины. Все компоненты тщательно перемешивали, доводили рН вакцинй До 7,27,4, расфасовывали вакцину по флаконам и этикетировали.

4 В представленной работе для сравнительного изучения эффективности биопрепарата использовали вакцину, приготовленную с использованием масляного* адъюванта (МА), на основе минерального масла ДонковскогЪ химкомбината Липецкой области. '•' • - г

Антигенную активность вакцины изучали в опытах' на белых крысах, кроликах и свиньях по способности вызывать у них выработку специфических' антител к антигенам штаммов «У-13» Parvovirus "suis в реакций торможения гемагтлютинации (РТГА), «С-05» Streptococcus suis'й «К-05» Salmonella choleraesuis в реакции агглютинации (РА). Все операции с животными'осуществляли в соответствии с «Правилами приведения работ с использованием'экспериментальных животных», утверждены МСХ СССР от 31 июля 1978 года. " ' " ' '

Изучение особенностей клеточного иммунитета проводилось на кроликах после иммунизации ассоциированной вакциной. Т- и В-Лймф6циты: выделяли на градиенте плотности методом центрифугирования, их

идентификацию осуществляли в одном препарате методом Е-РОК и ЗСг РОК. .. . .;,

Оценку эффективности ассоциированной вакцины в производственных условиях осуществляли в 54-тысячном свинокомплексе ГУ СП «Совхоз Рощинский» РБ на основании сравнения фактических данных по получению жизнеспособных поросят до применения вакцины и после применения вакцины. ,,, '....;-■.

Полученные данные лабораторных исследований обрабатывали классическими методами вариационной статистики по известным программам на компьютере (Д.А. Старик, 1996; С. Фишер и др., 1997).

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ . Мониторинг инфекционных болезней свиноматок с патологией органов воспроизводства в регионах среднего Поволжья и Предуралья

В период 2003-2006, гг. проведено исследование 1033 проб биоматериалов для диагностики на парвовирусную болезнь свиней, стрептококкоза и сальмонеллеза, полученных из 35 хозяйств 2 областей и 4 республик Среднего Поволжья и Предуралья. Доля хозяйств, где имеются сероположительные животные, составляет 97%. .

Применение вакцин против ПВБС производства НПО «Нарвак» в условиях, крупных свинокомплексов «Совхоз Рощинский» • .РБ и «Камский бекон» РТ привело, к сокращению случаев абортов и рождения мертвых и нежизнеспособных поросят. Однако проблема полностью не была решена, несмотря.на то,; что титры антител к ПВС были достаточно высокими . и напряженность поствакцинального иммунитета была оценена как вполне надежной. Вместе с тем частота случаев нарушения воспроизводительной функции возрастала, проявляющаяся в . виде рождения мертвых, и . нежизнеспособных поросят. Поэтому в, дальнейшем основное внимание было уделено

выяснению причин возникновения спорадических случаев абортов и рождения мертвых плодов путем обнаружения в РТГА специфических антител к парвовирусу свиней и проведения бактериологического анализа 105-патологических материалов - абортированных плодов до 70-го дня развития и мертворожденных поросят, а также абортированных плодов свиней на последнем месяце супоросности, полученных из четырех крупных свинокомплексов.'

В результате проведенных исследований из биоматериалов «Совхоза Рощинский» и «Камский бекон» высевались патогенные по отношению к белым мышам микроорганизмы, идентифицированные как гемолитические стрептококки и сальмонеллы, а в двух других ( совхоз «Кисинский» Аксубаевского района и ООО «Шинник» Нижнекамского района РТ) свинокомплексах из паренхиматозных органов абортированных плодов и мертворожденных поросят выделены патогенные микроорганизмы, типизированные как сальмонеллы.

Обнаружение специфических антител в транссудатах грудной и брюшной полостей у мертворожденных поросят из этих хозяйств свидетельствовало об их внутриутробном инфицировании,' что косвенно подтверждает постоянную циркуляцию парвовируса свиней среди восприимчивого поголовья.

Таким . образом, вирусологическим, бактериологическим и серологическим исследованиями нами было показано, что нарушения функции репродуктивных органов свиноматок в обследованных свиноводческих комплексах чаще всего вызывают парвовирус свиней, стрептококки и сальмонеллы, которые способны преодолевать плацентарный барьер и вызывать указанные заболевания как моноинфекциии, так и в смешанной форме.

Выделение и изучение биологических свойств этиологических агентов, вызывающих нарушения воспроизводительной функции у ■„.г.* свиней

В нашей работе был использован штамм «У-13» ПВС, выделенный в 1997 году сотрудниками лаборатории контроля и индикации • возбудителей болезней молодняка сельскохозяйственных животных ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (Гаффаров Х.З., Абдеева М.З.). Культивирование штамма ■ «У-13» ПВС проводили в перевиваемой линии культуры клеток почки' поросенка' «казанская» ППК. Для определения гемагглютинирующей способности изучаемого штамма парвовируса использовали реакцию гемагглютинации. Определение инфекционной активности штамма «У-13»- парвовируса проводили путем титрования его на перевиваемой культуре клеток ППК. Инфекционный - титр вируса вычислили по методу Рида и Менча,

который составил 7,3±0,4 lg ТЦЦ50/МЛ-■

При бактериологическом исследовании 43 абортированных плодов свиней, 31 мертворожденного поросенка и 3 околоплодных оболочек с применением различных питательных сред были выделены гемолитические и не гемолитические бактерии.

Выделенные гемолитические микроорганизмы, патогенные для белых мышей, отнесли, к роду. Streptococcus. Наиболее перспективной в плане дальнейшего использования в . качестве производственного штамма в сравнительном изучении оказалась культура стрептококков условно обозначенная как «С-05». Данная культура была выделена из головного мозга мертворожденного поросенка, полученного из свинокомплекса «Камский бекон» Тукаевского района республики Татарстан. Серологическую идентификацию и определение принадлежности штамма «С-05» стрептококка к группам по Лэнсфильду провели в реакции латексной агглютинации (PJIA) с использованием набора Slidex Strepto. Штамм «С-05» стрептококка по результатам исследований отнесли к серогруппе В.

, Выделенные негемолитические бактерии, патогенные для белых мышей, по результатам биологических и серологических исследований отнесли к роду Salmonella. В качестве производственного штамма для изготовления вакцины была отобрана' наиболее вирулентная культура сальмонелл, выделенная нами ■ из селезенки абортированного плода, полученного из свинокомплекса совхоза «Кисинский» Аксубаевского района Республики Татарстан. Ее условно обозначили как штамм «К-05» Salmonella choleraesuis. ■ . , ... ,

Лабораторный регламент технологии изготовления гидроокисьалюминиевой и эмульгированной ассоциированных вакцин против парвовирусной болезни, стрептококкоза и

сальмонеллеза свиней Технология изготовления ассоциированной инактивированной вакцины включает получение и инактивацию биомассы с максимально возможным сохранением антигенных и иммуногенных свойств отобранных штаммов.

Наработку биомассы штамма «У-13» ПВС проводили в культуре клеток ППК. Инактивировали вирусную суспензию штамма «У-13» парвовируса формалином. Контроль полноты инактивации' вирусной суспензии проверяли в культуре клеток ППК путем проведения трехкратных слепых пассажей. " ■' " ' '

Для выращивания штамма ■ «С-05» Streptococcus suis использовали МПА с содержанием 1% глюкозы и 5-10% дефибринированной крови барана. Штамм «К-03» Salmonella choleraesuis для получения бактериальной массы культивировали на МПА в матрацах. Инактивацию бактериальных масс проводили формалином. Контроль полноты инактивации осуществляли путем посева инактивированных бактериальных масс на глюкозно-кровяной МПА, МПА, МПБ, МППБ и среду Сабуро. •

Перед нами была поставлена задача —. подобрать адъювант для вакцины, обеспечивающий высокую антигенную активность и обладающий при этом низкой реактогенностью для животных. В качестве депонатора мы

использовали гель гидрата окиси алюминия (ГОА) и масляный адъювант (МА), состоящий из минерального масла с ланолином.

Для приготовления ассоциированной ГОА вакцины использовали гель гидрата окиси алюминия, из расчета 10 мл геля на 100 мл вакцинного препарата. Вирусную суспензию штамма ПВС, обладающую до инактивации гемагглютинирующей активностью 1:512, смешивали с бактериальными суспензиями сальмонелл и стрептококков, содержащих в 1 мл по 10 млрд.м.к., в равных соотношениях, тщательно перемешивали, доводили рН вакцины до 7,2-7,4, расфасовывали по флаконам, обкатывали алюминиевыми колпачками и этикетировапи.

Для изготовления ассоциированной эмульсионной инактивированной вакцины вирусную суспензию ПВС концентрировали, путем сухого диализа используя полиэтиленгликоль-6000, при этом получали гемагтлютинирующую активность суспензии 1:1024 и инактивировали ее, затем смешивали с бактериальными суспензиями сальмонелл и стрептококков, содержащих в 1 мл по 40 млрд.м.к., в соотношении 2:1:1. Полученную массу в равном соотношении объединяли с масляным адъювантом, тщательно перемешивали в размельчителе тканей марки «РТ-1» при 4000 об./мин в течение 3 минут, с последующим увеличением скорости до 8000 об./мин в течение 6 минут. Биопрепарат расфасовывали во флаконы объемом 100 или 200 мл, закрывали резиновыми пробками, обкатывали алюминиевыми колпачками и этикетировапи.

. Проведенный контроль каждой серии вакцины на стерильность, остаточную вирулентность и безвредность показал, что биопрепараты соответствуют требованиям, предъявляемым к инактивированным вакцинам.

Изучение антигенной и нммуногенной активности гидроокисьалюминиевой и масляной ассоциированных вакцин на лабораторных животных Изучение антигенной активности моно- и ассоциированной гидроокисьалюминиевых вакцин на белых крысах и кроликах

Для оценки антигенной активности и совместимости антигенов изготовленной ассоциированной вакцины использовали белых крыс и кроликов, иммунизируя их моно- и ассоциированной вакцинами против парвовирусной болезни, стрептококкоза и сальмонеллеза свиней.

В опыте было использовано 5 групп крыс живой массой 150-200гр, состоящих из 5 животных каждая. Крысам первой группы вводили моновакцину, изготовленную на основе антигенов штамма «К-03» сальмонелл, второй группы — штамма «С-05» стрептококков, третей группе -штамма «У-13» ПВС, четвертой группе - ассоциированную вакцину, пятая группа крыс служила контролем. В одном миллилитре моновакцин против сальмонеллеза содержалось - 10 млрд.м.к., против стрептококкоза - 10 млрд.м.к., против ПВБС - 512 ГАЕ. Вакцинацию проводили парентерально: моновакцины крысам вводили по 0,5 мл подкожно, ассоциированную вакцину - 1,5 мл. От подопытных крыс кровь брали тотальным обескровливанием через 14 дней после иммунизации. Титры специфических антител в пробах сывороток крови к антигенам ПВС определяли в РТГА, к антигенам стрептококков и сальмонелл — в РА, они составили в впервой группе 7,4±0,27 log2 к штамму «К-03» Salmonella choleraesuis, в второй группе б,4±0,27 Iog2 — «С-05» Streptococcus suis, в третьей группе б,6±0,27 log2 - «У-13» Parvovirus suis, в четвертой 6,4±0,27 log2, 6,4±0,27 log2, 6,6±0,27 log2 соответственно, у пятой группы специфических антител обнаружено не было.

Сравнительный анализ результатов испытания моновакцин и ассоциированной вакцины на белых крысах показал, что различия антигенной активности у животных первой, второй и третьей групп по отношению к четвертой статистически не достоверны (Р>0,05),

Далее провели сравнительную оценку антигенной активности изготовленных образцов вакцины на кроликах. Вакцинные препараты вводили двукратно с интервалом в 14 дней в дозе по 1 мл для моновакцин и 3 мл для ассоциированной вакцины. Кроликов первой группы иммунизировали

моновакциной из штамма «У-13» Parvovirus suis, второй — моновакциной из штамма «С-05» Streptococcus, suis, третьей —моновакциной из штамма «К-03» Salmonella choleraesuis, четвертой — ассоциированной вакциной. С целью изучения динамики накопления специфических антител у кроликов взятие проб крови осуществляли из ушной вены до. иммунизации и на 14, 28 дни после вакцинации. Результаты исследований представлены в таблице 1.

Таблица 1.

Уровень специфических антител в сыворотках крови кроликов, иммунизированных моно- и ассоциированной вакцинами

№ группы животных Титр специфических антител в сыворотках крови

JJ¡> К парвовирусному антигену в РТГА (log2) К стрептококковому антигену в PA (log2) К сальмонеллезному антигену в PA (log2)

До вакц. Через 14 дней Через 28 дней До вакц. Через 14 дней Через 28 дней До вакц. Через 14 дней Через 28 дней

1 отр 7,6±0,4 10,0±0

2 отр 5,6±0,4 7,6±0,4

3 отр 8,6±0,4 10,6±0,4

4 отр 7,6±0,4 9,3±0,4 отр 5,3±0,4 7,6±0,4 отр 8,3±0,4 10,0±0

Результаты, представленные в таблице 1 показывают, что у всех подопытных кроликов, до введения вакцин, антитела к специфическим возбудителям отсутствовали, а после первой и второй вакцинации в сыворотках крови отмечалось увеличение титров антител. Таким образом, результаты проведенных исследований по изучению антигенной активности моно- и ассоциированной ГОА вакцин против парвовирусной болезни, стрептококкоза и сальмонеллеза свиней показали, что биопрепараты после двукратного введения лабораторным животным обеспечивают выработку специфических антител против антигенов парвовируса, Str. suis и S. choleraesuis.

Изучение иммуногенной активности гидроокисьалюминиевой и масляной ассоциированных вакцин на кроликах

Сравнительная оценка антигенной активности изучаемой ассоциированной вакцины против парвовирусной болезни, стрептококкоза и

сальмонеллеза свиней нами проведена с добавлением к ней масляного адъюванта или геля гидрата окиси алюминия.

В опыте использовали 2 группы кроликов, состоящих из трех животных каждая. Кроликам "первой группы вводили вакцину с МА внутримышечно в дозе 2 мл двукратно с интервалом 14 дней, второй группы - вакцину с добавлением ГОА внутримышечно в дозе 3 мл двукратно. Взятие крови для исследований осуществляли из ушной вены до иммунизации, на 14, 30, 60, 90, 120, 150 и 180-е дни после вакцинации. Результаты исследований представлены в таблице 1.

Из таблицы видно, : что на введение ассоциированной вакцины с добавлением МА у • животных в сыворотках крови обнаруживаются специфические антитела больше, чем на вакцину с ГОА. Однако выявленные отличия статистически недостоверны (Р>0,05).

Изучение особенностей клеточного . иммунитета проводилось на кроликах после иммунизации двумя вариантами ассоциированной инактивированной вакцины. Кроликов первой группы иммунизировали вакциной с добавлением МА в дозе 2 мл, второй группы вакциной с ГОА в дозе 3 мл, третью группу не иммунизировали - контрольная. Вакцины вводили двукратно с интервалом 14 дней внутримышечно. Взятие крови для исследований осуществляли из ушной вены до иммунизации и через 14 дней после каждой вакцинации.

Выделение лимфоцитов из крови кроликов проводили на градиенте плотности методом центрифугирования! Идентификацию и процентное соотношение Т- и В-лимфоцитов проводили в одном препарате методом Е-РОК и ЗСЗ-РОК. Результаты исследований количественных характеристик Ти В-лимфоцитов в периферической крови кроликов до вакцинации, через 14 дней после первой и второй вакцинации представлены в таблице 3.

Исследования показали, что количество Т-лимфоцитов в крови кроликов статистически достоверно повышалось у животных первой и второй групп после второй вакцинации (Р<0,01). Статистически достоверное

Таблица 2

X я Титры антител (1о&)

Антигены До Через 14 Через 30 Через 60 Через 90 Через 120 Через 150 Через 180

2 ■ Z ® s X вакц. дней дней дней дней дней дней дней

Кролики, иммунизированные вакциной с МА

Parvovirus suis отр. 6,67±0,41 9,67±0,41 11,33±0,41 11,0±0 11,0±0 10,67±0,41 10,33±0,41

1 Str. suis отр. 5,0±0 7,41±0,41 9,0±0 8,67±0,41 8,67±0,41 9,0±0 8,33±0,81

S. choleraesuis отр. 6,67±0,41 9,67±0,41 10,67±0,41 10,33±0,81 10,67±0,41 10,33±0,41 10,0±0

Кролики, иммунизированные ГОА вакциной

Parvovirus suis отр. 7,67±0,41 9,33±0,41 10,66±0,41 10,33±0,41 10,66±0,41 10,0±0,71 9,66±0,41

2 Str. suis отр. 5,33±0,41 7,67±0,41 8,67±0,41 8,33±0,41 8,33±0,41 8,67±0,41 7,67±0,41

S. choleraesuis отр. 8,33±0,41 10,0±0 11,0±0,71 11,33±0,41 10,67±0,41 11,0±0 9,66±0,41

Содержание Т- и В-лимфоцитов в крови кроликов, привитых двумя типами вакцин

Таблица 3

№№ Группы Лимфоциты (%)

До вакцинации После первой вакцинации После второй вакцинации

Т- . В- Т- Вг Т- В-

1 Использована вакцина с МА . 52,9±1,8 16,9±0,2 55,7±2,0 19,9±0,1 57,4±1,3 22,9±1,4

2 Использована вакцина с ГОА 52,7±1,6 16,4±0,4 55,2±1,5 19,2±0,2 58,2±0,9 23,5±0,5

3 Контрольная 52,1±0,2 16,5±0,4 52,3±0,1 16,7±0,2 52,6±0,4 16,7±0,2

увеличение В-лимфоцитов у животных первой и второй групп, отмечалось после первой и второй вакцинации (Р<0,001) по отношению к контрольной группе. Отличия между результатами первой и второй-опытных групп статистически недостоверны (Р>0,05).

Таким образом, результаты проведенных исследований по изучению ассоциированной инактивированной вакцины против парвовирусной болезни, стрептококкоза и сальмонеллеза свиней на кроликах показали, что она с добавлением ГОА или МА обладает антигенной и иммуногенной активностью и обеспечивает формирование напряженного иммунитета. •

Изучение антигенной активности гидроокнсьалюмиииевой ассоциированной вакцины на свиноматках Для определения оптимальной дозы ассоциированной ГОА вакцины опыты проводили в условиях свинофермы ООО «Оршанский сельхозпром» Оршанского района РМ на 3 группах свиноматок, состоящих из 5 животных

каждая. . , ..........- .• ■

При исследовании сывороток крови свиноматок -, до опыта специфических антител к антигенам ПВС в РТГА, стрептококкозу и сальмонеллезу в РА обнаружено не было. • -

Свиноматок иммунизировали ассоциированной ГОА >' вакциной внутримышечно в область шеи двукратно, первый раз за 2-3 недели до осеменения и второй раз - через 21 день. Первую группу свиноматок вакцинировали в дозе 3 мл, вторую группу ,— в дозе 5 мл, третью группу - в дозе 7 мл, четвертая группа свиноматок служила' контролем. Взятие крови осуществляли из хвостовой вены через 14 дней после повторной вакцинации. Результаты исследования проб сывороток крови свиноматок представлены в таблице 4. . ... . . ■ ••;/. ..■ ■••• >■ ■' - ■

Из таблицы 4 видно, что после вакцинации у животных во всех группах отмечалось увеличение титров специфических антител в сыворотке крови. При этом сравнительный анализ результатов испытания различных доз • препарата у животных при использовании доз 5 и 7 мл показал, что

достоверно (Р<0,05) достигаются более высокие титры антител по сравнению с дозой 3 мл.

Клиническое. наблюдение за вакцинированными свиньями показало", что двукратное введение вакцины не оказывало отрицательного влияния на

Таблица 4

Уровень специфических антител в сыворотке крови иммунизированных свиноматок на 14 день после второй вакцинации.

№№ группы животных Доза вакцины, мл - 8 "«¡I Я § ■ к. Уровень специфических антител в пробах сывороток крови

к парвовирусу вРТГА к стрептококкозу : в РА .....к сальмонеллезу в РА

1 3 М±т 9,4±0,27 5,б±0,27 9,0±0,35

5 М±т 10,8±0,42 6,4±0,27 . 9,8±0,22

. .3 .■ .. 7 М±т 11,2±0,55 6,6±0,27 10,0±0,35

общее состояние организма. На месте введения биопрепарата наблюдали незначительную припухлость, которая исчезала через 10-14 дней. После осеменения у всех подопытных животных супоросность прошла без осложнений, на одну свиноматку было получено в первой группе 10,2±0,41, второй — 10,6±0,57, третьей — 10,4=Ь0,57, четвертой — 10,4±0,57 поросенка.

Таким образом, была определена наиболее оптимальная'прививная доза . ассоциированной ГОА вакцины против парвовируса * свиней, стрептококкоза и сальмонеллеза свиней, которая составила 5 мл.

: Производственное испытание вакцины ассоциированной инактивнрованной вакцины против парвовирусной болезни, стрептококкоза и сальмонеллеза Производственное испытание опытных серий «Ассоциированной инактивнрованной вакцины против парвовирусной болезни, стрептококкоза и сальмонеллеза свиней» проводили в условиях крупного свиноводческого комплекса ГУ СП «Совхоз Рощинский» Стерлитамакского района РБ.

Свинокомплекс ГУСП «Совхоз Рощинский» рассчитан на 54 тыс. голов свиней, где в последние 5 лет наблюдались аборты, в отдельные месяцы, достигавшие 10-12% у супоросных свиноматок. В комплексе

регистрировались инфекционные ' заболевания "' свиноматок, характеризующиеся рассасыванием эмбрионов,' мумификацией плодов, абортами, рождением мертвых и нежизнеспособных поросят.

Как показали проведенные исследования, причиной наблюдаемой патологии свиноматок является комплекс факторов. В одних случаях они были обусловлены тем, что в хозяйстве циркулируют потенциальные возбудители инфекционных абортов свиноматок — парвовирус. и хламидии, в других случаях они были обусловлены смешанной инфекцией, чаще всего парвовирусом, стрептококками и сальмонеллами, которые вызывали у взрослых животных латентную инфекцию и протекали бессимптомно, но у супоросных свиноматок вызывали нарушения репродуктивной функции.

С учетом полученных нами результатов исследований для специфической профилактики парвовирусной болезни, стрептококкоза и сальмонеллеза свиноматок было решено провести производственное испытание в данном хозяйстве опытно-производственных серий ассоциированной вакцины против этих заболеваний.

Основных свиноматок вакцинировали первый раз за 2-3 недели до осеменения и второй раз через 21-23 дня, ремонтных свиноматок - первый раз за 3-4 недели до осеменения и второй раз через 21-23 дня. Хряков-производителей первый раз вакцинировали в 6-7 месячном возрасте, а затем через каждые 6 месяцев. Испытание ассоциированной инактивированной гидроокись алюминиевой вакцины против парвовирусной болезни, стрептококкоза и сальмонеллеза для вакцинации свиноматок и хряков производителей было проведено на 4500 гол. свиней в производственной зоне свинокомплекса «Совхоз Рощинский».

С целью определения уровня поствакцинального иммунитета у свиноматок, вакцинированных ассоциированной вакциной против парвовирусной болезни, стрептококкоза и сальмонеллеза свиней, проводили выборочные серологические исследования сывороток крови. Для этого кровь брали на 14 день после их повторной иммунизации. При этом установили

накопление специфических антител к парвовирусу в титрах 9,44±0,19 log2, к стрептококку - 5,88±0,I9 log2 и сальмонеллам - 7,88±0,19 log2, что служит количественной характеристикой антигенной активности биопрепарата.

Проведенный сравнительный анализ получения и 'сохранности приплода у ■ иммунизированных свиноматок показал, что применение ассоциированной вакцины ■ против парвовируса, стрептококкоза и сальмонеллеза способствовало увеличению выхода поросят. Так, если в группе иммунизированных свиноматок ассоциированной вакциной было получено . 85% жизнеспособных и 15% мертворожденных и нежизнеспособных-, поросят, то в контрольной группе '— оказалось соответственно 77,5%, и 22,5% поросят. Применение предложенной нами вакцины на свиноматках позволило увеличить выход поросят на 7,5%.

Следовательно, разработанная ассоциированная ГОА вакцина против парвовирусной . .: болезни, ■ стрептококкоза и сальмонеллеза свиней обуславливает формирование напряженного иммунитета и создает защиту плодов от этих возбудителей, и тем самым обеспечивает увеличение выхода поросят. .. . . ■> -- ■

Таким, образом, - разработана и ■ предложена для внедрения в ветеринарную " * практику «Ассоциированная инактивированная гидроокисьалюминиевая вакцина против ' парвовирусной болезни, стрептококкоза и сальмонеллеза • свиней». ' На основе полученных результатов .разработаны нормативно-технические документы: инструкция по изготовлению . и контролю,1 технические условия, инструкция по применению вакцины. ' -

ВЫВОДЫ

1.; к Клиникотэпизоотологическим обследованием свиноводческих комплексов в регионах Среднего Поволжья и Предуралья установлено, что инфекционные болезни у свиноматок, вызываемые инфекционными агентами вирусной и бактериальной природы, характеризуются гибелью эмбрионов и

плодов на разных стадиях внутриутробного развития, что проявляется в виде их мумификации, абортами (выкидышами), мертворождением и бесплодием.

2. Вирусологическим, бактериологическим и серологическим исследованиями показано, что нарушения функции репродуктивных органов свиноматок, вызывают парвовирус свиней, стрептококки и сальмонеллы, которые способны преодолевать плацентарный барьер и вызывать указанные заболевания как моноинфекциии, так и в смешанной форме.

3. По степени антигенной активности и патогенности для восприимчивых лабораторных животных в качестве производственных микроорганизмов отобраны штаммы «К-03» сальмонелл и «С-05» стрептококков, а по способности репродуцироваться й культуре клеток с характерными цитопатическими изменениями и антигенной идентичности его по отношению к референтному парвсвирусу — штамм «У-13» парвовируса свиней.

4. Сравнительным исследованием антигенной и иммуногенной активности ассоциированной' инактивированной вакцины на кроликах установлено, что ее масляный вариант в прививной дозе 2 мл и сорбированный на ГОА в прививной дозе 3 мл, обеспечивают максимальное накопление специфических антител к парвовирусу 11,33±0,41 и 10,66±0,41 1од2в РТГА, к стрептококку 9,0±0 1о£2 и 8,67±0,41 1он2 в РА, сальмонеллам 10,67±0,41 ^2 и 11,0±0,71 1о§2 в РА соответственно на 60 день после двукратного, с интервалом 14 дней, внутримышечного введения. Следовательно, в результате проведенных экспериментов показано, что оба варианта вакцин, содержащих в одной прививной дозе равное количество антигенов каждого ' штамма, обладают выраженной иммуногенной активностью.

5. Испытанием антигенной активности ассоциированной инактивированной гидроокисьалюминиевой вакцины на 3 группах свиноматок, состоящих из 5 животных в каждой, в условиях благополучного

по инфекционным заболеваниям хозяйства установлена оптимальная прививная доза.

6. Применение предложенной ассоциированной инактивированной гидроокисьалюминиевой вакцины в крупном свиноводческом комплексе вызывает образование специфических антител у животных к парвовирусу 9,44±0,19 log2 в РТГА, к стрептококку 5,88±0Л9 log2 в РА и сальмонеллам 7,88±0,19 log2 в РА, что служит количественной характеристикой антигенной активности биопрепарата. Двукратная иммунизация свиноматок ассоциированной вакциной за 2-3 недели до осеменения с интервалом 21-23 дня в дозе по 5 мл позволила увеличить выход поросят на 7,5% в сравнении с периодом до применения вакцины.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

На основе проведенных исследований разработана и предложена для внедрения в ветеринарную практику «Ассоциированная инактивированная гидроокисьаггюминиевая вакцина против парвовирусной болезни, стрептококкоза и сальмонеллеза свиней». Подготовлены нормативно-технические документы, регламентирующие изготовление, контроль и применение данного биопрепарата, в частности:

— Выделены, отобраны и депонированы в лаборатории по хранению и изучению штаммов возбудителей особо опасных болезней ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» штаммы «У-13» Parvovirus suis, «С-05» Streptococcus suis, «К-03» Salmonella choleraesuis, соответствующие основным требованиям, предъявляемым к производственным штаммам (24.01.2006 г.),

— «Временная инструкция по изготовлению и. контролю ассоциированной инактивированной вакцины против парвовирусной болезни, стрептококкоза и сальмонеллеза свиней» (утверждена ФГУ «ФЦГРБ-ВНИВИ» 24.01.2006 г.),

— «Технические условия на ассоциированную инактивированную вакцину против парвовирусной болезни, стрептококкоза и сальмонеллеза свиней» (утверждены ФГУ «ФЦГРБ-ВНИВИ» 15.02.2006 г.),

— «Временная инструкция по ' применению ассоциированной инактивированной вакцины против парвовирусной болезни, стрептококкоза и сальмонеллеза свиней (в порядке производственного опыта)» (утверждена ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» 15.02.2006 г.),

— материалы диссертации используются в учебном процессе ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины им Н.Э. Баумана».

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Нургалиев, Ф.М. Мониторинг заболеваний свиноматок с патологией воспроизводства в регионе среднего Поволжья и Предуралья / Ф.М. Нургалиев, М.З. Абдеева, Х.З. Гаффаров, Р.Г. Госманов, А.Г. Кузнецов // Всероссийская научно-практическая конференция, посвященная 45-летию ФГНУ ВНИВИ. - Казань, 2005. - С. 341-348.

2. Нургалиев, Ф.М. Иммунобиологическая характеристика эпизоотсшогически значимых возбудителей, обуславливающих патологию репродуктивной функции свиней / Ф.М. Нургалиев, М.З. Абдеева, Г.Н. Спиридонов, Х.З.Гаффаров, Р.Г. Госманов // Международный симпозиум -Казань, 2005. - Т. 2. - С. 247-251.

3. Нургалиев, Ф.М. Совместимость антигенов в ассоциированной вакцине против парвовирусной болезни, стрептококкоза и сальмонеллеза свиней / Ф.М. Нургалиев, Х.З. Гаффаров, Р.Г. Госманов // Мат. межд. науч.-произ. конференции, КГАВМ - Казань, 2006. - С. 38-42.

4. Нургалиев, Ф.М. Об этиологии инфекционных болезней свиноматок с нарушением воспроизводительной функции / Ф.М. Нургалиев Н Мат. конференции молодых ученых и специалистов КГАВМ им. Н.Э. Баумана -Казань, 2006.-С. 49-50.

5. Нургалиев, Ф.М. Разработка технологии изготовления ассоциированной вакцины против парвовирусной болезни, стрептококкоза и сальмонеллеза свиней / Нургалиев Ф.М., Гаффаров Х.З., Госманов Р.Г. // Ученые записки КГАВМ-Казань, - 2006. - Т. 183 - С. 171-176.

Подписано к печати 22. ИМ. Формат 60x84/1 б

Заказ ¿69 Тираж /Шэга. Усл.-печ! л. /¿7

Бумага офсетная . _ Печать RISO

Центр информационных технологий КГАВМ 420074, Казань, Сибирский тракт, 35.

Проблема сохранности приплода свиноматок и новорожденных поросят всегда была в центре внимания ученых и ветеринарных специалистов. В этом плане, хотя и немало сделано, все еще велик отход молодняка.

В настоящее время инфекционные болезни среди маточного поголовья свиней, сопровождающиеся нарушением функций воспроизводства и проявляющиеся рождением нежизнеспособных поросят, гибелью эмбрионов, плодов и абортами распространены как в крупных свиноводческих комплексах, так и небольших свиноводческих хозяйствах. На сегодняшний день проблема смешанных инфекций, вызываемых возбудителями парвовирусной болезни свиней, репродуктивно-респираторного синдрома, хламидиоза, стрептококкоза, сальмонеллеза и болезни Ауески в различных сочетаниях, является одной из актуальных. На их долю приходится около 50% всей патологии маточного поголовья свиней, проявляющейся поражением органов воспроизводства (Х.З. Гаффаров и др., 2003). Распространенность смешанных инфекций объясняется ветеринарно-санитарным состоянием свинокомплексов, условиями кормления и содержания животных, так на ограниченной территории создана беспрецедентная концентрация поголовья (В.М. А п ате н ко, 1982).

Парвовирусная болезнь свиней (ПВБС) широко распространена в странах с развитым свиноводством, в том числе и на территории Российской Федерации. Эпизоотологический мониторинг затруднен тем, что это стационарная инфекция, которая протекает бессимптомно. ПВБС наносит значительный экономический ущерб свиноводческим хозяйствам нашей страны и за рубежом (Т.З. Байбиков и др., 2005). Почти повсеместное распространение ПВБС в странах с интенсивно развитым свиноводством делает борьбу с ней одним из основных условий, необходимых для обеспечения нормального процесса воспроизводства свинопоголовья (Б.Г. Орлянкин и др., 1989).

Микробный пейзаж репродуктивных органов свиноматок представлен различными ассоциациями аэробных и анаэробных микроорганизмов. В состав нормальной микрофлоры влагалища у 64,3% свиноматок входят грамположительные кокки рода Streptococcus, в т.ч. 44,4% Streptococcus группы D. У 42,8% исследуемых животных высеваются стафилококки. Грамотрицательная микрофлора представлена энтеробактериями родов: Esherichia, Proteus, Enterobacter и Serratia. (М.В. Бирюков, 2002г)

Частота выделения патогенных стрептококков различных серологических групп от маститных свиноматок из вагинального секрета и абортированных плодов составляет в среднем 51,6 %, 51,5 % и 15,9 % случаев соответственно. (Е.В. Малик, 2000г).

Большое значение в профилактике смешанных форм инфекционных болезней у свиноматок играет вакцинопрофилактика. Поскольку при иммунизации животных моновалентными вакцинными препаратами сложно охватить весь спектр микроорганизмов, участвующих в данной патологии свиноматок. В связи с этим наибольшее значение приобретают разработка и применение ассоциированных (комплексных) вакцин (Х.З. Гаффаров и др., 2003).

Анализ результатов исследований по применению ассоциированных вакцин свидетельствуют о том, что использование их позволяет значительно сократить время на создание защиты одновременно к нескольким болезням, уменьшить степень аллергизации животных, избежать неблагоприятного воздействия стресс-факторов, сократить затраты на профилактические мероприятия и значительно облегчить труд специалистов (А.П. Михайлюк и др., 1982).

В этой связи представляется весьма актуальной разработка ассоциированной вакцины против парвовирусной болезни, стрептококкоза и сальмонеллеза свиней, которая бы одновременно обеспечивала защиту животных от этих инфекционных заболеваний.

Цель и задачи исследований. Целью данной работы явилась разработка лабораторного регламента технологии изготовления и оценка эффективности применения ассоциированной инактивированной вакцины против парвовирусной болезни, стрептококкоза и сальмонеллеза свиней.

В соответствии с целью работы были поставлены следующие задачи:

- изучить этиологическую структуру наблюдаемых нарушений воспроизводительной функции свиноматок в хозяйствах зоны Среднего Поволжья и Предуралья;

- выделить возбудителей парвовирусной болезни, сальмонеллеза и стрептококкоза, вызывающих поражения репродуктивной системы свиноматок и изучить основные биологические свойства выделенных микроорганизмов;

- отобрать наиболее перспективные штаммы для изготовления вакцины, отличающиеся высокой иммуногенной активностью;

- изготовить и изучить антигенные свойства ассоциированных сорбированной и эмульгированной вакцин против парвовируса, стрептококкоза и сальмонеллеза в лабораторных и производственных условиях;

- испытать профилактическую эффективность изготовленной вакцины против парвовирусной болезни, стрептококкоза и сальмонеллеза свиней;

- разработать нормативно-техническую документацию на ассоциированную вакцину против парвовирусной болезни, стрептококкоза и сальмонеллеза свиней.

Научная новизна. Впервые на основе результатов клинико-эпизоотологичского мониторинга и лабораторных исследований при инфекционных заболеваниях свиноматок, вызывающих нарушения воспроизводительной функции в ряде свиноводческих комплексов регионов Среднего Поволжья и Предуралья показаны преимущественное распространение и циркуляция среди поголовья свиней возбудителей парвовирусной болезни, стрептококкоза и сальмонеллеза, проявляющиеся как моноинфекции, так и в ассоциации.

Выделены и отобраны штаммы сальмонелл и стрептококков по степени патогенности для восприимчивых лабораторных животных, морфологическим, биохимическим и антигенным свойствам, а парвовируса «У-13» - по способности репродуцироваться в культуре клеток с характерными цитопатическими изменениями и антигенной идентичности его с референтными штаммами. Отобранные штаммы соответствуют основным требованиям, предъявляемым к штаммам микроорганизмов, пригодных для изготовления биопрепаратов.

На лабораторных и естественно восприимчивых животных установлены оптимальные концентрации и соотношение инактивированных антигенов микроорганизмов каждого штамма в вакцинном препарате, определена прививная доза для свиноматок.

Получены экспериментальные данные, указывающие на высокую антигенную и иммуногенную активность ассоциированной вакцины.

Испытание разработанной вакцины как в лабораторных, так и в производственных условиях показали ее эффективность.

Практическое значение. На основе проведенных исследований разработана и предложена для внедрения в ветеринарную практику «Ассоциированная инактивированная гидроокисьалюминиевая вакцина против парвовирусной болезни, стрептококкоза и сальмонеллеза свиней». Подготовлены нормативно-технические документы, регламентирующие изготовление, контроль и применение данного биопрепарата, в частности:

- выделены, отобраны и депонированы в лаборатории по хранению и изучению штаммов возбудителей особо опасных болезней ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» штаммы «У-13» Parvovirus suis, «С-05» Streptococcus suis, «К-03» Salmonella choleraesuis, соответствующие основным требованиям, предъявляемым к производственным штаммам (24.01.2006 г.);

- «Временная инструкция по изготовлению и контролю ассоциированной инактивированной вакцины против парвовирусной болезни, стрептококкоза и сальмонеллеза свиней» (утверждена ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» 24.01.2006 г.);

- «Технические условия на ассоциированную инактивированную вакцину против парвовирусной болезни, стрептококкоза и сальмонеллеза свиней» (утверждены ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» 15.02.2006 г.);

- «Временная инструкция по применению ассоциированной инактивированной вакцины против парвовирусной болезни, стрептококкоза и сальмонеллеза свиней (в порядке производственного опыта)» (утверждена ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» 15.02.2006 г.).

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на:

- Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 45-летию ФГНУ ВНИВИ «Проблемы экотоксикологического, радиационного и эпизоотологического мониторинга» (Казань, 2005),

- Международном симпозиуме «Научные основы обеспечения защиты животных от экотоксикантов, радионуклидов и возбудителей опасных инфекционных заболеваний» Часть Н.(Казань, 2005),

- Международной научно-производственной конференции, КГАВМ (Казань, 2006),

- Конференции молодых ученых и специалистов КГАВМ им. Н.Э. Баумана (Казань 2006).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 научных работ, в том числе в «Ученых записках КГАВМ» (в списке изданий ВАК).

На защиту выносятся:

- этиологическая структура инфекционных заболеваний свиноматок с патологией органов репродуктивной системы в свинокомплексах регионов Среднего Поволжья и Предуралья;

- научное обоснование целесообразности создания ассоциированной вакцины против парвовирусной болезни, стрептококкоза и сальмонеллеза свиней;

- лабораторный регламент технологии изготовления, контроля и применения ассоциированной вакцины;

- установление антигенной и иммуногенной активности ассоциированной вакцины на лабораторных животных и свиноматках;

- показатели профилактической эффективности ассоциированной вакцины в производственных условиях.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 158 страницах машинописного текста и включает: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения, список использованной литературы и приложения. Список литературы содержит 200 источников, в том числе 92 иностранных. Диссертация иллюстрирована 12 таблицами и 3 рисунками.

ВЫВОДЫ

1. Клинико-эпизоотологическим обследованием свиноводческих комплексов в регионах Среднего Поволжья и Предуралья установлено, что инфекционные болезни у свиноматок, вызываемые инфекционными агентами, вирусной и бактериальной природы, характеризуются гибелью эмбрионов и плодов на разных стадиях внутриутробного развития, что проявляется в виде их мумификаций, абортами (выкидышами), мертворождением и бесплодием.

2. Вирусологическим, бактериологическим и серологическим исследованиями показано, что нарушения функции репродуктивных органов свиноматок, вызывают парвовирус свиней, стрептококки и сальмонеллы, которые способны преодолевать плацентарный барьер и вызывать указанные заболевания как моноинфекциии, так и в смешанной форме.

3. По степени антигенной активности и патогенности для восприимчивых лабораторных животных в качестве производственных микроорганизмов отобраны штаммы «К-03» сальмонелл и «С-05» стрептококков, а по способности репродуцироваться в культуре клеток с характерными цитопатическими изменениями и антигенной идентичности его по отношению к референтному парвовирусу - штамм «У-13» парвовируса свиней.

4. Сравнительным исследованием антигенной и иммуногенной активности ассоциированной инактивированной вакцины на кроликах установлено, что ее масляный вариант в прививной дозе 2 мл и сорбированный на ГОА в прививной дозе 3 мл, обеспечивают максимальное накопление специфических антител к парвовирусу 11,33±0,41 log2 и 10,66±0,41 log2B РТГА, к стрептококку 9,0±0 log2 и 8,67±0,41 log2 в РА, сальмонеллам 10,67±0,41 log2 и 11,0±0,71 log2 в РА соответственно на 60 день после двукратного, с интервалом 14 дней, внутримышечного введения. Следовательно, в результате проведенных экспериментов показано, что оба варианта вакцин, содержащих в одной прививной дозе равное количество антигенов каждого штамма, обладают выраженной иммуногенной активностью.

5. Испытанием антигенной активности ассоциированной инактивированной гидроокисьалюминиевой вакцины на 3 группах свиноматок, состоящих из 5 животных в каждой, в условиях благополучного по инфекционным заболеваниям хозяйства установлена оптимальная прививная доза.

6. Применение предложенной ассоциированной инактивированной гидроокисьалюминиевой вакцины в крупном свиноводческом комплексе у животных вызывает образование специфических антител у животных к парвовирусу 9,44±0,19 log2 в РТГА, к стрептококку 5,88±0,19 log2 в РА и сальмонеллам 7,88±0,19 log2 в РА, что служит количественной характеристикой антигенной активности биопрепарата. Двукратная иммунизация свиноматок ассоциированной вакциной за 2-3 недели до осеменения с интервалом 21-23 дня в дозе по 5 мл позволила увеличить выход поросят на 7,5% в сравнении с периодом до применения вакцины.

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

На основе проведенных исследований разработана и предложена для внедрения в ветеринарную практику «Ассоциированная инактивированная гидроокисьалюминиевая вакцина против парвовирусной болезни, стрептококкоза и сальмонеллеза свиней». Подготовлены нормативно-технические документы, регламентирующие изготовление, контроль и применение данного биопрепарата, в частности:

- Выделены, отобраны и депонированы в лаборатории по хранению и изучению штаммов возбудителей особо опасных болезней ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» штаммы «У-13» Parvovirus suis, «С-05» Streptococcus suis, «К-03» Salmonella choleraesuis, соответствующие основным требованиям, предъявляемым к производственным штаммам (24.01.2006 г.),

- «Временная инструкция по изготовлению и контролю ассоциированной инактивированной вакцины против парвовирусной болезни, стрептококкоза и сальмонеллеза свиней» (утверждена ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» 24.01.2006 г.),

- «Технические условия на ассоциированную инактивированную вакцину против парвовирусной болезни, стрептококкоза и сальмонеллеза свиней» (утверждены ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» 15.02.2006 г.),

- «Временная инструкция по применению ассоциированной инактивированной вакцины против парвовирусной болезни, стрептококкоза и сальмонеллеза свиней (в порядке производственного опыта)» (утверждена ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» 15.02.2006 г.),

- материалы диссертации используются в учебном процессе ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины им Н.Э. Баумана».