Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Специфическая профилактика и лечение ассоциативных инфекционных болезней нутрий

На правахлукоииси -

ШЕВЧЕНКО ЛЮДМИЛА ВАСИЛЬЕВНА

СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА И ЛЕЧЕНИЕ АССОЦИАТИВНЫХ ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ НУТРИЙ

16 00 03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

ООЗ169598

Краснодар, 2008

003169598

Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет», на кафедрах микробиологии, эпизоотологии и вирусологии факультета ветеринарной медицины

Научный консулы ант:

доктор ветеринарных наук, академик РАСХН,

заслуженный деятель науки РФ Бакулов Игорь Алексеевич Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук,

профессор Болоцкий Иван Александрович

доктор ветеринарных наук,

профессор Тимченко Людмила Дмитриевна

доктор ветеринарных наук,

профессор Малышева Людмила Александровна

Ведущая организация - Ставропольский государственный аграрный университет

Защита диссертации состоится 2008 г в часов на

заседании диссертационного совета Д 220 038 07 при Кубанском государственном aipapHOM университете по адресу 350044, г Краснодар, ул. Калинина 13, корпус факультета ветеринарной медицины, аудитория №-7

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет»

Автореферат размещен на официальном сайте»Л>ГОУ ВПО_ «Кубанский ГАУ» http //www kubagroru «/<9»cftf2008 г

Автореферат разослан < 2008 г

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор ветеринарных наук, профессор

Родин И А

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. По производству пушнины Россия традиционно является одним из мировых лидеров Значительную часть дохода этой отрасли приносят нутрии

Нутриеводство - перспективная отрасль пушного звероводства От нутрий получают вкусное диетическое мясо, ценные шкурки различных расцветок [В Г Кузнецов, 1993, В.Ф. Кладовщиков, 2002, Н.А Балакирев, 2006] Разведением нутрий занимаются государственные, фермерские хозяйства и нутриеводы-любители в различных климатических зонах [Н А Балакирев, 2002, Г А Кузнецов, 2003, И А Плотников, 2003]

Стабильному развитию нутриеводства препятствуют инфекционные болезни колибактериоз, сальмонеллез и стрептококкоз Они регистрируются во всех развитых странах мира, в том числе и в России, и наносят значительный экономический ущерб отрасли [В.А Есепенок и соавт, 1997, АН Панин и соавт, 1997, ПА Емель^ненко, 2000, ВФ Коссе, 2001, В И Терехов, 2005, В Kohler et al, 1988, А Them, 1998]

Следует отметить также, что колибактериоз, сальмонеллез и стрептококкоз имеют эпидемиологическое значение Роль эшерихий, сальмонелл и стрептококков в инфекционной патологии животных и человека ежегодно возрастает [Н И Брико, 2000, Е С Вылегжанина, 2001, Н М Колычев, 2006]

Как показывает мировой опыт, во многих случаях одним из основных средств специфической профилактики инфекционных болезней животных является вакцинация Выпускаемые в России поливалентная вакцина против сапьмонеллеза и колибактериоза пушных зверей [С Я. Любашенко, 1963], против стрептококкоза и пастереллеза нутрий [В А Есепенок и соавт, 1997] содержат в своем составе определенные штаммы возбудителей Антигенный состав биопрепаратов был предложен в 60-90 гг XX столетия и до сих пор не пересматривался Проводимый мониторинг не учитывает серотиповую циркуляцию штаммов возбудителей инфекционных болезней Выпускаемые биофабриками вакцины не соответствуют антигенному профилю эшерихий, сальмонелл, стрептококков и не обеспечивают надежной защиты от них нутрий.

В последние годы в нутриеводческих хозяйствах широкое распространение получило ассоциативное течение колибактериоза, сальмонеллеза, стрептококкоза, а также пастереллеза, стафилококкоза в различных сочета-

ниях [РА Кадымов, 1998, В И Терехов, 1999, ЛП Миронова, 1999, 2000, 2001, Н В Броварец, 2003, С Н Треглазов,ЛА Малышева, 2003]

В связи с этим большое значение придается применению ассоциированных вакцин, преимущество которых заключается в создании иммунитета сразу к нескольким болезням одновременно при отсутствии у животных иммунодепрес-сивных процессов, повышении производительности труда и снижении процента травмирования и осложнений при отлове и фиксации животных [Р А Кадымов и соавт, 1990, И А Домский, 2002, В А Есепенок и соавт, 2005,2006]

Для защиты нутрий от ассоциативных инфекций колибактериоза, саль-монеллеза и стрептококкоза в России ассоциированные вакцины не разработаны Изучение возможности их конструирования и применения с целью иммунизации пушных зверей представляет большой научный и практический интерес Проведение таких исследований может решить проблему надежной профилактики данных заболеваний у восприимчивых растительноядных

Учитывая сложную эпизоотическую обстановку, обусловленную совместным действием различных возбудителей, разработка новых ассоциированных вакцин является одним из важнейших современных направлений в области инфекционной патологии животных

Серофупповой состав стрептококков, эшерихий, сальмонелл многочислен и склонен к быстрым изменениям набора и количества В такой ситуации методы специфической профилактики должны основываться на применении ассоциированных вакцин, содержащих сероварианты возбудителей, которые выделяются от больных и павших животных в эпизоотическом оча> е Биопрепараты из местных штаммов возбудителей болезней обладают более высокими антигенными и иммуногенными свойствами и способствуют созданию иммунитета достаточной напряженности [АМ Ахмедов, 1983, В И Вачугов, 1989, Р А Кадымов и соавт, 1990, Р Т Маннапова, 1998, Н Н Шульга, 2006]

Исследований по включению в состав ассоциированных вакцин антигенов колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий согласно выделенному серотиповому составу не проводилось Разработка таких вакцинных ассоциаций для профилактики данных заболеваний целесообразна в теоретическом и практическом отношениях.

Цель и задачи исследований. Целью работы являлась разработка комплекса мероприятий для специфической профилактики ассоциативных

инфекционных болезней нутрий - колибактериоза, сальмонеллеза, стрепто-коккоза - и их лечения

Для достижения намеченной цели были поставлены следующие задачи..

- изучить эпизоотическую обстановку по инфекционным болезням нутрий и определить серологический профиль возбудителей,

- разработать технологии изготовления, нормативно-техническую документацию по изготовлению и контролю инактивированных моно- и ассоциированных вакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий,

- изучить иммунобиологические свойства новых моно- и ассоциированных вакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий в экспериментальных и производственных условиях,

- изучить иммунобиологическую реактивность организма нутрий до и после применения ассоциированной вакцины против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий,

- изучить эффективность новых ассоциированных вакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий в экспериментальных и производственных условиях,

- изучить лечебное действие антибактериальных препаратов при ассоциативной инфекции колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий,

- разработать систему профилактических и лечебных мероприятий по колибакгериозу, сальмонеллезу и стрептококкозу нутрий

Научная новизна. Впервые изучена эпизоотическая обстановка по инфекционным болезням нутрий и определен серологический профиль возбудителей

Впервые разработаны технологии изготовления новых инактивированных моновакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и ассоциированных вакцин против сальмонеллеза и стрептококкоза, колибактериоза и стрептококкоза, сальмонеллеза и колибактериоза, колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий

Отработана кинетика инактивации возбудителей колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза на основе совместного действия инактивантов разной физико-химической природы, которые позволяют в несколько раз уменьшить количество формалина, вводимого в бактериальную культуру, и

в 4 раза сократить время инактивации микроорганизмов по сравнению с традиционными технологиями

В результате исследований определены оптимальные соотношения антигенов и адъюванта, входящих в состав новых инактивированных ассоциированных вакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий, а также дозы и схемы введения биопрепаратов Установлена безвредность, слабая реактогенность и высокая иммуногенность новых инактивированных моно-и ассоциированных вакцин при их применении на нутриях Впервые изучена динамика морфобиохимических показателей и формирование клеточного и гуморального звеньев иммунитета у нутрий до и после применения ассоциированной вакцины против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза

Установлено, что применение инактивированных ассоциированных вакцин позволяет обеспечить не менее чем 80%-ную защиту нутрий от возбудителей колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза, сократить количество вакцинаций в 2-3 раза и при этом создать иммунное поголовье в короткие сроки, повысить производительность труда зооветспециалистов и обслуживающего персонала, уменьшить в два-три раза затраты на проведение противоэпизоотических мероприятий против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий

Разработана и внедрена в ветеринарную практику система мероприятий по профилактике и ликвидации инфекционных заболеваний колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий Установлено высокое лечебное действие отечественного антибактериального препарата абактан при ассоциативной инфекции колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий

Научная новизна работы подтверждена и защищена 10 патентами РФ на изобретение

Теоретическая и практическая значимость работы Теоретически обоснована и практически подтверждена необходимость защиты нутрий от инфекционных болезней моно- и ассоциированными вакцинами, изготовленными из местных штаммов возбудителей колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий Разработаны и предложены для внедрения в производство новые инактивированные моновакцины против колибактериоза, сальмонеллеза и ассоциированные вакцины против сальмонеллеза и стрептококкоза, сальмонеллеза и колибактериоза, колибактериоза и стрептококкоза,

колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий, а также технологии изготовления этих вакцин

Выявлен характер изменений неспецифического и специфического звеньев иммунитета, проявляющихся после иммунизации нутрий ассоциированной вакциной против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза Установлено, что в формировании специфической защиты нутрий ведущая роль принадлежит В-лимфоцитам, у-глобулинам, иммуноглобулинам IgA, IgM, IgG Выявленные закономерности клеточной реакции фагоцитов полностью соответствуют активации уровня гуморального звена иммунитета у нутрий и существенно дополняют характеристику специфического иммунного ответа

Разработана и утверждена в установленном порядке нормативно-техническая документация (регламент по изготовлению и контролю, технические условия, временные наставления по применению моно- и ассоциированных вакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий)

Производство разных вариантов новых инактивированных вакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрии освоено в ФГУ «Краснодарская биофабрика» и в ФГУ «Армавирская биофабрика». Изготовлено более 250 тыс доз биопрепаратов, которые были испытаны с положительными результатами в производственных условиях

На основании теоретических, экспериментальных и производственных исследований разработана и Енедрена в ветеринарную практику система мероприятии по профилактике и ликвидации инфекционных заболеваний колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий, включающая изучение эпизоотической обстановки хозяйства, выделение возбудителей, конструирование инактивированных вакцин, их контроль и применение Разработана и предложена схема лечения ассоциативной инфекции колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий,

Материалы исследований включены в утвержденные рекомендации по профилактике и ликвидации колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий, изложены в монографии «Нутрии», в учебном пособии «Биологические особенности и болезни нутрий», утвержденном МСХ РФ (№ 27-2-13/3912 от 12 01 2004 г), защищены патентами на изобретение, используются при чтении лекций и проведении лабораторно-практических за-

нятий по дисциплинам «Болезни пушных зверей», «Ветеринарная микробиология и иммунология», «Лабораторная диагностика инфекционных болезней животных»

Результаты исследований подтверждены актами внедрения

Связь работы с научными программами. Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематическим планом научно-исследовательской тематики Кубанского государственного аграрного университета, государственный регистрационный №01200113464 «Разработка и совершенствование специфической профилактики инфекционных болезней животных», по проекту № 03-04-96554 гранта совместных конкурсов РФФИ и администрации Краснодарского края «Теоретическое и экспериментальное моделирование профилактики инфекционных болезней у нутрий в Краснодарском крае», по проекту № 06-04-96772 гранта совместных конкурсов РФФИ и администрации Краснодарского края «Юг России» «Теоретическое и экспериментальное моделирование эпизоотологической и экологической безопасности выращивания нутрий»

Апробация результатов исследований. Основные положения и результаты диссертации доложены и обсуждены на международных научно-практических конференциях (Покров, 2002, 2003; Троицк, 2005, Ростов-на-Дону, 2007); на Всероссийской конференции грантодержателей регионального конкурса РФФИ и администрации Краснодарского края (Краснодар, 2003, 2004, 2005, 2006, 2007), на региональных научно-практических конференциях (Омск, 2004, Краснодар, 2004-2008), на II Всероссийской научно-практической конференции студентов, аспирантов и молодых ученых, Донской ГАУ (пос Персиановка, 2004), на научно-практической конференции молодых ученых (Краснодар, 2002), на заседаниях ученого совета Кубанского государственного аграрного университета (2001-2008)

Публикации результатов исследований. По материалам диссертации изданы 59 научных работ (в том числе монография, учебное пособие, утвержденное МСХ РФ, № 27-2-13/3912 от 12 01 2004 г), 9 из них опубликованы в журналах, рекомендуемых ВАК Министерства образования и науки России' «Ветеринария» - 2, «Вестник Саратовского госагроуниверситета им Н И Вавилова» - 1, «Известия высших учебных заведений Северо-Кавказский регион» - 1, «Труды Кубанского государственного аграрного университета» - 5, а также в материалах международных конференций - 6 (Покров, Ростов-на-

Дону, Троицк) и всероссийских научно-производственных конференций - 7 (Краснодар, Омск, пос Персиановка), в журналах- «Ветеринария сельскохозяйственных животных» - 2, «Вестник ветеринарии» - 1, «Наука Кубани» -1, «Современные наукоемкие технологии» — 2, «Успехи современного естествознания» - 2, «Фундаментальные исследования» - 1, в официальном бюллетене Российского агенства по патентам и товарным знакам «Изобретения, полезные советы» - 10, в сборниках научных трудов ДонГАУ - 3, КубГАУ -7 и в других научно-производственных изданиях

Основные положения, выносимые на защиту:

- результаты изучения эпизоотической обстановки по инфекционным болезням нутрий и определения серологического профиля возбудителей,

- результаты разработки технологий изготовления и методов контроля инактивированных моно- и ассоциированных вакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий,

- результаты изучения иммунобиологических свойств и эффективности новых инактивированных моно- и ассоциированных вакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий в экспериментальных и производственных условиях,

- результаты изучения иммунобиологической реактивности организма нутрий до и после прививки ассоциированной вакциной против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий,

- результаты изучения эффективности антибактериальных препаратов при ассоциативной инфекции колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий;

- результаты разработки системы профилактических и лечебных мероприятий по колибактериозу, сальмонеллезу и стрептококкозу нутрий

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 302 листах машинописного текста и содержит разделы введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований, выводы, предложения производству, список использованной литературы и приложения Работа иллюстрирована 46 таблицами, 35 рисунками, 6 фотографиями Список литературы включает 480 источников, в том числе 101 работа зарубежных авторов

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в период с 2000 по 2007 гг на базе кафедр микробиологии, эпизоотологии и вирусологии ФГОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет», ГУ «Кропоткинская зональная ветеринарная лаборатория», в звероводческих хозяйствах Краснодарского края, в ФГУ «Краснодарская биофабрика» и «Армавирская биофабрика»

Эксперименты на лабораторных животных и нутриях проводили в виварии ГУ «Кропоткинская зональная ветеринарная лаборатория», на базе плем-зверосовхоза «Северинский», фермерских хозяйств п Лорис, г Усть-Лабинска, в ФГУ «Краснодарская биофабрика» и ФГУ «Армавирская биофабрика» Краснодарского края В работе использовали выделенные от павших нутрий штаммы возбудителей стрептококкоза (Sir pneumoniae), сальмонеллеза (S typhmurium), колибактериоза (Е coli Ol).

Для определения патогенности возбудителей, испытаний вакцин на безвредность, реактогенность, иммуногенность, пассажей и титрования возбудителей использовали белых беспородных мышей (Muris) массой 16-18 г-2500, нутрий (Miocastor coypus) различного возраста и окраса - 78500

Исследования проведены на клинически здоровых нутриях, которые были подобраны по принципу аналогов (породной принадлежности, возрасту, физиологическому состоянию, упитанности) Рационы животных соответствовали нормам, разработанным в НИИ пушного звероводства и кролиководства им В А. Афанасьева Молодняк нутрий вакцинировали в возрасте от 40 до 60 дней, взрослых животных - за месяц до случки, беременных самок — во второй половине беременности

Производственные испытания вакцин проводили в племзверосовхозе «Северинский» и фермерских хозяйствах Краснодарского края

Для проведения научных исследований и производственных испытаний использовали опытные серии моно- и ассоциированных вакцин, разработанных нами для профилактики колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий, коммерческую вакцину против пастереллеза и стрептококкоза нутрий ФГУ «Ставропольская биофабрика»

Использовали реактивы, диагностикумы, наборы, тест-системы. - формалин технический с содержанием формальдегида не менее 36% (ГОСТ-1625-61), гидроокись алюминия (ГОА, с 6% сухого остатка), парфюмерное масло Marcol - 52,

- сыворотки О-коли агглютинирующие, поливалентные и моновалентные ФГУ «Армавирская биофабрика», антиадгезивные коли-сыворотки НПФ «ДИАВАК», п Оболенск Московской области, эритроцитарный диагностический эшерихиозный набор для выявления антител в РИГА ООО «Агровет», г Москва;

- сыворотки сальмонеллезные О-комплексные агглютинирующие и сыворотки монорецепторные О- и Н-агглютинирующие ФГУ «Курская биофабрика», эритроцитарный диагностический сальмонеллезный набор для выявления антител в РИГА ООО «Агровет», г Москва,

- набор антистрептококковых группоспецифических сывороток и стандартных групповых антигенов для реакции преципитации НПО «АКВАПАСТ», г Санкт-Петербург.

Научные исследования по теме диссертации проводили по схеме (рисунок 1)

Влияние вирулентных штаммов и биопрепаратов на организм лабораторных и опытных животных оценивали визуальным наблюдением после их введения Регистрировали также физиологические параметры организма нутрий температуру тела, пульс, частоту дыхания [В А Берестов, 2002]

Оценку гематологических показателей (количество эритроцитов, уровень гемоглобина, количество лейкоцитов, лейкоцитарная формула) проводили по общепринятым методикам [В А Берестов, 1981]. Кровь у нутрий брали перед кормлением из боковой вены хвоста до начала опытов и на 7-е, 14-е, 21-е, 28-е сут после иммунизации

Общий белок сыворотки крови нутрий определяли рефрактометрически, содержание белковых фракций - нефелометрическим методом в соответствии с методическими указаниями по применению унифицированных биохимических методов исследования крови, мочи и молока в ветеринарных лабораториях [М, 1981].

Бактериологические исследования включали, посевы культур микроорганизмов на питательные среды, определение чистоты их роста, идентификацию штаммов, посевы на специальные среды для изучения биохимических свойств микроорганизмов, определение устойчивости их к антибиотикам, определение концентрации микробных клеток, проведение биопробы на лабораторных животных и нутриях [Б И Антонов, 1986]

Рисунок 1-Схема проведения

исследований

Определение чувствительности выделенных штаммов Е coli Ol, S lyphimw tum, Stt pneumoniae к антибактериальным препаратам проводили методом диффузии в агар с применением дисков и лунок, методом серийных разведении в бульоне или агаре согласно методическим указаниям по определению чувствительности к антибиотикам возбудителей инфекционных болезней с-х животных [М , 1972], рекомендаций по определению чувствительности микроорганизмов к антибиотикам [А В Скориков, 2005]

Для установления серогрупповой принадлежности возбудителя стреп-тококкоза нутрий использовали стрептококковые групповые преципитирую-щие сыворотки в реакции преципитации (РП) в капиллярах по общепринятой методике [Д И Скородумов, 2005] Определение уровня антител в сыворотке крови нутрий проводили в РП согласно методическим указаниям по лабораторной диагностике стрептококкоза животных [М, 1990], утвержденным Главным управлением ветеринарии

Серологическую типизацию кишечной палочки и определение уровня антител в сыворотке крови нутрий проводили в реакции агглютинации (РА) согласно методическим указаниям по лабораторной диагностике колибакте-риоза животных, утвержденным Департаментом ветеринарии РФ [М , 2000]

Серологическую типизацию выделенной культуры рода Salmonella и определение уровня антител в сыворотке крови нутрий проводили в РА согласно методическим указаниям по лабораторной диагностике сальмонелле-зов человека и животных, обнаружение сальмонелл в кормах, продуктах питания и объектах внешней среды [М , 1990]

Уровень специфических антител в сыворотке крови иммунизированных нутрий и процент защиты определяли на 7-е, 14-е, 21-е, 28-е сут и выборочно у 5% животных через 60, 90, 180, 270 дней после прививки ассоциированными вакцинами против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий в различных сочетаниях

Для определения факторов неспецифической резистентности использовали тест бактериального фагоцитоза нейтрофилов с учетом степени его завершенности по отношению к бактериям Staphylococcus ашет (№209 Р) по методике И В Нестеровой [1996] Количество Т-, В-, NK-лимфоцитов крови нутрий определяли по методу Пирса [1962] в модификации Н Н Гугушвили [2001] Содержание иммуноглобулинов основных классов (Ig А, Ig М, Ig G)

в сыворотке крови нутрий определяли на биохимическом анализаторе HUMALYZER 2000

Безвредность моно- и ассоциированных вакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий проверяли на белых беспородных мышах массой 18-20 г, нутриях в возрасте 40-60 дней путем подкожного (мыши) и внутримышечного (нутрии) введения вакцины в 3-5-кратной иммунизирующей дозе

Иммуногенность вакцинных препаратов оценивали по проценту выживаемости (защиты) привитых нутрий (белых мышей) после заражения вирулентными возбудителями колибактериоза (Е coli Ol), сальмонеллеза (S lyphimui mm) и стрептококкоза (Sil pneumoniae) в летальных дозах, определяемых на нутриях и белых мышах предварительным титрованием

Статистическую обработку массовых цифровых материалов проводили на персональном компьютере IBM с использованием пакета статистических программ «Microsoft», «Microsoft Word» и «Microsoft Excel» Полученные результаты были подвергнуты биометрической обработке по И А Ойвину [1960], степень достоверности установлена по распределению Стьюдента

Отдельные фрагменты экспериментальных исследований были выполнены совместно с В В Стрельниковым (экологическая оценка экспериментов), А А Шевченко (идентификация энтеробактерий), О Ю Черных (организационная помощь в проведении лабораторных исследований), Э А Горнастаевым, H Е Пак, А А Крыцула (практическая помощь при вакцинации нутрий)

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Эпизоотическая обстановка по инфекционным болезням нутрий

Нами был проведен ретроспективный анализ уровня заболеваемости нутрий инфекционными болезнями в Российской Федерации на примере Краснодарского края в сравнительном аспекте и в динамике За основу были взяты ветеринарная отчетность по инфекционной патологии животных в Краснодарском крае за 1992-2006 гг и результаты собственных исследований - количество и видовой состав выделенных культур возбудителен

Установлено, что в течение 11 лет (1996-2006 гг.) в нозологическом профиле инфекционной патологии нутрий доминировали стрептококкоз -60%, колибактериоз - 33%, сальмонеллез - 4%, пастереллез - 2%, инфекционная энтеротоксемия, псевдомоноз, стафилококкоз - 1%. Возбудители первых трех инфекций вызывали массовую заболеваемость и гибель животных (рисунок 2).

Стрептококкоз нутрий - остропротекающая инфекционная болезнь, характеризующаяся поражением органов дыхания, массовым абортированием, рождением мертвых щенков. Стрептококкоз у нутрий в Краснодарском крае регистрировали в течение всего года. Заболеваемость животных составила 30-60%, летальность - 70-90%. Количество абортировавших во второй половине беременности самок достигло до 80% от покрытых.

1% 2%

0 пастереллез в колибактериоз □ сальмонеллез Встрептококкоз

■ инфекционная энтеротоксемия, псевдомоноз, стафилококкоз

Рисунок 2 - Нозологический профиль инфекционной патологии нутрий в Краснодарском крае (1996-2006 гг.)

Нами выявлено, что при естественном заражении к стрептококкозу восприимчивы нутрии всех возрастов, начиная с первых дней жизни. Однако чаше всего поражались щенята 2-3-месячного возраста, а также половозрелые - 5-6 месячные в одновозрастных группах. Болезнь в Краснодарском крае регистрировали в периоды массового щенения самок (февраль - март),

отсадки потомства от них (май - июнь), а также при формировании групп зверей для косячной случки (сентябрь - ноябрь). После всех технологических перемещений отход молодняка нутрий начинался на 12-45-й день.

При изучении территориальной распространенности стрептококкоза нутрий в Краснодарском крае установлено, что чаще всего его регистрировали в Кавказском - 29%, Динском - 16%, Белоглинском - 15%, Тбилисском -11% районах и в г. Краснодаре - 9% (рисунок 3).

Нами установлено, что стрептококкоз у нутрий чаще всего протекает остро: отмечали повышение температуры тела до 39-40°С, отказ от корма, кровянистые истечения из носовой полости. Смерть наступала через 24—48 ч. При хронической форме стрептококкоза у нутрий старшего возраста наблюдали снижение аппетита, истощение, угнетенное состояние, учащенное дыхание, болезненность при надавливании в области грудной клетки. Продолжительность болезни составила 2-4 недели.

29%

Рисунок 3 - Распространение стрептококкоза нутрий в Краснодарском крае (1996-2006 гг.)

При лабораторных исследованиях от больных и павших нутрий выделяли различные виды стрептококков: Sir. pneumoniae 55,73%,

Str. zooepidemicus 20,36%, относящиеся к группе С, а также Str. fciecalis группы D- 23,91%.

Колибактериоз нутрий - остропрогекающая инфекционная болезнь преимущественно молодняка, проявляющаяся септицемией, токсинемией и энтеритами. Установлено, что колибактериозом нутрии болеют преимущественно в первые 10 дней жизни. Заболевание в Краснодарском крае регистрировали в течение года, однако чаще всего в периоды массового щенения самок (февраль март). Летальность нутрий составила 80-97%.

Колибактериоз нутрий в Краснодарском крае чаще регистрировали в Кавказском - 26%, Каневском - 16%, Ленинградском и Динском - по 8%, Тбилисском - 7% районах и в г. Краснодаре - 19% (рисунок 4).

Нами установлено, что колибактериоз у нутрий протекает преимущественно септически с явлениями поноса, поражений центральной нервной системы, а иногда и других органов. У беременных самок болезнь нередко завершается абортом илй рождением мертвых щенков. Для колибактериоза нутрий характерна также энтеротоксемическая или энтеритная форма и органные инфекции (абсцесс, уроцистит, уретрит, мастит).

1%

Рисунок 4 - Распространение колибактериоза нутрий в Краснодарском крае (1996-2006 гг.)

При лабораторных исследованиях от больных и павших нутрий выделяли сероварианты Е. coli, доля которых составляла (%): 01 - 20,77, 02 -5,93, 04 - 4,15, 08 - 6,53,015 - 11,28, 020 - 8,61, 026 - 2,67, 033 - 2,97, 041 -3,56, 055 - 8,31, 078 -2,97, 0103 - 4,75, Ol 11 -2,97, 0115 - 3,26, 0127 -0,30, 0139- 2,37, 0141 - 1,78, 987Р - 5,04, К88 - 1,78. Доминирующим среди них был серотип Е. coli Ol - 20,77%.

Сапьмонеллез - инфекционная болезнь, проявляющаяся у нутрий расстройством пищеварения, исхуданием, парезом задних конечностей или поражением центральной нервной системы у молодняка и абортами у беременных самок.

Нами установлено, что к сальмонеллезу восприимчивы нутрии всех возрастов, однако чаше - 1,5-5-месячные и во время беременности. Болезнь носит сезонный характер (январь - февраль, октябрь - ноябрь). Заболеваемость и смертность животных составили 35-60 и 20-40% соответственно.

Сапьмонеллез нутрий в Краснодарском крае чаще всего регистрировали в Белоглинском - 33%, Динском - 19%, Каневском - 16%, Выселковском и Крымском - по 7%, Северском - 5% районах, а также в г. Краснодаре - 9% (рисунок 5).

2%

Рисунок 5 - Распространение сальмонеллеза нутрий в Краснодарском крае (1996-2006 гг.)

Сальмонеллез у нутрий протекал остро, подостро и хронически При остром течении отмечали повышение температуры тела, отказ от корма, возбуждение, сменяющееся угнетением, частое поверхностное дыхание, судороги, шаткость походки, жидкие испражнения слизистой консистенции, иногда с примесью крови Животные быстро худели, лежали неподвижно и вскоре погибали Смертность нутрий достигала 80%

При подостром и хроническом течении признаки болезни были сглажены Животные быстро худели, из-за слабости конечностей больше лежали, развивалась анемия Каловые массы были жидкими, слизистой консистенции Мех становился тусклым, взъерошенным Нередко перед смертью развивался паралич задних конечностей Гибель животных с признаками крайней степени истощения при подостром течении наступала через 10-14, при хроническом - через 25-30 сут

При лабораторных исследованиях от больных и павших нутрий выделяли сероварианты, доля которых составила (%) S typhimunum - 71 71, S dnblm - 13,73, S enteritidis - 5,04, S1 choleraesuis - 3,92, S paratyphi -3,92, S gallinamm - 1,68 Доминировал среди них серовариант S typhi-mut mm - 71,71 %

Ассоциативное течение колибактериоза, сальмонеллеза и стрепто-коккоза нутрий в различных сочетаниях в Краснодарском крае нами установлено в 89,2% случаев У большинства больных животных отмечали поражение суставов, органов дыхания, желудочно-кишечного тракта, а также нарушение функций почек, сопровождающиеся олигурией, в тяжелых случаях - анурией Наблюдали также серозно-гнойные, реже кровянисто-пенистые истечения из носовых отверстий, наличие корок засохшего экссудата Нутрии чихали, слабели, погибали

У нутрят наблюдали разжижение каловых масс, они были в угнетенном состоянии, апатичные, сонные, сбивались в кучки, или наоборот, расползались по всей клетке, загону У беременных самок отмечали аборты на последнем месяце беременности, рождение мертвых или ослабленных детенышей, а также эндометриты, агалактию

Заболеваемость нутрий от смешанной инфекции стрептококкоза, колибактериоза и сальмонеллеза составила 81,8%, а летальность - 90,5%

3.2 Разработка технологии mi отопления инактивированных моно- и ассоциированных вакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий

Нами были изучены биологические свойства чаще всего выделяемых се-роваров 385 различных бактериальных культур, и на основании проведенных исследований по антигенности, иммуногенности, стабильности подобраны штаммы Е coli Ol, S lyphimunum, Sit pneumoniae для изготовления биопрепаратов Накопление микробных клеток (м к/см3) изучали на обогащенных питательных средах - Эндо, Левина, селенитовой, желчном, мясо-пептонном и глю-козо-сывороточном бульонах Оно составило от 10 до 20 млрд м к /см3 Для получения бактериального сырья при производстве вакцин нами был взят как наиболее доступный и дешевый мясо-пептонный бульон, обогащенный глюкозой, который позволяет получать необходимую концентрацию микробных клеток На основе штаммов Е coli Ol, S lyphimunum, Sli pneumoniae нарабатывали бактериальное сырье для изготовления инактивированных моно- и ассоциированных вакцин, позволяющее получать не менее 4—8 млрд м к /см3

Нами были разработаны эффективные режимы инактивации возбудителей колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий на основе совместного действия формалина и температуры Раствор формалина в 0,4%-ной концентрации при температуре 37±2°С в течение 2-3 сут полностью подавлял инфекционную активность Е coli Ol, Sti pneumoniae, а в 0,5%-ной концентрации при температуре 37±2°С в течение 3-4 сут - инфекционную активность S lyphimunum, сохраняя при этом иммуногенные свойства антигенов Данные режимы позволили в 4 раза сократить время инактивации микроорганизмов по сравнению с традиционной технологией

Инакгивированную бактериальную массу подвергали стандартизации путем разбавления ее физиологическим раствором до концентрации не менее 4 млрд м к в 1 см1 по оптическому стандарту ГИСК им Тарасевича Депонирование биомассы проводили путем внесения адъюванта - 6%-ного гидрата окиси алюминия до 10, 20, 30% к объему и выдерживания с ним в течение 12-24 ч при температуре 20-25°С

Таким образом, нами была разработана принципиальная технологическая схема изготовления инактивированных моно- и ассоциированных вакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий (рисунок 6)

Производственные штаммы Е coli Ol, S typhimunum, Sti pneumoniae

I.

Приготовление питательной среды для культивирования _производственных штаммов_

Освежение культур Е coli 01, S typhimurium. Sir pneumoniae в МПБ с добавлением 40%-иого р-ра глюкозы до 0,2%- 1%-iiofi концентрации, рН 7,2 - 7,4, инкубирование при температуре 37±2°С в течение 12 - 24 ч

Контроль на чистоту роста (посев на МПА, МПБ, среды Эндо, Плоскирева, Сабуро Китта-Тароцци, окраска по методу Грама)_

I

Рисунок 6 - Принципиальная технологическая схема изготовления инактивирнванных моно- и ассоциированных вакцин против колибактериоза сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий

3.3 Изучение иммунобиологических свойств моно- и ассоциированных вакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий в экспериментальных и производственных условиях

По разработанной нами технологии были изготовлены опытные образцы инактивированных моновакцин против колибактериоза, сапьмонеллеза и стрептококкоза нутрий на основе вирулентных штаммов Е coli Ol, S typhimurium, SU pneumoniae соответственно формолвакцины, адсорбированные на гидрате окиси алюминия, формолвакцины с масляным адъюван-том, формолвакцины без адъюванта

При изучении иммуногенности и безвредности серий вакцин на нутриях в возрасте 40-50 дней нами установлено, что после однократного внутримышечного введения пушным зверям одной из гидроокисьапюминиевых формолвакцин в дозе 0,5 см3, через 14 сут формируется напряженный иммунитет, обеспечивающий 80%-ную защиту животных от возбудителя соответствующей инфекции В дозах 0,1-0,4 см3 данные биопрепараты создавали 50-60%-ную защиту нутрий, что не отвечает требованиям, предъявляемым к инактивированным вакцинам У нутрий, иммунизированных формолвакци-нами с масляным адъювантом, наблюдали хромоту в течение 2-3 дней, защита животных от возбудителя соответствующей инфекции составляла 60-80%, а формолвакцинами без адъюванта - 60%

При определении иммунобиологических свойств гидроокисьапюминиевых формолвакцин против колибактериоза, сапьмонеллеза и стрептококкоза нутрий после двукратного внутримышечного введения (первая доза -0,5 см3, вторая - 1,0 см3 с интервалом 10 сут) у животных не наблюдали поствакцинальных осложнений, через 14 сут после ревакцинации у нутрий формировался напряженный иммунитет, обеспечивающий 100%-ную защиту животных от возбудителя соответствующей инфекции

Таким образом, нами были разработаны и испытаны в лабораторных условиях безвредные, обладающие высокоиммуногенными свойствами гид-роокисьалюминиевые формолвакцины против колибактериоза, против сапьмонеллеза и против стрептококкоза нутрий (далее - вакцины против колибактериоза, сапьмонеллеза и стрептоккоза нутрий), после одно- и двукратной иммунизации обеспечивающие соответственно 80 и 100%-ную защиту нутрий от возбудителя соответствующей инфекции

Учитывая ассоциативное течение инфекционных болезней нутрии в зверохозяйствах Российской Федерации, в том числе в Краснодарском крае, а также отсутствие эффективных коммерческих ассоциированных вакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий, дальнейшие исследования мы ориентировали на разработку технологии изготовления ассоциированных вакцин против данных инфекций в различных сочетаниях и изучение их основных свойств

На основе выделенных и изученных штаммов S typhimurium и Sir pneumoniae по разработанной нами технологии были изготовлены опытные серии ассоциированной вакцины против сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий

При изучении иммуногенности биопрепарата на лабораторных животных нами выявлено, что после однократного подкожного введения белым мышам ассоциированной вакцины в дозе 2 млн/0,5 см3, через 14 сут формируется напряженный иммунитет, обеспечивающий соответственно 80 и 90%-ную защиту привитых животных от возбудителей стрептококкоза и сальмонеллеза Поствакцинальных осложнений у белых мышей не отмечали

Нами установлено, что биопрепарат при соотношении в нем антигенов сальмонеллеза и стрептококкоза 1 2 и с добавлением 20% гидрата окиси алюминия после двукратной иммунизации белых мышей подкожно с интервалом 10 сут в дозе 0,5 см3 не вызывает у лабораторных животных поствакцинальных осложнений и через 14 сут после ревакцинации обеспечивает соответственно 80- и 100%-ную защиту белых мышей от возбудителей стрептококкоза и сальмонеллеза

Нами определено, что оптимальной иммунизирующей дозой ассоциированной вакцины против сальмонеллеза и стрептококкоза для нутрий в возрасте 40-50 дней (однократно внутримышечно в область бедра) является 1,0 млрд микробных клеток по оптическому стандарту ГИСК им Тарасевича Такая доза обеспечивает 100%-ную защиту привитых нутрий от вирулентных возбудителей сальмонеллеза и стрептококкоза при 100%-ных заболевании и гибели невакцинированных животных (контроль)

При изучении безвредности и иммуногенности ассоциированной вакцины на нутриях в возрасте 40-50 дней нами выявлено, что у животных через 14 сут после внутримышечной вакцинации (1,0 см3) и ревакцинации (первая доза - 1,0 см3, вторая - 1,5 см3 с интервалом 10 сут) формируется напряжен-

ный иммунитет, обеспечивающий 80-100%-ную защиту иммунизированных нутрий от вирулентных возбудителей сапьмонеллеза (50 млрд мк/см3) и стрептококкоза (2 млрд м к /см3) Поствакцинальных осложнений у животных не отмечали

В производственных условиях ассоциированная вакцина после двукратной внутримышечной иммунизации нутрий (3 тыс 40 - 60-дневного возраста) через 14 сут после ревакцинации (первая доза - 1,0 см3, вторая -1,5 см3 с интервалом 10 сут) обеспечивала 97,8%-ную защиту привитых животных от возбудителей стрептококкоза и сальмонеллеза Отклонений от физиологической нормы у нутрий не выявлено Через 9 мес после повторной вакцинации уровень специфических антител в сыворотке крови нутрий (у 5% животных) к S lyphimiirium в РА составил 173,60±8,17, а к Sir pneumoniae в РП- 15,84±1,06

Таким образом, нами была разработана новая безвредная высокоимму-ногенная ассоциированная вакцина против сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий

На следующем этапе исследований по разработанной нами технологии на основе выделенных и изученных штаммов S typhimurium и Е coh Ol были изготовлены опытные серии ассоциированной вакцины против сальмонеллеза и колибактериоза нутрий

Установлено, что биопрепарат при соотношении в нем антигенов сальмонеллеза и колибактериоза 1 1 и с добавлением 10 и 20% гидрата окиси алюминия после двукратной подкожной иммунизации белых мышей в дозе 0,5 см3 с интервалом 10 сут не вызывает у животных поствакцинальных осложнений Через 14 сут после ревакцинации обеспечивает 100%-ную защиту белых мышей от вирулентных S lyphimwium и Е coli Ol

При изучении безвредности и иммуногенной активности ассоциированной вакцины на нутриях в возрасте 40-50 дней нами выявлено, что у животных через 14 сут после однократного внутримышечного введения биопрепарата в дозе 1,0 см3, а также двукратного (первая доза 1,0 см3, вторая -1,5 см3 с интервалом 10 сут) формируется напряженный иммунитет, обеспечивающий соответственно 80- и 100%-ную защиту нутрий от возбудителей сальмонеллеза и колибактериоза Поствакцинальных осложнений у животных не отмечали

В результате производственных испытаний вакцины (2 тыс нутрий 40-60-дневного возраста) нами установлено, что у животных через 14 сут после двукратной внутримышечной прививки (первая доза - 1,0 см3, через 10 сут вторая - 1,5 см3) формируется напряженный иммунитет, обеспечивающий 99,3% защиту пушных зверей от возбудителей сапьмонеллеза и ко-либактериоза Уровень специфических антител в сыворотке крови привитых нутрий через 9 мес после вакцинации, выявляемый в РА, к 5 iyphmwium составил 182,20±9,71 и к £ coli О! - 168,70±6,93

Таким образом, нами была разработана новая безвредная высокоимму-ногенная ассоциированная вакцина против сапьмонеллеза и колибактериоза нутрий

В связи с тем, что в России ассоциированная вакцина против колибактериоза и стрептококкоза нутрий не разработана, такая вакцина на основе выделенных и изученных штаммов Е coli Ol и Str pneumoniae нами была изготовлена и проверена на белых мышах и нутриях

Установлено, что биопрепарат при соотношении в нем антигенов колибактериоза и стрептококкоза 1 2 и с добавлением 20% гидрата окиси алюминия после двукратной иммунизации белых мышей подкожно с интервалом 10 сут в дозе 0,5 см3 не вызывает у животных поствакцинальных осложнений и через 14 сут после ревакцинации обеспечивает соответственно 80- и 100%-ную защиту белых мышей от возбудителей стрептококкоза и колибактериоза

При изучении безвредности и иммуногенности биопрепарата нами выявлено, что после однократной внутримышечной прививки нутрий ассоциированной вакциной в дозе 1,0 см3, а также двукратной (первая доза 1,0 см3, вторая - 1,5 см3 с интервалом 10 сут после первой) у животных через 14 сут после вакцинации и ревакцинации формируется напряженный иммунитет, обеспечивающий соответственно 80- и 100%-ную защиту нутрий от вирулентных Е coli Ol и Str pneumoniae Поствакцинальных осложнений у животных не отмечали

В результате производственных испытаний вакцины (1 тыс нутрий 40-60-дневного возраста) нами установлено, что у нутрий через 14 сут после двукратной внутримышечной прививки (первая доза - 1,0 см3, через 10 сут вторая - 1,5 см3) формируется напряженный иммунитет, обеспечивающий

98,5%-ную защиту привитых животных от возбудителей колибактериоза и стрептококкоза Уровень специфических антител в сыворотке крови иммунизированных нутрий (у 5% животных) через 9 мес после вакцинации к Е coli Ol в РА составил 156,82±7,21, а к Sir pneumoniae в РП- 17,28±1,15

Таким образом, нами была разработана новая безвредная высокоимму-ногенная ассоциированная вакцина против колибактериоза и стрептококкоза нутрий

Учитывая ассоциативное течение колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий в зверохозяйствах России, а также отсутствие ассоциированных вакцин против данных инфекционных болезней нутрий, нами была разработана технология изготовления ассоциированной вакцины против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий

При изучении влияния соотношения компонентов в биопрепарате на его иммуногенную активность нами выявлено, что ассоциированная вакцина при соотношении антигенов колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза I 1 2 и с добавлением 20% гидрата окиси алюминия после однократной иммунизации белых мышей подкожно в дозе 0,5 см3 не вызывает поствакцинальных осложнений и через 14 сут после прививки обеспечивает не менее чем 80%-ную защиту животных от возбудителей трех инфекций, что отвечает предъявляемым требованиям к инактивированным биопрепаратам (таблица 1)

Нами установлено, что иммунизирующей дозой ассоциированной трехвалентной вакцины для нутрий является 1,5 млрд м к /см3 по оптическому стандарту ГИСК им Тарасевича, которая обеспечивает 100%-ную защиту привитых животных от вирулентных возбудителей колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза при 100%-ных заболевании и гибели невакциниро-ванных нутрий (таблица 2)

При изучении иммуногенности трехвалентной вакцины нами определено, что после однократной внутримышечной прививки нутрий в возрасте 40-50-дней данным препаратом в дозе 1,0 см3 у животных через 14 сут формируется иммунитет, обеспечивающий 80%-ную защиту нутрий от возбудителей сальмонеллеза и колибактериоза, а 60%-ную - от стрептококкоза Поствакцинальных осложнений у животных не отмечали

Таблица 1 — Влияние соотношения компонентов в ассоциированной вакцине против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептокоюсоза нутрий на ее иммуногенность

« м и Результаты заражения возбудителями трех заболеваний через 14 сут

ш ч о ч х Н S typhimurium Str pneumoniae Е coli Ol

Sis g а о «> § О £ ES X 3 Пало животных Выжило животных X 3 Е о Пало животных Выжило животных X 3 Пало животных Выжило животных

Вакцина s rf е ® 23 с ^ я « IH н 2 а О я о ю U s § к 2 2 Й < К о о g ч о « количество % количество % а s * 0 е а» 1 1 количество % количество % § К о « В 1> о количество % количество %

Ассоциированная против 111 10 10 2 20 8 80 10 4 40 6 60 10 0 0 10 100

колибактериоза,

сальмонеллеза и 1:1 2 20 10 0 0 10 100 10 2 20 8 80 10 0 0 10 100

стрептокоюсоза

нутрий*

1.1.3 30 10 3 30 7 70 10 1 10 9 90 10 3 30 7 70

Контроль (непривитые) - - 3 3 100 0 0 3 3 100 0 0 3 3 100 0 0

* Вакцина безвредна

Таблица 2 - Определение иммунизирующей дозы ассоциированной вакцины против колибактериоза, сальмонеллеза и стрегггококкоза для нутрий

Вакцина Иммунизирующая доза, Ю'мк Количество нутрий | Вирулентный возбудитель, доза, млрд м к /см3 Результаты заражения возбудителями трех заболеваний через 14 сут

S typhimurium Str pneumoniae Е coli Ol

Заболело животных Пало животных Выжило животных Заболело животных Пало животных Выжило ! животных Заболело животных Пало животных Выжило животных

Ассоциированная против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий 2,0 1,5 1,0 0,5 0,25 4 4 ' 4 4 4 5 typhimurium, 50 млрд м к; Str pneumoniae и Е coli Ol -2 млрд м к. S typhimurium, 50 млрд м к , 0 0 0 1 2 — о о о о 4 4 4 4 3 0 0 1 2 3 0 0 1 1 2 4 4 3 3 2 0 0 0 1 2 0 0 0 1 1 4 4 4 3 3

Контроль Str pneumoniae

(непривитые) - 4 и Е coli Ol - 4 4 0 4 4 0 4 4 0

2 млрд м к.

ю 00

Нами установлено, что ассоциированная вакцина при оптимальном соотношении компонентов с адъювантом через 14 сут после двукратной иммунизации животных (первая доза 1,0 см3, вторая - 1,5 см3 через 10 сут после первой) формирует напряженный иммунитет, обеспечивающий 100%-ную защиту нутрий от вирулентных 5 ¡урктии шт и Е со1/ 01 и 80%-ную - от Я// рпеитотае Поствакцинальных осложнений у нутрий не отмечали

Таким образом, в экспериментальных условиях ассоциированная вакцина против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий после одно- и двукратной прививки животных не вызывала у них поствакцинальных осложнений и обеспечивала формирование напряженного иммунитета к трем возбудителям

Опыты по сравнительной эффективности нового биопрепарата с коммерческой вакциной против пастереллеза и стрептококкоза нутрий Ставропольской биофабрики были проведены в эпизоотическом очаге нутриеводческой фермы племзверосовхоза «Северинский» при ассоциативной инфекции колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий

С этой целью молодняк нутрий в возрасте 40-60 дней иммунизировали ассоциированной вакциной против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий двукратно первая доза - 1,0 см3, вторая - 1,5 см3 с интервалом 10 сут Коммерческим биопрепаратом животных прививали в соответствии с «Временным наставлением по применению вакцины против пастереллеза и стрептококкоза нутрий»

Нами установлено, что при иммунизации нутрят в неблагополучном по колибактериозу, сапьмонеллезу и стрептококкозу хозяйстве высокий процент эффективности получен в трех опытах при использовании ассоциированной трехвапетной вакцины При этом сохранность поголовья после вакцинации составила 99,19 - 99,71% В тех же условиях коммерческая вакцина против пастереллеза и стрептококкоза нутрий обеспечивала сохранность нутрят в 19,52±2,95% случаев, что в 5 раз достоверно ниже (Р>0,001) аналогичного показателя при использовании ассоциированной вакцины против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий

Производственные испытания ассоциированной вакцины против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий проводили в зверохозяйст-вах Краснодарского края на 8 тыс нутрий 40-60-дневного возраста Нами установлено, что у животных через 14 сут после двукратной внутримышечной прививки (первая доза - 1,0 см3, через 10 сут вторая - 1,5 см3) формируется напряженный иммунитет, обеспечивающий 99,2% защиту нутрий от возбудителей

трех инфекций Поствакцинальных осложнений у животных не отмечали Уровень специфических антител в сыворотке крови привитых нутрий (у 5% животных) через 9 мес после повторной прививки, выявляемый в РА к S typhimuuum и к С coli Ol составил соответственно 198,40±10,53 и 179,60±8,75, а в РП к Sil pneumoniae - 18,32± 1,37

В период эпизоотии ассоциативной инфекции колибактериоза, сальмо-неллеза и стрептококкоза нутрий в племзверосовхозе «Северинский» вакцинировали 5,5 тыс животных Иммунизацию проводили с 40-дневного возраста без традиционного разделения поголовья на явно больных, подозрительных по заболеванию и условно здоровых Вакцину нутриям вводили двукратно внутримышечно в область бедра первая доза 1,0 см3, вторая - 1,5 см3 с интервалом Юсут За привитыми животными вели наблюдение в течение 12 мес Падеж нутрий после вакцинации резко сократился и составил 8,57% в месяц против 47,25% перед иммунизацией, а в дальнейшем прекратился

Таким образом, ассоциированная вакцина против колибактериоза, саль-монеллеза и стрептококкоза нутрий в производственных условиях подтвердила безвредность и высокую иммуногенность В эпизоотическом очаге в период массовой гибели нутрий при ассоциативной инфекции колибактериоза, сальмо-неллеза и стрептококкоза оказывает высокий профилактический эффект, позволяет остановить эпизоотию и сохранить 93,75% животных

Разработанные нами методы контроля вакцины на безвредность и имму-ногенную активность (белые мыши и нутрии), реактогенность (нутрии), стерильность позволяют выпускать безопасную, стерильную и высокоиммуноген-ную вакцину против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий Эффективность предложенного контроля подтверждена при производстве 15 серий (более 250 тыс доз) биопрепарата

При изучении стабильности ассоциированной вакцины нами установлено, что она сохраняет свои иммунобиологические свойства в течение 12 мес при обычных условиях хранения биопрепаратов (сухое темное место и температура 2-10°С) и обеспечивает после двукратной иммунизации не менее чем 80%-ную защиту нутрий от вирулентных h coli Ol S typhimuuum и Str pneumoniae

В период 2001-2007 гг. в хозяйствах Краснодарского края ассоциированной вакциной против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза иммунизировано 78,5 тыс нутрий Применение данной вакцины позволило обеспечить не менее чем 80%-ную защиту животных от трех возбудителей Зарегистрировано физиологически нормальное течение беременности иммунизирован-

пых самок и щепемия, увеличение выхода нутрят на 0,3-0,5 в расчете на самку При выращивании потомства повысились его сохранность, рост и развитие

Важнейшим практическим аспектом применения ассоциированной вакцины явилось реальное сокращение сроков создания иммунного поголовья и 2-3-кратное снижение трудовых затрат для ветеринарных специалистов и звероводов

Производство инактивированной ассоциированной вакцины против коли-бактериоза, сальмонеллеза и стрепюкоккоза нутрий освоено в ФГУ «Армавирская биофабрика» Краснодарского края Разработана и утверждена в установленном порядке нормативно-техническая документация на опытно-промышленное производство (регламент по изготовлению и контролю, ТУ, наставление по применению)

Таким образом, нами была разработана и внедрена безвредная слаборсак-тогенная высокоиммуногенная ассоциированная вакцина против колибактерио-за, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий Аналогов вакцины за рубежом нет Предложенные методы контроля вакцины позволяют выпускать биопрепарат высокого качества Это подтверждено положительными результатами, полученными в процессе производственных испытаний вакцины в различных районах Южного федерального округа, неблагополучных по колибактериозу, сальмонеллезу и стрептококкозу нутрий

3.4 Изучение иммунобиологической реактивности организма нугрий до и после вакцинации

При вакцинации иммунологическая перестройка организма затрагивает многие органы и системы и сопровождается соответствующими изменениями клинических, морфологических и биохимических показателей Учитывая данное обстоятельство, а также тот факт, что в научной литературе отсутствуют сведения о прививочных реакциях нутрий на ассоциированные вакцины, нами у животных до иммунизации в 2-месячном возрасте и на 7-е, 14-е, 21-е и 28-е сут после прививки их ассоциированной вакциной против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий были изучены динамика морфобиохимиче-ских показателей, факторы неспецифического и специфического звеньев иммунитет Вакцинировали нутрий двукратно внутримышечно первая прививка в возрасте 60 дней 1,0 см', через 7 сут вторая - 1,5 см1

В результате анализа общеклинического исследования крови нами не выявлено различий по уровню гемоглобина и эритроцитов в опытной и контроль-

ной группе животных с 7-х но 28-е еут опыта Количество лейкоцитов у иммунизированных нутрий на 7-е, 14-е сут после прививки было в 1,5 раза достоверно выше (Р>0,001), чем у животных контрольной группы аналогичного возраста В более поздние сроки опыта показатели выравнивались с контрольными и соответствовали физиологическим нормам При определении клеточного состава крови у вакцинированных нутрий отмечен нейтрофильный лейкоцитоз.

Полученные нами данные по уровню лейкоцитов и их популяционному составу у нутрий опытной группы свидетельствуют об антигенной эффективности ассоциированной трехвалентной вакцины, вызывающей раздражение ре-тикуло-эндотелиальной системы животных и в то же время - о пластичности внутренней среды организма нутрий в поствакцинальный период, развитии компенсаторных механизмов, позволяющих обеспечить гомеостаз

Оценка показателей белкового обмена позволила установить достоверное (Р>0,001) повышенное содержание в сыворотке крови нутрий опытной группы в сравнении с животными контрольной группы аналогичного возраста с 1-х по 28-е сут опыта количества общего белка на 4,21-21,11% и относительного содержания у-глобулинов на 8,70-22,71% (рисунок 7). Данное обстоятельство свидетельствовало о повышенной иммунобиологической реактивности организма вакцинированных нутрий

Фагоцитарная активность нейтрофилов, стимулированных введением антигенов, по сравнению с контролем была достоверно (Р>0,001) выше с 7-х по 28-е сут опыта Максимальные значения данных показателей зарегистрированы на 14-е сут после первой вакцинации В отдаленные сроки после иммунизации фагоцитарная реакция нейтрофилов проявлялась на достоверно высоком уровне относительно животных контрольной группы (рисунок 8)

Таким образом, ассоциированная вакцина у иммунизированных животных вызывала не только активизацию, но и завершение процесса фагоцитоза

При изучении клеточного звена иммунитета нами выявлено, что вакцинация нутрий ассоциированной вакциной стимулировала интенсивный синтез В-лимфоцитов Относительное их содержание у иммунизированных животных было достоверно (Р<0,05-Р>0,001) выше на 5-24% с 7-х по 28-е сутки опыта по сравнению с контрольными животными аналогичного возраста Максимальный уровень В-лимфоцитов отмечен на 14-е сут после первой иммунизации -32,50±0,50% (таблица 3) Данное обстоягельсгво вполне объяснимо, так как В-лимфоциты являются продуцентами иммуноглобулинов, отвечающих за специфическое звено иммунитета

б Обоуй белок

□ Альбумины ■ а-глобулины

□ (3-глобулины в у-глобулины

Рисунок 7 - Изменение показателей общего белка и белковых фракций у нутрий после вакцинации (в процентах от контроля - до вакцинации)

До 14 28

вакцинации

Сутки после вакцинации

До 14 28

вакцинации

Сутки после вакцинации

Рисунок 8 - Изменение показателей фагоцитарной активности нейтрофилов у нутрий после вакцинации (в процентах от контроля - до вакцинации)

Оценка гуморального звена иммунитета позволила установить достоверное (Р>0,001) повышенное содержание в сыворотке крови иммунизированных

нутрий в сравнении с контролем (до вакцинации) уровня А в 1,2—1,3 раза (максимум - на 28-е сут), М в 1,4-1,6 раза (максимум - на 14-е сут) и в в 1,2-1,7 раза (максимум - на 14-е сут), что свидетельствует о иммунологической перестройке организма нутрий после прививки их ассоциированной вакциной Результаты исследований представлены в таблице 4

Таблица 3 - Показатели клеточного звена иммунитета нутрий до и после вакцинации (М±т, п=10)

Группа животных Т-лимфоциты, % В-лимфоциты, % NK -лимфоциты, %

До вакцинации

Кон[рольная 57,90±0,50 24,80±0,65 17,30±0,72

Опытная 59,50±0,48 23,60±0,45 16,90±0,69

На 7-е сутки после вакцинации

Контрольная 59,00±0,58 25,40±0,40 15,60±0,65

Опытная 52,20±0,47*** 29,30±0,37*** 18 50±0,73**

На 14-е сутки после вакцинации

Контрольная 58,80±0,51 26,30±0,56 14,90±0,71

Опытная 54,10±0,50*** 32,50±0,50*** 13,40±0,73

На 21-е сутки после вакцинации

Контрольная 59,20±0,47 27,00±0,47 13,80±0,53

Опьпная 56,70±0,42*** 31,10±0,35*** 12,20±0,57*

На 28-е су!ки после вакцинации

Контрольная 58,30±0,56 27,60±0,48 14,10±0,48

Опытная 59,40±0,54* 28,90±0,43* 11,70±0,83*

*Р<0,05, **Р>0,01, ***р>о 001

Динамика гуморального иммунного ответа у вакцинированных нутрий свидетельствует о росте титра специфических антител в сыворотке крови к Sir pneumoniae, Е coli Ol, S lyphimurium уже на 7-е сут после иммунизации Максимальное увеличение данного показателя отмечено на 14-е - 21-е сут после прививки, далее следует постепенное снижение титра антител (рисунок 9) Полученные результаты отражают полноценную иммунную реакцию организма нутрий на введение антигенов колибактериоза, сальмоиеллеза и стрептококкоза

Таблица 4 - Показатели гуморального звена иммунитета нутрий до и после вакцинации (М±ш; п=10)

1 руина животных IgA (г/л) IgM (г/л) IgG (г/л)

До вакцинации

Контрольная 0.290±0,02 1,12±0,01 2,40±0,02

Опытная 0,310±0,02 1,13±0.05 2,37±0,03

На 7-е сутки после вакцинации

Контрол ьная Опытная 0,320±0,02 1,38±0,01 2,50±0,02

0,365±0,01 * 1,69±0,03 *** 2,92±0,02 ***

На 14-е сутки после вакцинации

Контрольная 0,340±0,02 1,47±0,02 2,53±0,02

Опытная 0,386±0,01 ** 1,80±0,03 *** 3,96±0,03 ***

На 21-е сутки после вакцинации

Контрольная 0,355±0,02 1,57±0,02 2,58±0,02

Опытная 0,392±0,01 1,70±0,03 *** 3,69±0,03 ***

На 28-е сутки после вакцинации

Контрольная 0,380±0,02 1,58±0,01 2,63±0,02

Опытная 0,413±0,01 1,62±0,02 *** 3,44±0,03 ***

*Р <0,05: **Р>0.01: ***р>0.001.

Сутки после вакцинации

Рисунок 9 - Динамика титров антител у нутрий, двукратно иммунизированных против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза

Таким образом нами установлено, что ассоциированная вакцина против колибактериоза, сапьмонеллеза и стрептококкоза нутрий безвредна, не вызывает у животных поствакцинальных осложнений и обладает одновременно анти-генностью и иммуногенностью Выявленные у привитых животных закономерные изменения клеточного звена иммунитета полностью соответствуют активации уровня гуморальных показателей и существенно дополняют характеристику иммунного ответа

3.5 Изучение эффективности антибактериальных препаратов при лечении ассоциативной инфекции колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий

С этой целью проведено определение чувствительности выделенных от нутрий штаммов S typhimunum (п = 23), Е coh OI (п = 35), Sit pneumoniae (n = 52) к антибактериальным препаратам гентамицину, фурадонину, левомице-тину, биовиту-80, энрофлону, абактану методом диффузии в агар с применением дисков, лунок и методом серийных разведений в МПБ Установлено, что эти культуры обладали наибольшей чувствительностью к абактану, энрофлону

Терапевтическую эффективность абактана, энрофлона и биовита-80 определяли на нутриях в возрасте 40-50 дней в племзверосовхозе «Северинский» при ассоциативной инфекции колибактериоза, сапьмонеллеза и стрептококкоза Нами установлено, что наиболее эффективным в производственных условиях был абактан в дозе 5 мг/кг массы тела при однократной внутримышечной инъекции в течение 3 дней По этой схеме лечили 120 животных, из них выздоровело 119 (99,16%) При применении энрофлона с кормом в дозе 0,25г/кг массы тела животного в течение 7 дней (согласно наставлению по применению) выздоровело 110 животных (91,66%), а биовита-80 в дозе 0,5 г/нутрию в течение 12 дней - 55 животных (45,83%)

Таким образом, в производственных условиях при ассоциативной инфекции колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий высокую терапевтическую эффективность показали абактан (99,16%) и энрофлон (91,66%)

3.6 Разработка системы мероприятий по профилактике и ликвидации колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий

В России мероприятия по профилактике и ликвидации колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий не проводятся, поэтому нами на основании теоретических и практических результатов исследований они были разработаны по каждой указанной инфекции

Рисунок 10 — Система лечебно-профилактических мероприятий при колибактериозе, сальмопеллезе и стрептококкозе нутрий

Для профилактики инфекционных заболеваний молодняка и взрослых нутрий, в частности, колибактериоза, сальмоналпеза и стрептококкоза, в хозяйствах необходимо выполнять общие и специфические мероприятия

Общая профилактика колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий основывается на проведении комплекса технологических, зоогигиенических, ветери-нарно-санитарных и специфических мероприятий, направленных на повышение резистентности организма матери и новорожденного молодняка, снижение уровня контаминации помещений репродукторного отделения фермы возбудителями болезни и предотвращения заражения животных патогенными микроорганизмами через корма, а также объекты внешней среды При этом учитывают особенности содержания и выращивания молодняка нутрий(рисунок 10)

Специфическая профилактика колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий у новорожденных животных основана на проведении вакцинации маточного поголовья и молодняка соответствующими вакцинами в сроки и в дозах, указанных в наставлениях по их применению Наряду с вакцинами применяют следующие препараты-

- иммуномодуляторы (поливедрин, вестин, левамизол, полиоксидонин, Т- и В-акгивин и др.), которые вводят одновременно с вакциной одно- или двукратно согласно наставлению по их применению,

- поливалентные гипериммунные сыворотки сальмонеллезную, коли-, и стреп-тококкозную, а также бактериофаги в соответствии с действующими наставлениями по их применению;

- нормальные глобулины сывороток крови животных вводят внутримышечно или подкожно по 0,7 мл на 1 кг массы тела один раз в сутки в течение 2-3 дней,

- пробиотики (ветом-1 1, споробакгерин, субалин, ромакол, бифидумбактерин, бифацидобактерин, лакгицин и др) применяют в профилактической дозе по схеме, указанной в наставлении

Мероприятия по ликвидации заболевания По установлению диагноза на коли-бактериоз, сальмонеллез, стрептококкоз администрация района (города) в порядке, предусмотренном Федеральным законом «О ветеринарии», по представлению главного ветеринарного врача района (города) выносит решение об объявлении хозяйства (фермы), населенного пункта (или его отдельной самостоятельной части - в зависимости от эпизоотической обстановки) неблагополучными по сальмонелпезу, стрептокок-козу и установлении карантина, а в случае обнаружения колибактериоза вводят ограничения В решении указывают точные границы эпизоотического очага болезни, неблагополучного пункта, угрожаемой зоны, а также определяют основные мероприятия по ликвидации болезни в неблагополучном пункте и ее профилактике в угрожаемой зоне Проводят все необходимые мероприятия, направленные на недопущение выноса возбудителя за пределы эпизоотического очага и его локализацию В угрожаемой зоне проводят общие и специфические профилактические мероприятия

39

ВЫВОДЫ

1 Установлено, что эпизоотическая ситуация по стрептококкозу, колибакте-риозу и сапьмонеллезу нутрий в Российской Федерации, в том числе в Краснодарском крае, остается напряженной За 1996-2006 гг неблагополучными по данным инфекционным болезням животных являются 9-14 из 38 районов края, а также г Краснодар Зарегистрированы вспышки двух или трех указанных болезней одновременно в одном регионе

2. Выявлено, что в нозологическом профиле инфекционной патологии нутрий в Краснодарском крае доминируют стрептококкоз (60%), колибакте-риоз (33%), сальмонеллез (4,0%) Подавляющее большинство вирулентных культур, выделенных от нутрий в Краснодарском крае, приходится на S typhimurium (71,71%), Str pneumoniae (55,73%), Е coliOl (20,77%)

3 Разработаны технологии и способы изготовления новых инактивирован-ных моновакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и ассоциированных вакцин против сальмонеллеза и стрептококкоза, колибактериоза и стрептококкоза, сальмонеллеза и колибактериоза; колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий Отработаны параметры оценки качества по стерильности, безвредности, иммуногенности новых инактивиро-ванных моно- и ассоциированных вакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий

4 Разработаны эффективные режимы инактивации возбудителей колибактериоза (Е coh 01), сальмонеллеза (S typlvmui mm) и стрептококкоза (St) pneumoniae) нутрий в течение 2-4 суток на основе совместного действия раствора формалина в 0,4-0,5%-ной концентрации и температуры 37±2°С Это позволяет в 4 раза сократить время инактивации микроорганизмов по сравнению с традиционной технологией при сохранении у них иммуногенной активности

5 Подобраны оптимальные иммунологически сбалансированные соотношения инактивированных антигенов Е coh 01, S lyphimuiium, Sl> pneumoniae 1 1 2 и 20% адъюванта гидрата окиси алюминия, входящих в состав разработанных нами ассоциированных вакцин

6 Новые моно- и ассоциированные вакцины против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий в экспериментальных и производственных условиях признаны безвредными и высокоиммуногенными, после одно- и двукратной прививки с интервалом 10 суток позволяют обеспечить не менее чем 80%-ную защиту нутрий от вирулентных Е coh 01

■S typhmurmm, Sti pneumoniae Свои иммунобиологические свойства вакцины сохраняют в течение года при температуре 2-10°С

7 Установлено, что у вакцинированных нутрий в сравнении с животными контрольной группы аналогичного возраста с 7-х по 28-е сутки опыта были достоверно (Р>0,001) выше количество активно фагоцитирующих нейтрофилов на 5-24%, поглотительная способность нейтрофильных гранулоцитов -в 1,1-1,5 раза, процент переваривания - на 8-26% и коэффициент мобилизации формазанпозигивных клеток - в 1,1-1,8 раза, что свидетельствует об активизации и о степени завершенности процесса фагоцитоза

8 Выявленная у нутрий, иммунизированных ассоциированной трехвалентной вакциной, активизация клеточной реакции фагоцитов согласуется с повышением уровня гуморальных антител к Sti pneumoniae (в 1,1-35,3 раза), Е coli Ol (в 25,7-60,4 раза) и S typhimurium (в 26,2-56,3 раза), что обеспечивает невосприимчивость животных к возбудителям ко-либактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза в течение 12 месяцев

9 Установлено, что у нутрий после двукратного введения ассоциированной трехвалентной вакцины происходит иммунологическая перестройка организма, о чем свидетельствует достоверное (Р>0,001) увеличение уровня B-лимфоцитов на 22-38%, у-глобулинов и основных иммуноглобулинов А, М, G в 1,1-1,6 раза в сыворотке крови привитых животных в сравнении с контролем. Экономическая эффективность применения вакцины составляет 26,69 руб на 1 руб. затрат

10 В производственных условиях установлена высокая эффективность (99,16%) отечественного антибактериального препарата абактан при лечении нутрий, больных ассоциативной инфекцией колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза Экономическая эффективность применения абактана составляет 12,02 руб на 1 руб затрат

11 Разработаны рекомендации по профилактике и ликвидации колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий, позволяющие регламентировать эти мероприятия Утверждена в установленном порядке нормативно-техническая документация на разработанную нами ассоциированную вакцину против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ

1 Предложены способы технологии изготовления и новые инактивирован-ные моновакцины против колибактериоза, сальмонеллеза, ассоциирован-

ные вакцины против сальмонеллеза и стрептококкоза, колибактериоза и стрептококкоза; сальмонеллеза и колибактериоза; колибактериоза, сапьмонеллеза и стрептококкоза нутрий

2 Предложена схема лечения ассоциативной инфекции колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий отечественным препаратом абактан

3 Предложена система профилактических и лечебных мероприятий по сальмонеллезу, стрептококкозу и колибактериозу нутрий, изданы «Рекомендации по профилактике и ликвидации колибактериоза нутрий в Краснодарском крае», «Рекомендации по профилактике и ликвидации сальмонеллеза нутрий в Краснодарском крае», «Рекомендации по профилактике и ликвидации стрептококкоза нутрий в Краснодарском крае»

4 Материалы изложены в учебном пособии «Биологические особенности и болезни нутрий», утвержденном МСХ РФ (№ 27-2-13/3912 от 12 01 2004 г)

5 Результаты исследований могут быть использованы при планировании противоэпизоотических мероприятий по профилактике сальмонеллеза, стрептококкоза и колибактериоза нутрий, диагностических исследованиях, обучении студентов и повышении квалификации ветеринарных специалистов

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1 Шевченко, А А Идентификация возбудителей кокковых инфекций нутрий / А А Шевченко, Л В Шевченко // Биол -зкол проблемы заразных болезней диких животных и их роль в патологии с -х животных и людей материалы Междунар науч -практ конф / ВНИИВВиМ - Покров, 2002 -С 252-254

2 Шевченко, Л В Идентификация энтеробактерий нутрий/Л В Шевченко, А А Шевченко // Биол -экол проблемы заразных болезней диких животных и их роль в патологии с -х животных и людей материалы Междунар науч -практ конф / ВНИИВВиМ - Покров, 2002 - С 254-255

3 Шевченко, А А Нутрии Биологические особенности Содержание Разведение Болезни и лечение / А А Шевченко, Л В Шевченко - М Аквариум Бук, 2004 - 160 с

4 Шевченко, А А Изучение энтеробактерий нутрий и совершенствование лечения и профилактики / А А Шевченко, Л В Шевченко, Э А Горностаев // Фундам исслед - 2004 - № 1 - С. 93

5 Шевченко, Л В Изучение иммунобиологических свойств ассоциированной вакцины против сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий / Л В Шевченко, В В Стрельников, А А Шевченко // Сб науч тр / КубГАУ -2004 -№406(434) - С 25-29

6 Шевченко, Л В Изучение иммунобиологических свойств ассоциированной вакцины против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий /Л В Шевченко // Сб науч тр / КубГАУ - 2004 - № 406 (434) -С 32-37

7 Шевченко, Л. В. Изучение коккобактерий нутрий, совершенствование профилактики / Л В Шевченко, А А Шевченко // Актуал вопр микробиологии и инфекц патологии животных материалы науч -произв конф /Ом ГАУ, ин-тветеринар медицины - Омск,2004 -С 164-173

8 Шевченко, Л. В Изучение иммунобиологических свойств вакцины против сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий / Л В Шевченко // Соврем проблемы устойчивого развития агропром комплекса России материалы Второй Всерос дистанц науч -практ конф / Дон ГАУ - пос Персиановка, 2004 - С 90-92.

9 Шевченко, Л В Лабораторная диагностика энтеробактерий нутрий /Л. В Шевченко//Сб науч тр / КубГАУ -2004 -№406(434) -С 15-20

10 Шевченко, Л В Лечение энтеробактериальных инфекций нутрий / Л В Шевченко, Э А Горностаев, А А Крыцула // Сб науч тр /КубГАУ -2004 -№406(434) -С 29-32

11 Шевченко, Л В Основные свойства вакцины против сальмонеллеза нутрий / Л В Шевченко, В. В Стрельников // Соврем проблемы устойчивого развития агропром комплекса России материалы Второй Всерос дистанц науч.-практ. конф. / Дон ГАУ - пос. Персиановка, 2004. - С. 92-93.

12 Шевченко, Л В Эффективность вакцины против колибактериоза нутрий / Л В Шевченко, В В Стрельников // Соврем проблемы устойчивого развития агропром комплекса России материалы Второй Всерос дистанц науч -практ конф / Дон ГАУ - пос Персиановка, 2004 - С 94-95

13 Рекомендации по профилактике и ликвидации сальмонеллеза нутрий в Краснодарском крае / А А Шевченко, Л В Шевченко, О Ю Черных, Н.Е Пак. - Краснодар КубГАУ, 2005 -38 с

14 Шевченко, А. А Теоретическое и экспериментальное моделирование профилактики инфекционных болезней нутрий в Краснодарском крае / А А Шевченко, Л В Шевченко // Р2003юг заключ конф грантодержа-

телей регион конкурса РФФИ и администрации Краснод края тез докл - Краснодар, 2005 - С 70-72

15 Шевченко, А А Учебно-методический комплекс для дисциплины «Болезни пушных зверей» по специальности 111210 - «Ветеринария» фак ветеринар, медицины / А А Шевченко, Л. В. Шевченко -Краснодар КубГАУ,2005 -16 с

16 Шевченко, А А Учебно-мегодический комплекс для дисциплины «Лабораторная диагностика инфекционных болезней животных» по специальности 111210 - «Ветеринария» фак ветеринар медицины / А А Шевченко, Л В Шевченко - Краснодар КубГАУ, 2005 - 35 с

17 Шевченко, Л В Иммунобиологические свойства вакцины против коли-бактериоза нутрий / Л В Шевченко // Актуал проблемы биологии и ветеринар медицины мелких домашних животных материалы Междунар науч - практ конф / УГАВМ - Троицк, 2005 - С 204-207

18 Шевченко, Л В Лечение и специфическая профилактика сальмонеллеза нутрий / Л В Шевченко // Актуал проблемы биологии и ветеринар медицины мелких домашних животных материалы Междунар науч - практ конф / УГАВМ - Троицк, 2005 - С 201-204

19 Шевченко, Л В Рекомендации по профилактике и ликвидации стрепто-коккоза нутрий в Краснодарском крае / Л В Шевченко, О Ю Черных, А А Шевченко - Краснодар- КубГАУ, 2005 - 29 с

20 Патент 2279291 РФ, МПК А61К 39/112 Вакцина против сальмонеллеза нутрий / А А Шевченко, Л В Шевченко, Н Е Пак, В И Койков, заявл 08 02 05, опубл 10 07 06, Бюл №19 - 6 с

21 Патент 2288004 РФ, МПК А61К 39/108, А61Р 31/04 Вакцина против колибактериоза нутрий / А А. Шевченко, Л. В. Шевченко, А А Шевченко, В В Зайдель, заявл 14 06 05, опубл 27 11 06, Бюл №33 (1ч) - 6 с

22 Патент 2279891 РФ, МПК А61К 39/112 Способ изготовления вакцины против сальмонеллеза нутрий / А А Шевченко, Л В Шевченко, А 10 Шантыз, Н Е Пак, заявл 08 02 05; опубл 20 07 06, Бюл № 20 - 5 с

23 Патент 2288005 РФ, МПК А61К 39/108 Способ изготовления вакцины против колибактериоза нутрий / А А Шевченко, Л В Шевченко, А А Шевченко, заявл 14 06 05, опубл 27 11 06, Бюл № 33 (II ч) -5 с

24 Черных, О Ю Рекомендации по профилактике и ликвидации колибактериоза нутрий в Краснодарском крае / О Ю Черных, Л В Шевченко, А А Шевченко - Краснодар КубГАУ, 2006 - 31 с

25 Шевченко, А А Пищевые токсикоинфекции и токсикозы учеб пособие / А А Шевченко, В В Стрельников, Л В Шевченко - Краснодар Куб-ГАУ, 2006 -173с

26 Шевченко, Л В Ассоциированная вакцина против сальмонеллеза и энте-рококковой инфекции нутрий / Л В Шевченко, Э А Горностаев, А. А Крыцула//Ветеринария с.-х. животных.-2006 -№3.-С 25-26

27 Шевченко, Л В Болезни и биологические особенности нутрий учеб пособие / Л В Шевченко, В В Стрельников, А А Шевченко - Краснодар Краснодарбланкиздат, 2006. - 272 с.

28 Шевченко, Л В Теоретическое и экспериментальное моделирование эпи-зоотологической и экологической безопасности выращивания нутрий / Л В Шевченко, А. А Шевченко, О Ю. Черных // ЮГ РОССИИ, тез. конф грантодержателей регион конкурса Рос фонда фундам. исслед и администрации Краснод. края - Краснодар, 2006 -С. 174-175

29 Шевченко, Л В Эпизоотологические особенности распространения инфекционных болезней нутрий в Краснодарском крае / Л В Шевченко // Тр / КубГАУ - 2006 - № 4 - С 154-159.

30 Шевченко, Л В Энтерококковая инфекция нутрий / Л В Шевченко, В В Стрельников, А. А Шевченко // Ветеринария с -х животных - 2006 -№2 - С 29-31

31 Патент 2292912 РФ, МПК А61К 39/116, А61К 39/112, А61К 39/09, А61Р 31/04 Вакцина, ассоциированная против сальмонеллеза и стрепто-коккоза нутрий / А. А Шевченко, Л В Шевченко, Е А Шиканова, А А Шевченко, заявл 02 08 05, опубл 10 02 07, Бюл № 4 (II ч) - 7 с

32 Патент 2292913 РФ, МПК А61К 39/116, А61К 39/112, А61К 39/108, А61Р 31/04 Вакцина ассоциированная против сальмонеллеза и колибакте-риоза нутрий / А. А. Шевченко, Л. В Шевченко, А А Шевченко, Е. А. Шиканова, заявл. 02.08.05, опубл. 10 02.07, Бюл. № 4 (II ч). - 6 с

33 Патент 2301681 РФ, МПК А61К 39/116, А61К 39/112, А61К 39/108, А61К 39/09, А61Р 1/00 Вакцина ассоциированная против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий / Л В Шевченко, А А Шевченко, А А Шевченко, О Ю Черных, заявл 31 01.06, опубл 27 06 07, Бюл №18 (II ч) - 8 с

34 Патент 2292915 РФ, МПК А61К 39/116, А61К 39/112, А61К 39/108 Способ изготовления вакцины ассоциированной против сальмонеллеза и колибактериоза нутрий I А А Шевченко, Л В Шевченко, А А Шевченко, Е А Шиканова, заявл 02 08 05, опубл 10 02 07, Бюл № 4 (И ч) - 6 с

35 Пагент 2292911 РФ, МПК A6IK 39/116, А61К 39/112, А61К 39/09 Способ изготовления вакцины, ассоциированной против сальмонеллеза и стреп-тококкоза нутрий / А А Шевченко, Л В Шевченко, А А Шевченко, Е А Шиканова, заявл 02 08 05, опубл 10 02 07, Бюл № 4 (II ч) - 6 с

36 Патент 2301077 РФ, МПК А61К 39/116, A6IK 39/112, A6IK 39/108, A6IK 39/09 Способ изготовления вакцины ассоциированной против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий / Л В Шевченко, А А Шевченко, А А Шевченко, Е А Шевченко, заявл 31 01 06, опубл 20 06 07, Бюл № 17 (|Ц ч) - 7 с

37 Шевченко, А А Специфическая профилактика инфекционных болезней пушных зверей / А А Шевченко, Л В Шевченко, О Ю Черных // Вестн ветеринарии -2007 -№40-41(1-2) -С 144-148

38 Шевченко, Л В Вакцина против колибактериоза и стрептококкоза нутрий /Л В Шевченко//Фундам исслед -2007 -№ 1 -С 91

39 Шевченко, Л В Вакцина против колибактериоза и стрептококкоза нутрий / Л В Шевченко // Соврем наукоемкие технологии - 2007 - № 4 -С 96-97

40 Шевченко, Л В Динамика распространения инфекционных болезней нутрий в Краснодарском крае / Л В Шевченко // Наука Кубани - 2007 -№ 1 -С 31-34

41 Шевченко, Л В Диагностика и лечение стрептококкоза нутрий /Л В Шевченко//Сб науч тр /КубГАУ -2007 -№426(454) -С 105-108

42 Шевченко, Л В Иммунобиологические свойства ассоциированной вакцины против сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий / Л В Шевченко // Тр /КубГАУ -2007 -№1(5) -С 144-146

43 Шевченко, Л В Иммунологическая реактивность нутрий, привитых ассоциированной вакциной против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза / Л В Шевченко, О Ю Черных, А А Шевченко // Успехи соврем естествознания - 2007 - № 8 - С 72-74

44 Шевченко, Л В Инфекционные болезни нутрий в Краснодарском крае /Л В Шевченко, А А Шевченко, О Ю Черных // Ветеринария - 2007 -№11 -С 24-25

45 Шевченко, Л В Иммунобиологические свойства ассоциированной вакцины против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий / Л В Шевченко, О Ю Черных, А А Шевченко // Новые технологии в эксперим биологии и медицине материалы Междунар науч -практ конф / НИИ БИОЛОГИИ ЮФУ - Ростов-н/Д , 2007 - С 73

46 Шевченко, Л В Иммунобиологические свойства вакцины против коли-бактериоза нутрий / Л В Шевченко // Сб науч тр / КубГАУ - 2007 -№426(454) -С 99-101

47 Шевченко, Л В Лечение ассоциативных инфекционных болезней нутрий / Л В Шевченко // Тр / КубГАУ - 2007 - № 4(8) - С. 73-74

48 Шевченко, Л В Новая вакцина против сапьмонеллеза и стрептококкоза нутрий/Л В Шевченко//Ветеринария -2007 -№4 - С 24-26

49 Шевченко, Л В Теоретическое и экспериментальное моделирование эпи-зоотологической и экологической безопасности выращивания нутрий / Л В Шевченко, А А Шевченко, О Ю Черных // ЮГ РОССИИ вклад фундам исслед в развитие соврем инновац экономики Краснод края сб тез конф грантодержателей регион конкурса РФФИ и администрации Краснод края - Краснодар, 2007. - С 188-189

50 Шевченко, Л В Терапия ассоциативных инфекций нутрий / Л В Шевченко // Соврем наукоемкие технологии - 2007 - № 4 -С 99-100

51 Шевченко, Л В Технология изготовления ассоциированной вакцины против колибактериоза, сапьмонеллеза и стрептококкоза нутрий / Л В Шевченко, О Ю Черных, А \ Шевченко // Успехи соврем естествознания -2007 -№ 8 -С 74-75

52 Шевченко, Л В Технология изготовления ассоциированной вакцины против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий / Л В Шевченко, О Ю Черных, А А Шевченко // Новые технологии в эксперим биологии и медицине материалы Между нар науч -практ конф /НИИ БИОЛОГИИ ЮФУ - Ростов-н/Д , 2007 -С 74

53 Шевченко, Л В Технология изготовления ассоциированной вакцины против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий /Л В Шевченко//Тр / КубГАУ -2007 -№2(6) - С 149-152

54 Шевченко, Л В Формирование иммунитета у нутрий, привитых ассоциированной вакциной против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза/Л В Шевченко//Тр /КубГАУ -2007 -№3(7) -С 123-126

55 Шевченко, Л В Эффективность вакцины против сальмонеллеза нутрий /Л В Шевченко//Сб науч тр /КубГАУ -2007 -№426(454) - С 89-91

56 Рекомендации по лабораторной диагностике стафилококкозов и стрепто-коккозов животных / А А Шевченко, О Ю Черных, В Н Шевкопляс, Л В Шевченко - Краснодар КубГАУ, 2008 - 31 с

57 Рекомендации по лабораторной диагностике энтеробастериальных инфекций животных / А А Шевченко, О Ю Черных, В Н Шевкопляс, Л В Шевченко - Краснодар-КубГАУ, 2008 - 131 с

58 Шевченко, Л В Динамика морфобиохимического статуса нутрий, привитых ассоциированной вакциной против нолибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза / Л В Шевченко, О Ю Черных, В В Анников // Вестн Саратов госагроун-та им Н И Вавилова -2008 -№2 -С 46-47

59 Шевченко, Л В Иммунобиологическая реактивность нутрий, привитых ассоциированной вакциной против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза / Л В Шевченко, О Ю Черных, Л А Шевченко //Изв вузов Сев-Кавказ регион -2008 -№1 -С 91-93

Подписано в печать 6 05 2008 г

Бумага офсетная Печ л 2 Тираж 100 э кз

Офсетная печать Заказ №246

Отпечатаю в типографии КубГАУ 350044, г Краснодар,ул Калинина, 13

Актуальность проблемы. По производству пушнины Россия традиционно является одним из мировых лидеров. Значительную часть дохода этой отрасли приносят нутрии.

Нутриеводство - перспективная отрасль пушного звероводства. От нутрий получают вкусное диетическое мясо, ценные шкурки различных расцветок [В.Г. Кузнецов, 1993; В.Ф. Кладовщиков, 2002; Н.А. Балакирев, 2006].

Разведением нутрий занимаются государственные, фермерские хозяйства и нутриеводы-любители в различных климатических зонах [Н.А. Балакирев, 2002; Г.А. Кузнецов, 2003; И.А. Плотников, 2003].

Стабильному развитию нутриеводства препятствуют инфекционные болезни: колибактериоз, сальмонеллез и стрептококкоз. Они регистрируются во всех развитых странах мира, в том числе и в России, и наносят значительный экономический ущерб отрасли [В.А. Есепенок и соавт., 1997;

A.Н.Панин и соавт., 1997; П.А. Емельяненко, 2000; В.Ф. Косее, 2001;

B.И. Терехов, 2005; В. Kohler et al., 1988; A. Them, 1998].

Следует отметить также, что колибактериоз, сальмонеллез и стрептококкоз имеют эпидемиологическое значение. Роль эшерихий, сальмонелл и стрептококков в инфекционной патологии животных и человека ежегодно возрастает [Н.И. Брико, 2000; Е.С. Вылегжанина, 2001; Н.М. Колычев, 2006].

Как показывает мировой опыт, во многих случаях одним из основных средств специфической профилактики инфекционных болезней животных является вакцинация. Выпускаемые в России поливалентная вакцина против сальмонеллеза и колибактериоза пушных зверей [С.Я. Любашенко, 1963], против стрептококкоза и пастереллеза нутрий [В.А. Есепенок и соавт., 1997] содержат в своем составе определенные штаммы возбудителей. Антигенный состав биопрепаратов был предложен в 60-90 гг. XX столетия и до сих пор не пересматривался. Проводимый мониторинг не учитывает серотиповую циркуляцию штаммов возбудителей инфекционных болезней. Выпускаемые биофабриками вакцины не соответствуют антигенному профилю эшерихий, сальмонелл, стрептококков и не обеспечивают надежной защиты от них нутрий.

В последние годы в нутриеводческих хозяйствах широкое распространение получило ассоциативное течение колибактериоза, сальмонеллеза, стрептококкоза, а также пастереллеза, стафилококкоза в различных сочетаниях [Р.А. Кадымов, 1998; В.И.Терехов, 1999; Л.П.Миронова, 1999, 2000, 2001; Н.В. Броварец, 2003; С.Н. Треглазов, J1.A. Малышева, 2003].

В связи с этим большое значение продается применению ассоциированных вакцин, преимущество которых заключается в создании иммунитета сразу к нескольким болезням одновременно при отсутствии у животных иммунодепрес-сивных процессов, повышении производительности труда и снижении процента травмирования и осложнений при отлове и фиксации животных [Р.А. Кадымов и соавт., 1990; И.А. Домский, 2002; В.А. Есепенок и соавт., 2005,2006].

Для защиты нутрий от ассоциативных инфекций колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза в России ассоциированные вакцины не разработаны. Изучение возможности их конструирования и применения с целью иммунизации пушных зверей представляет большой научный и практический интерес. Проведение таких исследований может решить проблему надежной профилактики данных заболеваний у восприимчивых растительноядных.

Учитывая сложную эпизоотическую обстановку, обусловленную совместным действием различных возбудителей, разработка новых ассоциированных вакцин является одним из важнейших современных направлений в области инфекционной патологии животных.

Серогрупповой состав стрептококков, эшерихий, сальмонелл многочислен и склонен к быстрым изменениям набора и количества. В такой ситуации методы специфической профилактики должны основываться на применении ассоциированных вакцин, содержащих сероварианты возбудителей, которые выделяются от больных и павших животных в эпизоотическом очаге. Биопрепараты из местных штаммов возбудителей болезней обладают более высокими антигенными и иммуногенными свойствами и способствуют созданию иммунитета достаточной напряженности [A.M. Ахмедов, 1983; В.И. Вачугов, 1989; Р.А. Кадымов и соавт., 1990; Р.Т. Маннапова, 1998; Н.Н. Шульга, 2006].

Исследований по включению в состав ассоциированных вакцин антигенов колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий согласно выделенному серотиповому составу не проводилось. Разработка таких вакцинных ассоциаций для профилактики данных заболеваний целесообразна в теоретическом и практическом отношениях.

Цель н задачи исследований. Целью работы являлась разработка комплекса мероприятий для специфической профилактики ассоциативных инфекционных болезней нутрий - колибактериоза, сальмонеллеза, стрептококкоза - и их лечения.

Для достижения намеченной цели были поставлены следующие задачи:

- изучить эпизоотическую обстановку по инфекционным болезням нутрий и определить серологический профиль возбудителей;

- разработать технологии изготовления, нормативно-техническую документацию по изготовлению и контролю инактивированных моно- и ассоциированных вакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий;

- изучить иммунобиологические свойства новых моно- и ассоциированных вакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий в экспериментальных и производственных условиях;

- изучить иммунобиологическую реактивность организма нутрий до и после применения ассоциированной вакцины против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий;

- изучить эффективность новых ассоциированных вакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий в экспериментальных и производственных условиях;

- изучить лечебное действие антибактериальных препаратов при ассоциативной инфекции колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий; разработать систему профилактических и лечебных мероприятий по колибактериозу, сальмонеллезу и стрептококкозу нутрий.

Научная новизна. Впервые изучена эпизоотическая обстановка по инфекционным болезням нутрий и определен серологический профиль возбудителей.

Впервые разработаны технологии изготовления новых инактивирован-ных моновакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и ассоциированных вакцин против сальмонеллеза и стрептококкоза; колибактериоза и стрепто-коккоза; сальмонеллеза и колибактериоза; колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий.

Отработана кинетика инактивации возбудителей колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза на основе совместного действия инактивантов разной физико-химической природы, которые позволяют в несколько раз уменьшить количество формалина, вводимого в бактериальную культуру, и в 4 раза сократить время инактивации микроорганизмов по сравнению с традиционными технологиями.

В результате исследований определены оптимальные соотношения антигенов и адъюванта, входящих в состав новых инактивированных ассоциированных вакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий, а также дозы и схемы введения биопрепаратов. Установлена безвредность, слабая реактогенность и высокая иммуногенность новых инактивированных моно-и ассоциированных вакцин при их применении на нутриях.

Впервые изучена динамика морфобиохимических показателей и формирование клеточного и гуморального звеньев иммунитета у нутрий до и после применения ассоциированной вакцины против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза.

Установлено, что применение инактивированных ассоциированных вакцин позволяет обеспечить не менее чем 80%-ную защиту нутрий от возбудителей колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза, сократить количество вакцинаций в 2-3 раза и при этом создать иммунное поголовье в короткие сроки, повысить производительность труда зооветспециалистов и обслуживающего персонала, уменьшить в два-три раза затраты на проведение противоэпизоотических мероприятий против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий.

Разработана и внедрена в ветеринарную практику система мероприятий по профилактике и ликвидации инфекционных заболеваний колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий. Установлено высокое лечебное действие отечественного антибактериального препарата абактан при ассоциативной инфекции колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий.

Научная новизна работы подтверждена и защищена 10 патентами РФ на изобретение.

Теоретическая и практическая значимость работы. Теоретически обоснована и практически подтверждена необходимость защиты нутрий от инфекционных болезней моно- и ассоциированными вакцинами, изготовленными из местных штаммов возбудителей колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий. Разработаны и предложены для внедрения в производство новые инактивированные моновакцины против колибактериоза, сальмонеллеза и ассоциированные вакцины против сальмонеллеза и стрептококкоза; сальмонеллеза и колибактериоза; колибактериоза и стрептококкоза; колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий, а также технологии изготовления этих вакцин.

Выявлен характер изменений неспецифического и специфического звеньев иммунитета, проявляющихся после иммунизации нутрий ассоциированной вакциной против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза. Установлено, что в формировании специфической защиты нутрий ведущая роль принадлежит В-лимфоцитам, у-глобулинам, иммуноглобулинам IgA, IgM, IgG. Выявленные закономерности клеточной реакции фагоцитов полностью соответствуют активации уровня гуморального звена иммунитета у нутрий и существенно дополняют характеристику специфического иммунного ответа.

Разработана и утверждена в установленном порядке нормативно-техническая документация (регламент по изготовлению и контролю, технические условия, временные наставления по применению моно- и ассоциированных вакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий).

Производство разных вариантов новых инактивированных вакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий освоено в ФГУ «Краснодарская биофабрика» и в ФГУ «Армавирская биофабрика». Изготовлено более 250 тыс. доз биопрепаратов, которые были испытаны с положительными результатами в производственных условиях.

На основании теоретических, экспериментальных и производственных исследований разработана и внедрена в ветеринарную практику система мероприятий по профилактике и ликвидации инфекционных заболеваний колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий, включающая изучение эпизоотической обстановки хозяйства, выделение возбудителей, конструирование инактивированных вакцин, их контроль и применение. Разработана и предложена схема лечения ассоциативной инфекции колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий.

Материалы исследований включены в утвержденные рекомендации по профилактике и ликвидации колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий, изложены в монографии «Нутрии», в учебном пособии «Биологические особенности и болезни нутрий», утвержденном МСХ РФ (№ 27-2-13/3912 от 12.01.2004 г.), защищены патентами на изобретение, используются при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий по дисциплинам: «Болезни пушных зверей», «Ветеринарная микробиология и иммунология», «Лабораторная диагностика инфекционных болезней животных».

Результаты исследований подтверждены актами внедрения.

Связь работы с научными программами. Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематическим планом научно-исследовательской тематики Кубанского государственного аграрного университета, государственный регистрационный №01200113464 «Разработка и совершенствование специфической профилактики инфекционных болезней животных»; по проекту № 03-04-96554 гранта совместных конкурсов РФФИ и администрации Краснодарского края «Теоретическое и экспериментальное моделирование профилактики инфекционных болезней у нутрий в Краснодарском крае»; по проекту № 06-04-96772 гранта совместных конкурсов РФФИ и администрации Краснодарского края «Юг России» «Теоретическое и экспериментальное моделирование эпизоотологической и экологической безопасности выращивания нутрий».

Апробация результатов исследований. Основные положения и результаты диссертации доложены и обсуждены на международных научно-практических конференциях (Покров, 2002, 2003; Троицк, 2005; Ростов-на-Дону, 2007); на Всероссийской конференции грантодержателей регионального конкурса РФФИ и администрации Краснодарского края (Краснодар, 2003, 2004, 2005, 2006, 2007); на региональных научно-практических конференциях (Омск, 2004; Краснодар, 2004-2008); на II Всероссийской научно-практической конференции студентов, аспирантов и молодых ученых, Донской ГАУ (пос. Персиановка, 2004); на научно-практической конференции молодых ученых (Краснодар, 2002); на заседаниях ученого совета Кубанского государственного аграрного университета (2001-2008).

Публикации результатов исследовании. По материалам диссертации изданы 59 научных работ (в том числе монография, учебное пособие, утвержденное МСХ РФ, № 27-2-13/3912 от 12.01.2004 г.), 9 из них опубликованы в журналах, рекомендуемых ВАК Министерства образования и науки России: «Ветеринария» - 2; «Вестник Саратовского госагроуниверситета им. Н.И. Вавилова» - 1; «Известия высших учебных заведений Северо-Кавказский регион» - 1; «Труды Кубанского государственного аграрного университета» - 5; а также в материалах международных конференций - 6 (Покров, Ростов-на-Дону, Троицк) и всероссийских научно-производственных конференций — 7 (Краснодар, Омск, пос. Персиановка); в журналах: «Ветеринария сельскохозяйственных животных» — 2; «Вестник ветеринарии» — 1; «Наука Кубани» -1, «Современные наукоемкие технологии» — 2; «Успехи современного естествознания» — 2; «Фундаментальные исследования» — 1; в официальном бюллетене Российского агенства по патентам и товарным знакам «Изобретения, полезные советы» - 10, в сборниках научных трудов ДонГАУ - 3, КубГАУ -7 и в других научно-производственных изданиях.

Основные положения, выносимые на защиту:

- результаты изучения эпизоотической обстановки по инфекционным болезням нутрий и определения серологического профиля возбудителей;

- результаты разработки технологий изготовления и методов контроля инактивированных моно- и ассоциированных вакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий;

- результаты изучения иммунобиологических свойств и эффективности новых инактивированных моно- и ассоциированных вакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий в экспериментальных и производственных условиях;

- результаты изучения иммунобиологической реактивности организма нутрий до и после прививки ассоциированной вакциной против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий;

- результаты изучения эффективности антибактериальных препаратов при ассоциативной инфекции колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий;

- результаты разработки системы профилактических и лечебных мероприятий по колибактериозу, сальмонеллезу и стрептококкозу нутрий.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 302 листах машинописного текста и содержит разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований, выводы, предложения производству, список использованной литературы и приложения. Работа иллюстрирована 46 таблицами, 35 рисунками, 6 фотографиями. Список литературы включает 480 источников, в том числе 101 работа зарубежных авторов.

5. ВЫВОДЫ

1. Установлено, что эпизоотическая ситуация по стрептококкозу, колибак-териозу и сальмонеллезу нутрий в Российской Федерации, в том числе в Краснодарском крае, остается напряженной. За 1996-2006 гг. неблагополучными по данным инфекционным болезням животных являются 9-14 из 38 районов края, а также г. Краснодар. Зарегистрированы вспышки двух или трех указанных болезней одновременно в одном регионе.

2. Выявлено, что в нозологическом профиле инфекционной патологии нутрий в Краснодарском крае доминируют стрептококкоз (60%), колибактериоз (33%), сальмонеллез (4,0%). Подавляющее большинство вирулентных культур, выделенных от нутрий в Краснодарском крае, приходится на S. typhimurium (71,71%), Str. pneumoniae (55,73%), Е. coli Ol (20,11%).

3. Разработаны технологии и способы изготовления новых инактивированных моновакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и ассоциированных вакцин против сальмонеллеза и стрептококкоза; колибактериоза и стрептококкоза; сальмонеллеза и колибактериоза; колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий. Отработаны параметры оценки качества по стерильности, безвредности, иммуногенности новых инактивированных моно- и ассоциированных вакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий.

4. Разработаны эффективные режимы инактивации возбудителей колибактериоза (Е. coli Ol), сальмонеллеза (S. typhimurium) и стрептококкоза (Str. pneumoniae) нутрий в течение 2-4 суток на основе совместного действия раствора формалина в 0,4-0,5%-ной концентрации и температуры 37±2°С. Это позволяет в 4 раза сократить время инактивации микроорганизмов по сравнению с традиционной технологией при сохранении у них иммуногенной активности.

5. Подобраны оптимальные иммунологически сбалансированные соотношения инактивированных антигенов Е. coli Ol, S. typhimurium, Str. pneumoniae 1:1:2 и 20% адъюванта гидрата окиси алюминия, входящих в состав разработанных нами ассоциированных вакцин.

6. Новые моно- и ассоциированные вакцины против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий в экспериментальных и производственных условиях признаны безвредными и высокоиммуногенными, после одно- и двукратной прививки с интервалом 10 суток позволяют обеспечить не менее чем 80%-ную защиту нутрий от вирулентных Е. coli Ol, S. typhimurium, Str. pneumoniae. Свои иммунобиологические свойства вакцины сохраняют в течение года при температуре 2-10°С.

7. Установлено, что у вакцинированных нутрий в сравнении с животными контрольной группы аналогичного возраста с 7-х по 28-е суши опыта были достоверно (Р>0,001) выше: количество активно фагоцитирующих нейтрофилов на 5-24%, поглотительная способность нейтрофильных гранулоцитов -в 1,1-1,5 раза, процент переваривания - на 8-26% и коэффициент мобилизации формазанпозитивных клеток - в 1,1-1,8 раза, что свидетельствует об активизации и о степени завершенности процесса фагоцитоза.

8. Выявленная у нутрий, иммунизированных ассоциированной трехвалентной вакциной, активизация клеточной реакции фагоцитов согласуется с повышением уровня гуморальных антител к Str. pneumoniae (в 1,1—35,3 раза), Е. coli Ol (в 25,7-60,4 раза) и S. typhimurium (в 26,2-56,3 раза), что обеспечивает невосприимчивость животных к возбудителям колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза в течение 12 месяцев.

9. Установлено, что у нутрий после двукратного введения ассоциированной трехвалентной вакцины происходит иммунологическая перестройка организма, о чем свидетельствует достоверное (Р>0,001) увеличение уровня В-лимфоцитов на 22-38%, у-глобулинов и основных иммуноглобулинов А, М, G в 1,1-1,6 раза в сыворотке крови привитых животных в сравнении с контролем. Экономическая эффективность применения вакцины составляет 26,69 руб. на 1 руб. затрат.

10. В производственных условиях установлена высокая эффективность (99,16%) отечественного антибактериального препарата абактан при лечении нутрий, больных ассоциативной инфекцией колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза. Экономическая эффективность применения абактана составляет 12,02 руб. на 1 руб. затрат.

11. Разработаны рекомендации по профилактике и ликвидации колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий, позволяющие регламентировать эти мероприятия. Утверждена в установленном порядке нормативно-техническая документация на разработанную нами ассоциированную вакцину против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий.

6. ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ

1. Предложены способы технологии изготовления и новые инактивирован-ные моновакцины против колибактериоза, сальмонеллеза; ассоциированные вакцины против сальмонеллеза и стрептококкоза; колибактериоза и стрептококкоза; сальмонеллеза и колибактериоза; колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий.

2. Предложена схема лечения ассоциативной инфекции колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий отечественным препаратом абактан.

3. Предложена система профилактических и лечебных мероприятий по сальмонеллезу, стрептококкозу и колибактериозу нутрий; изданы «Рекомендации по профилактике и ликвидации колибактериоза нутрий в Краснодарском крае», «Рекомендации по профилактике и ликвидации сальмонеллеза нутрий в Краснодарском крае», «Рекомендации по профилактике и ликвидации стрептококкоза нутрий в Краснодарском крае».

4. Материалы изложены в учебном пособии «Биологические особенности и болезни нутрий», утвержденном МСХ РФ (№ 27-2-13/3912 от 12.01.2004 г).

5. Результаты исследований могут быть использованы при планировании противоэпизоотических мероприятий по профилактике сальмонеллеза, стрептококкоза и колибактериоза нутрий; диагностических исследованиях; обучении студентов и повышении квалификации ветеринарных специалистов.