Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Распространение и эффективность специфической профилактики стрептококкозов (диплококковой септицемии) телят в Приамурье

О новорожденном необходимо заботиться не с момента рождения,а с момента зарождения

А.П.Студенцов

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ РОССИЙСКОЙ

ФЕДЕРАЦИИ

Дальневосточный государственный аграрный университет

УДК 619:616.157:636.2-053.31(571.61) На правах рукописи

РАСПРОСТРАНЕНИЕ И ЭФФЕКТИВНОСТЬ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ СТРЕПТ0К0КК030В (ДИПЛОКОККОВОЙ СЕПТИЦЕМИИ) ТЕЛЯТ В ПРИАМУРЬЕ

Специальность: 16.00.03 -ветеринарная микробиология, вирусология,эпизоотология»микология и иммунология (по ветеринарным наукам)

Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Насибов Владимир Пирголамович

Научный руководитель-кандидат ветеринарных наук, профессор.член-корреспондент ААО

Консультант- доцент, заслуженный ветеринарный врач РФ Л.И.КОВАЛЕВ

и АВН

В.В.БУРИК

Благовещенск- 1999

ОГЛАВЛЕНИ Е

с.

ВВЕДЕНИЕ........................................ 3

РАЗДЕЛ I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава I Стрептококковая (диплококковая ) инфекция телят.. 5

Глава 2 Предпосылки к внутриутробной иммунизации......... 15

Глава 3 Эффективность вакцинации стельных коров и плодов с целью профилактики инфекционных болезней

новорожденных ................................... 25

Глава 4 Лечение при дипло - стрептококкозах крупного

рогатотого скота ................................ 33

РАЗДЕЛ II С О Б С Т В Е Н Н Ы Е ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава I Материал и методики исследования................. 36

Глава 2 Распространение стрептококкозов на территории

Приамурья........................................ 44

Глава 3 Источники инфицирования плода и новорожденных

телят стрептококками............................ 60

Глава 4 Характеристика выделенных микроорганизмов........ 67

Глава 5 чувствительность выделенных микроорганизмов к

антибиотикам..................................... 77

Глава 6 Определения оптимальных сроков и разработка

приемов внутриутробной иммунизации животных..... 80

ГЛАВА 7 Эффективность специфической профилактики

стрептококкозов в Приамурье.......................96

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИИ......................106

ВЫВОДЫ..............................................112

РЕКОМЕНДАЦИИ ПРОИЗВОДСТВУ................................114

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ.........................116

ПРИЛОЖЕНИЯ...............................................140

ВВЕДЕНИЕ

В соответствии с приказом Министерства сельского хозяйства и продовольствия России и Россельхозакадемии N 273/42 и распоряжением Правительства Российской Федерации N 1499-р в нашей стране разработаны и внедряются целевые научно-технические программы, в том числе и программа "Ветеринарное благополучие", в которой предусмотрено выявить молекулярно-генетические и клеточные механизмы создания экологически безопасных методов и средств профилактики и борьбы с болезнями животных,разработать систему противоэпизооти-ческих мероприятий в новых условиях хозяйствования,обеспечивающую высокое санитарное качество продуктов и сырья животного происхождения .охраны окружающей среды.

Учитывая,что стрептококковая инфекция занимает 3 место среди инфекционной патологии у людей (И.С.0сташенко,1995), на "стрептококк-убийцу" по данным ВОЗ приходится 50% из всех заболеваний сердца (Е.Kaplan,1990), а также инвалидизации населения (И.Моржа-реттоД995). Широкое распространение болезни,способность стрептококков за счет ферментативной активности проникать в ткани и органы животных, в том числе и гинеталии самок (Г.Ф.Панин, В.Ф.Румянцев, 1936; Е.И.Скрыпник, 1949; Р.А.Цион, 1964; А.А.Учаев, Л.В.Учаева, 1966; W.Winnenwerder, 1966; Е.П.Кремлев, 1977; И.А.Нестеров, 1981), вызывая аборты (Г.Н.Панин, Н.И.Румянцев, 1936; М.Е.Аввакумова, 1938; D.Beltchev, 1967), заболевания половой системы, молочной железы самок с последующим нарушением воспроизводительной способности и развитием патологии у новорожденных телят проявляющейся в виде сепсиса, пневмоний, диарей* артритов с высокой летальностью -дает основание искать пути профилактики данной болезни, в том числе и в период внутриутробного развития плода.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЙ. Изучить распространение стрептококков в хозяйствах Приамурья,разработать теоретическое обоснование и практические приемы внутриутробной иммунизации и определить эффективность специфической профилактики при данной инфекции.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЙ. Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

- изучить распространение стрептококкозов в хозяйствах Приамурья;

- установить удельный вес дипло-стрептококков в бактериальной микрофлоре амниотической жидкости, влияние их на объем, биохимические свойства околоплодных вод, инфицированность и динамику роста плода в период внутриутробного развития;

- изучить морфологические и биохимические свойства выделенных культур;

- выяснить эффективность различных приемов специфической профилактики стрептококкозов;

- определить чувствительность выделенных культур к антибиотикам.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. В процессе работы было изучено распространение дипло-стрептококкозов на территории Приамурья. Показана инфицированность околоплодных вод и плодов стрептококками, колибак-териями, сальмонеллами и другими бактериями, инвазированность ги-неталий сетариями. Изучены физико-химические свойства околоплодных вод и наличие в них мочевины, глюкозы, сиаловых кислот, холестерина, натрия, калия, хлора. Сконструированы приборы и предложена методика для внутриутробной иммунизации. Показана чувствительность стрептококков к антибиотикам и напряженность гуморальной защиты при внутримышечной, внутрицистернальной и внутриутробной иммунизации коров.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ И ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ В ПРАКТИКУ Результаты комплексного эпизоотологического, микробиологического и иммунологического исследования показали: механизм влияния стрептококков на формирование иммунитета против вышеуказанных заболеваний, преимущество внутрицистернальной иммунизации по сравнению с другими и возможность проведения профилактики стрептококкозов в период внутриутробного развития плода. Предложено в хозяйствах Приамурья для профилактики дипло-стрептококкозов использовать внутрицистернальную иммунизацию коров в период сухостоя. Дается информация видового состава стрептококков и чувствительность их к антибиотикам. Предложенные приемы амнио-аллантоцентеза позволяют вести контроль за инфицированностью плода в период внутриутробного развития, а при необходимости вводить в околоплодные воды, с терапевтической целью, лекарственные вещества и с профилактической-биопрепараты.

РАЗДЕЛ I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1

СТРЕПТОКОККОВАЯ (ДИПЛОКОККОВАЯ) ИНФЕКЦИЯ ТЕЛЯТ

Стрептококковая (диплококковая) инфекция телят вызывается полиморфными дипло-стрептококками, характеризуется септическими процессами, пневмониями, артритами, отставанием в росте и развитии молодняка и высокой смертностью.

Стрептококки (Streptococcus pneumoniae) вызывающие заболевания сельскохозяйственных животных,имеют следующие синонимы Diplo-coccus capsulatus (капсульный), Diplococcus lanceolatus (ланцетовидный), Diplococcus pneumoniae (пневмонийный), Diplococcus sep-ticus (септический), диплококк (пневмококк) Френкеля-Вексельбау-ма. Следует отметить, что название диплококков "ланцетовидный", "капсульный" не вполне точные, так как ланцетовидная форма или капсулообразование не являются строго постоянными признаками, а зависят от той среды, в которой микроб находится. Даже в организме животного (не говоря уже об искусственных питательных средах) этот микроб в зависимости от вызываемого им патологического процесса может встречаться в различных формах или в виде диплостреп-тококков. Некоторые исследователи называют (D.pneumoniae), возбудителем диплококковой пневмонии телят. Однако этот микроб далеко не всегда вызывает пневмонию. Он обуславливает также энтериты, артриты, но чаще всего проявляет патологию в виде сепсиса.

Исходя из того, что этот микроорганизм в своей вирулентной стадии имеет форму диплококка, а патологический процесс, вызываемый им в организме животных, характеризуется как сепсис, необходимо признать,что из всех синонимов название Diplococcum septicum (септический диплококк) наиболее правильное (К.П.Чепуров, 1963), а 19 лет спустя этот же автор констатирует, что возбудителем диплококковой инфекции телят является Streptococcus pneumoniae.

Streptococcus pneumonia был впервые описан Л.Пастером (1871), о диплококкозах телят первые сообщения сделали Маццанти и Виченци (1895) , а четыре года спустя голландец Пельс (Poels) детально описал морфологические показатели возбудителя диплококкоза телят. Интерес к стрептококкозам (вкладывая в это понятия и дип-лококкозы) неослабно проявлялся в течение всего пройденного периода двацатого столетия. А толчком к этому послужили сообщения о

<ijl

наличии и широком распространении данной инфекции в хозяйствах Германии (V.Karsten, 1926), Дании (Christinansen, 1913), Швеции (Lehman, 1934), Англии (W.Stitz, 1939; L.Trautwein, 1956), Японии (T.Tanahashi et al., 1986).

На территории России и СНГ стрептококкозы регистрируются в некоторых хозяйствах в виде энзоотий. По данным И. И. Архангельского (1951) в общем балансе отхода телят от инфекционных заболеваний на долю диплококкозов приходится от 5 до 20 %. Причем имелись случаи когда в хозяйстве заболевание встречалось у 5?,3 % восприимчивого поголовья телят (В.И.Упоров, К.Э.Дзиев, 1937), сочетание течения стрептококкозов с респираторными заболеваниями у телят отмечает Вуй Тхань Тху (1989).

0 наличии данной инфекции сообщают в Смоленской области (М.М. Козлов, 1938) в Западной и Центральной части России (И.В. Васильченко, 1936; З.В. Домрачева, 1940; И.Е. Вагин, 1946, 1948; С.С. Гетельсон, 1958; P.A. Цион, 1963), Ярославской области (Г.Н. Смолякова, 1938), Омской области (А.Д. Боярская, 1934), Свердловской области (Х.Б. Фрумкина, 1948, 1951), на Урале (В.К. Бауман, 1941), Московской области (З.В. Домрачева, 1940; Я.Р. Коваленко, М.А. Сидоров, Э.А.Шегидович, И.А. Яблонская, 1974; Г.Н. Гасанов, 1984), Ленинградской области (P.A. Цион, 1958, 1963), на Дальнем Востоке (A.M. Ахутин, 1940; К.П. Чепуров, 1943, 1949, 1954; A.B. Черкасова, 1943, 1953; К.П.Чепуров, В.А. Черкасова, 1963; Ю.М. Серебряков, Л.Н.Гордиенко, A.B. Гаврилина, 1995), Приморском крае (Е.А. Кирьянов, 1971).

Дипло-стрептококковая инфекция зарегистрирована на территории СНГ: в Казахстане (Я.Г. Плант, К.И. Туркевич, Г.Б. Зевис, 1937; И.И. Архангельский, 1940, 1945, 1950, 1956, 1976; Е.И. Скрыпник, 1949; A.A. Учаев, I960, 1963, 1965, 1966), в Молдавии (P.C. Москалюк, 1971, 1974), на Украине (В.И. Упоров, К.Я. Дзиев, 1937; М.М. Кальченко, 1963, 1964; В.В. Май, 1968, 1970, 1972; М.Н. Сарванчук и др., 1988), Грузии (А.И. Георгадзе, 1948), на Северном Кавказе (Е.И. Кузьминский, 1934).

Видовой состав стрептококков выделенных в различных странах мира отражен в таблице 1.

Таблица 1

Сводные данные по распространению и видовому составу возбудителей стрептококкозов

1 i Груп- i |Вид стрепто- Место вы- У кого обна- i i 1 Авторы |

|па i 1 кокка деления ружен 1 1 i i

! 1 1 i 2 3 4 1 1 1 5 | i i

1 А 1 Str.piogenes Россия человек 1 1 |С.А.Витко,Н.И.Брико |

I(1994),N.Brico (1994)|

1 в iStr.agalac- Югославия человек jP.Rainard (1988) |

j tiae США корова II.L.Watts (1988) (

Югославия корова |V.Milókovis (1987) |

Россия корова |Н.Г.Гасанов (1984) j

Чехосло- корова IV.Kubin (1984) |

вакия

Австралия корова iG.Schlerka (1990) 1

1 с iStr.egwisi- Чехосло- корова IF.Matura (1985) |

Imilis вакия 1 1

IStr.zooepi- Нидерлан- свинья iV.Vect (1987) |

1 demicum ды 1 1

Россия телята |Е.И.Цветков (1987) |

Россия поросята 1Е.И.Цветков (1987) |

Россия ягнята 1Е.И.Цветков (1987) |

istr.egui США лошадь |C.R.Swieng (1984) |

iStr.egui Россия лошадь |К.П.Чепуров (1984) |

1 D iStr.faeca- 1 1

1 Iis США лошадь |I.L.Watts (1988) |

Польша телята |T.Kwiatkowski (1987) |

США куры IM.N.Katanbaf (1987) |

США утята |T.S.Sandhu (1988) |

iStr.egwinus США корова |I.L.Watts (1988) |

i iStr.faecium i Дания норка jM.Jorgensen (1990) | i i

Продолжение табл.1

1 | 2 -0-

H

Str.suis

Str. sanglés

Str.pneumo-nia

Str.uberis Str.inlae Str.subacidu

Str.bovis Str.dysgala-ctia

Str.canis Str.porcinus Str.viridans

3

4

J/r

США США

Нидерланды

Англия

Англия

Канада

Алжир

ФРГ

Англия Россия США

Англия Япония Нидерланды США США

США США США

корова свинья свинья

свинья

свинья

свинья

свинья

свинья

свинья

телята

корова

корова

рыба

рыба

корова корова

корова корова корова

5

D.A.Todhunter (1985)

D.I.Larson (1984) V.Vect (1987)

Mc.Dawid (1989) M.E.Holt (1990) S.E.Santord (1987) F.Tonis (1988) I.Kofer (1990)

H.A.Dewar (1987) К.П.Чепуров (1984) A.I.Marchai1 (1987) W.Hill (1988)

E.Kawanara (1987) D.A.Todhunter (1985)

V.Vect (1987)

I.L. Watts (1988)

I.L.Watts (1988) I.L.Watts (1988) I.L.Watts (1988)

Анализируя данные таблицы следует отметить, что зарубежные исследователи описывают 17 видов стрептококков паразитирующих у сельскохозяйственных животных, птиц, рыб и норок. При этом основной акцент исследований делается на половозрелых животных не уделяя особого внимания стрептококкозам телят, ягнят, поросят. Отечественные исследователи в основном заняты проблемой сохранения при данной инфекции молодняка, уделяя больше внимания диплококко-зам, многие из них пытаются профилактировать данные болезни комп-

лексно, занимаясь стрептококкозными патологиями гинеталий, молочной железы самок и организма новорожденных.

КРАТКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СТРЕПТОКОККОВ

Стрептококки относятся к всесущим микроорганизмам. Название стрептококк произошло от слова streptos- ожерелье, цепь. Вначале стрептококков классифицировали по длине цепочки и их делили на три группы: Streptococcus longus, Streptococcus brevis, Streptococcus conglomeratus. К первой группе относили стрептококки выделенных из очагов гнойных ран при послеродовых заболеваниях и маститах, ко второй - стрептококки кишечника и афтозного стоматита; к третьей- стрептококки выделенные при ангине и образующие короткие цепочки, переплетающиеся в узлы.

Streptococcus pneumonia в мазках из трупного материала ,а также из старых культур располагаются попарно или короткими цепочками в виде дипло-стрептококков. Е.И. Блинникова (1989) изучила поверхностные клеточные белки данных бактерий, а Ж.И. Андреева (1973) иммунологические фракции их. В мазках из свежих культур преобладает диплококковая форма. Размеры клеток 0,8- 1,25 мкм. По Граму окрашиваются хорошо, капсулообразование наблюдается преимущественно в организме животных и в первых генерациях после высева из патологического материала. На МПА молодые колонии стрептококка прозрачные, мелкие, гладкие, круглые, с ровными краями. В МПБ микроб образует равномерное помутнение с небольшим осадком. В полужидком агаре растет в виде мелких хлопьев. В желатине рост нитевидный.

Для культивирования стрептококков испытано много сред, так в опытах Н.Д.Голубева (1938) диплококки лучше росли при добавлении виноградного сахара в молоко, И.Е.Вачик (1948) выращивал их в МПБ с добавлением 1% виноградного сока или 2% меда. М.М.Кальченко (1963) наибольшее накопление бактериальной массы достигал при выращивании стрептококков в бульоне Хоттингера с добавлением 0,2% глюкозы и 0,6% мальтозы. Рост микроорганизмов происходит в виде образования равномерного помутнения с последующим просветлением среды.

Стрептококки хорошо растут при добавлении к питательным средам (0,1 - 1%) глюкозы, (5 - 10%) крови, (10 -20%) сыворотки кро-

ви или асцина, при pH сред 7,4 - 7,6 (А.С.Овод, 1975).

Для дифференциации их видовой принадлежности предлагаются тесты: восстановления метиленовой сини в молоке, способности расти на кровяном агаре с желчью, ферментировать 1% раствор сорбита (Агеф - Хамди Аббас Хамди, 1973). Многие виды стрептококков способны вызывать полный гемолиз эритроцитов или позеленение среды (Л.Н.Кондратюк, 1969), образовывать токсины (О.Н.Грызлова, 1959).

H.Schotmuller (1903) по воздействию на эритроциты стрептококков разделил на следующие группы: Streptococcus haemoliticum (вырабатывающий растворимый гемолизин), Streptococcus viridans (дающий позеленение кровяного агара), Streptococcus mucosus (образующий на плотных средах слизистые колонии), Streptococcus ап-haemoliticum (не обладающий гемолитическими свойствами). Но по данным Н.И. Белоусовой-Троицкой (1952) под воздействием лейкоцитов может изменяться гемолитическая активность их, которая зависит от источника выделения бактерий ( А.Н.Кондратюк, 1989).

Однако не все микробиологи признают данную классификацию. M.Caudel (1929) делит все стрептококки на 2 группы: А и В, подразделяя их на лабильные и стабильные штаммы. Численность типов стрептококков с каждым годом растет. К 1957 году их значилось уже 131 (S.Bergey, 1957). В последующем их стало еще больше и L.Devese (1980) распределил их на 6 групп А,В,С и G, Д -энтерококки и Д не энтерококки, в"Определителе Берги" их числится 10 групп (A,B,C,D,E,F,G,H,K,N). По группоспецифическому полисахариду стрептококки разделены на 17 серологических групп (Е.И.Цветкова, 1987). Стрептококки ферментируют с образованием кислот без газа левулезу, маннозу, глюкозу, галактозу, лактозу, мальтозу, сахарозу, ксилозу, инулин и маннит (К.П.Чепуров, 1984). Им изучены морфологические и вирулентные свойства возбудителей.

На сегодняшний день изданы методические указания, предложены методики идентификации стрептококков, дается характеристика антигенной структуры их, показана общность их антигенов с белками животных (К.П.Чепуров, М.М.Кальченко, 1963-, Т.И.Пидегимас, А.В.Бут-кус, 1970; А.А.Триполиттов, 1971;Ф.Фалиев,1981; А.И.Панин, В.И.Гущин,1984; А.Н.Панин, 1986; Ю.А.Смиян, 1987; Н.А.Семенова, 1988; М.С.Шевчук, 1990; Е.В.Кочеткова, 1995).

Стрептококки маю устойчивы во внешней среде. В почве, навозе, в помещениях они погибают в течение месяца, особенно губительно действуют на них солнечные лучи и высушивание. Нагревание при 55 градусов Цельсия у