Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Сравнительная оценка эффективности вакционных и диагностических препаратов при туберкулезе крупного рогатого скота

Кинистерство сельского хозяйства Российской 'Федерация Главное Вправление внсших дчебных заведений Санкт - Петербдргский ветеринарный кнститдт

На правах рдкописн Коваленко Анатолий Михайлович

ЗДК 619:616-002.5-084:636.2 сравнительная оценка эффективности

вакщпшх в диагностических препаратов

BPS тзберкзяезе крзшого рогатого скота.

16.00.03 - ветеринарная микробиология.

зирдсология, . эпизоотология, иикология и имиднология.

АВТОРЕФЕРАТ хиссертации иа соискание ученой степени кандидата ветеринарннх надк..

Санкт - Петербург - 1994 г.

Работа выполнена в отделе по изучении туберкулеза сельскохозяйственных животных института экспериментальной и клинической ветеринарной медицины Украинской академии аграрннх наук, кафедре эпизоотологии Санкт-Петербургского ветеринарного.института. Центре физико-химических иссле-. доЕаний и высокочастотных измерений НИИ микропрепаратов г.Киев,

Научный руководитель-доктор ветеринарных наук, профессор академик РАСХН В.П. Эрбан.

Официальные

оппоненты; доктор ветеринарных наук, профессор

й.й. Евглевский доктор ветеринарных наук Й.Н. Борисенкова

^Ведущее дчреидение - Казанский ветеринарный институт.

Зашита, состоится ■ щ 1994 года

в 14 часов ' на . заседание специализированного совета Д.120.20.02 Санкт-Петербургского ветеринарного института по адресу: 196084, Санкт-Петербург, Московский пр.,112.

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке Санкт-Петербургского ветеринарного' института. Реферат разослан 1994 гоца.

Нченый секретарь.специализированного

совета, кандидат ветеринарных наук Нзвиова О.В.

- 3 -

1 обш характеристика работы

Актуальность теки. Б разработку и совершенствование мер -с борьбе с туберкулезом крупного рогатого скотг весомый вклад е:!°сли многие отечественные и зарубе«нне исследователи ( Вишневский Я.П.. 1928,1930,1937;Гизатулин Х.Г.. Сашин И.А.. 1?79.. Говоров A.M. 1954: Кассич Ю.Я., 1982:' Кокуричев П.И., 1940: Кузин А.И. .1982.1987: Овдиенко Н.П.. 1988; Сафин м.Й..1981,1985.1337; Нрбан Е.П... Хайкин Б.Я., 1988,1989; Ниробокова U.M.,1373; Цуревский В.Е. ,1980; йсковец U.K.. 1935,1937,1953: Вегвггеп S.A.. 1977,1981 и др.).

Меаду тем. туберкулез, как зооантропонозное заболевание, столетиями остается социальной и экономической проблемой. В вире нет страна, где бн эта инфекция ке регистрировалась у человека или аивотннх. Такие крупные страны СНГ, как Россия, Казахстан,Украина, Белорусъ десятилетиями является неблагополучными по тубер-»злэгу крупного рогатого скота (.Кассич И.Я. ,.1930:Кер1танова Б.Ф. 1991-; Ткачвнко Й.Й..19Э6: Урбан В.П., Широбокова М. И., Данко В.Е. 1987 и др.).

Существуяцая эпизоотическая ситуация во- кногом обусловлена несовершенством протизозпизоотических мероприятий, недостаточной изученность® биологии возбудителя инфекции и зпизоотологического значения разных его форм, иммунитета и эпизоотологии болезни.

Одной из проблей в научной и практической ветеринарной "фтизиатрии является разработка новых л совершенствование старых катодов диагностики, а такяе препаратов для слгиисмческой профилактики нфекции.

Л" »пенив Хайкнна Б.З..Хазипвва Н.Э.. Сафин» М.ft.(1385); Евг-левского А.й. (1990, 1992) вакцинопрофилактика при туберкулезе

крупного рогатого скота является эффективны* средством в профилактике болезни, а ее разработка находится лияь в зачаточно* состоянии.

Многие исследователи, однако, отрицают целесообаразность ее применения ( Кассич D.S.,1990; 1аров А.Н., 1372; {уревский В.Е.. 1980).Тем не менее, сложная эпизоотическая обстановка по туберкулезу. изменяющиеся хозяйственно-экономические и экологические условия содержания животных требупт коррекции подходов к решении системы противоэпизоотических мероприятии. Вот почему изучение этого вопроса является весьма актуальным и легло в основу нааих исследований.

Цель и задачи исследований. В систему профилактических и оздоровительных мероприятий необходимо внести коррективы с уче-тоа местных условий, а определив возможность и целесообразность применения существующих, " разработать новые специфические средства защиты крупного рогатого скота от заражения туберкулезом. Для этого необходимо было решить -следующие задачи:

- изучить эпизоотическую .ситуации по туберкулезу крупного рогатого скота.в Зкраине и эффективность проводимых противотуберкулезных мероприятий;

- провести оценку показаний АДП при 'применении различных аллергенов у морских свинок и крупного рогатого скота по туберкулезу в эксперименте . и производственных условиях;

- изучить эффективность системы-мероприятий с использованием вакцинных npenapaTOB:BCG. туберкулезного анатоксина; .

- сконструировать новый вакцинный препарат и изучить в экспериментальных условиях его свойства;

- внести предложения в систему противоэпизоотических меропри-

ятий с использованием средств специфической профилактики, йадчиея новизна. Сконструирован новый вакцинный- препарат против туберкулеза крупного рогатого скота, -изучены его свойства и икмуногеннссть в сравнительном аспекте с ВСБ и туберкулезным анатоксинов. Препарат обеспечивает более выравеннный иммунологический эффект..

Доказана более выраженная специфичность безальбумозного туберкулина по сравнении с ППД туберкулином для выявления зараженных туберкулззон ечвотких.

Впервые для сравнительной оценки изучаемых и разрабатываемых ?авцшшх и диагностических препаратов использована физико-химические метода: инфракрасная ((..;) и ультрафиолетовая (УФ) спектроскопия, ревтгеяоспектралъннй микроанализ и растровая электронная ^гагзосмта.

Впервчо в ветеринарной науке был изучен химический состав ::СЕЛ-:дованнил вакцин н аллергенов современники физическими метода!::! 5Щ и спектроскопии, рентгсноспектрального микроанализа и растровой электронной ииироскопии. Били обнарунены различия их сизлнп-яз'.гйчески:: свойств и характера поверхностей вн-

Врсэтячгсяеа честосП) работа. Результаты исследований могут бить яслвльэсеага для дальнейвей разработки новой скгтеяы противотубсряудйгшм ".ероприятий -с использованием предло?енних, вновь созданная препаратов - вакцины ПКП-1 'и безальбунозног? туберкулина. "

Глробпц'.п рпб07в. Осногяне материалы диссертационной работ« долозеин и обсузденз на конференции аолодых ученых ветеринашюя кедицины Ь'кр-ины С Хорьков, 1992г.), Первом ксздународном симпозиуме лангиалсгов ( йосква, 1332г.), Ученом Совете института экс-

. - В -

периментальной и клинической ветеринарной медицины (1991-92-93), заседании кафедры эпизоотологии Санкт-Петербургского ветеринарного ннститутаС 1993 ).

' Публикации. По результатам диссертационной работы опубликовано три печатных работы и 3 сданы в печать.

Диссертационная работа изложена на 170 страницах маиинописно-го.текста и содержит 31 рисунок, 14 таблиц. Состоит из введения, обзора литературы, методики и результатов исследований, обсуждения, выводов, предложений и списка литературы. Использовано 312 источников литературы, из них 272 отечественных и 40 зарубежных. Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:

I

- результаты изучения особенностей эпизоотического процесса, при проведении оздоровительных мероприятий с использованием вакцины ВСБ;

- материалы по оценке иммунитета у морских . свинок и телят, иммунизированных вакциной ВС£, туберкулезным анатоксином и новым вакцинным препаратом: ■ •

- оценка состояния гуморального иммунитета, ПЧЗТ у морских свинок и телят при поствакцинальном.иммунитете и экспериментальном туберкулезе. . *

.. 2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАШ.

2.1. Иатериалн и методы исследований. , Работа выполнена в 1991-1993 годы. Исследования проводили

лаборатории по изучении туберкулеза- сельскохозяйственных нивотнв

*

лаборатории патоморфологии Института экспериментальной и клиниче кой ветеринарной медицины и на кафедре эпизоотологии Санкт-Петв! бургского ветеринарного института.

Особенности эпизоотического процесса при проведении оздор| вительних мероприятий с использованием вакцины ВСЕ изучали в Н;

■¿опзльскоа и Еас:и:ьксвском районах Днепропетровской области.

Ог.зкко-хккнчгсг.ив свойства пакцгаганх и диагностических препаратов ассладоваяя з Центре хтаяко-физических исследований и. тглсокочастотнк; ззхерсимЯ !ШИ ^икропрег.аратов ,(г. Киев).

Для внполнеииа поставленных задач били использованы ебце-ппшзтпе зшгзоотологкчеиий, статистический, клинический, иккуно-логпчойкяй, патс^0гоапатс»гг«!с::!!а, а тгкзе зсжробкологическне н

гистологические иетода- зссяздовггвй.

• . / При ецггагз 4йзш:о-я«ккческих свойств кзучзекця вакцин и ал- .

.•¡ергег.'оэ зспользевала ггтадз спектроскопия, рентгеноспвхтральиого

¿¡хкросяаянзз я растрсвся электронной кикраскопи:!.

Для аззчеЕна свазогтггаеско* сятдация к зффективности протизо-

т;з5йрй^ггзз<;;х *^е|;сгтркаг;:й ксясльзоггпя да:шыс ветсринзрной статис-

Глеввс?аира Г.СХП, ветотуслоз областей я отделышх хозяйств

2х?з№.я за 1281 - 1032 г?as. Пад«т»-прокзводствсшшй спит проводх-

в ноИлиГзпо.^л^г.си ка тдберкдоезд гозэйствс. ,

Дла пррзедеэтя срапкитеяьиой оценка прохектив.чых свойств вак-

ВСЯ, тубгркилезпаго апатгкс::на м .предложенного паки протгао-

таберпакезаогв но^ялсксгого орепгрзта ПКП-1, бело использовано 49

зорских сышок 'I ¿3 ,тс;:"т. Зорских своди л телят отбирали длз

огштэз по зряп-дов аналогов.

Стлтлстпчшгпз -зйрзботкд получепшпе резяльтатоо лровог.::."" на

пзреезальнай ЗШ1 7 ни IE" - PC/AT с использование:! аакзтг г: г-

рага "Stadia". " •

гл. ощш •гшвоояпЕшп сатзащи по тяберкжзя крупного рогатого ската в украипе л реззльтати применения вйкм-

на 3cs В СИСТЕМЕ протйвотзбершезш МЕРОПРИЯТИЯ, исзчюксвсз гпз.га ¡»тпзоотстеской ситуации по туберкулезу • крупного роггтего скота 'в республике в разрезе всех . областей за

-8т

1981-1992 годи позволил ввявитъ три особенности распространения инфекции: пространственно - временнув изменчивость эпизоотической стуации, тенденции к снижении ежегодного выявления числа неблагополучных пунктов, относительную стабилизация частоты выявления животных с патологоанатомическими изменениями, характерными для туберкулеза среди убойных животных и эпизоотического процесса. Если в 1S86 году было выявлено 197 новых неблагополучных пунктов, то в 1987 г. их было 115, в 1988г.- 144, в 1989г.- 113, в 1990г. -119, в 1991г.- 97 и в 1992г.- 90. Первостепенное воздействие на распространение возбудителя туберкулеза оказывает животные с выраженным туберкулезным процессом - активные источники возбудителя инфекции. Таких животных среди реагируищих на туберкулин ежегодно, в последние 7 лет, выявляли от 9,6 до 12,9Z. Эти сведения, а так--же данные о выявлении в 1992 году больжего числа неблагополучных пунктов, чем оздоровленных^свидетельствувт о сложной эпизоотической ситуации по туберкулезу в Украине.

Наиболее высокий коэфицие-нт напряженности эпизоотической ситуации в 1981 V 1985 гг. был в Днепропетровской1, Николаевской, Одесской и Херсонской областях. В 1986 - 1992 гг. К этой категории отнесены Киевская и Луганская области.

Эпизоотологические исследования показали, что традиционные методы оздоровления ферм крупного рогатого скота от туберкулезной инфекции, основанные на выявлении и удалении животных, реагирув-Чих по туберкулиновой"пробе часто не даит результатов, а эпизоотические очаги становятся стационарными.' Это требовало введения в суэествувцуи систему борьбы с туберкулезом новых организационных и специальных мер, в том числе использования вакцинных препаратов.

Изучение опыта по борьбе с туберкулезом путем использования зярокоиасвтабяой иммунизации животных вакциной BCG при одновреме-

гаюи проведении всего коиплекса огаяязационпо-хозайствешшх и ве-терлирпо - сапкгариих пер во всех хозяйствах Никопольского района Днепропетровской области показала, что за пять лет в 31 раз заевьгилось "гасло резгйрувг.сго ва туберкулин крупного рогатого скота, а частота знзвдениэ тубсркугезттх изменений при ветсанякс-игртяае дбойпых еяэотекх с 51В з 1360 г. до прекращения - зжтепля тгттсрнх зузотпи.

2 Хзяютакскоз района С контроль 5, где оздоровительные ме-рояриатгя прззодзчщ кетодоа аллергических 'исследовгиий а ддале-газа рггггрпзгд* сеобгй. за акаяязирдеанй период увеличилась частота зз.езггяпз -зевотнях. давних реакциз на туберкулин с одпо-зречеткз ззгд'чегс'.га количеств«» ЕУ.ВОТННХ С активна»» формами тпйгрйзгггл.

Тага cif»P3, S-ssti залзчпя нгиукитгта у аквотнзх, вакц*ши-t.sn&t.'sx £52 зз эгидодет сc?::ich;:i.

2.3. п'гхптгезшя сценка йжкногеннзх свойств ЗЙКЦК1Ш все 51

г.гоглатзвк'-а'глзйого штошаш на морских свинках и

ТгЛ2Ш.

пй^гаогеЕйях евоЗств Ьакциня ВСС и првтнвотдберкд-гк-piro гязтряеггй, грздаатспздго Я.А.'Езглев extra в хачестпс вег-

Zizo лс£-е.7/:!;в тягл п гкспсрскситаяьяих зелознях пэ ксрскях гызеох я mciax.-

Бстааогй'лго, г:тп »'-л лреи?лта е&здчят ntaiporeraraat свойстве. 5с.";5рвд:п: я г^гкиагг tossmmoro действи» на гкзотиих.

Jf!os.is пездешм 5CG з ергаякзуе йоршга- езяпок (Пер-

еса опытом rjgnna) suesa зсста отьоткая азаушш реакция в органах еягтекз '.нкваттета.

Гсгггтгвга s cssescane характеризовалась зироет развитии Тшяядоэя! с spsranr«! реавтяэтзя центра-::. Япогдг взсь центр

к

был заполнен бластаыи. Отчетливо выражена структура синусов.В тимусе корковое вещество представлено компактно прилегавшими тиио-цитами, а мозговое вещество занимало небольвув площадь к было плотно заполнено клеткаии. В лимфоузлах иммунная активация была слабая, фолликулы содержали скопления бяастиых клеток.

В легких наблпдалось больвое количество скоплений пиронино-фильных клеток, местами несколько крупных и плотных разростов ко-нонуклеарных клеток с плотными ядрами и пиронинофильной цитоплазмой, уыеньвение в размерах альвеол и небольшие утолщения межаль-веоляршгх перегородок.

У животных, иммунизированных противотуберкулезным анатоксином (вторая опытная группа), изменения в селезенке характеризовались хорошо развитыми сливавшимися фолликулами с умеренными реактивными центрами. Наблвдались мелкие сосуды с периваскулярными муфтами из пиронинофилыгах клеток. В фолликулярной зоне обнаруживали бластнне клетки с больвик количеством митозов и колодце клетки лимфоидного типа. ' .

В тимусе наблвдали активное развитие коркового вещества, вы-тесняадего мозгозое, с.охраниввееся в виде островков, т.е. имела место выраженная а.ктивация тимуса.

В печени балочная структура гепатоцитоз сглажена,, они набух-Еие, округлые. МежбалочкФ пространства не определялись. -

Легкие имели утолщенные . иеЕальвеолярнке перегородки с частичным сдавливанием альвеол. Еольесе количество мелккх сосудов и бронхиол было окружено 3-5 рядами бластов. Наблвдалн значительные перибронхиальн'ые отеки и скопления паронинофильных плазматических клеток.

В фолликулах лимфоузлов обнаруживали крупные реактивные центры, заполненные больвим количеством бластов. Отмечалось ок-

- и -

РВГЯСЗИ8 и отделепке клеток синусов. растаргпие их просветов. 06-пзрдхеэт аякотпзе тйзи, заполнении цятсллазиатическийи клотка-

О ::п:!трпльг:и {ненкиоилзкрьйаншпс) карских евниок сдцествсн-пзх закмогэтеегпгс г.^спгю'Л со зпутреншх органах по обнажена.

3 сп*пе Г2тз звуедслзява пагачяя я пзщшаеииости язкунитета еитга спустя дзэ иасяпз после повторной вакцинации

гзозатх яе;зйто вззссъ на (дагеяогячеенса растворе возбудителя гдЗгрязлгзз й:*:ьсга згва 1лгз"а Уа11аоЭ.- а дезе 0,00001 аг/ал. 3 гэтззга йлитга проас^яая -ка^иэтееппв, гематологические и

'X .ч'п-взелз яграттолка з "мпотз1'.:х первой я контрольной

.-сзвс.-.зеа :*ог?оз яотзехпел. 3 зтот период у одной .саккз #

кс?23.1 ^ ■/¿•¿х згд^лясь исггсзяяссоссбное потоястсо,

!з 'йрета* . зторзй группа пгяггеескао проявления тдок-

отсит'с?£ог2»! ?,э !3-гп.д2а язеле згргзеняа. Позге волосяной ^«Фзя .ткзг.тез тдекяэл я сггпЗвияся язагизя. Рртиод, полученная <31. .'доотузя старей сстгпагсп зязпе(з?оссбпзк.

л глглз ззэгзлш, ч сргдг.8з па одну гзгезд, яоте-

э -зсс» ^русЗ, птчр?л л .трятьрз грдиа состазяяп 'Ч,

•1» 33 з з 33- :л] гсйгт??здар 3?. 30, ?3,-

3 30-гг] г1-1 гтаггз г:."?лсп ч;рс"жг евкно::

Г7«;к.гз, з £3-гз явз-- гажгтжзрезззйа* БС£. к 00-кз -•тазклг.'рпгггга т^ггготгеггя! . У' хигшпшх

гигпя.Г'згч ¡шяэт с?ся?;:ъ '¿нгтаеузг.тч нппс-гп Ъх^чп. К кг.!:гз сост^чз.-:^ з пор-оа грвпко - 502.

-12-

Патологоиорфалогическое исследования паввих ■ умерщвленных морских свинок, показали, что у животных контрольное группы видимые визуально патологоанатомжческие поражения внутренних органов туберкулезного характера обнаружены у 80г. из них у 50г - тяжелой степени. 3 свинок опытных групп изменения обнаружены в 602 случаев, причем только у одной свинки из каждой группы имели место сильно выраженные туберкулезные изменения.

Бактериологическими исследованиями возбудитель туберкулеза в бактериальной и I.-формах выделен от 9-ти животных контрольной группы, и от б-ти первой и второй групп. При посеве на полужидкую полисинтетическую питательнуо среду для выделения Ь-форм. нами обнаружен характерный нежный облаковидный рост в виде мелких взвезенных колоний, напоминающих маинув крупу, чаще в верхних слоях питательной среды. При микроскопии этих культур наряду с дефектными по клеточной стенке формами .разных размеров, встречались бактериальные кислотоустойчивые и некислотоустойчивве форма.

В нативных препаратах -обнаруживали 1-колокии гетерогенной зернистости со специфическими телами различной величины и оптической плотности, а также нароввдн&е зернистые тела разных размеров.

При гистологических исследованиях патслигческого материала органов кивотных установлено, что у морских свинок контрольной группы имело место развитие туберкулезных гранулем и отсутствие иммунологических реакций в селезенке. 9 животных первой и второй групп интенсивность туберкулезных поражений по сравнении с контролем была в 2 раза меньве, а в селезенка имела место четко выраженная иммунологическая реакция.

гриппах

Для изучения превентивных свойств вакцин на трех "интактнах, не реагируицих на туберкулин, телятах был поставлен опыт. Телят

важды вакцинировали: первой группы- вакциной BCG, второй-прота-отуберкулезпым анатоксином. Через 15 дней после-вакцкнацам те-ят подопытных и контрольной групп помещали ка неблагополучнуи ерму. Телэта находились в контакте с инфицированными жмвотнвми i протахекии 10 месяцев. Установлено, что g двух телят конт-зльной группы имела место реакция на туберкулин, у одного из них зи послеубойнои осмотре обнаружены патологоанатоиические измене-яя и выделена культура возбудителя туберкулеза, у подопытных я-зтных заражение туберкулезом ие установлено.

Исследования, по установление реакций организма на введенные 1кцинн показали, что у иммунизированных животных имело иесто по-«ение уровня общего белка в сыворотке крови с 41 по 155 день гата при максимальном показателе на 54 день исследований' в груд-г животных,,вакцинированных 8С6 до 74±5 г/л, противотуберкулезным «токсином до 79±4 г/л, a g неимидниых телят этбт показатель и равея 60±1 г/л.

Организм опытных животных неоднозначно реагировал на испн-;емые вакцинные препараты выработкой иммуноглобулинов. В сиворо-се крови телят первой группы их'ело место достоверное повышение с 54 по 155 день после иммунизации (р=0,001 - 0.004), второй >уппн с 41 по 155 день Ср=0,05 - 0,001. Показатель увеличения (нцентрацин анатител ГвС па закцину ВСБ достигал . статистически гачямых величин ливь к 41 дна Ср='0,04), а на противотуберкулез-[й анатоксин- с 41 по 155 день (р=0,05 на 41, 0,006 на 54, 0,001 95, 0,02 на 155 день). Доказатзльством иммунного ответа па веерные туберкулезные антигены служат даииЕе повнзенил в снворотке юви циркулирув^их иммунных конплевсоз апткген-антитело- в 2,7 и .4 раза.

Результаты, полученные при выполнена экспериментальных кокп-

ватны исследований «а корских свинках и телятах, позволит сделать заакаченне, что обе испытанные вакцина стигдомругт иааушда сйстеку вавотккя н поввпаат их устойчивость к заболевания и ссо-йеазво к', зарагеааа т^беркдлезоа. Нюадшшо реакции у гкаотнах, Еадзмзярованкзя гфотизотуберкцлезнн^ апатоксинон, баля более саратова» что обвсяогав'о их павааешща дстсйчшость к рззвитее ег-тззгего пйОгкцасшгего процесса.

Эяхазэ» оязта сояазахз. чте оба езйцяк« не оЗгспечкваст сто-DpoasaiHSB заизтп от заразгнкл и зебаязитаз.

гл. шетатши тажкекого вакцинного протизотуберку-

шн«г0 йг'епйрйтй.

Лашга «о ведчввхз шягзяогенгкх сгойсто ¡зашпшшх cpsna-ратец ьобЕДЕгл сас к ьогстршоеакз _

Вря atoa Ssxo -асзсдьо8зе«з тра гюоэшям: 5гк?грг&г;лгая ызярша UCfi, азатоасгЕв-ггацааа-виэкзотлЙврдагзпйй апзтьххт з з ггачгст-вг ssxsso'BOASJUTopa - гипгаезяа pacisrasbucro лрсьсаоздеагл. Пра npms&eim предварвт&гыш ассгздогакза задана быта состизлскз в cponapipuat: едва доза воддаш BCS, в^ккезавхьа sxa паэдякацзи EpSBmoro рогатые слота, egjsa азг» еазтаксва-гакгслш а С,? as ев-

В тг.к» созгзез&аи кажьЕиатсй z^p-a ¿идз гггптгж га :;орсг.'.и здяшах, й загьу a su зе-йигд. Йстидалекз, »ло ta^-iS гэсг sat t сро?каот?5ср5П»гсзи:зг &шгсвс&«5 ергазрат ПлН-1) бьа»-рзг.га. сЛявдзз? годфдеа.'зм и твкснчигитм;. Йгз-

о к^кйгеы/;..: спо^гти срод^азггксго i.v«^?"«'; £разгда-'-зсь

hj ^снользйзс^агЛ пул ; ш:атсз с г. г.-

гдаия 3CS s r.?a-macrj68?!{s~s3isa егатоптюа. Пгл этом ncs (дата паралггзмш -на тргх гр^аааз ажо«'аи с • тйС-вр:сдягаига с.ка?икйхива 'я врзааратои Eiffi-i. £ заа035»2>

«. - 15 -

химических и гистоиорфологических исследований установлено, что все показатели иммунного ответа организма на введение предложенного. препарата били значительно лучве выражены. чен на действие предыдущих вакцин. Так, например, концентрациа 1й И в сыворотке крови вакцинированных животных была на высокой уровне самый продолжительный промеауток времени - 114 дней. Дла сравнения: максимум этого показателя у вивотных, иммунизированных анатоксином, отмечался на протяжении 55-ти дней, а вакциной ВСЕ -13-ти дней. Самый стремительный подьем уровня 1в Б в крови телят иммунизированных ПКП-1 наблюдался с 13-го по 41 день опыта. 3 животных других групп максимум этого показателя был ниже, повы- -жеиие происходило более плавно, а уменьвеиие было более интенсивным. Высокая концентрация 1в ? в сыворотке крови телят, вакцинированных ПКП-1 держалась в течении 114 дней, иммунизированных ВС£ - 13-ти, противотуберкулезным анатоксином - 101 день.

Весьма показатеяьиыни оказались данные при определении содержания в сыворотке крови ЦИК: у телат нимунизированних испа-туемым препаратом каксикально высокий уровень образования комплексов антиген-антитело выявлен на 41 день после вакцинации, вакцинированных ВСЕ - на 54, а противотуберкулезный анатоксинов па 38 день. Стабильно высокий уровень этого показателя у животных первых двух групп длился 114, 100 дней.'З телят третьей группа пкк высокой концентрация ккнукных кокпл'ексов скеналса резким паденнсп. •

При экспериментальной зараггнкн иорских свинок, иммунизированных препаратов ПКП - 1, у четырех наблпдалк „очень слабые туберкулезные поражения внутренних органов. От этих свинок был выделен возбудитель туберкулеза как в бактериальной, так и I • ■ -Формах. И остальных свинок никаких вмдйкых патологоанатокичсс-

шп кзкеиегай па обиардаено и возбддитеяъ кг вицсхгн. В кои:

рмышй грдггаа эабояедо тдберкдлезви восееь аз цасатм сорск;

свсив;:, сз ю;з с очень тдзелой форзош кноекцкоинрго процесса

гать. 01 девяти ктоткагх, иезавкспио от стспоп;: порз2е1гиа ввд

органов, баха псщчг:;2 ¡¡зльтура взбдатеяз туберкулеза.

В течегзи ошта все корскяг свкнки вериодичсскя проверила

гляоргнческоЛ твЗврхз^зяовоа просей. Па*аЕ!1Т£21>лкв реахция Са

е&шрсавш иачкяая с 30-го дня восле зарамиия 5 четгрех каре»

еггкзгз. 3 шдаа зшротши. -ккадшакровщагп ВС8 рсагировг © . сгзта» а т$й2}23Вбзая1 анатокскаол -зесть гоеоз.

. ШяузьЕл» ргзге^тата гссяедозгшА дазт зсяовада палатам чтй Ехглхекскгй препарат сказгяса богов

едзв ГШ2ГЛ.

£ впзтах на телятах. гас врс-азсазэ «7естсвЕков аараге: сшотязх при содергапза ск ответе с кгй^генолиЧдшгя! ез тпб &д££зд, бала вохдчееэ сдедизчяе ргзвльтатз.

Зявствео, ишщиздшватзв сшюсвсшп ерездклоя, рехлдай ьз .сводмшз ирггарлта ес г.?в;ахкш£. За зргсз жеадкк та -я ыЪгхяжя ке дстаяогаезл ш блгегв с£$,ш ггЗоисшш зарйпкзил. Однако. • ври тцзсряу.хп^ащи ка 'И-й зглгта „•шитеяьвэ реагировало одно юаотво«, 2 к концу огага-10О2 тс ратсазгьггагоазчйсахк: и гтологичесяте.' ксл-'д-зйанр ^егедешег» 8«сяз дбел зка 257-С деиь сасгга, иг ьбиартдако хнвдзй шдоршая: орпшаг. зеддогерязх туберкулеза. ! тераапггачгсклб Ессдадаваягя дагл: йтргдзтельк^й результат. Б кзатро^ьнвй грднпе из. тзбсркцс;;»! резпзогаы деве ис а Юа збое 5 одиаго ез кж сбаа^зеив пгггояйпюв-зтош; гаа.нзагвекиа а савеяева кижьтпра возбддитвгл 'тдбвркддзза, ^етедакиггиьнзан ^жемяоааши&а вгтгзлзглеяо. что ззргг

нный комплексный препарат абсолвтно безвреден, ареактивен и более выражение защищает вакцинированных животных от заражения я заболевания туберкулезом, чем вакцина ВСС и противотуберкулезный анатоксин.

2.5. ИЗУЧЕНИЕ СЕНСИБИЛИЗИРЭВШ СВОИСТ ВАКЦИННЫХ ПРЕПАРАТОВ, И ПОКАЗАТЕЛЕЙ ЙДП ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ТУБЕРКУЛЕЗЕ 3 ИММЗНИЗИРОВАНННХ И ИНТАКТННХ МОРСКИХ СВИНОК.

Многочисленные данные литературы и наии собственные исследования даот основания считать, что аллергическая диагностическая проба со старыми аллергенами ( альттуберкулином и ПЛД )в настоящее время утратила свое былое значение. В силу того, что резко изменились условия содержания и эксплуатации животных, породный состав и уровень их продуктивности, возросло количество сильно-действувщих препаратов и ухудшилась экологическая ситуация, в организме крупного рогатого скота произоили глубокие нарушения прежде всего обмена веществ, что в свои очередь определяет состояние иммунной системм каждой ссобн. Резко возросло как количество веществ и факторов, сенсибилизирувщих организм, так и ии-мунодепрессантов, подавляющих его защитные', в том числе и аллергические реакции; В силу этих причин практика дже давно отказалась считать туберкулиновув пробу методом надежной диагностики туберкулеза и рассматривать ее как Эпизоотический тест для оценки благополучия стада. Метод может быть использован как ориентировочный при проведении более точных исследований.

Вот почему лвбне предложения по получении и применение новых вариантов аллергенов и их тщательное изучение представлявт интерес. Это и послужило основанием для проведения нами исследований ' по изучении аллергических свойств лвбезно предоставленного нам профессором Евглевским А.А. нового аллергена," условно названного

бсзальбунозтш тдбервдлкноа.

На период этапе били кзучшш свойства атого препарата в сравнений с юшздскаек»' бвофабрлкой ППД тдберкулшшя. Лда мздчеиия кскаяьзазаля истода пяфракрасиой и ультрафиолетово® спек'троско-вки, рснтгсйвспеетральпого илкроаналЕза и растровой электронной ак^росЕОша. . "

Рсздгьтатв реатгепр-спсктральпагв ивкроакализа кздчагких аллергенов, подтвсрг*азт отиосвтсяьлдл гк кдоктлчкость по олееснт-бп-'З составу. Она ир;кгрио в одинаковых количествах содержат у г- . лгрод. кислород в тгатрьЛ. Одвака в бсзальбуаозко;? губеркут!^ со^Ерлагсз в болыеа количестве ¡паза кальциг. я Ларга1:иа. а в ЦОД для шяпюп'дтаггда - ОосСора к гхора.

поверхностей вясдяеяизх капель везильг/даозкогс ¡1 ЕПД твбераулнксв в растровой зягутрснноы сикросхоас, в исрыз* из киз просматривается ргдко разСросгжнг ¡шнглохсрати, по оорие д езду яагсрлзюстк аавожааяггле пгрскховие косточз-гя, а в пленке ЙЩ- образоааакс гзсте расположенных гастдазв, юасггаизедк кро-«сяс зерна. й и-Зырй.*.;?олеговсй часта спсктра вропвсхаакл и бсз-йльй^^аанбга Т82гр!.ця2на ааесу иесто яоягнй край вопггцашз, 'кс-?орг& яа«йШЕТсв о сблагтз 300 »к. £ спгктрг пропдсшашг ШЩ ¿ям илсхшьнЁЯ&и с асс^гдйсао» сявктраяьшм £«эвазояс аолиое яагло-бг.оЬ-дй &?. ьайлздалась. волге того, в обложи 220 ш •ирт:-с5Ггствдат кзсг^.птагс ¡штекшыгс волоса каоп^скашз,

Стгечдошг С';зйкв-Х'й;1!'/1:с;;д£ различия в хздчас^кх сбьти:-ш, сйцсгавлена разкзз их составов. Пе-вадшоси. 2Т1л взппз аЬг-схить ЕцгвлалзшЕ различия в реакциях ~ оргггжзха ка кх введение. . .'

. Таиш образок, прсв'едеюше сизнпо - якические исследования показала, что новая препарат во своей природе стлкчастся ст ППЛ

по элементному составу, степени пропускания инфракрасных и ультрафиолетовых лучей, что говорит о разной их плотности, по форне и виду поверхностей высуженных капель адлегренов.

8 целях изучения специфичности препарата и его активности в эксперименте проведены исследования на иммунизированных вакциной ВСЁ( 1гр-.). противотуберкулезным анатоксином (2 гр.), вакцинным препаратом ЛКП-1 С 3 гр.) и зараженных возбудителем туберкулеза морских свинках.

Если до заражения иммунизированные испытуемыми препаратами морские свинки не проявляли кожной аллергической реакции на без-альбумозннй туберкулин и лижь у двух животных первой и четырех третьей групп проявлялся ответ на внутрикожное введение'ППД туберкулина, то уже через 30 дней после заражения 90% животных контрольной и 70% первой групп давали четко выраженнуж положи-тельнув реакции на безальбуиозннй туберкулин. Внутрикожная аллергическая реакция на ППД туберкулин к этому сроку была выявлена у четырех особей, иммунизированных вакциной ВСЕ, у двух животных - вакцинным препаратом ПИ! - 1, у одного - противотуберкулезным анатоксином и у пяти - контрольной труппы.

В подопытных группах к концу исследований осталось по 20Z животных, не проявлявиих реакции на ППД туберкулин и отсутствовали животные, не проявнвжие реакции на безальбуиозннй туберкулин.

Это свидетельствует о различии'реакции одного организма на ППД и безальбуиозннй туберкулин. Сопоставление результатов прижизненных и послеубойных исследований показало, что с псмоцьп безальбуиозного туберкулина достигается-90 - 100 % выявляемость инфицированных возбудителем туберкулеза морских свинок. ППД туберкулин позволяет выявить ливь от 30 до 80% таких животных.

- 20 -

Организм телят реагировал ва введенное препараты по-иному. Только у животных. квкунизкрованннх препарате»: ПКП-i установлено состояние аллергии с поиощьв обеих аллергенов на 41 день опыта: ка ППД туберкулин реакция установлена у 142:, а на безальбук.з-внй туберкулин у 852 телят. 3 сивотных других опытных групп к sTOiîy времени такая реакция ввявлева ливь на безаяьбузгозний тд-бераулия.ПоследдЕзнгш кссдсдовагшякк показано, что аллгргкческая реакция у всех хгоотннх третьей группы выявлена ка безальбуздз-ш:й туберкулин на 90 адздн va 1ШД твбсркдлкн-из 155 дойо. S cccz зввотшзх первой группа па 155 да® реакции внявлена да оба ад-ггргсяа, а.ц второй - лигь на Сезальбухозюгй туберкулин. На ГЛД туберкула! в этой группе ка 155 дййоакта реагировало яиеь четыре из сеац спатнкх телок, lia 2S7 дсиь спгтп еялергнчгсказ рс<;;> v.M иа ШЛ ¿'.' безальбдаозпкй туберкулин соадгяаягсь j. одного ги~ кстксго ез второй и третьей групп .

Приведенные лашзсЬюдтвсргдаст, что бЕзаяъб«аОЗШ2:3 тцСврху-'лка выявляет бохъгег чкего еизотшх, к»е1а;яг зхтггизй ту£срг;у-леззкй процесс т.е. яаюйй препарат явсяотса балег спгяггфкчяеа.

. ЩЩ1

1. Зпизиотичесхаз .ситуация по туберкулезу крупного рогатого скота в Зйранье t. 1986-1932 гг. )'характеризуется нгравиоыер-иостьв распро£тт.ансщ:я. Коэфициент капряаеиности зпизооптас-кого ароцесха белее С,0001 в пяти, в пределах от 0,00001 до 0,00003 в кевзтй, go 0,000001 - в девяти областях. В больсакстве зон республику, неблагополучие 'имеет стационарный характер и часто наблюдается рецидивирующее течение инфекции.

2. Применение в систске игропркятий вакцинации вивотных BCG позволяет в более короткое время ликвидировать эпизоотия туберкулеза крупного рогатого скота.

3. В эксперементальных исследованиях на норских свинках и телятах доказано, что иммунизация животных повышает их устойчивость-к заражения и заболевании, что подтверждено при искдсственно* заражении иорских свинок и естественной инфекции на телятах.

4. Ч иммунизированных животных развивается комплекс иммунных реакций, зыражаацихся в пролиферативчых изменениях в органах им-: мунной системы. повыиенимв сыворотке крови содержания 1вМ , 1е£ и циркулирующих иммунных комплексов.

5. У иммунизированных Телят. помещенных в неблагополучную по туберкулезу группу в течении 10 месяцев не установлено ни одного случая заражения при комплексном исследовании - убое, бактериологическом исследовании на бактериальные и 1-формы.

В то же время, з контроле заражение установлено у 15% телят. что подтверждено выделением возбудителя.

6. При сравнительном исследовании результатов вакцинации морских свинок и телят ВС£ и противотуберкулезным анатоксином ответные иммунные-реакции более выражены на противотуберкулезный анатоксин. Однако оба препарата не обеспечивают 100% зациты. ;

7. Сконструированная комплексная вакцийа по всем показателям оказалась более имиуногенной. Коэфициент эффективности иммунопрофилактики при экспериментальной оценке вакцинных лрепаратов на морских свинках соответствовал 0,25 при' иммунизации ПКП-1 и 0,16 - ВС£ и противотуберкулезным анатоксином.

8. ■ Аллерген нового типа, разработанный профессором Евглевс-ким А.А. - безальбумозный туберкулин, при зксперементальных исследованиях оказался более специфичным и чувствительным^чем ППД.

9. В общей системе оздоровительных'мероприятий при туберкулезе крупного рогатого скота, особенно в стационарных эпизоотических очагах, и высоко^ уровне зарааенносги целесообразно при-

• - 22 -

пенять вакцинацию как вспомогательный иетод оздоровления стада

от туберкулеза.

Предложения производстве.

Провести коыиссионное испытание безальбумозного туберкулина в вироком производственно!! опыте и организовать его прсиэ-оодство. <

В систему оздоровительных иеропривтий по ликвидации тубер-вулеаа в стационарных зпиэоотызеких очагах высоки* уровнем аарааенностн зивотиых целесообразно внедрить вакцинаций. Провести комиссионный опыт по определений инмуногвнных свойств противотуберкулезного анатоксина и препарата ПКП-1 и внедрить их в производство.

Работе опуйишоваянив по тепе дясеертацни:

1.Коваленко А. М..Урбан В.П. 0собливост1 туберкульозного проиесу у ворських свинок, веплених вакцинов ВСЁ та протитубгркульозниа анатоксинов.//■ Иатер1али коференцП иолодих вчаних 1 спгШал1с-т1в ЯкргЛни. Харк1в - 1392. с.30 - 31.

2.КоаалбЯко fi.iL, 9рбая Б,П. Динггша развития туберкулезного процесса у морских свинак и кроликов. // Доклад на первом ыев-дуиародноы симпозиуме данйыалогов. Сборник " Ланнмалогий йосква - 1333, 1.с-ВЗ. '

3.Коваленко О.. Урбан В.П. Изучение специфической профилактики туберкулеза крупного рогатого скота на * иорских свинках. // ¿оклад К' первой аэвдунеродной симпозиуме ланиазлогоа. Сборник " Лшю&яогиа " Москва - 1993, 1,с«84,

4.Коваленко Й.М.,УрЗан В.П. Дан! про 1муногенн1 властивост! вакци-

1.

2.

3.

ни BCG. протитуберкульозного анатоксина та протитуберкульозного препарату. //(в печати). 5.Коваленко А.П.. Гнатовская В.М. Изучение некоторых физико-химических свойств вакцинных препаратов против губеркулезаСв печати). S.Коваленко Й.Н., Урбан В.П. Експерииентальн1 дан1 про 1муноген-н1 та алергеш! властивост! вакцини 5ЦЗ, туберкулъозного анатоксина в nopiBHsiHHii з запропонованим протитуберкульозним ■ препаратом(в печати)

1сд писана к печати шшгБямага, тип.

Рорньт 60*И. Ооъем Шп.л. ОсршнЯ пег.

¡Uporp&cpitp Кн. пэЛЪЛЪ/. =/?р7£ма, г/3/.