Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Сравнительная эффективность вакционных препаратов для профилактики сальмонеллезного аборта овец

РГ8 ОД

2 ! К!0Й Ш

министерство сельского хозяпстпл республики казахстан

ллмлтинский зооветеринарный институт

На правах рукописи

ТУЛКИБАЕВ Калыбай Аптикетович

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ВАКЦИННЫХ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ САЛЬМОНЕЛЛЕЗНОГО АБОРТА ОВЕЦ

16.00.03 — Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

А и т о р I; ф с р а т диссертации на соискание ученой стеиенн кандидата ветеринарных наук

АЛМАТЫ 1993

Работа выполнена на кафедре микробиологии и вирусологии Алма-тинского зооветеринарного института.

Научные руководители: доктор биологических наук, профессор Б. Т. ТОЛЫСБАЕВ, доктор вететшарных наук К. Б, БИЯШЕВ.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Б. К. САНСЫЗБАЕВ, кандидат ветеринарных наук Ш. Ж. ТУРСУНКУЛОВ.

Ведущее учреждение: Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт.

Защита состоится *

^сщу 1993 года в № ча-

сов на заседании специализдроганного Совета Д. 120. 41. 02 при Алма-тинском зооветеринарном институте (480013, г. Алматы, пр. Абая, 28, Алматинский зооветеринарный институт).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Алматинского зооветеринарного института.

Автореферат разослан & <£ ^Л. 1993 года.

Ученый секретарь специализированного Совета, доктор ветеринарных наугг

К. Б. БИЯШЕВ

.....ВВЕДЕНИЕ

—"Актуальность темы: Овцеводства— одна- из важнейших-отраслей----------

животноводства Республики Казахстан. Основный условием увеличения производства продукции животных и дальнейшего роста поголовья овец является.благополучие ферм по инфекционным заболеваниям, в частности по сальмонеллезу.

Сальюнеллез овец - широко распространенная инфекционная болезнь во многих странах мира, часто протекает в виде энзоотии и сопровождается массовыми абортами, гибельп части овцематок от послеродового сепсиса, гибельи новорожденных ягнят и тем самым наносит большой экономический ущерб овцеводству.

Одной из цричин значительного распространения болезни является несовершенство специфической вакцинопрофилактики. Против саль-монеллеза овец были предложены различные варианта убитых вакц:::;.

Наибольшее признание получили форыолквасцовая вакцина колаенко и А.И.Нефедьев,1950; Нефедьев,195^; Николаенко, 1556^ ,::■:■-:-центрированная формолквасцовая вакцина (А.Г.Малявин с согзт. и поливалентная форда л-тиомерсаловая вакцина (ВГНКИ), которая меняется и з настоящее время.

Для создания иммунитета удовлетворительного напряжения эти вакцины вводятся двукратно и даже трехкратно в больсих доз свидетельствует о их недостаточной иммуногенной активности (5.11. Локтева,. 1955; АЛ «Банников и Р.С.Хрущудянц, 1956; А.З.Селгэанс?, 1959; ¿..ЛлИяс*, О.ГигсИ, 1567; Ц.А.Кеняебаев, 1967; А.Акт"..-?., 1970; МД.?аджабов,1974;. А.А.Волкова с. соавт.,1577;£.А^зтг^'зх-:., К.А.Тулкибаев,1988;Б.0.Шуст9р,1968;К.Б.5ияЕез с соазт.,;;:^: .: .:;,

Вместе с тем данние литературч свидетельствует о тоц, что ::— готовленные различными способаш убитое корпускулярные, л;::с х/.>а-адские вакцины или недостаточао эффективны а реактогекны, у.:" Пе не выполняет своего назначения. .

В кашей стране и за рубежом ряд исследователей считают, что наиболее эффективными и перспективными препаратами для иммунопрофилактики сальмонеддезного аборта овец являются живые вакцины --(Б.А.Матвиенко,1966, 1969, 1970,.1986; М.А.Кенжебаев, Л967;_А.Ак~ таев, 1ЭТ0;.М.Драганов с.соавт.,1968; М.Н.Никодьский, 1969; Матвиенко, К.Б,Бияшев, 1974; Матвиенко, С.Б.Бектембаев, 1977; соааа et а5981;р.рагаоч1964;р.раг^п ей а1 , 198б; В.Ф.Свириден-ко, Т.Т,Д»амгырчкева, 1988; Матвиенко, К.А.Тулкибаев, 1988; К.Б. Бияшев с соавт., 1991).

Однако многие вопросы, связанные с получением аттенуированшх шташов з.аЬог^;изоу1з , разработка и внедрение живых вакцин для специфической профилактики сзльшнеллеза овец и их сравнительная эффективность остаются еще недостаточно решенными.

Изучение перечисленных и других вопросов посводит предложить производству высоко эффективную живую вакцину против сальмонеллез-ксго аборта овец и тем самым оздоровить хозяйства от сальмонеллеза и увеличить поголовье овец.

Рель и задачи исследований. Цель рабош - разработка и внедре-• 'с г.:ккх вакцин из аттенуирсвакных итадаов з.аЬогЬиэоу1з и сравни- \.'ь:гое изучение эффективности вакцинных препаратов против сальдо-;>?лдезного аборта озец.

В связи с этим были поставлены следующие задачи:

- изучение этиологии салыюнеллезного аборта овец;

- характеристика выделенных шташов сальмонелл из абортирован-гл:х плодов озец;

* получение аттенуированных штаммов. з.аЬоггааоу1з;

- изучение морфологических, культурально«биохкмических, антз-геаыгх сзойстз и остаточной вирулентности, степени диссемянации, сроков элиминации а константности биологических свойств аттеяуцро» ваккых ПТц££;об з.аЬаг1:иаоу18;

- сравнительное изучение иммуногенности вакцинных препаратов против сальмонеллезного аборта овец;

- исследование механизма гуморального и клеточного иммунитета и реактогенности вакцинных препаратов;

- изучение иммуномсрфологических раекций организма на введение аттенуированного штамма S.abortusovis;

..« испытание гетерогенного иммунитета против сальмонеллеза овец;

- испытание в производственных условиях эффективности вакцинных препаратов против сальмонеллезного аборта овец;.

- разработка нормативно-технической документации по изготовление и контроди кивой вакцины из аттенуированного штамма s.abortusovis против сальмонеллезного аборта овец.

Научная новизна работы» Получены различными методами аттенуа-ции вакцинные штамш s.abortusovis имевшие, генетические маркеры, обладающие стабильностью биологических свойств, безвредные, имму-ногенные, эпизоотически безопасные.

Предложен способ получения аттенуированных штаммов s.abort.;.?-ovis с целью создания живых вакцин для специфической иммунопрофилактики сальмонеллеза овец.

Изучена в сравнительном аспекте динамика иммунобиологических реакций у овец после прививки вакцинами против сальмонеллеза.

Нашими исследованиями установлено, что кивая вакцина из аттенуированного штамма S.abortusovis I7NS по своей иммунoreнности значительно превосходит вакцинные препараты, применяемые против сальмонеллезного аборта овец.

Сухая живаз вакцина из штамма s. abortus о vis. I7i<s обладает высокими иммуногенными свойствами я вполне пригодна для специфически профилактики сальмонеллезного аборта овец при однократном подковном применении, а также комплексно о хламидиозной вакциной.

Новизна исследований подтверадена авторский свидетельством: "Сташг бактерий S.abortusovis используемый для изготовления живой вакцины против сальмонеллезного аборта овец", Л 1490956 от 1.03.1989 г. и пол они тельным решением на получение авторского свидетельства "Способ комплексной иммунизации овец против абортов сальмонеллез ной и хламидийной этиологии? £ 4931042 (035177) от 30.03.1592г.

Практическая ценность работа. Установлено этиологическое значение возбудителя S.abortusovis в инфекционной патологии овец, который в &6% случаев выделяется от абортированных плодов.

3 производственных условиях организовано широкое применение гривой вакцины из аттенуированного штамма S.abortusovis I7KS против сальмонеллезного аборта овец, что позволило снизить заболеваемость и увеличить выход молодняка.

На основании результатов исследований разработаны: - рекомендация "Сальмонеллезы животных и меры борьбы? рассмотренная и утвержденная научно-техническим Советом Госагропрома Казахской ССР от 25.12.1990 года;

- нормативно-техническая документация (ТУ-Ю-19-15-88, временная инструкция, наставление по применение) "Вакцина сухая кивая против сальмонеллезного аборта овец из штамма S.abortusovis 17 . i.'i ", утвержденная Главным управлением ветеринарии Госагропрома ZZj? от 8.07.1988 года;

- "Временная инезрукция по изготовление и контроле живой вак-ипкы против сальмонеллезного аборта овец'; утвержденная Главным управлением ветеринарии МСХ и продовольствия Казахской ССР от

04.1991 года.

Внесение результатов исследований. С разрешения Главного уп-:е-:ия ветеринарии Госагропрома СССР (Jf 116-16 от 20.01.1986г.) г-г. 2=.:.щ:ка из птамиа s.abortusovis I7i¡s против сальмонеллез-

ного аборта овец применялась в неблагополучных по сальмонеллезу овцеводческих хозяйствах Республики Казахстан. .

Указанной закцлпой к'-муназировано более б миллионововцеиа-ток с экономическим эффектом на I затраченный рубль 46 рублей.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на: научных конференциях профессорско-преподавательского состава, молодых ученых и специалистов Алматинского зооветеринарного института (1984,1987,1988,1989,1991,1993), научно-практической конференции молодых ученых КазШШЙ и АЗЕИ (г.Арматы, 1984), Всесоюзной научной конференции "Эпизоотология, эпидемиология, средства диагностики, терапии и специфической профилактики инфекционных болезней, общих для человека и животных" (г. Львов,1988),научно-техническом Совете.Госагропрома Казахской ССР ( г. Алматы,1990),Республиканской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов ( г.Алыата,1950),Всесоюзной научной конференции,посвященной 140-летию Харьковского зооветеринарного института им.Н.Ц.Борисенко (г.Харьков,1991),республиканской научно-практической конференции'молодых ученых и специалистов (г.Сеш-палатинск,1991) и 1 межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых и специалистов, посвященной 60-летию образования Кыргазского СХИ им'.К.И.Скрябина-(г.Бишкек, 1992).

Основные положения исследований, выносимые на защиту:

1.Изучение в сравнительных аспектах биологических свойств аттенуированных шташов з.аЬо^ивоуАа.

2.Динамика показателей гуморального и клеточного иммунитета

у животных иммунизированных вакцинными препаратами против сальмо-неллезного аборта овец.

3.Результата сравнительной оценки иммуногенных свойств е-зк-цикных препаратов против сальмонеллеза овец.

^».Разработка и внедрение живой вакцины против сальмонедлезксг аборта овец.

ПубликацияЛо материалам диссертации опубликовано 17 работ, 1в том числе одна рекоиендация, две нормативно-технические, документации на изготовление» ксн!роль и применение живых вакцин против сальшнеллезного аборта овец и получено одно авторское свидетельство, одно положительное.решение на изобретение.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 186 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения подученных результатов, списка литературы и приложения. ...

Материалы-диссертации иллюстрированы 25 таблицами, 2 рисунками и 19 фотоснимками. Список литературы включает 214 источника, из которых 52 иностранных.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Иатериалы и методы .

Работа выполнена на кафедре микробиологии и вирусологии Алма-Атинского ордена Трудового Красного Знамени зооветеринарного института и в овцеводческих хозяйствах Республики Казахстан.

Для .выполнения намеченных исследований использованы следующие вакданные препараты из аттенуированных штаммов з.аЪоггиз-оу1з 388-1/10,Б.аЬо^изот1а 388^^ з.аЬоггивоу1з 17 Ю, Б. аЬ<м#изот±э Гр-ПЛ-1/Ю,5.typh.iauri.um ф-Вг -1,3.*урЬ1тг1ша 274 и поливалентная формол-тиомерсаловая вакцина против сальцо-неллеза овец. "

Кроме этого использованы вирулентные штаммы сальмонелл: б. аЪо!^пзот18 388,з.аЬозгЬазот-1з Л-1, 3.аЪог-Ьизоу1з 460, ЭЛурМ-гииии 4/9 и ЗЛурЫтиг1ша 371.

Всего в опытах использованы 60 овцематок (в том числе 45 суягных), 347 ярок, 15 ягнят, 520 морских свинок, 2960 беспородных белых мышей.

1 Материалом для бактериологического исследования служили различные органы и лимфатические узлы от абортированных плодов, абор-

— тировавших овен, больных и экспериментально зараженных овец и ла----------

бораторных животных после гибели и убоя.

Выделение сальмонелл проводили согласно Методическим указаниям по бактериологической диагностике сальмонеллезов животных", рекомендованных Главным управлением ветеринарии МСХ СССР от 30. 12.1971 года посевом на мясо-пептонный бульон (МПБ), мясо-пептон-ный агар (КПА), мясо-пептонный полужидкий агар (ШПА), содержаний 0,075% агара и агар Хоттингера (рН-7,2-7,4), а также на среды Мвл-лер-Каус£мана и Эндо......

Морфологические, культурадьные и ферментативные свойства штаммов сальмонелл изучали по общепринятым методикам.

. Антигенные свойства аттенуированных и вирулентных штаммов сальмонелл определяли с.поли- и ыонорецепторными (0- и Н~) агглютинирующими сыворотками, которые получены из института вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова (г.Москва).

Чувствительность аттенуированных штаммов з.аЪог4изоу1з к антибиотикам определялась методом стандартных индикаторных дисков в сравнении с вирулентными культурами.

Вирулентность штаммов сальмонелл проверяли на.белых мышах (14-1бг), морских свинках (300-350г), ягнятах и овцах, с учетом реакции животных на введение штаммов, диссеминации и сроков элиминации культур при различных дозах и способах заражения.

Иммуногеннуп активность аттенуированных штаммов з.аЪог1;изоу1э изучали на белых мышах (К-14г), морских свинках (250-300г) при подковной вакцинации различными дозами.

Расчет остаточной вирулентности. ( Ы>5о ) и иимуногенной активности (ЕД50) проводили по методу Кербера.в. модификации Ашмарина. Результаты обрабатывали статистически (И.П.Ашмарин, А.А.Воробьев, 1962).

Константность биологических, свойств аттенуированных штаммов S.abortusovia изучена при. .длительном хранении,многократных neper севах на полужидких я твердых .питательных средах.,после лиофильно-го высушивания и после пассирования на чувствительных животных.

Сравнительные иммуногенные свойства вакцинных препаратов против сальмонеллеза овец проверяли в острых: экспериментах на ярках. Напряженность, иммунитета определялась по .степени выаиваемости,общей реакцией,изменениямигуморальных и клеточных показателей и им-» ыуноиорфологическими перес тройк^организма..

. Зкономическую эффективность.примененной вакцины определяли по методике "Определение экономической эффективности ветеринарных изроприятий".утвержденной начальником Главного управления'ветеринарии LICX.CCCP от 4.05.IS82 года.

Поствакцкнальный титр антител изучали в реакции агглютинации (РА) и реакции непрямой гемагглютинации (РИГА)..

Значение средних титров антител,а такие их относительную точность определяли по Т.С.Сайдулдину (19.92).

Определение общего количества лейкоцитов проводили по обще-::г::нятк:д 1.етод£.и (В.В.Меньшиков, 1987).

Количественную характеристику Т -лимфоцитов в крови, белых до и после вакцинации изучали в динамике при помощи (E-fOK) спонтанного розеткообразования (j.iielind et al.,1977).

Статистическую обработку результатов осуществляли по методу, ог::санксму И. АЛистяковнм (JS66) на электронном микрокалькуляторе :.!К-51 .Уровень достоверности определяли по таблице Стъюдента. ,т.£ннке считали достоверными при Р<0,05.

РЕЗУХЬТАШ ИССЛЕДОВАНИЙ

I. Характеристика штаммов s.abortusovia выделенных, "з абортированных плодов овец.

Пэми при бактериологическом исследовании патологических мате-

риалов от абортированных пледкв овец, павших овец.после аборта и погибших ягнят в возрасте 15-*45 дней, а также из выделений половых органов абортировавших овец выделены в основной культуры.' Б.аЪогЬизот1з и 3^ур111ти.г1.ит соответственно 86 и 14 процентов.

Выделенные штаммы по морфологическим, культураяьно-биохими-

ческим и антигенным свойствам были типичны присущим видам. По *

константности биологических свойств лучшими оказались штаммы Б.аЬоггизотХз 388,э.аЪсиЧизоу1з Л-1,3.аЬо1-1;изоу1з 460, выделенные из абортированных плодов овец, которые были взяты для дальнейших наших исследований.

Вирулентность штаммов з.аЪвгЬи80г1в 388,3.аЪогЬизоу1в Л-1 и З.аьо:г1;из<гу1э4б0 изучалась с повторениями на беспородных смелых мышах (14^-Кг).

Белым мышам вводились суточные вирулентные культуры внутри-

¿17 О П

бршинно в дозах 10 , 10 , 10 , 10 микробных клеток. ы>50 исследуемых штаммов составляли соответственно 14'10б, 22 *Юб и 6.105 м.к.

2. Получение аттенуированных штаммов э.аЪог1;изоу1з.

Нами под руководством проф.Б.А.Матвиенко получены под действием химического мутагена (трипафлавина) аттенуированные шт&'шы из вирулентного штамма б. аЬог4ивот1в 388.. Для этой цели вирулентный штамм з.аЬогЬизот±а 388 последовательно адаптировали к возрастанием концентрациямотрипафлавина 1:25000, 1:10000, 1:5000, I: 1000, 1:2000.

После этого у полученных аттенуированных штаммов изучали ос-гаточнуп вирулентность (Д)5о ) и иммуногеннуп активность (ЕД^) за белых мышах. По этим критериям сравнительно лучшим оказался птамм э.аЪоггизс^э 388-1/Ю, адаптированный к трипафлавину в концентрации 1:10000 ( Д^ - 2,5 • Ю8 м.к., ЕД^ - 3 '10би.к.).

При зшеуказанном методе получения аттенуированных штатов

не ясен специфический механизм действия выбранного ьутагена на совершенно определенные дискретности генетического аппарата особи т.е. отсутствуют генетические метки, позволяющие отличать их от эпизоотических прототипов..

Учитывая выше изложенное, нами совместно с сотрудниками лаборатории генетики вирулентности бактерий научнот-исследователь-ского института эпидемиологии и .микробиологии им.Н.Ф.Гамалеи (г.Москва) методом Стокера получен из штамма Б.аЪо^ивоу1в 3881/10 стрептомициноустойчивый штамм 3.аЬаг1;ивог1з 388 -100 мкг/мл (маркированный по стрептомицину);

Кроме этого, совместно получен методом генной инженерии.. из вирулентного штамма б.аЬозгЬивот1в 460 аттенуированный штамм 5.аЪозгЬизот1в 17НЗнесущий две мутации (устойчивость к стрептомицину и неамину, обуславливающие аттенуацив. Штамм защищен авторским свидетельством за £.149056 от 1.03.1989 года (авторы: В.Г.Петровская, Б.А.Матвиенко, Б.Й.Маракуша и К.А.Тулкибаев).

3. Биологические свойства аттенуированных •■ шташов Э.аЪогЬивот^.

Биологические свойства аттенуированных штаммов з.аЪог*изотПе 388-1/10, 3.аЪог^ивот1в 388 в^,3.аЪог1;изоу±в ГЛ^дуд^^ь в сравнении с вирулентными культурами з.аЪог1;изот1в ' 388,3.аЪог-4изот1в 460, а также с вакцинным штацмомЗ*аЬог1;иаот1а ПХ-1/10.

По морфологическим, культур ально-биохимическим и антигенным

свойствам аттену)фованные штаммы 3.аЪо1^ивоу1в 388-1/10,3'аЬог_

«е •

tusoYiз 388 в^г иЗ. аЪогЪивоу1в17НЗ>отличаются от вирулентных

штаммов з.аЪогЪивот1в.

У аттенуированных шташов в. аЪог4ивот1в 388-1/10, 388 в1;г.г 17КЗ отсутствуют явления самоагглютинации и термоагглютинации.

По данным.Т.А..Вакег (1972), одним из важных требований'к

вакцинным штаммам: является сохранение ими так называемой остаточ-•ной вирулентности, от чего зависит высокая иммунизирующая способность живой вакцины._____-____ __ _------'--------------------- ------------------------------

Остаточная вирулентность аттенуированных штаммов S.abortusovis 388-l/lO,S».abor1:uaovl3 388зггГ,3.аЬо^изот1з17КЗизучались в сравнении с вакцинным штаммом S.abortusovia Тр-Ш1-1/10.а вирулентным штатгом S.abortusovis 460 на белых мышах (14-1бг), морских свинках (300-350г) и на ягнятах в нескольких повторностях.

Белые мыши заражались БНЕеуказаккыми штаммами подкожно к внут-рибрдшинно в дозах 10^,10^,10^,10^ м.к. по 20 белых мышей на кая-дуо дозу.

По результатам опытов на белых мышах установлено, что аттенуи-рованные штаммыs.abortusovi3 обладали слабой остаточной вирулентное тьп в сравнении с исходными вирулентными штаммами. .

1.Д50 аттенуированных штаммов S.abortusovia 388-I/I0, S.abortusovia 388 strr , S.abortusovis l7NS,S.abortus°v^_[ui_iyjo и вирул-з-•нтного штамма S.abortusovis 460 для белых мышей при подкожном заражении равны соответственно 5,6 . Ю8; 6,3 . ЛО8; 4.4.I08; 7,Ю6 и 1,2.Ю7 м.к., а при внутрибршиннои 2,2*Ю8; 2,5*108;1,4-ГО8;4,4.

Ю8 и б-ГОбм.к.

Как видно вирулентность аттенуированных штаммов снизилась нч 2 порядка ( Р<0,05).

Слабая остаточная вирулентность штамма s.abortusoviaiTus хорошо иллюстрируется в опытах на ягнятах. Так, ягнята зараженные внутрибрюиянко культурой 3.abortu3ovis17i'^o3ax Ю10 и 2*I0ICW.:-:-робных клеток, остались живыми, тогда как контрольные, 2граг,3;.~гк? вирулентной культурой s.abortusovis 460 в дозе 5-ГО9 м.к. в-е ггг".

Следует отметить, что аттенуирсваннне втаияы s.abortusovia 388-I/3D,S.abortusovis 368з*гг pS.abortusovijs ШЗстабазьно сох-

- L¿ -

к

раняш остаточную вирулентность при длительном хранении, после лиофильног.0 высушивания, многодетных пересевоз на искусственных питательных средах (твердые в жидкие), а также при Ю-кратном пассаже на белых мышах и 5-кратном.пассаже на овцах.

Степень диссеминации и сроков элиминации аттенуированных штаммовS.abortusovis 358-1/Ю, S.abortusovis 388 а4гГ. З.аЬог-•tuaovis X7HS в организме животных изучались в сравнении.с вакцинным штаммом S.abortusovis Tp-IUI-i/iO на белых мышах, морских свинках и ярках в нескольких повторностях. Подопытные животные. .

7 о g

заражались подкожно в дозах соответственно 10 , 3^10 и

После заражения белые мыши и морские свинки забивались на 3,7,14,

21,30 сутки, а ярки на 5,10,15,20 сутки.

В результате опытов установлено, что аттенуированнне штаммы s.abortusovis 388-I/I0, S.abortusovis 388 strr,s.abortusovis I7KSиз.органов белых мышей шсеваэтся в течение И суток и пол-нос тьо элиминируются К 21 суткам^кроме штамма S.abortusovis I7HS, который в одном случае'высевается, единичными-колониями и только из пахового лимфатического узла» a штаммSkaborfrueovls Ip-DJI-i/iO полностью элиминируется из организма к суткам.

Аналогичные данные получены в опытах на морских свинках.

От убитых ярок через 5и10 суток вакцинные штаммы S.abortusovis 388-I/I0, S.abortusovis 388strr,¿.abortusovi3l7KS и S.abortusovis Тр-ПЛ-1/Ю высевались.из печени, селезенки, яичника и подчелюстного, средостенного, пахового, брыжеечного лимфатических узлов.

Через 15 суток культуры аттенуированных штампов, за исключением s.abortusovis Тр—ПЛ-I/IO высевались из печени, селезенки и пахово^ го лимфатического узла.

Результата опытов свидетельствуют о хорошей приживаемости ат~ тенукроланннх штаммов s.abortusovis, кроме S.abortusovis Tp-GJI-I/IO, ъ оргзку.?ме белых швей, морских свинок и ярок, обеспечивающих дли-

'тельное иммуное раздражение 'на больших тканевых поверхностях, тем самым создают напряженный, иммунитет. При этом нет бактерионосительства, штаммы полное ты) элиминируются из организма к 20 суткам.

3 результате изучения стабильности биологических свойств приели к заключению, что аттенуированные штаммы з.аЬог4изст±з 1/1.0, 3,аъоггизепг1а 388 зг^.з.аьоггизоллзхткз обладают типичными для этих видов морфологическими, культурально-биох1мнчеок;"!п •/. антигенными свойствами, слабой остаточной вирулентностью, хорошо приживаются в организме животных и не реверсируют при пассироэ^ним на воспреимчивых животных.

4„Иммуногенные свойства аттенуированных штаммов 5.аЬог1ивот1а.

Для создания вакцинных штаммов необходимо изучение иммуногек-ных свойств. Только после тщательной экспериментальной проверка иммунизирующей актизности аттзнуированкых штаммов :.:о~:ю реко!:';н.-.г. -■ вать их в качестве вакцинных штаммов.

Иммуногенные свойства аттенуированных штаммов 388-1/10, 3.аЪозЛазоу1з з£8 з1:гг,3.аЬог«;изру1з ГП^ й3'г-:г.:::е:- г сравнении с аттенуированго-ш штаммом з.аЪо1^изоу1з Те—ПТТ—Г/10 ливалентной формол-тиоыерсаловой вакциной, применяемой в время для профилактики сальмонеллеза овец в опытах на бсл;х , морских свинках и ярках.

Белые маши иммунизировались зттзнуированннми штаиг.:а:л. злЬтг-гизоу1а подкожно в дозах ГО5,ГО6,Ю7,ТО® м-.*-- и ?ор-.'.ол-тио'.'?-узловой вакциной в дозе 0,2 а? (8.108м.к.).. Сггдтк пр згод;: повторениям. Через 2С суток после иммунизации подопытные

"¡3 О "В*71-*** ЛОТХ'О »Э-Т-. --¿1 Т1П* .... - - ~ - г,-. Г С - . ~ „' ..

^ ------- ч.«*«—- .с^у,) «гсЛТпи.» г и • ^ . » ■ _ ^

460 внутрибрюшинно в смертельной дозе ГО5 м.к..

При этом установлено, что из аттенуированных т-та:.п:оз з.аЪог-

о гив<^1з наиболее иммуногенными свойствами обладает штамм з.аЬог-

17 КБ, . который защищает белых мышей в 85-100$ от.смер--' тельного, заражения, а формрл-тиомерсаловая. вакцина защищает.60$ животных. Оптимальные иммунизирующие дозы аттенуированных шташов 3.аЪог1;изот1з 388-1/Ю, 3,аЪог1;изотг1з 388 а*гг,3.аъог1:изау1з 17ИЗ_.и3.аЪаггизоу1э Тр-Ш1~1/Ю.для белых мышей равны соответственно 2'108; 2'108;Ю8-и 2*Ю8 м.к........

....Иммуногенная активность (ЕЗЦ^для белых мышей.равны соответст-венко Юб; 6,3.105''Л.105;3,5«Юб микробных.клеток.

.Изучение иммуногенных свойств пассированных (10 пассаж) аттенуированных штаммов Б. аЬогЬивоу1з .388-1/10, аЪогЬиво.у1а . ...

388 зЪг^ з. аЪог!:аоот1з подтверждает стабильность иммуноген-

6 5 5

еых-свойств штаммов - едсф соответственно 1,1*10 ;

микробных клеток................ ___ .....

В опытах на морских свинках установлено, что аттенуированный штамм з.аЬоггизо\-1в17кз создает, иммунитет-высокого напряжения,

о

о чем свидетельствует его ЕД^ равной 1,5*10 м.к., тогда как у штаммов 3.аЬог$изоу1.в 388-1/Ю,З.аЬо^иаоуХз 388аЪгг и 3,аЬог-1;ц50у1е Тр-ПМ/Ю равны соответственно 2.Ю8; 2*Ю8и 2.

С ' ' *

10 микробных клеток. Формол-таомерсадовая вакцина защищает 60$ ишунизиро Банных морских сьинок при гибели 100$ контрольных сеи-нок в течение /3-11 суток..

.В результате проведения многократных опытов на ярках по проверке иммукогенной.активности вакцинных препаратов нами установлено, что аттенуированный штамм з.аЬоггизоу1з гшобладает более имцуногенным свойством, защищает 100Й ярок от смертельного заражения при однократной иммунизации, тогда как штамиыз.аЬог1;изоу1з 388-1/10,3.аЬог^зоу!з 388 з*гг защищают 90% и 3.аЪоггизоу1в Тр-Ш-1/Ю - бСЙ, а формол-тиомерсаловая вакцина 40% иммунизиро-Баьных ярок, при гибели всех контрольных ярок на 4-7 сутки.

. Высокая защищенность иммунизированных животных аттенуирован-•ными штаммами s.abortusovis 388-I/I0, -S.abortusovis 388 strr

и s.abortusovis 17 из от смертельного заражения характеризуется-.

--------- .... t _"._ ________________________

легким.переболеванием и отсуствием.гастроэнтерических расстройств, а у ярок иммунизированных аттенуированным штаммом S.abortusovis Тр-ПЛ-I/IO и формол-тиомерсаловой вакциной наряду с повышением температуры тела (42°С) в течение б суток, отмечались резкое угнетение, профузный понос с примесью крови, резкая гиперемия и набухание .видимых слизистых оболочек, отказ от корма. Ярки погибали в течение 3-5 суток после заражения. В дальнейшем несмотря на_ нормальную температуру, состояние у этих ярок оставалось угнетенным. ......

... В дальнейшем.нами проведены опыты на белых мышах и ярках по создание иммунитета вакцинными штаммами, s.abortusovis itns,s.abortusovis 388 strr.S.typhimirium Tp-B г -I. и S.tuphinuriua 274.

имеющими родственные антигенные структуры, так как основными возбудителями сальмонеллеза овец являются S.abortusovis и S.

typhiftOrittEU "Установлено, что-вакцинные штаммы s.abortusovis I7NS u s.ty-phiniarium 274 создают напряженный иммунитет к гомологичной культуре (ЮС$ защищают) и менее выраженный к гетерологичной (80 и 85$ соответственно). Вакцинные штаммы S.abortusovis 388 str' и s.typMmuriua Tp-Br -I предохраняли иммунизированных белых мышей соответственно-от гомологичной культуры 85 и 75$, от гетерогенной культуры 60,55$, а формол-тиомерсаловая вакцина защищает в среднем 27£, при гибели всех контрольных мышей.

Для испытания гетерогенного иммунитета ярки были привиты однократно вакцинными штаммами S.abortusovis I7NS,S.abortusovis 388 str1" -и s.typhinnirium 274 подкожно в дозах соответственно 4*10^, 5«К9 и 2*109ц.к. по 10 фок на кавдый штамм.

Результаты показали,что вакцинные штаммы S.abortusovis I7ks и s.typhimurium 274 защищают 100$ иммунизированных животных от гомологичной .культуры.Штаммы S.abortusovis I7KS. и S.abortusovis SSEstr* защищают подопытных животных соответственно в 80 и 6С$ случаев при смертельной дозе заражения гетерологичной культурой S.typiirsariun .тогда как шташ s.typhimurium 274 защищает в 100> случаев от вирулентного штамма .S.abortusovis.

По итогам экспериментов можно сделать заключение,что более сективный гетерогенный иммунитет против сальмонеллеза овец создает вакцинный штамм .s.typhixuriujn 274,чем вакцинный штамм S.atoriusovis I7liS ■. ....

Все приведенные опыты по изучению иммуногенности вакцинных препаратов контролировались бактериологическим методом.При посевах на ксскуственные .питательные среды из органов павших иммуни-з:гроьанных и консольных (непривитых) животных выделялась зара-;.:а;х;ея культура.

Одним из дополнительных критериев оценки напряженности иммунитета' является длительность циркуляции заражающей культуры в организме иммунизированных животных,которая оцределялась путем посева из органов забитых подопытных животных на 20 сутки после заражении вирулентной культурой.Установлено,что посевы из органов шиункзированных животных аттенуированными штаммами s.abortusovis 388-I/I0, S.abortusovis 388в*гги S.abortusovis PUS

остаются стерильными,а у привитых аттеяуированным штаммом S.abortusovis Tp-IUI-I/IO и формол-тиомерсаловой вакциной заражающая культура выделялась в посевах единичными колониями из печени и . сгылеечного лимфатического узла в течение 30 суток.

Ео всех проведенных опытах на ярках по изучению иммуноген-::сст;: с.ттенуi:pоеанных штаммов S.abortusovis обращено внимание -:.:• :::';-:тогекность стаммов,которая является важным тестом оценки • ;:цг.;:ного Бтамиа.

. .Введение вакцинных штампов вызывает реакция у привитых жавот-шх, проявляющуюся местной и.общей реакциями» изменениями гуморальных и. клеточных показателей, а также иммуноморфологической перестройкой.

Местная реакция у ярок и овцематок, иммунизированных подкожно аттенуированными штаммами з.аЪогЪиас^1з 388-1/Ю, з.аЪоггиз-оПа 388 3.tr1, и 3.аЬог4пзог1з Г7ка оптимальных дозах соответст-

д о д

зенно 5*10 ,5*10 и 4«10 м.к. проявлялась воспалительными явлениями с образованием ограниченного отека (2x3 см) на месте введения. Поствакцинальные отеки рассасив^зтся в течение 3-7 суток.

Общая реакция характеризовалась незначительной угнетенностью в течение первых суток после введения аттенуированных штаммов, повышением температуры тела в пределах 0,5-1°С в течение 2-3 суток, в дальнейшем состояние животных нормализуется.

Наряду с этим реактогенность аттенуированннх штаммов з.аЪог-1шзоу1з 388згг? з.аЪоггизот±з 17 КЗ проверены на 70 ярках иу-- тем подкожного, внутрибр шинного и внутривенного заражения э дозах соответственно 2*1010,2*Ю10 и 5-К9и.к. При этой все запат.е:!-те ярки оставались живыми, тогда как ярки зараженные вирулентно.? культурой з.аЬог^зот1а 460 внутрибрвиинно и гнутризенно в дезах соответственно Ю10 и 2,5.109 ц.к. все пали (ЮСЙ).

Результаты опыта свидетельствуют о безвредности аттенуирозан-ных штаммов 3.аЪог*изоу±з 388э£гг И 3.зЬаг$и.зоу1э ГП-'З 2 Д5Й-рокачзственности вызваемых местных я общих реакций.

Кроме того,, нами проверены абортогеняне -свойства аттенуированных шташов з.аЬог^изот1з 388 3.аЪогЫ2<у»1зГ71:э г 4урМп»цг1п= 274 на 45 овцематках 3-4 месяцев суягности. Овцематки привиты подкожно оптимальными имууяйзярукгил доэзш! ответственно 5.109, 'иЮ^г-К^ц.х. В итоге опыта овцзкатха (15) иммунизированные штаммом з.аЬэПазе^з 3882ггг Еа абортировали,

а из 15 овцематок, привитых штаммом s.abortusoyisi7KS абортировало 9 (60я) и из 15 овцематок, привитых штаммомS.typhimurium 274 абортировало 2(13,3£).

От абортированных пдодов при. бактериологическом исследовании выделены . аттенущюванные штаммы. В связи с этим мы рекомендуем использовать вакцины из штамма S.abortusovis I7NS до случки.-

В сравнительных аспектах результаты серологических исследований свидетельствуют, что у ярок, привитых формол-тиомерсаловой вакциной и ат^енуированным штаммом s.abortusovis Тр-ПЛ-I/lO ;::.схунобиологические реакции выражены слабее, чем у ярок иммуни^ зированных вакцинным штаммом s.abortusovis I7HS. агглютинины накапливаются в высоких ти!рах.-Так, уровень специфических антител по РИГА на 14 и 60 сутки у ярок привитых вакцинным штаммом S. atcrtusovis I71ÏS составлял соответственно 1:1970, 1:490 (+15,7$ -13,5&), тогда как у привитых вакцинным.штаммом s.abortusovis Tp-íl¿-l/l0 тигры антител соответственно 1:700,-1:250 (+15,7%-13,52) и у привитых фсрмол-тиомерсаловой вакциной соответственно 1:600, 1:150 (7,2g-6.7#) (Р< .0,001).

Следует отметить, что'вакцинный, штамм s.abortusovis i7hs вызывает наибольшее увеличение лейкоцитов (почти вдвое) у ищу-, визированных животных к 14 дню в количестве 33,47+0,114 тыс/мкл, тогда Kai; штаммы s.abortusovis 388-I/I0, s.abortusovis 388strr, j.^bortasoris Тр-ПЛ-I/lO и формол-тиомерсаловая вакцина способ-ствуот увеличению лейкоцитов соответственно.II,.83^0,117¿ I2,34¿ 0,107; 11,12^0,153; 9,5±0,1б тыс/мкл (Р< 0,001).

Одним из наиболее доступным методом определения показателей клеточного иммунитета является выявление содержания Т-димфоцитов в периферической крови иммунизщзованных животных.

Количественную характеристику Т-лифоцитов в крови белых мышей -.'.■'.■(унизированкых аттенуированными штаммами s.abortusovis 3°Pstr^

S.abortusovis 388-I/I0, S.abortusovis 17ES в дозах подкое--lO-IO7 ы.к. и формол-тиомерсаловой вакциной в дозе подход:о С,2 с«3 до к после (7,10,14, и. 21 суток) вакцинация изучали з ке при помощи спонтанного розеткообразоваяия (Е-РОК).

Наиболее высокое относительное содержание Т-лим'оцлтоз з крови белых мышей было на 7 день после иммунизации (Р<0,05) ..Абсолютное количество розеткообразуодих клеток к этому гре:::-не всех группах достигало соответственно 2861,4^77,07; 2836^5,5; 3337,Э±52,8 и 1964-50,23 з I шел крози (Р < 0,001).

Начиная с 10 суток во всех подопытных группах происходило статистически достоверное снижение относительных и абсо-.этн^х количеств Т-лимфоцитов (Р .<Ю,001). .

. Относительное и.абсолютное количество Т-лиуфоцлтоз кгобл белых шшей иммунизированных аттениурованным штаммом s.abortusovis было несколько выше, чем у привитых штаммами s.abortua:-.-;.; 388-1/Ю и S.abortusovis . 388strr и еще больше, чем у привитых фориол-тиоыерсаловой.вакциной (соответственно тельное.- 53,3¿0,4I&, .38,34±0,28£ и абсолютное 3337,3=52,5 , 1964*50,23 в 1.мкл крови) (Р< 0,001).

Результаты, полученные в. опытах по изучения гуморального :*. клеточного иммунитета подтверждают высокую иммуногенкуэ £>:г::з-ность вакцинного шташа S.abortusovis X7KS по сравнению с д^уг.:-ми аттенуированными штаммами S.abortusovis и бормол-тиомзреа-

ловой вакциной. ......

Наряду с этим нами проводилось изучение некоторых зоптосен ишуяоморфодогии при вакцинации озец аттенуирэ^кким zc-vr't:: abortasovie I7HS . при последующем зарагенги ных смертельной дозой вирулентной культуры S.abortusovis

Подкожная иммунизация ялвотных. вакцинным штаммом s.'-i:-'-и; -ovia 17 ES не вызывает особых макроскопических

скопическая картина характеризуется значительной-активизацией системы фагоцитирущих мононуклеаров в. виде .диффузной и очаговой крупноклеточной пролиферации в селезенке» печени, легких, лимфа ти- . ческих узлах и лимфатических образованиях тонкого отдела кишечника.

. При вскрытии ярок,. иммунизированных штаммомS.abortusovis I7NS к затем заражениях вирулентной культурой s.abortusovis 460, отмечали умеренное макроскопическое изменение. При гистологическом исследовании отмечается.усиление пролиферации лимфо-гистиоцитарных элементов в селезенке,печени, наличие в лимфоузлах тонкого отдела .-•.;:печника большого числа плазматических клеток.

У иммунизированных животных, в. отличии от. .контрольных, последуп-: =с заражение вирулентной культурой не приводило к развитии патологического процесса, что подтверждается клинико-лабораторными. исследованиями и гистологическим-изучением органов от убитых ярок.

Материалы иммуно-шрфологических исследований свидетельствуют,-что вакцинный штамм s.abortusovis I7KS- обладает умеренной остаточной вирулентностью, вызывает.активную защитную реакцию-без резких патологических изменений, свойственных вирулентных культурам.

5.ПРОИЗВОДСТВЕННЫЕ ИСШТАЕИЯ ВАКЦИННЫХ ПРЕПАРАТОВ .

ПРОТИВ САЛКЮНЕЛЛЕЗНОГО АБОРТА ОВЕЦ . . .

На основании полученных положительных данных, нами проведено ;:опь-тгние аттенуированных штаммов S.abortusovis в неблагополучных г. с сальмонеллезному аборту овец хозяйствах "Республики Казахстан.

Б 1962-1985 гг в хозяйствах Алматинекой области привито однок-- атко белее 115 тысяч овцематок аттенуированными штаммами s.abor- , VjscYis 38B-I/I0 и S.abortusovis . ЗВ8 str* с положительным эффек-

По разрешению Главного управления ветеринарии Госагропрома СССР ' ;10-16 от 20.01.198бг) в неблагополучных по сальмонеллезу хозяй-: ¿:м':униз;гровано более б миллионов овец за 3-4 недели до случ-■ r:.Ku;:Hoi; из штамма S.abortusovis I7KS однократно. Поствакциналь-:, оо.-ог-кекий п случаев абортов не наблюдалось, эффективность по

сравнению с формол-тиомерсаловой.вакциной в 2-3 раза выше (Р<0,05)

Под руководством К.Б.Бияшева, с разрешения Главного управления ветеринарии Госагропрома СССР (Ж 3-6 от 29.06.89) нами бил а - - ----

апробирована на 4 миллионах овцематок вакцина из штамма Б^урЫ-гиг!ип 274, создающая гетерогенный иммунитет против сальмонеллэ-за при однократной иммунизации за 3-4 недели до или 3-4 недели после осеменения.

Результаты по сравнительному изучении эффективности вакцин из аттенуированных штаммов а.аЬэггиаоухз 17х;з И 274 убеццают, что они создаст иммунитет высокого напряжения, увеличивают выход молодняка, снижают сальмонеллоносительство, улучшают эпизоотическую обстановку хозяйств, что является основанием для широкого внедрения в ветеринарную практику.

6. вывода

1.Материалы наших исследований и данные ветбаклабораторий показывают, что причиной массовых абортов у овцематок в хозяйствах Республики Казахстан является сальмонеллез, вызываемый з основном Б.^ЬотЧизоПэ (86$).

2.Культуры з.аЬог4изот±з выделенные из абортированных плодов обладают типичным морфологическими, культурально-биохимнчес-

прцеущили

к ими и антигенными свойствами этому виду сальмонелл.

3.Вакцинные штамш з.аЬо1^иэоу±з 388-1/10, б.аЪог^з^з

7%

388 str и э.аЪог1и8ог±з ГТиэ полученные различными методами ат-тенуации обладают типичными.для з.аЪог1;изоу1з морфологическими, культурально-биохимическими, антигенными свойствами и не рсверс!?-руют при пассировании на воспреимчивнх животных (белые мыши,яр1:10.

4.При сравнительном изучении иммуногенных свойств езкц:н из

штаммов З.аЬогЪизоуЮ 171!3,3.аЬог1;цзог1з 363-1/10,3. аЪог^-СУ : ^

388э1;^ з.зЬо^ивотаз Тр-ПЛ-Ю и формол-тиомерсадовой вакцины , вакцинный штаммз.аЪо^изоу1з ГГКЭ обладет более выраженными п:.г.:у-

Еогеннымя свойствами (опыты на белых, швах,морских свинках,, ов-i цах),вызывая доброкачественную местную .и общую реакции. Штамм S. abortaeoTis I7ES приживается в организме ,5фак до 15 суток и полностью элиминируется к 20 суткам, что обеспечивает, длительное им-мунизаторное раздражение и.в то же время свидетельствует об отсуз ствии. хронического бактерионосительства.

5.Поствакцинальная реакция при введении штамма S.abortusovis I7i;s сопровождается образованием специфических агглютининов.в значительных титрах 1:1970 (+15,7^-13,5$) по.РНГА и.выраженной . иммуноклеточной реакцией (Т-клеток до 53,3*0,41$) по сравнению с вакцинными штаммами 388-I/I0,388strr, !ф-Ш1-1/10 и формол-тиомерса ловой вакциной. . .....

6.Псдтверждена эффективность гетерогенного иммунитета, создаваемого аттенуированными штаммами S.abortusovis I7HSH s.typhimu-rius 274 в отношении сальмонеллеза овец. Штамм 274 создает иммунитет более высокого напряжения как к гомологичным,так и гетероло-гичным вирулентным штаммам,, чем штамм I7KS.

7.Морфологическая.реакция при иммунизации вакцинным штаммом S.abortusovis I7HS сопровоадается диффузной и очаговой пролифе- . рацией.элементов системы фагоцитирующих ыононуклеаров в селезенке, печени,лимфатических узлах, легких,в основе ворсинок и лимфатических образованиях тонкого отдела кишечника. В ответ на заражение у иммунизированных ярок усиливается пролиферация клеток СШ, при отсутствии выраженных дисирофических и не1фобиотических процессов.

8.Подтверждена эффективность иммунизации овец живыми вакцинами против сальмонеллеза. Вакцина'из штамма S.abortusovis I7HS испытана на большом поголовье овец в хозяйствах, неблагополучных пс сальмэнеллезу. Применение вакцины снижает заболеваемость, уве-лпчпвает выход молодняка и улучшает эпизоотическую ситуацию. Эконо-

э$4ект от применения живой вакцины составляет на -I затра-

рубль 46 рублей.

7.ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРШОЕЕНИЯ . ..I, Предложен а для внедрения сухая живая вакцина против сальмо-, неллезного аборта овец из штамма з.аЪоггизо^зПЯзС^-Ю-^-К-88.Временная инструкция по изготовлении и контроле вакцины. Наставление по применении, утвервденное Главным управлением ветеринария Госагропрома СССР от 8.07.1988г).

.2,Разработана временная инструкция по изготовлении и контроля живой вакцины против сальшнеллезного аборта овец, утвержденная Главным управлением, ветеринарии Министерства сельского хозяйства и продовольствия Казахской ССР от 10.04,1991г.

. 3.Предложена рекомендация "Сальмонеллезы животных и меры борьбы", утвержденная научно-техническим Советом Госагропрома Казахской ССР от 25.12.1990г.,в которой приводится комплекс ветеря-нарно-санитарных мероприятий против сальданеллеза сельскохозяйственных животных.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИЯ

1.Тулкибаев К.А. Сравнительная иммуногенная активность атте-нуированных штаммов сальмонелла абортус овис и сальмонелла т;; муриум/Аатериалы научно-практ.конф.молодых ученых я специалист-.г Каз.НИВИ и АоВИ-Алма-Ата.-1984.-С.39-40. '

2.Тулкибаев К.А. Сальмонеллез овец //Труда Алма-Атинского к Семипалатинского зооветинститутов.-Длма-Ата.-1967.-С. 11-23.

3.Матвиенко Б.А.,Тулкибаев К.А. Иммунопрофилактика саль.то-неллезного аборта овец//Вестник с.-х. науки Казахстаяа-19£6.. С.73-76.

4.Тулкибаев К.А. Клинико-эпизотологпческое наблодеяле э»з.-:-тивности вакцинопрофилактики сальмонеллезного гборта овекУ/Т-з;^; . докл.Всесопзн. науч.конфереЕ.-Львов.-1988.-£.329.

•5,Штвиенко Б.А..Петровская З.Г.,Уаракуса и др. Технические условия "Вакцина сухая живая прэтпз е.- -ъмо:--.:-лезного аборта овец из штаьта з.аЪог*изот1з 1ТСЗ //17-10-19-1С-£=, утвержденная Глаз.упр.ветер.Госагропрома СССР 8.07.&5.-19сс.-1£с.

б.Петровская В.Г.,Матвиенко Б.А. Д'лракуса Е.Л. .ТулкпГ-аез Штамм бактерий З.аЪох^изотЗл ислользуемый для изготовлена вакцины против сальмонеллезного аборта овец//Агтореное ст-^от?.--

ство й 1490956 от I.03.1989.' " '

7.Макбузов АД.,Бияшев К.Б.,Тулкибаев К.А..Курбанова К. Изуче-. 'ние иммуногешш свойств шташов S.typhismriun 274. и S.abortusovis m:s //Тезисы докл.Респ.науч.конф.молодых ученых, и специалистов (ветеринария).-АЛма-Ата.-I990.-C...44*,

8.Бияшев К.Б.,Омаров М.лТолысбаев Б.Т.,1Улкибаев К.А. и др. Сальмонеллезы животных и шры борьбы (рекомендация)//Алма-Ата.-I99I.-42C. - ' '

9.Бияшев К.Б.,Ахметсадыков H.H..Тулкибаев К.А. Апробация живых вакцин против сальнонеллезного аборта овец// Вестник с.-х.научен Казахе тана.-I99I.-J5 2.-С.88-91." ' ' '

10.Бияшев К.Б.,Иглманов У.Й.,Нуршин К.А. .Тулкибаев К.А. Иышуно-морлодогические реакции организма животных на-введение аттенуирован-ю'х штаммов сальцокел71//Вестнш;' с. -х. науки' Казахстана-1991-£8-С.87. • И.Биясев К.Б. .Толысбаев Б.Т. .Иванова Г.М., Тулки баев К.А. Вак-цинопро*илактика салвмонеллеза животных //Тезисы докл.Всесоозн. конф. -Харьков.-I99T.-G.108-109.

I?..Бияшев К.Б..Тулкибаев К.А. Оценки иммуногенности вакцин из аттенуированных шташов саль;.;онелл//Тезисы докл.Республ.научн. гракт.конф. -Семипалатинск.-1991.-С.б. ' '

13Лакбузов а.Е. »Бияшев К.Б.;Тулкибаев К.А. и др. Комплексная '

.гнг'зация овец против аборта сальмонеллезной и хламидийной этио-лэ;'пч//Труды A3 ВИ.-Алма-Ата.-1991. -С .36-39. • •

14.Толысбазв Б.Т..Бияшев К.Б..Тулкибаев К.А. и др. Временная "н.:трукц;1я по изготовлению и контроля живой вакцины против салы:о- .

.-.-¿сс-аого аборта овец,утвержд.Глав.управ.ветеринарии МОХ и продо-::о.-ьстьия Каз.СОР' 10.04.1991.-24 с.

13.Бияшев К.Б.,Толысбаев Б.Т,.Макбузов А.1..Тулкибаев К.А. и др. Сгособ комплексной иммунизации овец против абортов сальмонеллезной и хламидпцной зтиологии/./Полокительное'реысние'на получение автор-' -:'сго'свидетельства J) 493104 2/13" от 30.03.1992;

Г;.Бияпев К.Б..Толысбаев Б.Т..Тулкибаев К.А. Вопросы иммунопро-v".лр..чвдкч садьчонеллеза животных //Сб.научных трудов Алма-Атинско-гэ и Семипалатинского зооветпнетитутов.-Семипалатинск.-I992.-C.S7-IC-I. •

17,Тулкибаев К.А. Иммуногенные свойства вакцинных штампов про-с"ьмочэллезного> аборта озец //Сб.научных трудов Алма-Атинс--огс 1: СсмгшалаткнсЕого з оо во те рин арках институтов.-Семипалатинск.

-С. 102-105.