Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Способы определения напряженности иммунитета при болезни марека

- —. ^ сг^1'

■1 О VI -

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи

РОПОНИЧ

Валентина Георгиевна

УДК: 619.616.988:578.828. И :636.5

СПОСОБЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАПРЯЖЕННОСТИ ИММУНИТЕТА ПРИ БОЛЕЗНИ МАРЕКА

Специальность: 16.00.03 — Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

САНКТ-ПЕТЕРБУРГ 1993

Работа выполнена на базе Всесоюзного научно-исследовательского ветеринарного института птицеводства. ;

Научный руководитель — доктор ветеринарных наук, профессор, член-корр. РАСХН Коровин Р. Н.

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук Придыбай-ло Н. Д.; кандидат ветеринарных наук, доцент Сонин П. Ф.

Ведущая организация — Всероссийский государственный научно-исследовательский институт контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов.

Защита диссертации состоится с.^-» 1993 г. в

/У часов на заседании Специализированного совета Д 120.20.02 при

Санкт-Петербургском ветеринарном институте по адресу: 196084, С.-Петербург, Московский прл 112.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Санкт-Петербургского ветеринарного института.

Автореферат разослан « ^ » ¿Д^/^^/СЗ 1д93 г

Ученый секретарь

Специализированного совета Шустрова М. В.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность теш. Значительный удельный вес болезни Марека среди всех форм инфекций определяет необходимость дальнейшего изучения этой нозоологической формы. Болезнь Марека продолжает наносить немалый экономический ушерб промышленному птицеводству многих стран. Интенсивные методы вцраищвания домашней птицы способствуют быстрому заражению большого поголовья при появлении болезни в хозяйстве.

Применяемая для профилактики болезни Марека вакцинация кивыми вакцинами предотвращает клинические формы болезни и гибель дти-цы, однако, она не исключает вирусоноситэльство и, следовательно, эпизоотический очаг при этой болезни на фоне вакцинации мо. кет постоянно сохраняться и поддерживаться. В хозяйстве, как по-.казали исследования, среди поголовья постоянно циркулирует полевой штамм вируса.

Эффективность вакцинации против болезни Марека зависит от обшей резистентности ятицы и состояния иммунной системы. Многими' авторами / Witter R.L. , 1987; otakj У. et al. , 1987; Коровин Р.Н., 198В; Еибинов В.И., 1987/ доказано, что при неблагоприятных условиях содержания птицы - скученность, плохой микроклимат, некачественное кормление - вакцинации малоэффективны и у птиц^ по вакцинированному фону наблюдается развитие клинических форм болезни.

До настоящего времени нет единого мнения о том, что обусловлен иммунитет к вирусу болезни Марека. Многие исследователи при' дают большое значение /Bulow е., 1983; Schat к.а. , 1982/ клеточному иммунитету в устойчивости к вирусу болезни Марека, другие /4?aune L., 1977; otakj L. , 1987/ отдают предпочтение специфическому - гуморальному. .

Не разработаны способы проверки результатов вакцинации, создался ли иммунитет в ответ на введенную вакцину и какое его' напряжение. В связи с этим разработка методов определения нацрякен-ности иммунитета при болезни Марека является весьма актуальной. Это позволит более быстро определить иммуногенныо свойства вак, цииных штаммов и, с .другой стороны, даст возможность проверить, как отреагировало поголовье при конкретных условиях на проведенную иммунизацию. Одним из путей решения этого вопроса мотет сяу-

fос, .у-; ч Су..- - • : ■

гать разработка реакций, характеризующих напряженность Т-клеточ-

ного иммунитета организма птиц.

Известно, что гиперчувствительность замедленного типа является одним из феноменов клеточного иммунитета. Оценивая ее в имму- . дологических тестах со специфическим антигеном, судят о состоянии иммунореактивности организма при инфекционных заболеваниях, вызванных возбудителями, склонными к внутриклеточному паразитиро-ваниго /Беклемешев Н.Д., 1986/. Изучению роли специфического клеточного иммунитета к вирусу болезни Марека "затрудняют отсутствие стандартных антигенных препаратов. Кроме того, решение вопроса осложняется возможным наличием в организме других видов возбудителей, которые способны вызывать иммунную перестройку и обусловливать появление неспецифических реакций.

Выяснение особенностей формирования аллергической реакции замедленного тшта при болезни Марена позволит приблизиться к раскрытию механизма иммунитета, расшифровать некоторые вопросы патогенеза и предложить аллергическую диагностическую пробу при втой болезни.

Цель и задачи исследований. Целью работы было предложить аллергическую реакцию для определения уровня клеточного иммунитета итиц, вакцинированных против болезни Марека.

В соответствии с этим были поставлены следующие задачи:

1. Изучить в экспериментальных условиях в сравнительном аспекте фитогемагглютинин (ФГА) и конканавалин (Кон А) для постановки аллергической диагностической пробы у птиц при болезни Марека.

2. Отработать в экспериментальных условиях постановку АДП и ■ дать рекомендации для ее применения.

4 3. Провести сравнительную оценку показания АЦП и морфологических изменений в лимфоидной ткани и внутренних органах у вакцинированной птицы против болезни Марека в динамике.

Основные положения, выносимые на заширт:

I. Установлены закономерности формирования гиперчувствительности замедленного типа прй внутриковдом введении ФГА и Кон А у птиц, вакцинированных против болезни .Марека. Характер реакции подтвержден динамикой формирования, ,а также гистологической картиной инфильтрата.в месте введения антигена и'изменениями, обнаруживав-

мыми'при электронномикроскопическом исследовании.

2. Гиперчувствительность замедленного типа на внутрикохное введение ФГА из Vlscum album и Кон А у птицы в возрасте 28 дней (и старше), вакцинированной против болезни Марека, является диагностическим тестом, по которому мота о судить о наличии Т-кле точного иммунитета в поствакциналышй период.

3. Развитие плазмоцитарной реакции лимфоидной ткани и внутренних органов, умеренно выраженный гранулоцитоз, псевдоацидофилия (но без нарушений в дифференциации клеток), незначительное снижение функциональной активности лейкоцитов коррелирует с динамикой гиперчувствительности замедленного типа на внутрикожное введение ФГА или Кон А в процессе формирования поствакционального иммунитета птиц при болезни Марека.

Научная новизна и теоретическая ценность работы. Установлены закономерности формирования гиперчувствительности замедленного типа на внутриконщое введение ФГА и Кон А при вакцинопрофилакти-<е против болезни Марека у птиц; Характер реакции подтвержден ди-замикой формирования, а галке гистологической картиной инфильтрата на месте введения антигенов и электронномикроскопическим ис~ . :ледованием. Всесторонне охарактеризованы особенности формирова-гая ГЗТ к ФГА из Viscum album и Кон А у птиц, вакцинированных [ротив болезни Марека. Показано, что интенсивность ГЗТ зависела it дозы, способа введения, времени, прошедшего с момента иммуни-ации, состава вакцинных препаратов, а такте от физико-химических войств самих антигенных препаратов. Отобранные препараты обда-ают выраженной противоопухолевой активностью.

Показано, что развитие плазмоцитарной реакции лимфоидной ткани •внутренних органов (тимус, фабрициева бурса, селезенка), уме- ' знно выракеннш'З гранулоцитоз, псевдоацидофилия и незначительное Жжение функциональной активности клеток лейкоцитов перифериче-шй крови коррелирует с динамикой гшерчувствительности замед-)нного типа на внутрикожное введение ФГА и Кон А в процессе формования Т-клеточного поствакцинального иммунитета птиц при бо-зг?я Марека. ■

Установлено, что по„ влиянием высот-опатогенного штамма вируса лезни Марека 813-1 наблюдается изменение иммунного статуса оргазма птиц, которое выраетется супрессией эффекторных механизмов

Т-клеточного иммунитета.

Впервые для оценки напряженности Т-клеточного поствакцинального иммунитета при болезни Марека у птиц, вакцинированных моно- в/или полиштаммной вакциной, использован Кон А и до- . казана его эффективность и возможность применения в производственных условиях.

Практическое значение работы. На оснований проведенных экспериментальных и производственных исследований для оценки напряженности Т-клеточного поствакцинального иммунитета при болезни Марека в птицехозяйствах, где применяют вакцины из ВШ (вируса герпеса индеек), отобран ФГА из \пасит а1Ьиш ; в птицехозяйствах, где применяют полиштаммные вакцины, содержащие в своем составе аттенуированный штамм вируса болезни Марека, предложено использовать Кон А при постановке АДП.

Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на научно-производственной конференции молодых ученых и специалистов ШИВИП "Ветеринарные проблемы птицеводства" (Ленинград, .1990 г.); на научной конференции профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов Ленинградского ветеринарного института "Актуальные проблемы ветеринарии" • (Ленинград, 1991 г.). '

Публикация научных исследований. Основные полокения диссертации опубликованы в трех печатных работах.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 132 страницах машинописного текста;и состоит из введения, обзора литературы, собственвдх исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, рекомендаций производству, списка использованной литературы. Список литературы включает 162 источника, в том числа ВО работ отечественных авторов и В2 - зарубежных, работа иллюстрирована 18 рисунками и 15 таблицами.

2. 'СОБСТВЕННЫЕ ИССВДОВАНШ .

2.1. Материал и методы исследования

Экспериментальную часть работы проводили в лаборатории опухолевых болезней птиц и виварии ШКВИП совместно с сотрудниками лаборатории, по принятой в институте программе. Производственные . исследования проводились на птицефабрике Ленинградской области.

Опыты проводились на пище породы белый леггорн, полученных из птицехозяйств Ленинградской области и благополучных по инфекционным заболеваниям птиц. В опытах использовали цыплят I-I20- ; дневного возраста. Опытную и контрольную птицу подбирали по принципу аналогов, содержали в изолированных боксах в клетках на . сетчатом полу.-

Для индукции гиперчувствительности замедленного типа к вирусу болезни Марека лимфокины вводили внутридермально по 0,1 мл в область правой сереяки. Левая слуншла контролем, в нее вводили 0,1 мл ФР. С целью отработки эффект-дозы для ФГА из Vieoum album и Кон А исследования проводили на СШ-цыплятах. В некото' рых опытах использовали внутривенное введение лимфокинов.

Для изучения формирования ГЗТ в сравнительном аспекте при постановке АДП птиц в суточном возрасте вакцинировали различными вакцинными препаратами - коммерческой вакциной Курской биофабрики, приготовленной с использованием ВГИ и бивалентной вакциной ШИВИП, содержащей в своем составе ЗШ и аттеяуированныи штамм ■ВЕМ. • •

Для моделирования тякелой клинически выраженной формы болезни Марека цыплятам двухнедельного, возраста внутримышечно вводили ВЕЛ штамм PB-I в количестве 800-1000 4>0Е на голову в дозе 0,5 мл однократно. Для изучения влияния факторов риска развития болезни Марека на формирование' гиперчувствптельности замедленного типа цыплятам вводили высокопатогенный'штамм ЗШ PB-I и аттенуирован-ный вакцинный штат C7I-9S8. Дозы были подобраны сотрудниками лаборатории^ предварительных-опытах.

С целью изучения воямонносты. развития инфекционного процесса и проведения сравнительной оценки показаний гиперчувствительности замедленного типа .и.морфологических изменений в лимфощшой

ткани и внутренних органах птицу выборочно забивали и производили гистологический анализ изменений внутренних органов: тимус, фабрициева бурса, селезенка.

В условиях эксперимента на цыплятах для исследования состояния клеточного иммунитета использовали fotpaad -тестирование. Тестирование проведали следующим образом. Цтице, вакцинированной против болеенп Марека, в правую сережку вводили антигенные препараты в различных дозах (объем инъекции - 0,1 мл), а в левую серекку - 0,1 мл ФР. Через 24 часа (части опытов через иные временные прометку тки) производили учет реакции по результатам макро-/ визуальной оценки/ и микроскопических исследований кожа сережки в месте введения препарата. Рассчитывали интенсивность реакции, индеко увеличения серекки.

Для дифференциации гшюрчувстштельности замедленного типа о неспецифической реакцией и исключения реакций, обусловленных дру-' гими иммунными механизмами, оценивали гистологическую и электрон-номикроскопическое подтвераденш картины инфильтрата, развивающегося в разные промекутки.времени после введения антигена. С этой целью отсеченные серекки цыплят фиксировали.в 10$ растворе формалина, затем декальцинировали в течение 7 суток. Оптимальные условия декальцинации были отработаны в предварительных опытах.-. Препараты для микроскопических исследований приготовляли общепринятыми методами.

При изучении лейкоцитарного профиля периферической квови, кроьь для исследованил в первые дни кизни у цыплят получали при надрезании "подушечки третьей фаланга большого пальца, а у птиц старшего возраста - из-под крыльцовой вены.

Количество лейкоцитов определяла общепринятым методом в камеру Горяева. ;

Определение количества Т- и В-лимфоцитоа проводили согласно ' пародических рекомендаций, предложенных В.Г.Морозов1ш и ВД.Ха-

венсевом /I98U/, с последующей фиксацией розеткообразуюшш: яле-сок раствором глртарового альдегида.

. Функциональное состояние лейкоцитов определяли в реакции тор-ыоканид миграции лейкоцитов по общепринятой.меводике.

•Все результаты исследований обрабатывали, применяя метода вариационной статистики. Достоверность различий устанавливали при помощи I/ —критерия.

2.2. Экспериментальное изучение закономерностей формирования гиперчувствительности замедленгвГ0 типа к вирусу болезни Марека

Гиперчувствительность замедленного типа имеет своп отличительные особенности развития как от момента иммунизации, так и при постановке кокных проб. Вместе с тем сходную динамику во времени после введения специфического тест-антигена могут иметь- реакции ' Джонса-Моута и поздняя фаза 1НТ. Поэтому на первом этапа работы было предпринято изучение возникновения ГЗТ у вакцинированной и внтактной птицы, проведены гистологическое и электронномикроско-пическое исследование характера реакции. Такая полная характеристика ГЗТ, развивавшаяся у вакцинированной птипы против ЕМ с использованием препаратов, содержащих в своем составе ВГИ или вма-' сте о аттенуированным штаммом ВШ, после внутриковдого введения ФГА практически не использовалась, а Кон А применен в таком исследовании впервые.

Первоначально изучили динамику развития ГЗТ в зависимости от времени, прошедшего с момента введения цыплятам 1000 ФОЕ ВШ в 0,2 мл ФР внутрйбршинно. В результате проведенных исследований установлено, что на 7 сутки после вакцинации у птицы величина отека серекни достоверно отличалась от контрольной группы и была достаточно выраженной. Наиболее выраженная реакция проявляется через 28 дней после вакцинации. К 90 дням отмечалось снижение интенсивности реакции на аллерген. Динамика развития реакции: раннее возникновение, постепенное ее нарастание и плавное-угасание характерно для ГЗТ.'

Установлено, что при подавлении ГЗТ к ФГА на 45 день в лим-фоидных органах птиц, экспериментально зараиенных высокопатогеп-ным штаммом ЕБМ, при гистологическом исследовании тимуса, фабрн-циевой бурсы; селезенки обнаруживали морфологические изменения, характерные для острого течения болезни Марека.• Период формиро- . вания иммунной зашиты у птиц совпадал со временем максимального 1 реагирования КР$ к ФГА. ".

■ Следующим этапом было изучение динамики развития реакции в зависимости от времени, прошедшего с момента введения антигенов. Установлено, что через 1,5 -3-6 часов как у иммунных, так и у

ингакгных птиц имел место выраженный отек сережек, что, по-видимому, можно объяснить неспецифическим, в том числе токсическим, воздействием антигена на ткани в месте его введения. В ю не время, достоверное отличие показателей у опытных птиц от контрольных через 45 минут можно объяснить развитием у первых ишерчувствительности немедленного типа. К 18-24 часам интенсивность реакции у вакцинированной птицы возрастала и сохранялась до 36 часов в отличие от интактных птиц, у которых к атому времени реакция исчезала.

Известна вависимость выраженности иммунного ответа от дозы и способа введения антигена, поэтому исследовали интенсивность ШГ К ФГА И» Faeeolus vulgaris , ФГА ИЗ Visoum album , Кон А ИЗ Сапа-walia enaiformis , pa 28 сутки при введении ФГА и Кон А' в разных дозах внугридермально и внутривенно. Установлено, для выявления ГЗТ у вакцинированной против БМ птицы нужно использовать ФГА из Viscum alburn НПО "ФАРМАХИМ" в дозе 100 мкг, Кон А 50 мгк. Лучшим способом введения антигенных препаратов является'внутрикож-ный.

Для уточнения природы реакции было проведено гистологическое исоледование инфильтрата, развивающегося в меоте введения антигенов. Гистологическая картина свидетельствовала о развитии,сильного отека на ранних стадиях (6-8 часов) как у вакцинированной, ®ак и у интактной птицы. Через 24 часа у вакцинированной птицы мошвый клеточный инфильтрат состоял И8 мононуклеарных клеток о примесью гистиоцитов, причем основные скопления клеток располагались вблизи сосудов. Через 24-36 часов клеточная инфильтрация вначительно уменьшилась и переваскулярное скопление малых лимфоцитов через 48 часов практически исчезло.

♦ При э л е к тр он н оыикр о ск оп и ча ск ом исследовании отмечали большое количество малых лимфоцитов в' пе'рипосткапиллярной инфильтрации о признаками дегенерации. Моноядерные клетки имели ворсинки и образовывали маленькие группы из 2-6 клеток, которые, сливаясь, образуют гигантокую клетку. Постепенно гигантские клетки и моно- . нуклеары исчезают и их мест.о через 48-96 часов' занимают крупные фибробласты. При электронномикроскопическом исследовании'установлено; что изменения происходят в, ооновном в Т-лимфоцитах.

28. 24 20 16 12

8 4

b—4-Ц''

21 28

По оои абодиод^г орошг наблюденияоои ординат - интек-т

Рио.1. Динамика развития ГЗТ к ФГА в завиоимооти от времени, прошедшего о момента иммунизации цыплят. По оои абсциоо - '

сивнооть I3T {%) Сплошная линия - опытная группа, пунктирная - контрольная,

■ ж - знак, отмечавший величины, дооговерно отличаюшэоя ог контрольных (p^O.OI)

24 20 16 12

' 8. 4

Рио,2.

1,5

9 12

VA

.24

7А

48 Часы

Динамика развития ГЗТ к ФГА а вависпыооти от времени, прошедшего о момента введения антигена. По оси абсциод - сроки наблюдения; по оси ординат - интенсивность ГЗТ {%)

Сплошная линия - опытная группа, пунктирная - контрольная,

х - знак, отмечавший величины, достоверно отличавпшаоя от контрольных ($¿0,01)

Наибольшая интенсивность ПЗТ обнаружена у птиц, которых вак-, цинировали бивалентной вакциной, как на внутрикокное введение ФД из vi a cum album , так и Кон А. При ВТом величина реакции достоверно отличалась от результатов группы цшлат, обработанных коммерческой вакциной Курской биофабрики.

В результате проведенных исследований установлено, что у птиц на 7-75 сутки нооле вакцинации против болезни Марека формируется ГЗТ, которую можно определить при поыош кожнореактивного факто- . ра - теста о ФГА иэ viscum album , Кон А. Характер реакции под-твервден динамикой формирования, характером гистологической картины инфильтрата в месте введения антигена, электронномикроскопи-ческин исследованием.

' ' . ' I '

2.3. Исследование способности, различных митогенов .выявлять ГЗТ у вакцинированных против болезни Марека птиц, зараженных высокопатогенным штаммом

В результате проведенных исследований установлено, что ФГА как отечественного, так и зарубаетого производства, обладает одинаковой способностью выявлять ГЗТ у вакцинированных птиц при использовании препарата, содержащего ВП1, в то время, как у птиц, обработанных вакциной, содержащей аттенуированный штамм ВБМ, их. антигепные свойства проявляются значительно ниже, при этом пока-' затели достоверно отличаются от контроля.

Кон А обеих фирм-изготовителей (фирмы " Serva ", фирмы " Farmacia") способен тестировать ГЗТ в группах цыплят, обработанных вакциной, приготовленной с использованием атгенуированного штамма вируса болезни Марека. В то же время дозировка вффект-дозы у этих препаратов была различна. В производственных условиях Кон А не проявлял своих специфических свойств, что дает основание предположить о его избирательной способности эффекторных механизмов реагирования непосредственно о вирусом БМ.

Цри изучении повышенной чувствительности у вакцинированных и экспериментально зараженных цыплят, было выявлено, что ГВТ почти отсутствовала в группе цшлят, зараженных высокопатогенным штаммом вируса болезни Марека и. вакцинированных коммерческой вакциной, а ее показатели в группе цшлят, вакцинированных бивалентной вак-

циаой, практически мало отличались от результатов, полученных у интактвых птиц.••

Иэучая активность лейкоцитов под влиянием ФГА и Кон А в реакции тормокения миграции лейкоцитов установили, что в группе цыплят, вакцинированных бивалентной вакциной, Кон А обладал способностью выявлять функциональную активность лейкоцитов значительно выше, чем ФГА (совпадение результатов кокного тестирования с наличием ответа лейкоцитов ln vitro наблюдали в 53$ случаев). Ус-•тановлено, что использование ФГА и Кон А в реакциях тормокения миграции лейкоцитов не позволяло получить однозначные результаты у здоровых птиц, что свидетельствует о необходимости дальнейшего изучения особенностей культивирования-отвечаецосги на антигены ФГА и Ков А в условиях искусственного культивирования.

Цря изучении количественных изменений периферической крови в динамике развития острого течения ЕМ у экспериментально зараженных цыплят установили увеличение лейкоцитов крови укв на 21 день эксперимента (отмечали увеличение количества лимфоцитов и снижение псевдоэозинофилов). , ,

1 Взаимосвязь клзточного иммунитета и резистентности организма к болезни Марека изучали на модели ГЗТ я ФГА. Для этого выбрали 21-28 сутки после иммунизации птиц вакцинными препаратами, приготовленными с использованием ВГИ или ВЕМ. Для моделирования острого течения болезни Марека птицу заракала высокопаюгеннын штаммом вируса болезни Марека разных пассакей (RB-I). С этой целью ГЗТ выявляет в комом госте с ФГА, Коа А. Течение инфекционного процесса оценивали по скорости подавления ковао-реактивного фактора, по характерным клиническим признакам при болезни Марека, ' количеству павших животных в опытной и контрольной группе, нроме того проводили выборочно убой птицы и проводили гистологические исследование вачнёйших органов иымуаогенеаа (тимус, фабрициева бурса, селевевка).

. При заражении пищ вирусом ВВ~1 (I-П пасса») как у интактных, так и /'иммунизированных птиц развивается остров течение болезни Марена. Таи, еслп у иммунизированных птац бивалентной вакциной па 21 день после заражения отреагировало при КР-тесгнровании с ■ ФГА лз viecum ааъии яоголовья, то у цнтактпых в 30$, а к

28 дню - 8О/С ж 23$ случаев соответственно. Таким образом, отмечено ревкое подавление Т-кдагочного иммунитета у интактной птицы. У птиц, положительно реагируших, отмечали опухание сережки. При этом' опухание иногда дополнялось индурацией тканей. Визуально такая сережка увеличивалась в размере в 2-4 раза больше, чем контрольная. Количественное измерение сережки о помотью штангенцир-1 'куля, до и после постановки реакции покааало, что ее толшина до, инъекции колебалась 1,.901±0,2 мм. После введения антигена сережка опухала более,' чем на 0,45 мм. Гистологически такие сережки характеризовались- воспалительными инфильтратами (периваскулярной и янтерстициальной инфильтрацией) соединительной и жировой ткани сережек различной интенсивности. •

j ' Таблица I

Процент положительно реагирующей птицы на внутрикожное введение ФГА из Visoum album

Дни тестирования ГЗТ

Группа

21 28 35 45 ' 60"

Птица экспериментально заражена ВБМ штамм RB-I I пассаж

Интактная птица 18 17 12 9 7

Птица, вакцинированная бивалентной вакциной 58 62 59- 59 60

Птвца, вакцинированная коммерческой вакциной 29 30 ;30 29 29

Птица экспериментально заражена ВБМ штамм RB-I П пассаж

Интактная птица -23 24 ' • 23,7 20,4 17

Птица, вакцинированная бивалентной вакциной 79 80 81 68 75

Птица, вакцинирован- " ная коммерческой вакциной 39 40 ' 41 33 . 35

Полученные результаты коррелируют с данными' патадогоанатоми-ческого вскрытия и морфологическими изменениями в лимфоидных органах. Результаты проведенного опыта показали, что под влиянием патогенного штамма ЕБМ наблюдается изменение иммунологического статуса птицы, выражавшееся супрессией эффекторных механизмов клеточного иммунитета, которая развивается независимо от возраста.

Вакно отметить, что напряженность клеточного иммунитета у птиц, вакцинированных бивалентной вакциной, содержащей в своем составе аттенуированный вирус болезни Марека, несомненно выше.

Полученные данные свидетельствуют, что ГЗТ на внутрикокное введение ФГА из Viacum album в возрасте 28 дней (и старше) у вакцинированной птицы против болезни Марека является диагностическим тестом, по которому мовдо судить о наличии Т-клеточного поствакцинального иммунитета.

2.4. Морфологические особенности в лимфоидных органах при оотром течении болезни Марека

В процессе эксперимента наблюдали слокные морфологические и гистохимические изменения в лимфоидной ткани. Для центрального иммун и ономпетентного органа характерно развитие ограниченных оо-судаотых реакций с накоплением лимфобластов в корковой и мозговой зонах тимусных долек. Клетки плазмоцитарного ряда встречаются редко. Первоначально морфологическая перестройка, происходит в-мозговом слое, постепенно в патологический процесо вовлекается корковая область тимусных долек. -

При развитии острого течения болезни Марека происходит постепенно нарастающая дифферэнцировка лимфоидной ткани фолликулов фабрициевой бурсы, при этом в процесо вовлекаются практически все лимфоидные клетки. Однако плазмоцитарная дифференцировка лимфоцитов в фолликулах бурсы происходит в более поздний период do— лэзни Марека, чем в лимфоидной ткани тимуса.

В селезенке также отмечали последовательность морфологических изменений. Первоначально изменения происходили в зародышевых центрах.. Одновременно идет процесс нараотания бласттрансформащш. и

плазмоцитарной дифференцирован в периартериальных зонах белой пульпы, постепенно в процесс морфологической перестройки вовлекается большая часть паренхимы белой пульпы.

Ве'сь слокный комплекс морфологических изменений лимфоидной ткани вавнейших органов иммуногенеза при остром течении болезни Марека у пищ свидетельствует о том, что в первую очередь происходит нарушение Т-клеточных звеньев иммунитета.

ВЫВОДЫ''

•I. При внутриковдом введении ФГА и Кон А у птиц, вакцинированных против болезни Марека, развивается гилерчувствительность за- , медленного типа. Установлены закономерности формирования ГЗТ.

Характер'реакции подтвержден динамикой развития и гистологяче- . ской картиной инфильтрата в месте введения, электронномикроскопи- " ческим исследованием.

I2. Под влиянием патогенного штамма вируса болезни Марека наблюдается изменение иммунного статуса организма птицы, которое выражается супрессией•эффекторных механизмов Т-клеточного иммунитета.

3. Гиперчувствительность замедленного типа иа внутрикокное введение ФГА из Viscum album в возрасте 28 дней (и старше) у вакцинированной птицы против болезни Марека является диагностическим тестом, по которому моязо судить о наличии Т-клеточного иммуните-' та в поствакцинальный период. .

4. Кон А является антигеном, способным выявлять напряженность Т-клеточного иммунитета у цыплят, вакцинированных против болезни Марека аттенуированным штаммом вируса болезни Марека.

5. Развитие плазмоцитарной реакции в лимфоидной ткани и изменения во внутренних органах; умеренно выраженный гранулоцитоз, псевдоацидофилия (но без "нарушений в дифференциации'клеток), не-.-

•• значительное сникение функциональной активности лимфоцитов периферической крови.коррелирует с динамикой гиперчувствительности замедленного типа на внутрикокное введение фитогемагглютинина и кон-канавалина в процессе формирования поствакцянального иммунитета.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для оценки напряженности Т-клеточного поствакцинадьного иммунитета у птиц, вакцинированных против болезни Марека, в возрасте 28 дней (и старше) рекомендуется проводить кокнореактивный фактор-тест о ФГА из Visoum álbum в дозе 100 мкг/0,1 мл физиологического раствора на голову.

Учет реакции производить через 24 часа.

2. У птиц, вакцинированных против болезни Марека препаратом, приготовленным с использованием аттенуированного штамма вируса болезни Марека, оценку напряженности Т-клеточного поствакцинального иммунитета рекомендуется проводить кокнореактивным фактор-тестом на внутрихожное введение Кон А в дозе 50 мкг на голову.

Учет реакции производить через 18-24 часа.

Стоон опубликованных работ по теме диссертации

1. Николаева И.П., Вихрева И.Н. ..Левчук О.Я,, Геращенко В.Г. Изучение культуралышх свойств апатогенного штамма вируса болезни Марека // Современные средства и методы борьбы с заразными болезнями сельскохозяйственных птиц: Сб.научных тр.ШИВИП. Ломоносов, 1988. - 4.1. - G. 51-55. '

2. Ропонич В.Г. Одан из методов оценки напряженности клеточного имц/нитета кур при болезни Ыарзка // Ветеринарные проблемы птицеводства: Тез.докл.научн.-производств.конф.мол.учен. и спец. -Л., 1990, о.32-34.

3. Ропонич В.Г. Оценка напряженности клеточного иммунитета кур ■при .болезни Марека с применением лвкттов для индукции кожнореак-■ тинного фактора // Актуальные проблемы ветеринарии: Тез.докл.

научн.конф.проф.-прел.состава, научн.сотр. и аспир.Ленингр.вет. ин-та. - Л., 1991. - С.78-80.