Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Спонтанный амилоидоз у низших обезьян

На правах рукописи

Науменко Елена Станиславовна

СПОНТАННЫЙ АМИЛОИДОЗ У НИЗШИХ ОБЕЗЬЯН (ПАТОЛОГИЧЕСКАЯ АНАТОМИЯ, НЕКОТОРЫЕ ВОПРОСЫ ПАТОГЕНЕЗА).

16.00.02 - Патология, онкология и морфология животных.

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Ставрополь— 2004

Работа выполнена в Государственном Учреждении Научно-исследовательском институте медицинской приматологии РАМН

Научный руководитель: доктор медицинских наук, старший научный сотрудник Крылова Римма Ивановна

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Боташева Валентина Салиховна кандидат биологических наук, Бондарь Елена Васильевна

Ведущая организация: Кубанский государственный аграрный университет

Защита состоится « 24 » сентября 2004г. в 14.30 ч на заседании диссертационного совета Д. 220.062.02 в Ставропольском государственном аграрном университете по адресу: 355017, г. Ставрополь, пер. Зоотехнический, 12.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ставропольского государственного аграрного университета (г. Ставрополь, пер. Зоотехнический, 12).

Автореферат разослан оО^ 2004г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Квочко А.Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Изучение вопросов общей патологии в сравнительном аспекте является чрезвычайно перспективным для понимания закономерностей возникновения патологических реакций в филогенезе. Особенный интерес представляют исследования на обезьянах - животных, наиболее близко стоящих к человеку по своим анатомо-физиологическим особенностям и вследствие этого широко использующихся в биологии и медицине в качестве экспериментальных. Знание спонтанной патологии обезьян является непременным условием адекватной оценки результатов эксперимента, так как всегда стоит вопрос дифференциации спонтанных патологических процессов, нередко имеющих место у обезьян, от патологии, обусловленной характером экспериментального воздействия. Изучение спонтанной патологии необходимо также и для безопасной работы с этими животными, так как известно, что обезьяны могут быть источником опасных нередко смертельных заболеваний человека (геморрагические лихорадки Марбург, Эбола желтая лихорадка, герпес В вирусный энцефаломиелит и другие), так как возбудители этих заболеваний у людей являются агентами обезьян.

Для современной экспериментальной медицины характерно использование альтернативных экспериментальных моделей не только на культурах тканей, в режиме компьютерного моделирования, но и в виде использования спонтанных заболеваний животных, в частности обезьян, в качестве аналоговых моделей соответствующей патологии человека, так как сходство филогенеза человека и обезьян определяет и сходство реагирования на однотипные факторы.

Изменение климатических условий, принципов питания, ограничение подвижности в связи с отсутствием необходимости поисков и добычи пищи, увеличение продолжительности жизни, а также некоторые другие моменты способствуют возникновению ряда патологических процессов у обезьян, ранее не описанных или встречавшихся весьма редко. К группе этих заболеваний следует отнести в частности амилоидоз.

Амилоидоз - стромальнс—сосудистый диспротеиноз, характеризующийся отложением в межуточной ткани амилоида, что приводит к атрофии паренхимы и функциональной недостаточности органов. Эта патология весьма актуальна для человека в настоящее время

I РОС НАЦИОНАЛЬНАЯ

1 БИБЛИОТЕКА

1 оТЖ^

в связи с ее учащением, трудностями диагностики и терапии. Учащение амилоидоза связано, в числе прочих причин, с увеличением продолжительности жизни человека.

Исследователи в приматологических центрах в последние десятилетия столкнулись с учащением амилоидоза у обезьян разных видов. Причины этого явления интенсивно изучаются, и одна из них несомненно связана с увеличением продолжительности жизни обезьян в неволе и возрастанием популяции старых обезьян. Амилоидоз у обезьян является одной из причин гибели, что препятствует эффективности разведения обезьян в неволе и в то же время может быть использован в качестве естественной модели амилоидоза человека.

На. территории бывшего СССР одним из первых в мире был создан приматологический центр в Сухуми, традиции научных исследований которого продолжаются в Институте медицинской приматологии РАМН (Сочи). У павианов гамадрилов Сухумского питомника, одного из старейших в мире, по-видимому, ранее всего было отмечено учащение этого процесса, приобретшего в 80-х годах прошлого столетия характер энзоотии. Не стали исключением и макаки адлерского питомника, среди которых амилоидоз регистрируется на вскрытии с частотой 0,2-37% в зависимости от возраста.

Данная работа посвящена подробному патоморфологическому изучению спонтанного амилоидоза низших обезьян на материалах сухумского и адлерского питомников.

Целью работы явилось сравнительное изучение патологической анатомии спонтанного амилоидоза у разных видов обезьян, его распространенности и роли некоторых факторов в патогенезе. Учитывая многообразие форм амилоидоза обезьян, предстояло выяснить возможность использования этой спонтанной патологии обезьян в качестве модельного процесса при изучении проблем патогенеза и терапии амилоидоза человека.

Задачи исследования:

1. Изучить по материалам морфологического исследования распространение амилоидоза у разных видов, в разных возрастных группах обезьян сухумского и адлерского питомников;

2. Описать патологическую анатомию амилоидоза у разных видов обезьян;

3. Провести сравнительную характеристику данной патологии обезьян- и человека с использованием современных методов идентификации различных форм амилоидоза;

4. Выделить морфологические формы амилоидоза обезьян, перспективные в плане возможности использования как модельного процесса для изучения амилоидоза человека.

Научная новизна.

Исследование вносит вклад в проблемы эволюционной и сравнительной патологии: показано, что один из самых распространенных и весьма древний вид мезенхимального диспротеиноза — амилоидоз - часто имеет место и у обезьян, которые ранее в этом плане представляли исключение в мире животных.

В работе впервые представлены данные по исследованию 461 случая амилоидоза четырех видов обезьян, собранные на протяжении 20 лет в сухумском и адлерском приматологических питомниках. В результате исследования выявлены видовые и возрастные особенности органопатологии амилоидоза у обезьян 4 видов. Это дополняет наши знания о спектре патологии этих животных и позволяет совершенствовать методы содержания и разведения обезьян в неволе.

Проведено сравнительное изучение амилоидоза обезьян и человека, что позволяет судить о некоторых аспектах эволюционной патологии. В частности, имеет место не только сходство патоморфологических особенностей амилоидоза у эволюционно близких человека и обезьян, но и идентичность некоторых амилоидогенных белков, выявленная при иммуногистохимическом типировании отдельных форм.

Впервые проведена идентификация некоторых вариантов откладывающихся амилоидных белков у обезьян с помощью использования моноклональных антител (к и X) к фрагментам легких цепей иммуноглобулинов, входящих в состав амилоидных отложений при первичном амилоидозе и к амилоиду А человека, характерного для вторичного амилоидоза.

Практическое значение.

Проведенные исследования показали, что у некоторых видов обезьян наблюдаются такие же, как и у человека, формы амилоидоза, и поэтому спонтанно возникающая патология обезьян может служить адекватной моделью для изучения амилоидоза человека С точки зрения охраны животных, а также по экономическим соображениям использование спонтанных заболеваний в качестве модельных процессов более целесообразно и перспективно в сравнении с искусственным моделированием процесса.

Сходность в процессах отложения амилоида в тканях и его белкового состава при первичном и вторичном амилоидозе позволяет рекомендовать для типирования многих видов амилоидных белков обезьян использование реагентов, применяющихся в медицинской практике.

Клинически амилоидоз у человека довольно трудно диагностируется, а средства имеющейся терапии мало эффективны. Поэтому перспективным является использование обезьян для выделения факторов риска, способствующих развитию амилоидоза, а также для разработки методов ранней диагностики и оценки эффективности действия создаваемых терапевтических антиамилоидных препаратов.

Достоверно показано увеличение частоты возникновения амилоидоза у обезьян с возрастом, что является характерным и для пожилых людей. Это позволяет рекомендовать обезьян старших возрастных групп в качестве экспериментальных животных при испытании геропротекторов, активно используемых для продолжения социально активной жизни старших возрастных контингентов, на наличие профилактического и лечебного антиамилоидного действия;

Более детальное знание возможных причин возникновения амилоидоза, клинических проявлений и последствий этого заболевания может быть полезным для работников зоопарков, цирков и просто людей, имеющих обезьян в качестве домашних любимцев.

- Основные положения, выносимые на защиту.

1. При сходстве амилоидоза павианов гамадрилов и макак по характеру отложений белка в органах и тканях, его тинкториальным свойствам и особенностям электронно-микроскопической структуры имеются различия в органопатологии: у павианов преобладающей формой является амилоидоз почек, у макак - амилоидоз печени.

2. По иммуногистохимической характеристике амилоидоз обезьян относится преимущественно к АА амилоидозу.

3. Имеется морфологическое сходство амилоидоза обезьян и амилоидоза человека, что позволяет использовать амилоидоз обезьян в качестве модельного процесса при изучении патогенеза, разработке критериев диагностики этого процесса, а также оценки терапевтической эффективности антиамилоидных препаратов.

Апробация диссертации.

Материалы диссертации докладывались и обсуждались на Российской конференции «Организм и окружающая среда жизнеобеспечение и защита человека в экстремальных условиях», Москва, 26-29 сентября 2000. Апробация проведена на ученом совете ГУ НИИМП РАМН, г. Сочи - Адлер, 30 декабря 2003 года.

Публикации: По материалам диссертации опубликовании 4 печатных работы.

Объем и структура диссертации: работа представлена на 117 страницах компьютерного текста (Microsoft Word) и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение, выводы и практические рекомендации, список литературы. Материалы диссертации иллюстрированы 28 рисунками и 6 таблицами. Библиографический указатель включает 120 источников.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы исследования Объекты исследования

Исследование выполнено на материале аутопсий обезьян сухумского и адлерского питомников, погибших или умерщвленных в связи с неизлечимыми заболеваниями или с целью экспериментального исследования.

Подавляющее большинство исследованных животных составили акклиматизированные обезьяны, считающиеся таковыми, если родились в питомнике или прожили в нем более трех лет после привоза. Для исследования использовали материалы текущих вскрытий, а также архивные патологоанатомические материалы (фиксированные кусочки органов, парафиновые блоки, гистологические препараты) и данные клинического наблюдения (карточки развития обезьян и истории болезни).

Распространенность и характер амилоидоза у обезьян изучали преимущественно по данным патоморфологического исследования. Были проанализированы результаты 9670 вскрытий обезьян пяти видов, погибших в сухумском и адлерском питомниках за период с 1981 по 2002 год включительно. В видовом отношении материал распределялся следующим образом:

Павианы гамадрилы

(Papio hamadiyas) 2387 (в т.ч. 2022 - архивный материал)

Макаки резусы . (Macaca mulatta)

Макаки яванские (Macaca

fascicularis)

Макаки лапу нд еры

Мартышки зеленые

(Macaca nemestrina)

(Cercopithecus aethiops)

5220 (в т.ч. 3842 - архивный материал)

1291 (в т.ч. 136 - архивный материал)

428 (в т.ч. 125 - архивный материал)

344 (в т.ч. 220 - архивный материал)

Так как в результате проведенного анализа у зеленых мартышек амилоидоз обнаруживали крайне редко, этот вид обезьян в дальнейшем исследовании не учитывался.

Методы исследования

Клиническое исследование. Для сопоставления результатов клинического и патологоанатомического исследований была прижизненно изучена группа обезьян, выделенная в группу риска по амилоидозу по наличию следующих данных: возраст старше 15 лет, низкая упитанность, разреженный шерстный покров, нарушения двигательной функции, увеличение печени и хронические заболевания кишечника, сопровождающиеся периодической диареей. Всего для наблюдения было отобрано 20 павианов гамадрилов (7

самок и 13 самцов), 10 макак резусов (2 самца и 8 самок). Павианов наблюдали в сухумском питомнике, результаты были проанализированы по данным историй болезни (период наблюдения составил от 3 мес. до 3 лет) и протоколам вскрытий обезьян, погибших в этот период.

Макак наблюдали в адлерском питомнике от трех месяцев до двух лет. Отобранные животные содержались в индивидуальных клетках. Рацион питания был обычный -брикетированные и сочные корма. Специальных средств терапии и профилактики амилоидоза не применялось. Лечение проводилось симптоматическое.

Исследование включало обычное клиническое обследование: аускультацию, перкуссию, пальпацию внутренних органов, изучение морфологии и биохимии крови, определение белкового состава сыворотки крови методом электрофореза в полиакриламидном геле, клиническое исследование мочи (на время обследования обезьяны отсаживались в метаболические клетки).

В динамике изменения в печени прослеживались на биоптатах, взятых у двух макак резусов с выраженной гепатомегалией. Биоптаты печени получали с помощью иглы Менгини под кетамингидрохлоридным наркозом (10 мг на 1 кг массы тела).

Патоморфологическое исследование. Вскрытие погибших обезьян проводилось по общепринятой методике. Для гистологического исследования кусочки органов фиксировали в 10% нейтральном формалине, обезвоживали и заливали в парафин. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином. В 461 случае был выявлен амилоидоз различных органов, в этих случаях проводили окраску конго красным.

В части случаев проводилось электронно-микроскопическое исследование, для чего кусочки органов фиксировали в 2% растворе глутаральдегида на фосфатном буфере и дополнительно в 1% растворе четырехокиси осмия. После обезвоживания в ацетоне материал заливали в эпон 812. Ультратонкие срезы контрастировали по Рейнгольдсу цитратом свинца и просматривали в электронном микроскопе JEM 100В.

Совместно с лабораторией бактериологии проводилось посмертное микробиологическое исследование всех погибших обезьян для изучения бактериальной микрофлоры в сопоставлении с имевшимся патологическим процессом.

Иммунологическое исследование. Для определения типа белка амилоида использовали метод непрямого иммуноферментного анализа. Для чего проводили реакцию с помощью кроличьих моноклональных антител к фрагментам легких цепей (к и X) иммуноглобулинов человека, входящих в состав амилоидных отложений при первичном амилоидозе и моноклональных антител, полученных от мышей к амилоиду А человека, характерного для вторичного амилоидоза. Типирование проводилось выборочно ввиду ограниченного количества антител. Было отобрано 12 случаев павианов гамадрилов и 18 случаев макак с генарализованными (по 3 случая) и изолированными формами (7 случаев павианов и13 случаев макак), по два случая обезьян старше 20 лет.

Иммунотипирование проводили по методу Handbook of Immunoperoxidase Staining Methods. DAKO Corporation (1989). Метод основан на способности антител образовывать нерастворимые комплексы с клеточными антигенами. Реакцию считали положительной, если обнаруживали отложения в виде окрашенных зерен, помеченных РАР иммунным комплексом.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Проведенное нами исследование показало, что амилоидоз при патологоанатомическом исследовании у обезьян сухумского и адлерского питомников встречается с различной частотой. Из всех видов изученных нами обезьян наиболее часто этот процесс регистрировался у павианов гамадрилов и макак резусов, несколько реже он наблюдался у макак лапундеров и макак яванских.

На 5308 аутопсий представителей рода макак возраста старше года (так как у детенышей до одного года амилоидоз не встречался, эта возрастная группа не отражена в таблицах) амилоидоз был выявлен у 196 (3,7%) обезьян трех видов - резусов, лапундеров, и яванских (M.mullata, M.nemestnna, M.fasciculans). При этом частота амилоидоза среди макак сухумского и адлерского питомников сильно разнится (таблица 1).

В сухумском питомнике процент животных с выявляемым амилоидозом относительно низок. Это объясняется тем, что колония макак в этом питомнике была сформирована в основном из молодых животных, привезенных из мест естественного обитания. С середины 80-х годов, когда колонию составляли молодые животные,

рожденные в питомнике, и некоторое количество привозных старых обезьян, частота амилоидоза стала нарастать, но в общем по стаду процент остался невысоким. Колония приматов адлерского питомника большей частью состоит из обезьян, родившихся в неволе.

Таблица 1.

Распространенность амилоидоза у макак старше одного года (по данным

патоморфологического исследования)

Возраст-ная группа Сухумский питомник

М.рез ге М.яван. Млап Всего

Всего % Всего % Всего % Всего-

1 —4 г 2286/11 0,5 92/1 1,1 63/- 0 2441/12 0,5

5-8 л 387/8 2,0 13/1 7,7 16/- 0 416/9 2,1

9-12л 366/14 3,8 10/2 20,0 14/2 14,3 390/18 4,6

13-16 л 134/10 7,5 1/1 100 5/- 0 140/11 7.9

17-20 л 102/4 3,9 2/- 0 3/- 0 107/4 3,7

>20 л. 30/2 6,7 1/- 0 6/- 0 37/2 5,4

Всего 3305/49 119/5 4,2 107/2 1,9 3531/56 1,6

Возраст-ная группа Адлерский питомник

М.рез^ ГС М.яван. Млап Всего

Всего Всего % Всего - % Всего •/о

1 -4 г 303/10 3,3 277/1 0,4 50/- 0 630/11 1,7

5-8 л 283/22 7.8 151/4 2,6 33/3 9,1 467/29 6,2

9-12л 155/26 16,8 81/1 1Д 29/4 13,8 265/31 11,7

13-16 л 106/21 19,8 78/3 3,8 13/2 15,4 197/26 13,2

17-20 л 65/12 18,5 63/4 63 20/3 15,0 148/19 12,8

>20 л. 40/15 37,5 19/5 26,3 11/4 45,5 70/24 34,3

Всего 952/106 11,1 669/18 23 156/16 юз 1777/140 7,9

ИТОГО 4267/155 3,6 788/23 2,9 263/18 6,8 5308/196 3,7

В числителе показано общее количество погибших особей в данной возрастной группе, в знаменателе - количество обезьян с амшоидозом в этой группе.

Тем не менее, тенденция увеличения частоты возникновения амилоидоза с возрастом, сходство форм и патоморфологических особенностей этого процесса у макак наблюдается в обоих учреждениях. Частота амилоидоза у павианов сухумского питомника составила 19,9% (таблица 2), этот показатель выше, чем у павианов адлерского питомника (13,1%).

Таблица 2.

Распространенность амилоидоза у павианов гамадрилов в различных возрастных группах старше 5 лет (по данным патоморфологического исследования)

Возрастная группа- Сухумский питомник Адлерский питомник

Всего % Всего %

5-8 лет 362/47 13,0 26/- -

9-12 лет 399/86 21,6 20/2 10,0

13-16 лет 268/72 26,9 19/4 21,1

17-20 лет 155/33 21,3 13/1 7,7

> 20 лет 95/16 16,8 6/4 66,7*

Всего- 1279/254 19,9 84/11 13,1

В числителе показано количество погибших особей в данной возрастной группе, в знаменателе - количество обезьян с амшоидозом в этой группе

* - процент выведен на малом количестве случаев, поэтому не отражает реальную частоту амилоидоза в данной группе.

Эта разница связана с особенностями сухумской колонии павианов, насчитывающей более десяти поколений родившихся в неволе обезьян. Кроме того, в стаде павианов этого питомника с конца 60-х годов в течение 20 лет продолжалась вспышка злокачественных лимфом, и у погибших животных помимо лимфомы нередко обнаруживали отложения амилоида в различных органах.

Ретроспективное изучение анамнеза погибших обезьян по материалам историй болезни, у которых был обнаружен амилоидоз, а также клиническое обследование 30 живот

ных группы риска, позволило выделить ряд клинических признаков, характерных для данного заболевания у обезьян.

Клинически на начальном этапе прослеживаются симптомы только основного заболевания, и нет существенных изменений в картине крови. Далее у больных обезьян наблюдается отклонение в общем состоянии (животное теряет в весе, снижаются аппетит и двигательная активность), учащаются эпизоды диарей, не поддающихся лечению, появляются нарушения двигательной функции. У нескольких макак было отмечено увеличение размеров печени, когда нижний край ее пальпировался на уровне пупка и даже ниже. В двух таких случаях была проведена аспирационная биопсия печени. При микроскопическом исследовании биоптатов были обнаружены отложения амилоида в пространствах Диссе, в одном случае еще и в стенках междольковой артерии. На этом этапе характерны изменения белкового состава крови в виде диспротеинемии с гипоальбуминемией (у макак - 24-47% при норме 57%; у павианов - 20,1-25,6% при норме 50-60%) и гиперглобулинемией (у макак - 53-76% при норме 44,5%; у павианов - 28,3 -30,1% при норме 23%). Наблюдается снижение уровня гемоглобина (у макак - 55-110 г/л при норме 120-140 г/л; у павианов - 90-110 г/л при норме 120-130 г/л). Эти изменения характерны для всех вариантов, но более выражены при гепатопатическом, свойственном для всех видов макак. Для нефропатического варианта амилоидоза (у павианов) характерно развитие хронической почечной недостаточности с азотемией, протеинурией (до О,О52°/оо), появлением отеков морды, половых органов и нижних конечностей на фоне общего истощения. Длительность течения заболевания у всех обезьян была различной - от 3 месяцев до 3 лет от момента регистрации диспротеинемии - и зависела не только от прогрессирования амилоидоза, но и от основной патологии, на фоне которой амилоидоз развивался.

Фоном для развития амилоидоза у павианов и макак были заболевания кишечника в виде колита, энтероколита, нередко в сочетании с гельминтозами (трихоцефалез, аскаридоз, стронгилоидоз), пневмония, опухоли (лимфомы у павианов, аденокарцинома шейки матки, хондросаркома, фибромиома матки у макак). Проведенный патоморфологический анализ материалов погибших от гемобластозов павианов показал, что в 27% таких случаев встречается амилоидоз одного или нескольких органов. Как всякая опухоль, что характерно и для людей, лимфомы могут привести к развитию амилоидоза, такой вариант описан у макак Калифорнийского приматологического центра [Но1шЪе^ С.А., 1977].

Роль этих факторов в развитии амилоидоза у обезьян была отмечена и другими исследователями [Chapman W.L., 1977, Benditt G.P., 1972, Migaki, 1972, Blanchard J.L., 1986, Holmberg C.A., 1977]. Исследования, проведенные в Вашингтонском приматологическом центре на макаках лапундерах [Slattum M.M., 1989] определили, что повторяющиеся диареи являются одной из главных причин развития амилоидоза, и чем больше случаев их повторения, тем больше вероятности развития амилоидоза. Однако, даже не связанные с инфекциями повторяющиеся диареи, обусловленные наличием стрессовых ситуаций, изменением окружающей среды, влекущие снижение иммунного статуса, тоже являются факторами риска. Надо полагать, что такой вариант развития амилоидоза мы наблюдали у исследуемых нами обезьян. Низкая частота амилоидоза у зеленых мартышек, возможно, является следствием низкой частоты диареи у этого вида обезьян с одной стороны, а также того, что они не доживают до возраста риска (основная масса погибших зеленых мартышек имела возраст до 10 лет), с другой. В литературе мы не нашли упоминаний об этой патологии у данного вида обезьян.

При бактериологическом исследовании у погибших от кишечных инфекций обезьян в качестве этиологических агентов изредка выделялись шигеллы, кампилобактер, но чаще это была условно-патогенная микрофлора. Большая часть кишечных инфекций осталась этиологически не расшифрованной. При заболеваниях органов дыхания в 16% случаев' выделяли пневмококки, еще у 10% - стрепто- и стафилококки, клебсиелла. Возникновение амилоидных отложений обнаруживалось и как случайная находка при травмах, переохлаждении, патологии беременности. В ряде случаев это были начальные формы, являющиеся, возможно, отражением каких-то преходящих форм отложений амилоида при некоторых физиологических состояниях (в частности, при беременности) и невыясненных патогенетических механизмов при латентно протекающих заболеваниях. В части случаев травма и переохлаждение лишь ускорили гибель обезьян с выраженными формами амилоидоза.

У части обезьян амилоидоз определялся уже на на вскрытии. Для макак характерным было резкое увеличение печени, бледность и восковидность ее ткани (Рис. 1). Нижний край печени иногда достигал уровня пупка. Капсула печени была тонкой, ткань напряженной, легко рвущейся. Обычно увеличенной была и селезенка, которая имела

типичный вид «саговой» (при отложении амилоида преимущественно в фолликулах) или «сальной» (при диффузном отложении амилоида)

Патоморфологическая картина амилоидоза у павианов характеризовалась преимущественным поражением почек с развитием их недостаточности. Уже при внешнем осмотре трупа можно было видеть отеки верхней и нижней частей туловища и половых органов (Рис. 2), резкое истощение.

Рис 1 Увеличенные печень и селезенка при амилоидозе у макака резуса

Рис 2 Амилоидозу павиана гамадрила. Истощение, отеки морды и половых органов, поражение печени

Почки в большинстве случаев были увеличены в размерах, с неровной бугристой поверхностью и восковидным «сальным» блеском на разрезе, где не прослеживалась граница слоев. Иногда почки имели вид сморщенных. Увеличение и однородность на разрезе отмечались в надпочечниках. Как и у макак, в части случаев у павианов макроскопически отмечалось поражение селезенки и печени.

Гистологически процесс отложения амилоидных масс в различных тканях и органах у макак и павианов имел сходный характер. ' Отложение гомогенных эозинофильных избирательно окрашивающихся конго красным амилоидных масс в различных тканях и органах варьировало по интенсивности и степени вытеснения паренхимы пораженного органа.

Отложения амилоида в печени обнаруживались в пространствах Диссе и иногда, преимущественно у макак, были столь массивны, что сопровождались атрофией печеночных балок с вытеснением гепатоцитов (рис. ЗА). В некоторых участках печени сохранялись лишь единичные купферовские клетки (рис.3 В). Почти всегда отложения амилоида обнаруживали в стенках сосудов печени - центральных вен, междольковых артерий и вен (рис.ЗД). При электронно-микроскопическом исследовании обнаруживали нежнофибриллярное вещество в цистернах эндоплазматического ретикулума звездчатого эндотелиоцита.

Изменения в почках при амилоидозе связаны с отложением амилоида первоначально в пирамидах (рис.4А) и интермедиарной зоне. Затем отмечались массивные отложения под базальными мембранами канальцев и сосудов, позднее - и под базальными мембранами капилляров клубочков (рис.4В). При электронномикроскопическом исследовании откладывающийся амилоид имел вид гомогенных или нежнофибриллярных преципитатов (рис.4С).

В селезенке отложения амилоида обнаруживали чаще всего в фолликулах и в стенках сосудов, реже - только в межсинусных пространствах. Иногда белковые массы располагались диффузно: в фолликулах, красной пульпе, трабекулах и их было так много, что от селезенки сохранялись лишь единичные эндотелиальные клетки, намечавшие просветы синусов.

Рис.3. Поражение печени при амилоидозе у макак

А-амилоид в печени, вытеснивший гепатоциты, х20; В-тотальное замещение печеночной ткани амилоидом. Сохранены единичные купферовские клетки, х20; С-начальная

стадия амилоидного пропитывания ткани печени, х20. Д-отложения амилоида в стенке центральной вены печени, х20; А,В-окраска конго красным; СД-окраска гематоксилином и

эозином.

Рис. 4.Поражение почек в развернутой стадии амилоидоза у павиана

А — массивные отложения амилоида в пирамидах с сохранением просветов единичных собирательных трубочек, х20; В - пропитывание амилоидом клубочков и стенок приводящих артериол, х20; С— отложение по базальноймембране капилляра клубочка белковых преципитатов, ультратонкий срез, хбООО; А, В — окраска гематоксилином и

эозином.

В желудочно-кишечном тракте амилоид чаще всего обнаруживали в сосудах и строме слизистой оболочки тонкого кишечника. Ворсинки тонкой кишки были утолщены, эпителий на вершинах был спущен, по ходу ретикулярных волокон стромы слизистой и в стенках сосудов подслизистого слоя располагался амилоид. Гораздо реже амилоидные отложения обнаруживались в строме слизистой и в стенках сосудов толстой кишки. В поджелудочной железе амилоид располагался в стенках сосудов, в слизистой оболочке крупных выводных протоков, под базальными мембранами концевых отделов экзокринной части железы, а также в островках Лангерганса. В надпочечниках амилоид откладывался в стенках сосудов и синусов в мозговом веществе, а так же на границе коркового и мозгового вещества. В части случаев в строме щитовидной железы обнаруживались массивные отложения амилоида, сдавливающие фолликулы. В одном случае наблюдался амилоидоз стромы опухоли (рак) щитовидной железы. Из всех лимфоузлов чаще всего амилоид откладывался в лимфоузлах корня брыжейки тонкой кишки. Отложения белка при этом обнаруживали в светлых центрах фолликулов, иногда имело место диффузное пропитывание ткани фолликула амилоидом.

Аналогичные варианты отложений амилоидных масс описаны для различных вариантов амилоидоза человека [Серов В.В., 1976,1977, Варшавский В.А., 2002].

Обнаруживалось не только сходство характера амилоидных отложений у макак и павианов, но и некоторые общие закономерности процесса. С возрастом частота амилоидоза существенно увеличивается. У павианов частота возрастает с 13% у молодых обезьян (сухумский питомник) до 20% у обезьян старше 20 лет. У макак всех видов с 1,7% в возрасте до 5 лет до 34,3% после 20 лет. Имеется общая тенденция учащения этого процесса в возрастных группах в диапазоне 1-16 лет, затем в группе 17-20 лет частота несколько снижалась, а у животных старше 20 лет достигала максимального значения (см. табл.1, табл.2). Снижение частоты амилоидоза в возрастных категориях 17-20 лет связано, вероятно, с тем, что к 16 годам погибает часть чувствительных к амилоидозу на фоне диареи животных, так как и у павианов и у макак с возраста 11 лет возрастает процент генерализованных тяжелых форм амилоидоза (43% и 41% соответственно). Амилоидоз же, как геронтологическая проблема появляется у более старых животных, после 20 лет.

И в этом возрасте амилоидоз обусловлен не только хроническими патологическими процессами, нередко множественными, но и расстройствами белкового синтеза, характерными для старого возраста

Нами отмечено преобладание АА форм амилоидоза у макак и павианов, что подтверждено иммунологическими исследованиями. Характерным и для макак и для павианов оказалось наличие положительной реакции на АА амилоид в большинстве изолированных случаев амилоидоза почек, печени, селезенки. Что касается генерализованных форм, то здесь мы наблюдали разнообразную картину - в нескольких случаях положительную реакцию в нескольких органах (печени, селезенке, почках), в одном случае реакция наблюдалась во всех органах, в других было отмечено отсутствие реакции в эндокринных органах при наличии ее в других. У старых обезьян обеих групп при иммунотипировании преимущественно наблюдалась положительная реакция на АА амилоид, но не во всех. органах. Имелись случаи, где реакция была отрицательная. с обеими -разновидностями антител к АА и AL амилоиду. Мы не исключаем, что у обезьян, как и у других животных [Johnson R.H. et al, 1992], имеются амилоидогенные белки, отличные от известных к настоящему времени. На это обстоятельство косвенно указывает обнаруженная -нами особенность в виде отсутствия окрашиваемости конго красным - ахроамилоид отмечался почти у 30% обезьян, а также, возможно, то обстоятельство, что используемые нами антитела относились к полученным человеческим по происхождению АА и AL амилоидным белкам. Известно [Neubauer RH. et al, 1983], что не все моноклональные антитела к маркерам клеток человека реагируют с клетками обезьян.

Помимо сходства амилоидоза у макак и павианов имелись и отличия, касающиеся органопатологии, частоты генерализованных и локальных (изолированных) форм, а также возрастной и половой зависимости.

У макак в 60,7% случаев был обнаружен изолированный амилоидоз отдельных органов. При этом в 36,4% это был амилоидоз печени, в 17,2% - амилоидоз селезенки, 4,3% -почек, 1,4% - поджелудочной железы. В 39,3% обнаружен амилоидоз двух и более органов в различных сочетаниях, в том числе в 2% случаев имел место генерализованный процесс с поражением печени, селезенки, почек, кишечника, надпочечников.

У всех видов макак преобладало поражение печени, встречающееся в целом в 64% случаев (изолированное поражение у 36,4% животных) и селезенки.

У павианов гамадрилов в 62% случаев наблюдались генерализованные формы амилоидоза с поражением трех и более органов, причем наибольшее количество генерализованных форм было зарегистрировано у животных в возрасте 9-12 лет. У старых обезьян чаще обнаруживали амилоидоз одного или двух органов. Изолированный амилоидоз почек встречался в 10,9% случаев, печени - в 2,3%, кишечника - в 1,5%. Оказалось, что у павианов наиболее поражаемым органом являются почки - частота поражения 94% (изолированное поражение - в 10,9%), затем по частоте отложений стоят селезенка, кишечник, печень.

Обнаружены половые различия в развитии амилоидоза у макак и павианов гамадрилов. У павианов амилоидоз чаще обнаруживали у самцов, чем у самок (27,7% и 14,5% соответственно), а у макак процесс чаще наблюдается у самок (6,2% и 3,2% соответственно).

У павианов амилоидоз не встречался ранее 5 лет, а у макак в возрасте 1-4 года частота составляла 0,5% в сухумском питомнике и 1,7%- в адлерском. В этой возрастной группе почти в 50% случаев поражалась селезенка по сравнению с другими возрастными периодами, когда поражение селезенки составляло от 27% до 30%. По-видимому, в этом возрастном периоде идет процесс формирования системы иммунологического гомеостаза организма и возникновение напряженности, связанное с воспалительным заболеванием, искажает адекватность иммунного ответа, обусловленную несовершенством лимфоидной ткани и в данный момент она оказывается наиболее уязвимой для отложений белка.

Что касается видовых особенностей органопатологии, то, вероятнее всего это может быть обусловлено видовой особенностью белкового обмена, индивидуальными сочетаниями определенных условий содержания, разведения, питания обезьян, климата, а также тем набором бактериальных, вирусных и прочих биологических агентов, которые определяют эпидемическую ситуацию в регионе. С другой стороны, различная органопатология может быть обусловлена нарушением нормальной функции органа в связи с наличием какой-либо скрытой патологии его инфекционной или неинфекционной природы.

В частности, у павианов гамадрилов Сухумской колонии таким агентом могли быть микоплазмы из семейства ахолеплазм, которые выделялись из разных органов, но почти всегда - из почек (в 80% случаев) при амилоидозе. Ахолеплазмы могут менять антигенную структуру клеток тканей, в которых они переживают, в частности ткани почек. Изменение антигенной структуры тканей отменяет физиологическую толерантность к ним и вызывает образование антипочечных антител по принципу развития аутоиммунных реакций. При заболеваниях аутоиммунной природы развивающийся при этом диспротеиноз может завершиться амилоидозом, а наличие аутоантител к почечным антигенам с фиксацией иммунных комплексов в почках объясняет их преимущественное поражение. Оно усугубляется тем, что почки, являясь органом выделения, должны обеспечить выведение грубых аномальных белков, появляющихся при диспротеинемии посредством гиперфункции. В результате воздействия ахолеплазм почечная ткань оказывается не способной к проявлению гиперфункции,, что приводит к декомпенсации и массивному отложению амилоида в почках, проявляющемуся почечной недостаточностью

У макак чаще наблюдался гепатопатический вариант амилоидоза. При хронических воспалительных заболеваниях избыточная секреция белка АА, вырабатывающегося в печени и циркулирующего в крови, должна компенсироваться выведением этого белка клетками системы мононуклеарных фагоцитов (СМФ). При снижении активности клеток СМФ, обусловленной наличием стрессогенных факторов, истощающих иммунную систему, а так же гиперпродукцией этого белка печенью, клетки СМФ не способны расщеплять всю его массу. Белок в виде фибриллярного амилоидогенного белка откладывается в органах, особенно тех, которые находятся в состоянии повышенной активности, связанной с наличием хронической инфекции или действием органотропных патогенных агентов. В данном случае таким органом является печень. По данным серологических исследований, проведенных лабораторией вирусологии [Корзая Л.И. с соавт., 2000], была выявлена степень инфицирования обезьян адлерского питомника вирусом гепатита А в зависимости от вида: макаки резусы и макаки лапундеры - 49%, макаки яванские - 41%. Степень инфицирования вирусом гепатита С у всех видов макак оказалась в пределах 6,3 - 8,5%.

Роль стрессогенных факторов, меняющих иммунологический статус, могут играть нежелательные контакты с человеком, скученное содержание, снижение двигательной

активности, связанное с отсутствием необходимости поисков пищи и ограничением жизненного пространства. Эти изменения более всего проявляются в пожилом и старом возрасте. Немаловажную роль в этот момент может играть и состав комбинированного корма, получаемого нашими обезьянами. Белок сухого молока, входящего в состав корма, может вызывать дополнительную гипсрпротеинемию, усугубляющую белковый дисбаланс и ведущую к отложению амилоидогенного белка.

Интересно значительное сходство стадий развития амилоидоза почек у человека и павианов. Павианы могут быть использованы как исключительно ценная модель для изучения действия новых лекарственных препаратов, используемых при лечении нефропатических вариантов амилоидоза человека.

Проведенные клинические исследования макак, у которых впоследствии был обнаружен амилоидоз печени, показали наличие у них биохимических изменений, общих для человека и обезьян. Особенно показательно наличие диспротеинемии с гипоальбуминемией и гиперглобулинемией при нормальном содержании общего белка крови. Кроме того, в лейкоцитарной формуле преобладает лимфоцитарный профиль, коррелирующий с диспротеинозом. Прижизненная диагностика гепатопатической формы основана на получении и гистологическом исследовании биопсийного материала. Проведенное нами исследование показало диагностическую значимость этой процедуры и для обезьян. Результаты гистологического исследования биопсийного материала печени двух макак из исследуемой группы подтвердили наличие амилоидоза печени у этих особей.

Генерализованные формы у исследуемых нами обезьян имеют свои особенности* у павианов в первую очередь поражаются почки, печень, селезенка, а затем другие органы. У макак первоначально в процесс вовлекаются печень, селезенка, кишечник. При проведении иммунологических исследований при генерализованном амилоидозе в одном из обследуемых случаев у макак мы наблюдали положительную реакцию на АА амилоид не во всех органах, что наводит на мысль о том, что у одного и того же животного могут иметь место два или более амилоидогенных процесса. То есть, развитие АА формы амилоидоза при наличии воспалительного процесса может сочетаться с другой формой локального амилоидоза в том или ином органе.

При генерализованном амилоидозе у 6 павианов в лимфатических узлах в местах отложения амилоида мы наблюдали наличие гигантских клеток типа инородных тел, что позволяет предполагать, что AL амилоидоз также встречается у наших обезьян, но очень редко. Амилоидсинтезирующей клеткой у обезьян при таких вариантах, как и у человека, по-видимому, может является клетка лимфоузла или селезенки, функционально активная при всех формах амилоидоза, но особенно при первичном амилоидозе. Появление макрофагальных элементов, по видимому, связано с поглощением секретируемых плазматическими клетками амилоидных белков, а наличие гигантских клеток типа инородных тел свидетельствуют о возможной резорбции амилоида на ранних этапах амилоидогенеза, как это известно для человека [Серов В.В., 1994]. В то же время нельзя исключить резорбтивной реакции и на отложение вторичного АА амилоидного белка при вторичном амилоидозе.

Таким образом, с середины 80-х годов прошлого века амилоидоз как распространенный патологический г процесс, обнаруживается у многих видов обезьян. Значительное количество наблюдений сделано на материалах сухумского и адлерского питомников. Патологическая анатомия спонтанного амилоидоза у павианов гамадрилов и трех видов макак имеет большое сходство. Отмечено увеличение частоты этого процесса с возрастом. Клинические симптомы заболевания довольно сходны у павианов и макак, хотя имеются значительные различия в органопатологии: у павианов наблюдается преимущественное поражение почек, а у макак - печени. У павианов превалируют генерализованные формы, у макак - локальные, у макак чаще поражаются самки, у павианов - самцы. Проведенные иммунологические исследования показали, что у обезьян преобладает вторичный амилоидоз, развивающийся на фоне воспалительных процессов, преимущественно в кишечном тракте. Показана роль некоторых факторов риска для развития амилоидоза у обезьян: наличие рецидивирующих диарей и других хронических заболеваний, в том числе опухолей, а так же присутствие стрессирующих факторов. У старых обезьян на фоне реактивного амилоидоза развивается амилоидоз эндокринных органов с вовлечением островков поджелудочной железы и надпочечников. Обнаружено значительное сходство развития амилоидоза почек у павианов и человека, что может быть использовано для изучения действия терапевтических приемов лечения нефропатического варианта амилоидоза человека. Значительное поражение печени при амилоидозе у макак представляет интерес для

отработки метода аспирационной биопсии печени при амилоидозе человека.

Выводы

1. Амилоидоз распространен почти у всех видов обезьян Сухумского и Адлерского приматологических центров с частотой от 13% до 19,9% у павианов гамадрилов и от 1,7% до 34,3% у макак трех видов в зависимости от возраста.

2. Характерными клиническими признаками амилоидоза обезьян являются диспротеинемия с гипоальбуминемией и гиперглобулинемией на фоне рецидивирующих диарей при гепатопатическом варианте и хроническая почечная недостаточность при нефропатическом варианте.

3. При сходстве механизмов развития и характера отложений амилоида в органах у макак и павианов гамадрилов имеются отличия, касающиеся органопатологии (у макак преимущественно поражалась печень - 64%, у павианов — почки- 94%), частоты локальных (у макак - 60,7%) и генерализованных форм (у павианов -62%), возрастной (у макак амилоидоз развивается, начиная с возраста 1-4 года, у павианов - после 5 лет) и половой зависимости (самцы-павианы поражаются в 2 раза чаще самок, самцы-макаки имеют амилоидоз в 2 раза реже, чем самки).

4: По- результатам патоморфологического, электронно-микроскопического и

иммунологического исследований выявлено сходство патологической анатомии амилоидоза человека и обезьян, а также иммунологическое сходство амилоидогенных белков.

5. Показана роль хронических инфекций различной этиологии, условий содержания,

разведения, кормления, а также влияние стрессогенных факторов в развитии амилоидоза.

У исследованных обезьян преобладают АА формы амилоидоза. Часть случаев иммунологически не типируется с моноклональными антителами к АА и ЛЬ амилоиду человека, что позволяет предполагать наличие специфических амилоидогенных белков у обезьян.

Выделены формы амилоидоза, которые можно использовать в качестве модельных процессов амилоидоза человека. Для нефропатических вариантов амилоидоза -предпочтительнее использовать павианов гамадрилов: для гепатопатических - макак лапундеров и резусов, для кишечных - макак резусов..

Практические рекомендации

Полученные в результате проведенных- исследований данные о распространенности спонтанного амилоидоза у обезьян учитываются в нашем учреждении, а так рекомендованы для использования другим приматологическим центрам при отборе приматов для исследовательских целей, что особенно важно при работе со старым поголовьем, так как вероятность наличия у них амилоидоза значительно выше, чем у молодых животных.

При формировании стада обезьян зоотехнической и ветеринарной службам следует отслеживать животных, имеющих факторы риска по амилоидозу с целью выведения их из репродуктивного стада.

Работникам зоопарков и ветеринарным специалистам следует обследовать обезьян старше 15 лет на наличие диабета, обусловленного амилоидозм островков Лангерганса поджелудочной железы, для своевременной коррекции уровня глюкозы в крови и продления жизни.

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1. Крылова Р.И. Амилоидоз павианов гамадрилов сухумского и адлерского питомников/ Р.И. Крылова, Е.С. Науменко // Материалы. Российской конференции «Организм и окружающая среда: жизнеобеспечение и защита человека в экстремальных условиях».- Москва.- 2000.- С.248-249.

2. Науменко Е.С. Амилоидоз макак адлерского приматологического центра/ Е.С.Науменко, Р.И.Крылова// БЭБиМ.-2003.-Т.136.-№7.-С.92-95.

3. Науменко Е.С. Сравнительная характеристика амилоидоза обезьян/ Е.С. Науменко, Р.И. Крылова//Вестник РАМН.-2004.-№4.-С.35-38.

4.

Науменко Е.С. Спонтанный амилоидоз обезьян/ Е С. Науменко // Газета «Ветеринарный консультант». - Москва.- 2004.-№5 (76).-С.22-23.

Участок множительной техники ГУ НИИ РАМН Подписано к печати 02.07.04 Заказ 74 Тираж 110 экз.

#4 - 1 3*95

Актуальность проблемы

Изучение вопросов общей патологии в сравнительном аспекте является чрезвычайно перспективным для понимания закономерностей возникновения патологических реакций в филогенезе. Особенный интерес представляют исследования на обезьянах - животных, наиболее близко стоящих к человеку по своим анатомо-физиологическим свойствам и вследствие этого широко использующихся в биологии и медицине в качестве экспериментальных. При этом знание спонтанной патологии обезьян является непременным условием адекватной оценки результатов эксперимента, так как всегда стоит вопрос дифференциации спонтанных патологических процессов, нередко имеющих место у обезьян, от патологии, обусловленной характером экспериментального воздействия. Изучение спонтанной патологии необходимо также и для безопасной работы с этими животными, так как известно, что обезьяны, а также их ткани, используемые для вирусологических целей, в том числе для производства вакцин, могут быть источником опасных, нередко смертельных заболеваний человека (геморрагические лихорадки Марбург, Эбола, желтая лихорадка, вирус герпеса В и другие), так как возбудители этих заболеваний у людей являются агентами обезьян.

Такая ситуация складывается и в экологии человечества. «Наступление» человека в процессе его хозяйственной деятельности на места естественного обитания обезьян все теснее приближают их друг к другу. Контакты с ними становятся опасными для человека с точки зрения возможности распространения зоонозных заболеваний, что еще раз подчеркивает необходимость максимально полного изучения патологических процессов у этих животных. и (Я гоълЯ .

Для современной экспериментальной медицины характерно использование альтернативных экспериментальных моделей. Все большее количество исследований проводится на культурах тканей, в режиме компьютерного моделирования, а также на моделях спонтанных заболеваний животных, в частности обезьян. Следует подчеркнуть, что многие спонтанные заболевания обезьян являются аналогами соответствующей патологии человека, так как сходство филогенеза человека и обезьян определяет и сходство реагирования на однотипные факторы, тем более что многие этиологические агенты, в частности возбудители инфекционных заболеваний, для человека и обезьян являются общими.

Стараясь максимально приблизить условия содержания животных в питомнике к условиям жизни обезьян в местах их естественного обитания, человек все же не может достичь этого в полной мере. Изменение климатических условий, принципов питания, ограничение подвижностив связи с отсутствием необходимости поисков и добычи пищи, увеличение продолжительности жизни, а также некоторые другие моментьРспособствуют возникновению ряда патологических процессов у обезьян, ранее не описанных или встречавшихся весьма редко.

К группе этих заболеваний следует отнести в частности амилои-доз. Эта патология весьма актуальна для человека в настоящее время в связи с ее учащением, трудностями диагностики и терапии. Ами-лоидоз не относится к числу редких заболеваний, хотя такое мнение бытует в среде врачей. Учащение амилоидоза связано, в числе прочих причин, с увеличением продолжительности жизни человека. Одной из проблем современной геронтологии, является амилоидоз пожилых и старых людей.

Амилоидоз - стромально - сосудистый диспротеиноз, характеризующийся отложениел^в межуточнои^гкани амилоида, что приводит к атрофии паренхимы и функциональной недостаточности органов. Амилоид - белково- полисахаридное соединение фибриллярной структуры.

Клиническая диагностика амилоидоза очень сложна. По данным патологоанатомических исследований, число случаев клинически нераспознанного амилоидоза в среднем составляет 52,2%, а первичный амилоидоз клинически диагностируется лишь в 20% случаев [Мазало-ва Н.С., 2001]. ✓

Исследователи в приматологических центрах в последние десятилетия также столкнулись с учащением возникновения амилоидоза у обезьян разных видов. Причины этого явления интенсивно изучаются, и одна из них несомненно, как и у человека, связана с увеличением продолжительности жизни обезьян в неволе и возрастанием популяции старых обезьян. X? ?

В 20 веке в связи с сокращением площадей естественного обитания обезьян возникла необходимость разведения их в питомниках и заказниках с целью схщюнения резерва этих животных для научных целей или для сохранения популяций многих видов обезьян. Были созданы приматологические центры, питомники, особенно многочисленные в США. На территории бывшего СССР одним из первых был создан приматологический центр в Сухуми, традиции научных исследований которого продолжаются в Институте медицинской приматологии РАМН (Сочи-Адлер).

У павианов гамадрилов сухумского питомника, одного из старейших в мире, рб^вмр,имому/ ранее всего было отмечено учащение этого процесса, приобретшего в 80-х годах прошлого столетия характер энзоотии. Не стали исключением и макаки адлерского питомника, среди которых амилоидоз регистрируется на вскрытии с частотой 0,237% в зависимости от возраста. Данная работа посвящена подробному патоморфологическому изучению спонтанного амилоидоза низших обезьян на материалах сухумского и адлерского питомников.

Цель и задачи исследования

Целью данной работы явилось сравнительное изучение патологической анатомии спонтанного амилоидоза у разных видов обезьян, его распространшнлости и роли некоторых факторов чв ~ патогенезе. Учитывая многообразие форм амилоидоза человека, предстояло выяснить возможность использования этой спонтанной патологии обезьян в качестве модельного процесса при изучении проблем патогенеза и терапии амилоидоза человека.

Для выполнения работы были поставлены следующие непо-средственныезадач и:

1. Изучить по материалам морфологического исследования распространение амилоидоза у разных видов, в разных возрастных группах обезьян сухумского и адлерского питомников;

ШЛС

2. Описать [патологическую анатомию] амилоидоза у разных видов обезьян;

3. Провести сравнительную характерисхикуданной патологии обезьян и человека с использованием современных методов идентификации различных форм амилоидоза;

4. Выделить морфологические формы амилоидоза обезьян, перспективные в плане возможности использования как модельного процесса для изучения амилоидоза человека.

Научная новизна

Исследование вносит вклад в проблемы эволюционной и сравнительной патологии: показано, что один из самых распространенных и весьма древний вид мезенхимального диспротеиноза - амилоидоз -часто имеет место и у обезьян, которые ранее в этом плане представляли исключение в мире животных.

В работе впервые представлены данные по исследованию 461 случая амилоидоза четырех видов обезьян, собранные на протяжении 20 лет в сухумском и адлерском приматологических питомнике) В результате исследования выявлены видовые и возрастные особенности органопатологии амилоидоза у обезьян 4 видов. Это дополняет наши знания о спектре патологии этих животных и позволяет совершенствовать методы содержания и разведения обезьян в неволе.

Проведено сравнительное изучение амилоидоза обезьян и человека, что позволяет судить о некоторых аспектах эволюционной патологии. В частности, имеет место не только сходство патоморфологи-ческих особенностей амилоидоза у эволюционно близких человека и обезьян, но и идентичность некоторых амилоидогенных белков, выявленная при иммуногистохимическом типировании отдельных форм.

Впервые проведена идентификация некоторых вариантов откладывающихся амилоидных белков у обезьян с помощью использования моноклональных антител (к и Л) к фрагментам легких цепей иммуноглобулинов, входящих в состав амилоидных отложений при первичном амилоидозе и к амилоиду А человека, характерного для вторичного амилоидоза.

Практическое и теоретическое значение

Проведенные исследования показали, что у некоторых видов обезьян наблюдаются такие же, как и у человека, формы амилоидоза, и поэтому спонтанно возникающая патология обезьян может служить адекватной моделью для изучения амилоидоза человека. С точки зрения охраны животных, а также по экономическим соображениям использование спонтанных заболеваний в качестве модельных процессов более целесообразно и перспективно в сравнении с искусственным моделированием процесса.

Сходность в процессах отложения амилоида в тканях и его белкового состава при первичном и вторичном амилоидозе позволяет рекомендовать для типирования многих видов амилоидных белков обезьян использование реагентов, применяющихся в медицинской практике.

Клинически амилоидоз у человека довольно трудно диагностируется, а средства имеющейся терапии мало эффективны. Поэтому перспективным является использование обезьян для выделения факторов риска, способствующих развитию амилоидоза, а также для разработки методов ранней диагностики и оценки эффективности действия создаваемых терапевтических антиамилоидных препаратов.

Достоверно показано увеличение частоты возникновения амилоидоза у обезьян с возрастом, что является характерным и для пожилых людей. Это позволяет рекомендовать обезьян старших возрастных групп в качестве экспериментальных животных при испытании геро-протекторов, активно используемых для продолжения социально активной жизни старших возрастных контингентов, на наличие профилактического и лечебного антиамилоидного действия.

Более детальное знание возможных причин возникновения амилоидоза, клинических проявлений и последствий этого заболевания может быть полезным для работников зоопарков, цирков и просто людей, имеющих обезьян в качестве домашних любимцев.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. При сходстве амилоидоза павианов гамадрилов и макак по характеру отложений белка в органах и тканях, его тинкто-риальным свойствам и особенностям электронно-микроскопической структуры имеются различия в органопа-тологии: у павианов преобладающей формой является ами-лоидоз почек, у макак - амилоидоз печени.

2. По иммуногистохимической характеристике амилоидоз обезьян относится преимущественно к АА амилоидозу.

3. Имеется морфологическое сходство амилоидоза обезьян и амилоидоза человека, что позволяет использовать амилоидоз обезьян в качестве модельного процесса при изучении патогенеза, разработке критериев диагностики этого процесса, а также оценки терапевтической эффективности антиамилоидных препаратов.

Материалы диссертации докладывались и обсуждались на Российской конференции «Организм и окружающая среда: жизнеобеспечение и защита человека в экстремальных условиях», Москва, 26-29 сентября 2000г. - д^/. <•> /г^ '

• /• '"•'•"с ч. /

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 4 печатных работы.

Объем и структура диссертации

Практические рекомендации

1. Полученные в результате проведенных исследований данные о распространенности спонтанного амилоидоза у обезьян учитываются в нашем учреждении, а так же рекомендованы для использования в других приматологических центрах при отборе приматов для исследовательских целей, что особенно важно при работе со старым поголовьем, так как вероятность наличия у них амилоидоза значительно выше, чем у молодых животных.

2. При формировании стада обезьян зоотехнической и ветеринарной службам следует отслеживать животных, имеющих факторы риска по амилоидозу с целью выведения их из репродуктивного стада.

3. Работникам зоопарков и ветеринарным специалистам следует обследовать обезьян старше 15 лет на наличие диабета, обусловленного амилоидозом островков Лангерганса поджелудочной железы, для своевременной коррекции уровня глюкозы в крови и продления жизни животного.