Патогенез и экспериментальная терапия модели первичного амилоидоза кардиопатического типа

Гиоева, Зарина Владиславовна

Диссертации по медицине → Патологическая физиология

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Патогенез и экспериментальная терапия модели первичного амилоидоза кардиопатического типа

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Гиоева, Зарина Владиславовна Владикавказ 2008 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.00.16

Автореферат диссертации по медицине на тему Патогенез и экспериментальная терапия модели первичного амилоидоза кардиопатического типа

На правах рукописи

ГИОЕВА ЗАРИНА ВЛАДИСЛАВОВНА

003452067

ПАТОГЕНЕЗ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ТЕРАПИЯ МОДЕЛИ ПЕРВИЧНОГО АМИЛОИДОЗА КАРДИОПАТИЧЕСКОГО ТИПА

14.00.16- натоло!нческни фитология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Владикавказ — 2008

003452067

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Северо-Осетинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Научный руководитель: Заслуженный работник высшей школы РФ,

заслуженный деятель науки РСО-Алания, доктор медицинских наук, профессор БРИ11 Вадим Борисович

Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор

КОЗЫРЕВ Константин Мурадпевич

Официальные оппоненты: Заслуженный работник высшей школы РФ

заслуженный деятель науки РСО-Алания, доктор медицинских наук, профессор ХЕТАГУРОВА Лариса Георгиевна

Заслуженный работник высшей школы РФ доктор медицинских наук, профессор ОВСЯННИКОВ Виктор Григорьевич

Ведущая организация: государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Кубанский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развития»».

Защита состоится » /¿&&М-2- 2008 года в часов на заседании диссертационного совета К 208.695.01 Северо-Осетинской государственной медицинской академии (362019, г. Владикавказ, ул. Пушкинская, 40).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке академии.

Автореферат разослан «с/о/ » 2008 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук //

И.Г. Джиоев

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В последнее время кардиопатический тип (первичного, старческого) амилоидоза вызывает значительный интерес у исследователей (Ойфа А.И., 1987; В.В.Серов, 1994 - 1998; Козырев K.M., Сяткин С.П., Березов Т.Т., 2002; Козырев K.M., Тутаева З.Р., 2005).

Амилоидоз сердца обнаруживают у 2,3 % умерших в возрасте до 50 лет, однако в возрастной группе 50-70 лет его выявляют у 30%, в группе 70-80 лет-уже у 41%, а у лиц, умерших в возрасте старше 90 лет, амилоидоз обнаруживали в 7190% случаев. Амилоидоз аорты встречается реже, однако его частота также увеличивается с возрастом и достигает 53% после 90 лет (Козловская J1.B., Рамеев В.В., и др.,2005.).

Тяжелое поражение и инвалидизация, отсутствие эффективных мер профилактики и лечения, многообразие висцеральных проявлений и далеко еще не решенные вопросы этиологии и патогенеза, обусловливают актуальность изучения амилоидоза в целом и его кардиопатического типа в частности.

Амилоид может откладываться в любой структуре сердца: в перикарде, клапанах, строме миокарда, эндокарде, папиллярных мышцах, мелких сосудах миокарда с развитием микроциркуляционпых нарушений. При этом на аутопсии он может макроскопически не диагностироваться, выявляясь только при микроскопии.

По причине малой изученности и тяжести последствий амилоидного поражения сердца, важное значение приобретает создание и исследование модели экспериментального амилоидоза сердца.

Экспериментальное моделирование является одним из основных методов изучения патогенеза амилоидоза. Существует большое количество способов его воспроизведения, большинство из которых основывается на введении животным биологических или химических агентов раздельно (I. Yamaguchi, К. Ilasegawa, H. Naiki et al., 2001) и в различных их сочетаниях (D. Cui, H. Kawano, M. Takahashi et al., 2002) с целью запуска иммуно-патобиохимичеких механизмов образования амилоидных фибрилл (M. Garcia-Garcia, G. Mourad, M. Durfort et al., 2003).

Положительные результаты экспериментальных исследований (Заалишвили Т.В., 2005) подтверждают возможность приостановки дальнейшего накопления амилоида в тканях и органах и даже его рассасывания. Это позволяет ставить вопрос о возможности обратимости амилоидоза и поиске методов и средств, действующих относительно избирательно на определенные звенья его патогенеза и направленных на стимуляцию амилоидоклазии.

Исходя из описанных ранее (Симхович Б.З., Мейрена Д.В., Хаги Х.Б.,1984; Калвиньш И.Я.,1991; Сутулов Ю.Л., Логунова Л.В., Козырев K.M., Заалишвили Т.В., 1998 — 2005) положительных многофакторных свойств милдроната, в частности его иммуномодулирующего и цитомембраностабилизирующего действия, целесообразным становится изучение эффектов использования препарата для коррекции нарушений при экспериментальном кардиопатическом типе генерализованного амилоидоза.

Цель работы - создание модели экспериментального кардиопатического типа амилоидоза, изучение ее функциональных и патогистоструктурных характеристик, анализ возможности коорригирующего влияния милдроната.

Задачи исследования. Для достижения указанной цели в работе решались следующие задачи:

1. Создать модель экспериментального амилоидоза у сирийских хомяков, провести функциональное и морфологическое ее сопоставление с ранее созданной моделью амилоидоза у мышей.

2. Исследовать функциональное состояние сердечно-сосудистой системы амилоидных животных, получавших милдропат.

3. Изучить характер структурных изменений сердечно-сосудистой системы экспериментальных животных с установленным амилоидозом, подвергнутых монотерапии милдронатом.

Научная новизна. Впервые разработан метод моделирования амилоидоза путем длительного (30 и 45 дней) подкожного введения золотистым сирийским хомякам нативиой бычьей плазмы в дозе 0,025 мл/г массы тела, при котором развивается системный амилоидоз с преимущественным поражением сердца, печени, почек, селезенки.

Показаны особенности развития амилоидоза сердца, сопровождающегося снижением основных функциональных показателей сердечно-сосудистой системы.

Установлено, что подкожное введение экспериментальным животным милдроната одновременно с нативной бычьей плазмой способствует меньшему, чем при изолированном введении амилоидогена, снижению артериального давления, что обусловлено более высокими значениями удельного периферического сосудистого сопротивления, сердечного и ударного индексов по сравнению с амилоидными животными; отмечается меньшее снижение адренореактивности сердечнососудистой системы; выявляются менее выраженные структурно-функциональные нарушения в миокарде, по сравнению с животными, получавшими только амилои-доген.

По теме диссертационной работы, па основании результатов исследования получен патент па изобретение Федерального института промышленной собственности от 20 сентября 2007 г, под № 2306617.

Научно-практическая значимость работы. Исследование посит экспериментальный характер и полученные результаты, демонстрирующие эффекты длительного введения золотистым сирийским хомякам пативной бычьей плазмы, сопровождающиеся развитием амилоидоза сердца, относятся к области фундаментальных знаний, так как расширяют представления о возможностях моделирования амилоидоза сердца, вносят определенный вклад в теорию патогенеза амилоидоза. Выявленные эффекты применения лекарственного препарата милдроната демонстрируют возможность его лечебного и профилактического применения с целыо нормализующего влияния на функциональное состояние сердечнососудистой системы.

Результаты исследования могут быть использованы при преподавании патофизиологических и гистоструктурных основ стромалыю-еосудистых диспро-теинозов, при разработке способов профилактики и лечения амилоидоза.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Длительное (30 и 45 дней) введение золотистым сирийским хомякам пативной бычьей плазмы в дозе 0,025 мл/г массы тела приводит к развитию системного амилоидоза с преимущественным поражением сердца, печени, почек, селезенки.

2. Формирование экспериментального амилоидоза сопровождается снижением артериального давления, что вызвано уменьшением сердечного выброса в результате поражения миокарда амилоидными массами и снижением а- и Р- адре-нореактивности сердечно-сосудистой системы.

Апробация диссертационной работы.

Материалы исследований доложены и обсуждались на конференции молодых ученых СОГМА (Владикавказ,2007); конференции «Инновационные технологии для устойчивого развития горных территорий» (Владикавказ,2007), объединенном заседании сотрудников кафедр нормальной и патологической физиологии, патологической анатомии, биохимии, научных сотрудников ЦНИЛ.

Публикации: по теме диссертации опубликовано 9 работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 139 страницах машинописного текста, включая библиографию и приложения. Работа состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, результатов исследования, их обсуждения, заключения, выводов, списка использованной литературы и приложения. Библиографический указатель включает 140 источников, из которых 50 отечественных и 90 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 70 рисунками и 10 таблицами, размещенными в приложении.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования.

Работа проведена на 77 золотистых сирийских хомяках-самцах в возрасте 6 - 9 мес., средней массой 90-110 г. Хомяки в течение эксперимента находились на стандартном рационе (хлеб, зерно, вода), кроме этого, проводилась подкормка специализированным кормом, богатым витаминами и минеральными веществами. Световой режим - естественный. Содержание серий опытов отражено в табл.1.

Таблица 1.

Методические приемы, варианты опытов, объем исследований

№ серии Кол-во

СОДЕРЖАНИЕ СЕРИИ хомяков

1 Исследования интактных хомяков 14

2 Контрольные исследования после подкожного введения хомякам 10% раствора милдроната в дозе 50 мг/кг в течение 30 дней 7

3 Исследования после п/к введения хомякам нативной бычьей плазмы в дозе 0,025 мл/г массы тела через день в течение 30 дней эксперимента 10

4 Исследования после п/к введения хомякам нативной бычьей плазмы в дозе 0,025 мл/г массы тела через день в течение 45 дней эксперимнета. 11

5 Исследования после единовременных п/к инъекций хомякам нативной бычьей плазмы в дозе 0,025 мл/г массы тела и 10% раствора милдроната в дозе 50 мг/кг через день в течение 30 дней эксперимента 8

6 Исследования после единовременных п/к инъекций хомякам нативной бычьей плазмы в дозе 0,025 мл/г массы тела и 10% раствора милдроната в дозе 50 мг/кг через день в течение 45 дней эксперимента 11

7. Патоморфологические исследования после п/к введения хомякам нативной бычьей плазмы в дозе 0,025 мл/г массы тела через день в течение 30 и 45 дней эксперимнета 12

8. Патоморфологические исследования после единовременных п/к инъекций хомякам нативной бычьей плазмы в дозе 0,025 мл/г массы тела и 10% раствора милдроната в дозе 50 мг/кг через день в течение 30 и 45 дней эксперимента 9

9 Всего 77

Кардиопатический тии первичиого генерализованного амилоидоза у экспериментальных животных вызывался подкожным введением нативной бычьей плазмы из расчета 0,025 мл/г массы тела животного через день в течение 30 и 45 дней. Наркотизация животных тиопенталом натрия, вводимом внутрибрюшинно в дозе 20 мг/100г массы тела, проводилась непосредственно перед началом экспериментов по изучению гемодипамических показателей Для измерения артериального давления проводилась гепаринизация ] 0% раствором гепарина, в среднем 70100 ед/100 г массы тела.

Для анализа реактивности использованы следующие вещества:

• норадреиалин (НА) в дозировках: минимальная - 2, 68*10 мг/100 г массы тела; средняя - 4*10~4 мг/100 г; максимальная - 8*10 А мг/100 г массы тела (Татров А.С., 1991);

• адреналин (Адр.) в дозировках: минимальная 0,25* 10"4 мг/100 г. массы тела; средняя - 0,5*10"4 мг/100 г.

В 5, 6-й и 8-й сериях опытов животным одновременно с амилоидогеном вводили подкожно 10% раствор милдроната в дозе 50 мг/кг через день.

Во всех группах животных электроманометром измерялось среднее артериальное давление (САД) через пластиковый катетер, наполненный 10% раствором гепарина, вводимый в правую бедренную артерию. Регистрация осуществлялась на мониторе МХ-04. Минутный объем крови (МОК) измерялся методом термоди-люции, для чего через левую общую сонную артерию в дугу аорты вводился тер-мистор МТ-54М. Физиологический раствор определенной (фиксированной) температуры объемом 0,2 мл вводился в правое предсердие через катетеризируемую правую яремную вену. Кривые термодилюции регистрировались на самописце ЭПП-09. По специальным формулам (Брин В.Б., Зонис БЛ., 1984), рассчитывались сердечный индекс (СИ), ударный индекс (УИ), удельное периферическое сосудистое сопротивление (УГ1СС), частота сердечных сокращений (ЧСС).

Среднее артериальное давление (САД) определялось по формуле: САД=ДД+1/3 ПД, где ДД - диастолическое давление, ПД - пульсовое давление.

В течение всего эксперимента измерялась ректальная температура животного, которая поддерживалась на уровне 36-37 °С. Переохлаждение тела животного предупреждалось подогреванием лампой с инфракрасным излучением (INFRA-SEC-TN). Математическая обработка полученных результатов с использованием критерия «t» Стыодента, построение графиков и диаграмм проводились на персональном компьютере Intel Pentium M - 1730 Mhz с использованием программ GraphPad Prism 4.

Для гистологических исследований образцы тканей (селезенка, печень, почка, сердце и др.) фиксировали в 10% нейтральном формалине, после чего подвергали заливке в парафин с последующим приготовлением срезов толщиной 5-6 микрон. Срезы окрашивались гематоксилином и эозином, а для идентификации амилоида - конго-красным.

Изучение срезов проводилось в проходящем свете при помощи микроскопа МИКМЕД-1 под увеличением х 80, х 200, х 400, х 600, х 900.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

У хомяков, получавших подкожные инъекции нативной бычьей плазмы отмечалось значительное снижение САД по сравнению с интактными животными. У группы хомяков, получавшей п/к инъекции нативной бычьей плазмы в течение 45 дней, отмечался более низкий уровень САД по сравнению с группой животных, получавшей п/к инъекции в течение 30 дней, что было обусловлено более низким уровнем сердечного индекса и сосудистого сопротивления (рис.1).

Снижение сердечного выброса, как показали гистологические исследования, было связано с инфильтрацией миокарда амилоидными массами. В то же время в 3 и 4 сериях опытов отмечался более высокий уровень УПСС (рис.1).

У подопытных животных, получавших одновременно инъекции нативной бычьей плазмы и милдроната в течение 30 дней, уровень САД почти не отличался от уровня САД в группе хомяков, получавшей только бычыо плазму. У животных, получавших одновременно п/к инъекции нативной бычьей плазмы и милдроната в течение 45 дней, уровень САД оказался выше по сравнению с животными, получавшими только амилоидоген в течение 45 дней, однако, САД, тем не менее, было достоверно ниже исходного уровня (рис.1). Менее существенное снижение уровня САД у животных, получавших амилоидоген с милдронатом в течение 45 суток, было обусловлено не столь выраженным, как при введении одного амилоидогена, снижением сердечного выброса. При этом у хомяков, получавших одновременно в течение 30 дней п/к инъекции нативной бычьей плазмы и милдроната, уровень сердечного выброса был выше, чем через 45 дней введения, но отмечалось понижение уровня УПСС.

Среднее АД

Рис.1. Изменения показа телей системной гемодинамики при формировании экспериментального амилоидоза. Эффекты милдроната.

Показатели системной гемодинамики у здоровых хомяков контрольной группы, получавших п/к только раствор милдроната в течение 30 дней, достоверно не отличались от показателей системной гемодинамики у интактных хомяков. Введение трех доз норадреналина вызвало у всех групп хомяков дозозависимый подъем САД. При этом у амилоидных животных, получавших амилоидоген в течение 30 дней, степень прироста САД была примерно такой же, как у интактных хомяков. У животных, получавших амилоидоген в течение 45 дней, степень прироста САД оказалась меньшей, чем у амилоидных животных, получавших подкожные инъекции в течение 30 дней (таблица 2). При этом, степень прироста УПСС в обеих группах амилоидных животных в ответ на введение НА уменьшилась по сравнению с интактными хомяками, что наиболее четко определялось при введении средней и максимальной доз ПА. Во всех трех группах животных изменения сердечного выброса оказались примерно одинаковыми, что может свидетельствовать о снижении а - адренореактивности, особенно у хомяков, получавших бычью плазму в течение 45 дней.

Введение двух доз адреналина вызывало у животных, получавших амилоидоген в течение 30 дней, более выраженный прирост САД, что обусловлено меньшими снижением УПСС и приростом сердечного выброса.

У амилоидных животных, получавших амилоидоген в течение 45 дней, прирост САД на введение адреналина уменьшался по сравнению с интактными хомяками преимущественно за счет меньшего прироста сердечного выброса по сравнению с животными, получавшими п/к инъекции только 30 дней (таблица 3.), в то время как изменения УПСС были примерно такими же. Данные изменения свидетельствуют о снижении р- адренореактивности сердечно-сосудистой системы, более выраженной у животных, получавших амилоидоген в течение 45 дней.

У хомяков, получавших одновременно п/к инъекции нативной бычьей плазмы и милдроната в течение 30 дней, минимальная и средняя дозы НА вызывали примерно такой же прирост САД, как и у интактных животных. Если максимальная доза НА вызывала меньший прирост САД, то минимальная доза НА вызывала несколько больший прирост УПСС по сравнению с интактными хомяками и хомяками получавшими п/к инъекции нативной бычьей плазмы 30 дней. Средняя доза НА вызвала у животных меньший прирост УПСС по сравнению с интактными, но больший - по сравнению с хомяками, получавшими амилоидоген в течение 30 дней. Прирост УПСС у этих хомяков в ответ на введение максимальной дозы НА уменьшился по сравнению с интактными и не отличался от такового у хомяков, получавших п/к инъекции нативной бычьей плазмы 30 дней. У хомяков, получавших одновременно п/к инъекции нативной бычьей плазмы и милдроната в течение 45 дней, прирост САД в ответ на введение трех доз НА уменьшался по сравнению с интактными, и мало отличался от такового у хомяков, получавших п/к инъекции нативной бычьей плазмы длительно (45 дней). Примерно такими же были изменения УПСС по сравнению с интактными животными и животными, получавшими амилоидоген также в течение 45 дней (таблица 4).

В тоже время введение двух доз адреналина вызывало у хомяков, получавших одновременно п/к инъекции нативной бычьей плазмы и милдроната в течение 45 дней, больший прирост САД по сравнению с интактными хомяками и хомяками, получавшими только амилоидоген 45 дней (таблица 1.), что обусловлено, прежде всего, более выраженным приростом сердечного выброса и несколько меньшим снижением УПСС по сравнению с интактными хомяками при введении им средней дозы адреналина (таблица 4.).

Относительные (в %) изменения САД

Показатели Интактные Плазма 1 мес Плазма 1,5 мес Плазма + милдронат 1 мес Плазма + милдронат 1,5 мес Милдронат 1 мес

НА мин +16,6* +20,4* +12,3* 1)-26* +17,9* 2)-2 +14* 3)+13* +16,2*

НА сред +25,9* +28,6* +19,5* 1)-26,2* +26,1* 2)-1,9 +21,8* 3)+13,5* +27,2*

НА макс +48,8* +45,3* +34,6* 1)-26,5* +40,5* 2)-3,3 +35,2* 3)+11,8* +49,4*

Адр. мин. +3,5* +7,6 +1,5 1)-25,1* +1 2)-6,2 +5,2 3)+15,4* +3,6*

Адр сред +6,7* +14* +4,1 1)-27,5* +3,9 2)-8,9* +11,7* 3)+19,5* +9,5*

Примечание. * - достоверные (р<0,05) изменения.

1) - относительные (в %) изменеиия САД у группы, получавшей п/к инъекции нативной бычьей плазмы в течение 1,5 месяцев по сравнению с группой, получавшей п/к инъекции нативной бычьей плазмы в течение 1 месяца, 2) - относительные (в %) изменения САД у группы, получавшей п/к инъекции нативной бычьей плазмы в течение 1 месяца по сравнению с группой, получавшей в течение 1 месяца одновременно п/к инъекции нативной бычьей плазмы и милдроната, 3) - относительные (в %) изменения САД у группы, получавшей п/к инъекции нативной бычьей плазмы в течение 1,5 месяцев по сравнению с группой, получавшей в течение 1,5 месяцев одновременно п/к инъекции нативной бычьей плазмы и милдроната

Таблица 3.

Относительные (в %) изменении СИ

Показатели Интактные Плазма 1 мес Плазма 1,5 мес Плазма + милдронат 1 мес Плазма+ милдронат 1,5 мес Милдронат 1 мес

НА мин. +6,8 +5,8* +5 1)-18,1* +6,8 2)+10,4* +2,5 3)+9,8* +7,3

НА сред +2,8 +6,1 +3,6 1)-19,5* +6,8* 2)+10* +3,5 3)+12,4* +4,5

НА макс -0,3 -1,4 1)-18,7* +0,8 2)+11,8* -1 3)+14,9* +2,8 2)-1,7

Адр мин +12* +9,5* +7,9 1)-18,7* +8,9* 2)-18,7* +10,2* 3)+14,9* +11,2*

Адр сред +23,5* +20,5* +15,8* 1)-20,7* + 16,4* 2)+5,6 +20,7* 3)+17,3* +23,7*

Примечание. * - достоверные (р<0,05) изменения; обозначения как в таблице 2.

Относительные (в %) изменения УПСС

НА мин. +8,9* +8,6 +6,6 1)-11* +10* 2)-11,2* +7 3)+4,7 +8,1

НА сред. +22,3* +13,4* +14,9* 1)-8,1 +17,5* 2)-9,2 +13,2* 3)+2,8 +21,2*

НА макс. +49,3* +38,7* +34,8* 1)-11,9* +38,7* 2)-12,4* +31,2* 3)+1,6 +51,5*

Адр. мин. -7,8 -5,7 -6,7 1)-9,7 -7,4 2)-13,9* -7,8* 3)+2,4 -6,9

Адр. сред. -13,75* -10,3* -10,6* 1)-9,6* -11* 2)-13* -11,3* 3)+3,5 -11,7*

Примечание:* - достоверные (р<0,05) изменения; обозначения как в таблице 2.

Показатели системной гемодинамики у контрольных хомяков, получавших п/к раствор милдроната в течение 30 дней достоверно не отличались от показателей системной гемодинамики у интактных хомяков.

Макроскопически при экспериментальном кардиопатическом типе генерализованного амилоидоза отмечалось расширение полостей предсердий, эндокард выглядел матово-серым, мышца сердца имела плотноэластическую консистенцию, серо- розового оттенка. Наиболее часто амилоид обнаруживался в обоих предсердиях и межпредсердной перегородке, реже - в одном из предсердий, обычно левом.

При микроскопическом исследовании выявлены признаки реактивного эндокардита, миокардита и перикардита в виде выраженных дистрофических изменений кардиомиоцитов, мукоидного набухания и фибриноидных изменений стро-мально-сосудистых структур, гиперемии, расширения и отека тканевых пространств, гидропической дистрофии эндотелиоцитов с наличием в их цитоплазме люминесцирующих конгофильных включений. Отложение амилоида в стенках сосудов (рис.2), сочеталось с ярко выраженными признаками панваскулита и лимфо-гистиоцитарной инфильтрацией очагов мукоидной и фибриноидной альтерации периваскулярной стромы сердца.

В миокарде, на фоне венозного полнокровия, амилоид обнаруживался чаще всего в периваскулярной соединительной ткани и кардиомиоцитах, подверженных очаговой альтерации с исчезновением их поперечной исчерченности (рис.3), стенках артерий среднего и крупного калибра. Отложения конгофильных аномальных белковых структур в интиме венечных артерий сердца сопровождались их резкой

окклюзией и тромбозом. Значительные отложения амилоида обнаруживались в стенках аорты, легочной артерии, нижней и верхней полых вен, легочных вен. В крупных сосудах амилоид откладывался преимущественно в субинтимапьном слое, тогда как в интиме и адвентиции. конгофильная субстанция выявлялась реже. Выявлена высокая степень повышения проницаемости всех составляющих системы микроциркуляции, зоны формирования информационной обратной связи и реализации управляющих эффектов, сопровождающаяся значительными расстройствами транскапиллярного обмена.

- б

1г.

Рис.2. Отложение амилоида в сгенкс венечной артерии сердца (а), дистрофия и некроз эндотелиоцитов (б), лимфо-гистиоцитарпаи инфильтрация адвентиции сосуда (в), пс-риваскулнрпый отек (г) у золотистых сирийских хомяков после 45 дней введения ами-лоидогена. Окр.конго красным. X 600.

Рис.3. Исчезновение поперечной иечерчепноети (а), фрагментации и распад кардио-миоцитов (б), содержащих глыбкн фибриллярных белков амилоида, венозное полнокровие (в) у золотистых сирийских хомяков после 45 дней введения амилоидогена. Окр. гематоксилином и юзином. X 400.

В эпикарде амилоид откладывался в стенках и периваскулярно в виде очаговых глыбчатых и гомогенных накоплений в виде муфт, охватывающих сосуды по периметру.

Функционально вышеуказанные процессы в сердце выражаются в нарушении сократительной функции миокарда, что проявляется снижением сердечного и ударного индексов. Следствием является снижение артериального давления, несмотря на повышение удельного периферического сосудистого сопротивления.

Таким образом, создание модели амилоидоза с помощью подкожного введения бычьей плазмы крови приводит к развитию структурно-функциональной недостаточности кровообращения (рис.4).

При исследовании основных показателей системной гемодинамики у животных, получавших одновременно п/к инъекции бычьей плазмы и милдроната, выявлено, что спустя 30 дней, уровень САД был достоверно ниже чем у интакт-ных хомяков, и практически не изменился по сравнению с животными, получавшими только амилоидоген 30 дней, что было связано со снижением УПСС и увеличением сердечного и ударного индексов под влиянием милдроната. ЧСС незначительно снизилась по сравнению с амилоидными животными, но была больше чем у интактных хомяков.

У животных, получавших амилоидоген и милдронат 45 дней САД увеличилось на 11,4% по сравнению с амилоидными животными, что было обусловлено более высоким уровнем УПСС и увеличением ударного и сердечного индексов и ЧСС.

При анализе изменения адренореактивности были выявлены следующие закономерности.

Введение трех доз а-адреномиметика НА вызвало во всех группах животных дозозависимый прирост САД. При этом у животных, получавших амилоидоген и милдронат 30 дней прирост САД был меньше чем у амилоидных, приближаясь к приросту у интактных хомяков, а у животных получавших амилоидоген и милдронат 45 дней прирост САД был больше чем у амилоидных, приближаясь к значениям у интактных хомяков. Под влиянием милдроната отмечался меньший прирост ударного и сердечного индексов по сравнению с амилоидными животными.

Нативная бычья плазма п/к

Рис.4. Схема нарушения функциональною состояния сердечно-сосудист ой системы при экспериментальном амилоидозе.

У животных, получавших бычыо плазму и милдронат 45 дней, при введении трех дозировок НА, отмечалось большее снижение адренореактивности по сравнению с животными, получавшими те же инъекции 30 дней.

При введении двух доз А животным, получавшим амилоидоген и милдронат 30 дней, отмечался меньший прирост показателей системной гемодинамики по сравнению с амилоидными и интактпыми животными, при этом характеристики адренореактивности приближались к значениям у инткатных животных. Введение двух доз А хомякам, получавшим бычыо плазму и милдронат 45 дней вызвало больший пророст показателей системной гемодинамики по сравнению с амилоидными животными, т.е. характеристики адренореактивности приближались к значениям у интактных хомяков.

Применение милдроната приводит к уменьшению дистрофических и некро-биотических изменений, вызванных нарушением трофической функции стромы, снижению эозинофилии саркоплазмы кардиомиоцитов, сохранению поперечной исчерченности кардиомиоцитов и гиперхромии ядер, что можно косвенно расценивать как признаки внутриклеточной регенерации кардиомиоцитов. Сохранность клеток стромалыю-сосудистых структур приводит к уменьшению сосудистой проницаемости и тканевого отека. Известно влияние милдроната на гуморальный иммунитет, по всей видимости, основанное на нормализации процессов синтеза антител плазматическими клетками (V.A. Or]ov, V.l. Sokolova, I.P. Zamotaev et al., 1990; A.A. Starchenko, V.A. Khil'ko, B.V. Gaidar et al., 1995), что в нашем случае может вызвать нарушение синтеза аномального белка, морфологически проявляющееся в снижении выраженности конгофилии и метахромазии стенок сосудов.

Функционально все описанные эффекты проявляются увеличением сократительной способности миокарда по сравнению с амилоидными животными, что выражается в увеличении сердечного и ударного индексов. Это в свою очередь приводит повышению артериального давления и улучшению, в итоге, процессов микроциркуляции. Последнее также может быть обусловлено снижением УПСС, уменьшением сосудистой проницаемости и тканевого отека (рис.5).

Изменения адренореактивности животных, получавших инъекции бычьей плазмы и милдроната в течение 1 и 1,5 месяцев свидетельствуют о том, что протекторное и корригирующее влияние милдроната на рецепторный аппарат не является превалирующим. О положительном действии милдроната можно судить по

достоверно более высоким показателям снс1емпой гемодинамики при применении данного препарата в течение 1,5 мсс. по сравнению с животными , получавшими одноименные инъекции 30 дней.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ТЕРАПИЯ АМИЛОИДОЗА СЕРДЦА МИЛДРОПАГОМ

Н3с о

НзС-^-Ш-СНг-СН^С -2 Н20 Нз(/ ^О"

Рис.5. Схема механизма дейс! вия мнлдроната на функциональное состояние сердсчно-сосудисюй сис!смы при экспериментальном амилоидозе.

В группе животных, получавших в течение 45 дней одновременно подкожные инъекции нативной бычьей плазмы и милдронат установлено некоторое снижение содержания в тканях амилоидположительных структур.

Отмечалось значительное снижение плазматического пропитывания сосудистой стенки с меньшим проявлением признаков панваскулита и периваскулита (рис.6).

Рис.6. Уменьшение плазматическою пропитывания сосудистой стеики (а) с меньшим проявлением признаков панваскулита и периваскулита у золотистых сирийских хомяков, получавших в течение 45 дней одновременно подкожные инъекции нативпой бычьей плазмы и милдронат. Х400

Рис.7. Сохранение поперечной исчерче......... н целостности кардиомиоцитов (а) у золотистых сирийских хомяков, получавших в течение 30 дней одновременно подкожные инъекции нативпой бычьей плазмы и милдронат. Х400.

В группе животных, получавших в течение 45 дней одновременно подкожные инъекции нативной бычьей плазмы и милдронат уменьшалось отложение амилоида в миокарде с сохранением поперечной иечерченности и целостности кардиомиоцитов, доказательством чего служит снижение хромотропной активно-

сти указанных анатомических образований н вялая тучноклеточная реакция (рис.7).

ВЫВОДЫ

1. Длительное (30 и 45 дней) подкожное введение золотистым сирийским хомякам нативпой бычьей плазмы в дозе 0,025 мл/г массы тела вызывает развитие системного амилоидоза с нреимущес1 венным поражением сердца, почек, селезенки, печени.

2. В результате развития амилоидоза у хомяков наблюдается снижение артериального давления, связанное с уменьшением сердечного выброса в результате поражения миокарда амилоидными массами. Данные изменения наиболее выражены у хомяков, получавших амилоидо! ей 45 дней.

3. При экспериментальной модели амилоидоза у хомяков развивается снижение а- и (3- адренореактивности сердечно-сосудистой системы, что наиболее выражено при 45-дневном введении амилоидо! сна.

4. Введение лекарственного препарата 3-(2,2,2-триметилгидразиний) пропионата (милдроната) в дозе 50 мг/кг массы тела иптактным хомякам не вызывает статистически значимых изменений морфо-функционалыюго состояния сердечно-сосудистой системы у золотистых сирийских хомяков.

5. Применение милдроната одновременно с нативной бычьей плазмой способствует меньшему, чем при изолированном введении амилоидогена снижению артериального давления, что обусловлено более высокими значениями УПСС, сердечного и ударного индексов. При эюм имеет место меньшее снижение адренореактивности сердечпо-сосудиеюй сис!емы по сравнению с животными, получавшими только бычыо плазму.

6. Применение милдроната одновременно с нативной бычьей плазмой ведет к снижению отложения амилоида в ор! апоспецифических и стромально-сосудистых структурах миокарда, что сопровождается адекватным уменьшением реактивных изменений.

7. Полученные результаты исследования подтверждают возможность положительного влияния милдроната при экспериментальном кардиопатическом типе генерализованного амилоидоза, выражающегося в коррекции структурно-функциональных изменений, что можег служи 1ь основанием рекомендовать его

для включения в арсенал лекарственных средств, применяемых для профилактики и лечения амилоидоза.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Созданную экспериментальную модель амилоидоза возможно рекомендовать для исследования этиологии, патогенеза, морфо-функциональных проявлений и разработки способов лечения генерализованного амилоидоза и его кар-диопатической формы.

2. Результаты исследования позволяют рекомендовать милдронат для апробации включения указанного фармакологического препарата в перечень лекарственных средств, применяемых для лечения и профилактики генерализованного амилоидоза и его кардиопатической формы.

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Гагкаева И.З., Гиоева З.В., Пухова И.У., Козырев K.M., Епхиев A.A. Изучение универсального протекторного и нормализующего действия фармакологического препарата милдронат (3-(2,2,2-триметилгидразиний) пропионата) // International Journal on Immunoreabilitation. Vol.4, Number 1, March 2002., C.77-78.

2. Гиоева 3.B., Заалишвили T.B., Кабисов O.T., Козырев K.M., Брин В.Б. Структурно-патофизиологическая характеристика модели амилоидоза и ее экспериментальная терапия милдронатом // Экстремальная медицина. Материалы научно-практической конференции Южного Федерального округа с международным участием. Владикавказ, 2006.С.28-31.

3. Гиоева З.В., Брин В.Б., Козырев K.M. Структурно-функциональная оценка системного кровообращения при экспериментальном амилоидозе// Сборник научных трудов МАИ ВШ №4, Владикавказ,2006. С.314-317.

4. Гиоева З.В., Козырев K.M., Брин В.Б. Структурно-функциональная оценка системного кровообращения при экспериментальном кардиопатическом амилоидозе. Влияние милдроната // Сборник научных трудов МАН ВШ №4, Владикавказ,2006. С.310-314.

5. Гиоева З.В. , Козырев K.M., Брин В.Б. Роль среды обитания в реализации лечебных эффектов милдроната при экспериментальном амилоидозе Мате-

риалы VI Международной конференции «Инновационные технологии для устойчивого развития горных территорий» // Владикавказ, 2007.-C.333-334.

6. Гиоева З.В., Брин В.Б., Козырев K.M., Кабисов О.Т., Заалишвили Т.В. Функциональная и морфологическая харакюристика новой модели экспериментального амилоидоза //Вестник новых медицинских технологий. - Тула, 2007. -T.XIV, № 1.- С.96-98.

7. Гиоева З.В., Брин В.Б., Козырев K.M. К вопросу использования лечебных эффектов милдроната при экспериментальном амилоидозе. Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины: материалы 65-й открытой итоговой научной конференции // Волки рад: Изд-во ВолГМУ, 2007., С. 171.

8. Гиоева З.В. Милдронат ирофилактрует развитие экспериментального кардиопатического амилоидоза. // Тезисы докладов 6 научной конференции молодых ученых СОГМА и ИБМИ ВИЦ. - Владикавказ, СОГМА. - 2007. - С. 42 - 43.

9. Гиоева З.В., Брин В.Б., Козырев K.M. Влияние милдроната на формирование структурно-функциональных признаков экспериментального кардиопатического амилоидоза. Вестник МАНЭБ, 2007,'Г. 12.-№3.-С.58-65.

10. Пат.2306617 Российская Федерация МПК G09B 23/28. Способ моделирования экспериментального амилоидоза у животных/ Гиоева З.В., Заалишвили Т.В., Козырев K.M., Брин В.Б.; заявитель и патентообладатель ГОУ ВПО «СевероОсетинская гос. мед. академия Федеральп. атютва по здравоохр. и соц. разв. »№2006113109/13; заявл. 18.04.2006; опубл. 20.09.2007// Бюл.-2007. - №26.

Информационно - издательский отдел ГОУ ВПО СОГМА Росздрава Подписано в печать 09 10 2008г Тираж 100 экз Формат издания 60 х 90 уел печ л 1,0 Заказ № 60

Оглавление диссертации Гиоева, Зарина Владиславовна :: 2008 :: Владикавказ

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1 .Амилоидоз, как фундаментальная проблема.

История вопроса.

1.2.Патофизиологическая и патоморфологическая характеристика кардиопатического амилоидоза.

1.3.Моделирование амилоидоза в эксперименте. Итоги экспериментального изучения.

1.4.Лечение кардиопатического амилоидоза, основные принципы медикаментозной терапии.

1.5.Фармакологическая характеристика 3-(2,2,2-триметилгидразиний) пропионата (милдроната).

Глава 2. Материалы и методы исследования.

2.1 .Метод моделирования амилоидоза.

2.2.Фармакологические препараты и материалы, использованные в эксперименте.

2.3.Методические приемы, варианты опытов, объем исследований.

2.4. Методики патофизиологического исследования.

2.5. Методики патогистологического исследования.

Глава 3. Функционально-морфологическая характеристика экспериментальной модели амилоидоза сердца у золотистых сирийских хомяков.

3.1. Функциональная характеристика экспериментальной модели амилоидоза сердца у хомяков.

3.2. Морфологическая характеристика экспериментальной модели амилоидоза сердца у золотистых сирийских хомяков.

Глава 4. Функционально-морфологическая характеристика экспериментальной терапии амилоидоза сердечно-сосудистой системы у золотистых сирийских хомяков.

4.1. Материалы патофизиологического исследования системной гемодинамики у хомяков, подвергнутых воздействию нативной бычьей плазмы и милдроната.

4.2. Результаты патоморфологического исследования органов хомяков, подвергнутых воздействию нативной бычьей плазмы и милдроната.

Глава 5. Обсуждение результатов исследования.

Введение диссертации по теме "Патологическая физиология", Гиоева, Зарина Владиславовна, автореферат

Актуальность проблемы. В последнее время кардиопатический тип (первичного, старческого) амилоидоза вызывает значительный интерес у исследователей (В.В.Серов, 1994 - 1998; Козырев К.М., Сяткин С.П., Березов Т.Т., 2002; Козырев К.М., Тутаева З.Р., 2005).

Обладая химической инертностью и иммунологической толерантностью, амилоид безудержно накапливается в органах и тканях, становясь морфологическим субстратом многих заболеваний человека и животных (В.Я. Карамышева, Т.С. Гулевская, В.В. Погодина и соавт., 2003), что приводит к атрофии и склерозу органов и развитию их функциональной недостаточности.

Согласно современным представлениям, амилоидоз, являясь тяжелым патологическим процессом, развивается в результате мутационных изменений генетического аппарата клеток, которые синтезируют фибриллярные белки амилоида. По этой теории соматическая мутация вызывает «ошибки» в генетическом аппарате, приводящие к синтезу белков с измененными антигенными свойствами и становящимися «чужими» для иммунной системы организма. Возникающее при этом снижение иммунного контроля за генетически детерминированным белково-клеточным гомеостазом в свою очередь может приводить к мутагенному диспротеинозу.

Многообразие висцеральных проявлений и инвалидизация, отсутствие эффективных мер профилактики и лечения, далеко еще не решенные вопросы этиологии и патогенеза, обусловливают актуальность изучения амилоидоза в целом и его кардиопатического типа в частности.

Амилоид может откладываться в любой структуре сердца: в перикарде, клапанах, строме миокарда, эндокарде, папиллярных мышцах, мелких сосудах миокарда с развитием микроциркуляционной стенокардии. При этом на аутопсии он может не диагностироваться макроскопически, однако микроскопически может выявляться.

Бесспорное диагностическое подтверждение наличия амилоидоза сердца может быть получено только при эндомиокардиальной биопсии. При невозможности произвести эндомиокардиальную биопсию, наиболее доступными для биопсии объектами считаются кожа, десна, язык и слизистая оболочка толстой кишки.

Одним из основных методов изучения патогенеза амилоидоза является экспериментальное моделирование. Существует большое количество способов его воспроизведения, большинство из которых основывается на введении животным биологических или химических агентов раздельно и в различных их сочетаниях (D. Cui, Н. Kawano, М. Takahashi et al., 2002) с целью запуска иммуно-патобиохимичеких механизмов образования амилоидных фибрилл (М. Garcia-Garcia, G. Mourad, М. Durfort et al., 2003). Комбинированные методы моделирования амилоидоза чаще применяются при работе с трансгенными мышами (A. Solomon, D.T. Weiss, М. Schell et al., 1999).

Амилоидоз - заболевание тяжелое, но все же далеко не фатальное и безнадежное. Положительные результаты экспериментальных исследований (Заалишвили Т.В., 2004) подтверждают возможность приостановки дальнейшего накопления амилоида в тканях и органах и даже его рассасывания. Это позволяет ставить вопрос о возможности обратимости амилоидоза и поиске методов и средств, действующих относительно избирательно на определенные звенья его патогенеза и направленных на стимуляцию амилоидоклазии.

Исходя из описанных ранее (Логунова JI.B., Сутулов Ю.Л., Епхиев

А.А. и др., 1998; Логунова Л.В., Сутулов Ю.Л., Епхиев А.А. и др., 1999; Dambrova М., Liepinsh Е., Kalvinsh I., 2002) положительных многофакторных свойств милдроната, в частности его иммуномодулирующего и цитомембраностабилизирующего действия, целесообразным становится изучение эффектов использования препарата для коррекции нарушений при экспериментальном кардиопатическом типе генерализованного амилоидоза.

Задачи исследования. Для достижения указанной цели в работе решались следующие задачи:

2. Исследовать функциональное состояние сердечно-сосудистой системы амилоидных животных, получавших милдронат.

Научная новизна. Впервые разработан метод моделирования амилоидоза путем длительного (30 и 45 дней) подкожного введения золотистым сирийским хомякам нативной бычьей плазмы в дозе 0,025 мл/г массы тела, при котором развивается системный амилоидоз с преимущественным поражением сердца, печени, почек, селезенки.

Установлено, что подкожное введение экспериментальным животным милдроната одновременно с нативной бычьей плазмой способствует меньшему, чем при изолированном введении амилоидогена снижению артериального давления, что обусловлено более высокими значениями удельного периферического сосудистого сопротивления, сердечного и ударного индексов по сравнению с амилоидными животными; отмечается меньшее снижение адренореактивности сердечно-сосудистой системы; выявляются выраженные структурно-функциональные нарушения в миокарде, по сравнению с животными, получавшими только амилоидоген.

По теме диссертационной работы, на основании результатов исследования получен патент на изобретение Федерального института промышленной собственности от 20 сентября 2007 г, под № 2306617.

Научно-практическая значимость работы. Исследование носит экспериментальный характер и полученные результаты, демонстрирующие эффекты длительного введения золотистым сирийским хомякам нативной бычьей плазмы, сопровождающиеся развитием амилоидоза сердца, относятся к области фундаментальных знаний, так как расширяют представления о возможностях моделирования амилоидоза сердца, вносят определенный вклад в теорию патогенеза амилоидоза. Выявленные эффекты применения лекарственного препарата милдроната демонстрируют возможность его лечебного и профилактического применения с целью нормализующего влияния на функциональное состояние сердечно-сосудистой системы.

Результаты исследования могут быть использованы при преподавании патофизиологических и гистоструктурных основ стромально-сосудистых диспротеинозов, при разработке способов профилактики и лечения амилоидоза.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Длительное (30 и 45 дней) введение золотистым сирийским хомякам нативной бычьей плазмы в дозе 0,025 мл/г массы тела приводит к развитию системного амилоидоза с преимущественным поражением сердца, печени, почек, селезенки.

2. Формирование экспериментального амилоидоза сопровождается снижением артериального давления, что вызвано уменьшением сердечного выброса в результате поражения миокарда амилоидными массами, и снижением а- и f3- адренореактивности сердечнососудистой системы.

3. Применение милдроната одновременно с нативной бычьей плазмой способствует меньшему, чем при изолированном введении амилоидогена снижению сердечного выброса и артериального давления, также меньшему снижению адренореактивности сердечно-сосудистой системы, ослаблению структурных признаков амилоидного поражения миокарда.

Апробация диссертационной работы.

Материалы исследований доложены и обсуждалисть на конференции молодых ученых СОГМА (Владикавказ,2007); конференции «Инновационные технологии для устойчивого развития горных территорий» (Владикавказ,2007), объединенном заседании сотрудников кафедр нормальной и патологической физиологии, патологической анатомии, биохимии, научных сотрудников ЦНИЛ.

Публикации: по теме диссертации опубликовано 9 работ.

Заключение диссертационного исследования на тему "Патогенез и экспериментальная терапия модели первичного амилоидоза кардиопатического типа"

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2008 года, Гиоева, Зарина Владиславовна

1. Абрикосов А.И. О рассасывании амилоида при помощи гигантских клеток у человека // Сборник, посвященный 25-летию научной деятельности Н.Н. Аничкова, т. 1, М. JL, 1935, С. 14-17.

2. Баранов В.Н. Тонкая структура амилоида // Бюл. экспер. биол., 1973, №9, С. 119-121.

3. Баранов В.Н. Ультраструктура селезенки мыши в норме и при экспериментальном амилоидозе // Дис. канд. мед. наук. -М, 1973.

4. Белицкий Г.А., Кальвинын И.Я., Анисимов В.Н. и др. Отсутствие мутагенных и канцерогенных свойств у милдроната // Вопросы онкологии. — 1999. Вып.45(3). - С. 279-282.

5. Брин В.Б., Зонис Б.Я. Физиология системного кровообращения. Изд-во Ростовского университета, 1984.-88с.

6. Вермель А.Е. Амилоидоз: классификация, клиническая характеристика. Диагностика и лечение // Клин. Мед. № 7. — 1997. - С. 1217.

7. Виноградова О.М. Периодическая болезнь. М.: Медицина,1973.

8. Виноградова О.М. Первичный и генетические варианты амилоидоза. М.: Медицина, 1980. - 223 с.

9. Виноградова О.М., Борисов И.А. Семейный амилоидоз // Клин, мед., 1975, № 1, С. 31-35.

10. Голодинский В.А., Дорецкая Н.Ф., Дорецкий В.В. Случай системного амилоидоза с преимущественным поражением сердца //Коллектив авторов 1991., №35, с.23-24.

11. Грицман А.Ю. Некоторые вопросы экспериментальной терапии амилоидоза и резорбции амилоида // Автореф. диссс. канд. мед. наук. — М.,1974.

12. Заалишвили Т.В., Брин В.Б., Логунова Л.В., Епхиев А.А. Применение милдроната в комплексном лечении экспериментального амилоидоза // Материалы научно-практич. конф., поев. 100-летию со дня рождения проф. Н.С. Гурциева. — Владикавказ. — 2005. — С. 68-69.

13. Заалишвили Т.В., Козырев К.М. Способы моделирования амилоидоза у экспериментальных животных // Успехи современного естествознания. Издательство Академии Естествознания, М. — 2005. №. 2 . -С. 78 - 79.

14. Заалишвили Т.В., Козырев К.М. Фармакологические свойства 3-(2,2,2-три- метилгидразиний) пропионата (милдроната) и области его применения // Успехи современного естествознания. Издательство Академии Естествознания, М 2004. - № 11. - С. 27.

15. Захарова Е.В., Хрыкина А.В., Проскурнева Е.П., Варшавский В.А. — «Случай первичного амилоидоза: трудности диагностики и лечения»; Нефрология и диализ, 2002, 1:54-61

16. Капинус Л.Н. Иммуноморфологическое изучение ранних стадий амилоидогенеза // Бюлл. Эксп. Биол. Мед. 1978. - Т. 85, №2. - С. 232-234.

17. Карамышева В.Я., Кулевская Т.С., Погодина В.В., и др. Патоморфология головного мозга при прионных болезнях.-М. :Медицина.-2003.-208с.

18. Козловская Л.В. Амилоидоз // Тер. арх. 1998. - № 6. - С. 62-70.

19. Козловская Л.В., Рамеев В.В., Саркисова И.А. Амилоидоз у пожилых. //Клиническая медицина. М.: «Медицина», 2005. с. 12-20.

20. Козырев К.М., Салбиев К.Д., Березов Т.Т. Морфобиохимические аспекты старческого амилоидоза. Владикавказ: Проект-Пресс, 2006.-232с.

21. Козырев К.М., Сяткин С.П., Березов Т.Т. Вестник РАМН 2002.-№7.-С.З-9.

22. Козырев К.М. Тутаева З.Р. Патогенез и клинико-морфологические особенности нейродегенеративных заболеваний у долгожителей различных климатических районов Северного Кавказа// Вестник новых медицинских технологий. -2005.-T.XII, №3-4.-С.120-124.

23. Корнеева Т.С. О химической природе и ультраструктуре амилоида // Арх. пат., 1970, № 6, С. 3-8.

24. Кузнецов В.Н. О лечебном применении цистеина при психозах в старческом возрасте. — В кн.: Юбил. конф. молодых уч. КИУВ. Киев, 1967, С. 40-42.

25. Логунова JI.B., Сутулов Ю.Л., Епхиев А.А., Батагова Ф.Э. Мембраностабилизирующее действие милдроната при стрессорных и токсических воздействиях // XVII Всероссийский съезд физиологов: Тез. докл. — Ростов на - Дону, 1998. - С. 331.

26. Логунова Л.В., Сутулов Ю.Л., Епхиев А.А., Тобоев Г.Г. К вопросу о применении милдроната в качестве иммуномодулятора.// Int. J. on Immunrehabilitation.-1999.-12.-C.9.-№16.

27. Лукина Г.В., Муравьев Ю.В., Прокаева Т.Б., Алекберова B.C. Лечение вторичного амилоидоза при ревматоидном артрите // Тер. Арх. — 1996.-№5.-С. 19-21.

28. Машковский М.Д. Лекарственные средства: в 2-х томах. Т. 2. -Харьков «Торсинг». 1998. -463 с.

29. Недошивнн А.О., Петрова Н.Н., Кутузова А.Е. и др. Влияние милдроната на качество жизни пациентов с хронической сердечной недостаточностью // Тер. Арх. 1999. -№71(8). - С. 10-12.

30. Николаев А.Ю., Милованов Ю.С., Трофимова Е.И. Трудноконтролируемая артериальная гипертония у больного амилоидозом почек при периодической болезни // Тер. Арх. 1998. - № 6. - С. 61-62.

31. Орлов В.А., Соколова В.И., Замотаев И.П. и др. Клинико-иммунологические аспекты использования милдроната у больных с бронхолегочными заболеваниями // Антибиот. химиотер. 1990. - Июль. -№35(7). - С. 47-50.

32. Рамеев В.В., Чегаева Т. В., Проскурнева Е. П. Успешное многолетнее применение колхицина при вторичном АА-амилоидозе // Терапевт, арх, 1999, N 1. С. 54-57.

33. Рукосуев B.C. К патогенезу амилоидоза (экспериментальное исследование) // Автореф. дис. д-ра мед. наук. М, 1975.

34. Рукосуев B.C. Неспецифический фактор, стимулирующий амилоидогенез у мышей // Арх. пат. 1970, вып. 10, С. 42-25.

35. Рукосуев B.C. Об участии гамма-глобулина и специфических антител в формировании амилоида // Арх. пат. 1973, т. 35, № 11, С. 33-37.

36. Рукосуев B.C. Перенос фактора, стимулирующего амилоидогенез от людей к мышам // Бюл. экспер. биол. 1971, № 2, С. 27-29.

37. Серов В.В. Амилоидоз: новые факты, спорные и нерешенные вопросы // Арх. пат., 1989, т. 51, вып. 10, С. 3-10.

38. Серов В.В. Локальные формы амилоидоза как проявление возрастной патологии: новый взгляд на проблему // Арх. пат., 1994, вып. 5, С. 39-43.

39. Серов В.В., Зыкова Л.Д. Старческий амилоидоз // Тер. арх., 1987, №8, С.14-20.

40. Серов В.В., Шамов А.И. Амилоидоз.: -М.: Медицина, 1997.-291 с.

41. Строжаков Г.И., Гендлин Г.Е. Амилоидоз серца. Журнал Сердечная недостаточность Том1 №1 2000.С.28-36.

42. Струков А. И., Серов В. В. Патологическая анатомия. Учебник. Изд. 4-ое -М.: Медицина, 1995.

43. Татров А.С. влияние паратгормона на реактивность системной и почечной гемодинамики у нормотензивных и спонтанно гипертензивных крыс. Автореф.дисс.канд. Краснодар, 1991.

44. Тихонова Г.Н., Чебышев А.П. Электронно-микроскопическая характеристика резорбции амилоида//Бюл. экспер. биол., 1975, №11, С. 108110.

45. Шамов И.А. Диагностика амилоидоза // Терапевт, арх. 1970, вып. 9, С. 21-24.

46. Шахламов В.А., Баранов В.Н., Рукосуев B.C., Капинус JI.H. Роль повышенной сосудистой проницаемости в образовании диморфного амилоида в миокарде мыши // Арх. пат., 1977, № 2, С. 58-64.

47. Шустов С.Б., Баранов B.JL, Барсуков А.В., Шкодин И.В., Орел С.В., Сагун Б.В. Амилоидоз сердца. Новые Санкт-Петербургские врачебные ведомости 2004, Т.4., №17, с.21-26.

48. Шутенко Ж.В., Симхович Б.З., Мейрена Д.В. и др. Регуляция карнитин-зависимого метаболизма жирных кислот миокарде у крыс при использовании 3-(2,2,2-триметилгидразиний) пропионата // Вопр. мед. хим. — 1989. Март-апрель. - №35(2). - С. 59-64.

49. Akamatsu Y., Ikegami R., Watanabe К., Kikui M. Induction of leukemia and amyloidosis in senile C57BL mice by oral feeding of 3-methylcholanthrene in olive oil solution // Gann. -1968. — Vol. 59, N 6. — P. 489496.; ii9t ^

50. Altieri P., Sau G., Cao R., Barracca A., Menneas A., Micchittu В., Cabiddu G., Esposito P., Pani A. Immunosuppressive treatment in dialysis patients //Nephrol. Dial. Transplant. 2002; 17 Suppl. 8. P. 2-9.

51. Antonenko L.I., Frantsuzova S.B., Arshinnikova L.L. The effect of mildronate on erythrocyte membrane permeability in experimental lung pathology. Eksp Klin Farmakol. 1992 Nov-Dec; 55(6): 33-35.

52. Arab A. Nosological unity of senile dementia and Altzheimer's disease according to a statistical and anatomo-clinical study // Sist. nerv., 1960, N 12, P. 189-201.

53. Araki H., Muramoto H., Oda K., Koni I., Mabuchi H., Mizukami Y., Nonomura A. Severe gastrointestinal complications of dialysis-related amyloidosis in two patients on long-term hemodialysis // Am. J. Nephrol. 1996; 16(2). P. 149-153.

54. Argiles A., Mourad G., Axelrud-Cavadore C., Cavadore J.C., Mion C. Amyloid deposits in hemodialysis patients: immunochemical analysis // Nephrologie. 1987; 8(2). P. 51-54.

55. Argiles A., Mourad G., Axelrud-Cavadore C., Watrin A., Mion C., Cavadore J.C. High-molecular-mass proteins in haemodialysis-associated amyloidosis // Clin. Sci (bond). 1989. - Vol. 76(5). - P. 547-552.

56. Ausserwinkler M., Karlo O., Ebner F., Schmidt P. Craniocervical amyloid tumor with destructive spondyloarthropathy and myelocompression as a rare complication of long-term dialysis // Wien Klin. Wochenschr. 1990. - Vol. 102(5).-P. 152-155.

57. Bolle G., Guery В., Joly D., et al. Presentation and outcome of patients with systemic amyloidosis undergoing dialysis // Clin J Am Soc Nephrol. -2008. Vol. 3.-375-381.

58. Borczuk A., Mannion C., Dickson D., Alt E. Intestinal pseudoobstruction and ischemia secondary to both beta 2-microglobulin and serum A amyloid deposition // Mod Pathol. 1995. - Vol. 8(5). - P. 577-582.

59. Brancaccio D., Cozzolino M., Gallieni M. Dialysis amyloidosis: clinical aspects and therapeutic approach // Nephrol. Dial. Transplant. 1996. Vol. 11 Suppl. 3. - P. 102-105.

60. Briggs G.W. // Ann. Intern. Med. 1961. - Vol. 55. - P. 943-957

61. Cagli V. La amiloidosi. Policlinico // Sez. prat. 1961. - Vol. 68. - N 49. -P.1801-1814.

62. Campistol J.M, Argiles A. Dialysis-related amyloidosis: visceral involvement and protein constituents // Nephrol. Dial. Transplant. 1996. Vol. 11 Suppl. 3. -P.142-145.

63. Campistol J.M. Dialysis-related amyloidosis after renal transplantation // Semin Dial. 2001 Mar-Apr; 14(2). P. 99-102.

64. Cetinkaya R., Odabas A.R., Selcuk Y., Erman Z., Kaya H. Bone marrow amyloidosis with erythropoietin-resistant anemia in a patient undergoing chronic hemodialysis treatment // South Med. J. 2003. Vol. 96(5). - P. 491-493.

65. Сое J.E., Ross M.J. Amyloidosis and female protein in the Syrian hamster. Concurrent regulation by sex hormones // J. Exp. Med. -1990.- Apr. 1. — Vol. 171, N4.-P. 1257-1267.

66. Cornwell G.G., Westermark P., Murdoch W., Pithanen P. // Amer. J. Path. 1982. - Vol. 108. - P. 135-139.

67. Cui D., Kawano H., Takahashi M. et al. Acceleration of murine AA amyloidosis by oral administration of amyloid fibrils extracted from different species // Pathol Int. 2002. - Vol. 52, N 1. - P. 40-45.

68. Dambrova M., Lierinsh E., Kalvinsh I. Milronate: cardioprotective action through carnitine-lowering effect. Trends Cardiovasc Med. 2002,- Vol. 12(6): 275-279.

69. Dammacco F. Amyloidosis: clinical picture, immunological and biomolecular features, treatment prospects // Ann. Ital. Med. Int. 1991. - Vol. 6(1 Pt 2). — P. 107-116.

70. Danesh F., Ho L.T. Dialysis-related amyloidosis: history and clinical manifestations // Semin Dial. 2001 Mar-Apr; 14(2). P. 80-85.

71. Diaz Candamio M.J., Pombo F., Yebra M.T. Amyloidosis presenting as a perforated giant colonic diverticulum // Eur Radiol. 1999; 9(4). P. 715-718.

72. Elizabeth M. Brunt, Dina G. Tiniakos, Metabolic storage diseases: amyloidosis. Clin Liver Dis 8, 2004, P.915-930.

73. Fukuda K., Yamamoto H. Dialysis-related amyloidosis // Semin Musculoskelet Radiol. 2001 Jun; 5(2). P. 113-119.

74. Garcia-Garcia M., Argiles., Gouin-Charnet A., Durfort M., Garcia-Valero J., Mourad G. Impaired lysosomal processing of beta2-microglobulin by infiltrating macrophages in dialysis amyloidosis // Kidney Int. 1999 Mar; 55(3). -P. 899-906.

75. Gejo F. Complications in hemodialysis // Nippon Naika Gakkai Zasshi. 2002.- Vol. 20; Suppl 91. P. 122-126.

76. Gejyo F., Narita I. Current clinical and pathogenetic understanding of beta2-m amyloidosis in long-term haemodialysis patients // Nephrology (Carlton). 2003.- Vol.8; Suppl. 2. P. 45-49.

77. Geluwe F., Dymarkowski S., Crevits I., et. al. Amyloidosis of the heart and respiratoiy system// Eur Radiol.- 2006.- Vol. 16. P. 2358-2365.

78. Gertz M. A., Lacy M. Q., Dispensieri A., Hayman S. R. Amyloidosis // Best Practice & Research Clinical Haematology.- 2005.- Vol.l8№4, P.709-727.

79. Gillmore JD, Lovat LB, Persey MR, Pepys MB, Hawkins PN Amyloid load and clinical outcome in AA amyloidosis in relation to circulating concentration of serum amyloid A protein // Lancet. 2001.- Vol. 358.-P. 24-29.

80. Goette A, Roecken C. Atrial amyloidosis and atrial fibrillation: a gender -dependent «arrhythmogenic substrate»?// European Heart Journal. -2004-Vol. 25.-P. 1185-1186.

81. Harel L., Mukamel M., Amir J., Straussberg R., Cohen A.H., Varsano I. Colchicine-induced myoneuropathy in childhood — Eur. J. Pediatr. 1998. — Oct .- Vol.157, N 10.-P.853-855.

82. Hassan W., Al-Sergani H., Mourad W., at. al. Amyloid Heart Disease new Frontiers and Insights in Pathophysiology,Diagnosis, and Management // Tex Heart Inst J.- 2005. Vol. 32. P.178-184.

83. Hayashi Y., Ishida H., Hoshiai M. MET-88, a gamma-butyrobetaine hydroxylase inhibitor, improves cardiac SR Ca uptake activity in rats with congestive heart failure following myocardial infarction// Mol Cell Biochem.-2000 Vol. 209(1-2).- P. 39-46.

84. Himmelmann F., Schroder J.M. Colchicine myopathy in a case of familial Mediterranean fever: immunohistochemical and ultrastructural study of accumulated tubulin-immunoreactive material. // Acta Neuropathol. (Berl). -1992.- Vol. 83. № 4. - P. 440-444.

85. Hirao F., Fujisawa Т., Tsubura E. et al. Experimental amyloidosis induced by 20-methylcholanthrene in rabbits // Acta Pathol. Jpn. 1967. - Feb. —1. Vol.17, N 1. -P.23-35.

86. Hirshberg A., Kaplan I., Gorsky M. Beta-2-microglobulin-associated nodular amyloidosis of the tongue // Int. J. Oral Maxillofac Surg. 1998 Jun; 27(3). P. 226-228.

87. Ho F.C., Fu K.H. A new model of AA-amyloidosis induced by oral pristane in BALB/c mice // Br. J. Exp. Pathol. -1987. Jun. - Vol. 68, N 3. - P. 413-420.

88. Husby G, Marhaug G, Dowton B, Sletten K, Sipe ID Serum amyloid A (SAA): biochemistry, genetics and the pathogenesis of AA amyloidosis // Amyloid.- 1994,-Vol.1.-P. 119-137.

89. Ikeda Shu-ichi Cardiac Amyloidosis : Heterogenous Pathogenic Backgrounds // Internal Medicine. 2004.- Vol.43, № 12. P. 1107-1114.

90. Ikegaya N., Hishida A., Sawada K., Furuhashi M., Maruyama Y., Kumagai H., Kobayashi S., Yamamoto Т., Yamazaki K. Ultrasonographic evaluation of the carpal tunnel syndrome in hemodialysis patients // Clin. Nephrol. 1995 Oct; 44(4). P. 231-237.

91. Isobe T, Matsushita T, Minakata T, et al. Coexistence of AL and Ap2M amyloid in tissues of a patient with myeloma on hemodialysis //Amyloid. — 1996.-Vol. 3.-P. 41-43.

92. Falk R. H. Diagnosis and Management of the Cardiac Amyloidoses // Circulation.- 2005. Vol. 112.- P. 2047-2060.

93. Jiang A., Qi W., Zhang F. Dynamic change of beta 2-microglobulin in hemodialysis // Zhonghua Nei Ke Za Zhi. 1996.- Vol. 35(6). - P. 397-399.

94. Jimenez R.E., Price D.A., Pinkus G.S., Owen W.F. Jr., Lazarus J.M., Kay J., Turner J.R. Development of gastrointestinal beta2-microglobulin amyloidosis correlates with time on dialysis // Am. J. Surg Pathol. 1998.- Vol. 22(6).-P. 729-735.

95. Joko Т., Tanaka H., Hirakata H., Henzan H., Hizawa K., Hirakata E., Higashi H., Yonemasu H., Fujishima M. Phlegmonous gastritis in a haemodialysispatient with secondary amyloidosis // Nephrol. Dial. Transplant. -1999.- Vol 14(1). -P. 196-198.

96. Kagan T.I., Simkovich B.Z. Kalvinysh et al. Study of the effect of an inhibitor of carnitine-dependent metabolism of mildronate on the oxidation of fatty acid in the liver mitochondria of intact rats // Vopr Med Khim. 1991.- Vol. 37(2). P. 44-46.

97. Kaplan B, Hrncic R, Murphy CL, Gallo G, Weiss DT, Solomon A. Microextraction and purification techniques applicable to chemical characterization of amyloid proteins in minute amounts of tissue // Methods Enzymol.- 1999.- Vol. 309.- P. 67-81.

98. Kawano M, Muramoto H, Yamada M, Minamoto M, Araki H, Koni I, Mabuchi H, Nonomura A. Fatal cardiac beta2-microglobulin amyloidosis in patients on long-term hemodialysis // Am. J. Kidney Dis. -1998.- Vol. 31(3).-P.4.

99. Kennedy J.S., Anderson J.D. The effect of treatment of the associated disease on the development of amyloidosis in the experimental animal // J. Pathol. 1983. - Vol. 141, N 1. -P. 11-15.

100. Ketteler M., Koch K.M., Floege J. Imaging techniques in the diagnosis of dialysis-related amyloidosis // Semin Dial. -2001.- Vol. 14(2). P. 9093.

101. Kholova I., Niessen H W M. Amyloid in the cardiovascular system: a review //J. Clin. Pathol. 2005.- Vol. 58.- P.125-133.

102. Kiromoto Т., Nobori K., Asaka et al. Beneficial effect of Met-88, a gamma-butyrobetaine hydroxylase inhibitor, on energy metabolism in ischemic dog hearts // Arch Int Pharmacodyn Ther. -1996.- Vol. 331(2).- P. 163-178.

103. Komatsuzaki Y., Tanaka M., Sakuma Т., Kiyokawa M., Takebayashi H. Retinal vessel changes in a patient with primary systemic nonfamilial amyloidosis // Ophthalmic Surg Lasers Imaging. 2003.- Vol. 34(4). - P. 321-323.

104. Kovacevic Z., Skataric V., Jovanovic D., Djuran P., Romanovic R., Veljancic D., Bogdanovic Z. Amyloid tumor in a patient on a regular hemodialysis program // Vojnosanit Pregl. -1999.- Vol. 56(2). P. 213-216.

105. Kovacsovics-Bankowski M., Zufferey P., So A.K., Gerster J.C. Secondary amyloidosis: a severe complication of ankylosing spondylitis. Two case-reports // Joint Bone Spine. 2000.- Vol. 67(2). - P. 129-133.

106. Letterer E. Zur Atiologie und formalen Pathogenese der Amyloidose // Nova Acta Leopoldina. 1966, Bd. 31, S. 11-22.

107. Liepnieks JJ, Benson MD. Codesposition of transthyretin and immunoglobulin lambda light chain in senile cardiac (ATTR) amyloidosis // Amyloid and Amyloidosis. London, New York: CRC Press; 2005.- P. 332-333.

108. Linke R.P. Immunochemische Klassifizierung generalisierter Amyloidosen // Verh. Dtsch. Ges. Pathol. 1979.- Bd. 63.- S. 658.

109. Loffler H.J., Brass H., Thoenes W., Linke R.P. Familial Mediterranean fever with amyloidosis. Recent pathogenetic and therapeutic aspects. Dtsch Med. Wochenschr. - 1983.- Vol. 108(6). -P.210-215.

110. Magy-Bertrand N. Les amyloses a transthyretine // La Revue de medecine interne.- 2007,- Vol. -28.- P. 306-313.

111. Margulis M.S., Sorokin I.A., Tkachenko B.O., et al. Pharmacological protection of the liver in the donors body for its preservation and transplantation // Khirurgia (Mosk). 1987.- P. 49-53.

112. Merlini G, Bellotti V. Molecular mechanisms of amyloidosis // N Engl J Med. 2003. - Vol. 349.- P. 583-596.

113. Mery J.P. The curative effect of colchicine in renal amyloidosis cannot currently be held to have been proven // Presse Med. -1984.- Vol. 13(39). -P.2393.

114. Nakagawa S. Pathogenesis of amyloidosos. Ultrastructural aspects of cell memrane in amyloidogenesis and amyloid fibril desrtuction // Amyloid A. Amyloidosis. Amsterdam. 1980. - P. 436-447.

115. Ohtsubo K., Ryu J.C., Nakamura K. et al. Chronic toxicity of nivalenol in female mice: a 2-year feeding study with Fusarium nivale Fn 2B-moulded rice // Food. Chem. Toxicol. -1989. Sep;27(9). -P.591-598.

116. Osserman E. F. et al. Tuther studies of therapy of Amyloidosis with Dimethylsulfofoxide (DMSO). Amsterdam. - 1980. - P. 563-569.

117. Palladini G., Perfetti V., Merlini G. Therapy and management of systemic AL (primaiy) amyloidosis // SWISS MED WKLY.- 2006.- Vol. 136.- P. 715-720.

118. Peracoli M.T., Mota N.G., Montenegro M.R. Experimental paracoccidioidomycosis in the Syrian hamster. Morphology and correlation of lesions with humoral and cell-mediated immunity // Mycopathologia. —1982. -Vol. 23; 79(1).-P. 7-17.

119. Pour P.M., Birt D.F. Effect of dietary protein on N-nitrosobis(2-oxopropyl)amine-induced carcinogenesis and on spontaneous diseases in Syrian golden hamsters // J. Natl. Cancer Inst. -1986. Jan; 76(1). - P.67-72.

120. Roecken C, Schakespeare Pathology, diagnosis and pathogenesids of AA amyloidosis // Virchows Arch. -2002.- Vol. 440.- P. 111-122.

121. Roecken C, Schwotzer E, Linke RP, et al. The classification of amyloid deposits in clinicopathological practice // Histopathology. — 1996. —Vol. 29. P. 325-335.

122. Roecken С, Wilhelm S. Influense of tissue fixation on the microextraction and identification of amyloid proteins // J Lab Clin Med. -Vol.146.- P.244-250.

123. Sanchorawala V. Light-Chain (AL) Amyloidosis: Diagnosis and Treatment // Clin J Am Soc Nephrol. 2006. -Vol. 1.- P. 1331-1341.

124. Schechter D., Fields M., Laufer A. The effect of beta aminoproprionitrile (BAPN) on experimental amyloidosis // Br J. Exp Pathol. -1975. Vol. 56, N 5. - P. 466-470.

125. Selvanayagam J. В., Hawkins P. N., Paul В., et. al. Evaluation and Management of the Cardiac Amyloidosis Journal of the American College of Cardiology. 2007. Vol. 50. - N. 22. P. 2101-2110.

126. Shah К. В., Inoue Y., Mehra M. R. Amyloidosis and the Heart Arch Intern Med. 2006. Vol. 166.-P. 1805-1813.

127. Simkovich B.Z., Shutenko Z.V., Meirena D.V., et al. 3-(2,2,2-Ttimethylhydrazinium)propionate (THP) a novel gamma-butyrobetaine hydroxylase inhibitor with cardioprtotective properties // Biochem Pharmacol. — 1998.-Vol. 15; 37 (2). P. 195-202.

128. Solomon A, Weiss D, Schell M. et al. Transgenic Mouse Model of AA Amyloidosis // American Journal of Pathology. 1999. - Vol.154, № 4. - P. 45-49.

129. Suslina Z.A., Fedorova T.N., Maksimova M.I., Kim E.K. Antioxidant activity of mildronate and L-carnitine in the treatment of patients with cerebrovascular diseases // Eksp Klin Farmakol. — 2003.- Vol. 66(3). P. 32-35.

130. Virchow R. // Virchow's Arch. Abt. A. Path. Anat., 1857, Bd. II, S.

131. Westermark P, Benson MD, Buxbaum JN, et al. Amyloid fibril protein nomenclature-2002 // Amyloid. 2002. - Vol. 9. - P. 197-200.