Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Совершенствование лабораторной диагностики алеутской болезни норок
- Ученая степень
- кандидата биологических наук
- ВАК РФ
- 16.00.03
Оглавление диссертации Михеев, Юрий Васильевич :: 2003 :: Москва
Принятые сокращения.,
Глава I. ВВЕДЕНИЕ.
Глава II. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.Алеутская болезнь норок а) возбудитель АБН. б)структура генома вируса АБН в)неструктурные белки вируса АБН г)структурные белки вируса АБН д)характеристика штаммов вируса АБН
2.Пути распространения вируса АБН
3.Клинические формы и патологоанатомические изменения при АБН.
3.1.Алеутская болезнь новорожденных щенков
3.2.Классическая форма АБН
4.Иммунитет при АБН.
5 . Профилактика АБН.
6 . Диагностика АБН.
Глава III.СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
1.МАТЕРИАЛ Ы.
1.1.Вирусы, бактериальные штаммы, плазмиды и питательные среды.
1.2.Реактивы
1.3.Праймеры
2. МЕТОДЫ.
2.1.Выделение плазмидной ДНК щелочным методом
2.2.Обработка ДНК рестрикционным эндонуклеазами
2.3.Постановка полимеразой цепной реакции
2.4.Электрофорез в агарозном геле
2.5.Очистка ПЦР-фрагментов электрофорезом в агарозном геле.
2.б.Выделение фрагментов ДНК из агарозного геля
2.7.Получение рекомбинантных молекул in vitro
2.8.Приготовление компетентных клеток и трансформация их препаратами плазмидной ДНК
2.8.1.Подготовка компетентных клеток
2.8.2.Электротрансформация
2.9.Выделение суммарной клеточной ДНК из органов животных(фенольный метод)
2.10.Клонирование ПЦР-продуктов
2.11.Кинирование ПЦР-продуктов
2.12.Достройка ПЦР-продуктов
2.13.Электофорез белков в ПААГ-ДСН
2.14.Окраска кумасси
2.15.Методика постановки ПЦР-ИФА
2.15.1.Полимеразная цепная реакция
2.15.2.Подготовка полестероловых микроплашек для ПЦР-ИФА.
2.15.3.Условия постановки ПЦР-ИФА
2 .16. Постановка РИЭОФ на АБН.
2.17.Определение активности термостабильной пирофосфатазы
PPase)
2.18.Экспрессия белков
2.19.Определение растворимости белка
2.20.Методика иммуноферментного анализа
2.20.1.Сущность метода
2.20.2.Постановка реакции
2.20.2.1.Сенсибилизация планшетов
2.20.2.2.Внесение исследуемых сывороток и антивидвого коньюгата.
2 . 20 . 2 . 3 . Внесение субстрата и учет реакции.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.
ЧАСТЫ. Разработка ПЦР - диагностикума для обнаружения ДНК вируса алеутской болезни норок
1.Получение ПЦР-продукта
2.Получение плазмиды Y1C (положительный контроль)
3.Получение плазмиды Y1CBK (внутренний контроль)
4.Отработка условий постановки полимеразной цепной реакции с плазмид Y1C и Y1CBK.
5.Определение минимального расчетного количества плазмиды Y1C, необходимого для детекции ПЦР-продукта в агарозном геле.
6.Потеря ДНК вируса алеутской болезни норок при выделении фенольным методом
7.Определение минимального количества плазмиды Y1CBK для проведения диагностического ПЦР
8.Апробация ПЦР с пробами клинического материала
ЧАСТЫ I. Детекция ПЦР-продуктов ДНК вируса алеутской болезни норок в ИФА формате.
1.Определение специфичности праймеров N-Aleutl и N
Aleut2.
2. Определение способности ПЦР-продуктов вируса АБН с праймеров N-Aleutl и N-Aleut2 связываться с белком
LV-GCN4.
3.Определение рабочей концентрации белка LV-GCN4 для детекции ПЦР-продуктов в плашечном ИФА - формате
4.Сравнение чувствительности ПЦР и ПЦР-ИФА при детекции ПЦР-продуктов вируса алеутской болезни норок
5.Апробация с пробами клинического материала.
ЧАСТЫII.Типирование вируса АБН выделенного в зверосовхозе «Родники» Московской области
1.Эпизоотологическое состояние зверосовхоза «Родники» Московской области по алеутской болезни норок
2.Сиквенс ПЦР-продуктов изолятов вируса алеутской болезни норок и сравнивание их со штаммом ADV-G.
3.Анализ гипервариабельного участка вирусов АБН.
ЧАСТЫУ.Создание химерного белка, содержащего детерминанту вируса алеутской болезни норок, и изучение ее физико-химических свойств.
1.Получение рекомбинантной плазмиды, содержащей ген химерного белка RpY-6.
1.1.Получение "ПЦР-продукта 530", содержащей ген пирофосфатазы.
1.2.Получение рекомбинантной плазмиды RpP-pa, содержащей ген белка пирофосфотазы.
1.3.Получение «ПЦР-продукта 302», содержащего детерминанту вируса алеутской болезни норок.
1.4.Получение рекомбинантных плазмид Y5-A1, содержащих спейсер и детерминанту вируса АБН.
1.5.Получение рекомбинантной плазмиды RpY-б, содержащей ген пирофосфотазы с присоединенной через спейсер детерминанту вируса АБН.
2.Изучение физико-химических свойств химерного белка pRY-6.
2.1.Экспрессия конструкций pRY-б в штамме M15[REP4]
E.Coli.
2.2.Определение экспрессии и растворимости химерного белка
RPY-б.
2.3.Очистка химерного белка pRY-6.
2.4.Определение специфичности детерминанты химерного белка в ИФА с пробами клинического материала.
Глава IV. ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
Глава V. ВЫВОДЫ.
Введение диссертации по теме "Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология", Михеев, Юрий Васильевич, автореферат
Глава I.ВВЕДЕНИЕ 1. Актуальность темы. '
По данным ЗВЕР0ПР0МА в 1990 году на внутренний и внешний рынки СССР было поставлено более 9,3 млн. шкурок норки. В 2 0 00 году эта цифра составила чуть меньше 2 млн. шкурок норки. В период с 1990г по 2000г в России прекратили свое существование около 50% зверосовхозов, входивших в состав ЗВЕР0ПР0МА, часть из этих хозяйств были ликвидированы в связи со 100% поражением основного стада норок алеутской болезнью. В настоящее время алеутская болезнь норок наносит огромный экономический ущерб звероводству вследствие уменьшения делового выхода молодняка, ухудшения качества пушнины, высоких денежных и трудовых затрат на сдерживание распространения заболевания и его ликвидации. В последние годы в нашей стране наблюдается дефицит информации у ветеринарных врачей и зоотехников звероводческих хозяйств по алеутской болезни норок. Попытки исследований этого заболевания в России носят спорадический характер, а проводимые исследования часто повторяют друг друга.
Более 40 лет (с 1956 года) алеутская болезнь норок является бичом звероводства во всем мире.
За это время была установлена вирусная этиология болезни, выделен вирус, изучены его морфологические свойства, определена полная нуклеотидная последовательность ДНК, построена трехмерная модель вируса, изучены эпизоотологические особенности и нуклеотидные различия некоторых штаммов вируса, отработаны методы специфической диагностики и на основе этих данных разработаны мероприятия по ликвидации данного заболевания.
Разработка специфической диагностики АБН и-мероприятий по ликвидации заболевания привели к сдерживанию распространения заболевания. Хорошую помощь в ликвидации АБН, на многих фермах за границей оказало принятие комплексных государственных программ. Так в Дании, где программа была принята с 197 8 года, на данный момент очищено более половины хозяйств. Но к полному освобождению от болезни это не привело, из-за сохранения в стаде латентно инфицированных животных, не выявляемых с помощью имеющихся диагностических тест-систем.
Таким образом, одним из основных путей контроля и профилактики болезни является разработка современных высоко специфических методов лабораторной диагностики АБН, способных составить одно из определяющих звеньев комплексной программы по профилактике и контролю АБН.
2.Цели и задачи исследования. Целью настоящей работы являлось создание диагностикума для детекции вируса алеутской болезни в крови и во внутренних органах павших или убитых норок.
В процессе работы предстояло решить следующие задачи:
1.Проанализировать нуклеотидные последовательности различных участков генома вируса АБН и определить наиболее консервативные и вариабельные области, пригодные для использования в диагностике.
2.Подобрать оптимальные праймеры для использования их в ПЦР-диагностикуме.
3.Отработать состав реакционной смеси и условия проведения ПЦР, обеспечивающие высокую чувствительность и специфичность метода.
4.Отработать протоколы подготовки проб (выделение ДНК) для их последующего использования в ПЦР.
5.Определить чувствительность и специфичность метода.
6.Определить диагностическую ценность разработанной методики.
7.Определить место предлагаемой методики в схеме ликвидации этого заболевания в хозяйствах. ,
8.На основании разработанного ПЦР - набора провести типирование изолята выделенного во время вспышки в зверосовхозе «Родники» Московской области.
9.Клонировать антигенную детерминанту капсидного белка АБН и изучить её пригодность для ИФА.
3.Научная новизна. Создан ПЦР - диагностикум для обнаружения ДНК вируса АБН и типирования новых изолятов вируса алеутской болезни норок.
Впервые был отработан и применен твердофазный метод детекции ПЦР продуктов, использующий ДНК-белковое взаимодействие для иммобилизации продуктов амплификации на плашке.
Впервые типирован по гипервариабельной области отечественный штамм П-1 вируса АБН и изолят СТЛ-1, выделенный в зверосовхозе «Родники» Московской области во время вспышки.
Впервые получен химерный белок пирофосфотазы E.Coli с антигенной детерминантой капсидного белка VP2 вируса АБН и изучены его физико-химические и антигенные свойства.
4.Практическая Значимость.
Разработанный ПЦР набор на алеутскую болезнь норок является дополнительным методом в спорных случаях;
Разработанный набор может быть использован для типирования «новых» и «старых» изолятов;
Платечный формат ПЦР набора на вирус АБН позволяет использовать его в массовых исследованиях в лабораториях звероводческих предприятий;
Материалы исследования вошли в рекомендации по а» применению ПЦР - диаГностикума не. вирус алеутской болезни норок»;
Материалы исследования внедрены в учебный процесс . и на цх основе разработаны лабораторно-практические занятия при изучении возбудителей вирусных инфекций на кафедре ветеринарной вирусологии МГАВМиБ им. К.И.Скрябина.
Полученная нами антигенная детерминанта позволяет выявить антитела к парвовирусам в сыворотки крови животных и может быть использоваться в биологической промышленности и в лабораториях для определения напряженности иммунитета у животных привитых против парвовирусных инфекций;
5.Апробация работы.
1. I Молодежная научная конференция: «Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии» 27 марта 2001.
2.Методическая и научная конференция Московской ветеринарной академии. Москва 2001.
6.Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 научных работ, в том числе одна в иностранном журнале.
Заключение диссертационного исследования на тему "Совершенствование лабораторной диагностики алеутской болезни норок"
Глава V, ВЫВОДЫ
1.Разработан метод детекции вируса алеутской болезни норок на основе полимеразной цепной реакции.
2.Впервые отработана детекция ПЦР-продуктов вируса АБН на основе твердофазного ПЦР-ИФА. Разработанный способ детекции ПЦР-продуктов увеличивает чувствительность полимеразной цепной реакции примерно в 10 раз по сравнению со стандартной методикой детекции ПЦР продуктов в агарозном геле и сокращает время исследований в 3 раза.
3.Показано, что отечественный штамм вируса алеутской болезни норок П-1 (Пушкинский-1) по вариабельному участку генома 2608-3288 относится к группе высоко патогенных штаммов вируса АБН, выделенных от больных животных и охарактеризованных в период 60-80-х годов прошлого века в Северной Америке.
4.Установлено, что изолят вируса алеутской болезни норок, выделенный в зверосовхозе «Родники» Московской области, названный ст.Ладожский (СТЛ-1) по вариабельному участку генома 2608-3288 ближе к известному европейскому штамму ADV-SL3 выделенному в Германии в 8 0-х годах и штамму ADV-G, реплицирующийся на культуре клеток.
5.Впервые получен химерный белок пирофосфатазы E.Coli с антигенной детерминантой капсидного белка VP2 вируса АБН и изучены его физико-химические и антигенные свойства. Химерный белок pRY-б сохранил свойства своих компонентов - растворимость и ферментативную активность белка пирофосфатазы и свойства антигенной детерминанты белка VP2 вируса АБН - специфически взаимодействовать с антителами.
6.Химерный белок pRY-б позволяет выявить антитела к парвовирусам в сыворотке крови животных и может использоваться в биологической промышленности и в лабораториях для определения напряженности иммунитета у животных привитых против парвовирусных инфекций.
Автор диссертации выражает огромную благодарность своим научным руководителям Доктору ветеринарных наук Белоусовой Р.В. и кандидату биологических наук Лунину В.Г.
Автор выражает огромную благодарность за материальную и моральную поддержку своим родителям Михеевой Н.У. и Михееву В.М.
Автор выражает благодарность Анисимовой С., Рязановой Е., Сергиенко О., Волохову Д., Шилову И. Лупановой Н., Ворониной О., Тихоновой Т. 0 О
Глава IV.ЗАКЛЮЧЕНИЕ
В настоящее время звероводство России испытывает большие трудности. Для многих звероводческих предприятий, выращивающих норку, стало проблемой освежение крови стада или завоз нового поголовья зверей. По данным Союза звероводов только два хозяйства в РФ являются благополучными по алеутской болезни норок - «Гагаринский» зверосовхоз Смоленской области и «Салтыковский» зверосовхоз Московской области. Все остальные хозяйства, занимающиеся разведением норки, в той или иной степени не благополучны по этому заболеванию. Это связано с тем, что звероводческие предприятия остались без государственной поддержки, а борьба и профилактика АБН требует больших финансовых затрат. Попытка сэкономить на приобретении «дешевых» кормов за границей хорошо описана в данной диссертации (результаты исследований ЧастьШ) .
В последнее время большинство ветеринарных врачей звероводческих предприятий отмечает ослабление эффективности мероприятий при ликвидации алеутской болезни основанных на реакции иммуноэлектроосмофореза. По данным зверосовхоза «Родники» Московской области на 100 исследуемых проб крови в РИЭОФ 30 проб с сомнительным результатом. Это, возможно, связано с нарушением технологии производства диагностикума, а, возможно, с тем, что в течение 2 0 лет животные подвергались искусственному отбору, где основным параметром по существу(!) являлось РИЭОФ на алеутскую болезнь норок.
Поэтому первостепенной задачей для норководства является разработка альтернативного диагностикума, который, например, мог бы выявлять не следствие болезни -антитела, а причину болезни - вирус.
Предлагаемый нами диагностикум ПЦР на АБН (и его модификация ПЦР-ИФА) является комплексным и может быть использован для детекции и типирования изолятов вируса АБН.
Для разработки набора в соответствии с предъявляемым к ПЦР системам нормам были созданы положительный (Y1C) и внутренний (Y1CBK) контроли ПЦР-реакции, которые имеют одни и те же места посадки праймеров N-Aleutl и N-Aleut2. Отработан состав реакционной смеси и условия проведения ПЦР с праймерами N-Aleutl и N-Aleut2.
В рекомендуемых нами услових ПЦР-реакции праймеры полностью расходовались для образования ПЦР-продуктов и мы не наблюдали появления дополнительных полос (ПЦР-продуктов несоответствующего размера) или димерных форм праймеров.
Диагностическая ценность разработанной тест -системы состоит в том, что ПЦР является прямым методом диагностики алеутской болезни.
Для массовых исследований в лабораториях звероводческих предприятий нами разработанный твердофазный формат детекции ПЦР-продуктов вируса АБН, использующий ДНК-белковое взаимодействие для иммобилизации продуктов амплификации на плашке.
Хочется обратить внимание на то, что чувствительность твердофазного метода детекции ПЦР-продуктов выше обычного формата ПЦР примерно в 10 раз.
Это обстоятельство позволило сократить время выделения ДНК фенольным методом с 2 8 часов до 8 часов из органов павших или убитых животных.
Полимеразную цепную реакцию на АБН можно рекомендовать при закупке самцов для освежения крови в стаде или при закупке не большой партии зверей для предотвращения распространения этого заболевания в новом хозяйстве.
Праймеры, используемые в диагностическом наборе, позволяют типировать изоляты по гипервариабельному участку гена VP2. В данной работе мы типировали отечественный штамм вируса АБН «Пушкинский-1» и изолят «ст.Ладожский-1», выделенный в зверосовхозе «Родники» Московской области.
Исследованный штамм вируса алеутской болезни норок П-1 выделенный в зверосовхозе «Пушкинский» в 8 0-х годах при сравнении с американскими и европейскими штаммами показал генетическую близость к американским штаммам и это не удивительно, ведь в период с 50 по 8 0 года в бывший СССР завозились норки из США.
Сравнение последовательностей вируса АБН штамма П-1 с ADV-G показало схожесть на 94,4%, с ADV-TR - 94,8%, с ADV-Pullman - 93,4%.
Зверосовхоз «Родники» Московской области, где выделили новый изолята вируса алеутской болезни норок СТЛ-1, интенсивно завозил «дешевые» корма из Европы в период предшествующий вспышке заболевания. Исследования показали большое родство вируса с непатогенным для норок штаммом ADV-G и штамма ADV-SL3 (выделен в Германии).
Сравнивание нуклеотидной последовательности выделенного нами изолята СТЛ-1 вируса АБН показало, что выделенный изолят на 98, 65% схож со штаммами ADV-G и ADV-SL3, с ADV-TR - 98,8% и с ADV-Pullman - 92,3%.
Генно-инженерными методами мы клонировали антигенную детерминанту вируса алеутской болезни норок, и использовали её в качестве антигена в иммунно-ферментном диагностикуме. Исследования показали хорошую растворимость и суперпродукдию химерного белка pRY-б, состоящего из пирофосфотазы E.Coli и антигенной детерминанты вируса АБН. В иммунологических исследованиях химерный белок pRY-6 показал способность выявлять антитела к семейству парвовирусав, в которое входит вирус алеутской болезни норок.
Список использованной литературы по ветеринарии, диссертация 2003 года, Михеев, Юрий Васильевич
1. Берестов В.А., Самсонов В.А. Плазмоцютоз норок.-Петрозаводск 1969.
2. Ветеринарное законодательство т. 4 Инструкции по профилактике и ликвидации заболевании норок алеутской болезнью от 14 ноября 1985
3. Данилов Е.П. Болезни пушных зверей. Москва. М. «Колос» 1984.- 78-87с.
4. Дукур И.И. Некоторые вопросы эпизоотологии АБ норок. Труды НИИПЗК т. 13.М 1978.с
5. Коваленко Г.А. Алеутская болезнь норок роль эндогенной ДРН-азы* 'как вероятного факторапротивовирусной защиты. Уссурийск 19 91.
6. Конопаткин А.А. Артемов Б.Т. Бакулов И.А. Эпизоотология и инфекционные болезни. 2-е издание М. Колос.19 93.
7. Маниатис Т., Э. Фрич, Дж. Сэмбрук Молекулярное клонирование. Методы генетической инженерии. М. Мир 1984 .
8. Мешков А.Ю. Рестрикционное картирование и клонирование фрагментов ДНК вируса алеутской болезни норок и парвовируса свиней для использования в качестве диагностических ДНК-зондов. Автореф.Дис.кан. биолог, наук. М. 1991. 106с.
9. Министерство с/х РФ Департамент ветеринарии. Наставление №13-7-2/142 от 23 августа 1994г. по применению антигена и контрольной сыворотки для серологической диагностики алеутской болезни норок в РИЭОФ (диагностикума).
10. Набиев Ф.Г. Ветеринарно-санитарные мероприятия в звероводстве.// М. Агропромиздат 1986.
11. Новое в клонировании ДНК. под ред. Д. Гловера Методы. М. Мир 1994
12. Рубис А.В. Фармакологический компонент мониторинга эпивоотии АБ норок. Пути повышения эффективности звероводства и оленеводства Дальнего востока (сборник научных трудов) Уссурийск 19 91г.
13. Слугин B.C. Алеутская болезнь норок и пути ее ликвидации. Автореф. Дис.д-ра вет. наук М 1982.
14. Слугин B.C. Ветеринарно-санитарная экспертиза кормов для пушных зверей.//М. Агропромиздат 1986.
15. Слугин B.C. Диагностика алеутской болезни норок.//Ветеринария 1980 N"9
16. Слугин B.C. Диагностическая ценность РИЭОФ при алеутской болезни норок.//Науч.Тр. НИИПЗК т.21.
17. Слугин B.C. Результаты 10-летней борьбы с алеутской болезнью норок в Дании (по материалам доктора М. Хансена 1988г.)// Ветзвероцентр.
18. Слугин B.C. Система мер борьбы с А5 норок// Ветеринария 1986г. №3-с 22-23.
19. Слугин B.C. Чувствительность норок к алеутской болезни.//Ветеринария 1981 №5
20. Технология производства шкурок норок (наставления) М. 1985 .
21. An, S. Н., F. J. DePauli, P. Wright, and D. G. Ingram. 1978. Characteristics of inapparent Aleutian disease virus infection in mink. Res. Vet. Sci. 24: 200-204.
22. Fox JG, Pearson RC, Gorham JR: Aleutian Disease. In. Fox JG, ed.: Biology and Diseases of the Ferret. Philadelphia, Lea and Febiger, 1988, pg 360-366.
23. Hillyer EV: Aleutian Disease. In. Hillyer EV and Quesenberry KE, ed.:Ferrets, Rabbits, and Rodents, Clinical Medicine and Surgery, Saunders, 1997, pg. 7172 .
24. Kenyon AJ et al: Aleutian disease in the Ferret. JAVMA, Oct 1966, 149(7): 922-926.
25. Kenyon AJ, Howard E, Buko L: Hypergammaglobulinemia in Ferrets with Lympho-proliferative Lesions (Aleutian Disease), AJVR. July 1967, 28(125): 1167-1172.
26. Ohshima K, et al: Comparison of the Lesions of Aleutian Disease in Mink and Hypergammaglobulinemia in Ferrets. AJVR. April 1978,39: 653-657.
27. Palley LS et al: Parvovirus-associated syndrome (Aleutian disease) in two ferrets. JAVMA, Vol. 201, no.1, July 1992, 100-106.
28. Durrant, G. R. Unpublished observations.
29. Agbandje, M., R. McKenna, M. G. Rossmann, M. L. Strassheim, and C. R.Parrish. 1993. Structure determination of feline panleukopenia virus empty particles. Proteins 16:1555-1571.
30. Alexandersen, S. 1986. Acute interstitial pneumonia in mink kits: experi-mental reproduction of the disease. Vet. Pathol. 23:579-588.
31. Alexandersen, S. 1990. Pathogenesis of disease caused by Aleutian mink disease parvovirus. Acta Pathol. Microbiol. Immunol. Scand. 98(Suppl. 14):1-32.
32. Alexandersen, S., A. Uttenthal-Jensen, M. Hansen, and B. Aasted. 1985. Experimental transmission of Aleutian disease virus (ADV) to different animal species. Acta Pathol. Microbiol. Immunol. Scand. Sect. В 93:195-200.
33. Alexandersen, S., M. E. Bloom, and J. Wolf inbarger. 1988. Evidence of restricted viral replication in adult mink infected with Aleutian disease of mink parvovirus. J. Virol. 62:1495-1507.
34. Alexandersen, S., M. E. Bloom, and S. Perryman. 1988. Detailed transcrip-tion map of Aleutian mink disease parvovirus. J. Virol. 62:3 684-3 694.
35. Alexandersen, S., S. Larsen, A. Cohn, A. Uttenthal, R. E. Race, B. Aasted, M.Hansen, and M. E. Bloom. 1988. Passive transfer of antiviral antibodies restricts replication of Aleutian mink disease parvovirus in vivo. J. Virol. 63:9-17.
36. Alexandersen, S., S. Larsen, B. Aasted, A. Uttenthal, M. E. Bloom, and M.Hansen. 1994. Acute interstitial pneumonia in mink kits inoculated with defined isolates of Aleutian mink disease parvovirus. Vet. Pathol. 31: 216-228.
37. An, S. H., F. J. DePauli, P. Wright, and D. G. Ingram. 1978. Characteristics of inapparent Aleutian disease virus infection in mink. Res. Vet. Sci. 24: 200-204.
38. Appel, M. J. G., and C. R. Parrish. 1982. Raccoons are not susceptible to canine parvovirus. J. Am. Vet. Med. Assoc. 181:489.
39. Ball-Goodrich, L. J., and P. Tattersall. 1992. Two amino acid substitutions within the capsid are coordinately required for acquisition of fibrotropismо
40. Barnard, D.L. and F.B. Johnson. 1992. Topographical analysis of the ADV-G virion using monoclonal antibodies. Arch. Virol. 127:271-289.
41. Bloom, M. E. 1985. Parvovirus infections: features reminiscent of AIDS. Ann. N. Y. Acad. Sci. 437:110-120.
42. Bloom, M. E., H. Kanno, S. Mori, and J. B. Wolfinbarger. 1994. Aleutian mink disease: puzzles and paradigms. Infect. Agents Dis. 3:279-301.
43. Bloom, M. E., L. W. Mayer, and C. F. Garon. 1983. Characterization of the Aleutian disease virus genome and its intracellular forms. J. Virol. 45:977- 984.
44. Bloom, M. E., R. E. Race, and J. B. Wolfinbarger. 1980. Characterization of Aleutian disease virus as a parvovirus. J. Virol. 35:836-843.
45. Bloom, M. E., R. E. Race, and J. B. Wolfinbarger. 1982. Identification of a nonvirion protein of Aleutian disease virus: mink with Aleutian disease have antibody to both virion and nonvirion proteins. J. Virol. 43:608-616.
46. Bloom, M. E., R. Е. Race, and J. В. Wolf inbarger. 1987. Analysis of Aleutian disease of mink parvovirus infection using strand specific hybridization probes. Intervirology 27:102-111.
47. Bloom, M. E., R. E. Race, B. Aasted, and J. B. Wolfinbarger. 1985. Analysis of Aleutian disease virus infection in vitro and in vivo: demonstration of Aleutian disease virus DNA in tissues of infected mink. J. Virol. 55:696-703.
48. Bloom, M. E., R. E. Race, W. J. Hadlow, and B. Chesebro. 1975. Aleutian disease of mink: the antibody response of sapphire and pastel mink to Aleutian disease virus. J. Immunol. 115:1034-1037.
49. Bloom, M. E., S. Alexandersen, S. Mori, and J. B. Wolfinbarger. 1989. Analysis of parvovirus infections using strand-specific hybridization probes. Virus Res. 14:1-26.
50. Boissy, R., and C. Astell. 1985. An Escherichia coli recBCsbc BrecF host permits the deletion-resistant propagation of plasmid clones containing the 59-terminal palindrome of minute virus of mice. Gene 35:179-185.
51. Carlson, J. H., F. W. Scott, and J. R. Duncan. 1977. Feline panleukopenia. I. Pathogenesis in germfree and specific pathogen-free cats. Vet. Pathol. 14:79-88.
52. Chapman M.S., and M.G. Rossmann. 1993. Structure, sequence and function correlates among parvoviruses. Virology 194:491-508.
53. Cheema A., J.B. Henson, and J.R. Gorham. 1972. Aleutian disease of mink: prevention of disease by immunosuppression. Am. J. Pathol. 66:543-551.
54. Chesebro В., M.E. Bloom, W. Hadlow, and R. Race. 1975. Purification and ultrastructure of Aleutian disease virus of mink. Nature (London) 254:456-457.
55. Comore SF, Tattersall P.,1987. The autonomously replicating parvoviruses. Adv Virus Res 33:91-174.
56. Cotmore, S.F., Tattersall, P., 1987. The autonomously repli-cating parvoviruses. Adv. Virus Res. 33, 91-174.
57. Csiza, C.K., A.De Lahunta, and J.H. Gillespie. 1971. Pathogenesis of feline panleukopenia virus in susceptible newborn kittens. I. Clinical signs, hematology, serology, and virology. Infect. Immun. 3:833837.
58. Eklund, С. M., W. J. Hadlow, R. C. Kennedy, С. C. Boyle, and T. A. Jackson. 1968. Aleutian disease of mink: properties of the etiologic agent and the host responses. J. Infect. Dis. 118:510-516.
59. Ellis, L.C., M.J. Jackson, J.D. Morrey, D.L. Barnard and Z-Z. Li. 1993. Aleutian disease: Current status and developments. Blue Book of Farming.pp4-5.
60. Ellis, L.C., M.K. Jackson and D.L. Barnard. 1996. Aleutian Disease: How it is spread and possible treatments. Blue Book of Farming, pp. 18-20.о
61. Fox JG, Pearson RC, Gorham JR: Aleutian Disease. In. Fox JG, ed.: Biology and Diseases of the Ferret. Philadelphia, Lea and Febiger, 1988, pg 360-366.
62. Frickhofen, N., and N. S. Young. 1991. A rapid method of sample prepara-tion for detection of DNA viruses in human serum by polymerase chain reaction. J. Virol. Methods 35:65-72.
63. Gardiner, E. M., and P. Tattersall. 1988. Mapping of the fibrotropic and lymphotropic host range determinants of the parvovirus minute virus of mice. J. Virol. 62:2605-2613.
64. Gorham, J. R., J. B. Henson, Т. B. Crawford, and G. A. Padgett. 1976. The epizootiology of Aleutian disease, p. 135-158. In R. H. Kimberlin (ed.). Slow virus diseases of animals and man. North-Holland Publishing Co., Amsterdam.
65. Gottschalk E., S. Alexandersen, A. Cohn, L. Poulsen, M.E. Bloom, and B.Aasted. 1991. Nucleotide sequence analysis of Aleutian mink disease parvovirus shows that multiple virus types are present in infected mink. J. Virol. 65:4378-4386.
66. Haas, L., M. Lochelt, and O.-R. Kaaden. 1988. Detection of Aleutian disease virus DNA in tissues of naturally infected mink. J. Gen. Virol. 69:705-710.
67. Haas, L., P. Wohlsein, G. Trautwein, B. Stolze, and O.-R. Kaaden. 1990. Violet mink develop an acute disease after experimental infection with Aleutiandisease virus (ADV). Zentralbl. Veterinaermed. 37:106117.
68. Hadlow, W. J., R. E. Race, and R. C. Kennedy. 1983. Comparative pathogenicity of four strains of Aleutian disease virus for pastel and sapphire mink. Infect. Immun. 41': 1016-1023 .
69. Hadlow, W. J., R. E. Race, and R. C. Kennedy. 1984 . Royal pastel mink respond variously to inoculation with Aleutian disease virus of low virulence. J. Virol. 50:38-41.
70. Hadlow, W., R. E. Race, and R. C. Kennedy. 1985. Temporal replication of the Pullman strain of Aleutian disease virus in royal pastel mink. J. Virol. 55:853856.
71. Hahn EC. Immune complexes in Aleutian disease:demonstration of antibody on isolated virus. Vet Immunol immunopathol 1984;5:313-21.
72. Ingram, D. G., and H. J. Cho. 1974. Aleutian disease in mink: virology, immunology and pathogenesis. J. Rheumatol. 1:74-92.
73. Jackson, M.J., L.C. Ellis, J.D. Morrey and D.L. Barnard. 1992. Early detection of Aleutian mink disease virus in mink by polymerase chain reaction. Nor. J. Agr. Sci. Supplement 9:385-387.
74. Jackson, M.K., L.C. Ellis, J.D. Morrey and D.L. Barnard. 1993. Detection of Aleutian disease virus in natural infections. Faseb J. 7:A502.
75. Jackson, M.K., L.C. Ellis, J.D. Morrey, Z.-Z. Li, D.L. Barnard. 1996. Progression of Aleutian disease in natural and experimentally induced infections of mink. Am. J. Vet. Res. 12:1753-1758.
76. Kaaden, O.-R., L. Haas, M. Lochelt, and S. Roth. 1986. Replication of Aleutian disease virus in minklymphocytes infected in vitro. Intervirology 25:201209.
77. Kanno, H., J. B. Wolfinbarger, and M. E. Bloom. 1993. Aleutian mink disease of parvovirus infection of mink peritoneal macrophages and human macrophage cell lines. J. Virol. 67:2075-2082.
78. Kanno, H., J. B. Wolfinbarger, and M. E. Bloom. 1993. Aleutian mink disease of parvovirus infection of mink macrophages and human macrophage cell line U937: demonstration of antibody-dependent enhancement of infection. J.Virol. 67:7017-7024.
79. Karstad, L., and T. J. Pridham. 1962. Aleutian disease of mink. I. Evidence of its viral etiology. Can. J. Сотр. Med. Vet. Sci. 26:97-102.
80. Kemp D.J. et al. (1989) Colorimetric detection of specific DNA segments amplified by polymerase chain reactions. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 8 6:2423-2327.
81. Kemp D.J. et al. (1990) Simplified colorimetric analysis of polymerase chain reaction: detection of HIV sequences in AIDS patients. Gene. 94:223-228.
82. Kenyon AJ et al: Aleutian disease in the Ferret. JAVMA, Oct 1966, 149(7): 922-926.
83. Kenyon AJ, Howard E, Buko L: Hypergammaglobulinemia in Ferrets with Lympho-proliferative Lesions (Aleutian Disease), AJVR. July 1967, 28(125): 1167-1172.
84. Kenyon, A. J., B. J. Kenyon, and E. C. Hahn. 1978. Protides of the Musteli-dae: immunoresponse of mustelids to Aleutian mink disease virus. Am. J. Vet. Res. 39:1011-1015.
85. Kenyon, A. J., E. Howard, and L. Buko. 1967. Hypergammaglobulinemia in ferrets with lympho-prolif erative lesions (Aleutian disease). Am. J. Vet. Res. 28:1167-1172.
86. Kenyon, A. J., T. Magnano, C. F. Helmboldt, and L. Buko. 1966. Aleutian disease in the ferret. J. Am., Vet. Med. Assoc. 149:920-923.
87. Kusukawa, N., T. Uemori, K. Asada, and I. Kato. 1990. Rapid and reliable protocol for direct sequencing of material amplified by the polymerase chain reaction. BioTechniques 9:66-72.
88. Kwok, S., and R. Higuchi. 1989. Avoiding false positives with PCR. Nature (London) 339:237-238.
89. Lahti R, Pitkaranta T, Valve E, Ilta I, Kukko-Kalske E, Heinonen J. Cloning and characterization of the gene encoding inorganic pyrophosphatase of Escherichia coli K-12 . J Bacterid 1988 Dec; 170 (12 ): 5901-5907
90. Larsen AE, Porter DD. Pathogenesis of Aleutian disease of mink: identification of non-persistent infection Infect Immun 1975;11:92-4.
91. Larsen S, Alexandersen S, Lund E, Have P, Hansen M. Acute interstitial pneumonitis caused by Aleutian disease virus in mink kits. Acta Pathol Microbiol Immunol Scand 198 4;92:391-3.
92. Larsen S, Lund E, Bloom ME, Storgaard T, AlexandersenS. Analysis of experimental mink enteritis virus infection in mink: in situ hybridization, serology and histopathology. 1990; 64:2768-97
93. Lew A.M., Marshall V.M., Kemp D.J., (1993) Affinity selection of polymerase chain reaction products by DNA-binding proteins. Methods Enziymol. 218:526-534.
94. Martyn, J. С., В. E. Davidson, and M. J. Studdert. 1990. Nucleotide se-quence of feline panleukopenia virus: comparison with canine parvovirus identifies host-specific differences. J. Gen. Virol. 71:2747-2753.
95. Meshkov Al, Chebotarev MI, Kaledin AS, Slugin VS. Restriction analysis of the DNA of aleutian minkdisease virus strain P-l. Mol Gen Mikrobiol Virusol 1989 Dec;(12):30-3.
96. Mori, S., J. B. Wolfinbarger, Dowling N, Wei W, M. E. Bloom. 1991.Simultaneous identification of viral proteins andnucleic acids in cells infected withaleutian mink disease parvovirus. Microb Pathog 9:243-53.
97. Mori, S., J. B. Wolfinbarger, M. Miyazawa, and M. E. Bloom. 1991. Replication of Aleutian mink disease parvovirus in lymphoid tissues of adult mink: involvement of follicular dendritic cells and macrophages. J. Virol. 65:952- 956.
98. Oakley M.G., Dervan P.B. (1990) Structural motif of the GCN4 DNA binding domain characterized by affinity cleaving. Science. 248:847-850.
99. Ohshima K, et al: Comparison of the Lesions of Aleutian Disease in Mink and Hypergammaglobulinemia in Ferrets. AJVR. April 1978,39: 653-657.
100. Padgett GA, Gorham JR, Henson JB. Epizootiologic studies of Aleutian disease. I. Transplacental transmission of the virus. J Infect Dis 1967;117:35-8
101. Palley LS et al: Parvovirus-associated syndrome (Aleutian disease) in two ferrets. JAVMA, Vol. 201, no.l, July 1992, 100-106.
102. Parrish, C. R., and L. E. Carmichael. 1986. Characterization and recombination mapping of an antigenic and host range mutation of canine parvovirus. Virology 148:121-132.
103. Parrish, C. R., C. F. Aquadro, M. L. Strassheim, J. F. Evermann, J.-Y. Sgro, and H. O. Mohammed. 1991. Rapid antigenic-type replacement and DNA sequence evolution of canine parvovirus. J. Virol. 65:6544-6552.
104. Parrish, C. R., C. W. Leathers, R. Pearson, and J. R. Gorham. 1987. Comparisons of feline panleukopenia virus, canine parvovirus, raccoon parvovirus, and mink enteritis virus and their pathogenicity for mink and ferrets. Am. J. Vet. Res. 48:1429-1435.
105. Parrish, C. R., J. R. Gorham, T. Schwartz, and L. E. Carmichael. 1984. Characterization of antigenic variation among mink enteritis virus isolates. Am. J. Vet. Res. 45:2591-2599.
106. Parrish, C. R., L. E. Carmichael, and D. F. Antczak. 1982. Antigenic relationships between canine parvovirus type 2, feline panleukopenia virus and mink enteritis virus using conventional antisera and monoclonal antibodies. Arch. Virol. 72:267-278.
107. Porter DD, . Larsen AE. Aleutian disease of mink:infectious virus-anti-body complexes in the serum. Proc Soc Exp Biol Med 1967;126:680-2.
108. Porter, D. -D. 1986. Aleutian disease: a persistent parvovirus infection of mink with a maximal but ineffective host immune response. Prog. Med. Virol. 33:42-60.
109. Porter, D. D., A. E. Larsen, and H. G. Porter. 1969. The pathogenesis of Aleutian disease of mink. I. Invivo viral replication and the host antibody response , to viral antigen. J. Exp. Med. 130:575-589.
110. Porter, D. D., H. G. Porter, A. E. Larsen, and M. E. Bloom. 1987. Restricted viral antibody specificity in many ferrets infected with the ferret Aleutian disease parvovirus. Arch. Virol. 93:155-161.
111. Porter, H. G., D. D. Porter, and A. E. Larsen. 1982. Aleutian disease in ferrets. Infect. Immun. 36:379-386.
112. Pridham, T. J., and C. G. Wills. 1960. Variations in the effectiveness of commercial infectious feline enteritis vaccines in preventing virus enteritis of mink. Can. Vet. J. 1:51-57.
113. Saiki, R. K., D. H. Gelfand, S. Stoffel, S. J. Scharf, R. Higuchi, G. T. Horn, K.B. Mullis, and H. A. Erlich. 1988. Primer-directed enzymatic amplifica-tion of DNA with a thermostable DNA polymerase. Science 239:487-491.
114. Sambrook J., Fritch E.F., Maniatis T. Molecular Cloning.//Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989.
115. Shieh G.J. et al. (1996) ELISA-based colorimetric detection of Rickettsia tsutsugamushi DNA from patient sera by nested polymerase chain reaction. Southeast Asian J. Trop. Public Health. 27:139-144.
116. Truyen, U., and C. R. Parrish. 1992. Canine and feline host ranges of canine parvovirus and feline panleukopenia virus: distinct host cell tropisms of each virus in vitro and in vivo. J. Virol. 66:53995408 .
117. Uttenthal, A., S. Larsen, E. Lund, M. E. Bloom, T. Storgaard, and S. Alexandersen. 1990. Analysis of experimental mink enteritis virus infection in mink: in situ hybridization, serology, and histopathology. J. Virol. 64:2768-2779.
118. Vasudevacharya, J., and R. W. Compans. 1992. The NS and capsid genes determine the host range of porcine parvovirus. Virology 187:515-524.
119. Viuff B, Aasted B, Alexandersen S., 1994. Role of alveolar type II cells and surfactant-associated protein С mRNA livels in the pathogenesis of respiratory distress in mink kits infected with Aleutian mink disease parvovirus. J Virol68:2720-5.
120. Welchman D deB, Oxenham M, Done SH: Aleutian disease in domestic ferrets: diagnostic findings and survey results. Veterinary Record (1993) 132,479-484.
121. Wells, G. A. H., I. F. Keymer, and К. C. Barnett. 1989. Suspected Aleutian disease in a wild otter (Lutra lutra). Vet. Rec. 125:232-235.
122. Lew A.M., Marshall V.M., Kemp D.J., (1993) Affinity selection of polymerase chain reaction products by DNA-binding proteins. Methods Enziymol. 218:526-534.
123. Kemp D.J. et al. (1990) Simplified colorimetric analysis of polymerase chain reaction: detection of HIV sequences in AIDS patients. Gene. 94:223-228.
124. Kemp D.J. et al. (1989) Colorimetric detection of specific DNA segments amplified by polymerase chain reactions. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 8 6:2423-2327.
125. Oakley M.G., Dervan P.B. (1990) Structural motif of the GCN4 DNA binding domain characterized by affinity cleaving. Science. 248:847-850.