Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Влияние биологически активных веществ на иммунный статус норок при алеутской болезни и иммунодефицитных состояниях

На правах

Хитрова Екатерина Александровна

Влияние биологически активных веществ на иммунный статус норок при алеутской болезни и пммунодефицитных состояниях

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Новосибирск - 2009

003460445

Работа выполнена в Институте ветеринарной медицины Федерального гос дарственного образовательного учреждения высшего профессионального образо ния «Омский государственный аграрный университет»

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор

Колычев Николай Матвеевич

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Незавитин Анатолий Григорьевич

доктор биологических наук, старший научный сотрудник Семенихин Владимир Иванович

Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Алтайский государственный аграрный университет»

Защита диссертации состоится « 25 » февраля 2009г. в 14°° часов на засе нии диссертационного совета Д.006.045.01 при ГНУ Институт экспериментальн ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО Россельхозакадемии по адресу: 6305 Новосибирская область, Новосибирский район, п. Краснообск, ГНУ ИЭВСиДВ, а/я тел/факс (383) 348-44-62.

С диссертацией можно ознакомиться в ЦНСХБ СО Россельхозакадемии Автореферат разослан ç/f£&p ? 2009 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета

Г.М. Стеблева

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Значительный урон экономике звероводства наносят еутская болезнь норок и иммунодефицитные состояния молодняка вследствие удшения товарных качеств шкурковой продукции и высокого отхода животных .Ф. Кузнецов, В.М. Короткое, 1996; В.Г. Ощепков и др., 1996; A.B. Владимиров, 05; И.Л. Обухов и др., 2005). Средства специфической профилактики алеутской лезни норок отсутствуют (A.A. Конопаткин, 1993; Т.А. Рыжова и др., 2002; .И. Литвинов, H.A. Яременко, 2005; B.C. Слугин, 2005). Профилактика инфекцион-IX болезней молодняка при иммунодефицитах не эффективна, так как иммунная 1стема не способна полноценно реагировать на антигенную стимуляцию (Ю.Н. Фе-ров, O.A. Верховский, 1996; B.C. Бузлама, 2005). В связи с этим, в звероводстве обое внимание уделяют поиску средств, позволяющих корректировать иммунный атус животных при алеутской болезни и иммунодефицитных состояниях с целью одления жизни зверей до формирования качественного мехового покрова. Данным ебованиям отвечают биологически активные вещества растительного происхожде-я, способные активизировать защитные силы организма, корректировать стрессы, вышать продуктивность животных и оказывать адаптогенное действие (В.Д. Соков, 1997). Учитывая относительно низкие затраты на выращивание и переработку фья, их использование является перспективным способом иммунокоррекции, по-ппающим качество продукции звероводства (А.Г. Нарижный, А.Ч. Джамалдинов, 03; H.H. Новикова и др., 2005). Это явилось основанием для изучения влияния стительных иммуномодуляторов - фоспренил и родиолы розовой - на иммунный атус норок при алеутской болезни и иммунодефицитных состояниях у щенков-потрофиков.

Цель исследования - изучение количественных показателей критериев оценки мунного статуса здоровых норок и инфицированных вирусом алеутской болезни, а кже здоровых щенков норок и щенков-гипотрофиков с иммунодефицитными со-ояниями при использовании фоспренила и родиолы розовой.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить гематологические показатели у здоровых норок, при алеутской бо-зни и иммунодефицитных состояниях под влиянием фоспренила, родиолы розовой ез них.

2. Определить поглотительную способность гранулоцитов периферической ови здоровых норок, при алеутской болезни и иммунодефицитных состояниях с пользованием биологически активных веществ и без них.

3. Установить количество розеткообразующих лимфоцитов периферической ови у здоровых норок и инфицированных вирусом алеутской болезни, а также у

ровых щенков норок и щенков-гипотрофиков при использовании фоспренила, диолы розовой и без них.

4. Изучить влияние фоспренила и родиолы розовой на количество иммунных ков и комплементарную активность сыворотки крови здоровых и инфицирован-

IX вирусом алеутской болезни норок, а также здоровых щенков норок и щенков-

3

гипотрофиков и сравнить с аналогичными показателями у животных контрольны групп.

Научная новизна. Изучено влияние биологически активных веществ - фос пренила и родиолы розовой - на иммунный статус норок, разводимых в Омской о ласти, в норме, при алеутской болезни и иммунодефицитных состояниях. Определен корригирующая роль фоспренила и родиолы розовой на количественные показател гематологического статуса, на функциональную активность клеточных и гуморал ных факторов иммунитета норок при алеутской болезни и щенков-гипотрофиков пр иммунодефицитах.

Теоретическая и практическая значимость работы. В результате проведё} ных исследований получены количественные показатели критериев оценки иммунн го статуса инфицированных и здоровых норок, а также молодняка норок в норме и иммунодефицитными состояниями при использовании биологически активных в ществ и без них. Дано обоснование применения фоспренила и родиолы розовой целью коррекции иммунного статуса у норок, инфицированных вирусом алеутско болезни, и иммунодефицитных состояний у щенков-гипотрофиков. Полученные да ные могут быть использованы в качестве критериев при оценке иммунного статус пушных зверей с инфекционной и иммунодефицитной патологией с применение различных иммуноактивных препаратов.

Внедрение результатов исследования. Материалы исследований использ ются в учебном процессе на факультетах ветеринарной медицины ФГОУ В ПО «О ский государственный аграрный университет» и ФГОУ ВПО «Красноярский гос дарственный аграрный университет». Разработаны методические рекомендации «М тоды оценки иммунного статуса норок», утвержденные на заседании подсекци «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отдел ния ветеринарной медицины РАСХН. Получен патент на изобретение «Способ и следования иммунокомпетентных клеток для оценки иммунного статуса норок». П лучено три удостоверения на рационализаторские предложения «Устройство дл фиксации норок»; «Использование цинк-сульфатного теста (ЦСТ - теста) для опр деления количества иммунных белков в сыворотке крови норок»; «Фиксирующе устройство для норок».

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсу дены на ежегодных научных конференциях профессорско-преподавательского сост ва и аспирантов ФГОУ ВПО ОмГАУ (Омск, 2005, 2006; 2007); на V Международно научно-практической конференции молодых ученых Сибирского федерального окр га «Современные тенденции развития АПК в России» (Красноярск, 2007).

Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликован восемь статей, в том числе две статьи - в журналах, рекомендованных ВАК Минобр зования РФ («Ветеринарная патология», Бюллетень №30).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 145 страница компьютерного текста и включает введение, обзор литературы, собственные иссл дования, обсуждение результатов исследования, выводы, практические предложени список литературы, приложения. Работа иллюстрирована 43 рисунками и содержи

4

тыре таблицы. Список литературы включает 261 работу, из них 201 отечественных торов и 60 иностранных.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Результаты гематологических исследований крови здоровых и инфициро-нных вирусом алеутской болезни норок, щенков норок с иммунодефицитными со-ояниями при использовании биологически активных веществ и без них.

2. Данные о влиянии фоспренила и родиолы розовой на функциональную ак-вность клеточных факторов иммунитета у здоровых норок, инфицированных виру-м алеутской болезни и с иммунодефицитными состояниями по сравнению с анало-чными показателями у норок контрольных групп.

3. Результаты исследования функционального состояния гуморального звена мунитета у здоровых норок, инфицированных вирусом алеутской болезни и щен-в-гипотрофиков с иммунодефицитными состояниями при использовании биологи-ски активных веществ и без них.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы исследования

Научно-исследовательская работа выполнена в 2003-2008 гг. на кафедре 1кробиологии, вирусологии и иммунологии института ветеринарной медицины ГОУ ВПО ОмГАУ в соответствии с государственной тематикой: «Теоретическое основание, разработка и внедрение эффективных методов, средств диагностики и офилактики болезней пушных зверей, собак и кошек» (гос. регистр. № .99.0004620). Исследования были проведены в условиях ЗАО «Речное» Омской ласти на 63 норках половозрелого возраста и 54 щенках, достигших сорокадневно-возраста. В эксперименте использовали норок, отрицательно и положительно реа-рующих в иммуноферментном анализе с антигеном алеутской болезни, а также оровых щенков норок и щенков-гипотрофиков с иммунодефицитными состояния-

Было сформировано 12 групп животных: восемь опытных и четыре контроль-IX. В первую и вторую опытные группы отнесены здоровые половозрелые норки, в етью и четвертую опытные группы - норки, инфицированные вирусом алеутской лезни. Пятую и шестую экспериментальную группу составили здоровые щенки рок, седьмую и восьмую - щенки-гипотрофики. В девятую контрольную группу шли здоровые взрослые норки, в десятую контрольную - норки, инфицированные русом алеутской болезни. В 11-ую контрольную группу включили здоровых щен-в норок, в 12-ую - щенков-гипотрофиков. Изучение иммунного статуса норок пер-й, третьей, пятой, седьмой опытных групп проводили при использовании фоспре-ла, второй, четвертой, шестой, восьмой групп - при использовании родиолы розой. Результаты гематологических и иммунологических исследований у норок 9, 10, , 12 групп были использованы в качестве критериев при оценке корригирующего ияния изучаемых препаратов. Схема применения иммуномодуляторов у норок едставлена в таблице 1.

Таблица 1 - Схема применения иммуномодуляторов у норок

Исследуемые животные № группы животных Иммуномодуляторы

Опытные группы животных

здоровые 1 фоспренил

Взрослые норки 2 родиола розовая

инфицированные вирусом АБ 3 фоспренил

4 родиола розовая

здоровые 5 фоспренил

Щенки 6 родиола розовая

норок гипотрофики 7 фоспренил

8 родиола розовая

Контрольные группы животных

Взрослые здоровые 9 -

норки инфицированные вирусом АБ 10 -

Щенки здоровые 11 -

норок гипотрофики 12 -

Фоспренил (Phosprenyl) представляет собой 0,4%-ый раствор фосфорилиро ванных полипренолов хвои и является одним из перспективных иммуномодуляторо растительного происхождения (производство ЗАО «Микро-плюс» при НИИЭМ им Н.Ф. Гамалеи). Экстракт родиолы жидкий (Extractum Rhodiolae fluidum) - препара приготовленный из корней и корневищ родиолы розовой (золотого корня) на 40%-о этиловом спирте (1:1). Дозировку, способ введения и схему применения иммуномо дуляторов устанавливали согласно наставлению и опираясь на результаты исследо ваний Т.А. Беспаловой и др. (1999), A.B. Деевой (2004), A.B. Деевой, Р.В. Белоусово (2004).

В качестве материала для проведения исследований использовали стабилизи рованную гепарином кровь и сыворотку крови норок. Пробы крови у животных бра ли в утренние часы до кормления общепринятым методом из кончика хвоста ил пальца. Подсчет количества эритроцитов и лейкоцитов проводили в счетной камер Горяева, гемоглобина - в гемометре Сали. Лейкоцитарную формулу подсчитывали мазках крови, окрашенных по Романовскому-Гимза. Гематокрит определяли с помо щью микроцентрифуги, скорость оседания эритроцитов - с использованием аппарат Панченкова (И.П. Кондрахин и др., 1985).

Поглотительную способность нейтрофилов определяли по количеству грану лоцитов, фагоцитирующих частицы латекса, т.е. по фагоцитарному индексу (ФИ,% а также по среднему числу частиц латекса, захваченных одним нейтрофилом

6

гоцитарному числу (ФЧ). На основании подсчета фагоцитарного индекса и числа ссчитывали абсолютные величины данных показателей (АФИ, тыс/мкл, АФЧ, ic/мкл) (В.Н. Блиндарь и др., 1996). Количество Т- и B-лимфоцитов, лимфоцитов-ллеров выявляли методом спонтанного (Е-рок), комплементарного (ЕАС-рок) и обулинового (ЕА-рок) розеткообразования (М.А. Бажин и др., 1989). Фуикцио-лыюе состояние гуморальных факторов иммунитета у норок оценивали по количе-ву иммунных белков, определяемых в ЦСТ-тесте (И.П. Кондрахин и др., 1985), и по овню комплементарной активности сыворотки крови (И.В. Меньшиков, Л.В. Беду-ва, 2001).

Постановку реакций розеткообразования, поглощения частиц латекса грануло-тами, ЦСТ-теста проводили в модифицированном варианте в соответствии с мето-ческими рекомендациями «Методы оценки иммунного статуса норок», утвержден-ши на заседании подсекции «Инфекционная патология животных в регионе Сиби-и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины РАСХН.

С целью определения достоверности результатов выполнено не менее трех поров по каждому виду исследований. Полученные данные обрабатывали статисти-ски с использованием программы MS Exel, достоверность различий оценивали по итериям Стьюдента.

Автор выражает благодарность за консультативную помощь в проведении час-исследований доктору ветеринар, наук, профессору Т.А. Беспаловой, доктору ве-инар. наук, профессору O.A. Приступе.

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 2.2.1. Влияние биологически активных веществ на показатели общего анализа клеток периферической крови норок

Результаты исследования общего анализа клеток периферической крови покати, что использование фоспренила и родиолы розовой способствовало улучшению итро - и лейкопоэза у здоровых и инфицированных вирусом алеутской болезни рок. О стимулирующем влиянии препаратов на кроветворную функцию органов мунной системы у норок свидетельствует увеличение количественных показателей ггроцитов, гемоглобина и гематокрита. Так, у здоровых норок первой опытной ппы содержание эритроцитов в периферической крови выше на 15,5%, второй ытной группы - на 18,9%, по сравнению с данным показателем у здоровых зверей нтрольной группы (Р>0,05; Р<0,001). У норок, инфицированных вирусом алеут-й болезни, данный показатель выше на 14,9% в третьей группе, на 12,2% в четвер-"i группе, соответственно (Р<0,001; Р<0,01). Аналогичная тенденция характерна и содержания гемоглобина: в опытных группах здоровых норок - на 6,8% и 7,5% 0,05; Р<0,05), в опытных группах инфицированных зверей - на 7,5% и 5,9% -0,05; Р>0,05), соответственно. Показатель скорости оседания эритроцитов у здо-вых норок в контрольной группе составил 2,60±0,23 мм/час, гематокрита -5±0,79%. У инфицированных зверей - 2,83±0,31 мм/час и 57,4±0,96%, соответст-нно. В опытных группах животных данные показатели достоверно не отличались

7

от контроля.

Абсолютное количество лейкоцитов у инфицированных зверей в контрольно группе составило 8,4±0,30 тыс/мкл, что в 1,7 раза больше, чем у здоровых норок кон трольной группы - 4,8±0,11 тыс/мкл. Выраженный лейкоцитоз у норок при алеутско болезни обусловлен изменением функциональной активности органов иммуногенез под действием вирусов. Применение биологически активных веществ вызвало кор рекцию абсолютного содержания лейкоцитов в крови как у инфицированных, так и здоровых зверей. Так, при использовании фоспренила в периферической крови ин фицированных норок лейкоцитов содержалось 7,2±0,23 тыс/мкл (Р<0,001), у здоро вых - 5,4±0,17 тыс/мкл (Р<0,005). При использовании родиолы розовой количеств лейкоцитов у инфицированных и здоровых норок составило 8,2±0,26 тыс/мк (Р>0,05) и 5,0±0,22 тыс/мкл (Р>0,05), соответственно.

Структура лейкоцитарной формулы здоровых зверей двух опытных и кон трольной групп имела нейтрофильный профиль. Преобладание нейтрофилов в лейко грамме указывает на важную роль фагоцитарного звена в обеспечении иммунног гомеостаза у норок. Так, количественные показатели гранулоцитов составили в пер вой группе - 63,1±0,97%, Р<0,01 (3,43±0,11 тыс/мкл), во второй - 66,0±0,75%, Р>0,0 (3,33±0,14 тыс/мкл), в контрольной - 65,7±0,67% (3,19±0,11 тыс/мкл), лимфоцитов 34,4±0,93%, Р<0,01 (1,87±0,09 тыс/мкл), 31,2±0,99%, Р>0,05 (1,56±0,07 тыс/мкл) I 31,6±0,64% (1,52±0,06 тыс/мкл), соответственно. У инфицированных животны. опытных групп показатели «белой» крови имели определенные отличия от контроля что свидетельствует о стабилизации величин лейкограммы под действием биологиче ски активных веществ. Содержание лимфоцитов в периферической крови норо третьей опытной группы ниже на 25,5%, четвертой группы - на 3,1%, по сравнению данным показателем в контроле - 45,3±1,11%, Р<0,001 (3,24±0,15 тыс/мкл) 58,9±1,04%, Р>0,05 (4,84±0,14 тыс/мкл) и 60,8± 1,34% (5,12±0,25 тыс/мкл), соответст венно. Уровень нейтрофилов в опыте, наоборот, выше на 43,3% в третьей группе, н' 5,8% - в четвертой группе, по сравнению с величинами контрольной группы и соста вил 51,6±0,96%, Р<0,001 (3,71±0,12 тыс/мкл), 38,1±0,90%, Р>0,05 (3,15±0,14 тыс/мкл и 36,0±0,70% (3,03±0,09 тыс/мкл), соответственно. Коррекция соотношения клето лейкограммы у инфицированных животных опытных групп отражает восстановлени функций кроветворных органов под влиянием иммуномодуляторов.

Количество эозинофилов, базофилов и моноцитов в периферической кров здоровых норок контрольной группы существенно не отличалось от соответствующие показателей у инфицированных животных в контроле. У здоровых зверей в контрол содержание эозинофилов составило 1,2±0,20% (0,19±0,13 тыс/мкл), базофилов 1,1±0,10% (0,05±0,01 тыс/мкл), моноцитов - 0,4±0,08% (0,02±0,004 тыс/мкл), у инфи цированных зверей - 1,8±0,42% (0,15±0,03 тыс/мкл), 1,0±0,20% (0,11±0,02 тыс/мкл) 0,4±0,16% (0,04±0,01 тыс/мкл), соответственно. В опытных группах данные величинь лейкоформулы также достоверно не отличались у здоровых и инфицированных живот ных.

У молодняка норок экспериментальных групп установлено увеличение количе ства эритроцитов, гемоглобина и гематокрита в периферической крови, чт

8

видетельствует о способности исследуемых препаратов активизировать процессы роветворения. Количественный показатель эритроцитов у здоровых щенков кон-ольной группы составил 7,4±0,34 млн/мкл, гемоглобина - 162,0±2,77 г/л, у щенков-шотрофиков в контроле 6,1 ±0,25 млн/мкл и 153,2±3,02 г/л, соответственно. В опыт-ых группах зверей данные показатели достоверно отличались. Так, в перифериче-ой кров и здоровых щенков норок пятой группы эритроцитов содержалось 8,6±0,18 лн/мкл (Р<0,001), гемоглобина - 172,7±3,15 г/л (Р<0,01), шестой группы 8,8±0,15 лн/мкл (Р<0,001) и 174,1±3,77 г/л (Р<0,01), соответственно. У щенков-гипотрофиков и использовании фоспренила количество эритроцитов в периферической крови ставило 7,2±0,17 млн/мкл (Р<0,001), гемоглобина - 160,8±2,52 г/л (Р<0,05). При пользовании родиолы розовой щенкам-гипотрофикам данные показатели состави-1 7,3±0,15 млн/мкл (Р<0,001) и 161,9±2,49 г/л (Р<0,01), соответственно. Процентное отношение эритроцитов к плазме крови у здоровых щенков составило в контроль-й группе 56,4±0,83%, в пятой группе - 57,2±0,87% (Р>0,05), в шестой группе -,8±0,76% (Р>0,05). У щенков-гипотрофиков данный показатель составил в кон-ольной фуппе 50,1 ±0,87%, в седьмой группе - 52,3±0,96% (Р>0,05), в восьмой уппе - 52,9±0,99% (Р<0,05). Эритроциты периферической крови щенков норок кон-ольных фупп оседали со скоростью 2,69±0,28 мм/час у здоровых, 2,80±0,23 мм/час гипотрофиков. Показатели СОЭ у молодняка норок опытных групп существенно не личались от контроля.

Абсолютное количество лейкоцитов у щенков норок контрольных групп соста-то 8,0±0,28 тыс/мкл у здоровых и 5,2±0,55 тыс/мкл у гипотрофиков. Применение спренила и родиолы розовой у молодняка способствовало нормализации уровня йкоцитов в периферической крови. Так, сравнительная оценка данного показателя здоровых щенков опытных и контрольной групп показала уменьшение количества еток «белой» крови на 7,5% (Р>0,05) при использовании фоспренила и на 3,7% >0,05) при использовании родиолы розовой. Снижение количества лейкоцитов у оровых щенков в опыте является показателем стабилизации механизмов иммунной щиты под действием препаратов. Уровень лейкоцитов у щенков-гипотрофиков в 1ыте, наоборот, выше, чем у гипотрофиков в контроле на 32,7% (Р<0,01) в седьмой уппе и на 15,4% (Р>0,05) в восьмой группе. Повышение содержания лейкоцитов в ови щенков-гипотрофиков при использовании иммуномодуляторов отражает акти-цию защитных факторов иммунитета.

В гемограмме здоровых щенков норок и щенков-гипотрофиков при использо-нии биологически активных веществ отмечена тенденция к повышению относи-льного количества нейтрофилов, что также свидетельствует об иммунокорриги-ющем действии препаратов. Так, в пятой опытной группе здоровых зверей нейтро-лов содержалось 47,0±1,17%, Р>0,05 (3,51±0,18 тыс/мкл), лимфоцитов 50,0±1,15%, 0,05 (3,72±0,16 тыс/мкл). У здоровых щенков норок в шестой опытной группе ко-1чество нейтрофилов в периферической крови составило 45,6±0,95%, Р>0,05 ,58±0,27 тыс/мкл), лимфоцитов 51,4±0,86%, Р>0,05 (3,82±0,20 тыс/мкл). Количест-нный показатель нейтрофилов здоровых щенков норок контрольной группы соста-л 44,7± 1,07%, в абсолютном значении 3,57±0,08 тыс/мкл, лимфоцитов 52,4±0,89%

9

и 4,23±0,21 тыс/мкл, соответственно. У щенков-гипотрофиков в опыте данные пока затели клеток «белой» крови также имели отличия от соответствующих значений щенков-гипотрофиков в контроле. Так, содержание нейтрофилов составило в седь мой группе 44,6± 1,08%, Р>0,05 (3,10±0,12 тыс/мкл), в восьмой - 44,4± 1,35%, Р>0,0 (2,6б±0,13 тыс/мкл), в контрольной - 43,5±0,73% (2,27±0,26 тыс/мкл). Количестве лимфоцитов в периферической крови щенков-гипотрофиков содержалось при ис пользовании фоспренила 52,3± 1,05%, Р>0,05 (3,65±0,17 тыс/мкл), родиолы розовой 52,3±1,34%, Р>0,05 (3,13±0,12 тыс/мкл) и в контрольной группе 53,3±0,83°/ (2,75±0,26 тыс/мкл).

Содержание других клеток лейкоформулы - эозинофилов, базофилов и моно цитов у здоровых щенков норок в контроле не имели достоверных отличий от соот ветствующих показателей у щенков-гипотрофиков контрольной группы. Так, у здо ровых щенков в контроле количество эозинофилов составило 1,30±0,32% (0,11±0,0 тыс/мкл), базофилов - 1,20±0,36% (0,09±0,03 тыс/мкл), моноцитов - 0,30±0,10°/ (0,02±0,01 тыс/мкл). У щенков-гипотрофиков данные показатели составил! 1,50±0,28% (0,08±0,02 тыс/мкл), 1,10±0,18% (0,05±0,01 тыс/мкл), 0,50±0,11°/ (0,02±0,01 тыс/мкл), соответственно. Количество эозинофилов, базофилов и моноци тов у здоровых щенков норок и щенков-гипотрофиков в опытных группах не имел! существенных отличий от контроля.

Таким образом, полученные результаты исследований свидетельствуют о вы сокой эффективности использования биологически активных веществ, что проявля ется их положительным влиянием на гематологический статус здоровых норок, npi алеутской болезни и иммунодефицитах.

2.2.2. Влияние биологически активных веществ на поглотительную способность нейтрофилов периферической крови норок

Оценка основной функции нейтрофилов периферической крови - фагоцитоз инородных частиц, является важнейшим показателем состояния естественной рези стентности организма. Нами установлено выраженное стимулирующее влияние био логически активных веществ на функциональную активность нейтрофилов перифе рической крови здоровых норок и при алеутской болезни. На это указывает повыше ние количественных показателей ФИ, АФИ, ФЧ, АФЧ, определяемых при постановк реакции поглощения частиц латекса гранулоцитами. В периферической крови норо: контрольных групп выявлено, что ФИ у здоровых зверей составил - 26,4± 1,41%, инфицированных - 21,5±1,00%, в абсолютных величинах 0,86±0,07 тыс/мкл i 0,65±0,05 тыс/мкл, соответственно. В первой и третьей опытных группах данные по казатели достоверно выше: у здоровых норок ФИ составил 35,4±1,23% (Р<0,001) АФИ - 1,24±0,08 тыс/мкл (Р<0,001), у инфицированных 25,7±1,84% (Р<0,05) i 0,92±0,07 тыс/мкл (Р<0,01), соответственно. Во второй и четвертой опытных группа показатели ФИ и АФИ также имели отличия от контроля. Так, у здоровых норо функционально активных нейтрофилов содержалось 32,6±1,65% (Р<0,01) относительной величине, 1,08±0,06 тыс/мкл (Р<0,01) в абсолютном значении

10

инфицированных зверей ФИ составил 23,3± 1,88% (Р>0,05), АФИ - 0,68±0,07 ыс/мкл (Р>0,05).

Среднее количество частиц латекса в одном нейтрофиле периферической крои норок контрольных групп у здоровых животных составило 10,8±0,78, у инфициро-' иных 7,8±2,3, абсолютное содержание фагоцитарного числа - 9,5±1,25 тыс/мкл и ,06±1,64 тыс/мкл, соответственно. У здоровых норок значение фагоцитарного числа &Ч) в первой опытной группе на 46,3%, во второй группе - на 24,1% выше, чем у оровых зверей контрольной группы (15,8±1,29; 13,4±1,47 и 10,8±0,78, соответст-^нно). Значение абсолютного фагоцитарного числа (АФЧ) в данных опытных груп-х также выше по сравнению с показателем АФЧ в контрольных группах 8,9±1,00 тыс/мкл; 14,6±1,86 и 9,5±1,25 тыс/мкл, соответственно). У норок в третьей уппе величина ФЧ составила 10,9±1,11, АФЧ - 10,1±1,49 тыс/мкл, в четвертой уппе - 9,0±1,24 и 6,62±1,48 тыс/мкл, соответственно.

Активацию процессов фагоцитоза в результате использования фоспренила и диолы розовой отмечали и у молодняка норок. У здоровых зверей в контроле ФИ ставил 20,0±1,31%, АФИ - 0,71±0,05 тыс/мкл, у щенков-гипотрофиков -,2±1,50% и 0,36±0,06 тыс/мкл, соответственно. В опытных группах щенков норок иные показатели имели отличия от соответствующих величин в контроле. Так, у оровых щенков при использовании фоспренила ФИ составил 23,4± 1,69% (Р>0,05), абсолютном значении 0,84±0,09 тыс/мкл (Р>0,05), при использовании родиолы ро-вой 21,3±2,11% (Р>0,05) и 0,79±0,13 тыс/мкл (Р>0,05), соответственно. У щенков-потрофиков в седьмой группе величина ФИ составила 19,6±1,84% (Р>0,05), АФИ -61 ±0,06 тыс/мкл (Р<0,01), в восьмой группе - 18,8±1,57% (Р>0,05) и 0,51 ±0,06 1с/мкл (Р>0,05), соответственно.

Значения ФЧ и АФЧ у здоровых щенков норок в контрольной группе состави-I 4,00±0,82 и 3,14±0,79 тыс/мкл, у щенков-гипотрофиков в контроле 2,10±0,30 и 85±0,21 тыс/мкл, соответственно. В опытных группах здоровых щенков норок еднее число частиц латекса в одном гранулоците периферической крови составило пятой группе 8,60±1,49 (Р<0,01), в шестой группе - 6,50±0,89 (Р<0,05). Показатели Ч у здоровых норок в опыте также выше и составили 8,11±2,06 тыс/мкл (Р<0,05) и использовании фоспренила, 5,79±1,43 тыс/мкл (Р>0,05) при использовании ро-олы розовой. В седьмой опытной группе щенков-гипотрофиков величина ФЧ со-авила 3,80±0,59 (Р<0,01), АФЧ - 2,87±0,74 тыс/мкл (Р<0,01), в восьмой группе 0±0,61 (Р>0,05) и 1,73±0,49 тыс/мкл (Р>0,05), соответственно.

Таким образом, применение имммуномодуляторов эффективно для повышения овня неспецифической резистентности организма норок при алеутской болезни и мунодефицитных состояниях, а также здоровых норок. Об этом свидетельствует имуляция поглотительной способности гранулоцитов периферической крови житных экспериментальных групп.

2.2.3. Определение количества Т- и В-лимфоцитов, лимфоцитов-киллеров у норок при использовании биологически активных веществ

Препараты - фоспренил и родиола розовая - обладают высокой иммуномоду лирующей активностью. Это характеризуется их корректирующим влиянием на со отношение розеткообразующих лимфоцитов периферической крови норок опытны групп. Так, у здоровых зверей в опыте отмечалось наибольшее содержание Е-рок ЕА-рок, по сравнению с данными величинами в контрольных группах, что свиде тельствует об активации клеточного звена иммунитета у норок под воздействие\ препаратов. При использовании фоспренила количество Е-рок у них составил 42,4± 1,06% (0,88±0,05 тыс/мкл), ЕА-рок - 34,5± 1,22% (0,72±0,05 тыс/мкл), при ис пользовании родиолы розовой - 42,0±0,87% (0,68±0,04 тыс/мкл) и 34,2± 1,28° (0,53±0,03 тыс/мкл), соответственно. Процентное содержание Т-лимфоцитов и лим фоцитов-киллеров в периферической крови инфицированных зверей опытных груп также выше, чем в контроле, и составило 39,9± 1,25% и 29,2±3,03% в третьей группе 34,0± 1,98% и 23,8±2,20% в четвертой группе, соответственно. В абсолютном значе нии данные величины достоверно не отличались от контроля. Так, под действие!^ фоспренила уровень Е-рок и ЕА-рок составил 1,51±0,20 тыс/мкл и 0,94±0,07 тыс/мкл под влиянием родиолы розовой - 1,62±0,09 тыс/мкл и 1,13±0,10 тыс/мкл, соответст венно. В контрольных группах количество Т-лимфоцитов и лимфоцитов-киллеро составило 41,3±0,70% (0,71±0,11 тыс/мкл) и 33,8±1,40% (0,54±0,04 тыс/мкл) у здоро вых норок, 31,3± 1,60% (1,60±0,14 тыс/мкл) и 20,9±1,30% (1,08±0,10 тыс/мкл) у инфи цированных, соответственно (рис. 1).

Содержание ЕАС-рок у здоровых норок в контроле составило 23,3±2,10° (0,38±0,04 тыс/мкл), у норок при алеутской болезни этот показатель в 1,5 раза больш и составил 35,0±1,01% (1,79±0,04 тыс/мкл). Непропорционально высокий уровень В лимфоцитов в периферической крови инфицированных зверей указывает на повы шенную стимуляцию гуморального ответа на вирусный антиген, что играет важну роль в развитии иммунопатологических процессов при данной болезни. Применени биологически активных веществ способствовало снижению количества В лимфоцитов у инфицированных норок, что свидетельствует о нормализации фун циональной активности гуморальных факторов иммунитета. Так, данный показател у них составил 30,2± 1,95% (Р<0,05) (1,07±0,08 тыс/мкл) в третьей группе, 34,1 ±1,63° (Р>0,05) (1,63±0,10 тыс/мкл) в четвертой группе. У здоровых норок в опыте, наоб рот, содержание В-лимфоцитов периферической крови выше - 24,2± 1,02% (Р>0,05 (0,50±0,04 тыс/мкл) при использовании фоспренила, 23,8±1,49% (Р>0,05) (0,37±0,0 тыс/мкл) - при использовании родиолы розовой. Увеличение количества лимфоцитов в крови здоровых норок является показателем активации гуморапьног звена иммунитета под влиянием иммуномодуляторов.

Рисунок 1 - Относительное количество Т - и В - лимфоцитов, лимфоцитов-киллеров в периферической крови норок

34,5

24,2

□ Т-лимфоциты в В-лимфоциты □Лимфоциты-киллеры Взрослые здоровые норки 34,2

\42,4

1 группа

33,

41,3

42,0

23,8

23,3

группа

9 группа

Норки, инфицированные вирусом алеутской болезни

30,2

й группа

14,9

46,2

5 группа

15,5 Ш

44,4

7 группа

19,0

14,74

С?

6 группа

Щенки - гипотрофики

42,5

14,б4* ^

8 группа

31,3

V

34,1

4 группа Здоровые щенки норок

45,9

35,0

10 группа

19,3

45,0

14'\) /

11 группа

16,4

С?

13,3'

Ш

40,0

12 группа

В периферической крови щенков норок контрольных групп содержание Е-рок составило у здоровых зверей 45,0±1,16% (1,88±0,13 тыс/мкл), у гипотрофиков -40,0±1,95% (1,13±0,14 тыс/мкл). В опытных фуппах щенков данный показатель имел отличия от контроля. Так, у здоровых щенков норок количество Т-лимфонитов составило 46,2± 1,84% (Р>0,05) (1,71±0,11 тыс/мкл) под действием фоспренила, 45,9± 1,70% (Р>0,05) (1,79±0,09 тыс/мкл) - под действием родиолы розовой, у щенков-гипотрофиков -44,4± 1,15% (Р<0,05) (1,60±0,07 тыс/мкл) и 42,5±1,60% (Р>0,05) (1,37±0,09 тыс/мкл), соответственно.

Количество ЕА-рок в периферической крови здоровых щенков норок в контроле составило 19,3±1,57% (0,77±0,08 тыс/мкл), ЕАС-рок - 14,1±1,11% (0,59±0,06 тыс/мкл). У щенков-гипотрофиков контрольной группы данные показатели составили 16,4±1,71% (0,46±0,07 тыс/мкл) и 13,3±2,05% (0,37±0,07 тыс/мкл), соответственно. Использование биологически активных веществ способствовало повышению содержания лимфоцитов-киллеров и В-лимфоцитов в периферической крови здоровых щенков норок и щенков-гипотрофиков. Так, количественный показатель ЕА-рок здоровых зверей составил 19,7±1,94% (0,72±0,06 тыс/мкл) в пятой группе, 19,0±2,32°/ (0,73±0,09 тыс/мкл) в шестой группе, у щенков-гипотрофиков - 18,6±2Д8% (0,66±0,0 тыс/мкл) в седьмой фуппе и 17,6±2,37% (0,53±0,06 тыс/мкл) в восьмой группе.

Количество ЕАС-рок у здоровых щенков норок при использовании фоспренила со ставило 14,9±1,98%(0,55±0,08 тыс/мкл), при использовании родиолы розовой - 14,7± 1,68°/ (0,57±0,06 тыс/мкл), у щенков-гипотрофиков 15,5± 1,35% (0,55±0,05 тыс/мкл) и 14,6±1,25°/ (0,45±0,03 тыс/мкл), соответственно.

Использование биологически активных веществ вызвало коррекцию относи тельного и абсолютного количества розеткообразующих лимфоцитов в перифериче ской крови здоровых щенков норок и гипотрофиков с иммунодефицитной патологи ей, что отражает стимуляцию клеточного и гуморального иммунитета. Таким обра зом, результаты исследования показали, что препараты - фоспренил и родиола розо вая - оказывают выраженное корректирующее действие на иммунный статус здоро вых норок, при алеутской болезни и иммунодефицитных состояниях.

2.2.4. Определение количества иммунных белков и комплемента в сыворотке крови норок при использовании биологически активных веществ

У инфицированных норок контрольной группы отмечено высокое количеств иммунных белков в сыворотке крови (42,1 ± 1,20 мг/мл) и низкий уровень комплемен тарной активности (42,2± 1,60 КГЕ 50) по сравнению с данными величинами у здоро вых норок в контроле (33,8± 1,60 мг/мл и 60,3± 1,00 КГЕ 50, соответственно). При вве дении биологически активных веществ инфицированным животным получены отли чительные показатели иммунного статуса от соответствующих величин у инфициро ванных норок в контрольной группе. Так, количество иммунных белков в сыворотк крови инфицированных норок в третьей группе составило 37,9±1,01 мг/мл, четвертой группе - 41,1±1,57 мг/мл. Уровень комплементарной активности

14

фицированных зверей составил - 48,2±1,88 КГЕ 50 и 42,5±1,45 КГЕ 50 в третьей и твертой группах, соответственно.

У здоровых норок в опыте данные показатели также имели отличия от соответ-вующих значений в контроле. При этом в первой опытной группе здоровых норок держание иммунных белков в сыворотке крови составило 36,1± 1,07 мг/мл, во вто-й группе - 34,0±1,66 мг/мл. Количественный показатель комплементарной активно-и сыворотки крови у здоровых норок составил 65,8±1,47 КГЕ 50 в первой группе и ,8±1,81 КГЕ 50 во второй группе.

Использование иммуномодуляторов у здоровых норок и при алеутской болезни особствовало усилению комплементарной активности сыворотки крови. О стимуля-и гуморального звена иммунитета также свидетельствовало повышение показателей Т-теста у здоровых зверей под действием препаратов. У инфицированных живот-IX опытных групп количество иммунных белков в сыворотке крови, наоборот, пони-ось. Данный факт указывает на тенденцию устранения гипергаммаглобулинемии у рок, инфицированных вирусом алеутской болезни, при использовании иммуномоду-торов.

У щенков-гипотрофиков в контроле иммунных белков и комплемента в сыво-тке крови содержалось меньше, чем у здоровых щенков норок контрольной группы составило 20,2± 1,63 мг/мл (Р>0,05) и 25,1±1,17 КГЕ 50 (Р<0,001) у гипотрофиков, ,5±1,89 мг/мл и 31,5±1,07 КГЕ50 - у здоровых. Применение биологически активных ществ здоровым щенкам норок и щенкам с иммунной недостаточностью вызвало вышение данных иммунологических показателей, что свидетельствует о стимули-ющем действии препаратов на функциональное состояние гуморальных факторов мунитета. Так, содержание иммунных белков в сыворотке крови щенков-потрофиков составило 22,7± 1,23 мг/мл (Р>0,05) при использовании фоспренила, ,4±1,76 мг/мл (Р>0,05) - при использовании родиолы розовой. Уровень компле-нтарной активности у щенков-гипотрофиков составил 28,4± 1,39 КГЕ 50 (Р>0,05) в ьмой группе, 25,8±1,01 КГЕ 50 (Р>0,05) - в восьмой группе. Количественные пока-ели иммунных белков и комплемента в сыворотке крови здоровых щенков норок д влиянием биологически активных веществ также имели отличия от контроля, держание иммунных белков в сыворотке крови у них составило в пятой группе ,8±1,53 мг/мл (Р>0,05), в шестой группе - 25,2±2,03 мг/мл (Р>0,05), количество мплемента - 34,4±1,06 КГЕ 50 (Р>0,05) и 31,9±0,96 КГЕ 50 (Р>0,05), соответствен-

Таким образом, корректирующее влияние биологически активных веществ на вень иммунных белков и комплемента в сыворотке крови здоровых норок, при але-кой болезни и иммунодефицитных состояниях свидетельствует о высоком иммуно-дулирующем эффекте изучаемых препаратов.

Помимо выраженного корректирующего действия на иммунный статус норок с мунодефицитной патологией и инфицированных вирусом алеутской болезни, изу-мые иммуномодуляторы способствовали формированию качественного мехового крова и продлению жизни зверей. Об этом свидетельствует снижение падежа среди

15

инфицированных норок и щенков-гипотрофиков в опытных группах, по сравнению контролем. У инфицированных норок третьей и четвёртой опытных групп отход со ставил 25 и 33%, соответственно, контрольной группы - 50%. Среди щенков гипотрофиков число павших составило по 22% в седьмой и восьмой опытных груп пах, в контроле - 44%. В контрольных и опытных группах здоровых норок и щенко падеж не зарегистрирован.

Товарные качества пушнины у норок при использовании биологически акти ных веществ соответствовали нормативным показателям. Волосяной покров блеет щий, шелковистый с густыми остью и пухом, при раздувании волосяного покров кожа не видна. Волоски прочные и эластичные, окрас меха равномерный и однотон ный по всей шкурке. Количество шкурок с дефектами в экспериментальных группа было значительно меньше, чем в контрольных группах.

3. ВЫВОДЫ

1. Применение фоспренила здоровым норкам способствовало увеличению ко личества эритроцитов в периферической крови на 15,5%, гемоглобина - на 6,8%, п сравнению с данными показателями в контроле (Р>0,05; Р>0,05), применение роди лы розовой - на 18,9% и 7,5% (Р<0,001; Р<0,05), соответственно. У норок, инфицир ванных вирусом алеутской болезни, при использовании фоспренила количественны показатель эритроцитов выше на 14,9%, гемоглобина - на 7,5% (Р<0,001; Р<0,05 при использовании родиолы розовой - на 12,2% и 5,9% (Р<0,01; Р>0,05), соответс венно. Аналогичная тенденция характерна и для гематологических показателей у м лодняка норок: у здоровых щенков в пятой группе - на 16,2% и 6,6% (Р<0,001 Р<0,01), в шестой группе - на 18,9% и 7,5% (Р<0,001; Р<0,01), у щенко гипотрофиков в седьмой группе - на 18% и 4,9% (Р<0,001; Р<0,05), в восьмой групп - на 19,7% и 5,7% (Р<0,001; Р<0,01), соответственно. Полученные данные свидетел ствуют о стимулирующем действии иммуномодуляторов на гематологический стату здоровых и инфицированных вирусом алеутской болезни норок, щенков норок с и мунодефицитными состояниями.

2. Изменения уровня лейкоцитов в крови здоровых и инфицированных норо щенков-гипотрофиков норок при иммунодефицитах под влиянием биологически а тивных веществ свидетельствует о коррекции процессов лейкопоэза. Так, при и пользовании фоспренила в периферической крови инфицированных норок количес во лейкоцитов ниже на 14,2%, при использовании родиолы розовой - на 2,4%, п сравнению с данным показателем у инфицированных зверей контрольной групп (Р<0,001; Р>0,05). Применение иммуномодуляторов здоровым щенкам норок повт ряло эту тенденцию на 7,5 и 3,7% (Р>0,05; Р>0,05), соответственно. У норок остал ных опытных групп, наоборот, содержание лейкоцитов в крови выше по сравнению контролем. У здоровых норок данный показатель составил в первой группе 5,4±0,1 тыс/мкл (Р<0,005), во второй - 5,0±0,22 тыс/мкл (Р>0,05), у щенков-гипотрофико седьмой группы - 6,9±0,26 (Р<0,01), восьмой группы - 6,0±0,22 (Р>0,05), соответс венно.

3. Под действием иммуномодулятора фоспренил количество гранулоцитов, фа-цитирующих частицы латекса, составило у здоровых норок - 35,4±1,23% (Р<0,001), инфицированных норок - 25,7±1,84% (Р<0,05), у здоровых щенков - 23,4±1,69% >0,05), у щенков-гипотрофиков - 19,б±1,84% (Р>0,05). При использовании препара-

родиолы розовой данный показатель составил 32,б±1,65% (Р<0,01), 23,3±1,88% >0,05), 21,3±2,11% (Р>0,05), 18,8±1,57% (Р>0,05), соответственно, что свидетельст-ет о повышении поглотительной способности нейтрофилов периферической крови рок экспериментальных групп под влиянием иммуномодуляторов.

4. У инфицированных вирусом алеутской болезни норок показатели Е-рок и -рок под действием фоспренила составили 39,9±1,25% (Р<0,001) и 29,2±3,03%

<0,01), под действием родиолы розовой - 34,0±1,98% (Р>0,05) и 23,8±2,20% >0,05), соответственно. У щенков-гипотрофиков с иммунодефицитными состоя-1ями данные показатели составили под влиянием фоспренила - 44,4±1,15% (Р<0,05) 18,6±2,18% (Р>0,05), под действием родиолы розовой - 42,5± 1,60% (Р>0,05) и ,6±2,37% (Р>0,05), соответственно. У здоровых норок в опыте также отмечена тен-нция к повышению количества Е-рок и ЕА-рок, по сравнению с данными величи-ми в контроле: в первой группе содержание розеткообразующих лимфоцитов в ови выше на 2,7% и 2,1% (Р>0,05; Р>0,05), во второй группе - на 1,7% и 1,2% >0,05; Р>0,05), соответственно, что свидетельствует об активации клеточного им-нитета при использовании иммуномодуляторов.

5. Под влиянием фоспренила содержание ЕАС-рок в относительной величине ставило у здоровых норок 24,2± 1,02% (Р>0,05), у щенков норок - 14,9±1,98%

0,05), у щенков-гипотрофиков - 15,5±1,35% (Р>0,05). Под действием родиолы зовой данный показатель составил 23,8±1,49% (Р>0,05), 14,7±1,68% (Р>0,05) и ,6±1,25% (Р>0,05), соответственно, что указывает на тенденцию стимуляции гумо-ьного звена иммунитета при использовании биологически активных веществ.

6. Биологически активные вещества - фоспренил и родиола розовая - способст-ют коррекции функциональной активности гуморальных факторов иммунитета у рок, инфицированных вирусом алеутской болезни. На это указывает снижение ко-чества В-лимфоцитов в периферической крови инфицированных зверей опытных

пп. Данный показатель у них составил при использовании фоспренила 30,2± 1,95% 0,05), при использовании родиолы розовой - 34,1±1,63% (Р>0,05).

7. Использование фоспренила здоровым норкам способствовало увеличению ичественных показателей ЦСТ-теста до 36,1± 1,07 мг/мл (Р>0,05), комплемента до

,8±1,47 КГЕ 50 (Р<0,001), у щенков норок до 25,8± 1,53 мг/мл (Р>0,05) и 34,4± 1,06 Е 50 (Р>0,05), у щенков-гипотрофиков до 22,7± 1,23 мг/мл (Р>0,05) и 28,4± 1,3 9 Е 50 (Р>0,05), соответственно. При использовании родиолы розовой данные пока-ели составили у здоровых норок 34,0± 1,66 мг/мл и 60,8± 1,81 КГЕ 50, у щенков ок - 25,2±2,03 мг/мл (Р>0,05) и 31,9±0,96 КГЕ 50 (Р>0,05), у щенков-отрофиков - 21,4±1,76 мг/мл (Р>0,05) и 25,8±1,01 КГЕ 50 (Р>0,05), соответствен-что свидетельствует о стимулирующем влиянии иммуномодуляторов на функ-нальную активность гуморального иммунитета.

8. Под действием фоспренила содержание иммунных белков и комплемента сыворотке крови норок, инфицированных вирусом алеутской болезни, составили 37,9±1,01 мг/мл (Р<0,01) и 48,2± 1,88 КГЕ 50 (Р<0,05), под действием родиолы роз вой - 41, 1± 1,57 мг/мл (Р>0,05) и 42,5±1,45 КГЕ 50 (Р>0,05), соответственно. Пониж ние количества иммунных белков и повышение уровня комплементарной активност в сыворотке крови инфицированных зверей опытных групп указывает на устранен нарушений гуморального иммунитета.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Материалы исследований используются в учебном процессе на факультет ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Омский государственный аграрный универс тет» и ФГОУ ВПО «Красноярский государственный аграрный университет».

2. Методические рекомендации «Методы оценки иммунного статуса норок утвержденные подсекцией «Инфекционная патология животных в регионе Сибири Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины РАСХН (протокол № 17 от 3 сентября 2003 г.).

3. Патент на изобретение № 2263310 от 27.10.2005 г. «Способ исследован иммунокомпетентных клеток для оценки иммунного статуса норок».

4. Рационализаторские предложения «Устройство для фиксации норок» (№ 3 от 26.02.2002 г.); «Использование цинк-сульфатного теста (ЦСТ - теста) для опред ления количества иммунных белков в сыворотке крови норок» (№ 379 от 17.05.20 г.); «Фиксирующее устройство для норок» (№380 от 17.05.2002 г.).

5. СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Коррекция иммунного статуса здоровых норок и инфицированных вирусо алеутской болезни I Соавт.: Т.А. Беспалова, Г.Н. Сидоров // Ветеринарная патологи - 2007. -№3,- С. 251-254.

2. Изучение иммунного статуса пушных зверей в норме и при алеутской боле ни норок /Соавт.: Д.А. Хитрова, Т.А. Беспалова, O.A. Приступа и др. // Достижен ветеринарной медицины - 21-му веку: матер. Междунар. науч. конф., посвящ. 4 летию ИВМ АГАУ. - Барнаул. - 2002. - Ч. 1. - С. 96-97.

3. Изучение функциональной активности клеточных факторов иммуните плотоядных / Соавт.: Т.А. Беспалова, O.A. Приступа, И.В. Архипов, Д.И. Варбанск // Научное обеспечение устойчивого развития АПК в Сибири: матер, конф. молодь ученых Сибирского федерального округа / ФГОУ ВПО «БГСХА им. В.Р. Филипп ва». - Улан-Удэ, 2004. - Ч. 1. - С. 254-255.

4. Изучение клеточного иммунитета норок в норме и при вирусном плазмоцито / Соавт.: Д.А. Хитрова, Т.А. Беспалова, O.A. Приступа, З.И. Фролова // Сб. матер. 2 Междунар. науч.-практ. конф., посвящ. 75-летию факультета технологии молочнь продуктов Омского государственного аграрного университета (22 - 23 сентября 2005 -Омск, 2005.-С. 345-347.

5. Изучение влияния фоспренила на иммунный статус норок в норме и при ин-екционной патологии // Новейшие направления развития аграрной науки в работах олодых ученых: матер. 2-й Междунар. науч.-практ. конф. молодых ученых 20-21 пр. 2006 г., пос. Краснообск / РАСХН. Сиб. отд-ние. - Новосибирск, 2006. - С. 46871.

6. Иммунный статус здоровых норок и инфицированных вирусом алеутской лезни на фоне использования иммуномодуляторов // Современные тенденции раз-тия АПК в России: матер. 5-й Междунар. науч.-практ. конф. молодых ученых Си-рского федерального округа / Краснояр. гос. аграр. ун-т. - Красноярск, 2007. - Ч. 1. С. 350-354.

7. Современные аспекты систематизации иммуноактивных препаратов / Соавт. .М. Колычев // Диагностика, лечение и профилактика болезней животных в условиях ибири и Урала: матер, межрегион, науч.-практ. конф., посвящ. 180-летию аграрной нау-

Сибири / ВНИИБТЖ. - Омск, 2008. - С. 139-142.

8. Патент 2263310 С2 Российская федерация, МПК G01N 33/48 (2003.04). Способ следования иммунокомпетентных клеток для оценки иммунного статуса норок / Сот.: Т.А. Беспалова, O.A. Приступа, Д.А. Хитрова, Ю.И. Пацула, И.В. Архипов, В.И. арбанский, Д.И. Варбанский // заявитель и патентообладатель ФГОУ ВПО ОмГАУ ВМ.-№ 2003113946/15; заявл. 20.11.2004; опубл. 27.10.2005, Бюл. № 30.

Подписано в печать 15.01.2009 Формат 60x84/16 П. л. - 1,0 усл. Способ печати - оперативный Тираж 100

Издательско-полиграфический центр ОмГМА 644099, Омск, ул. Ленина, 12; тел. 23-05-98 E-mail: ipc@omsk-osma.ru

Значительный урон экономике звероводства наносят алеутская болезнь норок и иммунодефицитные состояния молодняка вследствие ухудшения товарных качеств шкурковой продукции и высокого отхода животных (А.Ф. Кузнецов, В.М. Короткое, 1996; В.Г. Ощепков и др., 1996; A.B. Владимиров, 2005; И.Л. Обухов и др., 2005). Средства специфической профилактики алеутской болезни норок отсутствуют (A.A. Конопаткин, 1993; Т.А. Рыжова и др., 2002; А.И. Литвинов, H.A. Яременко, 2005; B.C. Слугин, 2005). Профилактика инфекционных болезней молодняка при иммунодефицитах не эффективна, так как иммунная система не способна полноценно реагировать на антигенную стимуляцию (Ю.Н. Федоров, O.A. Верховский, 1996; B.C. Бузлама, 2005). В связи с этим, в звероводстве особое внимание уделяют поиску средств, позволяющих корректировать иммунный статус животных при алеутской болезни и иммунодефицитных состояниях с целью продления жизни зверей до формирования качественного мехового покрова. Данным требованиям отвечают биологически активные вещества растительного происхождения, способные активизировать защитные силы организма, корректировать стрессы, повышать продуктивность животных и оказывать адаптогенное действие (В.Д. Соколов, 1997). Учитывая относительно низкие затраты на выращивание и переработку сырья, их использование является перспективным способом иммунокоррекции, повышающим качество продукции звероводства (А.Г. Нарижный, А.Ч. Джамалдинов, 2003; H.H. Новикова и др., 2005). Это явилось основанием для изучения влияния растительных иммуномодуляторов - фоспренил и родиолы розовой - на иммунный статус норок при алеутской болезни и иммунодефицитных состояниях у щенков-гипотрофиков.

Цель исследования - изучение количественных показателей критериев оценки иммунного статуса здоровых норок и инфицированных вирусом алеутской болезни, а также здоровых щенков норок и щенков-гипотрофиков с иммунодефицитными состояниями при использовании фоспренила и родиолы розовой.- Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить гематологические показатели у здоровых норок, при алеутской болезни и иммунодефицитных состояниях под влиянием фоспренила, родиолы розовой и без них.

2. Определить поглотительную способность гранулоцитов периферической крови здоровых норок, при алеутской болезни и иммунодефицитных состояниях с использованием биологически активных веществ и без них.

3. Установить количество розеткообразующих лимфоцитов периферической крови у здоровых норок и инфицированных вирусом алеутской болезни, а также у здоровых щенков норок и щенков-гипотрофиков при использовании фоспренила, родиолы розовой и без них.

4. Изучить влияние фоспренила и родиолы розовой на количество иммунных белков и комплементарную активность сыворотки крови здоровых и инфицированных вирусом алеутской болезни норок, а также здоровых щенков норок и щенков-гипотрофиков и сравнить с аналогичными показателями у животных контрольных групп.

Научная новизна. Изучено влияние биологически активных веществ -фоспренила и родиолы розовой - на иммунный статус норок, разводимых в Омской области, в норме, при алеутской болезни и иммунодефицитных состояниях. Определена корригирующая роль фоспренила и родиолы розовой на количественные показатели гематологического статуса, на функциональную активность клеточных и гуморальных факторов иммунитета норок при алеутской болезни и щенков-гипотрофиков при иммунодефицитах.

Теоретическая и практическая значимость работы. В результате проведённых исследований получены количественные показатели критериев оценки иммунного статуса инфицированных и здоровых норок, а также молодняка норок в норме и с иммунодефицитными состояниями при использовании биологически активных веществ и без них. Дано обоснование применения фоспренила и родиолы розовой с целью коррекции иммунного статуса у норок, инфицированных вирусом алеутской болезни, и иммунодефицитных состояний у щенков-гипотрофиков. Полученные данные могут быть использованы в качестве критериев при оценке иммунного статуса пушных зверей с инфекционной и иммунодефицитной патологией с применением различных иммуноактивных препаратов.

Внедрение результатов исследования. Материалы исследований используются в учебном процессе на факультетах ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Омский государственный аграрный университет» и ФГОУ ВПО «Красноярский государственный аграрный университет». Разработаны методические рекомендации «Методы оценки иммунного статуса норок», утвержденные на заседании подсекции «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины РАСХН. Получен патент на изобретение «Способ исследования иммунокомпетентных клеток для оценки иммунного статуса норок». Получено три удостоверения на рационализаторские предложения «Устройство для фиксации норок»; «Использование цинк-сульфатного теста (ЦСТ - теста) для определения количества иммунных белков в сыворотке крови норок»; «Фиксирующее устройство для норок».

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на ежегодных научных конференциях профессорско-преподавательского состава и аспирантов ФГОУ ВПО ОмГАУ (Омск, 2005, 2006; 2007); на V Международной научно-практической конференции молодых ученых Сибирского федерального округа «Современные тенденции развития АПК в России» (Красноярск, 2007).

Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано восемь статей, в том числе одна статья - в журнале, рекомендованном ВАК Минобразования РФ («Ветеринарная патология»).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 145 страницах компьютерного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследования, выводы, практические предложения, список литературы, приложения. Работа иллюстрирована 43 рисунками и содержит четыре таблицы. Список литературы включает 261 работу, из них 201 отечественных авторов и 60 иностранных.

IV. Выводы

1. Применение фоспренила здоровым норкам способствовало увеличению количества эритроцитов в периферической крови на 15,5%, гемоглобина — на 6,8%, по сравнению с данными показателями в контроле (Р>0,05; Р>0,05), применение родиолы розовой - на 18,9% и 7,5% (Р<0,001;, Р<0,05), соответственно. У норок, инфицированных вирусом алеутской болезни, при использовании фоспренила количественный показатель эритроцитов выше на 14,9%, гемоглобина - на 7,5% (Р<0,001; Р<0,05), при использовании родиолы розовой - на 12,2% и 5,9% (Р<0,01; Р>0,05), соответственно. Аналогичная тенденция характерна и для гематологических показателей у молодняка норок: у здоровых щенков в пятой группе - на 16,2% и 6,6% (Р<0,001; Р<0,01), в шестой группе - на 18,9% и 7,5% (Р<0,001; Р<0,01), у щенков-гипотрофиков в седьмой группе - на 18% и 4,9% (Р<0,001; Р<0,05), в восьмой группе - на 19,7% и 5,7% (Р<0,001; Р<0,01), соответственно. Полученные данные свидетельствуют о стимулирующем действии иммуномодуляторов на гематологический статус здоровых и инфицированных вирусом алеутской болезни норок, щенков норок с иммунодефицитными состояниями.

2. Изменения уровня лейкоцитов в крови здоровых и инфицированных норок, щенков-гипотрофиков норок при иммунодефицитах под влиянием биологически активных веществ свидетельствует о коррекции процессов лейкопоэза. Так, при использовании фоспренила в периферической крови инфицированных норок количество лейкоцитов ниже на 14,2%, при использовании родиолы розовой - на 2,4%, по сравнению с данным показателем у инфицированных зверей контрольной группы (Р<0,001; Р>0,05). Применение иммуномодуляторов здоровым щенкам норок повторяло эту тенденцию на 7,5 и 3,7% (Р>0,05; Р>0,05), соответственно. У норок остальных опытных групп, наоборот, содержание лейкоцитов в крови выше по сравнению с контролем. У здоровых норок данный показатель составил в первой группе 5,4±0,17 тыс/мкл (Р<0,005), во второй - 5,0±0,22 тыс/мкл (Р>0,05), у щенков-гипотрофиков седьмой группы - 6,9±0,26 (Р<0,01), восьмой группы - 6,0±0,22 (Р>0,05), соответственно.

3. Под действием иммуномодулятора фоспренил количество' гранулоцитов, фагоцитирующих частицы латекса, составило у здоровых норок - 35,4±1,23% (Р<0,001), у инфицированных норок - 25,7±1,84%. (Р<0,05), у здоровых щенков - 23,4±1,69% (Р>0,05), у щенков-гипотрофиков -19,6±1,84% (Р>0,05). При использовании препарата родиолы розовой данный показатель составил 32,6±1,65% (Р<0,01), 23,3±1,88% (Р>0,05), 21,3±2,11% (Р>0,05), 18,8±1,57% (Р>0,05), соответственно, что свидетельствует о повышении поглотительной способности нейтрофилов периферической крови норок экспериментальных групп под влиянием иммуномодуляторов.

4. У инфицированных вирусом алеутской болезни норок показатели Е-рок и ЕА-рок под действием фоспренила составили 39,9±1,25% (Р<0,001) и 29,2±3,03% (Р<0,01), под действием родиолы розовой - 34,0± 1,98% (Р>0,05) и 23,8±2,20% (Р>0,05), соответственно. У щенков-гипотрофиков с иммунодефицитными состояниями данные, показатели составили под влиянием фоспренила - 44,4± 1,15% (Р<0,05) и 18,6±2,18% (Р>0,05), под действием родиолы розовой - 42,5± 1,60% (Р>0,05) и 17,6±2,37% (Р>0,05), соответственно. У здоровых норок в опыте также отмечена тенденция к повышению количества Е-рок и ЕА-рок, по сравнению с данными величинами в контроле: в первой группе содержание розеткообразующих лимфоцитов в крови выше на 2,7% и 2,1% (Р>0,05; Р>0,05), во второй группе - на 1,7% и 1,2% (Р>0,05; Р>0,05), соответственно, что свидетельствует об активации клеточного иммунитета при использовании иммуномодуляторов.

5. Под влиянием фоспренила содержание ЕАС-рок в относительной величине составило у здоровых норок 24,2±1,02% (Р>0,05), у щенков норок -14,9±1,98% (Р>0,05), у щенков-гипотрофиков - 15,5±1,35% (Р>0,05). Под действием родиолы розовой данный показатель составил 23,8±1,49% (Р>0,05), 14,7±1,68% (Р>0,05) и 14,6±1,25% (Р>0,05), соответственно, что указывает на тенденцию стимуляции гуморального звена иммунитета при использовании биологически активных веществ.

6. Биологически активные вещества - фоспренил и родиола розовая -способствуют коррекции функциональной активности гуморальных факторов иммунитета у норок, инфицированных вирусом алеутской болезни. На это указывает снижение количества В-лимфоцитов в периферической крови инфицированных зверей опытных групп. Данный показатель у них составил при использовании фоспренила 30,2±1,95% (Р<0,05), при использовании родиолы розовой - 34,1±1,63% (Р>0,05).

7. Использование фоспренила здоровым норкам способствовало увеличению количественных показателей ЦСТ-теста до 36,1±1,07 мг/мл (Р>0,05), комплемента до 65,8± 1,47 КГБ 50 (Р<0,001), у щенков норок до 25,8±1,53 мг/мл (Р>0,05) и 34,4±1,06 КГБ 50 (Р>0,05), у щенков-гипотрофиков до 22,7± 1,23 мг/мл (Р>0,05) й 28,4±1,39 КГБ 50 (Р>0,05), соответственно. При использовании родиолы розовой данные показатели составили у здоровых норок 34,0±1,66 мг/мл и 60,8±1,81 КГБ 50, у щенков норок - 25,2±2,03 мг/мл (Р>0,05) и 31,9±0,96 КГБ 50 (Р>0,05), у щенков-гипотрофиков - 21,4±1,76 мг/мл (Р>0,05) и 25,8±1,01 КГБ 50 (Р>0,05), соответственно, что свидетельствует о стимулирующем влиянии иммуномодуляторов на функциональную активность гуморального иммунитета.

8. Под действием фоспренила содержание иммунных белков и комплемента в сыворотке крови норок, инфицированных вирусом алеутской болезни, составили - 37,9±1,01 мг/мл (Р<0,01) и 48,2±1,88 КГБ 50 (Р<0,05), под действием родиолы розовой -41,1±1,57 мг/мл (Р>0,05) и 42,5± 1,45 КГБ 50 (Р>0,05), соответственно. Понижение количества иммунных белков и повышение уровня комплементарной активности в сыворотке крови инфицированных зверей опытных групп указывает на устранение нарушений гуморального иммунитета.

V. Практические предложения

1. Материалы исследований используются в учебном процессе на факультетах ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Омский государственный аграрный университет» и ФГОУ ВПО «Красноярский государственный аграрный университет».

2. Методические рекомендации «Методы оценки иммунного статуса норок», утвержденные подсекцией «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины РАСХН (протокол № 17 от 30 сентября 2003 г.).

3. Патент на изобретение № 2263310 от 27.10.2005 г. «Способ исследования иммунокомпетентных клеток для оценки иммунного статуса норок».

4. Рационализаторские предложения «Устройство для фиксации норок» (№ 370 от 26.02.2002 г.); «Использование цинк-сульфатного теста (ЦСТ -теста) для определения количества иммунных белков в сыворотке крови норок» (№ 379 от 17.05.2002 г.); «Фиксирующее устройство для норок» (№380 от 17.05.2002 г.).

117