Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Совершенствование диагностики туберкулеза крупного рогатого скота в индивидуальных и общественных хозяйствах

На правах рукописи

ПОМЫКАНОВ НИКОЛАЙ ПЕТРОВИЧ

СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЁЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В ИНДИВИДУАЛЬНЫХ И ОБЩЕСТВЕННЫХ ХОЗЯЙСТВАХ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата ветеринарных наук

Москва - 2005

Работа выполнена в лаборатории микобактериозов ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко (ВИЭВ)

Научный руководитель:

Заслуженный ветеринарный врач РФ, доктор ветеринарных наук, Найманов Али Хусинович

Официальные оппоненты:

Заслуженный деятель науки, доктор ветеринарных наук, профессор, Бурлаков Валентин Александрович (МГАВМиБ)

Кандидат ветеринарных наук, Бричко Владимир Фёдорович (ВНИИВСГЭ)

Ведущая организация - ФГУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ «ВГНКИ»)

Защита диссертации состоится «<2?» Л/уЬ 2005 г. в ^^часов на заседании диссертационного совета Д 006.033.01 при ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко по адресу: 109428, Москва, Рязанский проспект,24/1, ВИЭВ.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИЭВ. Автореферат разослан » «V Де 2005 г.

Учёный секретарь диссертационного совета,

доктор ветеринарных наук, профессор.^ ' НП- Овдишк°

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Туберкулез крупного рогатого скота наносит значительный экономический ущерб животноводству страны, что связано с широкой распространенностью болезни, необходимостью убоя реагирующих на туберкулин животных в благополучных и неблагополучных по туберкулёзу хозяйствах и населенных пунктах.

На современном этапе борьбы с туберкулёзом животных, основой профилактических и оздоровительных мероприятий была и остаётся диагностика этой болезни. При диагностике туберкулёза крупного рогатого скота основным, массовым и общепринятым методом является внутрикожная проба с применением ППД - туберкулина для млекопитающих. Одной из важных проблем при диагностике туберкулёза внутрикожной туберкулиновой пробой остаётся проблема неспецифических реакций на туберкулин. Актуальность этой проблемы увеличивается из года в год. Так, в благополучных хозяйствах РФ выявляется в 5,3 раза больше реагирующих на туберкулин животных, чем в неблагополучных по туберкулёзу.

Массовые выявления неспецифических реакций на туберкулин приводит к убою большого количества здоровых животных, что увеличивает размеры экономического ущерба и вызывает сомнения в правильности диагностики туберкулёза утверждёнными методами.

Кроме того, туберкулез крупного рогатого скота имеет важное социальное значение, так как возбудитель болезни может передаваться человеку и вызывать заболевание людей и, наоборот, животные могут заразиться от людей.

В последние годы в нашей стране увеличилась заболеваемость людей туберкулезом, резко сократилось поголовье животных в общественном секторе и увеличилось поголовье крупного рогатого скота в частном секторе. Поэтому, всё острее возрастает проблема диагностики туберкулёза крупного рогатого скота в индивидуальных хозяйствах.

Следует указать, что для индивидуальных хозяйств более характерны бесконтрольные перемещения животных, перевозки кормов и животноводческой продукции, бесконтрольная торговля продуктами животноводства (особенно мясом и молоком), и все эти указанные факторы усложняют проведение комплекса профилактических и оздоровительных мероприятий при туберкулезе.

Другой, немаловажной особенностью, затрудняющей диагностику микобактериозов в индивидуальных хозяйствах, является совместное содержание и тесный контакт разных видов животных и птиц.

В связи с указанными особенностями, в последние годы увеличивается количество жалоб владельцев животных на необоснованный убой реагирующих животных, заводятся судебные дела между владельцами животных и ветеринарными специалистами.

Мероприятия по профилактике и борьбе с туберкулёзом проводятся в соответствии с Законом РФ «О ветеринарии», Санитарных правил СП 31.093-

96 и Ветеринарных правил ВП 13.3.1325-96, утвержденных Госкомсанэпиднадзором РФ 31.05.96 г. и Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства РФ от 18.06.96 г., «Наставлением по диагностике туберкулёза животных», утверждённых Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства РФ от 18.11.2002 г.

К сожалению, в этих нормативных документах очень мало рекомендаций по диагностике туберкулёза крупного рогатого скота в частном секторе. Поэтому, в практических условиях, диагностические мероприятия по профилактике и оздоровлению от туберкулеза в личных подворьях граждан проводятся как и в общественном секторе.

Известно, что диагностика туберкулеза крупного рогатого скота в общественном секторе имеет свои специфические особенности. Главной особенностью является тот факт, что в общественном секторе диагноз на туберкулез ставится по группе животных, т.е. по стаду. Так, в соответствии с утверждёнными нормативными документами при постановке диагноза на туберкулез, из числа реагирующих на туберкулин животных проводят диагностический убой нескольких, наиболее характерно реагирующих на туберкулин животных, с последующим патологоанатомическим и лабораторным исследованиями на туберкулез.

Симультанная туберкулиновая проба с применением туберкулина для млекопитающих и комплексного аллергена из атипичных микобактерий (КАМ), которая широко применяется в ветеринарной практике для дифференциации аллергических реакций на туберкулин, также является групповой и даёт возможность ориентироваться в ситуации по туберкулезу только по стаду или группе (не менее 6 голов) исследуемых животных.

Известно, что в индивидуальных хозяйствах, у хозяина одна-две коровы, а для постановки диагноза на туберкулёз необходимо провести убой реагирующих животных, и дальнейшие патологоанатомические и лабораторные исследования на туберкулёз.

В общественных хозяйствах, при убое одного или нескольких реагирующих животных сохраняется остальное поголовье животных, а в частном секторе, при убое одной коровы убивают и последнюю корову.

Поэтому, учитывая сложную эпидемическую и эпизоотическую ситуацию по туберкулёзу в нашей стране, недостаточную эффективность методов диагностики туберкулёза животных, совершенствование методов диагностики туберкулёза крупного рогатого скота в индивидуальных хозяйствах является весьма актуальным.

1.2. Цель исследований. Совершенствование методов диагностики туберкулёза крупного рогатого скота в индивидуальных и общественных хозяйствах. Предложить специальный, дополнительный комплекс методов диагностики туберкулёза в индивидуальных хозяйствах РФ.

13. Основные задачи исследований:

1.3.1. Изучить распространённость микобактериозов крупного рогатого скота в общественных и индивидуальных хозяйствах Стародубского района Брянской области.

1.3.2. Определить видовой состав микобактерий, выделенных от убитых с диагностической целью животных и объектов внешней среды.

1.3.3. Провести сравнительное изучение диагностической ценности симультанной туберкулиновой пробы с ППД - туберкулином для млекопитающих и КАМ и симультанной туберкулиновой пробы с ППД -туберкулином для млекопитающих и ППД - туберкулином для птиц.

1.3.4. Изучить возможность применения ускоренной симультанной туберкулиновой пробы с ППД- туберкулином для млекопитающих и КАМ, в целях дифференциации аллергических реакций на туберкулин.

1.3.5. Изучить возможность применения индивидуального учёта проявления аллергических реакций при симультанном методе введения туберкулинов.

1.3.6. Изучить диагностическую ценность одновременного применения внутрикожной и пальпебральной туберкулиновых проб с целью дифференциации аллергических реакций на туберкулин.

1.3.7. Оценить эффективность внутривенной туберкулиновой пробы при дифференциации аллергических реакций на туберкулин.

1.3.8. Разработать дополнительный комплекс методов диагностики туберкулёза крупного рогатого скота в индивидуальных хозяйствах РФ.

1.4. Научная новизна. Представлен анализ проявления микобактериозов в общественных и индивидуальных хозяйствах Стародубского района Брянской области.

Установлена диагностическая ценность симультанной туберкулиновой пробы с ППД - туберкулином для млекопитающих и КАМ и симультанной туберкулиновой пробы с ППД -туберкулином для млекопитающих и ППД -туберкулином для птиц.

Впервые показана необходимость применения симультанной туберкулиновой пробы, с индивидуальным учётом реакций на разные аллергены, для дифференциации специфических и неспецифических реакций на туберкулин в индивидуальных хозяйствах.

Впервые показана возможность применения ускоренной симультанной туберкулиновой пробы с ППД - туберкулином для млекопитающих и КАМ с индивидуальным учётом аллергических реакций на разные аллергены.

Определена диагностическая ценность комплексного применения внутрикожной и пальпебральной туберкулиновых проб для дифференциации специфических и неспецифических реакций на туберкулин.

Впервые представлен специальный, дополнительный комплекс методов для диагностики туберкулёза в индивидуальных хозяйствах РФ.

1.5. Практическая ценность.

Результаты исследований по применению симультанной туберкулиновой пробы с ППД - туберкулином для млекопитающих и ППД -туберкулином для птиц с индивидуальным учётом реакций, комплексное применение внутрикожной и пальпебральной туберкулиновых проб включены в «Наставление по диагностике туберкулёза животных», утверждённых Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства РФ 18.11.2002г.

Предлагается дополнительный, специальный комплекс методов диагностики туберкулёза крупного рогатого скота в индивидуальных хозяйствах, где предусмотрено: применение симультанной туберкулиновой пробы и ускоренной симультанной туберкулиновой пробы, с индивидуальным учётом реакций на разные аллегены; комплексное применение внутрикожной и пальпебральной туберкулиновых проб; применение внутривенной туберкулиновой пробы.

Материалы диссертационной работы по применению дополнительного, специального комплекса методов диагностики туберкулёза для индивидуальных хозяйств оформлены в виде дополнений и изменений к «Наставлению по диагностике туберкулёза животных» от 18.11.2002 г.

1.6. Основные положения выносимые на защиту.

1.6.1. Материалы по сравнительному изучению диагностической ценности симультанной туберкулиновой пробы с ППД - туберкулином для млекопитающих и КАМ и симультанной туберкулиновой пробы с ППД -туберкулином для млекопитающих и ППД - туберкулином для птиц при диагностике туберкулёза крупного рогатого скота в индивидуальных хозяйствах.

1.6.2. Результаты исследований по применению ускоренной симультанной туберкулиновой пробы с ППД - туберкулином для млекопитающих и КАМ для дифференциации аллергических реакций на туберкулин.

1.6.3. Результаты исследований по применению симультанной туберкулиновой пробы на крупном рогатом скоте общественных и индивидуальных хозяйств, с индивидуальным учётом проявления аллергических реакций.

1.6.4. Результаты применения внутрикожной и пальпебральной туберкулиновых проб для дифференциации аллергических реакций на туберкулин.

1.6.5. Применение специального, дополнительного комплекса методов диагностики туберкулёза крупного рогатого скота в индивидуальных хозяйствах РФ.

1.7. Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на:

• Международной научно-практической конференции «Современные проблемы диагностики и профилактики туберкулёза животных», Москва, 2003 г.;

• Межлабораторном совещании сотрудников ВИЭВ, Москва, 2005 г.

1.8. Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 3 научные работы.

1.9. Объём и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 170 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений и списка использованной литературы.

Список использованной литературы включает 254 наименования, из них 90 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 24 таблицами.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследований. Работа выполнена в 2001-2004 гг. в лаборатории микобактериозов ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко (ВИЭВ), в индивидуальных хозяйствах Стародубского района Брянской области и в благополучных по туберкулёзу общественных хозяйствах Брянской и Пензенской областей.

Исследования на туберкулёз проводили в соответствии с Санитарными и Ветеринарными правилами «Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных» от 31.05.96 г., «Наставлением по диагностике туберкулёза животных» от 25.02.86 г..

В работе использовали ППД - туберкулины для млекопитающих, ППД - туберкулины для птиц и КАМ (комплексный аллерген из атипичных микобактерий) производства Курской биофабрики. Для внутрикожного введения туберкулинов использовали безыгольные иньекторы БИ-7.

Основными методами исследования крупного рогатого скота являлась внутрикожная туберкулиновая проба и симультанная туберкулиновая проба с ППД -туберкулином для млекопитающих и КАМ или ППД - туберкулином для птиц. В качестве дополнительных методов исследования применяли пальпебральное и внутривенное методы введения туберкулина и полимеразную цепную реакцию (ПЦР).

Сравнительное изучение диагностической ценности симультанной туберкулиновой пробы с ППД - туберкулином для млекопитающих и ППД -туберкулином для птиц с симультанной туберкулиновой пробой с ППД -туберкулином для млекопитающих и КАМ, провели в трёх благополучных по

туберкулёзу хозяйствах, где установлена сенсибилизация крупного рогатого скота атипичными микобактериями, на 5393 головах крупного рогатого скота.

Усовершенствованную, ускоренную симультанную туберкулиновую пробу с ППД - туберкулином для млекопитающих и КАМ испытывали в 14 благополучных по туберкулёзу хозяйствах, где установлена сенсибилизация животных атипичными микобактериями, на 8637 головах крупного рогатого скота. Динамику проявления аллергических реакций при применении симультанной туберкулиновой пробы изучали в 8 благополучных по туберкулёзу хозяйствах, где установлена сенсибилизация животных атипичными микобактериями, на 3739 головах крупного рогатого скота.

Изучение возможности применения пальпебральной туберкулиновой пробы для дифференциации специфических и неспецифических реакций на туберкулин провели в пяти благополучных по туберкулёзу хозяйствах, где установлена сенсибилизация животных атипичными микобактериями, на 2035 головах крупного рогатого скота.

Изучение возможности применения внутривенной туберкулиновой пробы для дифференциации специфических и неспецифических реакций на туберкулин провели в 4 благополучных по туберкулёзу хозяйствах, где установлена сенсибилизация животных атипичными микобактериями, на 68 реагировавших на симультанную туберкулиновую пробу животных.

Изучение диагностической ценности ПНР при диагностике туберкулёза крупного рогатого скота в индивидуальных хозяйствах частного сектора, провели в 6 населённых пунктах Стародубского района Брянской области. Внутрикожной туберкулиновой пробой исследовали 1316 голов крупного рогатого скота. ПЦР методом исследовали 12 проб крови реагировавших на туберкулин коров.

Аллергические исследования и убой реагирующих животных проводили комиссионно, с участием представителей районной станции по борьбе с болезнями животных и ветеринарных врачей хозяйств.

От убитых животных брали лимфатические узлы, кусочки паренхиматозных органов и кровь для дальнейшего лабораторного (бактериологического, биологического и молекулярно-генетического) исследования на туберкулёз.

Полученные в процессе работы цифровые показатели обрабатывали общепринятыми методами вариационной статистики. Достоверность различий между средними арифметическими определяли с помощью критерия Стьюдента (Шмидт В.М., 1984).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Распространенность микобактериозов крупного рогатого скота в общественных и индивидуальных хозяйствах Стародубского района Брянской области.

Стародубский район благополучен по туберкулёзу крупного рогатого скота общественного пользования. В индивидуальных хозяйствах ежегодно

выявляются реагирующие на туберкулин животные и единичные случаи заболевания туберкулёзом крупного рогатого скота.

В населённых пунктах, где было установлено заболевание туберкулёзом людей, наиболее часто выявляются реагирующие на туберкулин животные и в единичных случаях подтверждается наличие туберкулёза крупного рогатого скота в индивидуальных хозяйствах.

Исследования крупного рогатого скота индивидуальных хозяйств Стародубского района мы проводили в 6 населённых пунктах, где по данным СЭС было установлено наибольшее количество заболевших туберкулёзом людей. При исследовании 1316 голов крупного рогатого скота, выявлено 12 (0,9%) реагирующих на туберкулин коров. Причём, все 12 реагирующих на туберкулин коров были выявлены в 10 индивидуальных хозяйствах, 10 семей где имелись больные туберкулёзом люди.

Все 12 коров были убиты с последующим патологоанатомическим осмотром и лабораторными исследованиями на туберкулёз. Характерные для туберкулёза изменения обнаружены у одной коровы в средостенном лимфатическом узле и лёгких. При лабораторном исследовании положительный результат культуральных исследований и биологической пробы получен при исследовании патматериала от этой коровы. В остальных 11 случаях возбудителя туберкулёза не выделили. Из 6 проб патматериала от убитых коров выделили атипичные микобактерии III и IV группы по классификации Раньона.

Проведённые исследования показывают, что основной причиной возникновения аллергических реакций на туберкулин является сенсибилизация животных атипичными микобактериями, а также возможное заражение туберкулёзом бычьего вида от больных туберкулёзом людей (вследствии близкого, тесного и постоянного контакта больных туберкулёзом людей и животных).

В дальнейшем, мы провели исследования по выделению и изучению видового состава микобактерии, выделенных из объектов внешней среды. Пробы объектов внешней среды брали в каждом индивидуальном хозяйстве, где были выявлены реагирующие на туберкулин животные: из кормушек, пола, навоза, почвы дворов (поверхность и глубина 0-10 см.).

При исследовании 60 проб объектов внешней среды атипичные микобактерии были выделены в 16 (26,6%) случаях, из них 4 культуры (25,0%) III группы по классификации Раньона, 12 культур (75,0%) IV группы по классификации Раньона. Культуры М. bovis и М. tuberculosis не выделили.

Проведённые исследования показывают, что в благополучных по туберкулёзу населённых пунктах, где при плановых аллергических исследованиях на туберкулёз постоянно выделяются реагирующие на туберкулин животные, при бактериологическом исследовании объектов внешней среды выявляются в 26,6 % случаях атипичные микобактерии III и IV группы по классификации Раньона. Учитывая полученные результаты

исследований следует считать, что основной причиной проявления неспецифических реакций на туберкулин в индивидуальных хозяйствах Стародубского района. Брянской области, является сенсибилизация животных атипичными микобактериями III и IV группы по классификации Раньона.

Изучение возможности применения симультанной туберкулиновой пробы с индивидуальным учётом аллергических реакций в индивидуальных хозяйствах.

Исследования провели в трёх благополучных по туберкулёзу людей и животных сёлах Стародубского района Брянской области (с. Бучки, с. Шняки, с. Горный). В указанных сёлах при исследовании крупного рогатого скота на туберкулёз, ранее регулярно выявляли реагирующих на туберкулин животных, которых впоследствии сдавали на убой.

В с. Бучки исследовали симультанной туберкулиновой пробой 320 коров индивидуальных хозяйств и выявили 26 (8,1 %) реагирующих животных.

При групповом учёте симультанной туберкулиновой пробы выявили реагирующих с большей интенсивностью реакции на ППД - туберкулин для млекопитающих т.е. со знаком (+) - 1 корову, с меньшей реакцией т.е. со знаком (-) - 17 коров, с равной реакцией т.е. со знаком (=) - 1 корову, с реакциями не подлежащими учёту при групповом учёте т.е. со знаком (?) - 7 коров.

При индивидуальном учёте реакций, со знаком (+) реагировала только одна корова, со знаком (-) - 22 коровы, с равной реакцией или со знаком (=) - 3 коровы. При диагностическом убое коровы реагирующей на ППД - туберкулин для млекопитающих на 9 мм, на КАМ - 4 мм, характерных для туберкулёза изменений не обнаружили. При лабораторном исследовании патматериала от убитой коровы, возбудителя туберкулёза не выделили.

Полученные результаты исследований показывают, что при индивидуальном учёте реакций, реагировала положительно только одна корова, отрицательно - 22 коровы, сомнительно - 3 коровы. То есть, в результате применения симультанной туберкулиновой пробы и индивидуальном учёте реакций, диагностическому убою подлежит только одна корова, 3 коровы подлежат переисследованию другими методами диагностики, а 22 (84,6 %) реагирующих коров - следует считать здоровыми.

В с. Шняки провели исследование 210 голов крупного рогатого скота. При учёте реакции выявили 48 (22,8 %) реагирующих животных.

При групповом учёте симультанной туберкулиновой пробы выявили реагирующих животных со знаком (+) - 8 коров, со знаком (-) - 8 коров, со знаком ( = )— 13 коров, с реакциями не подлежащими учёту при групповом учёте т.е. со знаком (?) -19 коров.

При индивидуальном учёте аллергических реакций реагировало со знаком (+) - 8 коров, со знаком (-) - 24 коров, со знаком (=) - 16 коров.

По результатам исследований в с. Шняки провели диагностический убой 7 реагирующих коров. При патологоанатомическом осмотре убитых коров, характерных для туберкулёза изменений не обнаружили ни в одном случае. При лабораторном исследовании патматериала от убитых коров, возбудителя туберкулёза не выделили.

Полученные результаты исследований показывают, что при групповом учёте реакций 19 (39,6 %) коров как бы выпадают из числа реагирующих животных и в дальнейшем неизвестно, что делать с этими животными. Тем более, что в индивидуальных хозяйствах необходимо решать дальнейшую судьбу каждой коровы в отдельности. Результаты исследований убеждают, что в индивидуальных хозяйствах необходимо применять индивидуальный учёт реакций симультанной туберкулиновой пробы.

В с. Горный, провели исследование 275 голов крупного рогатого скота. При учёте реакции выявили 16 (5,8 %) реагирующих животных.

При групповом учёте выявили реагирующих животных со знаком (+) - 4 коровы, со знаком (-) - 5 коров, со знаком (=) - реагирующих коров не выявили, с реакциями не подлежащими учёту при групповом учёте т.е. со знаком (?) - 7 коров.

При индивидуальном учёте реагировало со знаком (+) - 3 коровы, со знаком (-) - 12 коров, со знаком (=) - 1 корова.

По результатам исследований в с. Горный провели диагностический убой четырёх реагирующих коров. При патологоанатомическом осмотре убитых коров характерных для туберкулёза изменений не обнаружили. При лабораторном исследовании патматериала от убитых коров, возбудителя туберкулёза не выделили.

Всего в трёх сёлах, при исследовании 605 голов крупного рогатого скота было выявлено 80 (13,2 %) реагирующих коров. При индивидуальном учёте результатов симультанной пробы по предлагаемой нами методике учёта реакций, выявили 13 (2,1 %) положительно реагирующих, 51 (8,4 %) отрицательно реагирующих и 26 (4,3 %) сомнительно реагирующих коров, т.е. в конечном итоге положительные показания по симультанной туберкулиновой пробе были получены только у 13 (2,1 %) исследованных животных.

На основании полученных результатов исследований считаем что, при исследовании симультанной туберкулиновой пробой крупного рогатого скота в индивидуальных хозяйствах частного сектора, нет никакой необходимости определять достоверность проявления реакций по группе животных. Главная же цель исследований, как и на какой аллерген реагирует каждая корова в отдельности. Необходимо учитывать все реакции, по каждой реагирующей корове с критериями оценки аллергических реакций; + (положительно), - (отрицательно), = (сомнительно).

В связи с тем, что Россия готовится к вступлению во Всемирную торговую организацию (ВТО), предлагаемая методика учёта реакций

симультанной туберкулиновой пробы с индивидуальным учётом реакций вполне вписывается в рамки требований унифицированных методов диагностики туберкулёза в странах Европейского союза, так как в этих странах применяется только индивидуальный учёт результатов симультанной туберкулиновой пробы с примерно такими же критериями оценки аллергических реакций.

Сравнительное изучение симультанной туберкулиновой пробы с применением ППД-туберкулина для млекопитающих и ППД-туберкулина для птиц, с симультанной пробой с применением ППД-туберкулина для млекопитающих и КАМ.

Исследования провели в трёх благополучных по туберкулёзу хозяйствах, где была установлена сенсибилизация животных атипичными микобактериями. При этом, всё поголовье крупного рогатого скота трёх хозяйств, исследовали симультанной туберкулиновой пробой с использованием ППД - туберкулина для млекопитающих и ППД -туберкулина для птиц. Через 2-3 месяца, это же поголовье скота, исследовали симультанной туберкулиновой пробой с ППД - туберкулином для млекопитающих и КАМ.

В СПК «Прогресс» поголовье крупного рогатого скота было исследовано дважды симультанной туберкулиновой пробой с применением ППД - туберкулина для млекопитающих и ППД - туберкулина для птиц (в разных дозах). При первом исследовании ППД - туберкулин для млекопитающих использовали в дозе 10000 ME в 0,2 мл, а ППД - туберкулин для птиц в дозе 5000 ME в 0,2 мл. Всего исследовано 1448 голов крупного рогатого скота, выявлена 71 (4,9 %) реагирующая корова, из них со знаком «+» - 45, со знаком «-» - 11, со знаком «=» - 15. Реакции выражены в большей степени на ППД - туберкулин для млекопитающих, т. е. учитывая что хозяйство благополучное, симультанная проба даёт ошибочный результат.

Повторно, исследования проводили симультанной туберкулиновой пробой с использованием ППД - туберкулина для млекопитающих, в дозе 10000 ME в 0,2 мл и ППД - туберкулина для птиц, в дозе 2500 ME в 0,2 мл. Всего исследовали 1373 голов крупного рогатого скота, выявлено реагирующих — 24 (1,7 %) коров, из них со знаком «+» - 13, со знаком «-» - 10, со знаком «=» - 1 корова. Результат симультанной туберкулиновой пробы неопределённый.

В ГПЗ «Еланский» поголовье крупного рогатого скота также исследовали, дважды, симультанной туберкулиновой пробой с использованием ППД - туберкулина для млекопитающих и ППД - туберкулина для птиц. При первом исследовании ППД - туберкулин для млекопитающих применяли в дозе 10000 ME в 0,2 мл, а ППД - туберкулин для птиц, в дозе 5000 ME в 0,2 мл. Всего исследовано 941 голова крупного рогатого скота, выявлено 37 (3,9 %) реагирующих коров, из них со знаком «+» - 15, со знаком «-» - 13, со знаком - 9 коров. Результат симультанной туберкулиновой пробы

неопределённый.

Повторно, исследования проводили симультанной туберкулиновой пробой с ППД - туберкулином для млекопитающих, в дозе 10000 МЕ в 0,2 мл и ППД - туберкулина для птиц, в дозе 2500 МЕ в 0,2 мл. Всего исследовано 863 головы крупного рогатого скота, выявлено реагирующих - 23 (2,6 %) животных, из них со знаком «+» -12, со знаком «-» - 6, со знаком «=» - 5 коров. Результат симультанной туберкулиновой пробы неопределённый.

В АО «Родина» исследования 768 голов крупного рогатого скота провели с использованием симультанной туберкулиновой пробы с ППД -туберкулином для млекопитающих в дозе 10000 МЕ в 0,2 мл и ППД -туберкулина для птиц, в дозе 5000 МЕ в 0,2 мл. При учёте реакций выявлено 97 (12,6 %) реагирующих коров, из них со знаком «+» - 35, со знаком «-» - 32, со знаком «=» - 30 коров. Результат симультанной пробы неопределённый.

Резюмируя полученные результаты можно сделать заключение, что при исследовании симультанной туберкулиновой пробой с применением ППД -туберкулина для млекопитающих и ППД - туберкулина для птиц (в разных дозах), ни в одном случае не получен достоверный результат исследований. В одном случае, симультанная проба дала достоверно выраженные реакции по стаду на ППД - туберкулин для млекопитающих, т.е. ошибочный результат.

Результаты исследований по применению симультанной туберкулиновой пробы с ППД - туберкулином для млекопитающих и КАМ показали следующее. В СПК «Прогресс» было исследовано 1327 голов крупного рогатого скота, выявлено реагирующих 92 (6,9 %) животных, из них со знаком «+» - 33, со знаком «-» - 32, со знаком «=» - 27 коров. Результат симультанной туберкулиновой пробы неопределённый.

В ГПЗ «Еланский» было исследовано 890 голов крупного рогатого скота, при учёте реакции выявлено 74 (8,3 %) реагирующих животных, из них со знаком «+» - 6, со знаком «-» - 56, со знаком «=» -12 коров. Аллергические реакции достоверно выражены на КАМ. По результатам симультанной туберкулиновой пробы хозяйство следует считать благополучным по туберкулёзу.

В АО «Родина» исследовано 540 голов крупного рогатого скота, при учёте результатов симультанной пробы выявлено 42 (7,7 %) реагирующих на туберкулин животных, из них со знаком «+» - 13, со знаком «-»- 21, со знаком «=» - 8. Результат симультанной туберкулиновой пробы неопределённый.

Резюмируя результаты исследований можно сделать вывод, что симультанная туберкулиновая проба с использованием ППД - туберкулина для млекопитающих и КАМ обладает большей диагностической ценностью и дифференцирующими свойствами в благополучных по туберкулёзу хозяйствах, где установлена сенсибилизация животных атипичными микобактериями.

Изучение возможности применения ускоренной симультанной туберкулиновой пробы с ППД-туберкулином для млекопитающих и КАМ.

Актуальной проблемой диагностики туберкулёза крупного рогатого скота является проблема дифференциации специфических и

неспецифических реакций на туберкулин. Из всех известных методов дифференциации специфических и неспецифических реакций, наибольшее признание и распространенна во всём мире получил метод симультанной туберкулиновой пробы. Однако, и эта проба имеет свои определённые недостатки.

Учитывая, что при диагностике туберкулёза нет ни одного идеального метода диагностики, необходимо совершенствовать известные методы и на их основе, подбором разных методов диагностики, предложить комплекс методов диагностики туберкулёза в благополучных и неблагополучных по туберкулёзу общественных хозяйствах, а также специальный комплекс методов диагностики в индивидуальных хозяйствах.

Предлагаемая нами методика применения ускоренной симультанной туберкулиновой пробы исходит из запросов практических специалистов и заключается в следующем. Первоначально исследуют всех животных внутрикожной туберкулиновой пробой (на одной стороне средней трети шеи). После учёта реакции, т.е. через 72 часа после введения туберкулина, всем реагирующим на туберкулин животным на другой стороне шеи, вводят внутрикожно ППД - туберкулин для млекопитающих и КАМ, на расстоянии друг от друга 10-15 см.

Ускоренную методику применения симультанной туберкулиновой пробы мы сравнивали с симультанной туберкулиновой пробой, применяемой по общепринятой, утверждённой методике. Исследования провели в 14 благополучных по туберкулёзу хозяйствах, где выявляли реагирующих на туберкулин животных и была установлена сенсибилизация животных атипичными микобактериями. Исследования в этих хозяйствах проводили, вначале обычной симультанной пробой, затем через 35-60 дней, в этих хозяйствах, это же поголовье крупного рогатого скота исследовали симультанной туберкулиновой пробой по новой методике.

Всего, в 14 благополучных по туберкулёзу хозяйствах было исследовано обычной симультанной туберкулиновой пробой с применением ППД - туберкулина для млекопитающих и КАМ 8581 голова крупного рогатого скота. Из 14 исследованных хозяйств в 4 (28,5 %) случаях были получены достоверно более выраженные реакции на КАМ, в одном случае результаты симультанной туберкулиновой пробы указывали на наличие в хозяйстве туберкулёза (т.е. получен ошибочный результат), а в остальных 9 хозяйствах были получены неопределённые результаты симультанной туберкулиновой пробы.

При применении ускоренной симультанной туберкулиновой пробы в этих хозяйствах и на этом поголовье крупного рогатого скота, из 14 исследованных хозяйств в 6 (42,8 %) случаях были получены достоверно более выраженные реакции на КАМ, а в 8 остальных случаях были получены неопределённые результаты симультанной туберкулиновой пробы.

Таким образом, проведённые нами исследования показывают, что ускоренная симультанная туберкулиновая проба более эффективна. Кроме того, ускоряется и облегчается проведение симультанной туберкулиновой пробы, так как переисследуются только реагирующие на внутрикожное введение туберкулина животные, сокращается время проведения исследований и расход рабочей силы.

Считаем, что в целях совершенствования симультанной туберкулиновой пробы, возможно её применение через 72 часа после внутрикожной туберкулиновой пробы, так как многочисленные литературные данные, а также ранее проведённые в лаборатории микобактериозов ВИЭВ исследования показывают, что частым внутрикожным введением туберкулина невозможно вызвать сенсибилизацию у здоровых животных, т. е. туберкулины не обладают сенсибилизирующими свойствами. Тем более, что по предлагаемой методике применения ускоренной симультанной пробы, повторно аллергены вводятся на другой стороне шеи реагирующего на туберкулин животного.

Учитывая указанное, и в связи с тем, что при ускоренной симультанной туберкулиновой пробе, её применяют в момент учёта внутрикожной туберкулиновой пробы (то есть не надо ждать 30 дней), этот метод должен найти применение при диагностике туберкулёза крупного рогатого скота в индивидуальных хозяйствах.

Динамика проявления аллергических реакций на симультанную туберкулиновую пробу.

Оптимальное время проявления и учёта аллергических реакций на симультанную туберкулиновую пробу достаточно изучено и не вызывает противоречий у большинства авторов. Однако, в доступной литературе мы не обнаружили данных об оптимальном времени учёта ускоренной симультанной туберкулиновой пробы. Поэтому, следующей задачей наших исследований было уточнение оптимального времени учёта ускоренной симультанной туберкулиновой пробы.

В целях уточнения' оптимального времени учёта аллергических реакций при ускоренной симультанной пробе с ППД - туберкулином для млекопитающих и КАМ мы провели изучение динамики проявления аллергических реакций у реагирующих на туберкулин животных в 8-ми благополучных по туберкулёзу хозяйствах, где установлена сенсибилизация животных атипичными микобактериями.

На начальном этапе, мы провели изучение динамики проявления аллергических реакций при применении традиционной симультанной туберкулиновой пробы с ППД - туберкулином для млекопитающих и КАМ. Исследования проводили в двух благополучных по туберкулёзу хозяйствах, где установлена сенсибилизация животных атипичными микобактериями, на 2154 головах крупного рогатого скота.

При учёте реакций установили, что наибольшее количество реагирующих на туберкулин и КАМ животных выявляется через 24 часа после введения аллергенов, затем идёт некоторое снижение количества реагирующих животных. Однако, через 72 ч. реакции сохраняются у большинства реагирующих животных. Через 120 ч. реакции у большинства реагирующих животных исчезают, то есть количество реагирующих животных резко уменьшается.

Изучение динамики проявления аллергических реакций на ускоренную симультанную туберкулиновую пробу и оптимального времени их учёта провели в шести благополучных по туберкулёзу хозяйствах, где была установлена сенсибилизация животных атипичными микобактериями, на 1585 головах крупного рогатого скота.

В колхозе «Большевик» при исследовании 190 голов крупного рогатого скота на повторное введение ППД-туберкулина для млекопитающих реагировало: через 24 ч.'- 14 (7,4%), 48ч. - 11 (5,8%), 72 ч.- 7 (3,7%); на КАМ реагировало: через 24 ч. - 15 (7,9%), 48 ч. - 14 (7,4%), 72 ч. - И (5,8%) исследованных животных.

В колхозе «Волна революции» при исследовании 177 голов крупного рогатого скота на повторное введение ППД-туберкулина для млекопитающих реагировало: через 24 ч. - 10 (5,7%), 48 ч. - 8 (4,5%), 72 ч. - 4 (2,3%); на КАМ реагировало: через 24 ч. - 10 (5,7%), 48 ч. - 9 (5,1%), 72 ч. - 7 (4%) исследованных животных.

В совхозе «Бёрновичский» при исследовании 212 голов крупного рогатого скота на повторное введение ППД-туберкулина для млекопитающих реагировало: через 24 ч. - 12 (5,7%), 48 ч. - 10 (4,7%), 72 ч. - 6 (2,8%); на КАМ реагировало: через 24 ч. - 14 (6,6%), 48 ч. - 11 (5,2%), 72 ч. - 8 (3,8%) исследованных животных.

В колхозе им. Ленина при исследовании 299 голов крупного рогатого скота на повторное введение ППД-туберкулина для млекопитающих реагировало: через 24 ч. - 15 (5%), 48 ч. - 12 (4%), 72 ч. - 7 (2,3%); на КАМ' реагировало: через 24 ч. - 16 (5,4%), 48 ч. - 13 (4,4 %), 72 ч. - 10 (3,3%) исследованных животных.

В колхозе «Красный Октябрь» при исследовании 434 голов крупного рогатого скота на повторное введение ППД-туберкулина для млекопитающих реагировало: через 24 ч. - 17 (3,9%), 48 ч. - 15 (3,5%), 72 ч. - 10 (2,3%); на КАМ реагировало: через 24 ч. - 14 (3,2%), 48 ч. - 11 (2,5%), 72 ч. - 10 (2,3%) исследованных животных.

В колхозе им. XXI партсъезда при исследовании 273 голов крупного рогатого скота на повторное введение ППД-туберкулина для млекопитающих реагировало: через 24 ч. - 16 (5,9%), 48 ч. - 10 (3,7%), 72 ч. - 9 (3,3%); на КАМ реагировало: через 24 ч. - 15 (5,5%), 48 ч. - 11 (4%), 72 ч. - 9 (3,3%) исследованных животных.

Итого, в шести хозяйствах на внутрикожное введение ППД -туберкулина для млекопитающих реагировало: через 24 ч. - 84 (5,3 %), через

48 ч. - 66 (4,1 %), через 72 ч. - 43 (2,7 %) исследованных животных. На КАМ реагировало: через 24 ч. - 84 (5,3 %), через 48 ч. - 69 (4,3 %), через 72 ч. - 55 (3,4 %) исследованных животных. Представленные результаты исследований показывают, что в благополучных по туберкулёзу хозяйствах наибольшее количество реагирующих на ППД - туберкулин и КАМ выявляются при учёте реакции через 24 часа после внутрикожного введения туберкулинов.

Однако, в связи с тем, что при учёте результатов внутрикожной пробы, через 24 часа после введения аллергенов, могут реагировать (давать увеличение толщины кожной складки на 3-5 мм) здоровые животные. Мы считаем, что учёт результатов ускоренной симультанной туберкулиновой пробы следует проводить через 72 часа после введения аллергенов. Кроме того известно, что симультанная туберкулиновая проба обладает относительно небольшой дифференцирующей способностью, а главное её достоинство в том, что даёт возможность из большого количества реагирующих животных отобрать для диагностического убоя нескольких, наиболее вероятных в инфицировании туберкулёзом животных.

Тем более, что в соответствии «Наставления по диагностике туберкулёза» диагноз на туберкулёз ставится при подтверждении туберкулёза хотя бы у одного животного. Поэтому, в практических условиях, количество реагирующих животных не имеет никакого значения, наоборот, чем меньше реагирующих животных, тем легче отобрать одного, двух - наиболее характерно реагировавших животных для диагностического убоя.

Изучение возможности дифференциации парааллергических реакций одновременным применением внутрнкожной и пальпебральной пробы.

Пальпебральная туберкулиновая проба не нашла себе достойного применения при диагностике туберкулёза крупного рогатого скота. Поэтому, следующей задачей наших исследований было - изучить возможность применения пальпебральной туберкулиновой пробы для дифференциации аллергических реакций у крупного рогатого скота в индивидуальных хозяйствах.

Изучение пальпебральной туберкулиновой пробы мы провели на 2035 головах крупного рогатого скота, в 5 благополучных хозяйствах, где установлена сенсибилизация животных атипичными микобактериями. Сравнительное изучение диагностической ценности пальпебральной и внутрикожной туберкулиновых проб провели двумя способами.

При первом способе исследуемым животным одновременно вводили ППД туберкулин для млекопитающих внутрикожно, в область средней трети шеи и пальпебрально, в нижнее веко (в той же дозе), отступя от края нижнего века вниз на 2-3 см. Учёт аллергических реакций проводили через 72 часа после введения аллергенов.

При втором способе, вначале исследовали животных внутрикожной туберкулиновой пробой. Проводили учёт внутрикожной туберкулиновой пробы через 72 часа после введения туберкулина. После учёта результатов внутрикожной туберкулиновой пробы, всем реагирующим животным ППД -

туберкулин для млекопитающих вводили внутрикожно на другой стороне средней трети шеи и пальпебрально в нижнее веко.

Исследования первым способом провели в 3-х хозяйствах, на 769 головах крупного рогатого скота.

В ГПЗ «Еланский» при исследовании 210 голов крупного рогатого скота, на внутрикожную пробу реагировало 14 (6,6 %) животных, на пальпебральную пробу реагировало 4 (1,9 %) животных.

В АО «Родина» при исследовании 350 голов крупного рогатого скота на внутрикожное введение туберкулина реагировало 21 (6,0 %) животных, на пальпебральную пробу - реагирующих животных не выявлено.

В совхозе «Тарту», при исследовании 209 голов крупного рогатого скота на внутрикожное введение туберкулина реагировало 14 (6,7 %) животных, на пальпебральную пробу выявлена 1 (0,5 %) реагирующая корова.

В итоге, при исследовании 769 голов крупного рогатого скота на внутрикожную пробу реагировало 49 (6,3 %) животных, на пальпебральную пробу реагировало 5 (0,6 %) животных.

Исследования вторым способом применения пальпебральной и внутрикожной туберкулиновых проб мы провели на 1266 головах крупного рогатого скота, в двух благополучных по туберкулёзу хозяйствах.

В СПК «Нечаевский» при исследовании 910 голов крупного рогатого скота, на первое внутрикожное введение туберкулина реагировало 14 (1,5 %) животных, на второе внутрикожное введение туберкулина реагировало 8 (0,9 %) животных, а на пальпебральную пробу - реагирующих животных не выявили.

В СПК «Степановский», при исследовании 356 голов крупного рогатого скота, на первое внутрикожное введение туберкулина реагировало 25 (7,0 %) животных, на второе внутрикожное введение туберкулина реагировало 12 (3,4 %) животных, на пальпебральную пробу - реагирующих животных не выявили.

Полученные результаты исследований показывают, что в благополучных по туберкулёзу стадах, сенсибилизированные атипичными микобактериями животные реагируют на внутрикожное введение ППД -туберкулина для млекопитающих, но не реагируют (или реагируют единицы) на пальпебральное введение туберкулина.

Результаты исследований убеждают, что в благополучных по туберкулёзу хозяйствах, для дифференциации неспецифических реакций можно использовать одновременное применение внутрикожной и пальпебральной туберкулиновых проб. Тем более, что при одновременном применении этих проб проводится индивидуальный учёт аллергических реакций, что несомненно приемлемо для диагностики туберкулёза в индивидуальных хозяйствах.

Метод одновременного применения внутрикожной и пальпебральной туберкулиновых проб для исследования крупного рогатого скота в индивидуальных хозяйствах, мы предлагаем как дополнительный метод, в

случаях, когда при применении симультанной пробы получают неопределённые результаты исследований.

Предлагаемый способ комплексного применения двух методов введения туберкулина более эффективен, так как повышает специфичность туберкулиновой пробы, прост в исполнении и экономичен, так как позволяет использовать один ППД - туберкулин для млекопитающих. Кроме того, в связи с тем что, при применении этого метода в целях дифференциации неспецифических реакций на туберкулин реагирующими считаются только животные с положительными показаниями на обе пробы (проводится индивидуальный учёт реакций по каждому животному), этот метод диагностики должен найти достойное место при диагностике туберкулёза крупного рогатого скота в индивидуальных хозяйствах РФ.

Изучение возможности применения внутривенной туберкулиновой пробы для дифференциации аллергических реакций на туберкулин.

Внутривенная туберкулиновая проба не нашла широкого применения в ветеринарной практике, так как небольшая чувствительность, относительная трудоёмкость и длительность её проведения не позволяют использовать эту пробу на большом количестве животных.

Учитывая ограниченные возможности применения внутривенной туберкулиновой пробы при исследовании на туберкулёз общественного поголовья крупного рогатого скота, мы считаем возможным применять этот метод для переисследования реагирующих животных в индивидуальных хозяйствах.

На следующем этапе наших исследований мы поставили задачу провести сравнительное изучение дифференцирующего значения симультанной пробы и внутривенной пробы, изучить возможность применения внутривенной пробы при диагностике туберкулёза крупного рогатого скота в индивидуальных хозяйствах.

Изучение возможности применения внутривенной пробы для дифференциации неспецифических реакций на туберкулин провели в четырёх благополучных по туберкулёзу хозяйствах, где была установлена сенсибилицация животных атипичными микобактериями.

Исследования в 4-х хозяйствах вначале провели внутрикожной туберкулиновой пробой, через 30-60 дней реагирующих животных переисследовали симультанной туберкулиновой пробой с ППД -туберкулином для млекопитающих и КАМ, после учёта аллергических реакций на симультанную туберкулиновую пробу всех ранее реагирующих животных исследовали внутривенной туберкулиновой пробой.

В СПК «Прогресс» было выявлено 19 реагирующих животных на симультанную пробу, из них со знаком (+) - 3 коровы, со знаком (-) - 11 коров, со знаком (=) - 5 коров. В соответствии таблицы определения достоверности различий на туберкулин и КАМ - результат симультанной пробы неопределённый.

При исследовании 19 животных внутривенной туберкулиновой пробой, реагирующих животных не выявили, хотя, у трёх коров (инв №7186, №0266 и №1949) температура тела поднялась выше верхних границ нормальной температуры тела, т. е. выше 39,5 °С.

В ГПЗ «Еланский» было выявлено 15 реагирующих на симультанную пробу животных, из них со знаком (+) - 5, со знаком (-) - 5, со знаком (=) - 5 реагирующих животных. Результат симультанной туберкулиновой пробы неопределённый.

При исследовании 15, реагировавших на симультанную пробу животных внутривенной туберкулиновой пробой - реагирующих животных не выявили. При диагностическом убое двух реагировавших на симультанную пробу с большей интенсивностью реакций на ППД - туберкулин для млекопитающих коров, характерных для туберкулёза изменений не обнаружили ни в одном случае. При лабораторном исследовании патматериала от убитых животных, возбудителя туберкулёза не выделили.

В АО «Родина» было выявлено 22 реагировавших на симультанную пробу животных, из них со знаком (+) - 6, со знаком (-) - 13, со знаком (=) - 3 реагирующих животных. Результат симультанной туберкулиновой пробы неопределённый. При переисследовании 22 реагировавших животных внутривенной туберкулиновой пробой, реагирующих животных также не выявили ни в одном случае. При диагностическом убое двух реагировавших на симультанную пробу с большей интенсивностью реакции на ППД - туберкулин для млекопитающих коров, характерных для туберкулёза изменений не обнаружили ни в одном случае. При лабораторном исследовании патматериала от убитых с диагностической целью животных, возбудителя туберкулёза не выделили.

В СПК «Нечаевский» было выявлено 12 реагировавших на симультанную пробу коров, из них со знаком (+) - 4, со знаком (-) - 3, со знаком (=) - 5 реагирующих животных. Результат симультанной туберкулиновой пробы неопределённый. При переисследовании всех 12 реагировавших на симультанную пробу коров внутривенной туберкулиновой пробой - реагирующих животных не выявили ни в одном случае. При диагностическом убое двух реагировавших на симультанную пробу с большей интенсивностью реакций на ППД - туберкулин для млекопитающих коров, характерных для туберкулёза изменений не обнаружили. При лабораторном исследовании патматериала от убитых с диагностической целью животных, возбудителя туберкулёза не выделили.

Анализируя результаты исследований во всех 4-х благополучных хозяйствах, можно сделать заключение, что при исследовании 68 реагировавших на симультанную туберкулиновую пробу животных, внутривенной туберкулиновой пробой - реагирующих животных не выявили ни в одном случае.

Полученные результаты исследований показывают, что сенсибилизированные атипичными микобактериями животные не реагируют на

внутривенное введение ППД - туберкулина для млекопитающих. Указанный факт, в некоторой степени, можно объяснить и слабой чувствительностью внутривенной туберкулиновой пробы по сравнению с внутрикожной, симультанной и пальпебральной туберкулиновой пробами.

Тем не менее, учитывая все положительные и отрицательные качества внутривенной туберкулиновой пробы, считаем возможным применять внутривенную туберкулиновую пробу в комплексе диагностических исследований в индивидуальных хозяйствах, с целью отбора животных для диагностического убоя.

Изучение диагностической ценности ПЦР при исследовании крови реагирующих на туберкулин животных, в индивидуальных хозяйствах.

Исследования провели в 6 населённых пунктах Стародубского района Брянской области.

На начальном этапе работы, исследования на туберкулёз мы проводили методом внутрикожной туберкулиновой пробы с использованием ППД -туберкулина для млекопитающих. При исследовании 273 голов крупного рогатого скота индивидуальных хозяйств в д. Олейниково было выявлено 2 (0,7%) реагирующих коров, в д. Красный посёлок при исследовании 220 голов крупного рогатого скота выявлено 4 (1,8%) реагирующих коров, в д. Зап. Халеевичи при исследовании 185 голов крупного рогатого скота выявлена 1 (0,5%) реагирующая корова, в д. Даревичи при исследовании 123 голов крупного рогатого скота выявлена 1 (0,8%) корова, в д. Ломаковка при исследовании 65 голов крупного рогатого скота выявлено 4 (6,2%) реагирующих коров, в посёлке Десятуха при исследовании 450 голов крупного рогатого скота - реагирующих коров не выявили. В дальнейшем, от всех 12 реагирующих на туберкулин коров были отобраны пробы крови (в шприцы Моновет) для исследования ПЦР методом.

При исследовании ПЦР методом 12 проб крови от реагирующих на туберкулин коров ни в одном случае не был получен положительный результат, то есть ДНК М. bovis не выделили.

При диагностическом убое и патологоанатомическом осмотре 12-ти коров, характерные для туберкулёза изменения были обнаружены в средостенном лимфатическом узле и лёгких у одной коровы (Красуля).

При лабораторных исследованиях патматериала от этих животных, диагноз на туберкулёз также был подтверждён у коровы Красуля, т.е. выделена культура М. bovis и получен положительный результат биопробы на морских свинках. В 6 (50,0 %) случаях выделили атипичные микобактерии III и IV группы по классификации Раньона (нефотохромогенные микобактерии и быстрорастущие микобактерии).

Результаты исследований показывают, что использование крови в качестве анализируемого биоматериала для прижизненной диагностики туберкулёза крупного рогатого скота методом ПЦР является недостаточно эффективным и мало информативным. Тем не менее, учитывая небольшой

объём проведённых исследований по изучению возможности применения ПЦР для диагностики туберкулёза крупного рогатого скота в индивидуальных хозяйствах, считаем необходимым дальнейшее изучение этого метода диагностики, в целях определения роли и места ПЦР в комплексе диагностических исследований на туберкулёз.

4. ВЫВОДЫ

1. В населённых пунктах и индивидуальных хозяйствах, где регистрируется заболевание туберкулёзом людей, выявляются реагирующие на туберкулин животные у которых в единичных случаях подтверждается наличие туберкулёза. В общественных хозяйствах, выявляются реагирующие животные у которых не подтверждается наличие туберкулёза, но выделяются атипичные микобактерии III и IV группы по классификации Раньона.

2. В благополучных по туберкулёзу хозяйствах, где установлена сенсибилизация животных атипичными микобактериями, симультанная туберкулиновая проба с ППД - туберкулином для млекопитающих и КАМ обладает большей диагностической значимостью и дифференцирующими свойствами, чем симультанная туберкулиновая проба с ППД - туберкулином для млекопитающих и ППД - туберкулином для птиц.

3. Симультанная туберкулиновая проба с ППД - туберкулином для млекопитающих и КАМ дифференцирует специфические и неспецифические реакции по степени проявления аллергических реакций в 28,5 % случаях, ускоренная симультанная туберкулиновая проба в 42,8 % случаях.

4. Учёт результатов ускоренной симультанной пробы следует проводить через 72 ч. после введения аллергенов.

5. При применении симультанной туберкулиновой пробы и ускоренной симультанной туберкулиновой пробы в индивидуальных хозяйствах, учёт результатов симультанной пробы следует проводить индивидуально по каждому животному.

6. При оценке результатов аллергических реакций следует считать: за положительную реакцию - реагирующих животных с большей интенсивностью реакций на ППД - туберкулин для млекопитающих; за отрицательную реакцию - реагирующих с большей интенсивностью реакций на КАМ или ППД - туберкулин для птиц; за сомнительную реакцию -реагирующих животных с равной реакцией (с разницей не больше 2 мм.) на разные аллергены.

7. В индивидуальных и общественных хозяйствах дополнительным методом дифференциации специфических и неспецифических реакций может служить комплексное применение внутрикожной и пальпебральной туберкулиновых проб.

8. В целях дифференциации специфических и неспецифических реакций, при комплексном применении внутрикожной и пальпебральной туберкулиновых

проб, следует считать реагирующими животных с положительными показаниями на обе пробы.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

В целях дифференциации специфических и неспецифических аллергических реакций на туберкулин ввести дополнительный, специальный комплекс диагностических исследований для индивидуальных хозяйств, который включает:

1. Применение симультанной туберкулиновой пробы с ППД - туберкулином для млекопитающих и ППД - туберкулином для птиц, симультанной туберкулиновой пробы с ППД - туберкулином для млекопитающих и КАМ, с индивидуальным учётом реакций по каждому животному.

2. Применение ускоренной симультанной туберкулиновой пробы с ППД -туберкулином для млекопитающих и КАМ, с индивидуальным учётом реакций по каждому животному.

3. Комплексное применение внутрикожной туберкулиновой пробы и пальпебральной туберкулиновой пробы.

4. Исследование реагирующих животных внутривенной туберкулиновой пробой.

Результаты исследований по применению симультанной туберкулиновой пробы с ППД - туберкулином для млекопитающих и ППД -туберкулином для птиц с индивидуальным учётом реакций, комплексное применение внутрикожной и пальпебральной туберкулиновых проб включены в «Наставление по диагностике туберкулёза животных», утверждённых Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства РФ 18.11.2002г.

Материалы диссертационной работы по применению дополнительного, специального комплекса методов диагностики туберкулёза для индивидуальных хозяйств оформлены в виде дополнений и изменений к «Наставлению по диагностике туберкулёза животных» от 18.11.2002 г.

6. СПИСОК РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Найманов А.Х., Помыканов Н.П.. Особенности диагностики туберкулёза крупного рогатого скота в частном секторе. // Ветеринарная газета, Москва, №19 (236), 2002.

2. Помыканов Н.П.. Диагностика туберкулёза крупного рогатого скота индивидуального пользования// Материалы Международной научно-практической конференции «Современные проблемы диагностики и профилактики туберкулёза животных», Москва, 2004, с 60-63.

3. Найманов А.Х. Помыканов Н.П. Особенности диагностики туберкулёза крупного рогатого скота в частном секторе.// Вестник ветеринарной медицины, №1-2 (76), 2003.

Служба множительной техники ГУ РОНЦ им И Н Блохииа РАМН

Подписано в печать 2 3 .0 3 .0 5 Заказ № 176 Тираж 100 экз

i i í

2 2 Afeaos' 1289

1. Актуальность темы. Туберкулез крупного рогатого скота наносит значительный экономический ущерб животноводству страны, что связано с широкой распространенностью болезни, необходимостью убоя реагирующих на туберкулин животных в благополучных и неблагополучных по туберкулёзу хозяйствах и населенных пунктах.

На современном этапе борьбы с туберкулёзом животных, основой профилактических и оздоровительных мероприятий была и остаётся диагностика этой болезни. При диагностике туберкулёза крупного рогатого скота основным, массовым и общепринятым методом является внутрикожная проба с применением ППД - туберкулина для млекопитающих. Одной из важных проблем при диагностике туберкулёза внутрикожной туберкулиновой пробой остаётся проблема неспецифических реакций на туберкулин. Актуальность этой проблемы увеличивается из года в год. Так, в благополучных хозяйствах РФ выявляется в 5,3 раза больше реагирующих на туберкулин животных, чем в неблагополучных по туберкулёзу.

Массовые выявления неспецифических реакций на туберкулин приводит к убою большого количества здоровых животных, что увеличивает размеры экономического ущерба и вызывает сомнения в правильности диагностики туберкулёза утверждёнными методами.

Кроме того, туберкулез крупного рогатого скота имеет важное социальное значение, так как возбудитель болезни может передаваться человеку и вызывать заболевание людей и, наоборот, животные могут заразиться от людей.

В последние годы в нашей стране увеличилась заболеваемость людей туберкулезом, резко сократилось поголовье животных в общественном секторе и увеличилось поголовье крупного рогатого скота в частном секторе. Поэтому, всё острее возрастает проблема диагностики туберкулёза крупного рогатого скота в индивидуальных хозяйствах.

Следует указать, что для индивидуальных хозяйств более характерны бесконтрольные перемещения животных, перевозки кормов и животноводческой продукции, бесконтрольная торговля продуктами животноводства (особенно мясом и молоком), и все эти указанные факторы усложняют проведение комплекса профилактических и оздоровительных мероприятий при туберкулезе.

Другой, немаловажной особенностью, затрудняющей диагностику микобактериозов в индивидуальных хозяйствах, является совместное содержание и тесный контакт разных видов животных и птиц.

В связи с указанными особенностями, в последние годы увеличивается количество жалоб владельцев животных на необоснованный убой реагирующих животных, заводятся судебные дела между владельцами животных и ветеринарными специалистами.

Мероприятия по профилактике и борьбе с туберкулёзом проводятся в соответствии с Законом РФ «О ветеринарии», Санитарных правил СП 31.09396 и Ветеринарных правил ВП 13.3.1325-96, утвержденных Госкомсанэпиднадзором РФ 31.05.96 г. и Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства РФ от 18.06.96 г., «Наставлением по диагностике туберкулёза животных», утверждённых Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства РФ от 18. 11.2002 г.

К сожалению, в этих нормативных документах очень мало рекомендаций по диагностике туберкулёза крупного рогатого скота в частном секторе. Поэтому, в практических условиях, диагностические мероприятия по профилактике и оздоровлению от туберкулеза в личных подворьях граждан проводятся как и в общественном секторе.

Известно, что диагностика туберкулеза крупного рогатого скота в общественном секторе имеет свои специфические особенности. Главной особенностью является тот факт, что в общественном секторе диагноз на туберкулез ставится по группе животных, т.е. по стаду. Так, в соответствии с утверждёнными нормативными документами при постановке диагноза на туберкулез, из числа реагирующих на туберкулин животных проводят диагностический убой нескольких, наиболее характерно реагирующих на туберкулин животных, с последующим патологоанатомическим и лабораторным исследованиями на туберкулез.

Симультанная туберкулиновая проба с применением туберкулина для млекопитающих и комплексного аллергена из атипичных микобактерий (КАМ), которая широко применяется в ветеринарной практике для дифференциации аллергических реакций на туберкулин, также является групповой и даёт возможность ориентироваться в ситуации по туберкулезу только по стаду или группе (не менее 6 голов) исследуемых животных.

Известно, что в индивидуальных хозяйствах, у хозяина одна-две коровы, а для постановки диагноза на туберкулёз необходимо провести убой реагирующих животных, и дальнейшие патологоанатомические и лабораторные исследования на туберкулёз.

В общественных хозяйствах, при убое одного или нескольких реагирующих животных сохраняется остальное поголовье животных, а в частном секторе, при убое одной коровы убивают и последнюю корову.

Поэтому, учитывая сложную эпидемическую и эпизоотическую ситуацию по туберкулёзу в нашей стране, недостаточную эффективность методов диагностики туберкулёза животных, совершенствование методов диагностики туберкулёза крупного рогатого скота в индивидуальных хозяйствах является весьма актуальным.

2. Цель исследований. Совершенствование методов диагностики туберкулёза крупного рогатого скота в индивидуальных и общественных хозяйствах. Предложить специальный, дополнительный комплекс методов диагностики туберкулёза в индивидуальных хозяйствах РФ.

3. Основные задачи исследований:

1. Изучить распространённость микобактериозов крупного рогатого скота в общественных и индивидуальных хозяйствах Стародубского района Брянской области.

2. Определить видовой состав микобактерий, выделенных от убитых с диагностической целью животных и объектов внешней среды .

3. Провести сравнительное изучение диагностической ценности симультанной туберкулиновой пробы с ППД - туберкулином для млекопитающих и КАМ и симультанной туберкулиновой пробы с ППД -туберкулином для млекопитающих и ППД - туберкулином для птиц.

4. Изучить возможность применения ускоренной симультанной туберкулиновой пробы с ППД- туберкулином для млекопитающих и КАМ, в целях дифференциации аллергических реакций на туберкулин.

5. Изучить возможность применения индивидуального учёта проявления аллергических реакций при симультанном методе введения туберкулинов.

6. Изучить диагностическую ценность одновременного применения внутрикожной и пальпебральной туберкулиновых проб с целью дифференциации аллергических реакций на туберкулин.

7. Оценить эффективность внутривенной туберкулиновой пробы при дифференциации аллергических реакций на туберкулин.

8. Разработать дополнительный комплекс методов диагностики туберкулёза крупного рогатого скота в индивидуальных хозяйствах РФ.

4. Научная новизна. Представлен анализ проявления микобактериозов в общественных и индивидуальных хозяйствах Стародубского района Брянской области.

Установлена диагностическая ценность симультанной туберкулиновой пробы с ППД - туберкулином для млекопитающих и КАМ и симультанной туберкулиновой пробы с ППД -туберкулином для млекопитающих и ППД -туберкулином для птиц.

Впервые показана необходимость применения симультанной туберкулиновой пробы, с индивидуальным учётом реакций на разные аллергены, для дифференциации специфических и неспецифических реакций на туберкулин в индивидуальных хозяйствах.

Впервые показана возможность применения ускоренной симультанной туберкулиновой пробы с ППД - туберкулином для млекопитающих и КАМ с индивидуальным учётом аллергических реакций на разные аллергены.

• Определена диагностическая ценность комплексного применения внутрикожной и пальпебральной туберкулиновых проб для дифференциации специфических и неспецифических реакций на туберкулин.

Впервые представлен специальный, дополнительный комплекс методов для диагностики туберкулёза в индивидуальных хозяйствах РФ.

5. Практическая ценность.

Результаты исследований по применению симультанной туберкулиновой пробы с ППД - туберкулином для млекопитающих и ППД -туберкулином для птиц с индивидуальным учётом реакций, комплексное-применение внутрикожной и пальпебральной туберкулиновых проб включены в «Наставление по диагностике туберкулёза животных», утверждённых Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства РФ 18.11.2002г.

Предлагается дополнительный, специальный комплекс методов диагностики туберкулёза крупного рогатого скота в индивидуальных хозяйствах, где предусмотрено: применение симультанной туберкулиновой пробы и ускоренной симультанной туберкулиновой пробы, с индивидуальным учётом реакций на разные аллегены; комплексное применение внутрикожной и пальпебральной туберкулиновых проб; применение внутривенной туберкулиновой пробы.

Материалы диссертационной работы по применению дополнительного, специального комплекса методов диагностики туберкулёза для индивидуальных хозяйств оформлены в виде дополнений и изменений к «Наставлению по диагностике туберкулёза животных» от 18.1 L2002 г.

6. Основные положения выносимые на защиту.

1. Материалы по сравнительному изучению диагностической ценности симультанной туберкулиновой пробы с ППД - туберкулином для млекопитающих и КАМ и симультанной туберкулиновой пробы с ППД -туберкулином для млекопитающих и ППД - туберкулином для птиц при диагностике туберкулёза крупного рогатого скота в индивидуальных хозяйствах.

2. Результаты исследований по применению ускоренной симультанной туберкулиновой пробы с ППД - туберкулином для млекопитающих и КАМ для дифференциации аллергических реакций на туберкулин.

3. Результаты исследований по применению симультанной туберкулиновой пробы на крупном рогатом скоте общественных и индивидуальных хозяйств, с индивидуальным учётом проявления аллергических реакций.

4. Результаты применения внутрикожной и пальпебральной туберкулиновых проб для дифференциации аллергических реакций на туберкулин.

5. Применение специального, дополнительного комплекса методов диагностики туберкулёза крупного рогатого скота в индивидуальных хозяйствах РФ.

7. Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на:

• Международной научно-практической конференции «Современные проблемы диагностики и профилактики туберкулёза животных», Москва, 2003 г.;

• Межлабораторном совещании сотрудников ВИЭВ, Москва, 2005 г.

8. Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 3 научные работы.

9. Объём и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 166 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений и списка использованной литературы.

12. ВЫВОДЫ

1. В населённых пунктах и индивидуальных хозяйствах, где регистрируется заболевание туберкулёзом людей, выявляются реагирующие на туберкулин животные > у которых в единичных случаях подтверждается наличие '< туберкулёза. В общественных хозяйствах, выявляются реагирующие животные/' у которых не подтверждается наличие туберкулёза, но выделяются атипичные микобактерии III и IV группы по классификации Раньона.

2. В благополучных по туберкулёзу хозяйствах, где установлена сенсибилизация животных атипичными микобактериями, симультанная туберкулиновая проба с ППД - туберкулином для млекопитающих и КАМ обладает большей диагностической значимостью и дифференцирующими свойствами, чем симультанная туберкулиновая проба с ППД - туберкулином для млекопитающих и ППД - туберкулином для птиц.

3. Симультанная туберкулиновая проба с ППД - туберкулином для млекопитающих и КАМ дифференцирует специфические и неспецифические реакции по степени проявления аллергических реакций в 28,5 % случаях, ускоренная симультанная туберкулиновая проба в 42,8 % случаях.

4. Учёт результатов ускоренной симультанной пробы следует проводить через 72 ч. после введения аллергенов.

5. При применении симультанной туберкулиновой пробы и ускоренной симультанной туберкулиновой пробы в индивидуальных хозяйствах^ учёт^ результатов симультанной пробы следует проводить индивидуально по каждому животному.

6. При оценке результатов аллергических реакций следует считать: за положительную реакцию - реагирующих животных с большей интенсивностью реакций на ППД - туберкулин для млекопитающих; за отрицательную реакцию - реагирующих с большей интенсивностью реакций на КАМ или ППД - туберкулин для птиц; за сомнительную реакцию — реагирующих животных с равной реакцией (с разницей не больше 2 мм.) на разные аллергены.

7. В индивидуальных и общественных хозяйствах дополнительным методом дифференциации специфических и неспецифических реакций может служить комплексное применение внутрикожной и пальпебральной туберкулиновых проб.

8. В целях дифференциации специфических и неспецифических реакций, при комплексном применении внутрикожной и пальпебральной туберкулиновых проб, следует считать реагирующими животных с положительными показаниями на обе пробы.

13. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

В целях дифференциации специфических и неспецифических аллергических реакций на туберкулин ввести дополнительный, специальный комплекс диагностических исследований для индивидуальных хозяйств, который включает:

1. Применение симультанной туберкулиновой пробы с ППД - туберкулином для млекопитающих и ППД - туберкулином для птиц, симультанной туберкулиновой пробы с ППД - туберкулином для млекопитающих и КАМ, с индивидуальным учётом реакций по каждому животному.

2. Применение ускоренной симультанной туберкулиновой пробы с ППД -туберкулином для млекопитающих и КАМ, с индивидуальным учётом реакций по каждому животному.

3. Комплексное применение внутрикожной туберкулиновой пробы и пальпебральной туберкулиновой пробы.

4. Исследование реагирующих животных внутривенной туберкулиновой пробой.

Результаты исследований по применению симультанной туберкулиновой пробы с ППД - туберкулином для млекопитающих и ППД -туберкулином для птиц с индивидуальным учётом реакций, комплексное применение внутрикожной и пальпебральной туберкулиновых проб включены ос. в «Наставление по диагностике туберкулёза животных», утверждённых1 Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства РФ 18.11.2002г.

Материалы диссертационной работы по применению дополнительного, специального комплекса методов диагностики туберкулёза для индивидуальных хозяйств оформлены в виде дополнений и изменений к «Наставлению по диагностике туберкулёза животных» от 18.11.2002 г.