Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Эпизоотология и диагностика туберкулеза крупного рогатого скота в условиях Южного Урала

На правах рукописи

АБДЫРАМАНОВА Татьяна Дзепшевна

ЭПИЗООТОЛОГИЯ И ДИАГНОСТИКА ТУБЕРКУЛЕЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В УСЛОВИЯХ ЮЖНОГО УРАЛА

16.00.03-ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации па соискание ученой степени кандида га ветеринарных наук

Екатеринбург - 2007 г.

Работа выполнена в лаборатории клеточной биотехнологии ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза сельскохозяйственных животных» и на кафедре эпизоотологии и организации ветеринарного дела ФГОУ ВПО «Уральская государственная академия ветеринарной медицины»

Научный руководитель доктор ветеринарных наук,

профессор, заслуженный деятель науки РФ Ощепков Владимир Григорьевич

Официальные оппоненты доктора ветеринарных наук, профессор,

Околелов Владимир Иванович Начальник Главного управления ветеринарии Омской области, г Омск

кандидат ветеринарных наук Татарчук Александр Терентьевич ГНУ УрНИВИ РАСХН, г Екатеринбург

Ведущая организация ФГОУ ВПО Алтайский Государственный аграрный университет ветеринарной медицины (г Барнаул)

Защита состоится « » ноября 2007 г в ""часов на заседании диссертационного совета Д 220.067 02 в Уральской государственной сельскохозяйственной академии в зале Ученого совета по адресу 620075, г Екатеринбург, ул К Либкнехта, 42, тел/факс (343) 371-33-63

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Уральская государственная сельскохозяйственная академия»

Автореферат разослан «/£.» октября 2007 г

Ученый секретарь

диссертационного совета Кандаков Николай Васильевич

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность гемы Успех борьбы с туберкулезом крупного рогатого скота во многом зависит от степени изученности закономерностей эпизоотического процесса, а также от ранней и надежной его диагностики Особенно важно знать особенности эпизоо шческого процесса в конкретной природно-экономической зоне, гак как это определяет масштабы и эффективность проведения противоэпизоотических мероприятий

В последние десятилетия одним из наиболее актуальных вопросов ветеринарной фтизиатрии является дифференциация аллергических реакций па ППД-туберкулин для млекопитающих Довольно высокая частота обнаружения неспецифических реакций в благополучных по туберкулезу стадах крупного рогат ого скота привела к тому, что внутрикожная туберкулиновая проба потеряла значимость как единственный, достоверный и эффективный метод прижизненной диагностики туберкулеза Внутрикожная туберкулиновая проба стала лишь ориентировочной при первичной постановке диагноза на туберкулез в хозяйствах, считающихся благополучными по этой инфекции (И А Баку лов, 1976, ВП Урбан, 1982, АС Допченко, В Н Донченко, 1972, 1994, НМ Колычев с соавт, 1992, 2004, ВН Кисленко,1998,А Н Шаров с соавт ,1980, Ю Я Кассич с соавт , 1990, Н П Овдиенко, 1990, Н А Шкиль,1995, В Г Луницын,1998, В И Околелов, 2001, Р А Нуратинов с соавт ,2001, А X Найманов 2004, и др )

В настоящее время диагноз на туберкулез у крупного рогатого скота считается установленным, если позитивные показатели внутрикожной аллергической пробы подтверждаются патологоанатомическим методом или положительными результатами биологического и бактериологического исследований

Между тем, выделение микобактерий туберкулеза из биологического (патологического) материала связано с определенными трудностями в силу генетических и феношпических особенностей возбудителя Основные из них - медленный poci на искусс1 венных питательных средах и способность к L-трансформации и длительной персисгенции возбудителя в организме животных в измененной форме (А С Донченко, Н П Овдиенко, Н А Донченко, 2004, Н М Колычев с соавт , 2004, В С Федосеев с соавт, 1981, 1991, ЮА Макаров, 1997, МИ Гертман, 1988, JIB Галатова, 1993, 2000) Изменение морфологии микобактерий и понижение метаболизма предполагают и особые требования к условиям культивирования их L- форм, которые на обычных питательных средах, применяемых при лабораторной диагностике, либо вообще не растут, либо растут очень скудно (3 Н Кочемасова, 1970, 1975, ИР Дорожкова, 1984, ВС Федосеев, 1975, 1982, НП Овдиенко, МИ Гертман 1988, В Г Ощепков, Л А Таллер, ЕЮ Секин, 2001, 2006 и др ) Для них необходимы щадящие методы обработки биоматериала и элективные питательные среды, в которых обязательно присутствие нативных бел-

ков и веществ, стабилизирующих осмотические свойства среды и стимулирующих рост микобактерий

Следовательно, улучшение имеющихся и создание новых питательных сред, повышающих эффективность бактериологической диагностики туберкулеза, остается актуальным направлением фтизиатрии

Цель и задачи исследований. Целью наших исследований явилось изучение закономерностей особенностей, тенденции и эпизоотического процесса туберкулеза крупного рогаюго скота, происходящего в Челябинской области, и усовершенствование бактериологической диагностики

Для этого необходимо было решить следующие задачи

1 Изучить динамику эпизоотического процесса туберкулеза у крупного рогаюго скота на территории Челябинской области минимум за 50 лет

2 Установи! ь критерии эпизоотологической оценки хозяйств (ферм), в которых в течение 2-3 лет и более выявляются живошые, реагирующие на ППД- туберкулин

3 Определить видовой состав и основные культуральные свойства микобактерий, выделенных из органов реагирующих на ППД-туберкулин животных и объектов внешней среды

4 Изучить роль голубей в резервации и распространении патогенных и «атипичных» микобактерий

5 Выяснить влияние фитодобавок в питательных средах на повышение выделяемости и скорость роста типичных и измененных Ь-форм микобактерий

6 Изучить реверсибельные свойства Ь-форм патогенных и «атипичных» микобактерий с использованием новых питательных сред и их значимость в бактериологической диагностике туберкулеза

Научная новизна. Результаты проведенных исследований расширяют представление о возможных региональных особенностях эпизоотического процесса туберкулеза крупного рогатого скота, стдийности и периодичности его проявления в конкретных природно-климатических и социально-экономических условиях Южного Урала, методических подходах к эпизоотологической оценке инфекционного статуса животных, находящихся в стадах (фермах, хозяйствах), счишющихся благополучными по туберкулезу, но проявляющих кожные реакции на диагностический ППД-туберкулин, эпизоотологической роли синантропных птиц (голубей) в резервации и распространении возбудителя туберкулеза крупного рогатого скота, видовом составе типичных и измененных (Ь-форм) микобактерий, циркулирующих в последнее десятилетие (2002-2007 гг) на территории Челябинской области, в том числе на фермах, где содержится крупный рогатый скот, реагирующий на туберкулин, их культурально-морфологических и реверсирующих свойствах, способах конструирования и определения диагностической значимости питательных сред, предназначенных для выделения патогенных и «атипичных» микобактерии из биологического материала (паренхиматозные органы, лимфатические узлы, молоко) и объектов внешней среды

Составлена новая композиция питательной среды для культивирования микобактерий, находящихся в морфологически типичном и измененном (Ь-форме) состоянии, подана заявка на ее регистрацию в качестве изобретения (приоритетная справка ФИПС № 2006120646 от 13 06 2006г)

Практическая значимость Аналитические данные по эпизоотическому процессу могут быть использованы при планировании, организации и проведении противоэпизоотических мероприятий на территории Челябинской области

Разработанная композиция питательной среды (2006 г ) позволяет существенно повысить эффективность бактериологической диагностики туберкулеза и микобактериозов (в 1,3-1,8 раза) у крупного рогагого скота и птиц

Результаты исследований использованы при составлении методических рекомендаций по изоляции и идентификации Ь-форм микобактерий (2005г), а также при подготовке ветеринарных специалистов в Уральской государственной академии ветеринарной медицины

Апробация полученных материалов Материалы диссертации доложены и обсуждены на научных конференциях профессорско-преподавательского сосшва и асгшранюв Уральской государственной академии ветеринарной медицины ( 2003, 2004, 2005 I г), на конференциях молодых ученых УГАВМ г Троицк, (2003, 2004гг), координационных совещаниях по инфекционной паюлогии сельскохозяйственных животных (г Москва, ВИЭВ, 2005, 2006,2007 гг ), международных научно-практических конференциях по актуальным проблемам ветеринарии (Москва,2004г, Ялта, 2005г)

Публикация материалов исследований. По материалам диссертационной работы опубликовано 10 научных статей в трудах НИУ и сборниках научных конференций, в том числе 1 публикация в изданиях вошедших в Перечень ВАК РФ

Внедрение результатов исследований. Сконструирована новая питательная среда и подана заявка в ФИПС на ее регистрацию в качестве изобретения, составлены методические рекомендации по изоляции Ь-форм патогенных и «атипичных» микобактерий утвержденные Ученым советом ВНИ-ИБТЖ протокол № 3 от 14 05 2005 г и подсекцией «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока», отделение ветеринарной медицины СО РАСХН (протокол № 5 от 21 июня 2005 г ,) меюдической комиссией факультета ветеринарной медицины УГАВМ (протокол № 10 от 29 09 2003 г )

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 152 страницах компьютерного текста и состоит из следующих разделов введение, обзор литературы, результаты собственных исследовании, обсуждения полученных результатов, выводы, практические предложения и список литературы, включающий 218 источников, в том числе 23-иностранных, и приложения

Диссертация иллюстрирована 22 таблицами и рисунками

Основные положения, выносимые на защиту:

1 Особенносаи эпизоотического процесса туберкулеза крупного рогатого скота на территории Челябинской области в последние 56 лет (1951 -2006 гг)

2 Характеристика микобактерий, выделенных из организма животных и объектов внешней среды в хозяйствах, где выявляются реагирующие на ППД- туберкулин животные

3 Конструирование и оценка диагностической эффективности новых питательных сред, предназначенных для первичной изоляции и культивирования микобактерий

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы исследовании

Работа выполнена в 2002-2007 годах в лаборатории клеючной биотехнологии ВНИИБТЖ (г Омск), на кафедре эпизоотологии и организации ветеринарного дела Уральской государственной академии ветеринарной медицины (г Троицк), в областной ветеринарной лаборатории, в хозяйсгвах Челябинской области

Эпизоотическое состояние хозяйств Челябинской области по туберкулезу крупного рогатого скота изучали с 1951 по 2006 годы путем ретроспективного анализа ветеринарных документов учета и отчетности, проведения тщательной послеубойной ветсанэкспертизы туш и органов, реагирующего на туберкулин крупного рогатого скота убитого с диагностической целью, выделения и видовой идентификации типичных и измененных Ь- культур микобактерий

Аллергические, патологоанаюмические, бактериологические исследования проводили согласно санитарным (СП 3 1) и ветеринарным (ВП 13 3) правилам (1996 г) и «Наставлению по диагностике туберкулеза животных», утвержденному Департамента ветеринарии Министерства сельского хозяйства РФ в 2002 году

Биологическии материал брали от реагирующих на туберкулин животных из хозяйств с различным эпизоотическим состоянием

В качестве биоматсриала от животных, убитых с диагностической целью, брали лимфатические узлы, фрагменты паренхиматозных органов животных и молоко

Исследование молока на инфицированность микобактериями осуществляли по методике АП Аликаевой (1950), а обьектов внешней среды (животноводческие помещения, стоячие водоемы, почва пастбищных участков) - А11 Аликаевой (1979) и Н М Колычева (1992)

Выделение Ь-форм микобакцерий из биоматериала и объектов внешней среды проводили согласно рекомендациям, составленным на кафедре эпизоотологии и ОВД УГАВМ (г Троицк, 2003)

При этом пробы, взятые из лимфатических узлов и паренхиматозных органов, измельчали, растирали в фарфоровой ступке и обрабатывали 3%-ным раствором серной кислоты в течение 30 минут с последующим центрифугированием и отмыванием стерильным физиологическим раствором Суспензии от каждой пробы первоначально для выявления типичных культур ми-кобактерий засевали в четыре пробирки со средой Левенштейна-Йенсена и Фасг-ЗЛ Для обнаружения их Ь-форм посевы проводили в четыре пробирки с полусиптегической средой Школьниковой в модификации Дорожковой (1984) и с полужидкой средой ПС-1 (ВНИИБТЖ)

Контроль за посевами вели в течение трех месяцев Просмотр проводили каждые 10-15 дней Рост микобактерий выявляли путем визуального осмотра посевов По мере появления роста па средах пастеровской пипеткой готовили мазки методом раздавленной капли и окрашивали их по Цилю-Нильсену и микроскопировали в обычпом световом режиме Для обнаружения Ь- форм микобактерий дополнительно использовали фазово-контрастное устройство - КФ-4

Культуральные свойства микобактерий (морфология, окраска, характер роста на различных питательных средах, реверсибеяьпость и др ) изучали с учетом рекомендаций Центральной научно-методической ветеринарной лаборатории (Москва, 2004)

Для повышения выделяемоеш микобактерий из проб биоматериала и объекюв внешней среды, где содержались туберкулочувствительные животные, мы сконструировали и апробировали четыре новых питательных среды, (ЛСФ, ФСФ, ДСФ, ПСФ), содержащих фиюдобавки (эраконд, люце-вита, солодка) в концентрациях 0,15, 0,3, 3,0,12,0, 25,0, и 50,0, мг/мл Дозы концентраций фитодобавок определяли в предварительных опытах с 10-кратной повторяемостью

Изучение реверсирующих свойств культур Ь-форм проводили путем последовательных многократных их перессвов на новых апробируемых питательных средах ПС-1 и ПСФ с интервалом 5-10 суток

Идентификацию типичных и реверсировавших культур микобактерий проводили по общепринятым методикам (1986, 2002 гг) с использованием культуральных и биохимических тестов

2 2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 2 2.1. Динамика эпизоотического процесса туберкулеза крупного рогатого скота в Челябинской области в 1951-2006 п.

Анализ доступных нам материалов отчетов ве1еринарной службы за 1951-2006 гг и проводимых противотуберкулезных мероприятий показал (рис 1) что в 50-е годы (1951-1958 гг) в Челябинской области эпизоотический процесс туберкулеза крупного рогатого скота стал активизироваться К началу 1961 г на этой территории стало уже 354 неблагополучных пунктов

(ферм), которые находились большей частью в центрально-западной и южной зонах

400 , 354

Годы .

—Количество н/п - л - Оздоровлено -о— Выявлено новыхн/п

Примечание н п. - неблагополучные пункты Рисунок 1 - Количество неблагополучных пунктов по туберкулезу крупного рогатого скота в Челябинской области в 1951 -2006 I г

В последующие восемь лет в результате целенаправленной оздоровительной и профилактической работы областной и районных ветеринарных служб, за основу которых были взяты плановые диагностические исследования и ветерипарпо-санигарные мероприятия, эксгенсивность и интенсивность эпизоотического процесса удалось резко снизить и к 1967-1968 годам число неблагополучных пунктов сократилось до 64 С 1968 года по 1973 г наблюдалось некоторое замедление первого общего спада интенсивности процесса, продолжающегося до 1978 Года В 1979-1980 гг экстенсивность и интенсивность эпизоотического процесса стали возрастать, достигнув максимума к 1985-1987 гг По состоянию на 01 01 1987 г в области имелось 107 неблагополучных пунктов (рис 2) в которых в течение года было выявлено 28400 тысяч больных туберкулезом животных Наибольшее число неблагополучных пунктов наблюдалось, как и в 50-60-е годы, в центрально-западной и южной зонах

В связи с усилившимся распространением туберкулеза, значительным выявлением новых неблагополучных пунктов (по 30-45 пунктов в год) в 1985 году ветеринарнои службой было принято решение включить в комплекс противоэпизоогических мероприятий специфическое средство защиты крупного рогатого сюиа — вакцину ЬЦЖ (ВСО)

В первые два года (1985-1986 г) масштабы ее применения были весьма ограниченными, но в последующие 8 лет (1987-1994 гг ) зона прививок была увеличена фактически ее стали применять во всех неблагополучных районах, где туберкулезная инфекция получила довольно широкое распространение В эти годы ежегодно прививали по 54-121 тыс голов крупного рогатого скота (табл 1 ) и к 1994 году значительная часть поголовья телят и коров была вакцинирована и ревакцшшрована не один раз, а два, три и более раз

Эта мера (вакцинация), по нашему мнению, несомненно, способствовала приостановлению дальнейшего широкого распространения туберкулезной инфекции, а затем и более быстрому оздоровлению неблагополучных ферм

Благодаря применению вакцины БЦЖ в бывших неблагополучных хозяйствах, как правило, не отмечались повторные вспышки, поддерживалось эпизоотическое благополучие в хозяйствах, находящихся в угрожаемой зоне

С 1987 г по 1994 г общее число неблагополучных пунктов в области было сокращено почти в семь раз со 107 до 16 Значительно уменьшилось в зги годы число туш крупного рогатого скота, в которых находили изменения, характерные для туберкулеза (табл 1 )

Таблица 1 - Подтверждаемость туберкулеза у крупного рогатого скота на мясокомбинатах Челябинской области

Годы Вакцинировано БЦЖ, голов Подтвержден туберкулез на мясокомбинате, голов %

1987 54900 12398 4,6

1988 84000 9193 3,0

1989 96200 6556 2,2

1990 121800 3207 1,2

1991 114302 1955 0,8

1992 79200 1323 0,9

1993 71015 923 1,3

1994 55541 434 0,6

Примечания цифры, обозначенные в кружочке - число неблагополучных пунктов на территории района

В 2003 году после оздоровления двух последних ферм Челябинская область была объявлена благополучной по туберкулезу крупного рогатого скота Но в середине этого же года в одном, а затем в 2005 и 2006 гг уже в двух хозяйствах (фермах) обласш, находящихся в Сосновском и Окхябрьском районах, снова было выявлено неблагополучие по туберкулезу

Вероятнее всего активизация этих эпизоотических очагов была связана с сохранением возбудителя во внешней средс или с длительным скрытым но-сительством его у молодняка ранее неблагополучных ферм

Свердловская область

Оренбургская область

Рисунок 2 - Картограмма распространения туберкулеза крупного рогатого скота в Челябинской области в 1987 году

Таким образом, в динамике эпизоотического процесса туберкулеза крупного рогатого скота, происходящего в Челябинской области в последние 56 лет (1951-2006 гг ) можно выделить, как минимум, два наиболее значимых периода (цикла) подъема и угасания его интенсивности первый 1951-1978 гг (28 лет), второй 1979-2004 гг (26 лет) Два последующих года (2005-2006 гг ) вполне могут стать, если не будут приняты соответствующие профилактические меры, началом нового (третьего) эпизоотического цикла туберкулеза крупного рогатого скота на этой территории

2.2.2. Эпизоогологическая оценка хозяйств и районов области, считающихся благополучными по туберкулезу, но в которых в течение трех лет и более выявляется крупный рогатый скот, реагирующий на

ППД- туберкулин

После непродолжительного периода благополучия Челябинской области по туберкулезу крупного рогатого скота (2003-2004 гг) в 2005 году, как уже указывалось, снова был зарегистрирован эпизоотический очаг этой инфекции Это произошло на первом отделении СХП «Заря» Сосновского

района на фоне предыдущего проявления (2003-2004 гг) у значительной части стада крупного рогатого скота (более 2-4%) аллергических реакций на ППД-туберкулин

В связи с этим перед нами была поставлена задача определить критерии и дать эпизоотологическую оценку аналогичным хозяйствам и фермам, в которых в течение 2-3 и более лет выявлялся крупный рогатый скот, реагирующий на ППД-туберкулин

Для этого необходимо было

- провести ретроспективный анализ абсолютного и относительного количества ежегодно реагирующего на ППД-туберкулин крупного рогатого скота,

- собрать и систематизировать результаты бактериологических исследований на туберкулез, проведенных в районных и областной ветеринарных лабораториях,

- дополнительно провести выборочный диагностический убой реагирующего на ППД- туберкулин крупного рогатого скота, патологоанатомическое и комплексное бактериологическое исследования взятого от них биоматериала,

- исследовать бактериологическим методом объекты внешней среды, находящиеся на животноводческих фермах, где содержатся реагирующие на туберкулин животные,

- определить видовой состав выделенных микобактерии с учетом типичных и измененных их L- форм

Для экспертной оценки было выбрано 81 хозяйство, находящихся в семи животноводческих районах (Аргаяшский, Брединский, Варненский, Октябрьский, Увельский, Троицкий, Сосновский)

В результате ретроспективного анализа аллергических исследований было установлено, что в последние три года (2004-2006 гг ) в обследуемых районах число реагирующих на ППД-туберкулин животных в среднем составляло 1,29%, 0,86% и 1,86% ol общего числа исследованных с колебаниями по хозяйствам отдельных районов от 0,33% до 4,06%

При анализе бактериологических исследований определено (табл 2), что в эти годы в указанных районах почти половина (соответственно 41 4%, 48,4%, 49,4%о) реагирующего крупного рогатого скота подвергалось диагностическому убою, патологоанат омическому и бактериологическому исследованию

В итоге в 2004 г ветеринарными лабораториями было исследовано 1152 пробы биоматериала, взятого от реагирующих животных, в 2005 году -654 пробы и в 2006 году - 824 пробы

При таком достаточно большом объеме исследований только в 2-х пробах биоматериала, доставленного из Сосновского района в 2005 году, и двух пробах биоматериала из Октябрьского и Сосновского районов в 2006 году был обнаружен возбудитель туберкулеза М bovis

Во всех остальных пробах были выявлены либо «атипичные» мико-бактерии, либо посторонняя микрофлора Поэтому считаем, что на основании этих данных ветспециалисты хозяйств и районов вполне обоснованно считали 78 ферм (хозяйств) 5-ти районов благополучными и лишь только три фермы (СХП «Заря», МТФ №1,2 и СПК «Уйско-Чебаркульское» МТФ №1) неблагополучными по туберкулезу крупного рогатого скота

Для уточнения эпизоотического статуса в 14 из 81 хозяйства мы провели дополнительные комплексные бактериологические исследования биоматериала и объектов внешней среды с учетом не юлько типичных мико-бактерий, но и их Ь-форм Результаты этих исследовании изложены в разделах 2221, 2222и23

Таблица 2 - Бактериологические подтверждения туберкулеза у крупного рогатого скота, реагирующих на ППД-туберкулин в ветеринарных лабораториях

Район Количество хозяйств Исследовано в ветлабораториях, биопроб к числу выявленных реагирующих на ППД- туберкулин животных Подтвержден туберкулез

2004 г 2005 г. 2006 г. 2004 г. 2005г. 2006 г.

1 Реагировало (гол.) Число исследо-вапных проб от реагирующих £ Реагировало (гол.) Число исследованных проб от реагирующих г? Реагировало (гол.) Число исследованных проб от реагирующих *

Аргаяшский 14 236 126 53,3 215 57 26,5 328 156 47,5 0 0 0

Брединский 13 370 127 34,3 80 51 63,7 124 63 50,8 0 0 0

Варненский 13 370 146 39,4 210 95 45,2 206 169 82,0 0 0 0

Октябрьский 13 540 300 55,5 258 158 61,2 435 165 37,9 0 0 1

Увельский 9 570 292 51,2 290 156 53,7 230 106 46,1 0 0 0

Троицкий 10 195 118 60,8 226 99 43,8 256 109 42,6 0 0 0 ,

Сосновский 9 500 43 86,0 85 38 44,7 142 56 39,4 0 2 1

Итого- 81 2781 1152 41,4 1364 654 48,4 1721 824 49,4 0 2 2

2.2.2.^Характеристика микобактерий, выделенных из биоматериала крупного рогатого скота, реагирующего на ППД-туберкулин

Исследование 60-ти проб, взятых из органов животных, реагирующих на ППД- туберкулин, и посеянных на четыре питательные среды (Левенштей-на- Йенсена, Фаст-ЗЛ, Дорожковой, ПС-1), показало, что видовой и морфологический состав персист иругощих микобактерий зависит в определенной мере от эпизоотического статуса ферм (хозяйств)

В лимфатических узлах и паренхиматозных opiaHax крупного рогатого скота выявилось 42,5% культур микобактерий, которые находились в морфологически измененной (L) форме При этом следует отметить, что число культур L-форм из неблагополучных по туберкулезу ферм несколько превышало число аналогичных культур, выделенных на благополучных от туберкулеза фермах соответственно 42% и 38% L- -формы состояли в основном из крупных сферических образований, зернистости разной плотности, нитей разной длины, окраски и конфигурации, кокковидных сиреневых и темно-фиолетовых сравнительно мелких сферопластов, имеющих диаметр 1-3 мкм

Идентифицирование выделенных культур определило, что принадлежали они к 5- ти видам микобактерий М bovis, М avium, М terrae, М scrofu-laceum, и М diernhofen Патогенный для крупного рогатого скота вид - М bovis, находящийся как в типичной (3 культуры), так и L- форме (2 культуры) был выделен только на неблагополучных по туберкулезу фермах (СХП «Заря» Сосновского района, СПК «Уйско-Чебаркульское» Октябрьского района) Остальные четыре атипичных для крупного рогатого скота виды нетуберкулезного комплекса выявлялись и на неблагополучных, и на благополучных фермах

Если сопоставлять диагностическую значимость каждой питательной среды, использованной при бактериологическом исследовании биоматериала, взятого от животных, то следует указать, что из плотных сред (Левен-штейна-Йенсена, Фаст-ЗЛ) наиболее благоприятной для микобактерий оказалась среда Фаст- ЗЛ соответственно выделено 44,4% и 55,6% культур из полужидких сред (Дорожковой, ПС-1) наиболее благоприятной для микобактерий была среда ПС-1 выросло соотвеют венно 50,0% и 61,1% культур

При исследовании 57 проб молока, взятого от коров четырех районов (Троицкий, Октябрьский, Сосновский, Увельский), было выявлено 23 культуры микобактерий, 9 из них (15,8%) находились в морфологически типичном состоянии и 14 - (24,5%) в измененном (L-форма)

Выделенные из молока культуры отнесены к 5 видам М bovis - (10,0%), М avium - (16,5%), М tenrae - (24,3%), М scrofulaceum - (28,1%), М diernhofen - (17,7%), в том числс L-формы к 4 видам М avium - ( 25,4%), М terrae-(183%), М scrofulaseum - (12,7%), М diernhofen - (43,6%)

На МТФ 10 хозяйств, считающихся благополучными по туберкулезу, из молока коров были выделены микобактерии птичьего вида (М avium) и 3 вида «атипичных» микобактерий М terrae, М scrofulaceum, М diernhoferi

2.2.2.2.Характеристика микобактерий, выделенных из объектов

внешней среды

Для сравнительного изучения видового состава и культуральных свойств микобактерий, находящихся в среде обитания крупного рогатого скота, реагирующего на ППД-туберкулин, была избрана территория двух хозяйств, одно из них (СХП «Заря» Сосновского района) считалось согласно ветеринарной отчетности неблагополучным, а второе (ОПХ «Троицкое» Троицкого района) - благополучным по туберкулезу

Для исследования было взято 30 проб из животноводческих помещений (стойла, кормушки, проходы) сшячих водоемов и почвы пастбищных участков

Посевы из взятых проб производили на питательные среды Левенштей-на - Йен сена и 11С-1

Всего из объектов внешней среды было выделено 16 культур микобактерий, 5 (31,2 %) из них находились в морфологически неизмененном состоянии, all (68,7 %) - в L-форме При этом было определено, что обычные бактериальные культуры принадлежали к 5 видам М avmm -5 культур, М for-tuitum - 1 культура, М diernhoferi - 5 культур, М terrae - 3 культуры, М scrofulaceum - 2 культуры

2.3. Роль голубей, обитающих на территории благополучных и

неблагополучных по туберкулезу хозяйств в резервации и распространении патогенных (М. bovis, М avium) и «атипичных»

микобак>ерий

По данным ряда исследователей (MB Харитонов, 2000, и др ) следует, что голуби в определенных условиях могу! участвовать в распространении возбудителей туберкулеза видов М avium и М bovis Для выяснения роли птиц даннм о вида в резервации и распространении микобактерий на территории Челябинской области нами проведены бактериологические исследования биоматериала от отловленных в коровниках 54 голубей из 6 хозяйств 4-х районов, ранее неблагополучных (1998-2003 гг) по туберкулезу крупного рогатого скота (табл 3)

Таблица 3 - Результаты бактериологического исследования биоматериала от ___голубей__

Районы, хозяйства Исследовано голубей Выделено культур микобактерий В том числе

типичных бак культ L-форм

1 2 3 4 5

Увельский район, ООО «Южно-Уральское» 10 7 4 3

Октябрьский район, СПК «Кочердыкское» 6 3 2 1

Октябрьский район, ТОО «Восход» 12 9 4 5

Варненский район, СПК «Ново-Варненское» 7 4 2 2

Троицкий район, СПК «Кособродское» 10 8 6 2

Троицкий район, К/3 «Южный Урал» 9 5 2 3

ИТОГО 54 36 20 16

При идентификации, культуры, изолированные из органов голубей, были отнесены к птичьему и четырем «атипичным» видам микобактерий М avium (9 культур), М terrae (5 культур), М smegmatis (3 культуры), М diernhoferi (2 культур), М scrofulaceum (1 культура)

Микобактерии вида М bovis, являющиеся возбудителем туберкулеза крупного рогатого скота, из органов голубей ни в одном случае нами не выделены

2.4. Диагностическая эффективность новых питательных сред, содержащих фитодобавки

Для решения поставленной задачи проводили посев из биоматериала-ов (лимфоузлы, молоко), взятых от реагирующих на туберкулин коров и объектов внешней среды, в пробирки, в которых находилось 8 гатиельных сред, четыре из них были контрольными (Левенштейна-Йенсена, Фаст-ЗЛ, Дорожковой, ПС-1) и четыре испытуемыми (ЛСФ, ФСФ, ДСФ, ПСФ), содержащими 3 фитодобавки, условно названные нами «Эр», «Лв», «Ск»

Результаты опытов показали, чю эти фитодобавки, внесенные в контрольные среды в концентрациях 0,15, 0,3, 3,0, и 12,0 мг/мл пе улучшают рост микобактерий Заметное позитивное влияние на рост культур отмечался в средах, в которых фитодобавки содержались в концентрациях в 25,0 и 50,0 мг/мл При этом лучший результат был получен при концентрации добавок 50 мг/мл

В этом случае диагностическая эффективность как плотных (ЛСФ, ФСФ), так и полужидких питательных сред (ДСФ, ПСФ) повышалась в 1,31,8 раза

2.5. Реверсибельные свойства L-форм микобактерий и их значимость в бактериологической диагностике туберкулеза крупного рогатого скога

Нами изучена способность к реверсии у 23 культур L-форм атипичных микобактерий 4- видов (М avium, М terrae, М scrofulaceum, М diernhoferi) Эти культуры были выделены в 2002-2007 гг из лимфоузлов реагирующего на туберкулин крупного рогатого скота из трех благополучных хозяйств Челябинской области (ОПХ «Троицкое», СХП«Дробышево», ТО« Карсин-ский »Троицкого района) и одного хозяйства, небла1 ополучного по туберкулезу (СХП «Заря» Сосновского района) Их ревсрсибсльность изучали путем последовательных пересевов на новых питательных средах ПС-1и ПСФ

В результате последовательных пересевов на полужидких питательных средах реверсировало 13 культур (56,2%) При этом из 10 культур L-форм микобактерий, выделенных из биологического материала крупного рогатого скота благополучных по туберкулезу хозяйств, реверсировало в бактериальную форму 4 (40,0%), причем 2 культуры реверсировали после первого же пересева Еще по одной культуре реверсировали после 2-го и 3-го пересева

Способность реверсировать в исходное состояние у L-культур выделенных из патологического материала неблагополучного по туберкулезу хозяйства была выше, количество реверсирующих культур составило 69,0% (9-культур)

Выделенные микобактерии из неблагополучного хозяйства отнесены к 5 видам (М bovis, М avium, М terrae, М scrofulaccum, М dierhofcri), а из считавшихся благополучными - к 3 видам (М terrae, М scrofulaceum, М diernhoferi)

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о юм, что L-формы патогенных и «атипичных» микобактерий, персистирующие в организме крупного рогатого скота как благополучных, так и неблагополучных хозяйств были нестабильными и склонными к реверсии Для восстановления их исходных биологических свойств можно с успехом использовать новые питательные среды ВНИИБТЖ- УГАВМ (ПС-1 и ПСФ)

ВЫВОДЫ

1 Эпизоотический процесс туберкулеза крупного рогаюго скота, происходящий в Челябинской области в последние 56 лет (1951-2006 гг) характеризуется стадийностью, непрерывноеibio, цикличностью (наличием двух циклов развития и угасания) и территориальной приуроченностью

Продолжительность каждого цикла колеблется в пределах 26-28 лет, показатели максимальной интенсивности эпизоотии регистрировались в

1961 и в 1987 гг С 1988 года эпизоотический процесс имеет тенденцию к снижению активности

2 В хозяйствах и района, считающихся благополучными по туберкулезу по клиническим и патологоанатомическим показателям, но в которых при ежегодных диагностических исследованиях выявляется в среднем по 0,86%-1,86% реагирующего на 1И1Д—туберкулин крупного рогатого скога, туберкулез при комплексном патологоанатомическом и бактериологическом исследовании подтверждается не более, чем в 0,24 -0,35% случаев

3. Голуби, обитающие на территории Челябинской области, не играют существенной роли в резервации и распространении возбудителя туберкулеза крупного рогатого скота (М bovis), но они являются носителями возбудителя туберкулеза птиц (М avium) и «атипичных» микобактерий, to есть ми-кобактерий нетуберкулезного комплекса

4 «Атипичные», по классификации Раньона (1953), микобактерии, выделяемые от животных (крупный рогатый скот, голуби) и объектов внешней среды (кормовые проходы, кормушки, навоз) на территории благополучных и неблагополучных по туберкулезу хозяйств, в 45,2% случаев находится в морфологически измененной (L) форме

5 Растительные экстракты «Эр», «Лв», «Ск», добавленные в плотные (Левенштейна-Йенсена, Фаст-ЗЛ) и жидкие питательные среды (Дорожко-вой, ПС-1) в концентрации (объеме) 50,0 мг/мл, повышают достоверность изоляции типичных и измененных (L) форм микобактерий в 1,3-1,8 раза При этом лучшая информативность наблюдалась у питательных сред в которых добавлялся экстракт солодки и люцевиты

6 L-формы «атипичных» микобактерий, выделяемые из биоматериала (паренхиматозные органы, лимфатические узлы, молоко), взятого от животных, и объектов внешней среды, являются нестабильными и при первых же трех пересевах на полужидкой (ПС-1) или плотной (Фаст-ЗЛ) питательной среде большинство из них 9 культур (69,0%) принимают типичные для микобактерий морфологию и окраску по Цилю-Нильсену

7 Культуры морфологически типичных микобактерий, выделенные в 2002-2007 гг от животных (крупный рогатый скот, голуби) и внешней среды на территории Челябинской области, принадлежат к 6 видам М bovis, М avium, М scrofulaceum, М fortuitum, М terrae, М dienhofen, а L-формы к 5 видам М bovis, М avium, М scrofulaceum, М fortuitum, М dienhofen

8 Относительно быстрая реверсия L- форм микобактерий (от 7 до 20 суток) в исходное морфологическое и видовое состояние имеет важное значение в бактериологической диагностике, так как позволяет установить (или исключить) туберкулез, используя для идентификации реверсировавших культур только общепринятые (традиционные) методы лабораторных исследований

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1 Полученные данные по региональным особенное лям и закономерностям эпизоотического процесса туберкулеза крупного рогатого скота предлагаются использовать ветеринарной службой Челябинской области для средне- и дальнесрочных прогнозов и организации противоэгшзоотических мероприятий

2 При эпизоотологической оценке животноводческих хозяйств (ферм), в которых выявляется в течение года в среднем 0,86 - 1,86% и более реагирующих на туберкулин животных, считать решающими следующие показатели

- наличие (отсутствие) клинических и патолог оапагомичсских признаков туберкулезной инфекции,

- результаты бактериологических исследований биоматериала от животных крупного рогатого скота, голубей и объектов внешней (Ь) форм микобактерий

3 В хозяйствах, в которых выявляются реагирующие на ППД- туберкулин животные, а диагноз на туберкулез пагологоанатомическими и традиционными бактериологическими исследованиями не подтверждается, биоматериал, целесообразно дополнительно исследовать на наличие Ь-форм возбудителя При этом посевы осуществлять на плотные и полужидкие питательные среды, в которые необходимо добавлять фитодобавки («Эр», «Лв», «Ск»), стимулирующие рост микобактерий

4 Результаты исследований могут быть использованы в учебном процессе на факультетах ветеринарной и гуманитарной медицины по курсам микробиологии, эпизоотологии и эпидемиологии

5 Методические рекомендации по изоляции и идентификации Ь-форм патогенных и «атипичных» микобактерий из биоматериала животных, объектов внешней среды предлагаются применяться в научно-исследовательских учреждениях и производственных ветеринарных лабораториях, занимающихся диагностикой туберкулеза сельскохозяйственных животных

СПИСОК

опубликованных работ по теме диссертации

1 Абдыраманова, ТД Выделение атипичных и Ь-форм микобактерий из биоматериала реагирующих на туберкулин животных / Л В Галатова, А А Петров, Т Д Абдыраманова // Материалы Международной научно-практической конференции, посвященной юбилею профессора П С Лазарева - Троицк, 2003, С 17-18.

2 Абдыраманова, Т Д О реверсии L-форм микобактерий / Л В Галагова, А А Петров // Материалы научно- практической конференции «Перспективные направления научных исследований молодых ученых Урала и Сибири», Троицк, 2004, С 45-47

3 Абдыраманова, Т Д Влияние люцевиты на рост микобактерий туберкулеза на искусственных питательных средах / Л В Галатова, А А Петров // Сборник научных трудов - Троицк, 2004, С 3-4

4 Абдыраманова, ТД Выделяемое! ь микобактерий из проб биоматериала крупного рогатого скота /Л В Галатова, А А Петров // Материалы Международной научно-практической конференции, посвященной 75-летию УГАВМ - Троицк, 2005, С 7-10

5 Абдыраманова, ТД Голуби - носители микобактерий / Л В Галатова, А А Петров, Н В Кузнецова // Материалы Международной научно-практической конференции, посвященной 75- летию УГАВМ - Троицк, 2005, С 11-14

6 Абдыраманова, ТД Выделяемоегь L-форм микобактерий в объектах внешней среды // Материалы IX научно-практической конференции «Перспективы, направления научных исследований молодых ученых», Троицк, 2005, С 48

7 Абдыраманова, Т Д Выявляемость реагирующего на туберкулопротеин крупного ротатого скота и микобактериальная подтверждаемое^ реакций при лабораторных исследованиях в Челябинской области / В Е Симбирцев, А Г Показий, Т Д Абдыраманова, Л В Галатова // Материалы международной конференции, посвященной 75-летию УГАВМ,- Троицк, 2005, С 121-123

8 Абдыраманова, Т Д Изучение влияния корня солодки на рост микобактерий из проб биоматериала и объектов внешней среды / Л В Галатова, А А Петров, В Е Симбирцев, Н В Кузнецова // Материалы Международной научно-производственной конференции - Троицк, 2006, С 3-5

9 Абдыраманова, Т Д Сравнительные показатели выделяемое™ микобактерий, на полужидких и тотных питательных средах / Л В Галагова, ТД Абдыраманова, А А Петров // Сборник научных трудов - Троицк, 2007, - С 15-17

10 Абдыраманова Т Д Характеристика L- форм микобактерий, выделенных на территории Западной Сибири и Южного Урала / В Г Ощепков, Л А Тал-лер, Л В Галагова, Т Д Абдыраманова, Е Ю Секин, Г М Дюсенова // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки, Новосибирск, 2007,- №4 - С 99- 102

На правах рукописи

АБДЫРАМАНОВА Татьяна Дзепшевна

ЭПИЗООТОЛОГИЯ И ДИАГНОСТИКА ТУБЕРКУЛЕЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В УСЛОВИЯХ ЮЖНОГО УРАЛА

16 00 03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с мико-токсикологией и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Подписано в печать 9.10.2007 г. Формат 60x84 1/16 Усл. печ. л. 1,0. Бумага «Гознак» Тираж 100 экз. Заказ №786

Отпечатано в типографии ООО «ИРА УТК»

620075, г. Екатеринбург, ул. К. Либкнехта, 42, к. 1103.

Актуальность темы. Переход сельскохозяйственного производства к рыночным отношениям, изменение системы содержания и эксплуатации животных, увеличение импорта скота выдвинули проблему совершенствования научно-практической системы профилактики и борьбы с туберкулезом животных. Несмотря на улучшение эпизоотической, ситуации по туберкулезу крупного рогатого скота, обстановка по этой болезни в нашей стране остается нестабильной и очень сложной. В комплексе профилактических мероприятий по предотвращению возникновения и распространения туберкулеза среди сельскохозяйственных животных особое место занимает своевременная диагностика болезни, как можно более раннее выявление первых случаев заболевания скота. Однако известно, что одной из самых больших проблем при диагностике туберкулеза является проблема псевдо - и парааллергических, или, как чаще принято называть, неспецифических реакций на туберкулин. Неспецифические реакции на туберкулин выявляются у животных во многих странах. Причиной их возникновения преимущественно является сенсибилизация крупного рогатого скота «атипичными» мико-бактериями (В.П. Урбан, 1984; А.С. Донченко с соавт., 1994, 2004 и др.).

Несмотря на то, что в нашей стране разработан и широко применяется комплекс организационно-хозяйственных и специальных мероприятий, регламентированных действующей инструкцией, добиться полной ликвидации туберкулеза удается не всегда, причем постоянно остается возможность повторного возникновения этой болезни, что зачастую связано с персисти-рованием в организме животных возбудителя болезни в измененной L-форме. По данным В.Д. Тимакова. Г.Я. Каган., (1978), З.Н. Кочемасовой, М.Н. Дыхно (1980), С.В. Прозоровского с со-авт. (1981) L-формы представляют собой варианты микроорганизмов, частично или полностью утративших клеточную стенку, но сохранивших способность к репродукции. L-формам придается особое значение в связи с их способностью длительно существовать в организме животных и реверсировать в исходный микробный вид с восстановлением вирулентности. На роль L-форм микобактерий в эпизоотическом процессе туберкулеза крупного рогатого скота указывают В.Ф. Керимжанова, Г.Г. Шейко (1983) и другие. Т.И. Байтерикова с соавторами (1982), B.C. Федосеев (1985) рецидивы туберкулеза в хозяйствах, где причину их не удается установить обычными методами, связывают с персистированием микобактерий туберкулеза в L- форме. В настоящее время L-формы микобактерий выделены от многих видов животных и птиц как в благополучных, так и в неблагополучных хозяйствах изучен ряд их биологических свойств (B.C. Федосеев с соавторами 1985; М.И. Гертман, 1988; JI.В. Галатова, 1993; Ю.А. Макаров 1997 и др.).

Успех борьбы с туберкулезом на отдельно взятых территориях (регионах) во многом зависит от полноты знаний особенностей эпизоотического процесса, правильной и своевременной его диагностики. В комплексе диагностических мероприятий решающее значение имеет бактериологическое исследование биоматериала от убитых с диагностической целью животных, выделение и последующая идентификация возбудителя. В последнее время исследователями замечено резкое снижение выявляемости микобактерий туберкулеза из биоматериала. В связи с этим Э.Д. Лакман с соавторами (1983) предлагают посев биоматериала проводить не на одну, а одновременно на несколько питательных сред разных видов. По их наблюдениям, наиболее эффективными являются яичные среды Гельберга и Петраньяни. Сотрудниками ВНИИБТЖ (JI.M. Ходун, JI.A. Таллер, и др.) разработана питательная среда Фаст-ЗЛ, применение которой сокращает сроки бактериологического исследования в полтора-два раза и способствует быстрому накоплению бактериальной массы. Новая среда создана на основе яичных питательных сред с углеводами. Учитывая, что возбудитель туберкулеза в процессе взаимодействия с макроорганизмом и под влиянием антибиотиков и других препаратов может изменять свои свойства и переходить в безоболочное состояние, то есть в L-форму, многие исследователи (B.C. Федосеев, 1985) рекомендуют проводить посев одновременно на. специальные среды для его выделения. Поэтому актуальным остается вопрос о лабораторной диагностике туберкулеза с учетом существования L-форм возбудителя и участия его в эпизоотическом процессе туберкулеза крупного рогатого скота.

Цель и задачи исследований. Целью наших исследований явилось изучение закономерностей, особенностей и тенденции эпизоотического процесса туберкулеза крупного рогатого скота, происходящего в Челябинской области, и усовершенствование его бактериологической диагностики.

Для этого необходимо было решить следующие задачи: 1. Изучить динамику эпизоотического процесса туберкулеза у крупного рогатого скота на территории Челябинской области минимум за 50 лет.

2. Установить критерии эпизоотологической оценки хозяйств (ферм), в которых в течение 2-3 лет и более выявляются животные, реагирующие на ППД- туберкулин.

3. Определить видовой состав и основные культуральные свойства микобактерий, выделенных из органов реагирующих на ППД-туберкулин животных и объектов внешней среды.

4. Изучить роль голубей в резервации и распространении патогенных и «атипичных» микобактерий.

5. Выяснить влияние фитодобавок в питательных средах[ на повышение выделяемости и скорость роста типичных и измененных L-форм микобактерий.

6. Изучить реверсибельные свойства L-форм патогенных и «атипичных» микобактерий с использованием новых питательных сред и их значимость в бактериологической диагностике туберкулеза.

Научная новизна. Результаты проведенных исследований расширяют представление о возможных региональных особенностях эпизоотического процесса туберкулеза крупного рогатого скота, стадийности и периодичности его проявления в конкретных природно-климатических и социально-экономических условиях Южного Урала; методических подходах к эпизоотологической оценке инфекционного статуса животных, находящихся в стадах (фермах, хозяйствах), считающихся благополучными по туберкулезу, но проявляющих кожные реакции на диагностический ППД-туберкулин; эпизоотологической роли синантропных птиц (голубей) в резервации и распространении возбудителя туберкулеза крупного рогатого скота; видовом составе типичных и измененных (L-форм) микобактерий, циркулирующих в последнее десятилетие (2002-2007 гг.) на территории Челябинской области, в том числе на фермах, где содержится крупный рогатый скот, реагирующий на туберкулин, их культурально-морфологических и реверсибельных свойствах; способах конструирования и определения диагностической значимости питательных сред, предназначенных для выделения патогенных и «атипичных» микобактерий из биологического материала (паренхиматозные органы, лимфатические узлы, молоко) и объектов внешней среды.

Составлена новая композиция питательной среды для культивирования микобактерий, находящихся в морфологически типичном и измененном (L-форме) состоянии, подана заявка на ее регистрацию в качестве изобретения (приоритетная справка ФИПС № 2006120646 от 13. 06. 2006 г).

Теоретическая и практическая значимость. Аналитические данные по эпизоотическому процессу могут быть использованы при планировании, организации и проведении противоэпи-зоотических мероприятий на территории Челябинской области.

Разработанная композиция питательной среды (2006 г.) позволяет существенно повысить эффективность бактериологической диагностики туберкулеза и микобактериозов (в 1,3-1,8 раза) у крупного рогатого скота и птиц.

Результаты исследований использованы при составлении методических рекомендаций по изоляции и идентификации L-форм микобактерий (2005г), а также при подготовке ветеринарных специалистов в Уральской государственной академии ветеринарной медицины.

Апробация полученных материалов. Материалы диссертации доложены и обсуждены на научных конференциях профессорско-преподавательского состава и аспирантов Уральской государственной академии ветеринарной медицины (2003, 2004, 2005 гг.), на конференциях молодых ученых УГАВМ г. Троицк, (2003, 2004 гг.), координационных совещаниях по инфекционной патологии сельскохозяйственных животных (г. Москва, ВИЭВ, 2005, 2006, 2007 гг.), международных научно-практических конференциях по актуальным проблемам ветеринарии (Москва, 2004г., Ялта, 2005 г.).

Публикация материалов исследований. По материалам диссертационной работы опубликовано 10 научных статей в трудах НИУ и сборниках научных конференций, втом числе 1 публикация в изданиях, вошедших в Перечень ВАК РФ.

Внедрение результатов исследований. Сконструирована новая питательная среда и подана заявка в ФИПС на ее регистрацию в качестве изобретения; составлены методические рекомендации по изоляции L-форм патогенных и «атипичных» микобактерий утвержденные Ученым советом ВНИИБТЖ протокол № 3 от 14.05. 2005 г. и подсекцией «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока», отделение ветеринарной медицины СО РАСХН (протокол № 5 от 21 июня 2005 г.,) методической комиссией факультета ветеринарной медицины УГАВМ (протокол № 10 от 29.09. 2003 г.).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 159 страницах компьютерного текста и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, результаты собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводы, практические предложения и список литературы, включающий 246 источников, в том числе 26-иностранных, и приложения.

Диссертация иллюстрирована 21 таблицами и 7 рисунками.

Основные положения, выносимые на защиту: 1 Особенности эпизоотического процесса туберкулеза крупного рогатого скота на территории Челябинской области в последние 56 лет (1951-2006 гг.).

2. Характеристика микобактерий, выделенных из организма животных и объектов внешней среды в хозяйствах, где выявляются реагирующие на ППД-туберкулин животные.

3. Конструирование и оценка диагностической эффективности новых питательных сред, предназначенных для первичной изоляции и культивирования микобактерий.

5. ВЫВОДЫ

1. Эпизоотический процесс туберкулеза крупного рогатого скота, происходящий в Челябинской области в последние 56 лет (1951-2006 гг.), характеризуется стадийностью, непрерывностью, цикличностью (наличие двух циклов развития и угасания) и территориальной приуроченностью.

Продолжительность каждого цикла колеблется в пределах 26-28 лет; показатели максимальной интенсивности эпизоотии регистрировались в 1961 и в 1987 гг. С 1988 года эпизоотический процесс имеет тенденцию к снижению активности.

2. В хозяйствах и районах, считающихся благополучными по туберкулезу по клиническим и патологоанатомическим показателям, но в которых при ежегодных диагностических исследованиях выявляется в среднем по 0,86%- 1,86% реагирующего на ППД-туберкулин крупного рогатого скота, туберкулез при комплексном патологанатомическом и бактериологическом исследовании подтверждается не более, чем в 0,24-0,35% случаев.

3. Голуби, обитающие на территории Челябинской области, не играют существенной роли в резервации и распространении патогенного для крупного рогатого скота вида микобактерий (М. bovis), но они являются носителями М. avium и «атипичных» микобактерий, нетуберкулезного комплекса.

4. «Атипичные», по классификации Раньона (1953) микобактерии, выделяемые от животных (крупный рогатый скот, голуби) и объектов внешней среды (кормовые проходы, кормушки, навоз и др.) на территории благополучных и неблагополучных по туберкулезу хозяйств, в 42,5 % случаев находятся в морфологически измененной (L) форме.

5. Растительные экстракты «Эр», «Лв», «Ск», добавленные в плотные (Левенштейна-Йенсена, Фаст-ЗЛ) и жидкие питательные среды (Дорожковой, ПС-1) в концентраций (объеме) 50,0 мг/мл, повышают достоверность изоляции типичных и измененных L форм микобактерий в 1,3-1,8 раза. При этом лучшая информативность наблюдалась у питательных сред, в которых до-бовлялся экстракт солодки и люцевиты.

6. L-формы «атипичных» микобактерий, выделяемые из биоматериала (паренхиматозные органы, лимфатические узлы, молоко), взятого от животных и объектов внешней среды, являются нестабильными, и при первых же трех пересевах на полужидкой (ПС-1, ПСФ) питательной среде большинство из них, (69, 0%) -принимают типичные для микобактерий морфологию и окраску по Цилю-Нильсену.

7. Культуры морфологически типичных микобактерий, выделенные в 2002-2007 гг. от животных (крупный рогатый скот, голуби) и внешней среды на территории Челябинской области, принадлежат к 6 видам: М. bovis, М. avium, М. scrofulaceum, М. terrae, М.fortuitum, М. diernhoferi, a L- формы к 5 видам: М. bovis, М. avium, М. scrofulaceum, М.fortuitum, М. diernhoferi.

8. Относительно быстрая реверсия L-форм микобактерий (от 7 до 20 суток) в исходное морфологическое и видовое состояние имеет важное значение в бактериологической диагностике, так как позволяет установить (или исключить) туберкулез, используя для идентификации реверсировавших культур только общепринятые (традиционные) методы лабораторных исследований.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Полученные данные по региональным особенностям и закономерностям эпизоотического процесса туберкулеза крупного рогатого скота предлогается использовать ветеринарной службой Челябинской области для средне - и долгосрочных прогнозов и организации противоэпизоотических мероприятий.

2. При эпизоотологической оценке скотоводческих хозяйств (ферм), в которых выявляется в течение года в среднем 0,861,86% и более реагирующих на туберкулин животных, считать рещающими следующие показатели:

- наличие (отсутствие) клинических и патологоанато-мических признаков туберкулезной инфекции;

- результаты бактериологических исследований биоматериала от животных (крупного рогатого скота, голубей) и объ ектов внешней среды.

3. В хозяйствах, где выявляются реагирующие на ППД - туберкулин животные, а диагноз на туберкулез патологоанатоми-ческими и традиционными бактериологическими исследованиями не подтверждается, биоматериал целесообразно дополнительно исследовать на наличие L- форм возбудителя. При этом посевы осуществлять на плотные и полужидкие питательные среды, в которые необходимо добовлять фитодобавки («Эр», «Лв», «Ск»), стимулирующие рост микобактерий.

4. Результаты исследований могут быть использованы в учебном процессе на факультетах ветеринарной и гуманитарной медицины по курсам микробиологии, эпизоотологии и эпидемиологии.

5. Методические рекомендации по изоляция и идентификации L-форм патогенных и «атипичных» микобактерий из биоматериала животных и объектов внешней среды предлагается применять в научно-исследовательских учреждениях и производственных ветеринарных лабораториях, занимающихся диагностикой туберкулеза сельскохозяйственных животных.