Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Схемы профилактики и лечения респираторного и ассоциативного микоплазмоза птиц

На правах рукописи «0/

Лыско Светлана Борисовна

СХЕМЫ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ РЕСПИРАТОРНОГО И АССОЦИАТИВНОГО МИКОПЛАЗМОЗА ПТИЦ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Омск-2005

Работа выполнена в ФГОУ ВПО "Омский государственный аграрный университет" и ГНУ "Сибирский НИИ птицеводства" РАСХН.

Научный руководитель

доктор ветеринарных наук, профессор Красиков Александр Пантелсевич

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Новицкий Алексей Алексеевич

доктор ветеринарных наук, профессор Димов Сергей Константинович

Ведущее учреждение:

ГНУ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт птицеводства (ВНИВИП)

Защита состоится 27 января 2006 г. в 12 30 часов на заседании диссертационного совета Д 220.050.03 при Омском государственном аграрном университете в институте ветеринарной медицины ОмГАУ по адресу: 644122, г. Омск-122,ул. Октябрьская, 92, тел. 23-74-71, факс 23-04-67.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке института ветеринарной медицины Омского ГАУ.

Автореферат разослан 26 декабря 2005 г.

Ученый секрета?» диссертационнсо совета, доцент

Sty

1. Общая характеристика работы

Актуальность темы. Концентрация большого количества птицы на ограниченных площадях, поточная система выращивания, искусственный микроклимат, нарушения технологии содержания и кормления, другие стрессовые факторы привели к снижению общей резистентности организма птицы, обусловили постоянное пассирование через ее организм условно-патогенной микрофлоры и повышение ее вирулентности. Именно на этом фоне широкое распространение получили такие болезни, как респираторный микоплазмоз. а также болезни, вызываемые условно-патогенной микрофлорой - эшерихиоз, стафштококкоз. стрептококкоз и др.

В результате ретроспективных исследований, проведенных во ВНИИЗЖ за последние 5 лет, установлено, что из 250 птицефабрик России и стран СНГ в 221-ой птица была инфицирована М. gallisepticum. что составило 88% (Гирин М.В.. 2004). По данным A.C. Серебрякова (1970), S.L. Branlon (1984), Б.Ф Бессарабова (2001), D.N. Ley (2003) и др. экономический ущерб от респираторного микоппазмоза складывается из: летальности цыплят (20 - 80%), взрослых птиц (4 - 6%). гибели эмбрионов (8 - 30%), снижения яйценоскости (10 - 50%), привесов молодняка (13 -16%), задержки роста и выбраковки цыплят (50 - 75%). В большинстве случаев микоплазмоз протекает в ассоциации с другими инфекциями, что затрудняет диагностику болезни и снижает эффективность лечебно-профилактических мероприятий (Glisson J R.. 1988; Nakamura К., 1994; Гусев B.C., 2003; Садовников Н.В., 2003; МандрусоваТ.А., 2003; Андреева H.J1., 2004 и др.).

В настоящее время с профилактической и терапевтической целью при респираторном микоплазмозе птиц применяют антибиотики широкого спектра действия. Однако бессистемное применение антибиотиков в производстве без учета всех членов ассоциации, участвующих в инфекционном процессе, и чувствительности возбудителей к лекарственным препаратам зачастую не позволяет добиться желаемых результатов. Одним из отрицательных моментов применения антибиотиков является возникновение у птиц дисбактериозов и развитие антибиотикорезистентности у микроорганизмов Поэтому одним из перспективных направлений является использование пробиотикотерапии.

В связи с изложенным выше, на данном этапе развития птицеводства весьма актуальным остается вопрос о разработке рациональных, технологичных схем профилактики и лечения респираторного и ассоциативного микоплазмоза птиц с учетом всех сочленов ассоциации микроорганизмов, участвующих в инфекционном процессе.

Цель исследований. Разработать рациональные схемы профилактики и лечения респираторного и ассоциативного микоштазмоза птиц и методы лабораторного контроля их эффекта !Т]Щ5с7национл,льн

3

-w. 08

БИБЛИОТЕКА |

Задачи исследований.

1 Изучить эпизоотическую ситуацию по респираторному микоплаз-моз\ птиц и его ассоциациям на птицефабриках Омской области.

2. В экспериментальных условиях на инкубационном яйце, цыплятах. курах-несушках и петухах изучить схемы профилактики, лечения респираторного и ассоциативного микоплазмоза птиц.

3 Разработать бактериологические и серологические методы контроля эффективности применяемых схем.

4 Испытать наиболее эффективные рациональные схемы профилактики, лечения респираторного и ассоциативного микоплазмоза птиц в производственных условиях, дать им экономическое обоснование

Научная новизна. Установлено широкое распространение респираторного микоплазмоза среди птицы разных половозрастных групп, проявляющегося чаще в ассоциированных формах с эшерихиозом у молодняка на птицефабриках Омской области Впервые в условиях Омской области показано, что куры репродуктивного стада могут заражаться через сперму, конгаминированную микоплазмами. в том числе и при искусственном осеменении Разработаны научно и экономически обоснованные рациональные схемы профилактики и лечения респираторного и ассоциативного микоплазмоза гггиц на вое: этапах производства (инкубация яш^ выращивание цыплят-бройлеров и кур родительского стада), а также серологические и бактериологический методы контроля их эффективности.

Теоретическая и практическая значимость работы.

Материалы исследований дополняют конттетп'ию о полиэтиочогиче-ской роли микроорганизмов. участв5?огциг в ассоциативном инфекционном процессе.

Предложены для применении в практике схемы профилактики и лечения при ассоциативном респираторном мккоплазмозе цыплят-бройлеров. повышающие сохранность и продуктивность молодняка Использование в них пробиотика позволяет сократить кратность применения антибиотиков на птицефабриках Применение предложенных схем обработки кур родительского стада в сочетании с глубинной обработкой инкубационного яйца позволяет снизить количество пгиц-микоплазмоносителей. повысить сохранность, продуктивность кур и выводимость яиц

Использование предлагаемых лабораторных методов позволяет контролировать эпизоотическую ситуацию по данной инфекции и вносить корректировку в применяемые схемы лечения и профилактики

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на научно-практической конференции "Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов" (ВНТИБП. Щелково, 2003): IV международной научно-практической конференции ОмГМА (Омск, 2003): ежегодных научных конференциях ППС и аспирантов ФГОУ ВПО Омско-

го ГАУ (ИВМ ОмГАУ. Омск. 2004-2005); межрегиональной научно-практической конференции "Современные проблемы ветеринарной медицины" (ВНИИБТЖ, Омск, 2004); ученых советах ГНУ "СибНИИП" РАСХН (Морозовка. 2003-2005): ветеринарном конгрессе по птицеводству (Новосибирск. 2004): Ш научной конференции молодых ученых Сибирского федерального округа "Инновационное развитие аграрного производства в Сибири" (Кемерово, 2005): 1 -ом международном ветеринарном конгрессе по птицеводству (Москва, 2005).

Публикации результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 10 печатных работ, в которых изложены основные положения диссертации.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 130 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы. собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений и приложения. Список использованной литературы включает 189 наименований, в том числе 57 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 25 таблицами и 16 рисунками.

Внедрение результатов исследований. Результаты исследований с положительном эпизоотологическим и экономическим эффектом внедрены в ЭПХ "СибНИИП". Полученные данные вошли в методические реко- -мендации "Комплексная система мер борьбы и профилактики с ассоциативным респираторным микоплазмозом птиц", одобрены Центром научного обеспечения АПК Омской области при Министерстве сельского хозяйства Омской области от 21,10.2005г. № 6 и подсекцией "Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока" отделения ветеринарной медицины СО РАСХН от 25.10.2005г. № 6.

Основные положения диссертации используются в учебном процессе кафедры эпизоотологии и инфекционных болезней института ветеринарной медицины Омского ГАУ. на семинарах для технологов и ветврачей НПС "Сибирь", в лекциях для слушателей Тюменского института переподготовки кадров агробизнеса и курсов повышения квалификации на базе ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Данные об эпизоотической ситуации по респираторному мико-плазмозу и его ассоциациям на птицефабриках Омской области.

2. Чувствительность полевых культур микоштазм и эшерихий к антибактериальным препаратам in vitro

3. Результаты экспериментального изучения различных схем профилактики, лечения и методы лабораторного контроля их эффективности при респираторном микоплазмозе птиц, а также при его ассоциации с эшерихиозом.

4 Материалы производственных испытаний рациональных схем

профилактики и лечения при респираторном микоплазмозе птиц, а также при его ассоциации с эшерихиозом и их экономическое обоснование

2. Собственные исследования 2.1. Материалы и методы исследования

Исследования проводили с 2002 по 2005 год в лаборатории и виварии отдела ветеринарии "Сибирского НИИ птицеводства", в ЭПХ "Сиб-НИИП" и лаборатории микст инфекций кафедры эпизоотологии института ветеринарной медицины Омского ГАУ

Тема диссертационной работы является составной частью плана научно-исследовательской работы, проведенной ГНУ "Сибирский НИИ птицеводства" в соответствии с программой фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития агропромышленного комплекса РФ на 2001-2005 гг. задание 07 "Разработать новые и усовершенствовать существующие средства диагностики, терапии, специфической профилактики инфекционных и паразитарных болезней для обеспечения ветеринарного благополучия промышленного птицеводства" и самостоятельным разделом комплексной государственной программы ИВМ Омского ГАУ "Профилактика (диагностика) и меры борьбы с ассоциативными инфекционными и инвазионными болезнями животных и птиц", номер государственной регистрации 01.2.001100602.

Объектом исследования были инкубационные яйца, эмбрионы и куры разных половозрастных групп В опытах было использовано: 4140 инкубационных яиц, 2680 цыплят-бройлеров и 2448 голов взрослых кур кросса "Сибиряк".

Для изучения эпизоотической ситуации по респираторному мико-плазмозу птиц и его ассоциациям использовали эпизоотологический, клинический. бактериологический, серологический и патологоанатомиче-ский методы диагностики.

Материалом дня прижизненного исследования служили пробы крови. сыворотки крови, спермы, соскобов со слизистой оболочки гортани Для посмертного - кусочки легкого и стенки воздухоносных мешков, головной мозг, семенники, пораженные паренхиматозные органы. У эмбрионов исследовати хориоалантоисную жидкость и желток. Посевы из пораженных органов проводили по общепринятой в микробиологии методике на простые (МПБ, МПА). элективные (Эндо. ВСА. Клиглера и др.) и специальные среды для выделения микоплазм: обогащенный бульон Хот-тингера и жидкую (плотную) среды для выделения глюкозоферменти-рующих микоплазм, разработанные нами совместно с Омским НИИ при-родно-очаговых инфекций согласно методическим рекомендациям 'Методы диагностики ассоциативного респираторного микоплазмоза птиц", утвержденных на заседании ЦНО АПК Омской области 08 10 2004 г

В процессе выделения и культивирования микроорганизмов на питательных средах изучали их культуральныс свойства общепринятыми методами Морфологию бактериальных клеток из\"чачи в мазках, окрашенных по Граму и Романовскому-Гимза. биохимические свойства выделенных культур микроорганизмов - при помощи тест системы ММТ Е1 согласно инструкции.

ТТатогенность культур кишечной палочки изучачи на 21-дневных цыплятах согласно наставлению по диагностике колибактериоза животных. утвержденного Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства и продовольствия Российской Федерации 27 07.2000 г. Цыплят заражали внутрибрюшинно в дозе l.OxlO9 микробных тел в мл по ОСМ ГИСК им. JI.A. Тарасевича.

Патогенность выделенных культур микоплазм изучачи постановкой биопробы на 9-суточных куриных эмбрионах согласно наставлению по диагностике респираторного микоплазмоза птиц, утвержденного Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 28 12 1969 г.

Чувствительность выделенных полевых культур к антибактериальным препаратам in vitro определяли методом серийных разведений по общепринятой методике, утвержденной Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР 30.10.1971 г

Для серологической диагностики на начичие антител к микоплазмо-зу применяли сывороточно-капельную реакцию агглютинации (СКРА) с цветным стандартным антигеном М. gallisepticum (производства ВНИ-ИЗЖ) и метод иммуноферментного аначиза (ИФА) с использованием наборов фирмы BioChec (Голландия) с инструментальным учетом результатов (спектрофотометр EL х 800) и компьютерной обработкой данных

На следующем этапе работ в экспериментальных условиях на инкубационном яйце, цыплятах-бройлерах, курах-несушках и пету хах были изучены различные схемы профилактики, лечения и методы лабораторного контроля их эффективности при респираторном микоплазмозе птиц, а также при его ассоциации с эшерихиозом. Наиболее эффективные и ра-ционачьные схемы лечения и профилактики и лабораторные методы контроля их эффективности были испытаны в производственных условиях.

Экономическую эффективность определяли по методике определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий, утвержденной Департаментом ветеринарии РФ 21 02.1997 г.

Цифровые данные экспериментов обработаны методами математической статистики, принятыми в биологии и медицине с использованием программы Microsoft Excel 2000 и критериев Стьюдента.

2.2. Изучение эпизоотической ситуации по респираторному мпсоплазмозу птиц и его ассоциациям на птицефабриках Омской области

Исследования по данному разделу проводились совместно с научными сотрудниками отдела ветеринарии ГНУ "СибНИИП" Н Ф. Хатько и О А. Сунцовой Установлено, что на птицефабриках Омской области в структуре гибели кур от инфекционных болезней за 1998-2002 гг преобладал эшерихиоз (51, 92, 88, 85, 73%). тогда как за период 2003-2005гг <*шезнь Марека (28-47%) и лейкоз (35-44%), а эшерихиоз составлял от 11 _до 29%. При этом от общего количества погибшей птицы от эшерихиоза •на долю молодняка в возрасте 1-60 дней приходилось от 59 до 98%. Респираторный микогитазмоз зарегистрирован на трех птицефабриках Омской области. Чаще всего микоплазмоз протекал в ассоциации с эшсрихиозом. «тафилококкозом, реже с пастереллезом и реовирусным теносиновитом.

Аналогичную картину наблюдали и в ЭНХ "СибНИИП".

В структуре гибели молодняка в возрасте 1-60 дней микоплазмоз в -ассоциации с эшерихиозом составил 67,3%. Наибольшее количество положительно реагирующих на микоплазмоз цыплят в СКРА 65 и 51%. а -также цыгпят- мико пл аз монос итс л с й при прижизненном бактериологиче-•сюм исследовании 55 и 45% было выделено соответственно в одно- и 24-л;«вном возрастах. Количество их к 50 дням снижалось до 15%, а к 70 .даям оно снова увеличилось до 55% Надо отметить, что культуры мико-шазм были выделены как от положительно, так и отрицательно реагирующей птицы что, по-видимому, связано с высокой реактивностью птицы в первом и иммунологической толерантностью во втором случаях. Переболевший молодняк отставал в росте. При этом разницу в массе регистрировав с 24-х дневного возраста, который соответствовал периоду болезни гггицы и сохранялась на весь период содержания с достоверной разницей (Р<0,01).

Наличие возбудителя респираторного микоплазмоза у эмбрионов (J3%) и суточного молодняка (55%) свидетельствовало о передачи инфекции трансовариальным путем.

При исследовании на респираторный микоплазмоз и сопутствующую микрофлору были выделены культуры следующих микроорганизмов: Е coli, Diplococcus, Proteus. Citrobacter diversus. Причем как моноинфекция микоплазмоз встречался в 7 % случаях. В остальных случаях - в ассоциациях, и чаще всего в ассоциации М gallisepticum + Е. coli в 72 % случаях (рис. 1).

В структуре гибели кур-несушек на долю инфекционных болезней пришлось 4,9%. из которых 0,5% - микоплазмоз с эшерихиозом. 0.5% -болезнь Марека и 3.9% - лейкоз. В структуре гибели петухов лейкоз составил 3,8%.

Куры-несушки и петухи, не имеющие видимых клинических признаков болезни, являются скрытыми носителями возб> дителя респираторного микоплазмоза и источником инфекции для потомства Так. антитела к возбудителю респираторного микогггазмоза у кур-несушек в ИФА были выявлены в 100% случаях во все возрастные периоды, при этом максимальный средний титр 7387+1253 отмечагги в период интенсивной яичной продуктивности (220 дней) При прижизненном бактериологическом исследовании культуры М §аШ8ер11сит выделяли в 35 - 60% случаев Число положительно реагирующих петухов в ИФА увеличивалось с возрастом (212. 280 и 372 дней) и составляло 30. 73 и 82% соответственно. Увеличивалось (от 30 до 70%) и количество петухов-микоплазмоносителей, которые выделяли микоплазмы со спермой.

В 2% M-gaffisepticmtfE-cfDipiooocciB ■ 8% М.gaflisepticim + Dipiococcm ® 2% M-gafflseptkan+Cifiyereu»__

Рис 1. Бактериальные ассоциации, выделяемые при респираторном мико-плазмозе молодняка птиц.

2.3. Определение чувствительности полевых культур микоплазм и эшерихий к антибиотикам in vitro

Наибольшей активностью in vitro к полевым культурам М. gallisepticura обладали антибиотики из группы макролидов (тишозин тар-трат, фармазин). антибиотики из группы плеуромутилина (тиамулин гид-роген фумарат) и препараты из группы фторхинолонов (ципрофлоксацин. энрофлоксацин); к полевым культурам Е. coli - антибиотики из группы фторхинолонов Данные препараты были испытаны в опытах при изучении схем лечения и профилактики ассоциативного респираторного микоплазмоза птиц в экспериментальных и производственных условиях

Ш 72"/в M.gaIHsepticum+ Е.соВ ■ 3% Е.соН

□ 7% Mgaffisepfioan О б% M.gaffisepdcom+ Protein

2.4. Изучение схем деконтаминации куриных яиц от микоплазм в экспериментальных условиях

Яйцо на инкубацию брали от кур-несушек 242-х дней с положительными результатами серологических и бактериологических исследований на респираторный микоплазмоз Для деконтаминации яиц от микоплазм применяли нагрев их перед инкубацией при температуре 38,8°С в течение 24 ч. (1 опытная) и при температуре 45.8°С в течение 12 ч (2 опытная), облучение ультрафиолетовыми лучами в течение 15 и 30 минут (3 и 4 опытные), обработку яиц раствором фармазина методом прямого перепада температур с +38 до +5°С в течение 15 минут (5 опытаая) и аэрозолем Виркона-С (6 опытная), по 20 яиц в каждой группе В контрольной группе яйцо не обрабатывали. Полученный молодняк исследовали на ншшчие возбудителя респираторного микоачазмоза с использованием серологического и бактериологического методов диагностики в одно- и семидневном возрасте.

Анатиз полученных данных показал, что только обработка яиц перед инкубацией раствором фармазина, методом прямого перепада температур, позволила получить молодняк свободный от возбудителя респираторного микоплазмоза (табл. 1).

Таблица 1

Серологический и бактериологический контроли эффективности схем

деконтаминации инкубационных яиц от микоплазм ____в экспериментатьных условиях.__

Группы Кол-во. голов Однодневные цыплята 7-дневные цыплята

реагировало в СКРА, % выделено культур, % реагировало в СКРА, % выделено культур, %

Контрольная 15 40 47 40 47

1 опытная 10 20 20 20 20

2 опытная гибель эмбрионов в 1 сутки инкубации

3 опытная 15 33 47 1 33 47

4 опытная 5 опытная 10 30 30 30 30

16 - - - -

6 опытная 16 6 13 6 13

2.5. Изучение схем профилактики, лечения и методов лабораторного контроля их эффективности при ассоциативном респираторном микоплазмозе цыплят-бройлеров в экспериментальных условиях

Для моделирования ассоциативной микоачазмозной инфекции использовали полевые штаммы М gallisepticum и Е. coli серотип 020. выделенные от больных кур Заражения цыплят проводили по схеме предложенной О А Сунцовой, суть которой состоит в одновременном заражении цьшлят 21-дневного возраста двумя возбудителями и интраназатьном вве-

дении вакцины против ньюкаслской болезни птиц из штамма "Ла-Сота" для созданием у цыплят иммунодепрессии

Для проведения опытов методом аналогов было сформировано 2 контрольных (интактная и зараженная) и 9 опытных групп по 10 цыплят в каждой. Помимо антибактериальных препаратов использовали пробиотик "Астра-2". созданный и предоставленный нам ООО "БинКорм" (г. Бердск) и иммуномодулятор "Вестин", выпускаемый и предоставленный нам ООО "Диафарм" (г. Бердск).

С целью изучения схем профилактики данной болезни до заражения применяли в двух первых группах в течение семи дней пробиотик (1 кг/т корма) и в течение трех дней тилозина тартрат (50 мг/кг массы) в первой, и ципрофлоксацин (10 мг/кг массы) во второй группе. В третьей и четвертой группах - дважды, с интервалом семь дней интраназально вводили иммуномодулятор (16 мкг/голову) и применяли указанные выше антибиотики в течение трех дней до заражения. В пятой группе использовали сочетание пробиотика с иммуномодулятором без применения антибактериальных препаратов.

Лечение цыплят проводили на второй день после заражения при появлении клинических признаков. С этой целью в течение пята дней применяли тилозина тартрат в одном случае, и ципрофлоксацин в другом, в сочетании с пробиотиком (от начата лечения до 42-х дней). Эти же антибиотики использовати в сочетании с иммуномодулятором, который применяли в течение первых трех дней лечения.

Контроль эффективности применяемых схем осуществляли с использованием серологического и бактериологического прижизненных методов диагностики через 7, 14 и 20 дней после лечения и 1.7 и 21 день после заражения в опыте по изучению схем профилактики.

Анализ полученных данных показал, что применение для профилактики и лечения при ассоциативном респираторном микоплазмозе цыплят-бройлеров антибактериальных препаратов ципрофлоксацина и тилозина тартрата в сочетании с пробиотиком "Астра-2" позволило снизить уровень инфицированности микоплазмами на 90 -100%, кишечной палочки на 80 -100%, по сравнению с контрольной зараженной группой Использование же данных антибиотиков с иммуномодулятором - снизило уровень инфицированное™ микоплазмами на 80 - 90%, а кишечной папочки на 30 -50%.

Применение предлагаемых серологических и бактериологических методов диагностики позволило контролировать эффективность лечебно-профилактических мероприятий

2.6. Изучение схем лечения кур-несутек и петухов родительского стада при спонтанном респираторном микоплазмозе в экспериментальных условиях

В опыте использовати спонтанно зараженную птицу с положительными результатами серологических и бактериологических исследований, из которой были скомплектованы контрольная и 3 опытных группы по 6 голов кур-несушек и петухов в каждой Для лечения в течение пяти дней применяли препараты из разных фармакологических групп, с учетом их активности in vitro, энрофлоксацин (1 Омг/кг массы), фармазин и тиамулин (50 мг/кг массы) Контроль эффективности применяемых схем лечения осуществляли с использованием серологического и бактериологического прижизненных методов диагностики через 7. 14 и 40 дней после лечения.

На основании проведенных исследований с помощью бактериологического метода установлено, что использование дом лечения петухов фар-мазина и тиамулина при респираторном микоплазмозе способствовало элиминации возбудителя из их организма в течение первых 14 дней после лечения Тогда как применение энрофлоксацина лишь уменьшило количество инфицированных петухов на 73%, по сравнению с контролем. Однако через 40 дней после лечения микоплазмоносительство вновь было выявлено во всех опытных группах, что указывает на повторное заражение возбудителем через 40 дней после применения антибиотиков (рис 2)

через 7 дней через 14 дней через 40 дней после лечения после лечении после лечения

□ контрольная □ 1 опытная Я 2 опытная ■ 3 опытная |____

Рис 2 Контроль эффективности печения петухов, спонтанно инфицированных М %а11иериснт с применением бактериологического \temoda исследования спермы

Использование антибиотиков не оказато отрицательного влияния на качество спермы петухов, оплодотворяемость и выводимость яиц Применение для лечения кур-несушек фармазина и тиамулина позволило снизить уровень их инфицированное™ микоплазмами в течение первых 14 дней после применения антибиотиков на 83%. а применение энрофлоксацина - на 67%. по сравнению с контролем, где микоплазмоносительство было выявлено в 100% случаях.

2.7. Испытание наиболее эффективной и рациональной схемы

деконтаминации яиц в производственных условиях

Наиболее эффективная схема экспериментальных исследований (обработка яиц перед инкубацией раствором фармазина методом прямого перепада температур) была испытана в производстве в сравнении со схемой, применяемой в базовом хозяйстве института (обработка парами формальдегида) на 2000 инкубационных яиц в каждой группе Сбор яйца на инкубацию проводили в течение семи дней от птицы спонтанно инфицированной М §аШзерйсит. Контроль эффективности применяемых схем проводили с применением прижизненного серологического и бактериологического методов диагностики цыплят, полученных из обработанных яиц, в одно- и семидневном возрасте. Обследовали 5% цыплят от общего поголовья.

Применение обработки яиц раствором фармазина обеспечило получение молодняка свободного от возбудителя респираторного микоштазмо-за Выводимость яиц составила 84,3%, вывод цыплят - 80%. Тогда как у цыплят, полученных из яиц обработанных парами формальдегида, культуры микоплазм были выделены в 13% случаях, выводимость яиц составила 83%, вывод цышгят - 75%.

2.8. Испытание разработанных схем профилактики и лечения цыплят-бройлеров при ассоциативном респираторном микоплазмозе

в производственных условиях

Профилактику болезни проводили согласно схеме опыта (табл. 2).

Таблица 2

Испытание схем профилактики при ассоциативном респираторном микоплазмозе цыплят-бройтеров в производственных условиях

Группы Кол-во, гол. Схема профилактики

возраст, дней препарат доза

Контрольная (по схеме хозяйства) 300 300 1-3 энроксил 10 мг/кг массы

16-18 ципрофлоксацин 10 мг/кг массы

28-30 ципрофлоксацин 10 мг/кг массы

1 опытная 1-42 "Астра-2" 1кг/тонну корма

28-30 ципрофлоксацин 10 мг/кг массы

2 опытная 300 1-42 "Астра-2" 1кг/тонну корма

28-30 тилозина тартрат 50 мг/кг массы

Контроль эффективности применяемых схем профилактики осуществляли с использованием серологического и бактериологического прижизненных методов диагностики в возрасте 32. 38 и 42 дней, исследовали 5% от поголовья.

Анализ полученных данных показал, что применение испытуемых схем (1 и 2 опытные группы) позволило повысить сохранность бройлеров соответственно до 99 и 98.7% и получить здоровый молодняк Использование пробиотика "Астра-2"сократило кратность дачи антибактериальных препаратов до одного раза за период выращивания бройлеров Сохранность в контрольной группе (по схеме хозяйства) составила 95,7%, а ми-котазмоноситсльство выявлено у 13.3% цыплят При использовании опытных схем был предотвращен экономический ущерб на сумму 22128 и 22024 руб.. экономический эффект на один рубль затрат составил 2,3 рубля (в расчете на 300 голов).

Для испытания схем лечения при ассоциативном респираторном ми-коплазмозе в производственных условиях было сформировано 3 группы из цыплят-бройлеров, спонтанно инфицированных микоплазмами и кишечной пачочкой, по 550 голов в каждой Для лечения в течение 5 дней применяли ципрофлоксахдин (10 мг/кг массы) в 1-ой опытной группе и ти-лозина тартрат (50 мг/кг массы) во 2-ой в сочетании с пробиотиком, который применяли от начала лечения до 42-х дней. Контролем служила группа, где лечение цыплят проводили по схеме хозяйства (энроксил в течение 5 дней) Контроль эффективности, применяемых схем лечения, осуществляли с использованием серологического и бактериологического прижизненных методов диагностики в возрасте 37 и 42 дней, исследовали 5% от поголовья.

На основании клинических и лабораторных методов контроля эффективности применяемых схем (табл 3) наилучшие результаты при лечении ассоциативного микоплазмоза у цыплят-бройлеров были получены в 1-ой опытной группе, где применяли ципрофлоксацин и пробиотик.

Таблица 3

Бактериологический и серологический контроли эффективности испытуемых схем лечения цыплят-бройлеров при ассоциативном _респираторном микоплазмозе в производственных условиях

Группы Возраст Количество цыплят-бактерионосителей, % Количество серопози-тивных цыплят, %

птицы, М даШяерЬ- Е. сок СКРА ИФА

дней сшп % Ср ТИ'ф

Контрольная (по 37 26,7 26,7 6,7 - -

схеме хозяйства) 42 26,7 33,3 53,3 73,3 1424±239

1 опытная 37 6,7 0 - -

42 6,7 0 0 0 288±45

2 опытная 37 6,7 26,7 0 - -

42 6,7 26,7 0 0 202±48

Примечание: «-» исследование не проводили

Применение данной схемы повысило сохранность бройлеров на 2% и снизило количество цыплят микоплазмоносителей на 20% по сравнению со схемой применяемой в хозяйстве При этом был предотвращен экономический ущерб на сумму 39519 руб.. экономический эффект на один рубль затрат составил 11,7 руб.

2.9. Испытание схем профилактики респираторного микоплазмоза на птице родительского стада в производственных условиях

Для проведения опыта из птицы 120-126 дневного возраста было скомплектовано три группы, по 800 голов в каждой. С целью профилактики болезни птице в течение 5 дней ежемесячно применяли в 1 ой опытной группе ципрофлоксацин (10 мг/кг массы), во 2-ой - тилозина тартрат (50мг/кг массы). Контролем служила группа, где профилактику болезни проводили по схеме хозяйства - биовит (5 кг/т корма) 1 раз в 15 дней.

Контроль эффективности применяемых схем осуществляли с применением серологического и бактериологического методов диагностики через 14 дней после дачи антибиотиков. Исследовали 3% от поголовья.

По результатам серологического исследования микоплазмозные антитела в ИФА регистрировались в контрольной группе у 26% птицы в 156 дней, а к 249 дням количество серопозигивной птицы увеличилось и составляло 100% Тогда как в 1-ой и 2-ой опытных группах антитела в диагностических титрах регистрировали у птицы лишь в возрасте 212 и 249 дней. При этом количество реагирующей птицы в ИФА в эти сроки было соответственно на 87-80% и 93-87% ниже, чем в контроле (табл. 4).

Таблица 4

Серологический контроль эффективности испытуемых схем профилакти-

ки респираторного микоплазмоза на птице родительского стада

Количество серопозитишюй птицы, %

156 дней 184 дня 212 дней 249 дней

Группы <f ИФА <г ИФА < ИФА < ИФА

си М и % ср титр Си и % ср. титр « а % ср титр Рч « и % ср титр

Контрольная 13 26 976 ±284 40 53 2198 ±453 53 100 3469 ±272 100 100 4995 ±329

1 опытная 0 0 0 0 0 0 7 13 812 ±62 7 20 1001 ±88

2 опытная 0 0 0 0 0 0 0 7 1030 ±76 7 13 1103 ±111

При прижизненном бактериологическом исследовании соскобов с гортани от птицы 1 -ой и 2-ой групп культуры микошазм были изолированы лишь в возрасте 212 и 249 дней соответственно от 13.3 и 20% птицы.

ны лишь в возрасте 212 и 249 дней соответственно от 13.3 и 20% птицы Тогда как в контрольной группе они были выделены уже в возрасте 156 дней от 26.7% птицы, в 184 дня - от 60% и в 212 и 249 дней - от 100%

Таким образом, применение ципрофлоксацина и тилозина тартрата на птице родительского стада по разработанным схемам повысило сохранность. яйценоскость кур-несушек и снизило количество птиц-микоплазмоносителсй. по сравнению со схемой применяемой в хозяйстве Был предотвращен экономический утцерб на сумму 72199 и 58674 руб, экономический эффект на один рубль затрат составил 20,8 руб в первом случае и 10,2 руб. во втором (в расчете на 800 голов).

Выводы

1. Основной путь передачи М gallisepticum трансовариатъный и контактный. Куры-несушки и петухи являются скрытыми носителями возбудителя и главным источником инфекции для потомства, при этом петухи выделяют микоплазмы со спермой. У молодняка респираторный мико-плазмоз чаще носит ассоциативный характер Среди выделенных ассоциаций в 72 % случаев превалирует микоплазмоз осложненный эшерихиозом

2 Выделенные полевые культуры М. gallisepticum в 90% случаев чувствительны к тиамулину, в 86% - к фармазину и тилозину тартрату. в -76- 80% к ципрофлоксацину. энроксилу и энрофлоксацину. Полевые культуры Е. coli в 89% случаев чувствительны к гентамицину, в 84, 64 и 60% — к ципрофлоксацину. энроксилу и энрофлоксацину соответственно.

3 Разработанные схемы профилактики и лечения, включающие де-контаминацию яиц перед инкубацией, использование антибактериальных препаратов на птице родительского стада, а также применение их в сочетании с пробиотиком на цыплятах-бройлерах в экспериментальных условиях снижают уровень инфицированное™ микоплазмами кур-несушек на 83%. петухов на 67-73% и цыплят бройлеров на 90-100%

4 Применение в производственных условиях ципрофлоксацина и тилозина тартрата на птице родительского стада повышает сохранность на 4.9 и 5,3% соответственно, яйценоскость кур-несушек на 3,8 и 0.6% и снижает количество птиц-микоплазмоносителей на 80 и 87%, по сравнению со схемой применяемой в хозяйстве.

5. Обработка яиц перед инкубацией раствором фармазина методом прямого перепада температур (с +38 до +5°С) обеспечивает полную де-контаминацию их от микоплазм. повышает выводимость яиц на 1.3%о и вывод цыплят на 5%.

6 Использование в производственных условиях для профилактики ассоциативного респираторного микоплазмоза цыплят-бройлеров в возрасте 28-30 дней ципрофлоксацина в одном, и тилозина тартрата во втором случаях в сочетании с пробиотиком "Астра-2" повышает сохранность

до 99 и 98.7% соответственно, сокращает кратность дани антибактериальных препаратов до одного раза Применение с лечебной целью ципроф-локсацина и пробиотика "Астра-2". повышает сохранность на 2% и снижает количество цыплят микоплазмоносителей на 20%.

7 Контроль эффективности разработанных схем профилактики и лечения необходимо проводить с помощью серологических СКРА, ИФА и бактериологического методов диагностики. При этом качественные и количественные показатели серологических методов являются ориентировочными, а бактериологический с использованием элективных питательных сред выявляет остаточное микоплазмоносительство у птиц, что позволяет вносить корректировку в схемы.

8 Применение в производственных условиях разработанных схем лечебно-профилактических мероприятий при респираторном микоплазмозе птиц и его ассоциации с эшерихиозом снижает фактический ущерб от болезни: на молодняке от 1066 до 1843 руб. в расчете на 300 голов, на родительском стаде от 9229 до 2500 руб. в расчете на 800 голов. При этом экономический эффект составляет на молодняке от 2,3 до 11,7 руб., на родительском стаде от 10,2 до 20,8 руб на один рубль затрат.

Практические предложения

Ветеринарной практике предложены рациональные схемы профилактики и лечения респираторного и ассоциативного микоплазмоза птиц, и методы лабораторного контроля их эффективности, которые подробно изложены в методических рекомендациях "Комплексная система мер борьбы и профилактики с ассоциативным респираторным микоплазмозом птиц", одобренных Центром научного обеспечения АПК Омской области при Министерстве сельского хозяйства Омской области от 21.10.2005 года № 6 и подсекцией "Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока" отделения ветеринарной медицины СО РАСХН от 25 10 2005г № 6 Данные рекомендации могут быть использованы ветеринарными специалистами птицефабрик и производственных ветеринарных лабораторий.

Материалы диссертации могут бьггь использованы при написании соответствующих разделов учебных руководств, наставлений, инструкций по респираторному микогтлазмозу птиц и его ассоциациям, а также в учебном процессе на кафедрах микробиологии, эпизоотологии и болезней птиц в высших и средних зооветеринарных учебных заведениях.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Ассоциативный респираторный микоплазмоз птиц / О А Сунцова. А.П. Красиков. С.Б. Лыско [и др.] // Актуальные проблемы обеспечения санитарно-эпидемиологического благополучия населения • материалы IV Международной научно-практической конференции, посвященной 60-летию кафедры эпидемиологии и 80-летию кафедры микробиологии Ом-ГМА (13-14 ноября 2003 года) - Т. 1 - Омск, 2003 - С. 260-264

2. Мониторинг эпизоотической обстановки по инфекционным болезням птиц в Западно-Сибирском регионе и Алтайском крае / А П Красиков, Н.В. Рудаков, С.Б. Лыско [и др.] // Роль ветеринарного образования в подготовке специалистов агропромышленного комплекса • сб. науч. тр -Омск, 2003.-С 163-171.

3. Производственные испытания питательных сред для диагностики мшеоплазмоза животных и птиц / А.П Красиков, Н.В. Рудаков, С Б. Лыско [и др.] // Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов • материалы Международной научно-практической конференции (24-25 апреля 2003 г.) - Щелково. 2003. - С. 92-95

4. Эпизоотические и лабораторно-диагностические аспекты респираторного микошазмоза птиц / А.П. Красиков, Н.В. Рудаков, С Б. Лыско [и др ] // Роль ветеринарного образования в подготовке специалистов агропромышленного комплекса : сб науч. тр. - Омск, 2003. - С. 160-163.

5. Лыско, С Бактериальные ассоциации при респираторном мико-штазмозе / С. Лыско // Птицеводство. - 2004. - № 5. - С. 16

6. Лыско, С.Б. Бактериальные ассоциации при респираторном мико-плазмозе птиц / С.Б. Лыско // Ветеринарный консультант - 2004. - № 6 -С. 18-19.

7. Красиков, А.П. Схемы профилактики и лечения при ассоциативном респираторном микоплазмозе птиц / А.П Красиков, С.Б. Лыско // Ветеринарный консультант. - 2005. - №3 - С. 15-16..

8. Лыско, С Б Деконтаминация куриных яиц от микоплазм / СБ. Лыско // Инновационное развитие аграрного производства в Сибири • сб материалов третьей научной конференции молодых ученых вузов "Агро-образования" Сибирского федерального округа - Т 2 - Кемерово. 2005 -С. 170-173.

9. Лыско, С.Б Эффективность химиотерапевтических препаратов в отношении полевых культур, выделенных от птиц /СБ Лыско. Н.Ф Хатько, O.A. Сунцова // Био - 2005. - № 6. - С 10-11

10. Хатько, Н.Ф О патоморфологической диагностике ассоциированных форм микоплазмоза птиц / Н Ф. Хатько. С Б. Лыско. О А Сунцова // 1-й международный ветеринарный конгресс по птицеводству (18-22 апреля 2005 г.) -Москва 2005.-С 174-178

Лыско Светлана Борисовна

СХЕМЫ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ РЕСПИРАТОРНОГО И АССОЦИАТИВНОГО МИКОПЛАЗМОЗА ПТИЦ

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Подписано в печать 22.12.2005 Формат 60 х 84 1/16. Гарншура Times New Roman Печ. л. 1,2. Печать оперативная. Тираж 100 экз.

ФГОУ ВПО «Омский государственный аграрный университет» ГНУ «Сибирский НИИ птицеводства» РАСХН

Отпечатано с оригинал-макета в типографии ООО "Вариант-Омск" 644043 г. Омск, ул. Коммунистическая, 45. Тел: 25-14-34

ЛШГА

сf/f

Актуальность темы. Концентрация большого количества птицы на ог-® раниченных площадях, поточная система выращивания, искусственный микроклимат, нарушения технологии содержания, кормления и влияние других стрессовых факторов привели к снижению общей резистентности организма птицы и обусловили постоянное пассирование через ее организм условно-патогенной микрофлоры, повышение ее вирулентности. Именно на этом фоне широкое распространение получили такие болезни, как респираторный мико-щ плазмоз, а также болезни, вызываемые условно-патогенной микрофлорой эшерихиоз, стафилококкоз, стрептококкоз и др.

В период с 1950 по 1970 годы респираторный микоплазмоз птиц был за-^ регистрирован во многих странах: в Италии, в США (Osteen О., 1956), Дании

Marthedal Н.Е., 1969), во Франции (Tournut J., Espinase J., 1969), в Болгарии (Чечнев И., Обрешков К., Шишков Н., 1966), в Индии (Rao К., 1969), в Японии (Ando К., 1969). В России первые случаи микоплазмоза были установлены в 1959 г (Коваленко Я.Р., 1960; Грошева Г.А., 1966).

В настоящее время проблема респираторного микоплазмоза остается ак-# туальной для птицеводческих хозяйствах. В результате ретроспективных исследований, проведенных во ВНИИЗЖ за последние 5 лет, установлено, что из 250 птицефабрик России и стран СНГ в 221-ой птица была инфицирована М. gallisepticum, что составило 88% (Гирин М.В., 2004). По данным A.C. Серебрякова с соавт. (1970), S.L. Branton, J.W. Deaton (1984), Г.Ф. Коромыслова (1987), Б.Ф. Бессарабова, И.И. Мельникова (2001), D.N. Ley, H.W. Yoder (2003) экономический ущерб от респираторного микоплазмоза складывается из: летальности цыплят (20 - 80%), взрослых птиц (4 - 6%), гибели эмбрионов (8 - 30%), снижения яйценоскости (10 - 50%), привесов молодняка (13 - 16%), задержки роста и выбраковки цыплят (50 - 75%). ® В большинстве случаев микоплазмоз протекает в ассоциации с другими инфекциями, что создает сложную эпизоотическую ситуацию на птицефабриках, при этом болезнь протекает в более тяжелой форме, увеличивается летальность птицы (Glisson J.R., 1988; Nakamura К., 1994; Гусев B.C. с соавт., 2003; Садовников Н.В., 2003; Мандрусова Т.А., 2003; Андреева H.JI., 2004 и др.). Кроме того, ассоциативное течение инфекции затрудняет диагностику болезни и снижает эффективность лечебно-профилактических мероприятий.

Вопросам борьбы и профилактики с РМП посвящены работы многих отечественных и зарубежных исследователей. Ряд исследователей для профилактики РМП предлагает использовать живые и инактивированные вакцины (Adler H.Е., Мс Martin D., 1960; Fabricant J., Levin P., 1962; Adler H.E., 1970; Прокофьева M.T. с соавт., 1972; Branton S.L., Deaton J.W., 1985; Glisson J.R., Kleven S.H., 1984; Branton S.L., 1988; Зоткин Г.В. с соавт., 2004; Белкин В.А., 2004). Другие с этой целью предлагают использовать разные методы обработки химиотера-певтическими средствами кур-несушек, петухов, молодняка и яиц, предназначенных для инкубации (Антонова М.Е., 1966; Чечнев И. с соавт., 1966; Прокофьева М.Т. с соавт., 1966; Фомина А.Я., Серебряков A.C., Грошева Г.А., 1968; Yoder H.W., 1970; Kempf I., 1992; Jordan F.T., 1993; Tanner A.C., 1993; Башкиров О.Г., 1999; Елесеева Е., 2003; Борисенкова А.Н., 2003, 2004; Колобов Е.А., 2004; Климов A.A., 2004; Зоткина Г.В. с соавт., 2004 и др.).

В результате проведенных опытов исследователи пришли к заключению, что применение противомикоплазмозных препаратов и вакцин оказывает определенный терапевтический эффект, позволяет снизить заболеваемость РМП и профилактировать появление новых случаев заболевания кур в стаде, снижает передачу M. gallisepticum с яйцом, но полностью возбудителя не уничтожает.

В настоящее время с профилактической и терапевтической целью при респираторном микоплазмозе птиц применяют антибиотики широкого спектра действия. Однако бессистемное применение их в производстве, без учета всех членов ассоциации, участвующих в инфекционном процессе, и чувствительности возбудителей к лекарственным препаратам зачастую не позволяет добиться желаемых результатов. Одним из отрицательных моментов применения антибиотиков является возникновение у птиц дисбактериозов и развитие антибиотикорезистентности у микроорганизмов. Поэтому одним из перспективных направлений является использование пробиотикотерапии.

В связи с изложенным выше, на данном этапе развития птицеводства весьма актуальным остается вопрос о разработке рациональных, технологичных схем профилактики, лечения респираторного и ассоциативного микоплаз-моза птиц с учетом всех сочленов ассоциации микроорганизмов, участвующих в инфекционном процессе, с обязательными лабораторными методами контроля их эффективности.

Цель исследований. Разработать рациональные схемы профилактики, лечения респираторного и ассоциативного микоплазмоза птиц и методы лабораторного контроля их эффективности.

Задачи исследований.

1. Изучить эпизоотическую ситуацию по респираторному микоплазмозу птиц и его ассоциациям на птицефабриках Омской области.

2. В экспериментальных условиях на инкубационном яйце, цыплятах, курах-несушках и петухах изучить схемы профилактики, лечения респираторного и ассоциативного микоплазмоза птиц.

3. Разработать бактериологические и серологические методы контроля эффективности применяемых схем.

4. Испытать наиболее эффективные рациональные схемы профилактики, лечения респираторного и ассоциативного микоплазмоза птиц в производственных условиях, дать им экономическое обоснование.

Научная новизна. Установлено широкое распространение респираторного микоплазмоза среди птицы разных половозрастных групп, проявляющегося чаще в ассоциированных формах с эшерихиозом у молодняка на птицефабриках Омской области. Впервые в условиях Омской области показано, что куры репродуктивного стада могут заражаться через сперму, контаминированную микоплазмами, в том числе и при искусственном осеменении. Разработаны научно и экономически обоснованные рациональные схемы профилактики и лечения респираторного и ассоциативного микоплазмоза птиц на всех этапах производства (инкубация яиц, выращивание цыплят-бройлеров и кур родительского стада), а также серологические и бактериологический методы контроля их эффективности.

Теоретическая и практическая значимость работы.

Материалы исследований дополняют концепцию о полиэтиологической роли микроорганизмов, участвующих в ассоциативном инфекционном процессе.

Предложены для применения в практике схемы профилактики и лечения при ассоциативном респираторном микоплазмозе цыплят-бройлеров, повышающие сохранность и продуктивность молодняка. Использование в них про-биотика позволяет сократить кратность применения антибиотиков на птицефабриках.

Применение предложенных схем обработки кур родительского стада в сочетании с глубинной обработкой инкубационного яйца позволяет снизить количество птиц-микоплазмоносителей, повысить сохранность, продуктивность кур и выводимость яиц.

Использование предлагаемых лабораторных методов позволяет контролировать эпизоотическую ситуацию по данной инфекции и вносить корректировку в применяемые схемы лечения и профилактики.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на: научно-практической конференции "Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов" (ВНИТИБП, Щелково, 2003); IV международной научно-практической конференции, посвященной 60-летию кафедры эпидемиологии и 80-летию кафедры микробиологии ОмГМА (Омск, 2003); ежегодных научных конференциях профессорско-преподавательского состава и аспирантов ФГОУ ВПО ОмГАУ (ИВМ ОмГАУ, Омск, 2004-2005); межрегиональной научно-практической конференции "Современные проблемы ветеринарной медицины" (ВНИИБТЖ, Омск, 2004); ученых советах ГНУ Сиб-НИИП РАСХН (Морозовка, 2003-2005); ветеринарном конгрессе по птицеводству (Новосибирск, 2004); третьей научной конференции молодых ученых вузов "Агрообразования" Сибирского федерального округа "Инновационное развитие аграрного производства в Сибири" (Кемерово, 2005); 1-ом международном ветеринарном конгрессе по птицеводству (Москва, 2005).

Публикации результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 10 печатных работ, в которых изложены основные положения диссертации.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 130 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений и приложения. Список использованной литературы включает 189 наименований, в том числе 57 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 25 таблицами и 16 рисунками.

ВЫВОДЫ

Основной путь передачи М. gallisepticum трансовариальный и контактный. Куры-несушки и петухи являются скрытыми носителями возбудителя и главным источником инфекции для потомства, при этом петухи выделяют микоплазмы со спермой. У молодняка респираторный микоплаз-моз чаще носит ассоциативный характер. Среди выделенных ассоциаций в 72 % случаев превалирует микоплазмоз осложненный эшерихиозом. Выделенные полевые культуры М. gallisepticum в 90% случаев чувствительны к тиамулину, в 86% - к фармазину и тилозину тартрату, в - 7680%) к ципрофлоксацину, энроксилу и энрофлоксацину. Полевые культуры Е. coli в 89%) случаев чувствительны к гентамицину, в 84, 64 и 60% - к ципрофлоксацину, энроксилу и энрофлоксацину соответственно. Разработанные схемы профилактики и лечения, включающие деконтами-нацию яиц перед инкубацией, использование антибактериальных препаратов на птице родительского стада, а также применение их в сочетании с пробиотиком на цыплятах-бройлерах в экспериментальных условиях снижают уровень инфицированности микоплазмами кур-несушек на 83%, петухов на 67 - 73% и цыплят бройлеров на 90 - 100%. Применение в производственных условиях ципрофлоксацина и тилозина тартрата на птице родительского стада повышает сохранность на 4,9 и 5,3%) соответственно, яйценоскость кур-несушек на 3,8 и 0,6% и снижает количество птиц-микоплазмоносителей на 80 и 87%, по сравнению со схемой применяемой в хозяйстве.

Обработка яиц перед инкубацией раствором фармазина методом прямого перепада температур (с +38 до +5°С) обеспечивает полную деконтамина-цию их от микоплазм, повышает выводимость яиц на 1,3% и вывод цыплят на 5%.

Использование в производственных условиях для профилактики ассоциативного респираторного микоплазмоза цыплят-бройлеров в возрасте 28

30 дней ципрофлоксацина в одном, и тилозина тартрата во втором случаях в сочетании с пробиотиком "Астра-2" повышает сохранность до 99 и 98,7% соответственно, сокращает кратность дачи антибактериальных препаратов до одного раза. Применение с лечебной целью ципрофлоксацина и пробиотика "Астра-2", повышает сохранность на 2% и снижает количество цыплят микоплазмоносителей на 20%.

7. Контроль эффективности разработанных схем профилактики и лечения необходимо проводить с помощью серологических СКРА, ИФА и бактериологического методов диагностики. При этом качественные и количественные показатели серологических методов являются ориентировочными, а бактериологический с использованием элективных питательных сред выявляет остаточное микоплазмоносительство у птиц, что позволяет вносить корректировку в схемы.

8. Применение в производственных условиях разработанных схем лечебно-профилактических мероприятий при респираторном микоплазмозе птиц и его ассоциации с эшерихиозом снижает фактический ущерб от болезни: на молодняке от 1066 до 1843 руб. в расчете на 300 голов, на родительском стаде от 9229 до 2500 руб. в расчете на 800 голов. При этом экономический эффект составляет на молодняке от 2,3 до 11,7 руб., на родительском стаде от 10,2 до 20,8 руб. на один рубль затрат.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Ветеринарной практике предложены рациональные схемы профилактики и лечения респираторного и ассоциативного микоплазмоза птиц, и методы лабораторного контроля их эффективности, которые подробно изложены в методических рекомендациях "Комплексная система мер борьбы и профилактики с ассоциативным респираторным микоплазмозом птиц", одобренных Центром научного обеспечения АПК Омской области при Министерстве сельского хозяйства Омской области от 21.10.2005 года № 6 и подсекцией "Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока" отделения ветеринарной медицины СО РАСХН от 25.10.2005г. № 6. Данные рекомендации могут быть использованы ветеринарными специалистами птицефабрик и производственных ветеринарных лабораторий.

Материалы диссертации могут быть использованы при написании соответствующих разделов учебных руководств, наставлений, инструкций по респираторному микоплазмозу птиц и его ассоциациям. А также в учебном процессе на кафедрах микробиологии, эпизоотологии и болезней птиц в высших и средних зооветеринарных учебных заведениях.

1.5. Заключение

Таким образом, из проведенного обзора следует, что респираторный ми-коплазмоз широко распространен во всем мире и занимает далеко не последнее место в ряду инфекционных болезней птиц.

Основной экономический ущерб от респираторного микоплазмоза у молодняка складывается из следующих показателей: летальность цыплят от 5-10% до 50% при осложнениях вторичной инфекцией, цыплята отстают в росте и развитии, увеличивается процент выбраковки птицы до 50-75%, повышаются затраты корма, увеличивается срок откорма бройлеров. У взрослой птицы ми-коплазмоз чаще протекает бессимптомно, поэтому широко распространяется через инфицированное возбудителем яйцо. Заболевание взрослой птицы чаще регистрируется в период начала яйцекладки и сопровождается снижением продуктивности, увеличением количества неоплодотворенных яиц, гибелью эмбрионов, снижением выводимости цыплят. Помимо трансовариальной передачи возбудителя возможен аэрогенный и контактный пути передачи инфекции.

Возникновению болезни способствуют нарушения ветеринарно-санитарных условий содержания, кормления, стресс факторы, обуславливаю

• щие снижение естественной резистентности организма.

Микоплазмоз тормозит образование поствакцинального иммунитета против болезни Ньюкасла, инфекционного ларинготрахеита и бронхита. Является типичной хронической инфекцией с присущей ей длительной персистенцией возбудителя в организме. При этом микоплазмы способны сохранять жизнеспособность в фагоцитах и оказывать повреждающее действие на макрофаги, что приводит к нарушению их функции и снижению резистентности организма. При этом микоплазмы вступают в синергические отношения с вирусной, бактериальной и условно-патогенной микрофлорой. Создаются благоприятные условия для развития микоплазмоза, при этом болезнь протекает в более тяжелой форме, увеличивается летальность птицы.

Анализ данных отечественной и зарубежной литературы в отношении различных методик индикации и идентификации микоплазм показывает, что в основном современная диагностика микоплазмоза основывается на бактериологических, иммунологических и серологических методах. Полученные первичные изоляты на специальных питательных средах для роста микоплазм подвергают дальнейшим исследованиям с помощью экспресс-методов: реакции имму-нофлюоресценции (РИФ), иммуноферментного анализа (ИФА), моноклональ-ных антител (МАТ) или поликлональных антител (ПАТ), ДНК-зондов, ПЦР.

В племенных птицеводческих хозяйствах для организации мероприятий, направленных на ликвидацию респираторного микоплазмоза и получение здорового потомства, необходимо прижизненное выявление латентной инфекции у взрослой птицы и носительства возбудителя у клинически здоровых кур. Для массовой диагностики респираторного микоплазмоза наиболее широко применяют серологические методы: сывороточно- и кровекапельная РА, РИГА, ИФА.

Различная активность химиотерапевтических препаратов в отношении микоплазм, способность микроорганизмов приобретать лекарственную устойчивость к антибиотикам, разработка и внедрение новых препаратов создают необходимость постоянного контроля чувствительности микоплазм к антибактериальным препаратам, как единственный способ для выбора наиболее эффективных.

Основным методом профилактики остается охрана хозяйств от заноса в них данной болезни. В хозяйствах, где имеет место микоплазмоз, в целях снижения экономических потерь следует проводить лечебно-профилактические мероприятия с применением химиотерапевтических препаратов. Применение лекарственных веществ при микоплазмозе целесообразно, если одновременно с этим будут созданы надлежащие условия содержания птиц. В противном случае расход лекарств и все затраты окажутся бесполезными. Всегда необходимо помнить о том, что применением антибиотиков, вакцин можно снизить заболеваемость, однако ликвидировать заболевание в хозяйстве не удается.

При назначении антибактериальных препаратов необходимо учитывать возможность образования устойчивых рас микоплазм к применяемому препарату, поэтому следует определять чувствительность культур микоплазм к препаратам в каждом конкретном случае. Микоплазмоз часто протекает в ассоциации с другими инфекциями, что затрудняет диагностику болезни и снижает эффективность лебно-профилактических мероприятий. В связи с чем, основные мероприятия должны быть направлены не только на сопутствующую инфекцию, которая легче диагностируется, но и прежде всего на основное заболевание - микоплазмоз.

Применять антибиотики с целью профилактики микоплазмоза бройлеров целесообразно посредством обработки кур маточного стада и инкубационных яиц, а не самих цыплят. Однако данные мероприятия не позволяют полностью исключить микоплазмоносительство и заболевание возникает у цыплят. Применение антибиотиков на цыплятах должно сводиться к минимуму и быть рациональным, так как мясо цыплят - это продукция птицеводства, поступающая в пищу людям.

Для уменьшения кратности дачи антибактериальных препаратов и повышения общей резистентности организма птиц к инфекциям, для получения экологически чистой продукции помимо антибактериальных препаратов целесообразно применять пробиотики и иммуномодуляторы. Комплексное применение всех выше перечисленных методов окажется, по-видимому, наиболее эффективным в борьбе с респираторным микоплазмозом птиц.

В связи с изложенным выше, на данном этапе развития птицеводства весьма актуальным остается вопрос о разработке рациональных, технологичных схем профилактики, лечения респираторного и ассоциативного микоплаз-моза птиц с учетом всех сочленов ассоциации микроорганизмов, участвующих в инфекционном процессе, с обязательными лабораторными методами контроля их эффективности.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследования

Исследования проводились с 2002 по 2005 год в лаборатории ветеринарии "Сибирского НИИ птицеводства" и ЭПХ "Сибирского НИИ птицеводства", в лаборатории микст инфекций кафедры эпизоотологии ИВМ ОмГАУ.

Тема диссертационной работы является составной частью плана научно-исследовательской работы, проведенной ГНУ "Сибирский НИИ птицеводства" в соответствии с программой фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития агропромышленного комплекса РФ на 2001-2005 гг. задание 07. "Разработать новые и усовершенствовать существующие средства диагностики, терапии, специфической профилактики инфекционных и паразитарных болезней для обеспечения ветеринарного благополучия промышленного птицеводства" и самостоятельным разделом комплексной государственной программы ИВМ Омского ГАУ "Профилактика (диагностика) и меры борьбы с ассоциативными инфекционными и инвазионными болезнями животных и птиц", номер государственной регистрации 01.2.001100602.

Объектом исследования были инкубационные яйца, эмбрионы, цыплята-бройлеры и куры разных половозрастных групп. В опытах было использовано: 4140 инкубационных яиц, 2680 цыплят-бройлеров в возрасте 1-42 дня и 2448 голов взрослых кур кросса "Сибиряк".

На первом этапе работы изучали эпизоотическую ситуацию по респираторному микоплазмозу птиц и его ассоциациям на птицефабриках Омской области, закономерности проявления инфекционного и эпизоотического процессов. При этом использовали эпизоотологический, клинический, бактериологический, серологический и патологоанатомический методы диагностики.

Одновременно с исследованием на респираторный микоплазмоз и сопутствующую микрофлору определяли чувствительность выделенных полевых культур к лекарственным препаратам in vitro.

Материалом для прижизненного исследования служили пробы крови, сыворотка крови, спермы, соскобов со слизистой оболочки гортани. Для посмертного - кусочки легкого и стенки воздухоносных мешков, головной мозг, семенники, пораженные паренхиматозные органы. У эмбрионов исследовали хориоа-лантоисную жидкость и желток.

Кровь брали из подкрыльцовой вены, в пробирки Флоринского, смоченные физиологическим раствором. Сыворотку получали по общепринятой методике. Соскобы со слизистых оболочек брали стерильным хирургическим полым зондом на транспортную среду, представляющую собой питательную среду для микоплазм без ингибиторов и субстрата ферментативной активности.

Посевы из пораженных органов делали по общепринятой в микробиологии методике на простые (МПБ, МПА) и специальные среды для выделения микоплазм: бульон Хоттингера, обогащенный 1% глюкозы и 20% нормальной лошадиной сывороткой,жидкую и плотную среды с глюкозой, разработанные нами совместно с НИИПИ (Научный исследовательский институт природно-очаговых инфекций) и ИВМ ОмГАУ согласно методическим рекомендациям "Методы диагностики ассоциативного респираторного микоплазмоза птиц", утвержденных Центром научного обеспечения АПК Омской области 8.10.2004 г.

Посевы инкубировали в аэробных условиях при температуре (37±1)°С в течение 1-7 суток. В процессе выделения и культивирования микроорганизмов на питательных средах изучали их культуральные свойства. В жидких средах определяли образование и характер осадка, а также наличие или отсутствие пристеночного кольца и поверхностной пленки. На плотных средах учитывали скорость роста, форму, рельеф, размер, поверхность и структуру колоний.

Учет роста на испытуемой жидкой среде для индикации глюкозофермен-тирующих микоплазм проводили по изменению цвета индикатора, входящего в состав среды и наличию придонного осадка.

Морфологию бактериальных клеток изучали в мазках, окрашенных по Граму и Романовскому-Гимза.

В зависимости от морфологических свойств выделенные микроорганизмы пересевали на элективные питательные среды: Эндо, висмут-сульфит-агар, Клиглера, Симмонса, желточно-солевой агар (ЖСА) для выделения чистых культур с целью последующей идентификации. Биохимические свойства выделенных культур микроорганизмов изучали при помощи тест системы ММТ Е1 согласно инструкции.

При выделении микоплазм на жидких специальных диагностических средах производили дифференциацию по одному из биохимических признаков -ферментация глюкозы. Для видовой идентификации микоплазм дополнительно изучали фосфотазную активность, редукцию тетразола, гемолиз эритроцитов.

Выделенные на жидкой среде культуры микоплазм пересевали на плотную среду с содержанием 1,3% агара Дифко для выделения глюкозоферменти-рующих микоплазм. Для этого 0,1 мл бульонной культуры микоплазм вносили пастеровской или химической пипеткой на поверхность агара без штриховки. Посевы инкубировали в микроаэрофильных условиях при температуре (37±1)°С в течение 5-7 дней. Учет роста проводили при малом увеличении микроскопа (в 40-70 раз) ежедневно, начиная с третьих суток инкубации по образованию характерных колоний (круглой формы с глубоко врастающим в агар центром и зернистой периферией). При подозрении на Ь-формы бактерий проводили 3-5 последовательных пассажей выделенных культур с трехсуточными интервалами на транспортной среде без ингибиторов для восстановления исходных форм бактерий.

Патогенность культур кишечной палочки изучали на 21-дневных цыплятах согласно наставлению по диагностике колибактериоза животных, утвержденного Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства и продовольствия Российской Федерации 27.07.2000 г. Цыплят заражали внутри-брюшинно в дозе 1,0х109 микробных тел в мл по ОСМ ГИСК им. Л.А. Тарасе-вича. Патогенной считали культуру, вызывающую гибель двух и более цыплят в течение первых трех суток после заражения.

Патогенность выделенных культур микоплазм изучали постановкой биопробы на 9-суточных куриных эмбрионах согласно наставлению по диагностике респираторного микоплазмоза птиц, утвержденного Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 28.12.1969 г. С этой целью 0,2 мл бульонной культуры вводили в хориоаллантоисную полость. Эмбрионам контрольной группы вводили равное количество стерильного физиологического раствора. Отверстия в скорлупе заливали парафином. Эмбрионы инкубировали в лабораторном инкубаторе ИЛУ-Ф-03, ежедневно просматривая на овоскопе на жизнеспособность. Гибель до 24 часов считали не специфичной. Наблюдение проводили в течение 12 дней (до окончания инкубации). Вылупившихся цыплят де-витализировали и исследовали патологоанатомическим, серологическим и бактериологическим методами.

Чувствительность выделенных полевых культур к антибактериальным препаратам (in vitro) определяли методом дисков и методом серийных разведений по общепринятой методике, утвержденной Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР 30.10.1971 г.

Для серологической диагностики на наличие антител к возбудителю респираторного микоплазмоза применяли сывороточно-капельную реакцию агглютинации (СКРА) с цветным стандартным антигеном М. gallisepticum (производства ВНИИЗЖ) и метод иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием наборов фирмы BioChec (Голландия) с инструментальным учетом результатов (спектрофотометр ELx800) и компьютерной обработкой данных.

На следующем этапе работ в экспериментальных условиях на инкубационном яйце, цыплятах-бройлерах, курах-несушках и петухах были изучены различные схемы профилактики, лечения и методы лабораторного контроля их эффективности при респираторном микоплазмозе птиц, а также при его ассоциации с эшерихиозом.

Наиболее эффективные и рациональные схемы лечения и профилактики и лабораторные методы контроля их эффективности были испытаны в производственных условиях.

Для контроля эффективности проводимых мероприятий применяли серологический и бактериологический методы диагностики микоплазмоза, описанные выше. Для бактериологического исследования в экспериментальных и производственных опытах использовали жидкие и плотные питательные среды для выделения глюкозоферментирующих микоплазм.

Экономическую эффективность определяли по методике определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий, утвержденной Департаментом ветеринарии РФ 21.02.1997 г.

Цифровые данные экспериментов обработаны методами математической статистики, принятыми в биологии и медицине с использованием программы Microsoft Excel 2000 и критериев Стыодента (Усович А.Т., Лебедев П.Т., 1970).

2.2. Изучение эпизоотической ситуации по респираторному микоплазмозу птиц и его ассоциациям на птицефабриках Омской области

Концентрация большого количества птицы на ограниченных площадях, поточная система выращивания, искусственный микроклимат, нарушения технологии содержания, кормления и влияние других стрессовых факторов, привело к снижению общей резистентности организма птицы и обусловило постоянное пассирование через ее организм условно-патогенной микрофлоры, повышению ее вирулентности. Именно на этом фоне широкое распространение получили такие болезни, как респираторный микоплазмоз, а также болезни, вызываемые условно-патогенной микрофлорой - эшерихиоз, стафилококкоз, стрептококкоз и др. В большинстве случаев микоплазмоз протекает в ассоциации с другими инфекциями, что создает сложную эпизоотическую ситуацию на птицефабриках, затрудняет своевременную диагностику и снижает эффективность лечебно-профилактических мероприятий.

Для разработки эффективных мер борьбы и профилактики с любой инфекционной болезнью необходимо знать конкретную эпизоотическую ситуацию на птицефабрике и закономерности проявления инфекционного и эпизоотического процессов.

В связи с чем, целью первого этапа наших исследований было изучить эпизоотическую ситуацию по респираторному микоплазмозу кур и его ассоциациям на птицефабриках Омской области.

Исследования по данному разделу проводились совместно с научными сотрудниками отдела ветеринарии ГНУ "СибНИИП" Н.Ф. Хатько и О.А. Сун-цовой.

Было установлено, что на птицефабриках Омской области в структуре гибели кур от инфекционных болезней за 1998 - 2002 гг. преобладал эшерихиоз (51, 92, 88, 85, 73%), тогда как за период 2003 - 2005гг. болезнь Марека (28 -47%) и лейкоз (35 - 44%), а эшерихиоз составлял от 11 до 29%. При этом от общего количества погибшей птицы от эшерихиоза на долю молодняка в возрасте

1 - 60 дней приходилось от 59 до 98%.

Респираторный микоплазмоз зарегистрирован на трех птицефабриках Омской области (Сибирская, Любинская, ЭГ1Х "СибНИИП"), Чаще всего мико-плазмоз протекал в ассоциации с эшерихиозом, стафилококкозом, реже с иас-тереллезом и реовирусным теносиновитом. Причем с каждым годом отмечается рост заболеваемости птицы микоплазмозом, вызываемым М. 5упоу1ае и М.

Мясная птица более восприимчива к микоплазмозу, чем птица яичных пород: число кур, положительно реагировавших с цветным микоплазменным антигеном достигало к 300-дневному возрасту 100% и удерживалось на этом уровне до конца жизни.

Аналогичную картину наблюдали и в ЭПХ "СибНИИП".

Анализ данных по сохранности молодняка показал, что в возрасте 1-70 дней фактическая сохранность была на 3,3% ниже, чем планируемая (рис. 1.). л н и о = М о и

100 99 98 97 96 95 94 93

98,5

1-12

13-40 41-70

Возраст, дней

71-102 Планируемая

Фактическая

Рис. I. Влияние микоплазмоза на сохранность молодняка

При этом в структуре гибели молодняка микоплазмоз в ассоциации с эше-рихиозом составил 67,3% в возрасте 13-40 дней и 36% в 41-70 дней (рис. 2.). Среди незаразных болезней регистрировали энтерит, гепатит, подагру и нефрит.

100 80 60

40

20 0

1-12 13-40 41-70 71-102

Возраст, дней □ микоплазмоз+эшерихиоз □ незаразные болезни

Рис. 2. Структура гибели молодняка от инфекционных и незаразных болезней

При вскрытии было обнаружено: фибринозный аэросаккулит, одно - и двухсторонняя очаговая пневмония, фибринозный перикардит и перигепатит. При бактериологическом исследовании были выделены патогенные культуры микоплазм и кишечной палочки.

На основании результатов серологических исследований установлено, что наибольшее количество положительно реагирующих на микоплазмоз цыплят в СКРА было зарегистрировано в суточном и 24-дневном возрастах (табл. 2.2.1.). В 50-дневном антитела к респираторному микоплазмозу отсутствовали, а к 70 дням они снова стали регистрироваться у 3% цыплят

Также наибольшее количество культур микоплазм 55 и 45% было выделено соответственно от цыплят 1 и 24-дневного возраста. Количество цыплят-микоплазмоносителей в 50 дней составляло 15%, а к 70 дням оно увеличилось до 55% (табл. 2,2.1.), Надо отметить, что культуры микоплазм были выделены как от положительно, так и отрицательно реагирующей птицы что, по-видимому, связано с высокой реактивностью птицы в первом и иммунологической толерантностью во втором случаях.