Ассоциативный урогенитальный микоплазмоз крупного рогатого скота

Вологодская, Ольга Владимировна

Диссертации по ветеринарии → Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Ассоциативный урогенитальный микоплазмоз крупного рогатого скота

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Вологодская, Ольга Владимировна Омск 2006 г.

Ученая степень: кандидата ветеринарных наук

ВАК РФ: 16.00.03

Автореферат диссертации по ветеринарии на тему Ассоциативный урогенитальный микоплазмоз крупного рогатого скота

На правах рукописи

Вологодская Ольга Владимировна

АССОЦИАТИВНЫЙ УРОГЕНИТАЛЬНЫЙ МИКОПЛАЗМОЗ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА (ДИАГНОСТИКА И ЛЕЧЕНИЕ)

16.00.03. - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с мшсотоксикологией и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Омск-2006

Работа выполнена в институте ветеринарной медицины Федерального государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Омский государственный аграрный университет»

Научный руководитель:

доктор ветеринарных наук, профессор Красиков Александр Пантелеевич

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, профессор Плешакова Валентина Ивановна

доктор ветеринарных наук Бажин Михаил Аристоклевич

Ведущее учреждение

Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока (ИЭВС и ДВ)

Защита состоится 20 декабря 2006 г. в 1230 часов на заседании диссертационного совета Д. 220.050.03 при ФГОУ ВПО «Омский государственный аграрный университет» в институте ветеринарной медицины по адресу: 644122, г. Омск-122, ул. Октябрьская, 92, тел.: 24-15-35, тел./факс.: 23-30-31 (для Н.П. Жабина). E-mail: ivm_omgau@omsknet.ru www/ omgau.ru

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Института ветеринарной медицины ОмГАУ.

Автореферат разослан « » 2006 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета, доцент

Н.П. Жабин

ЯО

2А9&А

1. Общая характеристика работы Актуальность темы.

В последние годы возросло значение в возникновении заболеваний ус-ловнопатогенных микроорганизмов, в том числе микоплазм. Микоплазмоз является типичной хронической инфекцией с присущей ей длительной персистенци-ей возбудителя в организме. При этом микоплазмы способны сохранять жизнеспособность в фагоцитах и оказывать повреждающие действие на макрофаги, что приводит к нарушению их функции и снижению резистентности организма. Вступая в синергические отношения с вирусной, бактериальной и условно-патогенной микрофлорой, микоплазмы создают условия для ее активного роста и развития, что усиливает тяжесть течения данного заболевания. (С.В. Прозоровский и др.,1997) Все это приводит к снижению продуктивности, бесплодию и яловости коров. Данная инфекционная болезнь наносит хозяйствам значительный экономический ущерб. Поэтому, следует проводить своевременную диагностику микоплазмоза в ассоциации с сопутствующими микроорганизмами с использованием экспресс-методов, что позволит выявлять больных животных, а также микробоносителей и своевременно лечить их.

Для лечения больных микоплазмозом людей животных и птиц применяют различные антибиотики. Однако бессистемное применение их без определения чувствительности возбудителей к лекарственным препаратам не позволяет добиться желаемых результатов. В настоящее время не разработаны эффективные и рациональные схемы лечения крупного рогатого скота при урогениталь-ном микоплазмозе и ассоциативных формах его проявления.

В связи с этим весьма актуальным является: выяснить распространение урогенитального миоплазмоза крупного рогатого скота с помощью экспресс-методов диагностики, а также разработать эффективные и рациональные схемы лечения крупного рогатого скота при ассоциативном урогенитальном микоплазмозе с учетом всех сочленов ассоциаций микроорганизмов, учавствующих в инфекционном процессе. Все это предопределило тему данных исследований.

Цель работы. Разработка методов диагностики и лечения при ассоциативном урогенитальном микоплазмозе крупного рогатого скота. Задачи исследований.

• Выяснить эпизоотическую ситуацию по урогенитальному мико-плазмозу крупного рогатого скота и ассоциативным формам его проявления в хозяйствах Омской области.

• Изучить культурапьные, морфологические, биохимические и патогенные свойства выделенных микоплазм.

• Изыскать экспресс-методы диагностики урогенитального микоплазмоза и испытать их в производственных условиях

• Разработать эффективные и рациональные схемы лечения коров при урогенитальном микоплазмозе и его ассоциации с другими инфекциями.

Научная новизна. Установлено широкое распространение урогениталь-ного микоплазмоза крупного рогатого скота, проявляющегося чаще в ассоциативных формах, в хозяйствах Омской области. Доказана чувствительность элективных питательных сред для индикации глюкозо- и аргинин ферментирующих микоплазм и уреаплазм крупного рогатого скота. Определены виды и основные свойства выделенных микоплазм. Получены антигены из полевых штаммов микоплазм и диагностические сыворотки для РНИФ. Предложены методы и способы индикации и идентификации возбудителей, основанные на комплексном подходе к изученшо всех сочленов микробных ассоциаций. Они легко выполнимы в лабораторных условиях, могут быть использованы для определения видовых характеристик выделяемых культур микроорганизмов. Изучена чувствительность к антибиотикам полевых культур микоплазм, на основании чего разработаны эффективные и рациональные схемы лечения.

Теоретическая и практическая значимость работы.

Материалы диссертации вносят определенный вклад в развитие науки микоплазмологии и в изучение микропаразитоценозов урогенитапьного тракта крупного рогатого скота. Разработанные методы индикации и идентификации микоплазм на питательных средах, методики получения микоплазмозных антигенов и антисывороток для РНИФ и эритроцитарного диагностикума позволят внедрить данные рациональные экспресс- методы диагностики микоплазмоза крупного рогатого скота в условиях промышленного животноводства.

На основании проведенных исследований разработаны для внедрения в практику методические рекомендации «Комплексная система мер борьбы и профилактики с ассоциативными инфекционными болезнями животных» и «Диагностика и лечение при ассоциативном урогенитальном микоплазмозе крупного рогатого скота», которые позволят ветеринарным специалистам своевременно диагностировать урогенитальный микоплазмоз крупного рогатого скота и его ассоциативные формы. Применение испытанных при ассоциативном микоплазмозе крупного рогатого скота схем лечения позволит наиболее эффективно бороться с данной инфекцией.

Апробация работы. Материалы исследований доложены и обсуждены на научных конференциях профессорско-преподавательского состава и аспирантов ИВМ ФГОУВПО ОмГАУ 2004, 2005, 2006 гг. «Проблемы ветеринарного образования и научных исследований в агропромышленном комплексе» (Омск, 2004, 2005, 2006); Межрегиональной научно-практической конференции «Эпизоотология, патология и ветеринарно-санитарные мероприятия при инфекционных болезнях животных» (Омск, 2004, СО РАСХН ВНИИБТЖ); Межригеональ-ной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины» (Омск, 2005, 2006, СО РАСХН ВНИИБТЖ); Международной научно-практической конференции «Профилактика, диагностика и лечение инфекционных болезней, общих для людей и животных» (Ульяновск, 2006г); Международной научно-практической конференции посвященной 60-ти летшо Краснодарского НИВИ (Краснодар, 2006).

Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 10 печатных работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 122 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений и приложения. Список использованной литературы включает 145 наименований, в том числе 50 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 33 таблицами и 6 рисунками.

Внедрение результатов исследований. Результаты научных исследований использованы при подготовке методических рекомендаций: «Комплексная система мер борьбы и профилактики при ассоциативных инфекционных болезнях животных» (Утверждены Ученым советом ИВМ ФГОУ ВПО ОмГАУ, протокол № 1 от 29.09.2004 г. и секцией животноводства Центра научного обеспечения АПК Министерства сельского хозяйства и продовольствия Омской области от 08.10.2004 г., протокол № 5) и «Диагностика и лечение при ассоциативном урогенитальном микоплазмозе крупного рогатого скота» (Утверждены Ученым советом ИВМ ФГОУ ВПО ОмГАУ, протокол № 7 от 28.06.2006 г. и секцией животноводства Центра научного обеспечения АПК Министерства сельского хозяйства и продовольствия Омской области от 12.09.2006 г., протокол № 5)

Материалы диссертации используются в учебном процессе кафедры эпизоотологии и инфекционных болезней ИВМ ОмГАУ, кафедры микробиологии, вирусолоии и иммунологии ОмГМА и Тюменского института переподготовки кадров агробизнеса.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Эпизоотическая ситуация по ассоциативному урогенитальному микоплазмозу крупноо рогатого скота в хозяйствах Омской области.

2. Испытание усовершенствованных бактериологического и серологического методов диагностики ассоциативного урогенитального микоплазмоза крупного рогатого скота.

3. Чувствительность полевых культур микоплазм к антибактериальным препаратам in vitro.

4. Схемы лечения при ассоциативном урогенитальном микоплазмозе крупного _ рогатого скота.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы

Тема диссертационной работы является самостоятельным разделом комплексной государственной программы «Профилактика (диагностика) и меры борьбы с ассоциативными инфекционными и инвазионными болезнями животных и птиц» (№ гос. регистрации 01.2.001100602).

Научно-исследовательская работа проводилась в лаборатории мик-стинфекций кафедры эпизоотологии и инфекционных болезней ИВМ ОмГАУ и хозяйствах Омской области.

Объектом исследований являлись коровы родильно - профилакторного периода с выраженными клиническими признаками абортов, эндометритов и маститов, а также быки-производители.

Материалом для исследований служили сыворотка крови, молоко (молозиво), цервико-вагинальная слизь от 790 коров и нетелей из 34 хозяйств Омской области с различной эпизоотической ситуацией по инфекционным болезням, рождаемостью и гибелью телят, а также сперма и препуциальные смывы от быков и патологический материал от абортированных плодов.

Индикацию и идентификацию возбудителей осуществляли микроскопическими методами, включающими и электронную микроскопию, а так же бактериологическими и серологическими методами.

Мазки окрашивали по Граму и Романовскому-Гимзе.

Электоронно-микроскопическое исследование взвеси микоплазмозных культур осуществляли путем просмотра ультратонких срезов в электронном микроскопе ЭМ -125.

Для бактериологического исследования использовали стандартные (МПА, МПБ) и, разработанные совместно с ФГУ Омского НИИ природно-очаговых инфекций Роспотребнадзора, жидкие и твердые питательные среды для индикации и идентификации микоплазм. Специфичность и чувствительность которых была изучена ранее в лаборатории микст-инфекций кафедры эпизоотологии и инфекционных болезней ИВМ ОмГАУ и лаборатории зоонозных инфекций Омского НИИ природно-очаговых инфекций при микоплазмозе плотоядных Новиковой H.H. (2002) и респираторном микоплазмозе птиц Сунцовой O.A. (2004). При этом морфологические, тинкториальные, культуральные и биохимические свойства выделенных микроорганизмов изучали согласно общепринятым в бактериологической практике методикам. Микроскопирование проводили при помощи светового микроскопа «Ломо» (х 900). Для видовой индикации микоплазм использовали ключ Gourlay and Howard (1979).

Применяли стандартные и дополнительные, разработанные нами методы серологической диагностики непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ) для прижизненного выявления антигенов и антител, и посмертного антигенов, а также реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА) для обнаружения антител в сыворотке крови животных. Фиксацию мазков проводили по методу Моди с соавт. (1958), а постановку РНИФ по методике, предложенной Уэллером и Кунсом (1945). В качестве антигенов применяли: полученные нами микоплазмозные антигены, антигены вакцинных штаммов и стандартные антигены, используемые

для постановки РА и РСК, а в качестве антител - гомологичные антигенам кроличьи и бычьи антисыворотки, антивидовые для РНИФ и специфические саль-монеллезные, риккетсиозные, листериозные для РПИФ люминесцентные сыворотки меченные ФИТЦ (ИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи), а также полученные нами кроличьи сыворотки против возбудителей микоплазмоза, хламидиоза, ИРТ-ПВ, ди-плококкоза, стафилококкоза, стрептококкоза. Видоспецифические сыворотки к полевым штаммам микоплазм получали путем гипериммунизации кроликов по схеме D.Schimmel в модиффикации Красикова А.П. и Новиковой Н.Н. (2000). Пробы, обработанные люминисцентными сыворотками, просматривали под микроскопом ЛЮМ Р-8 при увеличении в 900 раз. Степень флуоресценции антител оценивали по 4-х крестной системе (Вайтекер и др., 1958).

В качестве клеточной основы для приготовления диагностикума для РНГА были выбраны эритроциты барана, а для стабилизации 20% формальдегид. Фиксацию эритроцитов проводили по методу Фили в модификации Красикова А.П.(199б).

Исследования проводили с целью выявления антигенов возбудителей и вырабатываемых гомологичных специфических антител в сыворотке крови, вымени и половой системе, а также в патологическом материале на 11 инфекционных болезней: микоплазмоз, инфекционный ринотрахеит - пустулезный вульво-вагинит (ИРТ-ПВ), сальмонеллез, пастереллез, хламидиоз, ку-лихорадка, лептос-пироз, листериоз, диплококкоз, стрептококкоз и стафилококкоз.

Экономическую эффективность рассчитывали по методике определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий, утвержденной Департаментом ветеринарии РФ 21.02.1997.

Статистическую обработку полученных данных проводили на ПК с помощью программы Microsoft Excel 2000.

2.2. Изучение эпизоотической ситуации по урогенитальному

микоплазмозу крупного рогатого скота и ассоциативным формам его проявления в хозяйствах Омской области

Для изучения эпизоотической ситуации по урогенитальному микоплазмозу крупного рогатого скота и возможности его ассоциативных форм проявления были проведены комплексные обследования хозяйств с применением эпизо-отологического, клинического, бактериологического и серологических методов. Для лабораторных исследований брали цервико-вагинальную слизь, молоко и сыворотку крови коров родильно-профилакторного периода; препуциальные смывы, сперму и сыворотку крови быков-производителей; патологический материал от абортированных плодов.

На основании полученных результатов установлено, что урогениталь-ный микоплазмоз крупного рогатого скота широко распространен в Омской области (табл. 1)

Из 34 обследованных хозяйств микоплазмоз отсутствовал только в трех, при этом в виде моноинфекции данная болезнь проявлялась лишь в 16% хозяйств, а остальных инфекционный процесс носил ассоциативный характер.

Таблица 1.

Ассоциации микроорганизмов при урогенитальном микоплазмозе у коров в хозяйствах Омской области.

№ п.п Хозяйс-тва К-во гол Инфицировано, %

сап пас хл пв ку-лих леп лис ДИП стр ста мик

1. Россия 75 60 10 24 13 63 32 37 4 10 12 100

2. им. Розы Люксембург 20 30 - 60 40 25 40 25 15 5 5 75

3. Боевое 180 10 - 30 10 5 5 - 10 8 7 10

4. Лесное 7 - - - - - - - - - - 40

5. Украинский 10 - - 60 30 50 50 50 - - - 40

6. Заря свободы 10 10 20 70 50 20 10 20 10 10 - 20

7. Искра 10 20 - 40 10 - - - 10 10 80 -

8. Русский хлеб 10 - - - - - - - - - - 50

9. им. Карбышева 20 - - 60 - 10 - - - - - 20

10. Ермолаевское 15 20 - 20 - 30 - 10 - - - 46

11. Алексеевское 12 70 30 20 45 30 - - 10 - 20 60

12. Знамя 12 - - 17 8 - - - - - 17 100

13. Ачаирский-1 10 10 30 10 10 10 - 10 - 10 80

14. Сосновское 10 90 - - - 20 - 10 10 - - 80

15. Агрофирма Корми-ловская 21 38 - 24 - 14 10 5 5 - 5 90

16. Молзавод Корми-ловский 10 70 - 40 - - 40 30 - - 20 100

17. Колос 10 40

18. Нива 10 10 20 60 - - 10 20 30 40 - 30

19. Большевик 10 10 - - - - - - - - - 20

20. Новороссийское 20 10 - 20 10 10 20 20 - - - 100

21. Цветочное 10 - - 90 50 20 20 - - 10 - 10

22. Береговое 20 - - 80 - - - - - - - 100

23. Новоазовское 20 - - 5 5 5 - - 5 - - 25

24. Новорождественское 20 - 30 5 20 5 20 - 15 10 15 10

25. Дружба 10 - - 40 10 - - - - - - 60

26. Евгащинское 10 - - 10 10 - - - 20 - - 30

27. Добровольское 12 - - 67 - - - - - - - -

28. Руспол 6 - - 60 - - - - - - - 100

29. Чисговское 40 20

30. Рагозинское 96 31

31. Любимовское 30 - - 33 - - - - - - - 33

32. Екатеринославское 10

33. Кам-Курское 24 8 . - 40 4 - - - 4 - - 30

34. им. Кирова 3 - - 33 - - 33 - - - - 100

Примечание: са - сальмонеллы, пас- пастереллы, хл - хламидии, пвв - вирус пустулезного вульвовагинита, ку - ли - риккетсия ку-лихорадки, ле- лептоспиры, ли-листерии, ди-диплококки, стр-стрептококки, ста-стафилококки, ми-микоплазмы.

2.3. Бактериологические методы диагностики урогенитального

микоплазмоза

2.3.1. Индикация и идентификация микоплазм на питательных

средах

Для выделения микоплазм, использовали элективные жидкие и твердые питательные среды для индикации и идентификации микоплазм.

Посевы на жидких средах инкубировали в течение трех суток, учет роста проводили визуально по изменению цвета среды. Микоплазмы в процессе жизнедеятельности ферментируют глюкозу, аргинин или гидролизируют мочевину, в результате изменяется рН среды, о чем свидетельствует изменение цвета входящего в него индикатора. Среды также содержат ингибиторы, которые губительно действуют на сопутствующую микрофлору.

С целью более глубокого изучения культуральных свойств микоплазм, выросшие на селективных индикаторных средах (изменившие их цвет) культуры пересевали на аналогичные плотные диагностические среды с содержанием 1,3% агара Дифко. Микоплазмы на плотной среде росли в виде круглых, не сливающихся друг с другом колоний с врастающим в агар центром и нежной поверхностной периферией. Также отмечали мелкие зернистые колонии без особо выраженной центральной зоны. У старых колоний центр уплотняется, становится более темным, зернистость усиливается. При обнаружении типичных колоний их вместе с агаровым блоком отсевали на жидкие элективные питательные среды с соответствующей ферментативной активностью. Если рост отсутствовал, то проводили 3-5 последовательных «слепых» пассажей, если в течение этого периода индикаторная среда не изменяла цвет, фиксировали гибель микоплазм при пересевах.

2.3.2. Основные биологические свойства микоплазм 2.3.2.1. Морфологические свойства

Для изучения тинкториальных и морфологичечких свойств микоплазм, из 72-х часовой бульонной культуры микоплазм готовили мазки, высушивали на воздухе, фиксировали метиловым спиртом или ацетоном в течение 5 мин и окрашивали по Романовскому-Гимзе в течение часа при температуре 37°С. Мазок промывали и просматривали под иммерсионной системой микроскопа - микроорганизмы были преимущественно кокко-овойдно-перстневидной формы размером 0,3-0,5 мкм фиолетового оттенка. Также встречались и фиолетовые шары размером 3-6 мкм, образования синего цвета величиной 2-6 мкм, единичные палочки, скопления, зернистой и гомогенной массы с синеватым оттенком, в которые заключены микроструктурные элементы.

2.3.2.2.Биохимические свойства

При выделении микоплазм на жидких элективных диагностических питательных средах, производят дифференциацию по главным биохимическим

признакам разложению глюкозы, аргинина, мочевины. Поэтому, для видовой индикации микоплазм по ключу Gourlay and Howard, 1979, изучали протеолити-ческую активность, редукцию тетразоля, потребность в холестерине, дигитонин-чувствительность и рост при температуре 22° С.

По основным свойствам выделенные микоплазмы от крупного рогатого скота в хозяйствах Омской области были отнесены к трем видам М. bovoculi, М. arginini и Ureaplasma sp. (табл. 2)

Таблица 2

Основные свойства микоплазм, выделенных у крупного рогатого скота.

Род и вид Г А У Пленка и пятна Редук ция тетразоля Потребность в холе стерине Диги тонин чувстви тельность Протео- литиче екая актив ность Рост при 22° С

M.bovoculi + - - - + + + + -

M.arginini - + - - - + + + -

Ureaplasma sp. - - + - - + + + -

Примечание: Г - ферментация глюкозы, А - гидролиз аргинина, У - уреазная активность.

2.3.2.3. Ультраструктурные свойства

Для электронно-микроскопического исследования использовали взвеси микоплазмозных культур, фиксированных в смеси глутарового и параформапь-дегидного растворов. После промывки их в фосфатном буфере и дополнительной фиксации в 1% растворе четырех окиси осмия, обезвоживали в спиртах восходящей крепости и ацетоне. Приготовленный материал заключали в аралдит. Ультратонкие срезы готовили на ультратоме УМТП - 4. После контрастирования срезы исследовали в электронном микроскопе ЭМ - 125. При просмотре срезов обращали внимание на форму микоплазм, которая обычно была округлая, овальная, вытянутая, иногда в виде ракетки.

Оболочка не имеет клеточной стенки, представляет собой трехслойную цитоплазматическую мембрану, два слоя осмиофильных и один между ними ос-миофобный. Внутренняя структура представлена сильно контрастированным нуклеотидом и зернистыми тяжами, микрофибриллами, рибосомными, полисо-мными структурами.

2.3.2.4. Патогенные свойства

В опыте для изучения патогенности микоплазм использовали полевые штаммы М. bovoculi, М. arginini, Ureaplasma sp. выделенные от крупного рогатого скота в Омской области.

Для проведения опыта взяли 20 белых мышей массой по 20 грамм, кото-

1 л

рых разделили на 4 группы, три опытных и одна контрольная - интактная, по пять голов в каждой группе.

На 2-й день после заражения наступила гибель 4-х мышей зараженных М. bovoculi, 5-я мышь погибла на 4-й день. Две мыши зараженные М. argmini погибли на 4-й день, три на 7-й. Одна из зараженных уреаплазмами мышей погибла на 7-й день, оставшиеся же в живых четыре мыши были девитализированы на 10-е сутки, как и мыши контрольной группы.

По результатам проведенного опыта видно, что микоплазмы обладают ^ высокой патогенностыо. При этом инфицированность органов при заражении М. bovoculi и Ureaplasma sp.. составляла 100%, а M.arginini 75-100%. У контрольной группы, микоплазмы не были выделены. Летальность для белых мышей составляет: М. bovoculi и M.arginini 100%,а Ureaplasma sp.. - 20%.

2.4. Серологические методы диагностики урогенитального микоплазмоза

2.4.1. Получение микоилазмозиых антигенов и диагностических кроличьих сывороток для РНИФ

Целью нашего исследования являлось получение антигенов и активных гипериммунных кроличьих сывороток против полевых штаммов микоплазм, выделенных от крупного рогатого скота, для реакции непрямой иммунофлюорес-ценции (РНИФ).

Антигены для РНИФ готовили из трехсуточных убитых культур М. bovoculi, М. arginini Ureaplasma sp., которые отмывали от питательной среды путем центрифугирования при 6000 g 30 мин, осадок после трехкратного ресуспензи-рования и последующего центрифугирования разводили до концентрации 1,7 млрд. микробных клеток в 1 мл по бактериальному стандарту мутности (ГИСК им. Л.А. Тарасевича).

Гипериммунизацию кроликов проводили путем дробного внутривенного введения живых концентрированных культур микоплазм каждые три дня с при* менением иммуностимулятора левамизола подкожно. Для этого использовали б кроликов (по 2 головы на каждый штамм) весом 2,5 - 3 кг.

Динамику синтеза антител изучали на 7, 14, 21 и 30 сутки после гипериммунизации в реакции непрямой иммунофлюоресценции, которую ставили на предметных стеклах по стандартной методике, учет реакции проводили в крестах, свечение менее чем на два креста считали отрицательным (рис1.)

Установлено, что на 7-й день после иммунизации антитела в РНИФ выявлялись в низких титрах 1:10 - 1:20. На 14-й день положительная реакция была при более высоких разведениях в пределах с 1:80 до 1:160 на все вводимые антигены, а на 21-30 сутки титр люминесцирующих антител достиг максимального уровня 1:320- 1:640.

Рис. I. Динамика синтеза антител у кроликов гипериммунизированных культурами микоплазм.

2.4.2. Изучение специфичности и активности сывороток и антигенов вРНИФ

Для изучения видовой специфичности и активности применяли кроличьи антимикоплазмозные сыворотки и антигены, полученные выше описанным способом и убитые путем нагревания Т 70° С ЗОмин. Для изучения специфичности микоплазмозных антигенов в РНИФ использовали антимикоплазмозные сыворотки в разведении 1:10, а также сыворотки против бруцеллеза, лептоспироза, пустулезного вульвовагинита (ПВ), сальмонеллеза и риккетсиоза.

Определяя видовую специфичность и активность полученных микоплазмозных кроличьих сывороток в РНИФ установили, что полученные сыворотки реагируют только с аналогичными антигенами, при этом активность сывороток достигала титра от 1:320 до 1:640.. При определении специфичности микоплазмозных антигенов с сыворотками против бруцеллеза, лептоспироза, лис-териоза, ПВ и риккетсиоза РНИФ была отрицательная. Положительная же реакция отмечалась только с аналогичными кроличьими антисыворотками

2.4.3. Определение диагностической ценности бактериологического и серологического (РНИФ) методов диагностики в производственных

условиях

Для сравнения чувствительности РНИФ и бактериологического метода исследовали цервико-вагинальную слизь и сыворотку крови от коров, и патологический материал от абортированных плодов (табл. 3, 4,5).

Таблица 3.

Чувствительность РНИФ в сравнении с бактериологическоим методом исследования патологического материала от абортированных плодов.

Хозяйства Кол-во проб На средах В РНИФ

Г А У Г А У

ЗАО им.Кирова 18 33% 88% 0 88% 77% 77%

СПК «Новороссийское» 12 33% 83% 0 83% 67% 50%

ЗАО им. «Розы Люксембург» 24 15% 90% 100% 35% 90% 100%

Примечание: антигены Г-глюкозоферментирующих М.Ьо\'осиП, А- аргининфер-ментирующих М.а^шш, У-11геар1азта ер.

Таблица 4.

Чувствительность РНИФ и бактериологического метода исследования цервико-вагинальной слизи коров.__

Хозяйства Кол-во Голов На питательных средах РНИФ

Г А У Г А У

ОПХ «Боевое» 160 23% 5% 50% 53% 26% 51%

ЗАО им. Кирова 48 19% 31% 88% 50% 56% 63%

СПК «Новороссийское» 40 35% 55% 30% 70% 82,5% 12,5%

Таблица 5.

, Определение чувствительности микоплазмозных антигенов в РНИФ с сывороткой крови в сравнении с бактериологическим методом._

Хозяйства Кол-во голов На питательных средах РНИФ

Г А У Г А У

С-з «Россия» 20 20% 20% 80% 20% 20% 60%

ОПХ «Боевое» 26 61,5% 38% 15% 58% 73% 69%

Для выявления «местных» антител в секрете вымени провели исследование в РНИФ молока от 26 коров, ринадлежащих ОПХ «Боевое» с микоплазмозными антигенами и сыворотками. Антигены М.ЬоуосиН в молоке выявляли 50% животных, антитела присутствовали у большего количества коров - 61%; антигены М.ащпиш у 65%, а аналогичные антитела у 61%; уреаплазмозные антигены у 54% животных, антитела были выявлены у 69% животных.

Таким образом, результаты исследований подтверждают, что полученные нами микоплазмозные антигены и кроличьи антимикоплазмозные сыворотки активны и специфичны в РНИФ, а данная реакция не уступает по чувствительности бактериологическому методу исследования, а в некоторых случаях даже превосходит его.

2.4.4. Получение эритроцитарного днагностикума для реакции непрямой гемаглютинации (РНГА)

Формалинизированные эритроциты барана сенсибилизировали инакти-вированным микоплазмозным антигеном из смешанных в равных объемах M.bovoculi, M.arginini и Ureaplasma sp. соотношении 2:1 (2V антигена: IV эрит-роцитову.

Для контроля пригодности полученного эитроцитарного диагностикума проводки постановку РНГА. Реакцию ставили макрометодом в объеме 0,5 мл в полистироловых пластинках, с микоплазмозными Г, А, У и смешанной (Г +А + У) микоплазмозными сыворотками в разведениях 1:10, 1:20, 1:40, 1:80, 1:160, 1:320.

С микоплазмозными сыворотками по отдельности полученный диагно-стикум реагировал на три креста до разведения 1:40, на два креста до разведения 1:80, а со смешенной сывороткой против трех видов микоплазм реагировал на три креста до разведения 1:80 и на два креста 1:160. С отрицательной сывороткой сомнительная реакция на два креста отмечалась в первом разведении. В контроле с буферным раствором отрицательная реакция наблюдалась во всех разведениях.

При изучении специфичности трех серий полученных микоплазмозных эритроцитарных диагностикумов (МЭД) установлено, что только в титре 1:10 МЭД в РНГА вызывал перекрестные реакции с бруцеллезной, лептоспирозной, сапьмонеллезной, и хламидиозной сыворотками, тогда как в последующих разведениях РНГА была отрицательной при четко выраженных положительных реакциях с гомологичными микоплазмозными сыворотками.

2.5. Изыскание средств и методов лечения животных репродуктивного стада при ассоциативном урогенитальном микоплазмозе

2.5.1 Определение чувствительности полевых культур микоплазм к антибактериальным препаратам in vitro

Для подбора наиболее эффективных препаратов для лечения животных при урогенитальном микоплазмозе определяли чувствительность полевых культур микоплазм к антибактериальным препаратам методом серийных разведений. Для определения чувствительности к препаратам использовали культуры микоплазм выделенные в хозяйствах Омской области.(табл 6.).

На основании результатов проведенных исследований показано, что наибольшей активностью in vitro в отношении культур, выделенных из урогени-тального тракта крупного рогатого скота, обладает тетрациклин и препараты фторхинолонового ряда (ципрофлоксацин, норфлоксацин).

Таблица 6.

Чувствительность кульур микоплазм к антибактериальным препаратам.

препараты чувствительность^

М.ЬоУосиН (п=30) М. авдпии (п=30) игеар1азгаа Бр. (п=30)

тетрациклин 97 90 83

ципрофлоксацин 97 63 67

норфлоксацин 90 53 40

левомицетин 67 37 16

эритромицин 40 10 10

сульфадимезин 33 50 0

тилозина-тартрат 0 20 63

триметоприм 40 16 0

тетра-триметосул 16 10 10

тиланик 0 27 0

бензилпенициллин 0 0 0

контроль - - -

2.5.2. Изучение различных схем лечения и лабораторных методов контроля их эффективности.

Действие различных схем лечения изучали на 75 коровах родильно-профилакторного периода с клиническими признаками эндометритов и положительными результатами лабораторных исследований на микоплазмоз и другие инфекции (к-з «Россия»). Животные были разделены 14 групп по 5 голов в каждой, которых лечили по разным схемам и двух контрольных - больных не леченных и здоровых.

До и после лечения исследовали сыворотку крови, молоко (молозиво), маточно-влагалищный секрет лабораторными методами: серологическими - реакция прямой (РПИФ) и непрямой (РНИФ) иммунофлюоресценции (в качестве антигенов и антисывороток использовали стандартные диагностикумы для РА и РСК, инактивированные вакцинные штаммы, стандартные люминисцентные антивидовые кроличьи, бычьи сыворотки для РНИФ и люминисцентные сальмо-неллезные типы А, В Д, листериозную, риккетсиозную люминисцентные сыворотки для РПИФ, а также полученные нами кроличьи сыворотки против мико-плазмоза, хламидиоза, диплококкоза, стафилококкоза, и стрептококкоза, бактериологическими - с применением жидких и плотных микоплазмозных питательных сред.

Для лечения коров с урогенитальным микоплазмозом наилучшей оказалась 12 схема, а, при урогенитальном микоплазмозе в ассоциации с двумя и более инфекциями наиболее эффективными были 4-я, 5-я и 7-я схемы. Данные схемы включают комплексные препараты, действующие не только на микоплаз-мы, но и на всю ассоциацию микроорганизмов: (тетрациклин ПВП; левотетра-сульфин ПЭГ; левоэртроцикпин ПЭГ) (табл. 7.).

Эффективность других схем с применением в различных сочетаниях тетра-сульфина, бициллина-З, ихтиоглюковита, глюкоихтиола-ПЭГ, окситощша, пункции по Логвинову и фуразолидоновых палочек составляла от 0 до 90%.

Таблица 7.

Эффективные и рациональные схемы лечения при урогенитальных инфекциях

Группы животных Характеристика групп Применяемые препараты Продолжительность лечения(дней) Эффективность, %

3 Сальм. + микопл. Тетрациклин ПВП (однократно) 10 100%

4 Лет. + лист. + сальм. + Ку-лих. + микопл. Окситоцин + бицил-лин-3 + ихтиоглюко-вит + тетрациклин ПВП 40 100%

5 Лист. + сальм. + Ку-лих. + микопл. Левотетрасульфин ПЭГ (4х-кратно) 26 100%

7 Лист. + сальм. + Ку-лих. + микопл. Окситоцин + бицил-лин-3 + пункция по Логвинову + лево-эритроциклин ПЭГ 33 100%

12 Микопл. Окситоцин + ихти-оглюковит + тетрациклин ПВП 20 100%

15 Хлам. + лепт. + лист. + сальм. + Ку-лих. + микопл. Контрольная не леченная группа 0

16 Контрольная ин-тактная группа - -

Эс| )фективность комплексных препаратов (тетрациклина ПВП и левоэрит-

роциклина ПЭГ) была подтверждена в двух других производственных опытах на глубокостельных коровах с носительством микоплазм, сальмонелл, хламидий, рик-кетсий и вируса ПВ (СПК «Новороссийское», СПК «Большевик»).

Применение разработанных схем лечения в хозяйстве позволило предотвратить экономический ущерб на сумму 574461 руб, при этом экономический эффект от проведенных мероприятий составил 550056 руб, а экономический эффект на один рубль затрат был - 22, 53 руб.

ВЫВОДЫ

1. Урогенитальный микоплазмоз крупного рогатого скота широко распространен в хозяйствах Омской области, при этом в виде моноинфекции данная болезнь проявляется лишь в 16% хозяйств, а в остальных (84%) инфекционный процесс носит ассоциативный характер.

2. Жидкие и плотные питательные среды НИИПОИ Роспотребнадзора г.Омска чувствительны к микоплазмам урогенитального тракта крупного рогатого скота, и позволяют не только выделять их, но и дифференцировать по основным биохимическим показателям (аргинин, глюкоза, мочевина).

3. Микоплазмы выделенные от крупного рогатого скота в Омской области по биохимическим свойствам отнесены к трем видам М. bovoculi, М. argmini и Ureaplasma sp..

4. Полученные из полевых штаммов микоплазм антигены и аналогичные кроличьи антимикоплазмозные сыворотки активны и специфичны в РНИФ, а данная реакция не уступает по чувствительности бактериологическому методу.

5. Сконструирован стойкий, специфичный и активный эритроцитарный ди-агностикум из трех видов микоплазм, циркулирующих в стадах крупного рогатого скота, для постановки РНГА, позволяющий проводить массовые исследования сыворотки крови животных на микоплазмоз.

6. Выделенные полевые культуры микоплазм и уреаплазм наиболее чувствительны к препаратам фторхинолонового ряда норфлоксацину и ципрофлок-сацину, а также к тетрациклину и левомицетину.

7. При ассоциативном урогенитальном микоплазмозе наиболее эффективными и рациональными являются следующие схемы лечения: оксито-цин+бициллин-3+ихглюковит+тетрациклин ПВП; левотетрасульфин ПЭГ; ок-ситоцин + бициллин-3 + пункция по Логвинову + левоэритроциклин ПЭГ. Экономический эффект от их применения в хозяйстве составил 550056 руб.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Ветеринарной практике предложены эффективные и рациональные схемы диагностики и лечения крупного рогатого скота при ассоциативном урогенитальном микоплазмозе, которые подробно изложены в методических рекомендациях: «Комплексная система мер борьбы и профилактики при ассоциативных инфекционных болезнях животных» (Утверждены Ученым советом ИВМ ФГОУ ВПО ОмГАУ, протокол № 1 от 29.09.2004 г. и секцией животноводства Центра научного обеспечения АПК Министерства сельского хозяйства и продовольствия Омской области от 08.10.2004 г., протокол № 5) и «Диагностика и лечение при ассоциативном урогенитальном микоплазмозе крупного рогатого скота» (Утверждены Ученым советом ИВМ ФГОУ ВПО ОмГАУ, протокол № 7 от 28.06.2006 г. и секцией животноводства Центра научного обеспечения АПК Министерства сельского хозяйства и продовольствия Омской области от 12.09.2006 г., протокол № 5).

Результаты исследований по диагностики и лечению используются в учебном процессе на кафедре эпизоотологии и инфекционных болезней ИВМ ОмГАУ, на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии ОмГМА и в

Тюменском институте подготовки кадров агробизнеса.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Ассоциативный микоплазмоз у коров родильно-профилакторного периода/

А.П. Красиков, О.В. Вологодская И Проблемы ветеринарного образования и научных исследований в агропромышленном комплексе: сб. науч. тр. ИВМ ОмГАУ- Омск, 2004. - С. 182-187.

2. Диагностика ассоциативных инфекционных болезней крупного рогатого скота

/ А.П. Красиков, В.Э. Малошевич, Н.В. Лобанова, О.В. Вологодская // Проблемы ветеринарного образования и научных исследований в агропромышленном комплексе: сб. науч. тр. ИВМ ОмГАУ - Омск, 2004. - С. 187-193.

3. Урогенитальный микоплазмоз крупного рогатого скота и ассоциативные

формы его проявления / А.П. Красиков, О.В. Вологодская, H.H. Новикова// Эпизоотология, патология и ветеринарно-санитарные мероприятия при инфекционных болезнях животных: сб. науч. тр. ВНИИ БТЖ СО РАСХН -Омск, 2004.-С.149-155

4. Ассоциативные формы проявления инфекционного процесса у телят и коров

родильно-профилакторного периода/ В.Э. Малошевич, А.П. Красиков, О.В. Вологодская // Актуальные проблемы ветеринарной медицины: сб. науч. тр. ВНИИ БТЖ СО РАСХН - Омск, 2005. - С. 136-146.

5. Диагностика и схемы лечения ассоциативного микоплазмоза и других уроге-

нитальных инфекций крупного рогатого скота / О.В. Вологодская, А.П. Красиков // Актуальные проблемы ветеринарной медицины: сб. науч. тр. ВНИИ БТЖ СО РАСХН - Омск, 2005. - С. 84-91.

6. Диагностика ассоциативного микоплазмоза телят при помощи бактериологи-

ческого и серологического методов / А.П. Красиков, А.Н. Свиридова, О.В. Вологодская, А.Е. Жонголович // Актуальные проблемы ветеринарной медицины продуктивных и непродуктивных животных: сб. науч. тр. ВНИИ БТЖ СО РАСХН - Омск, 2006. - С. 107-111.

7. Изучение активности и специфичности антигенов и антисывороток в РНИФ

при ассоциативном урогенитальном микоплазмозе крупного рогатого скота/ А.П. Красиков, О.В. Вологодская // Актуальные проблемы ветеринарной медицины продуктивных и непродуктивных животных: сб. науч. тр ВНИИ БТЖ СО РАСХН- Омск, 2006. - С. 102-107.

8. Изучение специфичности, активности и чувствительности кроличьих сыворо-

ток в РНИФ при урогенитальном микоплазмозе коров/ А.П. Красиков, О.В. Вологодская // Профилактика, диагностика и лечение инфекционных болезней, общих для людей и животных: сб. науч. тр. Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии -Ульяновск, 2006. - С. 240-243.

9. Получение сывороток для диагностики урогенитального микоплазмоза круп-

ного рогатого скота в РНИФ / А.П. Красиков, О.В. Вологодская //Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях: сб. науч. тр. Краснодарского НИВИ- Краснодар, 2006. - С. 168-169.

10. Профилактика носительтва ассоциаций патогенных микроорганизмов у беременных коров и нетелей/А.П. Красиков, О.В. Вологодская, И.Г. Алексеева, Н.И. Водопьянова //Ветеринарная патология- 2006- №3-С.144-147

На правах рукописи

Вологодская Ольга Владимировна

АССОЦИАТИВНЫЙ УРОГЕНИТАЛЬНЫЙ МИКОПЛАЗМОЗ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА (ДИАГНОСТИКА И ЛЕЧЕНИЕ)

16.00.03. - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Омск-2006

Сдано в набор 17.11.06 Подписанов печать 17.11..06

Формат 60x84/16. Гарнитура Times New Roman. Усл.печл. 1,25. Печать-оперативная. Тираж 100 экз. Лицензия ЛТ № 020074

Отпечатано с оритенал-макета. В типографии ООО «Вариант-Омск» 644043, г.Омск, ул. Коммунистическая, 45. Тел./факс: 25-14-34

Я.оо £ ^

zTTüZ р 2 4 9 9 4

Оглавление диссертации Вологодская, Ольга Владимировна :: 2006 :: Омск

ВВЕДЕНИЕ.

1.ОБЗОР ЛИТЕРАТУЫ.

1.1. Этиологические аспекты ассоциативного урогенитального микоплазмоза крупного рогатого скота.

1.2. Методы индикации и идентификации микоплазм.

1.2.1 .Питательные среды для культивирования микоплазм.

1.2.2. Серологические и иммунологические методы диагностики микоплазмоза.

1.3.Чувствительность микоплазм к химиотерапевтическим препаратам и лечение больных микоплазмозом.

Введение диссертации по теме "Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология", Вологодская, Ольга Владимировна, автореферат

Актуальность темы. В последние годы возросло значение в возникновении заболеваний условнопатогенных микроорганизмов, в том числе микоплазм. Микоплазмоз является типичной хронической инфекцией с присущей ей длительной персистенцией возбудителя в организме. При этом микоплазмы способны сохранять жизнеспособность в фагоцитах и оказывать повреждающие действие на макрофаги, что приводит к нарушению их функции и снижению резистентности организма. Вступая в синергические отношения с вирусной, бактериальной и условно-патогенной микрофлорой, микоплазмы создают условия для ее активного роста и развития, что усиливает тяжесть течения данного заболевания. (С.В. Прозоровский и др., 1997) Все это приводит к снижению продуктивности, бесплодию и яловости коров. Данная инфекционная болезнь наносит хозяйствам значительный экономический ущерб. Поэтому, следует проводить своевременную диагностику микоплазмоза в ассоциации с сопутствующими микроорганизмами с использованием экспресс-методов, что позволит выявлять больных животных, а также микробоносителей и своевременно лечить их.

В настоящее время для лабораторной диагностики микоплазмозов применяют бактериологический и серологический методы: посевы на питательные среды, реакцию непрямой гемагглютинации; реакцию агре-гат-гемагглютинации (РАГА); реакцию пассивной гемагглютинации (РПГА), реакцию иммунофлюоресценции (РИФ); моноклональные антитела (МАТ), поликлональные антитела (ПАТ); твердофазный иммуно-ферментный анализ (ТИФА); радиоиммунологический анализ (РИА); хемиолюминесцентный анализ (ХЛИА); полимеразную цепную реакцию (ПЦР). (А.С.Серебряков, Г.А. Трошева, В.А. Шубин, 1970; П.М. Митрофанов и др., 1982; Ю.В. Вульфович и др., 1995; JI. Н. Новикова и др., 1998). Для постановки серологических реакций необходимо иметь набор активных и специфичных сывороток и антигенов.

Для лечения больных микоплазмозом людей, животных и птиц применяют различные антибиотики. Однако бессистемное применение их без определения чувствительности возбудителей инфекционных болезней при ассоциативном микоплазмозе к лекарственным препаратам не позволяет добиться желаемых результатов. В настоящее время не разработаны эффективные и рациональные схемы лечения крупного рогатого скота при урогенитальном микоплазмозе и ассоциативных формах его проявления.

В связи с этим весьма актуальным является: выяснить распространение урогенитального миоплазмоза крупного рогатого скота с помощью экспресс-методов диагностики, а также разработать эффективные и рациональные схемы лечения крупного рогатого скота при ассоциативном урогенитальном микоплазмозе с учетом всех сочленов ассоциаций микроорганизмов, участвующих в инфекционном процессе. Все это предопределило тему данных исследований.

Цель работы: Разработка методов диагностики и лечения при ассоциативном урогенитальном микоплазмозе крупного рогатого скота. Задачи исследований:

• Выяснить эпизоотическую ситуацию по урогенитальному ми-коплазмозу крупного рогатого скота и ассоциативным формам его проявления в хозяйствах Омской области.

• Изучить культуральные, морфологические, биохимические и патогенные свойства выделенных микоплазм.

• Изыскать экспресс-методы диагностики урогенитального ми-коплазмоза и испытать их в производственных условиях

Научная новизна. Установлено широкое распространение уроге-нитального микоплазмоза крупного рогатого скота, проявляющегося чаще в ассоциативных формах, в хозяйствах Омской области. Доказана чувствительность элективных питательных сред для индикации глюко-зо- и аргинин ферментирующих микоплазм и уреаплазм крупного рогатого скота. Определены виды и основные свойства выделенных микоплазм. Получены антигены из полевых штаммов микоплазм и сыворотки для РНИФ. Предложены методы и способы индикации и идентификации возбудителей, основанные на комплексном подходе к изучению всех сочленов микробных ассоциаций. Они легко выполнимы в производственных и лабораторных условиях, могут быть использованы для определения видовых характеристик выделяемых культур микроорганизмов. Изучена чувствительность к антибиотикам полевых культур микоплазм, на основании чего разработаны эффективные и рациональные схемы лечения.

Теоретическая и практическая значимость работы.

Материалы диссертации вносят определенный вклад в развитие науки микоплазмологии и в изучение микропаразитоценозов урогени-тального тракта крупного рогатого скота. Разработанные методы индикации и идентификации микоплазм на питательных средах, методики получения микоплазмозных антигенов и антисывороток для РНИФ и эритроцитарного диагностикума позволят внедрить данные рациональные экспресс- методы диагностики микоплазмоза крупного рогатого скота в условиях промышленного животноводства.

На основании проведенных исследований разработаны для внедрения в практику методические рекомендации «Комплексная система мер борьбы и профилактики с ассоциативными инфекционными болезнями животных» и «Диагностика и лечение при ассоциативном урогени-тальном микоплазмозе крупного рогатого скота», которые позволят ветеринарным специалистам своевременно диагностировать урогениталь-ный микоплазмоз крупного рогатого скота и его ассоциативные формы. Применение испытанных при ассоциативном микоплазмозе крупного рогатого скота схем лечения позволит наиболее эффективно бороться с данной инфекцией.

Апробация работы. Материалы исследований доложены и обсуждены на научных конференциях профессорско-преподавательского состава и аспирантов ИВМ ФГОУВПО ОмГАУ 2004, 2005, 2006 гг. «Проблемы ветеринарного образования и научных исследований в агропромышленном комплексе» (Омск, 2004, 2005, 2006); Межрегиональной научно-практической конференции «Эпизоотология, патология и ветери-нарно-санитарные мероприятия при инфекционных болезнях животных» (Омск, 2004, СО РАСХН ВНИИБТЖ); Межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины» (Омск, 2005, 2006, СО РАСХН ВНИИБТЖ); Международной научно-практической конференции «Профилактика, диагностика и лечение инфекционных болезней, общих для людей и животных» (Ульяновск, 2006г); Международной научно-практической конференции посвященной 60-ти летию Краснодарского НИВИ (Краснодар, 2006).

Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 10 печатных работ.

Заключение диссертационного исследования на тему "Ассоциативный урогенитальный микоплазмоз крупного рогатого скота"

ВЫВОДЫ

2. Жидкие и плотные питательные среды НИИПОИ Роспотребнад-зора г.Омска чуствительны к микоплазмам урогенитального тракта крупного рогатого скота, и позволяют не только выделять их, но и дифференцировать по основным биохимическим показателям (аргинин, глюкоза, мочевина).

3. Микоплазмы выделенные от крупного рогатого скота в Омской области по биохимическим свойствам отнесены к трем видам: М. bovoculi, М. arginini и Ureaplasma sp.

5. Сконструирован стойкий, специфичный и активный эритроцитар-ный диагностикум из трех видов микоплазм, циркулирующих в стадах крупного рогатого скота, для постановки РНГА, позволяющий проводить массовые исследования сыворотки крови животных на микоплазмоз.

6. Выделенные полевые культуры микоплазм и уреаплазм наиболее чувствительны к препаратам фторхинолонового ряда норфлокса-цину и ципрофлоксацину, а также к тетрациклину и левомицети-ну.

7. При ассоциативном урогенитальном микоплазмозе наиболее эффективными и рациональными являются следующие схемы лечения: окситоцин+бициллин-3+ихглюковит+тетрациклин ПВП; ле-вотетрасульфин ПЭГ; окситоцин + бициллин-3 + пункция по Логвинову + левоэритроциклин ПЭГ. Экономический эффект от их применения в хозяйстве составил 550056 руб.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Результаты исследований по диагностике и лечению используются в учебном процессе на кафедре эпизоотологии и инфекционных болезней ИВМ ОмГАУ, на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии ОмГМА и в Тюменском институте подготовки кадров агробизнеса.

1.4. Заключение

Таким образом, из приведенного обзора литературы следует, что урогенитальный микоплазмоз широко распространен в природе и является важным этиологическим фактором в патологии урогенитального тракта крупного рогатого скота.

Микоплазмоз является типичной хронической инфекцией с присущей ей длительной персистенцией возбудителя в организме. При этом микоплазмы способны сохранять жизнеспособность в фагоцитах и оказывать повреждающие действие на макрофаги, что приводит к нарушению их функции и снижению резистентности организма. Микоплазмы вступают в синергические отношения с вирусной, бактериальной и условно-патогенной микрофлорой, создавая условия для ее активного роста и развития, что усиливает тяжесть течения данного заболевания. Все это приводит к снижению продуктивности, бесплодию и яловости коров. Поэтому, принимая во внимание и учитывая патогенез болезни следует проводить своевременную диагностику микоплазмоза в ассоциации с сопутствующими микроорганизмами, что позволит выявлять больных животных и своевременно лечить их.

Анализ данных отечественной и зарубежной литературы, в отношении различных методик индикации и идентификации возбудителя из первичного материала, показывает, что в основном современная диагностика микоплазмоза основывается на иммунологических и бактериологических методах. Выделенный материал культивируют на специальных питательных средах для роста микоплазм, и подвергают дальнейшим исследованиям с помощью серологических, иммунологических и генетических методов.

Способность микоплазм к длительному персистированию в инфицированном организме никак не проявляя своего присутствия в нем, требует высоко чувствительных и специфичных методов для своевременной постановки диагноза. Современные подходы к исследованию проблемы позволяют наиболее точно и в короткие сроки не только выделить возбудителя, но и отдифференцировать его от других видов микроорганизмов.

Различная активность химиотерапевтических препаратов, способность микроорганизмов приобретать лекарственную устойчивость к антибиотикам, появление новых препаратов создают необходимость контроля чувствительности микоплазм к антибактериальным препаратам, как единственный способ для выбора более эффективных.

В связи с изложенным выше, на данном этапе весьма актуальным остается вопрос о разработке рациональных схем диагностики и лечения ассоциативного урогенитального микоплазмоза крупного рогатого скота с учетом всех сочленов ассоциации микроорганизмов.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы

Научно-исследовательская работа проводилась в лаборатории микстинфекций кафедры эпизоотологии и инфекционных болезней ИВМ ОмГАУ и хозяйствах Омской области.

Объектом исследований являлись коровы родильно - профилак-торного периода с выраженными клиническими признаками абортов, эндометритов и маститов, а также быки-производители.

Использовали эпизоотологические, клинические, патологоанато-мические и лабораторные методы диагностики инфекционных болезней животных.

Материалом для исследований служили сыворотка крови, молоко (молозиво), цервико-вагинальный секрет от 790 коров и нетелей из 34 хозяйств Омской области с различной эпизоотической ситуацией по инфекционным болезням, рождаемостью и гибелью телят, а также сперма и препуциальные смывы от быков и патологический материал от абортированных плодов.

Индикацию и идентификацию возбудителей осуществляли микроскопическими методами, включающими и электронную микроскопию, а также бактериологическими и серологическими методами.

Мазки окрашивали по Граму и Романовскому-Гимзе.

Электоронно-микроскопическое исследование взвеси микоплаз-мозных культур осуществляли путем просмотра ультратонких срезов в электронном микроскопе ЭМ - 125.

Для бактериологического исследования использовали стандартные (МПА, МПБ) и, разработанные совместно с ФГУ Омского НИИ природно-очаговых инфекций Роспотребнадзора, жидкие и плотные питательные среды для индикации и идентификации микоплазм. Специфичность и чувствительность которых была изучена ранее в лаборатории микст-инфекций кафедры эпизоотологии ИВМ ОмГАУ и лаборатории зоонозных инфекций Омского НИИ природно-очаговых инфекций при микоплазмозе плотоядных Новиковой Н.Н. (2002) и респираторном микоплазмозе птиц Сунцовой О.А. (2004). При этом морфологические, тинкториальные, культуральные и биохимические свойства выделенных микроорганизмов изучали согласно общепринятым в бактериологической практике методикам. Микроскопирование проводили при помощи светового микроскопа «Ломо» (х 900). Для видовой индикации микоплазм использовали ключ Gourlay and Howard (1979).

Применяли стандартные и дополнительные, разработанные нами методы серологической диагностики реакцию непрямой иммунофлюо-ресценции (РНИФ) для прижизненного и посмертного выявления антигенов и антител, а также реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА) для обнаружения антител в сыворотке крови животных. Фиксацию мазков проводили по методу Моди с соавт. (1958), а постановку РНИФ по методике, предложенной Уэллером и Кунсом (1945). В качестве антигенов применяли: полученные нами микоплазмозные антигены, антигены вакцинных штаммов и стандартные антигены, используемые для постановки РА и РСК, а в качестве антител - гомологичные антигенам кроличьи и бычьи антисыворотки, антивидовые для РНИФ и специфические сальмонеллезные, риккетсиозные, листериозные для РПИФ люминесцентные сыворотки меченные ФИТЦ (ИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи), а также полученные нами кроличьи сыворотки против микоплазмоза, хламидиоза, ИРТ-ПВ, диплококкоза, стафилококкоза, стрептококкоза). Видоспецифические сыворотки к полевым штаммам микоплазм получали путем гипериммунизации кроликов по схеме D.Schimmel в модиф-фикации Красикова А.П. и Новиковой Н.Н. (2000). Пробы, обработанные люминесцентными сыворотками, просматривали под микроскопом ЛЮМ Р-8 при увеличении в 900 раз. Степень флуоресценции антител оценивали по 4-х крестной системе (Вайтекер и др., 1958).

Исследования проводили с целью выявления антигенов возбудителей и вырабатываемых гомологичных специфических антител в сыворотке крови, вымени и половой системе, а также в патологическом материале на 11 инфекционных болезней: микоплазмоз, сальмонеллез, пас-тереллез, хламидиоз, инфекционный ринотрахеит - пустулезный вуль-вовагинит (ИРТ-ПВ), ку-лихорадку, лептоспироз, листериоз, диплокок-коз, стрептококкоз и стафилококкоз.

Экономическую эффективность рассчитывали по методике определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий, утвержденной Департаментом ветеринариии ветеринарии РФ 21.02.1997 г.

Статистическую обработку полученных данных проводили на ПК с помощью программы Microsoft Excel 2000.

2.2. Изучение эпизоотической ситуации по урогенитальному микоилазмозу крупного рогатого скота и ассоциативным формам его проявления в хозяйствах Омской области

Работа проводилась в лаборатории микстинфекций кафедры эпизоотологии и инфекционных болезней ИВМ Ом ГАУ и хозяйствах Омской области.

Для изучения эпизоотической ситуации по урогенитальному ми-коплазмозу крупного рогатого скота и его ассоциативным формам были проведены комплексные обследования хозяйств с применением эпизо-отологического, клинического, бактериологического и серологических методов (РНИФ И РИГА). Для лабораторных исследований брали цер-вико-вагинальную слизь, молоко и сыворотку крови коров родильно-профилакторного периода; препуциальные смывы, сперму и сыворотку крови быков-производителей; патологический материал от абортированных плодов.

На основании полученных результатов установлено, что уроге-нитальный микоплазмоз крупного рогатого скота широко распространен в Омской области (табл. 2.2.1.) Из 34 обследованных хозяйств микоплазмоз отсутствовал только в трех, при этом в виде моноинфекции данная болезнь проявлялась лишь в 16% хозяйств, а в остальных инфекционный процесс носил ассоциативный характер.

Так, наиболее насыщенный микробный пейзаж имел место в к-зе «Россия» Любинского райнона, там выделяли в тех или иных сочетаниях возбудителей микоплазмоза и 10-ти сопутствующих инфекций, притом, что микоплазмы присутствовали у всех обследованных животных. В другом хозяйстве этого же района - ЗАО им. «Розы Люксембург» микоплазмы выделяли у 75% коров и телок, при этом ассоциации микоплазм с возбудителями ИРТ-ПВ, хламидиоза, ку-лихорадки (риккетсиоза) встречались в 20% случаев, ИРТ-ГТВ и хламидиоза в 10%; ми-коплазмоз в виде моноинфекции встречался только у 10% животных.

Высокий процент пораженных микоплазмами животных отмечали в хозяйствах Кормиловского района. Так, в ЗАО «Знамя» и ООО «Молзавод Кормиловский» микоплазмы выявляли у 100% обследованных коров, в хозяйстве Агрофирма «Кормиловская» у 90%, в ООО «Со-сновское» и «Ачаирский-1» по 80%. В других хозяйствах: ЗАО «Русский хлеб», к-з им. Карбышева, СПК «Ермолаевское», ЗАО «Алексеевское» поражено микоплазмами было меньшее количество животных - от 20 до 60%. В виде моноинфекции микоплазмоз присутствовал только в одном хозяйстве - ЗАО «Русский хлеб», в остальных же хозяйствах наблюдались всевозможные ассоциации микоплазм с сальмонеллами, хламидия-ми, листериями, лептоспирами, риккетсиями, вирусом ИРТ-ПВ и кокками. Так, в колхозе им. «Карбышева» у животных обнаружены ассоциации микоплазм с хламидиями в 60% и с риккетсиями в 10% случаев.

В ОПХ «Боевое» Иссилькульского района наряду с микоплазмами выделяли у 30% животных хламидии, у 10% - вирус ИРТ-ПВ сальмонеллы и кокки, у 5 % лептоспиры и риккетсии. У обследованных животных ЗАО «Лесное» и СПК «Украинский» микоплазмы присутствовали в 40% проб исследуемого материала, при этом в первом хозяйстве микоплазмоз проявлял себя в виде моноинфекции, а во втором носил ассоциативный характер.

Наиболее пестрый микробный пейзаж имел урогенитальный тракт у животных из хозяйств: 1) «Новороссийское», 2) «Заря свободы», 3) «Новорождественское», 4) «Нива», 5) «Цветочное». При этом в первом хозяйстве вместе с микоплазмами выделяли в 20% случаев хламидии, лептоспиры и листерии, и в 10% вирус ИРТ-ПВ, сальмонеллы и риккетсии. Во втором хозяйстве у 10% коров выявляли ассоциативную форму проявления микоплазмоза с сальмонеллезом и хламидиозом одновременно и при этом присутствовали практически все исследуемые инфекции, а в третьем - наряду с микоплазмами, хламидиями, вирусом ИРТ-ПВ добавились в различных сочетаниях: риккетсии, лептоспиры, пасте-реллы, диплококки, стрептококки и стафилококки. В четвертом хозяйстве вместе с микоплазмозом у одних и тех же животных в 10% случаев регистрировали хламидиоз, пастереллез, стрептококкоз. В пятом хозяйстве выделяли у 10% животных из маточно-влагалищного секрета одновременно с микоплазмами следующие ассоциации микроорганизмов: вирус ИРТ-ПВ + лептоспиры + хламидии+ стрептококки. В хозяйстве «Новоазовское» в 20% регистрировали микоплазмоз с ИРТ-ПВ и в 5% случаев в различных сочетаниях с ИРТ-ПВ, диплококкозом, ку-лихорадкой и хламидиозом. В ЗАО «Кам-Курское» у 30% коров обнаружена хламидиозно- микоплазмозная инфекция, у 8% микоплазмо-хламидиозно-сальмонеллезная инфекция, у 4% - микоплазмо-хламидиозно-диплококковая и микоплазмо-хламидиозносальмонеллезно- ИРТ-ПВ инфекции. В ЗАО «Дружба» в микропарази-тоценозе урогенитального тракта также были обнаружены ассоциации микоплазм с хламидиями у 40% и с вирусом ИРТ-ПВ у 10% коров и нетелей. В чистом виде микоплазмоз регистрировали в хозяйствах: «Колос», «Чистовское», «Рогозинское», а в «Любимовское», «Руспол» и «Береговое» отмечали ассоциации только с хламидиозом.

Список использованной литературы по ветеринарии, диссертация 2006 года, Вологодская, Ольга Владимировна

1. Астапова, А.А. Микоплазменные инфекции / А.А. Астапова, Э.А. Мельникова, А.А. Зборовская // Медицинские новости. 2000. - №7. -С. 26-30.

2. Андреев, Е.В. Смешанная вирусомикоплазменная инфекция / Е.В. Андреев, П.П. Фукс // Ветеринария. 1980. - №8. - С. 30 -32.

3. Афонасьев, В.Н. Локализация видовых антигенов в микоплазмах / В.Н. Афонасьев // Новое в инфекционной патологии сельскохозяйственных животных: тр. ВИЭВ. М., 1983. - Т. 58. - С. 73 -75.

4. Афонасьев, В.Н. Методы получения гипериммунных сывороток к микоплазмам / В.Н. Афонасьев // Новое в инфекционной патологии сельскохозяйственных животных: тр. ВИЭВ. М., 1980. - Т. 51. - С. 54-58.

5. Белоусова, Е.В. Сравнительная оценка эффективности методов выявления возбудителей урогенитальных микоплазм: автореф. дис.канд. мед. наук:03.00.07. / Е.В. Белоусова; С.-Петерб. Гос. мед. акад. им И.И. Мечникова.-СПб., 1999.-С. 16.

6. Бердник, В.П. РДСК в микрообъеме при микоплазмозе свиней / В.П. Бердник // Ветеринария. 1986. №1. - С. 23 - 27.

7. Бердник, В.П. Получение мутантов микоплазм и ахолеплазм для изготовления вакцины против инфекционной пневмонии свиней / В.П.Бердник, В.Д. Настенко //Проблемы ветеринарной иммунологии. -М., 1985.-С. 118-121.

8. Борхсениус, С. Н. Микоплазмозы / С. Н. Борхсениус, О. А. Чернова; -Л.: Наука. 1989. - С.37-41.

9. Выявление тетрациклин и эритромицин устойчивых штаммов урогенитальных микоплазм с помощью ПЦР / С.В. Соловьева и др. // ЖМЭИ. - 1998. - №6 - С 3- 7.

10. Гамзаев, Ф. Ш. Сравнительная характеристика диагностических методов для идентификации микоплазменной инфекции урогенитально-го тракта / Ф.Ш. Гамзаев, A.M. Ли //Актуальные проблемы внутренней медицины и стоматологии : сб. науч. тр. СПб, 1997. - С. 184.

11. Гамзаев, Ф.Ш. Особенности диагностики, патогенеза и лечения микоплазменной инфекции урогенитального тракта мужчин : автореф. дис. . канд. мед. наук : 14. 00. 11. / Ф.Ш. Гамзаев; Кубан. Гос. мед. акад. М., 1999.- 18 с.

12. Гасанова, Т. А. Лабораторная диагностика инфекций передающихся половым путем при хронических воспалительных заболеваниях репродуктивной системы / Т. А. Гасанова // ЖМЭИ. 2001. - № 3. - С. 60-65.

13. Гюрджи-Оглы, С.Ж. Фторхинолоны новые синтетические препараты / С.Ж. Гюрджи-Оглы, И.М. Самородов, М.И. Рабинович // БИО. -2004. - №4.-С.5-8.

14. Дададжанов, Ю.Х. Модифицированный метод постановки связывания комплемента при микоплазмозах / Ю.Х. Дададжанов, В.А. Бурлаков //Проблемы лейкоза и инфекционных заболеваний с/х животных. -М., 1988. С. 125- 128.

15. Дерябин, Д.Г. Смешанные урогенитальные инфекции у мужчин / Д.Г. Дерябин, С.Д. Борисов, С.В. Михайленко // ЖМЭИ. 2000. - № 2. -С. 15-18.

16. Ежов, В.И. Изучение чувствительности птичьих микоплазм к антибиотикам и другим химиотерапевтическим препаратам / В.И. Ежов, Г.А. Трошева, Б.М. Савич // Бюллетень ВИЭВ. М., 1972. - Вып. 12. -С. 110.

17. Идентификация Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum и Chlamydia trachomatis методом полимеразной цепной реакции / М.Ю. Бродский и др. // Бюллетень Экспериментальной Биологии и медицины. 1995. - №12. - С. 606 - 609.

18. Использование метода полимеразной цепной реакции in situ для выявления внутриклеточной локализации М. Hominis в культивируемых клетках Hela / К.Т. Момыналиев и др. // Цитология. 2000. - №2. -С. 202-208.

19. Киприч, В.В. Иммунобиологические реакции при микоплазмозе птиц / В.В.Киприч // Болезни птиц: сб. тр. JI.: Колос, 1971. - Вып. 7(18). -С. 208-213.

20. Киприч, В.В. Реакция задержки гемагглютинации и ее диагностическое значение при респираторном микоплазмозе птицы / В.В.Киприч // Ветеринария: сб. тр. Киев : Ураджай, 1973. - Вып. 34 - С. 53 - 56.

21. Климов, А.А. Повышение эффективности фторхинолонов в индустриальном животноводстве / А.А. Климов // Ветеринария. 2003. -№5.-С.53-56.

22. Коваленко, Я. Р. Использование тилана и антибиотиков тетрацикли-нового ряда при лечении массовых пневмоний телят в крупных откормочных хозяйствах / Я. Р. Коваленко, Э. А. Шегидович, И. А. Яблонская//Бюл. ВИЭВ. М.,1973.- Вып. 16.-С. 33-36.

23. Коваленко, Я.Р. Микоплазмы и микоплазмозы животных / Я.Р. Коваленко, М. А. Сидоров // Бюллетень ВИЭВ. М.,1980. - Вып. 38. - С. 5-13.

24. Комелединова, Н.Н. Изучение антигенного состава микоплазм методом иммуноэлектрофореза/ Н.Н. Комелединова, JI.C. Колабская, J1.A. Шорникова // Бюлллетень ВИЭВ. 1972. - №13. - С. 105.

25. Красиков, А.П. Ассоциативный респираторный микоплазмоз птиц / А.П. Красиков, Н.В. Рудаков, О.А. Сунцова // Актуальные проблемы обеспечения санитарного благополучия населения Омск, 2003. -Т.1 - С. 260-264.

26. Красиков, А.П. Новые механизмы исскуственной регуляции парази-то-хозяинных отношений : автореф. дис. доктора вет. наук. : 16.00.03. / А.П. Красиков; Новосибирск - 1996. - С. 42.

27. Красиков, А.П. Эпизоотология и лабораторная диагностика урогенитального микоплазмоза собак и кошек / А.П. Красиков, Н.Н. Новикова //Проблемы ветеринарного образования в агропромышленном комплексе : сб. науч.тр. ИВМ ОМГАУ.- Омск, 2003. С. 171-173.

28. Куликова, И.Л. Диагностика микоплазма-контаминации в культуре клеток животных // Ветеринария. 1989. - № 8. - С. 35-37.

29. Куликова, И.Л. Иммуноферментный анализ для видовой идентификации микоплазм выделенных из культур клеток / И. Л. Куликова, Т.А. Феоктистова // Иммунитет сельскохозяйственных животных: тр. ВИЭВ М, 1989, Т - 67. - С. 50 - 55.

30. Лабораторная диагностика микоплазмоза и уреаплазмоза у урологических и гинекологических больных / Ю.В. Вульфович и др. / ЖМЭИ. 1995. - №5. - С. 97 - 100.

31. Лыско, С.Б. Схемы профилактики и лечения респираторного и ассоциативного микоплазмоза птиц: автореф. дис.канд. ветеринар, наук: 16.00.03. /С.Б. Лыско; Омск, 2005.-С. 18.

32. Мальцева, Е.С. Клиническое значение микоплазменной инфекции при хроническом пиелонефрите у детей: автореф. дис. . канд. мед. наук: 14. 00. 09/ Е.С. Мальцева; Казань, 1996. - 23 с.

33. Маркина, О.С. Сравнительное изучение геномов микоплазм инфицирующих рогатый скот : автореф. дис. канд. ветеринар, наук. / О.С. Маркина ; Казань. - 1995. - С. 8-9.

34. Медицинская микоплазмология / С.В. Прозоровский и др. М: Медицина. - 1995. - С. 287.

35. Микоплазмозы животных / под ред.Я. Р. Коваленко. М. : Колос, 1976.-304 с.

36. Микоплазмозы в патологии животных / Г.Ф. Коромыслов и др.. -М.: Агропромиздат, 1987. 256 с.

37. Микоплазмы и их роль в патологии сельскохозяйственных животных / Я. Р. Коваленко и др. // Труды ВИЭВ. М., 1980. - Т. 51. - С. 24 -29.

38. Миллер, Г.Г. Взаимодействие микоплазм с вирусами человека и животных Ультраструктурный анализ / Г.Г. Миллер, И.В. Раковская, В.Э. Березин // Вестн. АМН СССР. 1991. - №6. - С. 36 - 43.

39. Митрофанов, П.М. Влияние бактерий при микоплазмозе телят / П.М. Митрофанов, К.М. Хакимова, Х.З. Гаффаров //Ветеринария. 1978. -№3 -С.52-55.

40. Митрофанов, П.М. Генитальный микоплазмоз крупного рогатого скота / П.М. Митрофанов. Новосибирск. - 1982. - С.20.

41. Митрофанов, П.М. Иммунопатология при микоплазмозе животных / П.М. Митрофанов, Х.З. Гаффаров, Р.В. Боровик // Ветеринария. -1984.-№5.-С. 35-37.

42. Митрофанов, П.М. Микоплазмоз половых органов у быков / П.М. Митрофанов, И.А. Курбанов // Труды ВИЭВ. М., 1977. - Т. 46. - С. 33-34.

43. Митрофанов, П.М. Патоморфология и патогенез микоплазменных инфекций крупного рогатого скота вызванных М. Bovirhinis и М. Bovigenitalium / П.М. Митрофанов //Научно технический бюллетень -1981.-Вып. ЗЗ.-С. 16-22.

44. Митрофанов, П.М. Патоморфология микоплазмоза половых органов крупного рогатого скота / П.М. Митрофанов, И.А. Курбанов // Труды ВИЭВ.-М., 1972.- Т. 13.-С. 34-36.

45. Наумкина, Е.В. Ureaplasma urealiticum в этиологии урогенитальных микст-инфекций / Е.В. Наумкина, Н.В. Рудаков, Н.В. Темникова // Журнал микробиологии 2006. - №3.-С.93-95.

46. Новикова, Н.Н. Экспресс-методы диагностики ассоциативного уроге-нитального микоплазмоза плотоядных: автореф. дис.канд. вет. наук: 16.00.03./Н.Н. Новикова; Новосибирск, 2002.-С. 18.

47. Ощепков, В.Г. Результаты изучения антигенного родства бруцелл и микоплазм / В.Г. Ощепков, М.Н. Шадрина, Н.Н. Шкиль // Инфекционная патология животных : Сб. науч. тр. Юбилейный выпуск ВНИИБТЖ.- Омск, 2001.-С. 130- 132.

48. Ощепков, В.Г. Этиологическая структура и пути распространения микоплазмозов у телят на территории Сибири / В.Г. Ощепков, М.Н. Шадрина, Н.Н. Шкиль // Инфекционная патология животных: сб. науч. тр.: Юбилейный вып. ВНИИБТЖ. Омск, 2001. - С. 292 - 293.

49. Патогенность полевых штамммов М. Bovigenitalium для генитального тракта быков производителей / З.П. Наумец и др. // Труды ВИЭВ. -М., 1977.-Т. 46.-С. 35-37.

50. Паутов, Ю.М. Активность антигенов разных видов микоплазм в РА и РДСК / Ю.М. Паутов //Ветеринария. 1988. - №1. - С.35 - 37.

51. Персистенция микоплазм в инфицированном организме: наблюдения, причины и механизмы, диагностика / С.В. Прозоровский и др. // ЖМЭИ. 1997. - №4. - С. 47 - 51.

52. Петросова, В.Н. Серологическая характеристика некоторых видов микоплазм по данным реакции агглютинации, связывания комплемента и ингибиции роста / В.Н. Петросова, И.В. Раковская, Г.Я.Каган //ЖМЭИ.- 1969.-.№10. С. 11.

53. Плотко, Е.Э. Роль хламидийной и микоплазменной инфекции в генезе послеродового эндометрита, оптимизация его диагностики и терапии / Е.Э. Плотко: автореф. дис. . канд. мед. наук: 14. 00. 01. / Урал. Гос. мед. акад. Омск, 1996. - 22 с.

54. Притулин, П.И. Роль микоплазм в патологии свиней / П.И. Притулин, В.П. Бердник // Бюллетень ВИЭВ. 1972. - №13. - С.37.

55. Поликарпов, В.П. Выделение микоплазм от ягнят больных пневмониями / В.П. Поликарпов, И.А. Нестеров // Бюллетень ВИЭВ. -М.,1972.-Вып. 13.-С. 61.

56. Поликарпов, В.П. Морфологическое строение микоплазм, выделенных из паринхиматозных органов больных пневмонией ягнят / В.П. Поликарпов, A.M. Никитенко // Труды ВИЭВ. Т. 46. - М., 1977. - С. 50-52.

57. Пустовар, А.Я. Микст-инфекции, обусловленные микоплазмами и другими бактериальными агентами / А.Я. Пустовар // VI съезд пара-зитоценологов Украины. Харьков, 1995. - С. 113-114.

58. Пустовар, А.Я. Особенности микоплазма-инфекции при энзоотической пневмонии свиней / А.Я. Пустовар, // Труды ВИЭВ. М., 1977. -Т. -46. - С. 65-69.

59. Рудаков, Н.В. Актуальные аспекты лабораторной диагностики мелких домашних животных / Н.В. Рудаков, Н.Н. Николаева, А.П. Красиков // сб. науч.тр. ИВМ ОМГАУ.- Омск, 2000. С. 132-134.

60. Румпель, Е. Г. Сравнение различных ПЦР тестов для выявления Chlamydia trachomatis, Ureaplasma urealyticum и Mycoplasma hominis у женщин с нарушением репродуктивной функции /Е. Г. Румпель, В.А. Шаманин // ЖМЭИ. - 2000. - №6. - С. 80 - 83.

61. Серебряков, А.С. Изучение некоторых вопросов эпизоотологии респираторного микоплазмоза птиц / А.С. Серебряков, B.C. Оскол-ков//Сб. трудов ВИВЭ. М : Колос, 1966. - Т.32. - С.9-23.

62. Сравнительная оценка методов диагностики микоплазменных инфекций урогенитального тракта / Д.Н. Балабанов и др. // Журнал Микробиологии 2006. - №4 - С.82-85.

63. Сунцова, О.А. Усовершенствование лабораторной диагностики ассоциативного респираторного микоплазмоза птиц: автореф. дис.канд. ветеринар, наук: 16.00.03. / О.А. Сунцова; Омск, 2004. С. 18.

64. Тимаков, В.Д. L- формы бактерий семейства Micoplasmatoceae в патологии / В.Д. Тимаков, Г.Я. Каган. М: Медицина, 1973. - С. 278.

65. Урогенитальный ассоциативный микоплазмоз плотоядных: эпизоото-логические и диагностические аспекты / А.П. Красиков и др. // Ветеринарная патология №1 (12) 2005. - С. 68-69.

66. Федорова, З.П. Серологический анализ микоплазм, выделенных от птиц, в РСК и РА / З.П. Федорова, О.В.Виноходов, И.А. Собчак // Бюллетень ВИЭВ.- М, 1972.-Вып.13.-С. 83-85.

67. Фукс, П.П. К вопросу о лабораторной диагностике микоплазмоза / П.П. Фукс, Н.В. Калашник, Г.Б. Герус // Информационный бюллетень ИЭКВМ Харьков, 1995. - С. 253 - 255.

68. Хламидии и микоплазмы у детей с заболеваниями мочевыводящих путей / З.Х. Ахмедшин и др. //Актуальные проблемы детской и под-растковой гинекологии и эндокринологии: Материалы 2-ой Респ. науч. практ. конф., 4 дек. 1996 г. - Уфа. - С. 85 - 88.

69. Чернова, О.А. Биохимические аспекты патогенеза при персистенции микоплазм у человека / О.А. Чернова: автореф. дис. . д-ра биол. наук : 03. 00. 04. / О.А. Чернова; Рос. АН Ин -т биохимии им. А. Н. Баха.-М, 1997.-51 с.

70. Чернов, В.М. Микоплазменные инфекции как возможный фактор генетических изменений в клетках высших эукариот / В.М. Чернов, О.А. Чернова // Цитология. 1996. - №2. - С. 107 - 114.

71. Шаповалова, Г.П. Реакция агглютинации для прижизненной диагностики микоплазма-милиагридис инфекции индеек/ Г.П. Шаповалова

72. Тезисы докладов к Всесоюз. науч.-произв. конф. "Комплексная система ветеринарных мероприятий в птицеводстве резерв повышения эффективности производства ". - М., 1989. - С.24 - 26.

73. Шегидевич, Э. А. О методах выделения и культивирования микоплазм / Э.А. Шегидевич, И.А. Яблоньская, М.А. Сидоров // Бюллетень ВИЭВ. 1972. - Вып. 13. - С. 64 -68.

74. Шкиль, Н. Н. Эпизоотологические и иммунологические аспекты микоплазмоза телят во взаимосвязи с бруцеллезом и другими инфекциями: автореф. дис. . канд. ветеринар, наук: 16. 00. 03 / Н. Н. Шкиль. Новосибирск, 2000. - 23 с.

75. Abele-Horn, М. Polymerase chain reaction versus culture for detection of Ureaplasma urealyticum and Mycoplasma hominis in the urogenital tract of adults and the respiratory tract of newborns / M. Abele-Horn, C. Wolff,

76. P. Dressel // Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 1996. - V. 15, Jul. - S. 595 - 598.

77. Albertsen, B.E. Pleuropneumonia-like organisms in the sement of dan-ishartificial insemination bulls / B.E. Albertsen // Nord. Vet. Med. 1955. -7-P.169.

78. Association of Mycoplasma hominis and Ureaplasma urealyticum with some indicators of nonspecific vaginitis / L. Cedillo-Ramirez et al. // Rev. Latinoam. Microbiol. 2000. - V. 42, Jan-Mar. - S. 1 - 6.

79. Baier, R.J. Failure of erythromycin to elimimate airway colonization with ureaplasma urealiticum in very low birth weight infants. / R.J. Baier, J. Loggins, Т.Е. Kruger // BMC Pediatr. 2003. - Sep.4 - P.3-10.

80. Barber, T.L. Primari isolation of mycoplasma organisms (PPLO) from mammalian sources / T.L. Barber, J. Fabricant // J. Bact. 1962. - V. 83. -№ 6. - S. 1268.

81. Bashiruddin, J.B. Evaluation of PCR systems for the identification and differentiation of Mycoplasma agalactiae and Mycoplasma bovis: a collaborative trial / J.B. Bashiruddin, J. Frey, M.N. Konigsson // Vet. J. -2005.-169(2) -P.268-343.

82. Bihari, A. Screening of sexually transmitted diseases (Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum and Chlamydia trachomatis) in young women / A. Bihari // Orv Hetil. 1997. - V. 138, Mar. - S. 799803.

83. Blom, E. Mycoplasmosis infections of the genital organs of Bulls / E. Blom, H. Ern // Acta Vet. Scand. 1967. -8 - P. 186.

84. Blom, E. Mycoplasmas in semen of Danish breeding buuls / E. Blom, H. Ern // Proc. II, Nordic Vet. Cong. 1970.- P.254.

85. Cai, H.Y. Development of real-time PCR for detection of Mycoplasma bovis in bovine milk and lung samples./ H.Y. Cai, P. Bell-Rogers, L. Parker, //J. Vet. Diagn. Invest. 2006. - 17(6) - P.537-582.

86. Chanock, R. Growth on artificial medium of an agent asociated with atypical pneumonia and its identification as a PPLO/ R. Chanock, L. Hay-flick, M. Barile // Proc. Nat. Acad. Sci 1962. - V. 48 - № 1. - S. 41.

87. Comparison of PCR for sputum samples obtained by induced cough and serological tests for diagnosis of Mycoplasma pneumonia infection/ T. Yamasaki et al. // Clin Vaccina Immunol. 2006. -V. 13(6), Jan. - P. 708-718.

88. Detection of Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, Ureaplasma urealyticum, and Mycoplasma genitalium in First-void Urine Specimens by Multiplex Polymerase Chain Reaction / J.B. Mahony et al.///Mol. Diagn. 1997. -V. 2, Sep - S. 161-168.

89. Edward, D. An investigatio of the biological properties of organisms of the pleuropneumonia group, with suggestions regarding the identification of streins/ D. Edward // J. Gen. Microbiol. 1950. -№ 4. - P. 311.

90. Edward, D. An investigation of pleuropneumonia-like organism isolated from the bovine genital tract / D. Edward // J. Gen. Microbiol. -1950.-№4.-P. 4.

91. Edward, D. The isoletion of organisms the pleuropneumonia group of dogs/ D. Edward, W. Fitzgerald // J. Gen. Microbiol. 1951. - № 5. - P. 566-569.

92. Edward, D. The pleuropneumonia group of organism: a reiew together with some new observations / D. Edward // J. Gen. Microbiol. 1954. - № 10.-P. 27.

93. Epitope mapping of the variable repetitive region with the MB antigen of Ureaplasma urealyticum / X. Zheng et al/. // Clin. Diagn. Lab. Immunol. 1996. - V. 3, Nov. - S. 774 - 778.

94. Erytromycin for the prevention of chronic lung disease in intubated preterm infants at risk for, or colonized or infected with ureaplasma urealiticum. / C.G. Mabanta et al. // Cochrane Database Systs Rev. -2003.(4):CD0033744

95. Freundt, E.A. The taxonomy of Mycoplasmatales recent progress and current problems / E.A. Freundt // Mycoplasmatales. Paradubice. 1973. -S. 9

96. Garsia, M. Evaluation and comparison of various PCR metods for detection of Mycoplasma gallisepticum infection in chickens./ M. Garsia, N. Ikuta, S. Levisohn // Avian Dis. 2005. - 49(1) - P. 125-157.

97. Gil-Juarez, C. Detection of Mycoplasma hominis and Ureaplasma urea-lyticum in women sexually active or not / C. Gil-Juarez, B.A. Calderon, J. Montero, A. Yanez // Rev. Latinoam. Microbiol. 1996. - V. 38, Apr-Jun. -S.81 -88.

98. Hoare, M. Surveyof the incidence of Mycoplasma infection in the Oviducts of Dairy Cows / M. Hoare, D. Haig // Vet. Rec. 1969. -V. 85(13) -P.351.

99. In vitro amplification of the 16S rRNA genes from Mycoplasma bovirhinis, Mycoplasma alkalescens and Mycoplasma bovigenitalium by PCR / H. Kobayashi et al. // J. Vet. Med. Sci. 1998. -V. 60, Dec. -S. 1299- 1303.

100. Jasper, D. Mycoplasma: Their role in bovine desease / D. Jasper // J. Am. Vet. Med. Ass. 1967. - V. 12 - P.650.

101. Jurstrang, M. Detection of Mycoplasma genitalium in urogenital speciments by real-time PCR and by conventional PCR assay / M. Jurstrang, J.S. Jasen, H. Fredlung, L. Falk, P. Moiling // J. Med. Microbiol. -2005.-V. 54(1)-P. 23-32.

102. Kehoe, I. Bovine Mycoplasma mastitis / I.Kehoe, N.L. Norcross// Ann. N.Y. Acad. Sci. 1967. - V.143 (1). - P. 337.

103. Klieneberger-Nobel, E. Pleuropneumonia-like organisms in genital infections/ E. Klieneberger-Nobel // Brit. Med. J. 1959. - № 1. - S. 19.

104. Leach, R.N. Comparative studies of Mycoplasma of bovine origin / R.N. Leach // Ann. N.Y. Acad. Sci. 1967. - V. 143( 1). - P. 305.

105. Leberman, P. Suseceptibiliti of pleurapnevmonia-like organisms to the in vitro action of antibiotics: terramycin and neomycin and sodium penicillin / P. Leberman, P. Smith, H. Morton // J. Urol. 1952. - V. 68. -P.399.

106. Leberman, P. Symboiotic growth of pleuropneumonia-like organisms with bacterial colonies/ P. Leberman, P. Smith, H. Morton // Proc. Soc. Exp. Biol. 1949. - V. 72. - S. 328.

107. Leberman, P. The suseceptibiliti of pleurapnevmonia-like organisms to the in vitro action of antibiotics: auretromycin, chloramphenicol, dihy-drostreptomycin and sodium penicillin / P. Leberman, P. Smith, H. Morton // J. Urol. 1950. - V. 64. - P. 167.

108. Lemcke, R. Media for the Mycoplasmatoceae / R. Lemcke // Lab. Pract. 1965. -V. 14. -№ 6. - S. 712.

109. Ley, D.N. Mycoplasma gallisepticum / D.N. Ley, H. W. Yoder // Diseases of poultry. USA/ - 2003. - P.227-243.

110. Naessens, A. Development of a monoclonal antibody to a Ureaplasma urealyticum serotype 9 antigen / A. Naessens, X. Cheng , S. Lauwers // J. Clin. Microbiol.- 1998.-V. 36, Apr. S. 1125- 1127.

111. Newnham, A. An in vitro coparison of some antibacterial, antifungal and antiprotozoal agents in various strains of Mycoplasma (PPLO). / A. Newnham, H.Chu // J. Hyg. Camp. 1965. - V. 63. - P.l - 3.

112. Ogasava, K.K. Efficacy of azitromycin in reducing lower genital Ureaplasma urealiticum colonization in women at risks for preterm delivery. /

113. K.K. Ogasava, Т.М. Goodwin // J. Matern Fetal Med. 1999. - V.8(l). -P.12-18.

114. Olson, N. Characteristics of PPLO isolated from the genital and respiratory tracts of Cattle / N. Olson // Ann. N.Y. Acard. Sci. 1960. - V.79. -P.677.

115. Page, L.A. Isolationof a nw serotype of Mycoplasma of bovine Placenta / L.A. Page // J. Am. Vet. Med. 1972. - V.8. - P.919.

116. Ramires, A.S. Development and evevaluation of diagnostic PCR for Mycoplasma sinovia using primers located in the intergenic spacer region the 23S RNA gene / A.S. Ramires, C.J. Naylor, P.P. Hammond // Vet. Microbiol. 2006. - V.7. -P.12-18.

117. Schaeverbeke, T. Systematic detection of mycoplasmas by culture and polymerase chain reaction (PCR) procedures in 209 synovial fluid samples / T. Schaeverbeke, H. Renaudin // Br. J. Rheumatol. 1997. -V. 36, Mar. - S. 310-314.

118. Schoetensack, H. M. Pure cultivation of the filtrabl virus isolated from canin distemper/ H. M. Schoetensack // Kitasato Arch. Exp. Med. 1934. -№ 11. — S. 277.

119. Speck, J. PPLO from the genital system of Cattle / J. Speck // Tierheilk -1962.-V.14.-P.244.

120. Taylor-Robinson, D. Те isolation and comparative biological and physical characteristics of T-mycoplamas of cattle / D. Taylor-Robinson, M. Willams, D. Haig Leach // J/ Gen. Microbiol. 1968. - V.54. - P. 33

121. Tang, F. F. Further investigations on the causal agent of bovine pleu-ropneumania/ F.F. Tang, H. Wei, J. Edgar // J. Path. Bact. 1936. - V. 42.-S.45.

122. Turner, A. W. Growth-inhibition tests with Micoplasma micoides as a basis for chemotherapy and selectiva culture media / A.W. Turner // Austr. Vet. J. 1960.-№ 5-S. 221.

123. Vazquez, F. Comparison of 3 culture methods for genital mycoplasmas / F. Vazquez, F. Carreno, A.F. Perez // Enferm. Infecc. Microbiol. Clin. -1995.-V. 13, Oct.-S. 460-463.

Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Ассоциативный урогенитальный микоплазмоз крупного рогатого скота

Автореферат диссертации по ветеринарии на тему Ассоциативный урогенитальный микоплазмоз крупного рогатого скота

Оглавление диссертации Вологодская, Ольга Владимировна :: 2006 :: Омск

Введение диссертации по теме "Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология", Вологодская, Ольга Владимировна, автореферат

Заключение диссертационного исследования на тему "Ассоциативный урогенитальный микоплазмоз крупного рогатого скота"

Список использованной литературы по ветеринарии, диссертация 2006 года, Вологодская, Ольга Владимировна

Похожие научные работы

Каталог диссертаций