Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Диагностика и лечение телят при микоплазмоз-ассоциированной инфекции

На правах рукописи

Свиридова Анна Николаевна

ДИАГНОСТИКА И ЛЕЧЕНИЕ ТЕЛЯТ ПРИ МИКОПЛАЗМОЗ-АССОЦИИРОВАННОЙ ИНФЕКЦИИ

16 00 03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Омск - 2007

003166244

Работа выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Омский государственный аграрный университет»

Научный руководитель доктор ветеринарных наук профессор

Красиков Александр Пантелеевич

Официальные оппоненты доктор биологических наук профессор

Сидоров Геннадий Николаевич

доктор ветеринарных наук профессор Бажин Михаил Аристоклевич

Ведущее учреждение Институт экспериментальной ветеринарии

Сибири и Дальнего Востока СО РАСХН

Защита состоится 13 ноября 2007 г в 1500 часов на заседании диссертационного совета Д 220 050 03 при ФГОУ ВПО «Омский государственный аграрный университет» в институте ветеринарной медицины по адресу 644122, г Омск-122, ул Октябрьская, 92, тел 24-15-35, факс 23-04-67 E-mail ivm omgau@,omsknet ru

www / ivm omgau ru С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке института ветеринарной медицины ОмГАУ

Автореферат разослан & октября 2007 г

Ученый секретарь диссертационного совета: канд ветеринар наук доцент сУ-Ь

Н П Жабин

1. Общая характеристика работы Актуальность темы. Респираторные болезни телят, в последние годы, по заключению многих отечественных и зарубежных ученых, стали одним из главных препятствий на пути развития промышленного скотоводства В органах дыхания телят и других животных обнаруживают значительное количество различных по видовому составу микоплазм, а также многокомпонентные системы (вирусы, бактерии), конечный эффект взаимодействия с которыми организма животного еще не раскрыт (П М Митрофанов, К М Хакимова, X 3 Гаффаров, 1978, L J Kusiluka, В Ojemyi, N F Frus, 2000, В Г Ощепков, М Н Шадрина, Н Н Шкиль, 2000, 2001, А П Красиков, Н В Рудаков, Н Н Николаева, 2001, Н Н Новикова, 2002, О А Сунцова, 2004, В Э Малошевич, С Б Лыско, Н Ф Хатько, 2005, О В Вологодская, 2006)

МикоплаЗмоз крупного рогатого скота характеризуется у коров и нетелей развитием маститов, эндометритов, вульвовагинитов, сальпингитов, абортами, рождением слаборазвитых, зачастую недоношенных, нежизнеспособных телят, бесплодием У быков он проявляется в виде орхитов и эпидидимитов, а у телят - керато-конъюнктивитами, ринитами, пневмониями и артритами

Данная инфекционная болезнь наносит хозяйствам значительный экономический ущерб Поэтому проблема микоплазмоза на сегодня весьма актуальна

Одной из причин низкого выхода и гибели телят в хозяйствах Омской области является широкое распространение среди маточного поголовья коров урогениталь-ного микоплазмоза в ассоциации с другими инфекциями (А П Красиков, О В Вологодская, 2004 - 2006, В Э Малошевич, 2005)

В связи с этим, актуальным является проведение массовых обследований молодняка крупного рогатого скота с применением экспресс-методов диагностики на микоплазмоз и его ассоциации с другими инфекционными болезнями Это позволит своевременно профилактировать распространение микоплазмоза, выявлять сопутствующие инфекции и лечить телят. Все это послужило основанием для проведения данных исследований

Цель работы. Усовершенствовать методы диагностики при микоплазмоз-ассоциированной инфекции и разработать методы лечения телят Задачи исследований:

- установить ассоциативные формы проявления микоплазмоза у молодняка крупного рогатого скота и степень их распространения в хозяйствах Омской области,

- изучить кулыуральные, морфологические, биохимические и патогенные свойства выделенных от телят микоплазм,

- разработать и испытать в производственных условиях экспресс- методы диагностики и эффективные схемы лечения телят при микоплазмоз-ассоциированной инфекции, дать им экономическое обоснование

Научная новизна. Выявлена широкая распространенность в хозяйствах л Омской области микоплазмоз-ассоциированной инфекции телят Изучены основ- > ные свойства микоплазм, выделенных от молодняка крупного рогатого скота Усовершенствованы экспресс-методы диагностики микоплазмоза микробиологический - с помощью специальных питательных сред и серологические - для выявления ми-

коплазм и их антигенов в биоматериале и антител в сыворотке крови и бронхоаль-веолярных смывах в РНИФ и РНГА

Получена приоритетная справка № 200 711 5734 / 13 (017092) от 25 04 07 на способ получения эритроцитарного диагностикума для реакции непрямой ге-магглютинации (РНГА) при микоплазмозе крупного рогатого скота

Разработаны научно-обоснованные рациональные схемы лечения телят разных возрастных групп при ассоциативном микоплазмозе и лабораторные методы контроля их эффективности

Теоретическая и практическая значимость работы. Материалы диссертации вносят определенный вклад в развитие науки микоплазмологии и в изучение микропаразитоценозов респираторной системы телят, дополняя концепцию о полиэтиологической роли микроорганизмов, участвующих в инфекционном процессе ассоциативного характера Результаты исследований являются основой для дальнейшего более глубокого изучения микропаразитоценозов других экологических ниш и систем организма животных

Использование эффективных рациональных схем лечения телят при мико-плазмоз-ассоциированной инфекции и экспресс-методов диагностики, которые отражены в методических рекомендациях «Комплексная система мер борьбы и профилактики с ассоциативными инфекционными болезнями животных» и «Диагностика и лечение при микоплазмоз-ассоциированной инфекции телят», ускорит сроки выявления больных животных, повысит сохранность телят, позволит контролировать эпизоотическую обстановку по данной инфекции

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на Межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины» (Омск, 2005, СО РАСХН ВНИИБТЖ), научной конференции профессорско-преподавательского состава и аспирантов ИВМ ФГОУ ВПО ОмГАУ, 2006 г «Научные и практические проблемы ветеринарной медицины, животноводства и перспективы их решения» (Омск, 2006), Межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины продуктивных и непродуктивных животных» (Омск, 2006, СО РАСХН ВНИИБТЖ), Международной научной конференции «Профилактика, диагностика и лечение инфекционных болезней, общих для людей и животных» (Ульяновск УГСХА, 2006г), Международной научно-практической конференции, посвященной 60-летию ГНУ Краснодарского НИВИ «Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях» (Краснодар, 2006), Межрегиональной научно-практической конференции «Патология сельскохозяйственных животных и пути ее профилактики» (Омск, 2007, СО РАСХН ВНИИБТЖ), Международной научно-практической конференции, посвященной 45-летию Северо-Казхстанского НИИ животноводства и ветеринарии «Состояние и перспективы аграрной науки Казахстана и Западной Сибири» (Бишкуль, 2007)

Публикации результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 131 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложе-

ний, списка литературы и приложения Работа иллюстрирована 31 таблицей и 15 рисунками Список литературы включает 164 источника, в том числе 50 зарубежных авторов

Внедрение результатов исследований. Результаты исследований отражены в методических рекомендациях «Комплексная система мер борьбы и профилактики при ассоциативных инфекционных болезнях животных» (Утверждены Ученым советом ИВМ ФГОУ ВПО ОмГАУ, протокол № 1 от 29 09 2004 г и секцией животноводства Центра научного обеспечения АПК Министерства сельского хозяйства и продовольствия Омской области от 08 10 2004 г, протокол № 5) и «Диагностика и лечение телят при микоплазмоз-ассоциированной инфекции» (Утверждены Ученым советом ИВМ ФГОУВПО ОмГАУ, протокол № 8 от 29 06 2007 г и секцией животноводства Центра научного обеспечения АПК Министерства сельского хозяйства и продовольствия Омской области от 13 09 2007 г, протокол № 7)

Материалы диссертации внедряются в хозяйствах Омской области и используются в учебном процессе кафедр эпизоотологии и инфекционных болезней, микробиологии, вирусологии и иммунологии института ветеринарной медицины ОмГАУ, институте повышения квалификации руководителей и специалистов АПК ОмГАУ, а также в курсе лекций Тюменского института переподготовки кадров агробизнеса

Основные положения, выносимые на защиту:

1 Ассоциативные формы проявления микоплазмоза телят и степень его распространения в хозяйствах Омской области

2 Усовершенствованные экспресс-методы диагностики микоплазмоза телят

3 Результаты экспериментального изучения различных схем лечения и методы лабораторного контроля их эффективности при микоплазмоз - ассоциированной инфекции телят

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы Исследования проводили с 2004 по 2007 год в лаборатории микстинфекций кафедры эпизоотологии и инфекционных болезней ИВМ ОмГАУ, в лаборатории зоонозных инфекций НИИПОИ Роспотребнадзора и хозяйствах Омской области

Тема диссертационной работы является составной частью комплексной государственной программы «Профилактика (диагностика) и меры борьбы с ассоциативными инфекционными и инвазионными болезнями животных и птиц» (№ гос регистрации 01 2 001100602)

Объектом исследований были телята 0,5-4 месячного возраста с выраженными клиническими признаками пневмонии, артритов и конъюнктивитов

Материалом для исследований служили пробы сывороток крови, бронхо-альвеолярных смывов, фекальных масс и слизи из прямой кишки, внутрисуставная жидкость, патологический материал от погибших телят и абортированных плодов

Для индикации и идентификации возбудителей применяли серологические и микробиологические методы Окрашивание мазков проводили по Романовскому — Гимзе и Граму Для серологических исследований применяли реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА) — для обнаружения антител в сыворотке крови и бронхо-альвеолярных смывах животных, реакцию непрямой иммунофлуоресценции (РНИФ) - для обнаружения антител и антигенов в пробах био- и патологического материала, полученного от погибших и вынужденно убитых животных

Микробиологические исследования проводили, используя разработанные совместно с ФГУ Омского НИИ природно-очаговых инфекций Роспотребнадзора, жидкие и плотные питательные среды для индикации и идентификации микоплазм Свойства выделенных микроорганизмов изучали по общепринятым методикам Микроскопирование проводили при помощи светового микроскопа «Ломо» (х 900) Для видового определения микоплазм использовали ключ Gourlay and Howard (1979)

Для исследований применяли полученные нами микоплазмозные и стандартные антигены, используемые для постановки РА и РСК, а в качестве антител -гомологичные антигенам кроличьи и бычьи антисыворотки, антивидовые для РНИФ и специфические сальмонеллезные, листериозные для РПИФ люминесцентные сыворотки меченные ФИТЦ (ИЭМ им H Ф Гамалеи), а также полученные нами кроличьи сыворотки против микоплазмоза, хламидиоза, ИРТ, диплококкоза, стафи-лококкоза и стрептококкоза

Видоспецифические сыворотки к полевым штаммам микоплазм получали путем гипериммунизации кроликов по схеме D Schimmel, в модификации А П Красикова, H H Новиковой, (2000)

Мазки с нанесенными люминесцентными сыворотками просматривали под микроскопом ЛЮМ Р-8 при увеличении в 900 раз Степень флуоресценции антител оценивали по 4-х крестной системе (Вайтекер и др , 1958) При приготовлении диаг-ностикума для РНГА в качестве клеточной основы использовали эритроциты барана, а для стабилизации 20%-й р-р формальдегида Фиксацию эритроцитов проводили по методу Фили в модификации Красикова А П (2002)

Исследования были направлены на выявление антигенов возбудителей ряда инфекционных болезней (микоплазмоз, сальмонеллез, пастереллез, хламидиоз, инфекционный ринотрахеит, лептоспироз, листериоз, диплококкоз, стрептококкоз, стафилококкоз, эшерихиоз) и вырабатываемых гомологичных специфических антител в респираторной, пищеварительной и кровеносной системах

Расчет экономической эффективности проводили по методике утвержденной Департаментом ветеринарии РФ от 21 02 97 г

Цифровые данные экспериментальных исследований обработаны методами математической статистики по Г Ф Лакину (1980) и с помощью программы Microsoft Excel

2.2. Изучение эпизоотической ситуации по микоплазмозу молодняка крупного рогатого скота и ассоциативным формам его проявления в хозяйствах Омской области

При изучении эпизоотической ситуации по микоплазмозу телят и его ассоциативным формам были проведены комплексные обследования хозяйств с использованием эпизоотологического, клинического, бактериологического и серологических методов

По результатам исследований установили, что микоплазмоз-ассоциированная инфекция телят имеет широкое распространение в хозяйствах Омской области (табл 1 ) При этом проявление микоплазмоза достоверно больше всех других инфекций (р < 0,001)

Наиболее насыщенный микробный пейзаж установлен в СПК «Украинский», где в различных сочетаниях выделяли возбудителей микоплазмоза и девяти других микроорганизмов у 50% обследованных животных

В ООО «Русский хлеб» микоплазмы были обнаружены у всех обследованных телят При этом выделяли ассоциации возбудителей ИРТ, хламидиоза, пасте-реллеза, лептоспироза, диплококкоза, эшерихиоза и сальмонеллеза

Высокую степень микоплазмоза (100%) в ассоциации с другими микроорганизмами отмечали в Агрофирме «Кормиловская», СПК «Ермолаевское» и СПК «Новороссийский» (50%) В ОАО «Алексеевское» и ЗАО «Знамя» при высоком уровне микоплазмоносительства (100%), другие микроорганизмы выделили в минимальном количестве В ряде хозяйств СПК «Россия», ЗАО им «Розы Люксембург», Молзавод «Кормиловский», СПК «Некрасовский» микоплазмами было поражено меньшее количество животных - от 38 до 88%

Из проб патологического материала микоплазмы также выделяли в ассоциации с другими возбудителями в 33-83% случаев (табл 2) При этом инфициро-ванность патологического материала микоплазмами достоверно выше всех других инфекций (р < 0,01)

В органах абортированных плодов из СПК им «Кирова» микоплазмы обнаруживали у 81% животных в ассоциации с хламидиями (33%), лептоспирами (17%), листериями (22%) и сальмонеллами (33%)

Ассоциативные формы проявления микоплазмоза у телят в хозяйствах Омской области

Хозяйства К-во ж-х Инфицировано (%), М±т р < 0,001

§ о о К) С г й X Н О, с и ==: о 5 Ч с я ч е- о В о ьа я

Россия 10 50,0± 15,8 " 70,0± 14,5 - 70,0± 15,8 90,0± 9,5 - - - 40,0± 15,5

им Розы Люксембург 10 70,0± 14,5 40,0± 15,5 40,0± 15,5 - 70 0± 14,5 70,0± 14,5 100,0 - 50,0± 15,8

Украинский 15 60,0± 12,6 60,0± 126 58,0± 12 7 75,0± 112 53,0± 129 60,0± 126 40,0± 12,7 - - 50,0± 12,9

Русский хлеб 20 50,0± 11,2 15,0± 7,8 40,0± 11,0 10,0± 6,7 20,0± 89 50,0± 11,2 60,0± 10,9 - - 100,0

Ермолаев-ское 10 40,0± 15,5 - 90,0± 9,5 - 60,0± 15,5 50,0± 15,8 70,0± 14,5 50,0± 15,8 20,0± 12,6 100,0

Алексеев-ское 7 35,0± 18,0 - - - 20,0± 15,1 - - - 30,0± 17,3 100,0

Знамя 8 - - - - - - 13,0± 11,9 - 13,0± 11,9 100,0

Сосновское 6 32,0± 19,0 33,0± 19,1 67,0± 19,2 - - 17,0± 15,3 17,0± 15,3 - - 50,0± 24,0

Агрофирма Кормилов-ская 8 60,0± 17,3 20,0± 14,1 80,0± 14,1 80,0± 14,1 80,0± 14,1 100,0 100,0

Молзавод Кормилов- ский 9 11,0± 10,4 11,0± 10,4 20,0± 13,3 44,0± 16,5 33,0± 15,7 11,0± 10,4 33,0± 15,7 88,0± 10,8

Нива 10 - - - - - - - -

Новороссийское 10 10,0± 9,5 20,0± 12,6 20,0± 12,6 30 0± 14,5 50,0± 15,8 40,0± 15,5 50,0± 15,8 50,0± 15,8

им Кирова 10 10,0± 9,5 - - - - - - - 100,0

Технофарм 10 ■ - 10,0± 9,5 - 20,0± 12,6 20,0± 12,6 10,0± 9,5 - - -

Новоцари-цино 10 70,0± 14,5 - - - - - - - -

Овцевод 5 - - - - - - - - - -

Некрасовский 10 - - - - - - - - - 80,0± 12,6

Всего(17) 168 42,0± 3,8 28,0± 3,5 50,0± 39 38,0± 3,7 49,0± 3,9 51,0± 3,9 47,0± 3,8 42,0± 38 21,0± 3,1 77,0± 3,2

Примечание сал - сальмонеллы, пас - пастереллы, хлам - хламидии, ИРТ - вирус инфекционного ринотрахеита, леп - лептоспиры, лис - листерии, дип - диплококки, стр -стрептококки, ста - стафилококки, мик - микоплазмы

Таким образом, по результатам эпизоотологического обследования хозяйств Омской области установлено, что микоплазмоз телят имеет широкое распространение Из 17 обследованных хозяйств с высоким уровнем гибели телят, микоплазмоз отсутствовал только в четырех, при этом в виде моноинфекции данную болезнь не регистрировали

! ■ ' »

Изучение инфицированности патологического материала от погибших или вынужденно убитых телят и'абортированных плодов* в РНИФ

№ п п Хозяйства К-во ж-х Инфицировано (%), М±ш р < 0,01

5 О о (Я с г « X н си 5 с и п о 5 Ч ы я г

1 Солнцево 6 - 33,0 ±19,0 - - 33,0 ±19,2 17,0 ±15,3 -

2 Знамя 6 - - - - - - 83,0 ±15,3

3 им Розы Люксембург 24 35,0 ±9,7 15,0 ±7,3 40,0 ±10,0 - 50,0 ±10,2 75,0 ±8,8 75,0 ±8,8

4 им Кирова 24 25,0 ±8,8 19,0 ±8,0 31,0 ±9,4 - 6,0 ±4,8 31,0 ±9,4 66,0 ±9,7

4 1 им Кирова* 18 33,0 ±11,1 - 33,0 ±11,1 - 17,0 ±8,8 22,0 ±9,8 81,0 ±9,2

5 Георгиевское 6 - - - - - 25,0 ±17,7 33,0 ±19,2

6 Сосновское 3 - 33,0 ±11,1 42,0 ±11,6 50,0 ±11,8 - 16,0 ±18,6 39,0 ±11,5

7 Русский хлеб 6 - 100,0 33,0 ±19,2 - - 33,0 ±19,2 33,0 ±19,2

8 Россия 18 - 39,0 ±11,5 22,0 ±9,8 - 33,0 ±11,5 11,0 ±7,4 43,0 ±11,7

Всего 126 31,0 ±4,1 39,0 ±4,3 33,5 ±4,2 50,0 ±4,5 27,0 ±3,9 28,0 ±4,0 56,0 ±4,4

2.3. Диагностика микоплазмоза 2.3.1. Микробиологические методы диагностики

микоплазмоза молодняка КРС 2.3.1.1. Индикация и идентификация микоплазм на питательных средах При проведении микробиологического метода диагностики микоплазмоза на питательных средах исследовали бронхоальвеолярную слизь, суставную и конъ-юнктивальную жидкости, патологический материал от погибших телят и абортированных плодов С этой целью использовали жидкие и плотные элективные питательные среды для индикации и идентификации микоплазм

Рост микоплазм на жидких питательных средах при 37 °С в течение трех суток наблюдали визуально При наличие микоплазм в исследуемом материале происходил сдвиг рН питательной среды, изменялся ее цвет, обусловленный индикатором Гибель сопутствующей микрофлоры осуществлялась под воздействием ингибиторов, входящих в состав питательной среды По ферментации глюкозы, аргинина или мочевины идентифицировали выделенные микоплазмы на глюкозо-, аргининза-висимые и уреаплазмы

В последующем для изучения культуральных свойств микоплазм, культуры пересевали на плотные диагностические среды, содержащие 1,3% агара Дифко Для

этого 0,1 мл исследуемой культуры микоплазм вносили пастеровской пипеткой или стерильным одноразовым шприцем на поверхность агара и подсушивали при комнатной температуре Инкубацию посевов проводили при 37-38 °С в течение 5 сут За ростом микоплазм наблюдали, просматривая чашки Петри под малым увеличением микроскопа (х 45-70) На плотной среде отмечали рост типичных колоний микоплазм округлой формы, несливающихся друг с другом с врастающим в агар центром и нежной периферией

2.3. 2. Основные биологические свойства микоплазм 2.3. 2.1. Морфологические свойства

Тинкториальные и морфологические свойства микоплазм изучали микроскопическим методом Для этого из трехсуточных культур готовили мазки, высушивали на воздухе, фиксировали метиловым спиртом в течение 5 мин и окрашивали по Романовскому - Гимзе 60 мин при 37 °С Промывали и просматривали мазок под иммерсией Наблюдали преимущественно кокки и овоидно-перстневидные формы микоплазм (0,3-0,5 мкм) сине-фиолетового цвета, а также палочки (2-5 мкм), скопления зернистой массы с включениями микроструктурных элементов.

2.3.2.2. Биохимические свойства

Принадлежность выделенных культур к микоплазмам определяли по основным биохимическим свойствам разложение глюкозы, аргинина, мочевины, культивируя их на жидких и плотных элективных диагностических питательных средах Определяя видовую идентификацию микоплазм по ключу Gourlay and Howard (1979), изучали протеолитическую активность, редукцию тетразоля, потребность в холестерине, дигитонинчувствительность и рост при 22°С

Микоплазмы М arginini и Ureaplasma sp , выделенные из проб от телят с клиническими признаками в хозяйствах Омской области, были аналогичны ранее выделенным от коров родильно-профилакторного периода, что свидетельствует о передаче возбудителей от коров-матерей телятам Дополнительно был выделен вид М bovirhims (табл 3 )

Основные свойства микоплазм, выделеных у телят

Род и вид Ферментация глюкозы Гидролиз аргинина Уреазная акттивность Пленка и пятна Редукция тетразоля Потребность в холестерине Дигитонин чувствительность Протеолитиче-ская активость Рост при 22°С

М bovirhinis + - - - + + + + -

М arginini - + - - - + + + -

Ureaplasma sp - - + - - + + + -

2. 3. 2. 3. Патогенные свойства

Патогенность штаммов микоплазм, выделенных от телят в хозяйствах Омской области, изучали на белых мышах Для этого использовали полевые штаммы М bovirhmis, М arginini, Ureaplasma sp

В опыт взяли 20 белых мышей массой по 20 граммов, которых разделили на 4 группы, три опытных и одна контрольная (интактная), по пять голов в каждой группе Культуры микоплазм вводили внутрибрюшинно, однократно в объеме 0,5 мл На второй день после заражения наступила гибель всех мышей Мыши контрольной группы были девитализированы на десятые сутки

При бактериологическом исследовании микоплазмы были обнаружены в опытных группах у всех животных В патологическом материале из паренхиматозных органов мышей контрольной группы микоплазмы не были выделены Результаты проведенного опыта подтверждают высокую патогенность, изолированных от телят микоплазм При 100%-ной летальности степень инфицированно-сти органов М bovirhinis составила 96%, М argimm - 92%, Ureaplasma sp -100%

2.4. Серологические методы диагностики микоплазмоза 2.4.1. Получение микоилазмозных антигенов и диагностических сывороток для РНИФ

Антигены для РНИФ готовили из выделенных от телят трехсуточных инактивированных на водяной бане при 70 °С - 30 мин культур (М bovirhinis, М arginini и Ureaplasma sp), которые отмывали от питательной среды путем центрифугирования при 6000 g 30 мин Осадок после трехкратного ресуспензирования и последующего центрифугирования разводили до концентрации 1,7 млрд микробных клеток в 1 мл по бактериальному стандарту мутности (ГИСК им JIА Тарасевича) Кроликов разделили на три группы (по две головы на каждый штамм) и гипериммунизировали внутривенно восьмикратно возрастающими дозами (суммарная 19,55 млрд м.т) в сочетании с подкожным

сочетании с подкожным введением иммуностимулятора левамизола по указанной в п 2 1 схеме

Синтез антител изучали в динамике на 7, 14, 21 и 30 сутки после гипериммунизации в реакции непрямой иммунофлуоресценции, которую ставили на предметных стеклах по общепринятой методике, учет реакции проводили в крестах, свечение менее чем на два креста считали отрицательным

На седьмой день после иммунизации антитела в РНИФ на все виды мико-плазм выявляли в низких титрах 1 10 - 1 20 На 14-й день титр антител повысился с 1 10 до 1:640 на все вводимые антигены, а на 30-е сутки - достиг максимального уровня 1 640 - 1 2560

Таким образом, нами были получены три высокоактивные кроличьи сыворотки с диагностическим титром 1 640 - 1 2560 в РНИФ для индикации из биоматериала (бронхоальвеолярная слизь) больных телят и патологического материала посмертно М bovirhinis, М argmini и Ureaplasma sp

2.4.1.1. Изучение специфичности и активности сывороток и антигенов в РНИФ

На следующем этапе исследований определяли специфичность и активность полученных микоплазмозных сывороток и антигенов в РНИФ

Для этих целей применяли полученные нами антигены и кроличьи антими-коплазмозные сыворотки в разведениях 1 10- 1 2560 Для изучения специфичности микоплазмозных антигенов в РНИФ применяли сыворотки против микоплазмоза, хламидиоза, лептоспироза, листериоза, сальмонеллеза, риккетсиоза и эшерихиоза в разведении 1 10

При этом установили высокую внутривидовую специфичность полученных микоплазмозных кроличьих сывороток в РНИФ, которые реагировали только с аналогичными антигенами Активность сыворотки достигала титра антител до уровня 1 1280-1 2560

Микоплазмозные антигены также показали высокую гетерологичную специфичность с сыворотками против хламидиоза, лептоспироза, листериоза, эшерихиоза и сальмонеллеза, с которыми они не реагировали в РНИФ Положительную реакцию отмечали только с аналогичными кроличьими антисыворотками

2.4.2. Получение эритроцитарного диагиостикума для реакции непрямой гемагглютинации (РНГА)

Формалинизированные 3%-ные эритроциты барана сенсибилизировали различными разведениями смеси трех антигенов микоплазм (15-1 80) в соотношении два объема антигена и один эритроцитов

Для контроля диагностикума проводили постановку РНГА макрометодом в объеме 0,5 мл в полистироловых пластинках с микоплазмозными (Г, А, У) и смешанной (Г + А + У) микоплазмозными сыворотками в разведениях от 1 10 до 1 2560 В качестве разбавителя применяли фосфатный буфер, pH - 6,4 При постановке реакции осуществляли соответствующие контроли

С тремя микоплазмозными сыворотками диагностикум реагировал на четыре креста до предельного титра (1 320), со смешанной против трех видов микоплазм

сывороткой - на три креста (1 640) С отрицательной сывороткой во всех разведениях и буферным физиологическим раствором реакция была отрицательной

При изучении специфичности микоплазмозного эритроцитарного диагно-стикума (МЭД) в РИГА установлено, что оптимальным разведением антигена для сенсибилизации формалинизированных эритроцитов является 1:10, при котором отсутствовали перекрестные реакции с хламидиозной, эшерихиозной и против инфекционного ринотрахеита сыворотками, тогда как при разведении антигена 1 5 РИГА с данными сыворотками была положительной С гомологичными микоплаз-мозными сыворотками с титром 1 20 отмечали реакцию на четыре креста при разведении антигена 1 10, на три креста - 1 20, на два креста - 1 40 Отсутствие реакции с микоплазмозными сыворотками регистрировали при использовании МЭД разведенного 1 80

Таким образом, полученный эритроцитарный диагностикум можно использовать для диагностики микоплазмоза телят, принимая за диагностический титр в РИГА разведение испытуемой сыворотки 1 20

2.4.3. Сравнительная оценка диагностической ценности микробиологического и серологических (РНИФ, РНГА) методов диагностики микоплазмоза телят в производственных условиях

Чувствительность микробиологического метода диагностики изучали в сравнении с серологическими методами (РНИФ, РНГА) с применением полученных нами сывороток и антигенов Материалами для исследований являлись пробы патологического материала от погибших, вынужденно убитых телят и абортированных плодов, бронхоальвеолярных смывов, сыворотки крови, внутрисуставной жидкости от телят из 17-ти хозяйств Омской области

Наиболее чувствительным диагностическим тестом является РНИФ, с помощью которой выявляется по результатам исследования сыворотки крови и бронхоальвеолярных смывов 79,4-85,3% больных микоплазмозом телят соответственно (табл. 4) А при исследовании бронхоальвеолярных смывов регистрируется на 5,9% больше больных животных и с более высоким уровнем антител, что свидетельствует о выработке, наряду с общим, «местного» тканевого иммунитета у телят

РНГА по чувствительности незначительно уступает РНИФ Так, с помощью данного теста при исследовании сыворотки крови и бронхоальвеолярных смывов выявлено в среднем по десяти хозяйствам 62,2 - 80,7% больных микоплазмозом телят, что на 17,2-4,6% соответственно меньше, чем в РНИФ Нами установлена закономерность, указывающая на более высокий уровень антител в бронхоальвеолярных смывах, чем в сыворотке крови, при этом количество реагирующих животных при исследовании бронхоальвеолярных смывов было на 18,5% больше

Вместе с тем, комплексное применение РНГА и РНИФ для исследования сыворотки крови и бронхоальвеолярных смывов позволяет более полно выявлять больных микоплазмозом телят Так, в РНИФ по результатам исследования сыворотки крови выявлено 79,4% телят, а при комплексном исследовании сыворотки крови и бронхоальвеолярных смывов с помощью данного теста зарегистрировано 81,5% больных животных Также в РНГА с сывороткой крови и в РНГА с бронхоальвео-лярными смывами вместе выявлено 71% реагирующих на микоплазмоз телят, тогда как в РНГА с сывороткой крови реагировало только 62,2% животных

По результатам исследования бронхоальвеолярных смывов с помощью РИГА и РНИФ вместе зарегистрировано 84,5% реагирующих на микоплазмоз телят, а в одной РИГА только 80,7%

Однако в РНИФ с сывороткой крови дополнительно к РНГА было выявлено от 5% до 65% телят (в среднем 22,5%), в то же время в РНИФ с бронхоальвеолярными смывами дополнительно к РНГА обнаружено от 5% до 20% (в среднем 6%) животных

С помощью же РНГА при исследовании сыворотки крови удалось дополнительно к РНИФ выявить от 10% до 20% (в среднем 4%), реагирующих на микоплазмоз телят, а при исследовании бронхоальвеолярных смывов - до 10% (в среднем 2%)

При этом положительные результаты серологических исследований подтверждаются выделением микоплазм при микробиологических исследованиях проб бронхоальвеолярных смывов телят в 79,8% случаев, что указывает на высокую диагностическую ценность РГНА и РНИФ для диагностики микоплазмоза телят

При выборочном исследовании проб сыворотки крови и бронхоальвеолярных смывов от 100 клинически здоровых телят из данных хозяйств в РНГА и РНИФ результаты были отрицательными, что указывает также и на специфичность этих тестов

Таблица 4

Оценка диагностической ценности РНГА и РНИФ в производственных усло-

виях при микоплазмозе телят

Хозяйства Кол-во телят РНИФ в % РНГА в % Микробиологический в %

сыв-ка крови бронх смывы сыв-ка крови бронх смыв

1 Большевик 20 67 90 35 70 90

2 им Кирова 20 100 100 35 85 100

3 Россия 20 75 85 70 80 90

4 Новороссийский 10 80 80 60 80 80

5 Русский хлеб 10 90 90 60 90 70

6 Сосновское 10 70 90 70 90 50

7 Некрасовский 18 72 78 72 72 78

8 им Розы Люксембург 10 100 100 90 100 100

9 Нива 10 100 100 90 100 100

10 Новоцарицино 10 40 40 40 40 40

Всего 138 79,4 85,3 62,2 80,7 79,8

2.5. Изыскание средств и методов лечения телят при микоплазмоз-ассоциированной инфекции 2.5.1. Определение чувствительности полевых культур микоплазм к антибактериальным препаратам in vitro

При изыскании средств лечения животных при микоплазмоз- ассоциированной инфекции определяли чувствительность полевых культур микоплазм к антибактериальным препаратам методом серийных разведений

Наибольшей активностью in vitro в отношении культур, выделенных из респираторного тракта телят, обладали препараты тетрациклинового (тетрациклин, ле-вотетрасульфин, тетра-триметосул - 74-87%, 27-67%, 39-65%) и фторхинолонового (энрофлоксацин, норфлоксацин — 46-82%, 49-75%) рядов и амоксицилин (38-54%), соответственно Препараты как по отдельности, так и в различных сочетаниях, были испытаны в опытах при изучении схем лечения телят при микоплазмоз-ассоциированной инфекциии в производственных условиях

2.5.2. Изучение различных схем лечения и лабораторных методов контроля их эффективности

Действие различных схем лечения испытывали на 45 телятах с клиническими признаками бронхопневмоний, артритов, кератоконъюнктивитов и положительными результатами лабораторных исследований (табл 5)

До лечения и через 10 дней после лечения исследовали сыворотку крови, бронхоальвеолярные смывы, фекальные массы и слизь из прямой кишки серологическими методами реакция прямой (РПИФ) и непрямой (РНИФ) иммунофлуорес-ценции и микробиологическими, с применением жидких и плотных питательных сред, для индикации и идентификации микоплазм Критерием оценки эффективности схем лечения служили клинические признаки, сохранность телят и отсутствие или снижение количества животных микробоносителей после лечения Опыт I ЗАО «им Кирова» Больных телят 1-3 мес возраста разделили на 5 групп по 5 голов в каждой Животных 4 опытных групп лечили по разным схемам, а контрольную - по традиционной схеме, применяемой в хозяйстве

Опыт II ЗАО «им Розы Люксембург»

Аналогично первому опыту телят разделили на 4 группы по 5 голов в каждой Животных двух опытных групп лечили по разным схемам, животных третьей (контрольной) группы не подвергали лечению и в четвертую (контрольную) входили здоровые животные

При микоплазмоз-ассоциированной инфекции с возбудителями наиболее опасных в эпизоотическом плане болезней (лептоспироз, листериоз, пастереллез, диплококкоз) наиболее эффективными по отсутствию гибели телят, клинических признаков и остаточного микробоносительства по результатам лабораторных исследований (микробиологический, РНИФ и РПИФ) являются 6 и 7 схемы лечения, включающие в себя сочетанное применение амоксициллина с левотетрасульфином и энрофлокса со стрептомицином

Схемы лечения телят при микоплазмоз-ассоциированной инфекции

Группы ж-х Характеристика групп Применяемые препараты Продолжительность лечения (дней)

опыт 1

1-я Хлам + лепт + лист + сальм + паст + мик + эш Амоксициллин (однократно) 10

2-я Хлам + дипл + мик + эш Тетратриметасул (двукратно с интервалом 3 дня) 10

3-я Хлам + лепт + сальм + мик + эш Левотетрасульфин (двукратно с интервалом 3 дня) 10

4-я Хлам + лепт + сальм + паст + мик + эш Энроксил (3 дня подряд) 10

5-я Хлам + лепт + лист + сальм + паст + мик + эш Контрольная группа, леченная по традиционной схеме, применяемой в хозяйстве (поливалентная сыворотка против сальмонеллеза, пастереллеза, парагриппа - 3, инфекционного ринотрахеита, миксоферон и тиланик) 10

опыт 2

6-я Хлам + лепт + лист + дипл + паст + мик + эш Амоксициллин (двукратно с интервалом 24 часа) + Левотетрасульфин ПЭГ через 6 дней (двукратно с интервалом 3 дня) 15

7-я Хлам + лепт + лист + дипл + паст + мик + эш Энрофлокс (трехкратно с интервалом 24 часа) + Стрептомицин через 6 дней (двукратно с интервалом 3 дня) 18

8-я Хлам + лепт + лист + дипл + паст + мик + эш Контрольная не леченая группа -

9-я Клинически здоровые животные Контрольная интактная группа -

Примечание хлам - хламидиоз, лепт - лептоспироз, лист — листериоз, сальм -сальмонеллез, мик - микоплазмоз, эш - эшерихиоз

По результатам производственного внедрения данных схем лечения в ЗАО «им Розы Люксембург» гибель телят, а также все экономические показатели ущерба уменьшились в три раза Так фактический ущерб от падежа и недополучения живой массы снизился на 274323 руб , на одно заболевшее животное - на 56 руб, на одно животное стада - на 783 руб Таким образом, был предотвращен экономиче-

ский ущерб на сумму 313506 руб Экономический эффект на один рубль ветеринарных затрат составил 20 рублей

ВЫВОДЫ

1 Микоплзмоз-ассоциированная инфекция телят имеет широкое распространение в 13-ти хозяйствах (77%) Омской области из 17-ти подвергнутых эпизоотологиче-скому обследованию

2 Жидкие и плотные микоплазмозные питательные среды ФГУ НИИ природ-но-очаговых инфекций Роспотребнадзора (г Омск) обладают специфичностью и чувствительностью к микоплазмам, выделяемым из бронхоальвеолярных смывов и патологического материала у телят В них выявляются микоплазмы в 50-70% случаев соответственно Они могут применяться для прижизненной и посмертной микробиологической диагностики

3 Выделенные у телят микоплазмы М arginini, Ureaplasma sp по биохимическим свойствам аналогичны таковым, изолированным у маточного поголовья из секрета урогенитального тракта, что обусловлено их передачей от коров-матерей Дополнительно выделена М bovirhinis

4 Антигены, полученные из полевых штаммов микоплазм и аналогичные им кроличьи сыворотки, обладают высокой активностью и специфичностью в РНИФ для проведения серологических исследований на микоплазмоз, которая выявляет 79,4-85,3% больных телят

5 Разработан эритроцитарный антиген, который может использоваться в РНГА для дополнительной диагностики микоплазмоза РНГА по чувствительности незначительно уступает РНИФ и выявляет в аналогичных исследованиях 62,2-80,7% больных телят Оба метода дополняют друг друга и позволяют обнаружить большее количество больных животных При этом серологические данные подтверждаются выделением микоплазм при микробиологическом исследовании бронхоальвеолярных смывов телят в 79,8% случаев, что указывает на высокую диагностическую ценность РНГА и РНИФ при микоплазмозе телят

6 Полевые культуры микоплазм, выделенные от молодняка крупного рогатого скота, обладают высокой чувствительностью к препаратам тетрациклинового (7487%), а также фторхинолонового (46-82%) рядов

7 При лечении микоплазмоз-ассоциированной инфекции телят наиболее эффективными являются схемы с сочетанным применением амоксициллина и комплексного препарата левотетрасульфина, энрофлокса и стрептомицина Экономический эффект от применения предложенных рациональных схем диагностики и лечения составил 20 рублей на один рубль затрат

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для ветеринарной практики предложены рациональные схемы диагностики и лечения телят при микоплазмоз-ассоциированной инфекции с учетом всех микроорганизмов, участвующих в инфекционном процессе, которые подробно изложены в методических рекомендациях «Коплексная система мер борьбы и профилактики при ассоциативных инфекционных болезнях животных» и «Диагностика и лечение при микоплазмоз-ассоциированной инфекции телят»

Материалы диссертации используются в учебном процессе на кафедрах эпизоотологии и инфекционных болезней, микробиологии, вирусологии и иммунологии в учебных и научно-исследовательских учреждениях ветеринарной медицины.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Красиков, А П Ассоциативные формы проявления микоплазмоза у телят / А П Красиков, А H Свиридова // Практик - 2007 - № 1 -С 72-75

2 Красиков, А П Диагностика ассоциативного микоплазмоза телят при помощи бактериологического и серологического методов / А П Красиков, А H Свиридова // Профилактика, диагностика и лечение инфекционных болезней, общих для людей и животных сб науч тр / Ульяновская гос с х академия - Ульяновск, 2006 - С 240-243

3 Красиков. А П Диагностика и лечение при респираторной микоплазмоз-ассоциированной инфекции телят / А П Красиков, А H Свиридова // Актуальные проблемы ветеринарной медицины сб науч тр/ИВМОмГАУ - Омск, 2007 - С 107-111

4 Красиков, А П Микоплазмоз телят и его ассоциативные формы проявления/ А П Красиков, А H Свиридова // Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях сб науч. тр / Краснодарский НИВИ - Краснодар, 2006 -С 163-166

5 Распространенность ассоциативных инфекционных болезней крупного рогатого скота в хозяйствах Омской области / Красиков А П, Малошевич В Э, Свиридова А H , Наконечный О И. II Актуальные проблемы ветеринарной медицины сб науч тр / ИВМ ОмГАУ - Омск, 2007 - С 118-121.

6 Свиридова, А H Ассоциативный микоплазмоз телят и его диагностика / А H Свиридова // Состояние и перспективы аграрной науки Казахстана и Западной Сибири сб науч тр / Северо-Казахстанского НИИ животноводства и ветеринарии - Биш-куль, 2007 -С 291-297.

7 Свиридова, А H Схемы лечения телят и лабораторные методы контроля их эффективности при микоплазмоз-ассоциированной инфекции /АН Свиридова // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки - 2007 - №6 - С 69-74

8 Свиридова, А H Схемы лечения телят при микоплазмоз-ассоциированной инфекции /АН Свиридова // Патология сельскохозяйственных животных и пути ее профилактики сб науч тр /ВНИИ БТЖ СО РАСХН -Омск, 2007 -С 147-151

На правах рукописи

Свиридова Анна Николаевна

ДИАГНОСТИКА И ЛЕЧЕНИЕ ТЕЛЯТ ПРИ МИКОПЛАЗМОЗ-АССОЦИИРОВАННОЙ ИНФЕКЦИИ

16 00 03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Омск-2007

Сдано в набор 02 10 07. Подписано в печать 02.10 07

Формат 60x84/16 Гарнитура Times New Roman Усл. печ. л. 1,00 Печать оперативная. Тираж 100 экз. Лицензия J1T № 020074

Отпечатано с оригинал-макета в типографии ООО «Вариант-Омск» 644043, г. Омск, ул Коммунистическая, 45 Тел /факс 25-14-34

Актуальность темы. Респираторные болезни телят, в последние годы, по заключению многих отечественных и зарубежных учёных, стали одним из главных препятствий на пути развития промышленного скотоводства. В респираторных органах телят обнаруживают значительное количество микоплазм, различных по видовому составу, а также многокомпонентные системы (вирусы, бактерии), конечный эффект взаимодействия организма животного с которыми ещё не раскрыт. Проблема взаимодействия микоплазм, бактерий, вирусов и клеток макро-оганизма представляет не только теоретический, но и большой практический интерес для медицины (Ю.В. Вульфович, С.В. Прозоровский, И.В. Раковская, А.П. Джумигр, С.А. Гончарова, Л.Г. Горина, В.В. Не-устроева, Г.Г. Миллер, В.Э. Березин, 1991, 1995, 1997, 1998) и ветеринарии (П.М. Митрофанов, К.М. Хакимова, Х.З. Гаффаров, 1978; З.Х. Ах-медшин, Р.З. Ахмедшин, С.А. Коновалов, JI.B. Коновалова, Д.Н. Гоман, 1996; Л.И. Мальцева, В.М. Чернов, Е.С. Мальцева, Р.В. Федоров, В.В. Софонов, 1996; JI.A. Газовская, 1997; Е.И. Васильева, J1.B. Фесячко, А.В. Марченкова, Л.Н Бурлаку, 1997; С. Liu, R.Z. Bai, X.J. Qu, 1997; F. Kong, X. Zhu, X. Zhang, 1997; A.J. Talat, D.T. Crouse., B.K. English, C. Newman, L. Livingston, E. Meals,1998; L.J. Kusiluka, B. Ojeniyi, N.F. Friis, 2000; В.Г. Ощепков, M.H. Шадрина, H.H. Шкиль, 2000, 2001; А.П. Красиков, H.B. Рудаков, H.H. Николаева, О.В. Вологодская, И.Г. Алексеева, Н.И. Водопьянова, 2001; Н.Н. Новикова, 2002; А.П. Красиков, Н.В. Рудаков, 2003; О.А. Сунцова, 2004; В.Э. Малошевич, С.Б. Лыско, Н.Ф. Хатько, 2005; О.В. Вологодская, 2006).

Микоплазмоз крупного рогатого скота характеризуется: у коров и нетелей развитием маститов, эндометритов, вульвовагинитов, сальпингитов, абортами, рождением слаборазвитых, зачастую недоношенных, нежизнеспособных телят, бесплодием; у быков проявляется в виде орхи-тов и эпидидимитов; у телят - кератоконъюнктивитами, ринитами, пневмониями и артритами.

Данная инфекционная болезнь наносит хозяйствам значительный экономический ущерб. Поэтому проблема микоплазмоза на сегодня весьма актуальна.

Одной из причин низкого выхода и гибели телят в хозяйствах Омской области является широкое распространение среди маточного поголовья коров урогенитального микоплазмоза в ассоциации с другими инфекциями (А.П. Красиков, О.В. Вологодская, 2004 - 2006; В.Э. Малоше-вич, 2005).

В связи с этим весьма актуальным является проведение массовых обследований молодняка крупного рогатого скота с применением экспресс-методов диагностики на микоплазмоз и его ассоциации с другими инфекционными болезнями. Это позволит своевременно выявлять, лечить и профилактировать распространение микоплазмоза и сопутствующих инфекций у молодняка крупного рогатого скота. Все это послужило основанием для проведения данных исследований.

Цель работы. Усовершенствовать методы диагностики при мико-плазмоз-ассоциированной инфекции и разработать методы лечения телят.

Задачи исследований:

- установить ассоциативные формы проявления микоплазмоза у молодняка крупного рогатого скота и степень их распространения в хозяйствах Омской области;

- изучить культуральные, морфологические, биохимические и патогенные свойства выделенных от телят микоплазм;

- разработать и испытать в производственных условиях экспресс-методы диагностики и эффективные схемы лечения телят при мико-плазмоз-ассоциированной инфекции, дать им экономическое обоснование.

Научная новизна. Выявлена широкая распространенность в хозяйствах Омской области микоплазмоз-ассоциированной инфекции телят. Изучены основные свойства микоплазм, выделенных от молодняка крупного рогатого скота. Усовершенствованы экспресс-методы диагностики микоплазмоза: микробиологический - с помощью специальных питательных сред и серологические - для выявления микоплазм и их антигенов в биоматериале и антител в сыворотке крови и бронхоальвео-лярных смывах в РНИФ и РНГА.

Получена приоритетная справка № 200 711 5734 / 13 (017092) от 25.04.07 на способ получения эритроцитарного диагностикума для реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) при микоплазмозе крупного рогатого скота.

Разработаны научно-обоснованные рациональные схемы лечения телят разных возрастных групп при ассоциативном микоплазмозе и лабораторные методы контроля их эффективности.

Теоретическая и практическая значимость работы. Материалы диссертации вносят определенный вклад в развитие науки микоплазмо-логии и в изучение микропаразитоценозов респираторной системы телят, дополняя концепцию о полиэтиологической роли микроорганизмов, участвующих в инфекционном процессе ассоциативного характера. Результаты исследований являются основой для дальнейшего более глубокого изучения микропаразитоценозов других экологических ниш и систем организма животных.

Использование эффективных рациональных схем лечения телят при микоплазмоз-ассоциированной инфекции и экспресс-методов диагностики, которые отражены в методических рекомендациях «Комплексная система мер борьбы и профилактики с ассоциативными инфекционными болезнями животных» и «Диагностика и лечение при микоплазмоз-ассоциированной инфекции телят», ускорит сроки выявления больных животных, повысит сохранность телят, позволит контролировать эпизоотическую обстановку по данной инфекции.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на Межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины» (Омск, 2005, СО РАСХН ВНИИБТЖ), научной конференции профессорско-преподавательского состава и аспирантов ИВМ ФГОУ ВПО ОмГАУ, 2006 г. «Научные и практические проблемы ветеринарной медицины, животноводства и перспективы их решения» (Омск, 2006), Межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины продуктивных и непродуктивных животных» (Омск, 2006, СО РАСХН ВНИИБТЖ), Международной научной конференции «Профилактика, диагностика и лечение инфекционных болезней, общих для людей и животных» (Ульяновск УГСХА, 2006г), Международной научно-практической конференции, посвященной 60-летию ГНУ Краснодарского НИВИ «Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях» (Краснодар, 2006), Межрегиональной научно-практической конференции «Патология сельскохозяйственных животных и пути её профилактики» (Омск, 2007, СО РАСХН ВНИИБТЖ), Международной научно-практической конференции, посвященной 45-летию Северо-Казхстанского НИИ животноводства и ветеринарии «Состояние и перспективы аграрной науки Казахстана и Западной Сибири» (Бишкуль, 2007).

Публикации результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 130 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Работа иллюстрирована 31 таблицей и 16 рисунками. Список литературы включает 164 источника, в том числе 50 зарубежных авторов.

ВЫВОДЫ

1. Микоплазмоз-ассоциированная инфекция телят имеет широкое распространение в 13-ти хозяйствах (77%) Омской области из 17 -ти подвергнутых эпизоотологическому обследованию.

2. Жидкие и плотные микоплазмозные питательные среды ФГУ НИИ природно-очаговых инфекций Роспотребнадзора обладают специфичностью и чувствительностью к микоплазмам, с помощью которых они выделяются из бронхоальвеолярных смывов и патологического материала у телят в 50-70% случаев соответственно и могут применяться для прижизненной и посмертной микробиологической диагностики.

3. Выделенные у телят микоплазмы М. arginini, Ureaplasma sp.no биохимическим свойствам аналогичны таковым, изолированным у маточного поголовья из секрета урогенитального тракта, что обусловлено их передачей от коров-матерей. Дополнительно выделена М. bovirhinis.

4. Антигены, полученные из полевых штаммов микоплазм и аналогичные им кроличьи сыворотки, обладают высокой активностью и специфичностью в РНИФ для проведения серологических исследований на микоплазмоз, которая выявляет 79,4-85,3%) больных телят.

5. Разработан эритроцитарный антиген, который может использоваться в РНГА для дополнительной диагностики микоплазмоза. РНГА по чувствительности незначительно уступает РНИФ и выявляет в аналогичных исследованиях 62,2-80,7% больных телят. Оба метода дополняют друг друга и позволяют обнаружить большее количество больных животных. При этом серологические данные

109 подтверждаются выделением микоплазм при микробиологическом исследовании бронхоальвеолярных смывов телят в 79,8% случаев, что указывает на высокую диагностическую ценность РНГА и РНИФ при микоплазмозе телят.

6. Полевые культуры микоплазм, выделенные от молодняка крупного рогатого скота обладают высокой чувствительностью к препаратам тетрациклинового (74-87%), а также фторхинолонового (46-82%) рядов.

7. При лечении микоплазмоз-ассоциированной инфекции телят наиболее эффективными являются схемы с сочетанным применением амоксициллина и комплексного препарата левотетрасульфи-на, а также энрофлокса и стрептомицина. Экономический эффект от применения предложенных рациональных схем диагностики и лечения составил 20 рублей на один рубль затрат.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для ветеринарной практики предложены рациональные схемы диагностики и лечения телят при микоплазмоз-ассоциированной инфекции с учетом всех микроорганизмов, участвующих в инфекционном процессе, которые подробно изложены в методических рекомендациях: «Коплексная система мер борьбы и профилактики при ассоциативных инфекционных болезнях животных» (утверждены учёным советом ИВМ ФГОУ ВПО ОмГАУ, протокол № 1 от 29.09.04 г. и секцией животноводства Центра научного обеспечения АПК Министерства сель-скогохозяйства и продовольствия Омской области от 28.10.2004 г., протокол № 5), «Диагностика и лечение при микоплазмоз-ассоциированной инфекции телят» (утверждены учёным советом ИВМ ФГОУ ВПО ОмГАУ, протокол № 8 от 29.06.07 г. и секцией животноводства Центра научного обеспечения АПК Министерства сельского-хозяйства и продовольствия Омской области от 13.09.2007 г., протокол №7).

Материалы диссертации могут использоваться в учебном процессе на кафедрах эпизоотологии и инфекционных болезней, микобиологии, вирусологии и иммунологии в учебных и научно-исследовательских учреждениях ветеринарной медицины.

1.4. Заключение

Микоплазмоз является типичной хронической инфекцией с присущей ей длительной персистенцией возбудителя в организме. При этом микоплазмы способны сохранять жизнеспособность в фагоцитах и оказывать повреждающие действие на макрофаги, что приводит к нарушению их функции и снижению резистентности организма. Микоплазмы вступают в синергические отношения с вирусной, бактериальной и условно-патогенной микрофлорой, создавая условия для ее активного роста и развития, что усиливает тяжесть течения данного заболевания. Поэтому, принимая во внимание и учитывая патогенез болезни, следует проводить своевременную диагностику микоплазмоза в ассоциации с сопутствующими микроорганизмами, что позволит выявлять больных животных и своевременно лечить их.

Рассматривая данные отечественной и зарубежной литературы по диагностике микоплазмоза, необходимо сказать, что основными методами индикации и идентификации микоплазм являются микробиологические методы - с использованием специальных микоплазмозных питательных сред, а также иммунологические и серологические методы.

Так как микоплазмы способны достаточно долго находиться в организме инфицированного животного, не проявляя себя, для своевременной и точной постановки диагноза необходимо применение высокочувствительных и специфичных методов, которые позволят в короткие сроки обнаружить и отдифференцировать возбудителя.

Для правильного подбора препаратов для лечения больных животных, необходимо предварительно проводить исследования антибиоти-кочувствительности микоплазм, выделенных от данных животных, предотвращая тем самым развитие устойчивости данных микроорганизмов к химиопрепаратам.

Анализируя вышеизложенное, можно сделать заключение, что разработка методов диагностики при микоплазмоз-ассоциированной инфекции телят требует усовершенствования, а для лечения больных телят необходимо изыскание наиболее рациональных и эффективных схем применения комплексных препаратов с учетом всех микроорганизмов, участвующих в инфекционном процессе.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы

Исследования проводились с 2004 по 2007 год в лаборатории мик-стинфекций кафедры эпизоотологии и инфекционных болезней ИВМ ОмГАУ, в лаборатории зоонозных инфекций НИИПОИ Роспотребнад-зора и хозяйствах Омской области.

Тема диссертационной работы является составной частью комплексной государственной программы «Профилактика (диагностика) и меры борьбы с ассоциативными инфекционными и инвазионными болезнями животных и птиц» (№ гос. регистрации 01.2.001100602).

Объектом исследований были телята 1-4 месячного возраста с выраженными клиническими признаками пневмонии, артритов и конъюнктивитов.

Для диагностики использовали эпизоотологические, клинические, патологоанатомические и лабораторные методы.

Материалом для исследований служили пробы сывороток крови, бронхоальвеолярных смывов, фекальных масс и слизи из прямой кишки, внутрисуставная жидкость, патологический материал от погибших телят и абортированных плодов.

Для индикации и идентификации возбудителей применяли серологические и бактериологические методы. Окрашивание мазков проводили по Романовскому - Гимзе и Граму.

Для серологических исследований применяли реакцию непрямой гемагглютинации (РИГА) - для обнаружения антител в сыворотке крови животных, реакцию непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ) - для обнаружения антител и антигенов в пробах биоматериала и патологического материала, полученного от павших и вынужденно убитых животных.

Микробиологические исследования проводили, используя разработанные совместно с ФГУ Омского НИИ природно-очаговых инфекций Роспотребнадзора, жидкие и твердые питательные среды для индикации и идентификации микоплазм. Свойства выделенных микроорганизмов изучали по общепринятым методикам.

Микроскопирование проводили при помощи светового микроскопа «Ломо» (х 900). Для видового определения микоплазм использовали ключ Gourlay and Howard (1979).

Для исследований использовали полученные нами микоплазмоз-ные и стандартные антигены, используемые для постановки РА и РСК, а в качестве антител - гомологичные антигенам кроличьи и бычьи антисыворотки, антивидовые для РНИФ и специфические сальмонеллезные, листериозные для РПИФ люминесцентные сыворотки меченные ФИТЦ (ИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи), а также полученные нами кроличьи сыворотки против микоплазмоза, хламидиоза, ИРТ, диплококкоза, стафилококкоза и стрептококкоза.

Видоспецифические сыворотки к полевым штаммам микоплазм получали проводя гипериммунизацию кроликов по схеме D. Schimmel, в модификации А.П. Красикова, Н.Н. Новиковой, (2000).

Мазки с нанесёнными люминисцентными сыворотками, просматривали под микроскопом ЛЮМ Р-8 при увеличении в 900 раз. Степень флуоресценции антител оценивали по 4-х крестной системе (Вайтекер и др., 1958).

При приготовлении диагностикума для РНГА в качестве клеточной основы использовали эритроциты барана, а для стабилизации 20%-й р-р формальдегида. Фиксацию эритроцитов проводили по методу Фили в модификации Красикова А.П. (2002).

Исследования были направлены на выявление антигенов возбудителей ряда инфекционых болезней (микоплазмоз, сальмонеллез, пасте-реллез, хламидиоз, инфекционный ринотрахеит, лептоспироз, листериоз, диплококкоз, стрептококкоз, стафилококкоз, эшерихиоз) и вырабатываемых гомологичных специфических антител в респираторной, пищеварительной и кровеносной системах.

Расчёт экономической эффективности проводили по методике определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий, утвержденной Департаментом ветеринариии РФ 21.02.1997 г.

Цифровые данные экспериментальных исследований обработаны методами математической статистики по Г.Ф. Лакину (1980) и с помощью программы Microsoft Excel.

2.2. Изучение эпизоотической ситуации по микоплазмозу молодняка крупного рогатого скота и ассоциативным формам его проявления в хозяйствах Омской области

Исследования проводили в хозяйствах Омской области, на базе лаборатории микстинфекций кафедры эпизоотологии и инфекционных болезней ИВМ ОмГАУ. При изучении эпизоотической ситуации по микоплазмозу телят и его ассоциативным формам были проведены комплексные обследования хозяйств с использованием эпизоотологическо-го, клинического, бактериологического и серологических методов. В лаборатории кафедры исследовали сыворотку крови, бронхоальвеолярные смывы, фекалии и слизь из прямой кишки, внутрисуставную жидкость, конъюнктивальную жидкость, патологический материал от павших, вынужденно убитых телят и абортированных плодов.

По результатам исследований установили, что микоплазмоз телят имеет широкое распространение в хозяйствах Омской области (табл. 1.). При этом проявление микоплазмоза достоверно больше всех других инфекций (р < 0,001). Наиболее насыщенный микробный пейзаж установлен в СПК «Украинский» Исилькульского района, где в различных сочетаниях выделяли возбудителей микоплазмоза и девяти микроорганизмов 1 у 50% обследованных животных. В ООО «Русский хлеб» Кормиловско-го района микоплазмы выделяли у 100%> телят, при этом также выделялись ассоциации возбудителей ИРТ, хламидиоза, пастереллёза, лептос-пироза, диплококкоза, эшерихиоза и сальмонеллёза (табл. 1., 2).

Высокую степень ассоциации микоплазмоза с другими микроорганизмами отмечали в Агрофирме «Кормиловская» Кормиловского района (100%>), СПК «Ермолаевское» Калачинского района (100%>) и СПК «Новороссийский» Нововаршавского района (50%>). В ОАО «Алексеев-ское» Кормиловского района и ЗАО «Знамя» Москаленского района отмечалось высокое микоплазмоносительство (100%), другие микроорганизмы выделили в минимальном количестве. В других хозяйствах: СПК «Россия», ЗАО им. «Розы Люксембург», Молзавод «Кормиловский», СПК «Некрасовский» поражено микоплазмами было меньшее количество животных - от 38 до 88%.

Из проб патологического материала микоплазмы также выделялись в ассоциации с другими возбудителями в 33-83%) случаев (табл.

3). При этом инфицированность патологического материала микоплазмами достоверно выше всех других инфекций (р < 0,01).

В органах абортированных плодов из СПК им. «Кирова» Крутин-ского района микоплазмы обнаруживали у 81% животных в ассоциации с хламидиями (33%), лептоспирами (17%), листериями (22%) и сальмонеллами (33%).