Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Серогрупповая характеристика и получение концентрированных антигенов возбудителей сальмонеллеза телят

МИНИСТЕРСТВО саньского ХОЗЯЙСТВА И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И.Скрябина

РГ6 од

1 АПР 1998

На правах рукописи

МОХАМАД ВАННУС

СЕРОГРУППОВАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА И ПОЛУЧЕНИЕ КОНЦЕНТРИРОВАННЫХ АНТИГЕНОВ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ САЛЬМОНЕЛЛЕЗА ТЕЛЯТ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Москва - 1998г.

Работа выполнена в Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии имХИ.Скрябина и Ветеринар-но-медицинского университета г.Хамат (САР).

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор Бурлаков В.А.

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, профессор Сидоров М.А.

кандидат ветеринарных наук, доцент Масимов Н.А.

Ведущая организация: Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им.Я.Р.Коваленко

Защита диссертации состоится « » 1998 г. в часов

на заседании диссертационного совета К 120.36.05 по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата наук в Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им.К.И.Скрябина ( 109472, Москва, ул.академика Скрябина, 23).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке академии.

Автореферат разослан « » 1998 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Меньшикова З.Н.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1.Актуальность темы. В последние годы установлена поли-этиологичность острых кишечных заболеваний с существенным весом возбудителей, относящихся к условно патогенным бактериям. Между тем, в ветеринарии подавляющее большинство случаев заболеваний животных не имеют бактериологического подтверждения и остаются нерасшифрованными, что затрядняет анализ, учет заболеваемости и проведение лечебно-профилактических мероприятий. В частности, в силу этого невозможно целенаправленно конструировать специфические биологические препараты и объективно оценивать их эффективность. Кроме того, следует учитывать, что состав убиквитарной микрофлоры постепенно меняется.

Анализ исследований по изучению свойств и патогенности выделяемых от животных основных видов сальмонеллопозволил бы рационализировать и по возможности упростить бактериологический анализ и определить перспективы конструирования средств защиты, при заболеваниях, вызываемых широко распространенной патогенно микрофлорой, включая колибиктериозы, клебсиеллезы и протейные инфекции.

Кроме того, часто возникает необходимостьполучения концентратов возбудителей для изготовления тех или иных биопрепаратов.

1.2. Цель и задачи исследований. Целью работы является выделение и изучение основных биологических свойств сальмонелл, встречающихся в настоящее время при сальмонеллезах телят и разработка методов получения концентрированных препаратов сальмонелл.

В соответствии с этим перед нами стояли следующие задачи:

1. Провести выделение культур сальмонелл из патматериалов от телят из хозяйств неблагополучных по сальмонеллезу.

2. Изучить основные морфологические, культуральные, биохимические и вирулентные свойства сальмонелл, выделяемых от телят.

3. Изучить видовой (серогрупповой) состав сальмонелл, вызыва-пющих сальмонеллез телят.

4. Отработать методы получения концентрированных препаратов сальмонелл с целью использования их в качестве сырья для изготовления биопрепаратов.

1.3. Научная новизна. Получены дополнительные данные о различиях свойств и серогрупповой (3 серогруппы) структуре сальмонелл 5 сероваров, выделяемых при сальмонеллезах телят в неблагополученых хозяйствах 4-х областей России и Сирии.

Разработана методика получения концентрированных препаратов сальмонелл, обеспечивающих выработку агглютинирующих антиген у коров-доноров в титрах 1:300 - 1:600 и эффективность инактивирован-ной вакцины на основе этих концентратов.

1.4. Практическая значимость. Установлено важное этиологическое значение в инфекционной патологии телят в хозяйствах Сирии, России (Московской, Волгоградской и Тульской областей) S.dublin, S. enteritidis, S.typhimurium и S.cholerae suis.

Проведение профилактики сальмонеллеза телят должно базироваться на данных о циркуляции сальмонелл 3 серогруппы (В,С,Д); естественно, также требуется разработка вакцин и лечебных сывороток.

1.5.Апробация работы. Материалы были доложены и одобрены на научных конференциях Московской Государственной Академии ветеринарной медицины и биотехнологии в 1994-1997 гг.

1.6. Публикации. По теме диссертации сдана в печать для публикации в трудах Московской Государственной Академии ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И.Скрябина статья " Серогруппо-вая характеристика и биологические особенности сальмонелл, выделенных от телят в хозяйствах России (Московской и Тульской областей) и Сирии.

1.7. Основные положения, выносимые на защиту:

- серогрупповая характеристика сальмонелл, выделяемых при сальмонеллезе телят, ■

- метод получения концентрированных полиэтиленгликолем препаратов сальмонелл, пригодных для получения активных гипериммунных сывороток и ассоциированных вакцин.

1.8. Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 104 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения и выводов. Список использованной литературы включает 184 наименования из них 43 зарубежных источника. Материалы иллюстрированы 10 таблицами и 5 фотографиями.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы

Экспериментальные исследования проводились на кафедре микробиологии и иммунологии МГАВМиБ, в лабораториях ветеринарно-медицинского университета г.Хамат (Сирия) и в хозяйствах Московской, Волгоградской и Тульской областей России.

Животные и патматериалы. Общее поголовье коров ( без учета нетелей ) привитых в этих хозяйствах составляло 3635 голов; количество вакцинированных телят было около 4-х тысяч.

В каждом хозяйстве в зависимости от количества рождающихся телят ( от 28 до 179 в среднем за месяц) были отобраны коровы- доноры гипериммунной сыворотки с отрицательными данными анализов на туберкулез, бруцеллез и лейкоз ( от 3-х до 15 продуцентов сыворотки). Гипериммунизацию доноров сыворотки бактериальными антегенами проводили один раз в 3-4 месяца ( по 10, 20 и 30 мл концентрированных антигенов с интервалом 7-10 дней).

Для диагностики заболевания и выделения возбудителя от павших или убитых больных телят брали пробы крови, селезенки, легких, печени, почек, мезентериальные и средостенные лимфоузлы и от отдельных телят, вскрываемых в поздние сроки, - кусочек 1-го или 2-го ребра для последующего извлечения красного костного мозга в лабораторных условиях. Если в ближайшие 12 часов проводить бактериологическое исследование было невозможно, то пробы замораживались в условиях бытового холодильника. Для проверки вирулентных свойств выделяемых культур сальмонелл заражали белых мышей (2-4 головы на биопро-бу).Суспензию или культуру вводили мышам по 0,3-0,5 мл подкожно или внутрибрюшинно; в инокулируемой дозе культуры содержалось от 0,3 до 1 млн. микробных тел при контроле исходных культур по стандарту мутности.

Питательные среды, наборы и реактивы. Для проведения бактериологического исследования по стандартным методикам использовали мясопептонный агар (МПА), мясопептонный кровяной агар (МПКА) и агар Эндо. В отдельных опытах в качестве селективной среды использовали агар Плоскирева и висмуг-сульфат агар.

Для выращивания сальмонелл в больших количествах применяли жидкую среду - мясопептонный бульон с 0,5% глюкозы.

Биохимические свойства культур изучали с использованием пластин биохимических дифференцирующих энеробактерий (ПБДЭ).

Для изучения антигенной структуры, определения серогрупповой и вариантной принадлежности выделенных культур сальмонелл использовали стандартные наборы биофабричного производства агглютинирующих комплексных или поливалентных О-сывороток и монорецеп-торных О и Н- сывороток. Капельную реакцию агглютинации на специальных пластинах или предметных стеклах ставили по общепринятой рутинной методике.

Статистическую обработку данных проводили по методу Стьюден-та с учетом методических рекомендаций Ю.К.Баюна (1989).

2.2. Экспериментальные исследования

2.2.1. Выделение и идентификации культур сальмонелл

Убедительного предварительного диагноза на сальмоллез в хозяйствах обычно поставлено не было. Результаты лабораторных анализов в региональных лабораториях чаще всего были негативными. Только у отдельных павших телят по экспертизам региональных лабораторий из , органов были выделены Б.скЫш ("Утро"), Б^рЫтипит ("Озерки") и Б-риНошт, ("Озеры"). В большинстве хозяйств основной отход телят был в течение первых 30-45 дней после рождения. У больных телят обычно отмечали разжиженный кал зеленоватого или желтого цвета; отмечали незначительное повышение температуры у отдельных телят (до

б

40,0-40,8°С). Течение заболевания обычно было обусловлено интенсив-'ностью химиотерапевтического вмешательства и эффективностью применяемых антибиотиков. Патологоанатомические изменения чаще всею были сходными: легочные поражения в той или иной степени, вплоть до фибринозной пневмонии и гидроперикардита, иногда отмечали отрубь-евидные наложения в толстом кишечнике и геморрагическое воспаление в тонком отделе кишечника. Довольно часто регистрировали увеличение желчного пузыря и сочность мезентериальных лимфоузлов.

Результаты выделения сальмонелл представлены в таблице 1.

Таблица 1

Рензультаты бактериологиче кого исследования патматериалсз из хозяйств с предварительным диагнозом «Сальмонеллез»

№ Хозяйство , Количество Сопутствующая микрофлора

исследован -ных проб/ телят выделены культуры сальмонелл*

1. «Утро» Воскресенского района Московской обл. 43/7 4 E.coli, P.mirabilis

2. «Усово-Ильинское» Красногвардейского района Московской обл. 48/8 8 E.coli

3. «Озеры «Луховицкого района Московской обл. 34/5 3 Р, vulgaris

4. «50 лет СССР» Ногинского района Московской области 39/7 3 E.coli, S.pneumonia

5. «Волго-Дон» Калачев-ского района Волгоградской области 63/11 9 E.coli

6. « Барыбино» Одинцовского района Московской области 21/4 0 F.necroforum

7. «Озерки» Новомосковского района Тульской области 93/21 19 E/coli*, P.multocida**,P.vulga ris, S.pneumoniae**

8. «Хамат» Центральный район Сирии 49/7 6 E.coli

Примечание: * - указано количество телят от которых выделены культуры сальмонелл;

** - за последние 3 года хозяйство было неблагополучно по заболеванию.

Из данных таблицы 1 видно, что при исследовании 390 патматериалов от 70 телят 8 хозяйств сальмонеллы были выделены от 52-х животных. Чаще всего выделяли культуры из легких, лимфоузлов,

почек и проб крови. Высокая результативность выделения отмечена несмотря на тот факт, что в большинстве хозяйств проводилась интенсивная антибиотипотерапия с и-спользованием пенициллина, бициллина-3, стрептомицина и левоэритроциклина. Рост выделяемых культур на используемых нами питательных средах был характерен для сальмонелл, а морфгия - характерна для энтеробакгерий.

Биохимические свойства 15 культур сальмонелл выделенных в хозяйствах и впоследствии серотипированных, в основном соответствовали справочным данным Берджи. Все культуры давали отрицательную реакцию на малонат натрия, индол, ацетил-метилкарбинол, уреазу, р-галактозидазу, лактозу и сахарозу; положительные реакции были на цитрат натрия с глюкозой, глюкозу, маннит и в большинстве случаев на мальтозу, сорбит и арабинозу.

Результаты типизации выделеных культур сальмонелл в реакции агглютинации с поливалентными (комплексными) монорецепторными 0-и Н-агглютинирующими сыворотками представлены в таблице 2. Все выделенные и типируемые культуры были вирулентны для белых мышей.

Таблица 2

Антигенная структура и сероварианты сальмонелл, выделенных от телят в неблагополучных хозяйствах

№ Хозяйство Куль- РА с сыворотками на антиге- Серо Серовар

туры ны гру-

(номера) ппа

лолм- О-аитигепы Н-рнткгены

5 = ; й К X 1467912 ¡§рптГ

1. «Утро» 1 + + 000+ + 0 + + 0 & З.аиЫт

2-4 + + О 0 0 + + о+ 0 + Б.е^епйсйз

2. Усово- 5-12 + + 0 0 0 + + 0 + о + Д1 То же

Ильинское

3. Озеры 13-15 + + 000+ + 0 0 0 0 Д1 8.ри11огит

4. Волго-Дон 16-22 + + 000+ + 0 + 0 + Б.ииеп НсПя

23-24 + 0 О 0 0 0 0 О 0 0 0 ? • ?

5. 50 лет 25 + О О О 0 О 0 о о о о 9 . ?

СССР 26 + + 000+ + 0+ + 0 & эЛи-ЬИп

27 + 0 0 + + 0 о 00 0 0 с, Ъ.С&оИекге^

6. Озерки 28-30 + 0 0 + + 0 0 0 0 0 0 --// ——

31-32 + + + 0 0 0 + + 000 в Б^рЫипит

33-46 + + 000+ + 0+ + 0 д. Б.аиЫт

7. Хамат 47-49 + + 000+ + 0+ + 0 БЛиЫт

50-52 + + + 0 0 0 + + 000 в З^рЫтипиП

Из данных таблицы 2 следует, что из 52 культур сальмонелл, вы-денных от телят 19 относились к S.dublin ( группа ДО, 18 - к S.enteritidis (серогруппа ДО, 5 - к S.typhimurium ( серогруппа В), 4 - к S.choleraesuis (серогруппа С]), 3 - к S.pullorum (серогруппа ДО.

Таким образом, сальмонеллез у телят в обследованных неблагополучных хозяйствах был преимущественно (80%) обусловлен возбудителями из группы Дь в том числе примерно в равной мере 36,5-34,6% распространенными серовариантами S. Dublin и S. enteritidis. Вспышка сальмонеллеза телят, вызванной относящейся к этой же группе S.pullorum была установлена региональной лабораторией и подтверждена нами только в одном хозяйстве.

S.choleraesuis (группа СО выделялось в 2-х хозяйствах ( 7,6% исследованных культур), где имелся тесный контакт телят со свиньями, больными сальмонеллезом.

5,7% выделенных культур и давших положительную реакцию с поливалентными сыворотками не давали агглютинации с монорецеп-торными сыворотками 1,4, 6, 7,9, 12 и остались нетипированными.

2.3. Отработка режима осанедсния сальмонелл полиэтиленгликолем

Режим осаждения бактерий в суспензиях отрабатывали с учетом изменения концентрации ПЭГ(от 4-х до 14% ,его агрегатного состояния (порошок или стерильный 50% раствор), рН (7,2-7,6) питательной среды и температуры (0- +4°С, 18-22°С, 37-38°С) и сроков спонтанного отстоя (1-3 суток).

Работа велась с суспензиями, количество микробных тел в которых составляло 1-2 млрд/ мл по стандарту мутности. Перед тем как оценивать характер образовавшегося осадка суспензии выдерживали при комнатной температуре 1-2 часа для " доосаэдения" бактерий. Отмечали объем выпавшего осадка, его консистенцию, способность ресуспендиро-ваться при встряхивании, возможность удаления надосадочной жидкости жидкости, Приемлемыми считали те условия, при которых формировался осадок, объем которого был бы не более чем 10-15%, а консистенция - рыхлой, или аморфной. При этом осадок должен был легко разбиваться при встряхивании с образованием равномерной без комков суспензии, а надосадочная жидкость должна была легко удаляться с помощью сифона или прямого слива.

Было установлено, что осадок бактерий начинает формироваться уже при конценграции 6% ПЭГ в смеси. Однако, осадок был слабо выражен (до 40% по объему) и разделить без потерь бакмассу и надоса-дочную жидкость не представлялось возможным; увеличение концентрации ПЭГ до 8-10% по объему позволяло получить осадок, который

легко ресуспендировался, а надосадочную жидкость можно было легко удалить сифоном. При концентрации ПЭГ 12-14% в суспензии образовывался плотный, трудно ресуспендируемый осадок.

Температура отстоя не оказывала существенного влияния на формирование осадка и степень концентрирования (от 19,1 до 20 млрд.мт/мл) сальмонелл, хотя при температуре холодильника (0-4°С) осаждение было несколько эффективней, а осадок был немного плотнее.

Максимальное осаждение бактерий достигалось по истечении спонтанного отстоя в течение 3-х суток.

Бактерии хорошо осаждались как сухим ПЭГ, так и его 50% авто-клавированным при конечной концентрации ПЭГ равной 8-10%.

Эксперименты показали, что ПЭГ не оказывает какого-либо отрицательного влияния на жизнеспособность сальмонелл. При микроскопии не было замечено изменений в морфологии клеток.

Для изготовления лабораторных образцов концентратов (антигенов) использовали выделенные нами 3 серовара сальмонелл: 8.1урЫтипит , Б^иЬНп и 8.с1ю1егаезшз . Культуры выращивали в 10 и 20 литровых бутылях на МПБ с добавкой 0,5% глюкозы. В бутыли со стерильной средой вносили освеженные суточные культуры сальмонелл (матриксная расплодка) из расчета 50-100 мл на литр бульона. Выращивание с периодическим встряхиванием (раз в сутки) продолжали 3-4 суток. После завершения цикла выращивания в культуры добавляли 50% раствор ПЭГ до концентрации 10% (200 мл раствора ПЭГ на 1 литр культуры) и одновременно 0,4% формалина. Одновременное осаждение бактерий и их инактивацию проводили в этом режиме в течение 3-х суток.

В последующем надосадок удаляли сифоном, не допуская слива микробной массы. Осадки исследовали на концентрацию микробных тел и полноту инактивации, объединяли и расфасовывали во флаконы по 200-500 мл. После объединения и расфасовки проводили повторную проверку препарата на полноту инактивации сальмонелл и безвредность на белых мышах ( 2 мышам по 0,5 мл антигена подкожно) и кроликах (1-2 кроликам по 2-3 мл антигена внутримышечно).

Наблюдение за посевами и за животными продолжали 7 дней. Препарат считали стерильным и безвредным, если рост на средах отсутствовал и опытные животные оставались клинически здоровыми в течение недельного срока наблюдений.

Данные о полученных образцах концентрированных препаратов (антигенов), включая объемы, концентрацию микробных тел и результаты проверки на полноту инактивации представлены в табл.3.

Таблица 3

Характеристика лабораторных образцов концентрированных препаратов(антигенов)

Культура сальмонел (вид) Объем культуры, л Объем получен ного концентрат а (л) Кратность концентр ирова-ния по объему Концентрация мнкр. Тел (млрд/ мл) Стерильность и безвредность

1а. Б^рЬниипит 50 10,0 5 24 Стерилен, безвреден

16. . 25 5,0 5 19 и

2а. З.ёиЫт 40 4 10 32 II

26. _"_ 40 4 10 28 II

За. БхИокгаевиез 25 7,5 3,3 14 II

36. 50 5 10 26 II

Примечание: концентрация бактерий в исходных культурах колебалась от 2-х до 4 млрд.мт/мл.

Из данных табл.3 видно, что в лабораторных условиях по отработанным параметрам концентрирования кратность концентрирования сальмонелл достигала от 3,3 до 10 раз по объему и в 7-8 раз по содержанию микробных тел. '

Перед концентрированием рН в исходных культурах была^доведе-на до уровня 7,4-7,6. Оседание бакмассы обычно было хуже в тех бутылях, где в процессе роста отмечали резкое закисление культуры (до рН = 6,0-6,5).

В итоге было получено 21,5 (серия "а") и 14 (серия "б") литров концентрированных препаратов. Все они были стерильны и безвредны.

Полученные препараты (антигены) использовались нами в неблагополучных хозяйствах для получения гипериммунных сывороток на коровах-донорах и для иммунизации животных экспериментальными образцами ассоциированной инактивированной вакцины, готовящихся на кафедре микробиологии и иммунологии МГАВМиБ.

Для получения гипериммунных сывороток коровам вводили 3-кратно по 10,20 и 30 мл с интервалом 7-10 дней 5-10 кратные концентраты эшерихий, сальмонелл, протея, клебсиелл, стрептококка и посте-релл, полученных по выше указанной технологии и смешанные в равных объемных соотношениях. Кровь для получения сыворотки от доноров брали через 15-25 дней после третьей инокуляции. От одной коровы брали от 3-х до 5-ти литров крови в целлофановые пакеты или пластмассовые бутыли, их помещали на 3-5 часов в термостат или на сутки в теплое помещение при температуре 20-35 °С. Сыворотку получали обычно на следующие сутки. Ее объем колебался от 30 до 45% от объема взятой крови.

Экспериментальные образцы ассоциированной инактивированной полиэтиленгликолевой вакцины против эшерихиоза, сальмонеллеза, клебсиеллеза, протеоза и стрептококкоза готовились кафедрой микробиологии и иммунологии МГАВМиБ им.Скрябина. В состав этих образцов были включены концентраты, изготовленные нами из 8.с1иЫт, З^рЬетипит и З.сЬокгаезшэ в равных объемных соотношений с другими бактериальными компонентами.

Сыворотки и вакцины применяли обычно в хозяйствах, где был диагностирован сальмонеллез и выделены вирулентные культуры сальмонелл от павших телят. Борьба с заболеванием, как отмечено выше, проводилась комплексно:

1) для создания молозивного иммунитета вакцинировали коров за 1 -2 месяца до отела;

2) для серопрофилактики на 1-2 сутки после рождения всем телятам вводили 10-20 мл гипериммунной сыворотки;

3) через 20-35 дней после рождения ( в зависимости от напряженности в хозяйстве схемы вакцинаций против различных заболеваний) проводили вакцинацию телят в соответствии с наставлением по применению вакцины.

Результаты специфической профилактики сальмонеллеза телят в неблагополучных хозяйствах по описанной выше схеме представлены в табл.4.

Таблица 4

Результаты серо-вакцинопрофилактики сальмонеллеза с использованием полученных концентрированных антигенов

№ пп Хозяйство Рождается телят (среднее за месяц Павшие и вынужденно убитые телята

до опытов после применения сыворотки и вакцины

голов % отхода голов % отхода

1. АОЗТ «Утро» 59 28 7,9 7 1,9

2. «Усово-Ильинс-кое» 43 18 1 0,4

3. «Озеры» 28 12 9,6 2 1,6*

4. АОЗТ «Волго-Дон» 179 64 5,96 17 1,5*

5. «50 лет СССР» 36 21 13,9 8 5,3*

6. «Озерки» 42 34 22,4 7 3,5

Примечание: * - через полгода показатели сохранности мододняка возросли.

Учет эффективности комплексной серо- и вакцинопрофилактики проводили по отходу ( павшие и вынужденно убитые от суточного возраста до шести месяцев) или сохранности молодняка в месячный период до начала экспериментов (период диагностики заболевания и создание донорского стада от 3-х до 15 голов) и спустя 2-4 месяца после получения телят от коров, привитых нашей вакциной. Данные взяты из журналов учета приплода, журналов выбытия поголовья, регистрации больных животных и годовых отчетов неблагополучных хозяйств.

Из данных табл.4 следует, что в хозяйствах, где длительное время не проводилась вакцинация животных против сальмонеллеза ("Усово-Ильинское", "Озеры") или вакцины не содержали антигенов серогруппы сальмонелл, вызвавших вспышку заболевания, или, возможно, из-за применения неиммуногенной серии вакцины ("Утро", "Волш-Дон", "50 лет СССР", "Озерки") месячный отход молодняка составлял от 5,96 до 22,4%. После проведения серо-вакцинопрофилактических мероприятий с использованием наших концентрированных препаратов (антигенов) сальмонелл эти показатели были снижены до 0,4-5,3%.

Наиболее высокая сохранность молодняка за год (более 90%) была в хозяйствах "Усово-Ильинское" и "Волго-Дон".

Активность получаемых в хозяйствах сывороток от доноров проверялась в близлежащих бактериологических отделах районных лабораторий. Отдельные пробы были доставлены на кафедру и проверялись нами.. Результаты проверки активности получамых и используемых в хозяйствах сывороток представлены в табл.5.

Таблица 5

Агглютинирующая активность гипериммунных сывороток, используемых для серопрофилактики заболевания в хозяйствах

№ п/п Хозяйство Количество доноров Количество литров сыворотки* Средние титры антител (РА)

1. "Озерки" Тульская обл. 5 65 1:600±20

2. "Волго-Дон" Волгоградская область 15 180 1:300±75,5

3 "Усово-Ильинское Московская обл. 4 8 1:400±50

Из данных табл.5 видно, что производство сывороток в хозяйст вах колебалось в значительных пределах и было обусловлено потребностью в ней. Обычно от коров при первичной эксплуатации брали не более 5 литров крови в месяц, а в последующем отмечали привыкание к процедуре взятия крови и от них брали кровь уже 1-2 раза до 6 литров.

Выход сыворотки, если ее получали не в лабораториях, а в условиях хозяйств составлял 30-40% от объема взятой крови.

В "Озерках" готовилось избыточное количество сыворотки для продажи соседним хозяйствам. Избыток сыворотки хранили до 1 месяца в обычных бытовых холодильниках. Активность сывороток в хозяйствах также была различной от 1:300 до 1:600 в смешанных пробах. Возможно, это было связано в какой-то мере со временем их взятия после цикла гипериммунизации. Титры антител у вакцинированных коров через 1-3 месяца после прививки в обычной дозировке колебались обычно в пределах от 1:50 до 1:200.

3. ВЫВОДЫ И ПРЕДЛОЖЕНИЯ 3.1.ВЫВОДЫ

', ' ■ . 11 а

1. В 7 хозяйствах Московской, Волгоградской, Тульской Областей и региона Хамат (Сирия) от больных и павших телят выделено 52 культуры сальмонелл и изучены их морфологические, биохимические, антигенные, вирулентные свойства.

2. Возбудители сельмонеллезов телят отнесены к трем серогруп-пам (В, Сь и ДО- В этиологической структуре сальмонеллезов серовары Б.сШЫш и Б.е^егШсШ составляли соответственно (36,5 и 34,6%), ЗЛурЫтигшт (9,6%), З.сМегаеБШБ (7,6%), Б.риНогит (5,7%) и 5,7% культур сальмонелл до серовара типировать не удалось.

.3. Разработана простая методика концентрирования сальмонелл в 3,3-10 раз по объему и 7-8 раз по содержанию микробных тел путем спонтанного отстоя в присутствии 10% полиэтиленгликоля массой 6000 Д при рН = 7,4-7,6.

4. Доказана возможность одновременного концентрирования препаратов (антигенов) и инактивации бактерий 0,4% формалином в течение 3-х суток. Получено 35,5 литров концентрированных препаратов сальмонелл, которые использованы в составе комплексных антигенов

для гипериммунизации коров-доноров сыворотки и изготовления ассоциированной вакцины.

5. Концентрированные антигены при 3-х кратной инокуляции по 10,20 и 30 мл подкожно или внутримышечно обеспечивали у коров-доноров выработку агглютинирующих антител в титрах 1:300 - 1:600. Сочетанное применение гипериммунной сыворотки и ассоциированной вакцины на основе концентрированных сальмонеллезных препаратов (антигенов) из трех выделенных серогрупп было эффективно для профилактики заболевания телят в неблагополучных хозяйствах.

3.2. Практическая значимость

Применение монопрепаратов из отдельных сероваров сальмонелл не может обеспечить эффективную профилактику сальмонеллезов телят. Вакцинные пепараты должны конструироваться из сероваров 3-х групп сальмонелл ( В, Д! и С1).

Для изготовления вакцин и антисывороток перспективно использование концентратов сальмонелл по отработанной методике.

Сведения о практическом использовании полученных автором научных результатов:

новые данные о групповой и серовариантной принадлежности, биохимических свойствах и получении концентрированных препаратов сальмонелл, являющихся возбудителями сальмонеллеза телят используются при лтении лекций и проведении лабораторных занятий со студентами по теме «Патогенные сальмонеллы».

Рекомендации по использованию научных выводов:

- вакцины для профилактики сальмонеллеза телят должны готовиться и обеспечивать защиту против всего спектра циркулирующих возбудителей 3-х групп ( В, Д1 и С[);

- в технологиях изготовления гипериммунных сывороток и вакцин целесообразно использовать метод получения концентрированных поли-этиленгликолем препаратов сальмонелл.

Размножено в Типографии "РОТЭКС" НС экз.

Заказ № Цена договорная.