Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Противоэпизоотическая эффективность специфической профилактики туберкулеза, микробиологические и иммунологические особенности вакцинного процесса (БЦЖ) у крупного рогатого скота

РГб од

О б ЯНВ 1998

На правах рукописи

ДИКИХ ЯКОВ ГАВРИЛОВИЧ

Противоэпизоотическая эффективность специфической профилактики туберкулеза, микробиологические и иммунологические особенности вакцинного процесса /БЦЖ/ у крупного рогатого скота

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Якутск 1998

Работа выполнена :•- Дальневосточном зональном научно-исследовательском ветеринарном институте

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук,

член-корр. РАСХН Ю. А.Макаров

Научный консультант: доктор ветеринарных наук.

профессор.член - корр.РАСХН А. С.Донченко

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук.

профессор Б.М.Чекпщев кандидат ветеринарных наук Н.И.Брокопьева

Ведущее учреждение Новосибирский Государственный аграрный университет

Залдата состоится " января 1998 г. в "_" часов на

заседании диссертационного совета к.120.29.02 по ветеринарной микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, микологии и иммунологии Якутской государственной сельскохозяйственной академии (677891, г.Якутск, ГСП, ул.Красильникова 15, ЯГСА)

С диссертацией можно ознакомиться ь околпотеке ЯГСА.

- 3 -

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Туберкулез сельскохозяйственных животных до настоящего времени имеет еще значительное распространение в отдельных регионах страны, причиняет большой экономический ущерб и имеет большое социальное значение.

Интенсификация животноводства и специализация хозяйств, внедрение новых технологий содержания жиеотных оказали существенные влияние на течение эпизоотического процесса и создали условия для многократного пассирования и усиления вирулентности возбудителя туберкулеза. В этих условиях активизируются факторы передачи возбудителя инфекции (В.П.Урбан, 1980; А.С.Донченко, 1980, 1986: М.А.Сафин, 1986; В.И.Пионтковский, 1987; Б.Я.Хайкин, 1988).

В этой 'связи мероприятия, регламентированные действующей инструкцией и направленные на ликвидацию туберкулеза, не всегда имеют успех.

В борьбе с туберкулезом крупного рогатого скота в последние годы в общем комплексе мероприятий стали использовать специфическую профилактику. Многими исследователями (М.А.Сафин, 1981, 1984; Р.С.Сибгатуллин, 1982, 1984; Б.Я.Хайкин с соавт., 1984, 1986;

A.С.Жумашев, 1985; В.И.Пионтковский, 1986; Г.А.Васильченко, 1988;

B.И.Касюк, 1991; А.В.Гуркин, 1994; Ю.И.Смолянинов, 1994), доказана противоэпизоотическая эффективность применения вакцины в неблагополучных по туберкулезу пунктах.

Однако, несмотря на достигнутые успехи применения вакцины БЦЖ в условиях практики и значительное количество экспериментальных исследований в этой области, один из аспектов этой проблемы -биоморфологические формы микобактерий и отдаленные аллергические туберкулиновые реакции у вакцинированных БЦЖ животных нуждается в дополнительном исследовании.

Цель работы. Изучить протиноэпизоотическую эффективность специфической профилактики туберкулеза крупного рогатого скота в условиях хозяйств Амурской области, а также выявить микробиологические особенности вакцинного (БЦЖ) процесса у дачного вида животных и их связь с аллергическими туберкулиновыми реакциями.

На разрешение ставились задачи:

1. Изучить эпизоотическую ситуацию по туберкулезу крупного рогатого скота и эффективность применения вакцины БЦЖ в общем

комплексе противотуберкулезных мероприятий в хозяйствах Амурской области.

2. Изучить биоморфологические формы микобактерий БЦЖ в динамической последовательности вакцинного процесса.

3. Установить причину отдаленных аллергических туберкулиновых реакций у вакцинированных БЦЖ животных.

Научная новизна. В условиях Амурской области выявлены некоторые закономерности и особенности в динамике проявления эпизоотического процесса туберкулеза крупного рогатого скота, доказана противоэпизоотическая эффективность в общем комплексе противотуберкулезных мероприятий специфической профилактики с использованием вакцины БЦЖ по определенной схеме.

Экспериментально подтвервдена динамическая последовательность биоморфологической трансформации вакцинного штамма БЦЖ в организме крупного рогатого скота.

Установлено, что причиной отдаленных аллергических туберкулиновых реакций у вакцинированных животных являются микобактерии БЦЖ.

Практическая значимость. Иммунизация телят вакциной БЦЖ в комплексе противотуберкулезных мероприятий сокращает сроки оздоровления неблагополучных пунктов от туберкулеза крупного рогатого скота, значительно повышает эффективность противотуберкулезных мероприятий. Кулътурально-биологический метод обнаружения биомор-фологически измененных вариантов вакцины БЦЖ в организме вакцинированных животных может быть использован в условиях ветеринарных лабораторий.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на региональной научно-производственной конференции "Профилактика и ликвидация основных болезней сельскохозяйственных животных на Дальнем Востоке" (г.Благовещенск. 1989); на областной научно-практической конференции "Ветеринарная наука на службе АПК" (г.Благовещенск, 1988); на научной сессии Президиума ДВО РАСХН (г.Благовещенск, 1995); на ученых советах ДальЗНИВИ (1987, 1990).

Публикации результатов исследования. По теме диссертации опубликовано 3 научные статьи, 1 брошюра, 3 рекомендации.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 100 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений и списка литературы.

Список литературы содержит 234 источников, в том числе 42 зарубежных. Работа иллюстрирована 12 таблицами-и 11 рисунками.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материал и методы исследований

Работа выполнена в 1986-1995 гг. в Дальневосточном зональном научно-исследовательском Еетеринарном институте, в хозяйствах и госЕетучреждениях Амурской области.

Эпизоотическую ситуацию по туберкулезу крупного рогатого скота изучали согласно методическим рекомендациям (С.И.Джупина, В.А.Ведерников, 1981), по материалам ветеринарной отчетности, результатам собственных наблюдений и исследований (клинических,аллергических, патологоанатомических, бактериологических).

Учитывали также такие показатели, как движение неблагополучных по туберкулезу пунктов, заболеваемость жиеотных. Также использовали материалы мясоперерабатывающих предприятий Амурской области о количестве туш, выявленных с туберкулезными поражениями внутренних органов и лимфатических узлов.

Количественную оценку напряженности эпизоотической ситуации определяли с использованием рекомендаций М.Г.Таршис, В.М.Константинов (1975) и Е.К.Меркурьева (1970). Приуроченность инфекции к определенной территории выясняли путем сопоставления показателей заболеваемости животных. Доказательство корреляционной зависимости эпизоотического процесса от различных факторов подтверждали математическими методами, где учитывали усредненный показатель, достоверность различий при альтернативном варьировании, корреляции рангов вариационных рядов (М.Г.Таршис, В.М.Константинов, 1975; А.Т.Усович, Т.Т.Лебедев, 1976).

Для изучения персис-тирования аттенуированных микобачтерий е организме вакцинированных БЦЖ животных в благополучном по туберкулезу хозяйстве были взяты в опыт 24 теленка в возрасте до 10 дней. Телята были разделены на две группы: 13 в опыте и б в контроле. Кормление и содержание было одинаковым. По окончании моло-зиеного периода из рациона телят было исключено цельное молоко и обрат, для кормления применяли заменитель цельного молока (ЗЦМ), а в дальнешем - сухое обезжиренное молоко (СОМ) согласно зоотехническим нормам. По окончании молозивксго периода телят опытной группы привили вакциной БЦЖ внутрикожно в дозе 1 мг сухого вещества в 0,3 мл растворителя.

Локализацию и персистенцию вакцинного штамма БЦЖ в организме иммунизированных телят установили при их убое через 20 дней, 2, 6, 13, 21, 30 месяцев после вакцинации и проведения бактериологического исследования биоматериала.

С этой целью комплексному микробиологическому и биологическому исследованию посредством многократных повторных пассажей были подвергнуты кусочки кожи на месте введения вакцины, лимфатические узлы (подчелюстные, предлопаточные, паховые, портальные средостенные) и внутренние органы (легкие, почки, селезенка).

В клиническом разделе работы исследовали биоматериал от 38 животных с различными сроками давности вакцинации БЦЖ. Бактериологическое исследование биоматериала проводили как с целью выделения бактериальных, так Л-форм микобактерий туберкулеза. В общей сложности сделано 436 посевов на „микобактерии туберкулеза и Л-формы.

Одновременно с посевом биоматериала производили заражение морских свинок с целью выделения бактериальных и Л-форм возбудителе "туберкулеза путем подкожного введения 0,1 мл гомогената патологических органов в правую паховую область.

Исследование на Л-формы проводили согласно "Методическим рекомендациям по выделению Л-форм микобактерий туберкулеза из патологического материала", разработанным И.Р.Дорожковой, З.Н.Кочема-совой, М.М.Дыхно (М.,1984). Выделенные культуры Л-форм пассировали на полужидкой среде Школьниковой с целью получения реверсии. При отсутствии реверсии в течение 5-6 последовательных пассажей культуры относили к условно-стабильным. Все выделенные при посеве или полученные в результате реверсии культуры микобактерий изучали согласно положению N 558 от 8.06.78. "Об унификации микробиологических исследований при туберкулезе".

Лекарственную чувствительность определяли методом абсолютных концентраций на среде Левенштейна-Иенсена и оценивали по общепринятым критериям. Устойчивыми считали микобактерии туберкулеза, дающие рост при концентрации стрептомицина 5 мкг/мл, изониазида -1, ПАСК N 1, зтионамида-30, рифампицина-30, зтамбутола-5 мкг/мл.

Для культивирования бактериальных форм микобактерий туберкулеза использовали плотную питательную среду Левенштейна-Иенсена. Для культивирования Л-форм микобактерий готовили полужидкую среду Школьниковой по методике, разработанной И.Р.Дорожковой (1984).

Экспериментальную работу осуществляли в соответствии с "Пра-

rt

- r -

1илзми проведения работ с использованием экспериментальных живот-:ых", утвержденными приказом N 755 МЗ СССР-от 12.07.77.

Порядок и правила забора биоматериала не отличались от об-1епринятых при исследовании на микобактерии туберкулеза и изложе-1Ы в "Наставлении по диагностике туберкулеза животных" (ГУВ МСХ !ССР 25.02.86).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Эпизоотическая ситуация по туберкулезу крупного рогатого скота и организация иммунопрофилактики

Ретроспективный анализ состояния стад крупного рогатого ско-•а по туберкулезу в Амурской области показал, что за 25 лет [1961-1985 г.) установлено несколько циклов течения зпизоотичес-юго процесса.

В неблагополучных по туберкулезу крупного рогатого скота :тадах в области с 1961 по 1963 годы установлено завершение цикла шизоотического процесса. Показатели его интенсивности и экстен-¡ивности за указанные годы снижаются соответственно: заболевае-юсть - от 0,03 до 0,01%; неблагополучие - от 1,13 до 0,68%.

Второй цикл продолжается 9 лет (1965-1974 гг.), Заболевае-юсть среди стад крупного рогатого скота в самой высокой амплиту-;е течения эпизоотического процесса была установлена в 1968 году i составила - 0,40, неблагополучие - 1,8%.

Начало следующего цикла эпизоотии туберкулеза крупного рога-'ого скота в неблагополучных пунктах области было установлено в .983 году. Показатели заболеваемости и неблагополучия в сравнении : предыдущим циклом увеличились и составили соответственно в 1985 •ОДУ 1,03 и 5,2%.

Коэффициент очаговости, отражающий интенсивность эпизооти-[еского процесса за 20 лет (1965-1985 гг.), увеличился в 3,5 pasa. Увеличение интенсивности эпизоотического процесса при тубер-r/лезе крупного рогатого скота связано в Амурской области с рядом закторов. Одним из основных считают интенсификацию ведения отрас-[и животноводства.

Интенсификация и специализация отрасли животноводства приЕе-ia к нарушению традиционно сложившихся условий содержания крупно-■о рогатого скота.

Проведенные исследования в ретроспективе глубиной 25-30 лет в Амурской области позволили установить, что поголовье одной фермы в 60-е годы, в среднем, составляло 350-400 голов. В настоящий период поголовье на одной ферме возросло в 3-4 раза.

Среднее поголовье коров в неблагополучных хозяйствах по сравнению с благополучными выше на 9,5-10,4%. В хозяйствах с невыясненной этиологией туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота поголовье выше, чем в благополучных и неблагополучных соответственно на 14,4 и 27,6%. Среднее поголовье крупного рогатого скота, в том числе коров, в неблагополучных пунктах выше на 12,4%.

Достоверные различия установлены в структуре земель хозяйств с различной эпизоотической ситуацией по туберкулезу (Р < 0,05). В неблагополучных хозяйствах пашни занимают 26,0... 27,3%, озера, болота 5,0... 5,5%, пастбища - 9,3... 10,7%, леса - 10,0... 11,6%. В благополучных хозяйствах первый показатель ниже, но больше доля пастбищ, лесов и рек.

Следовательно благополучие хозяйств по туберкулезу крупного рогатого скота, на наш взгляд, находится в прямой зависимости от структуры земель хозяйства (Y = 0,3... 0,7). Концентрация животных на незначительных участках пастбищ (10,7%), лесов (11,6%), использование для водопоя животных болот, а также озер, недостаточное разветвление рек активизирует факторы передачи возбудителя инфекции, обостряя течение эпизоотического процесса.

Установлено, что на течение эпизоотии при туберкулезе крупного рогатого скота оказывает влияние состояние материально-технической базы хозяйства. Так, обеспеченность животноводческими помещениями в области в неблагополучных хозяйствах на 5,3-6,3% ниже, чем в благополучных; в благополучных и неблагополучных охрана ферм организована соответственно в 62,0 и 27,3... 42,9%; Наличие скотомогильников - 77,3...78,1 и 18,2...28,6%; убойных пунктов, плошадок - 32,1... 39,0 и 9,1...14,3%; навозохранилищ -98...100 и 9...18%; расколов для туберкулинизации - 12,3... 14,0% и неорганизованы; соответствуют ветеринарно-санитарным требованиям в благополучных и неблагополучных хозяйствах - место водопоя -100 и 71,4... 81,8%; летние лагеря - 100 и. 84,0...88,3%; загоны -66,4 и 57,1... 63,7%; молочные и санитарные пункты - 63,6...71,4 и 61,6... 62,0%; доильные площадки - 45,5... 57,1 и 33,9... 35,6%; зооветеринарным требованиям соответственно: жиЕотноводчес-

кие помещения 42,9... 45,5 и 29,0%; пункты искусственного осеменения - 56,2 и 31,3... 36,1%. Варьирует и-рентабельность животноводства. В благополучных и неблагополучных хозяйствах она соответствует 40,0...+ 14,9 и 32,0...+5,3, т.е. в последнем случае она значительно ниже.

Прямая корреляционная связь выведена нами при выявлении роли кадров, работающих в животноводстве и обеспечивающих благополучие хозяйств по туберкулезу. Установлены достоверные различия в обеспеченности ветеринарными специалистами, доярками, телятницами, скотниками - коэффициент корреляции составил +0,78. Так, обеспеченность специалистами в неблагополучных хозяйствах составила 86,4... 90,0%. Обеспеченность животноводами в этих пунктах ниже, чем в благополучных, особенно скотников (73,3...79,1%).

Существенное влияние на развитие эпизоотического процесса оказывают организационно-хозяйственные мероприятия. Исследованиями установлено, что в неблагополучных и благополучных хозяйствах области соответственно налажены учет, нумерация жиеотных -81,8...85,7 и 88,9... 90,0; организовано кормление по сбалансированному рациону - 27,3. ..28,6 и 32... 34,0; исключен контакт общественных и личных животных - 57,1... 63,6 и 66,0%; организована стирка халатов и другой спецодежды на ферме - 45,5... 57,1% и 64,3... 69,1%; осеменение и случка животных вне фермы - 71,4... 81,8% все животные.

Больные животные являются наиболее интенсивным источником возбудителя туберкулеза. В неблагополучных хозяйствах области крупный рогатый скот исследовали 5,1... 5,7 раз в год и больных животных вывозили на мясокомбинат до 2-х недель - 46,4%, до месяца - 49,4... 52,1%. Остальные реагирующие на туберкулин животные выеозились на мясокомбинат через месяц после выявления.

Источником возбудителя инфекции в области почти во Есех случаях при вспышке туберкулеза крупного рогатого скота оказывается больное животное или человек. При этом в благополучных и в хозяйствах с невыясненной этиологией туберкулиновых реакций установлены случаи работы с животными людей, больных инфильтратив-ной формой туберкулеза в фазе распада (2,5 %). Охват медицинскими обследованиями составляет 56,2... 79,2 %.

Работа по идентификации микобактерий проводилась нами с 1984 года, а за более ранний период (с 1975 г.) взяли данные из отчетности ветеринарных лабораторий (табл.1).

Таблица 1

Видовой спектр микобактерий, изолированных от крупного рогатого скота в Амурской области (1975-1988 гг.)

1 | Виды микобактерий 1 1 1 ¡Количество штаммов| 1 | 1 % |

1 |М. Ьоу1б 1 1 1 27 | 45 |

|М. ^Ьегси1оз1з 1 5 | 8,3 |

|М. ау1иш 1 ю | 16,6 |

|М. рИШ 1 6 | 10 |

|М. ГогШилп 1 9 1 15 |

|М. але^аИ Б 1 1 1 1,6 |

|М. уа11ае » 1 2 | ' | 3,3 | 1

От пораженных туберкулезом животных в 45% случаев изолированы микобактерии бычьего вида.

Установлены некоторые особенности при изоляции микобактерий туберкулеза от крупного рогатого скота. Так, в некоторых хозяйствах Серышевского района, где туберкулез был диагностирован пато-логоанатомически, из биоматериала были выделены микобактерии туберкулеза как в типичной, так и в измененной форме. Наряду с возбудителем туберкулеза бычьего вида в двух хозяйствах изолированы и атипичные микобактерии.

Полученные результаты исследований по видовому составу микобактерий позволяют сделать заключение, что в хозяйствах с высокой интенсивностью поражения туберкулезом, атипичные микобактерии встречаются крайне редко.

Как видно из данных таблицы 2, наибольшее количество неблагополучных пунктов за период с 1961 по 1981 годы было зарегистрировано в Михайловском, Бурейском и Октябрьском районах соответственно 34,9; 18,6 и 16,3 %.

Таблица 2

Эпизоотическая'характеристика районов Амурской области по туберкулезу крупного рогатого скота (1961-1981 гг.)

1 1 |Количество 1 Продолжительность неблагополучия,!|

I Район Iнеблагопо-

- 1 1

|лучных пунк до 3 лет 4-5 лет | 6-10 лет |

|тов, Z 1 1 1 I

I Белогорскии 1 4,7 50 50 1 1

1 Благовещенский 1 2,3 - - I 100 |

1 Бурейский 1 18,6 100 - Г4 - I

I Завитинский 1 4,7 50 50 1 - 1

| Зейский 1 2,3 100 - 1 - 1

I Мазановский 1 2,3 100 - 1 - 1

I Михайловркий 1 34,9 100 - 1 - 1

I Октябрьский 1 16,3 57,1 42,9 1 - 1

1 Сершевский 1 4,7 - - 1 100 |

1 Тамбовский 1 2,3 100 - 1 - 1

I Шикаловский • 1 6,9 < 100 1 - » '

В течение 3 лет методом систематических диагностических исследований на туберкулез были оздоровлены более 81Z неблагополучных пунктов, в том числе в Бурейскоы, Завитинскоы, Мазановскоы, Михайловском, Тамбовском и Шимановсксм районах. При этом необходимо отметить, что для ряда неблагополучных пунктов Серышевского и Благовещенского районов было характерно стационарное течение туберкулезной инфекции. В этих районах оздоровление неблагополучных пунктов этим же методом проводили в течение 6-10 лет. Такая продолжительность оздоровления неблагополучных пунктов в Серы-шевском и Благовещенском районах указывает на низкую эффективность метода систематических диагностических туберкулиновых исследований.

Мероприятия, регламентирозанные действующей инструкцией и направленные на ликвидацию туберкулеза, наиболее эффективны в тех неблагополучных по туберкулезу крупного рогатого скота пунктах, где инфекция имеет незначительнее распространение. В длительно неблагополучных пунктах при широком распространении туберкулеза

наиболее результативен метод полной одномоментной замены скомпрометированного по туберкулезу логолоеья животных здоровым. Однако, в ряде районов - Серышевском, Завитинском, Бурейском и Мазановс-ком по различным хозяйственным и экономическим причинам проводить полную замену больного поголовья здоровым многим хозяйствам оказалось не под силу, а поэтапное оздоровление, как правило, затягивало на долгие годы оздоровление и не всегда имело положительный успех. В этой связи мы решили применитьв общем комплексе противотуберкулезных мероприятий иммунизацию молодняка крупного .рогатого скота вакциной БЦЖ .

Вакцину БЦЖ применяли в хозяйствах районов с наиболее тяжелой эпизоотической обстановкой по туберкулезу - Бурейский, Зави-тинский, Мазановский, Серышевский.

В Серышевском районе, неблагополучном по туберкулезу с 1961 г., в 1986 г. при поголовье крупного рогатого скота в районе 29384 гол., в том числе 8301 коров заболело туберкулезом 3452 гол__, или 11,7%, в том числе 2031 корова - 24,4%, 1421 голова молодняка - 6,7% и 162 головы индивидуальных владельцев животных -7,7%.

Применение специфической профилактики туберкулеза в районе начато на сложном эпизоотическом фоне. Учитывая постоянно существующую угрозу инфицирования животных возбудителем туберкулеза, иммунизацию молодняка крупного рогатого скота вакциной БЦЖ проводили как в благополучных, так- и в неблагополучных по туберкулезу стадах крупного рогатого скота.

Перед применением вакцины весь молодняк в возрасте старше двух месяцев исследовали ППД туберкулином для млекопитающих. Реагирующих на туберкулин животных отправляли на откорм или подвергали убою. Нарождающийся молодняк вакцинировали в возрасте от двухнедельного до двухмесячного возраста по мере формирования отдельных групп без предварительных аллергических исследований. Через 1,5-2 месяца после вакцинации всех телят исследовали внутри-кожной туберкулиновой пробой с целью контроля выработки иммунитета. Не реагирующих на туберкулиновую пробу животных вновь допри-вивали вакциной БЦЖ повторно в той же дозе.

В дальнейшем иммунизированных животных исследовали внутри-кожной туберкулиновой пробой через 12 месяцев после допрививки. Реагирующих на туберкулин животных сдавали на убой, а не реагирующих ревакцинировали вакциной БЦЖ в той же дозе (1мг на голову).

Вакцинированных вакциной БЦЖ телят выращивали изолированно до 3-10- дневного возраста на молозиве и молоке матерей, затем - на заменителе цельного молока (3114) или сухом обезжиренном молоке (СОМ). В летний период привитых вакциной БЦЖ телят содержали изолированно на ограниченных участках с подвозом кормов или выпасали на пастбищах, где не выпасали неблагополучное по туберкулезу поголовье.

В дальнейшем из ревакцинированных вакциной БЦЖ животных формировали отдельные одновозрастные группы иммунных животных, которыми заменяли неблагополучные по туберкулезу гурты маточного поголовья коров.

Применение иммунизации молодняка крупного рогатого скота вакциной БЦЖ в общем комплексе противотуберкулезных мероприятий позволило значительно улучшить эпизоотическую ситуацию по туберкулезу в районе (табл. 3).

Таблица 3

Динамика показателей эпизоотической обстановки по туберкулезу при иммунизации крупного рогатого скота вакциной БЦЖ в хозяйствах Серышевского района

1 Количество Заболело Обнаружено при убое 1 1 |Вакцинировано |

неблагопо- животных 1 Не нарастающим |

|Год лучных пун гол. с туберку-| утилизиро- ¡итогом, гол. |

ктов лезными по| вано, туш 1 1

ражениями,| 1 1

гол. | 1 1 1 |

|1986 11 3452 170 | 29 1 1

|1987 21 946 88 | 16 | 3461 |

11988 4 491 23 | 4 | 5886 |

11989 5 301 13 | 2 | 12687 |

11990 4 299 9 | 1 | 15732 |

11991 4 97 19 | 1 ! 15857 |

| 1992 2 48 14 | - | 16817 |

11993 1 17 б I - | 17355 |

11594 t 1 11 4 1 | - I 17651 | ! !

При этом к 1992 г. во всех хозяйствах района 60-75%, а к 1333 г. все маточное поголовье крупного рогатого скота было сформировано из привитых вакциной БЦЖ жиеотных.

Б дальнейшем тенденция улучшения эпизоотической ситуации подтвердилась как по показателю снижения заболеваемости животных туберкулезом, так и уменьшением количества-неблагополучных пунктов.

Выявляемость на мясоперерабатывающих предприятиях туш с туберкулезными поранениями внутренних органов и лимфатических узлов, в том числе с генерализацией туберкулезного процесса, свелась к единичным случаям.

Аналогично была организована работа по иммунизации молодняка крупного рогатого скота вакциной ВДЖ и в хозяйствах Бурейского, Завитинского, Мазановского районов.

В целом в 1986-1995 гг. работа по иммунопрофилактике организована при нашем непосредственном участии в 48 хозяйствах 6 районов Амурской области (табл. 4).

Таблица 4

Объемы иммунизации крупного рогатого скота вакциной БЦЖ в Амурской области

1 1 1 Административная единица. 1 (Вакцинировано 1 Ревакцинирова-|

|Год количество Iмолодняка, гол. но через 12 |

1 1 Н нес..гол. |

1 ■ район 1 ХОЗЯЙСТВО 1 1 1 ■ |

1 11986 . 1 1 . 1 10 1 | 1753 194 |

11987 5 1 44 | 30134 5886 |

11988 5 I 44 | 22404 3171 |

11989 4 I 34 I 13190 2337 |

11990 4 1 31 | 7655 3089 |

Ц991 6 1 48 | 4605 125 |

11992 6 1 48 I 6862 960 |

11993 6 1 48 I 5195 538-' |

11994 6 1 48 I 4239 296 |

11995 I 4 1 1 .10 I I ' 2532 | 32 | | |

Применение специфической профилактики туберкулеза в района;', с широким распространением туберкулеза позволило к 1993 г. ликвидировать туберкулез среди молодняка крупного рогатого скота, а с 1994 г. отмечено стабильное снижение заболеваемости и среди взрослых животных (табл.5).

Таблица 5

Противоэпизоотическая эффективность специфической профилактики туберкулеза крупного рогатого скота в хозяйствах Амурской области

1 1 1 Год | Неблагополучные пункты 1 | Заболело, гол. I 1 Поражено туш |

1 I всего 1 1 1 |молодняка 1 1 всего 1 1 |генерализо- | |ванные формы|

11986 | 31 1 I 20990 1 I 13810 99 1 19 I

Ц987 | 37 | 29590 | 19170 97 1 13 |

11988 | 9 | 899 ! 1 83 1 ю |

11989 | 5 | 5360 | 4066 93 1 14 |

11990 | 6 I 804 | 20 214 I 9 1

11991 | 7 | 707 | 87 40 I 6 |

11992 | 5 I 106 | 20 29 1 з |

11993 | 3 | 31 | 35 1 2 |

|1994 | 3 | 27 | 7 1 " 1

11995 1 | | 3 1 15 I I 6 | |

Полученные результаты дают нам основание рекомендовать широкое применение вакцины БЦЖ в системе противотуберкулезных мероприятий в неблагополучных по туберкулезу района', и хозяйствах.

Изучение биоморфологических форм микобактерий в динамической последовательности вакцинного процесса

Исследованиями И. Р.ДорожкоЕой (1974), Н.А.Шмелева и др. (1976), М.А.Сафина (1976), Д.Д. Новак (1984), А.А.Перлова (1990), Ю.А.Макарова (1993) установлено, что ослабленные в своей вирулентности микобактерии туберкулеза вакцинного штамма БЦЖ в организме могут длительно сохранятся, подвергаясь биоморфологическим изменениям.

В связи с этим большой интерес представляет изучение ферм и сроков персистирования микобактерий БЦЖ в организме вакцинированных с учетом возможности Л-трансформации микобактерий туберкулеза и вегетирования их не только в измененной форме, но и в виде структур с дефектом клеточной стенки или полностью лишенных ее.

■ - 16 -

С этой . целью комплексному микробиологическому и биологическому исследованию посредством многократных повторных пассажей был подвергнут биоматериал вакцинированных телят через 20 дней, 2, 6, 13, 21, 30 месяцев после вакцинации. Исследования при изучении возможности индукции и персистенции вакцинного штамма БЦЖ в организме привитых телят позволили установить, что уже через 20 дней в организме вакцинированного животного под влиянием его естественной резистентности происходила интенсивная Л-трансформация бактериальных клеток вакцинного штамма БЦЖ в Л-формы. В начале подобной Л-трансформации подвергается часть микробной популяции, о чем свидетельствует одновременное выделение на протяжении первых 2 месяцев смеси бактериальных и Л-форм вакцинного штамма БЦЖ.

Позднее на смену бактериальным приходят нестабильные Л-формы, в которых биологические изменения еще не закрепились окончательно и при удалении их из-под влияния макроорганизма (который в данном случае является Л-трансформирующим фактором и индуцирует эти изменения) удается наблюдать реверсию к исходной бактериальной форме. После 13-ти месяцев в организме привитых телят вакцинный штамм БЦЖ продолжает персистировать в виде условно-стабильных Л-форм и стойко сохраняет способность воспроизведения в виде типичных Л-колоний и может длительно персистировать в таком состоянии в организме вакцинированного животного (срок наблюдения - 30 месяцев).

А

В посевах биоматериала от телят и пассажных животных после 3 -4 недель инкубации Л-формы вакцинного штамма БЦЖ чаще всего выявлялись в виде больших, округлых или вытянутых неправильной формы тел, заполненных негомогенной зернистостью. Иногда эти большие тела подвергались как бы разрушению и зернистое содержимое выходило за пределы их, образуя более или менее общирные скопления. Дальнейшее пассирование этих форм in vitro на средах без Л-транс-формирующих агентов позволило наблюдать в основном два пути последовательных морфологических превращений, один из которых приводил к переходу указанных структур в бактериальные формы и как завершающий этап - получение реверсии. Другой путь - к более или менее длительному воспроизведению подобных себе условно-стабильных форм, состоящих из скоплений темных и светлых шаровидных тел различной величины и оптической плотности, зернистых структур и Езкуолизкрованных форм или к постепенной гибели их..

Анализ результатов ыикробиологическиго исследования лимфатических узлов, паренхиматозных органов и кожи вакцинированных телят, а также органов пассажных животных, зараженных гомогенатом указанных субстратов исследования в возрастном аспекте, позволил выявить последовательную динамику биоморфологических изменений вакцины в организме привитых телят. Все это позволило заключить, что в ходе развития вакцинного процесса в организме животных ат-тенуированные микобактерии вакцинного штамма БЦЖ претерпевают ряд существенных изменений,, важнейшим из которых является их Л-транс-формация.

Установление причин отдаленных аллергических реакций у привитых вакциной БЦЖ животных

Основными причинами, сдерживающими широкое применение вакцины БЦЖ на крупном рогатом скоте являются длительное проявление туберкулиновых реакций у животных, а также трудности в дифференциальной диагностике поствакцинальных и постинфекционных туберкулиновых реакций (Н.П.Овдиенко с соавт., 1984; В.И.Пионтковский с соавт., 1984; В,П.Шишков с соавт., 1986).

В ряде хозяйств Амурской области аллергия на туберкулин у вакцинированных БЦЖ телят регистрировалась у незначительной части животных при достижении ими 3-4 и 5-летнего возраста.

Несмотря на то, что предложен ряд методик дифференциации поствакцинальной и инфекционной аллергии, окончательно разрешить этот вопрос не удается до настоящего времени (М.А.Сафин, 1986; А.Х.Наиманов, 1993).

Это и побудило проведение исследований, результаты которых изложены в данной главе диссертации.

С этой целью комплексному микробиологическому и биологическому исследованию путем многократных повторных пассажей был подвергнут биоматериал от вакцинированных БЦЯ животных с отдаленными аллергическими реакциями на туберкулин.

Бактериальные формы микобактерии БЦЖ выделены в 8 (18,1%) случаях: 5-и непосредственно из биоматериала от вакцинированных животных и в 3-х из органов пассажных животных. Кроме того, в результате микробиологического исследования выделено в общей сложности 11 культур Л-форм (25%), которые при последующих пассажах in vitro (в 2 случаях) и in vivo ( в 4 случаях) дали реверсию в

бактериальные Форш. Таким образом, в нашем распоряжении имелось 14 культур микобактерий.

Выделенные культуры микобактерий и ревертантов Л-форм мы подвергли углубленному микробиологическому исследованию. При этом было необходимо исключить наличие среди них вирулентных бактерий бычьего вида и представителей атипичных микобактерий, а также доказать видовую принадлежность культур и ревертантов к микобактериям БЦЖ. С этой целью культуры изучали с точки зрения их . морфологических свойств, биохимических особенностей, лекарственной чувствительности, вирулентности и видовой принадлежности.

Их отношение к редукции, наличие корд-фактора, характерная лекарственная чувствительность, а также слабая вирулентность для морских свинок позволили отнести - их микобактериям вакцинного щтамма БЦЖ.

При определении лекарственной чувствительности выделенных микобактерий и ревертантов отмечалось почти полное соответствие лекарственной чувствительности исследованных культур и контрольного штамма БЦЖ.

Наряду с бактериальными формами в 11 (25%) случаях были выделены микроорганизмы, отнесенные нами к Л-формам микобактерий туберкулеза, которые оказались нестабильными и в результате 2-4 последовательных пассажей без Л-трансформирующих агентов дали реверсию в бактериальные формы БЦЖ, что явилось прямым доказательством их'видовой принадлежности к микобактериям туберкулеза.

Всем культурам микобактерий была присуща биологическая особенность - устойчивость к 50 мкг/мл циклосерина, которая впервые была подмечена в институте им. Л.Пастера (г.Париж), что и позволило предложить эту особенность в качестве диагностического теста идентификации микобактерий БЦЖ. ^

Проведенное исследование позволило с уверенностью отнести все изученные культуры к микобактериям БЦЖ и исключить среди них наличие полевых изолятов возбудителей туберкулеза.

ВЫВОДЫ

1. В хозяйствах Амурской области с 1961 по 1985 гг. методом ретроспективного анализа эпизоотического состояния стад крупного рогатого скота по туберкулезу установлено несколько циклов течения эпизоотического процесса. Заболеваемость среди стад крупного

рогатого скота в самой высокой амплитуде течения эпизоотического процесса установлена в 1983 году и составила 1,03, неблагополучие - 5,2%.

2. Коэффициент очаговости, отражающий интенсивность эпизоотического процесса за 20 лет(19б5-1985 гг.), увеличился в 3,5 раза. Увеличение интенсивности эпизоотического процесса при туберкулезе крупного рогатого скота связано с интенсификацией ведения отрасли.

3. Наибольшее количество неблагополучных пунктов по туберкулезу крупного рогатого скота за период с 1961 по 1981 годы зарегистрировано в Михайловском, Бурейском и Октябрьском районах соответственно 34,0%, 18,6 и 16,3%.

4. Полученные результаты исследований по видовому составу микобактерий позволяют сделать заключение, что в стадах крупного рогатого скота с высокой интенсивностью поражения туберкулезом выделяются микобактерии как в типичной, так и измененной форме, атипичные микобактерии выделяются крайне редко. Крупный рогатый скот инфицируют 7 видов микобактерий (М. bovis, М. tuberculosis, М.avium, M.phlei, M.fortuitum, M.srnegmatis, M.vallae).

5. Мероприятия, регламентированные действующей инструкцией и направленные на ликвидацию туберкулеза, наиболее эффективны были в тех неблагополучных пунктах области, где инфекция имела незначительное распространение. При широком распространении инфекции наиболее эффективен был метод полной одномоментной замены скомпрометированного по туберкулезу поголовья здоровыми животными, однако в ряде районов по хозяйственным и экономическим причинам этот метод многим хозяйствам оказался не под силу.

6. Применение специфической профилактики туберкулеза крупного рогатого скота вакциной БЦЖ в общем комплексе противотуберкулезных мероприятий в районах области с широким распространением туберкулеза позволило к 1993 г. ликвидировать болезнь среди молодняка крупного рогатого скота, а с 1994 г. зарегистрировано стабильное снижение заболеваемости и среди взрослых животных.

7. Микробиологические исследования биоматериала от привитых вакциной БЦЖ телят в возрастном аспекте позволили выявить последовательную динамику биоморфологических изменений штамма вакцины в организме животных и прийти к заключению, что в ходе развития вакцинного процесса введенные в организм аттенуированные микобактерии вакцинного штамма БЦЖ претерпевают ряд существенных измене-

- 20 -

ний, важнейшим из которых является Л-трансформация.

8. Носительство вакцинированными животными различных биоморфологических форм микобактерии БЦЖ (в том числе Л-форм) может быть длительным (до 5 лет). При этом оно у 1% вакцинированных БЦЖ животных сопровождается положительными туберкулиновыми реакциями, что свидетельствует о вакцинной природе последних.

9. Дополнение схемы микробиологической диагностики туберкулеза культурально- биологическим исследованием в целях обнаружения биоморфологически измененных вариантов вакцины БЦЖ в организме вакцинированного животного повышает возможность дифференциации поствакцинальной аллергии от инфекционной.

10. Учитывая полученные результаты, свидетельствующие о значительной степени корреляции аллергических реакций у животных, привитых БЦЖ, с носительством Л-форм микобактерий, а также литературные данные в пользу взаимосвязи аллергии с иммунитетом, можно предполагать существенную роль Л-форм вакцинных микобактерий I поддержании напряженного противотуберкулезного иммунитета у животных, а также потенциальную возможность использования методт по выявлению таких форм и в целях дальнейшего комплексного изучения механизмов иммуногенеза.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Научные разработки вошли составной частью в следующие документы:

О комплексных мероприятиях по оздоровлению животноводства области от заболеваний скота бруцеллезом и туберкулезом, н; 1986-1995 годы (Постановление исполкома Областного Совета народных депутатов N 101, 1986 г.).

Методические рекомендации к проведению ветеринарно-профилак-тических мероприятий в животноводстве Амурской области (утвержденные ученым советом ДальЗНИВИ протокол N 5 от 16 мая 198бг).

Методические рекомендации к проведению ветеринарных меропри ятий в Амурской области (утвержденные ученым советом ДзльЗНИЕ протокол N 6 от 19 июня 1988 г).