Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Патогенетические механизмы лекарственных гепатопатий и их фармакокоррекция растительными препаратами

пи Л БУРЯТСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ

^ Ц ' СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ

На правах рукописи УДК (615-099+616.36): (615.32+615.857)

АЖУНОВА Татьяна Александровна

ПАТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ГЕПАТОПАТИЙ И ИХ ФАРМАКОКОРРЕКЦИЯ РАСТИТЕЛЬНЫМИ ПРЕПАРАТАМИ

16. 00.02 - патология, онкология и морфология животных; 14. 00.25 - фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Улан-Удэ 1998

Работа выполнена в Институте общей и экспериментальной Биологии Сибирского отделения Российской академии наук и Бурятской государственной сельскохозяйственной академии

Научные консультанты:

Доктор медицинских наук, профессор.С.М.Николаев Доктор ветеринарных наук, профессор Ю.А.Тарнуев

Официальные оппоненты:,

Доктор ветеринарных наук, профессор А.В.Марышев Доктор биологических наук, профессор С.В.Пронина Доктор биологических наук, профессор В.НДавыдов

Иркутский государственный медицинский университет

Защита состоится 23 декабря 1998 г. в 14 часов на заседании Диссертационного совета Д- 120.79.01 в Бурятской государственной сельскохозяйственной академии (670020, г. Улан-Удэ, ул. Пушкина, 6).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Бурятской государственной сельскохозяйственной академии

Автореферат разослан // ноября 1998 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета, кандидат ветеринарных наук.

Ведущая организация:

доцент

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Медикаментозные поражения печени -проблема, окончательное решение которой пока далеко от своего завершения. Все еще остаются нерешенными такие вопросы, как механизм токсического действия многих лекарственных препаратов, клинико-биохимическая картина заболеваний, нет единой морфологической классификации поражений печени медикаментозного генеза (Голиков и соавт.., 1986; Лужников и соавт.., 1995; Машковский, 1997; Wolf et al., 1996).

В настоящее время частота побочных эффектов при применении синтетических лекарственных средств составляет около 35 %, длительность заболевания в этих случаях увеличивается вдвое. В то же врёмя, только 9,5 % всех побочных лекарственных осложнений протекают с поражением печени, но число тяжелых реакций настолько велико, что, по данным некоторых авторов, они являются одной из главных причин печеночной недостаточности (Вальтер, 1983; Белозеров, 1989; Tibrell, 1983). Известно более 200 лекарственных соединений, которые в терапевтических дозах могут оказывать гепатотоксическое действие (Машковский, 1997). Наряду с этим, неоправданное назначение лекарственных препаратов без учета функционального состояния печени и распространенное среди населения самолечение способны вызывать специфические дозозависимые изменения ее функций и морфо-функциональной структуры.

Наибольший вклад в биотрансформацию лекарственных средств в организме вносит монооксигеназная система печени (Мишин, Ляхович, 1985; Чекман и соавт.., 1996; Conzalez, 1992; 1996). В то же время, метаболизм медикаментозных средств сопровождается в ряде случаев образованием свободных радикалов, которые инициируют перекисное окисление липидов биомембран (Лужников, Костомарова, 1989; Середенин, Дуриев, 1992; Тиунов, 1995; Meyer, 1996), или же угнетением метаболизма лекарственных веществ, что также способствует увеличению токсичности препаратов (Белозеров, 1981; Чекман, Гриневич, 1984). В частности, исследования ряда авторов свидетельствуют -о неблагоприятном влиянии. на организм в процессе химиотерапии препаратов, обладающих цитостатическими и противотуберкулезными свойствами,антибиотиков с широким спектром действия тетрациклинового ряда и нестероидных противовоспалительных

средств (Апросина, 1996; Ветошкина и др., 1994; Корякин, 1995; Скакун, Сливка, 1996; Яблоков, 1996; Чекун и соавт., 1992; DeLeve, 1996; King,'Perry, 1995; Orlowski et al., 1996).

Одним из ведущих звеньев гепатотоксичности химиотерапевтических средств является образование в процессе метаболизма активных форм кислорода, инициация свободнорадикального окисления липидов биомембран, угнетение активности монооксигеназной системы печени, ослабление эндогенной антиохсидантной защиты организма (Величко, Соловьева, 1994; Мухин, Пода, 1990; Удинцев, 1993; Bienvenu, 1995; Danidar, Anmed, 1987). Подобные изменения вызывают дестабилизацию и деструкцию субклеточных и клеточных мембран гепатоцитов, что ведет к нарушению метаболизма с их последующей гибелью.

В связи с тем, что арсенал лекарственных средств, обладающих побочным гепатотоксическим действием и относящихся к самым разным классам химических соединений довольно обширен, современные подходы к лечению и профилактике повреждений печени медикаментозными средствами должны включать патогенетические средства, оказывающие комплексное фармакологическое воздействие на различные звенья патогенеза лекарственных гепатопагий. Этой задаче в полной мере отвечают многокомпонентные растительные препараты, составленные на основе тибетских рецептурных прописей. Их выраженная фармакологическая активность обусловлена широким и гармоничным сочетанием биологически активных веществ, содержащихся в растениях, которые обеспечивают не только адекватное воздействие на основные звенья патологического процесса, но и способствуют фармакологической регуляции всех функциональных систем и повышают адаптивные возможности организма в целом.

В соответствии с этим, разработаны и рекомендованы для клинического применения многокомпонентные растительные препараты полифитохол и розобтин, обладающие желчегонным, мембраностабнлиЗирующим, антиоксидантным,

противовоспалительным и детоксицирующим действиями, обеспечивающими выраженный гепатозащитный эффект при повреждениях печени различной этиологии.Использование влечении и профилактике лекарственных гепатопатий малотоксичных многокомпонентных растительных препаратов позволяет проводить длительную и эффективную фармакотерапию химиотерапевтическими средствами различных нозологических форм без прерывания курсов лечения, отмены лекарственных

средств или снижения терапевтических доз, повысить эффективность проводимой этиотропной терапии основного заболевания, что благоприятно влияет на его течение и исход.

В настоящее время в клинической практике господствует направление, для которого характерны принципы «введения» лекарственных препаратов,- направленные на компенсацию дефицита различных соединений или на стимуляцию различных ■ функций и реакций организма. В то же время, «насыщение» организма чужеродными веществами влечет за собой накопление в организме веществ, небезразличных для его нормального функционирования. Одновременно с этим, неблагоприятная экологическая ситуация во многих регионах при интенсивном распространении ксенобиотиков приводит к угрозе загрязнения внутренней среды организма человека с нарушением биологических и биохимических основ его жизнедеятельности (Гуляева и др., 1985; Лопухин и соавт., 1983; 1994; Семке и соавт., 1996). Экологический стресс приводит к развитию «химической болезни», нарушению гомеостаза, развитию медленной интоксикации (Parke, Sapota, 1996) с ухудшением показателей здоровья различных групп населения, увеличением роста заболеваемости, что, в свою очередь, ведет к еще более интенсивному использованию лекарственных препаратов.

Принципы «выведения» лекарственных веществ и других ксенобиотиков из организма не занимают столь значительного места в современной клинической медицине. В то же время, детоксикация организма является патогенетически обоснованной мерой при экзогенных отравлениях, при патологическом снижении активности собственных детоксицирующих систем организма, а также при возникновении и распространении экологически обусловленных заболеваний (Голиков и др., 1986; Лужников и др., 1995; Новожеева, 1998). Биологическая система детоксикации определяет развитие адаптационных и компенсаторных процессов при действии на организм различных патогенов. Функциональная сбалансированность естественных процессов детоксикации во многом обусловливает развитие или блокирование на молекулярном, клеточном, органном и организменном уровнях токсических эффектов ксенобиотиков, а их нарушение приводит к расстройству гомеостаза и развитию патологии (Кузнецов и соавт., 1997).

В связи с этим, разработка комплексной технологии предупреждения и лечения интоксикаций, коррекции и очищения внутренней среды организма от чужеродных веществ с использованием в рациональных сочетаниях растительных лекарственных препаратов, приобретает еще большую значимость в

условиях интенсивного загрязнения внутренней среды человека и нарушения гомеостаза.

Цель исследования. Целью настоящей работы явилось изучение основных патогенетических механизмов возникновения лекарственных гепатопатий, оценка фармакотерапевтической эффективности фитопрепаратов при повреждениях печени медикаментозного генеза и разработка комплексной технологии активации естественной детоксикации организма растительными лекарственными препаратами.

Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи:

- Изучить особенности морфофункцио,нального состояния печени при экспериментальных медикаментозных повреждениях;

- Выяснить основные патогенетические механизмы повреждения печени лекарственными препаратами с гепатотоксическим потенциалом действия;

- Оценить фармакотерапевтическую эффективность и выяснить особенности механизма гепатозащитного действия фитопрепаратов при лекарственных гепатопатиях различной этиологии;

, - Оценить эффективность комплексной химиотерапии туберкулеза легких и злокачественных новообразований у больных при назначении фитогепатопротекторов;

Разработать комплексную технологию активации естественной детоксикации организма растительными лекарственными средствами.

Научная новизна. Работа представляет первое систематическое экспериментально-клиническое исследование патогенетических особенностей развития лекарственных гепатопатий различной этиологии с обоснованием целесообразности их фармакокоррекции с помощью растительных препаратов, составленных на основе тибетской рецептуры и полученных по ресурсосберегающей технологии. Способы получения фитопрепаратов защищены патентами РФ.

Показано, что в основе повреждения печени медикаментозными средствами с различной химической структурой лежат универсальные клеточные механизмы активации

свободнорадикального окисления липидов, ведущие к деструкции биомембран гепатоцитов и снижению активности оксигеназ со смешанной функцией микросомальной системы окисления.

Показана высокая терапевтическая и профилактическая эффективность растительных гепатопротекторов при повреждении печени цитостатиками, противотуберкулезными препаратами,

антибиотиками широкого спектра действия и нестероидными противовоспалительными препаратами. Обоснована схема оптимизации фармакокоррекции лекарственных гепатопатий в комплексной химиотерапии больных туберкулезом легких и со злокачественными новообразованиями различной локализации. Установлен один из важнейших молекулярно-клеточных механизмов гепатозащитного действия фитопрепаратов, заключающийся в способности ингибировать перекисйое окисление липидов, стабилизировать клеточные мембраны и повышать активность естественной системы детоксикации организма.

Разработана модульная технология детоксикации организма, направленная на развитие адаптационных и компенсаторных процессов при действии на организм различных токсикантов.

Научно-практическая ценность работы. Проведены доклинические испытания розобтина и полифитохола. Отчеты по проведенным исследованиям представлены в Фармакологический комитет МЗ РФ. Получено разрешение на клинические испытания розобтина. На основании клинических испытаний полифитохола получено разрешение на его промышленный выпуск.

Разработаны и утверждены МЗ Республики Бурятия методические рекомендации: «Оптимизация цитостатической полихимиотерапии опухолевых заболеваний комплексным растительным препаратом розобтином»; «Оптимизация химиотерапии туберкулеза легких гепатозащитными препаратами»; «Технология детоксикации организма растительными препаратами в терапии и профилактике атопического дерматита у детей»; в Республиканском ЦНТИ утверждены: Информационный листок «Влияние полифитохола на течение этанолового, тетрациклинового и комбинированного повреждений печени»; Информационный листок «Влияние растительных препаратов на состояние животных при интенсивном откорме их на барде».

Основные положения, выносимые па защиту.

Общим молекулярно-клеточным звеном в патогенезе медикаментозного повреждения печени различными химиотерапевтическими средствами является активация процессов свободнорадикального окисления фосфолипидов биологических мембран и связанное с этим нарушение дезинтоксикационных процессов в печени.

Многокомпонентные растительные препараты полифитохол и розобтин обладают выраженной фармакотерапевтической эффективностью при повреждении печени цито- и туберкулостатиками, антибиотиками тетрациклинового

ряда и нестероидными противовоспалительными средствами. Общим патогенетическим механизмом гепатозащитного действия фитопрепаратов является их способность ингибировать процессы пероксидации липидов, стабилизировать клеточные мембраны и повышать активность процессов биотрансформации в печени.

- Фармакотерапевтическая эффективность полифитохола и розобтина проявляется в предотвращении развития

цитолитического и холестатического синдромов, повышении дезинтоксикационной функции печени, стимуляции репаративных процессов в органе.

Использование растительных гепатопротекторов в комплексной терапии туберкулеза легких и злокачественных новообразований предотвращает развитие лекарственных гепатопатий, позволяющее повысить эффективность базисного лечения.

Разработанная комплексная технология активации естественной детоксикации организма растительными препаратами повышает интенсивность адаптационных и компенсаторных процессов при действии на организм различных патогенов.

Апробация материалов диссертации. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на:

1 Всероссийской и 3 Международной конференциях: «Экологическая патология: вопросы биохимии, фармакологии, клиники» (Чита, 1990; 1995).

3, 4-, 5 Международных конгрессах: «Человек и лекарство» (Москва, 1996-1997).

Всероссийской конференции «Актуальные проблемы фармакологии и поиска лекарственных препаратов» (Томск, 19871997);

1 и 2 Международном научном конгрессах

«Традиционная медицина и питание: теоретические и практические аспекты» (Москва, 1994; Чебоксары, 1996);

Всероссийской научно-практической- конференции «Экологозависимые заболевания» (биохимия, фармакология, клиника) (Чита, 1997);

Всероссийской научной конференции «Актуальные проблемы клинической и экспериментальной медицины» (Иркутск, 1995);

4 Национальном конгрессе по болезням органов дыхания (Новосибирск, 1995);

Всероссийских научных конференциях «Тибетская медицина: традиции, перспективы, интеграция» (Улан-Удэ, 1994; 1997; 1998):

Международном симпозиуме «Биантиоксидант» (Тюмень,

1997);

Всероссийской научной конференции «Сохранение биологического разнообразия в Байкальском регионе: проблемы, подходы, практика (Улан-Удэ, 1996).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 60 работ, получен 1 патент РФ, разработаны 3 методические рекомендации, получено 2 информационных листка Республиканского ЦНТИ.

Работа выполнена в Отделе биологически активных веществ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН и кафедре терапии Бурятской государственной сельскохозяйственной академии. Работа выполнена в соответствии с заданием по программам: «Лекарственные растения Сибири и Дальнего Востока», являющейся разделом (6.3) Государственной программы «Сибирь» на 1986-2000 гг.; «Создание информационного банка данных по тибетской медицине и разработка новых лекарственных препаратов» № гос. регистрации 01.400031.83, утвержденной 06.12.95 г. Президиумом СО РАН.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 290 страницах машинописного текста и состоит из введения, 6 глав, включающих обзор литературы, материалы и методы исследований, глав собственных исследований, обсуждения, заключения, выводов, практических рекомендаций, данных о внедрении полученных результатов в практику и списка литературы, содержащего 600 отечественных и 147 иностранных источников. Диссертация иллюстрирована 47 таблицами и 34 рисунками, включая микрофотографии.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Экспериментальная работа выполнена на 1900 беспородных белых крысах обоего пола с исходной массой 130-230 г. Животных содержали в идентичных условиях на стандартном рационе вивария (Приказ МЗ СССР № 1179 10.10.83 г.). Эксперименты осуществляли в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу МЗ СССР № 755 от 12.08.77 г.). Крыс эвтаназировали методом мгновенной декапитациц.

Клинические исследования выполнены на базе отделения химиотерапии Бурятского онкологического диспансера и Бурятского Республиканского противотуберкулезного стационара РТМО «Фтизиатрия».

Экспериментальные исследования

Изучали гепатотоксичность тетрациклина гидрохлорида, парацетамола; цитостатиков - , циклофосфана, метотрексата, 6-меркаптопурина; противотуберкулезных препаратов - изониазида, рифампицина, пиразинамида. Тетрациклин гидрохлорид вводили белым крысам внутрижелудочно в виде водной взвеси с Ти>ееп-80 (1: 10) в дозе 1000 мг/кг массы 1 раз в сутки ежедневно в течение 7 дней (Скакун, Высоцкий, 1982). Парацетамол вводили белым крысам внутрижелудочно в виде водной суспензии с Т\уееп-80 (1:10) в дозе 2,5 мг/кг массы, 1 раз в сутки, в течение 2 дней (Скакун, Шманько, 1984). Циклофосфан и метотрексат вводили внутрибрюшинно в дозах 27 и 0,6 мг/кг массы соответственно, 1 раз в сутки в течение 10 дней. 6-меркаптопурин вводили внутрижелудочно ежедневно в дозе 20 мг/кг массы в течение 10 дней (Блохин, Переводчикова, 1984; Гарин и соавт., 1986; Переводчикова и соавт., 1986).Изониазид, рифампицин и пиразинамид вводили внутрижелудочно (сочетанное введение) ежедневно в дозах 50, 50 и 1,5 мг/кг соответственно в течение 14 суток (Скакун, Табачук, 1992).

Полифитохол и розобтин вводили в форме водных растворов внутрижелудочно в дозах 300 мг/кг и 300 мг/кг массы (1/10 ШЬо) соответственно в объеме 10 мл/кг массы. В каждой серии экспериментов комплексные фитопрепараты вводили с 1-го дня от начала экспериментов. Продолжительность их введения варьировала в зависимости от цели и продолжительности эксперимента.

Контрольные группы животных получали в эквиобъемных количествах дистиллированную воду по аналогичной схеме.

Клинические исследования

На базе Бурятского Республиканского онкологического центра и Бурятского Республиканского противотуберкулезного стационара РТМО «Фтизиатрия» исследовалось функциональное состояние печени у больных туберкулезом легких и у больных со злокачественными новообразованиями различной локализации, получающих полихимиотерапию. Оценку функционального состояния, печени в отделении химиотерапии Бурятского Республиканского онкологического центра проводили у 37 больных со злокачественными новообразованиями различной локализации в возрасте от 45 до 65 лет. В Республиканском противотуберкулезном стационаре РТМО «Фтизиатрия» обследовано 179 больных туберкулезом легких в возрасте от 18 до 79 лет. При проведении

базисной терапии туберкулеза легких и злокачественных новообразований больным назначали розобтин в дозе 30 мг/кг 3 раза в день за 20-30 минут до приема пищи.

Для оценки морфофункционального состояния печени были использованы наиболее адекватные модели и информативные методы, позволяющие объективно оценить особенности патогенеза лекарственных гепатопатий, а также фармакотерапевтнческую эффективность испытуемых фитопрепаратов.

Для оценки антитоксической функции печени определяли: содержание цитохрома Р-450 (Omura, Sato, 1964); регистрировали скорость инактивации восстановленного цитохрома Р-450 (Бачманова, 1983); содержание белка микросом определяли по методу O.N.Lowry и соавт. (1951); продолжительность гексеналового сна оценивали при однократном внутрибрюшинном введении белым крысам гексенала в дозе 70 мг/кг массы по длительности нахождения крыс в боковом положении (Гацура, 1974); экскреторно-поглотительную функцию печени оценивали по скорости выведения бромсульфалеина с желчью (Соловьев и др., 1976); о функциональной состоятельности монооксигеназной системы печени судили по данным антипиринового теста (Аширметов, Краковский, 1990). В клинических условиях антипирин определяли у больных в слюне при введении указанного препарата однократно, натощак в дозе 10 мг/кг per os (Brodie et al., 1949).

Интенсивность процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) оценивали по содержанию малонового диальдегида (МДА) (Темирбулатов, Селезнев, 1981) и диеновых конъюгатов (ДК) (Гаврилов, Мишкорудная, 1983) в сыворотке крови, в гомогенате печени (Стальная, Гаришвили, 1977) и желчи (Скакун, Высоцкий, 1983). Каталазную активность сыворотки крови крыс определяли по методу М.А.Королюк и соавт. (1988). Содержание SH-групп в сыворотке крови определяли по методу В.Ф.Фоломеева (1980).0пределение уровня Fe2+- индуцированной

хемилюминесценции (XJI) проводили на приборе «Хемилюминометр PXL- 01» (Россия) по общепринятому методу (Клебанов и соавт., 1988; Сергеев и соавт., 1991). Влияние фитопрепаратов на скорость генерации супероксидного анион-радикала (О27) оценивали по скорости восстановления нитросинего тетразолия (Nichikimi et al., 1972); оценивали изменение уровня диенов и кетадиенов (Костюк, Потапович, 1988) и шиффовых оснований в митохондриях печени крыс (Fletcher et al., 1973).

Мембраностабилизирующие свойства фитопрепаратов определяли по их влнянию на степень гемолиза эритроцитов,

вызванного фотоактивированным хлорпромазином, реактивом Фентона, а также при осмотическом гемолизе (Ковалев и соавт., 1986).

Желчеобразовательную и желчевыделительную функции печени оценивали по скорости секреции желчи, концентрации желчных кислот в сецернируемой желчи (Карбач, 1961), по содержанию в желчи холестерина (Дроговоз, 1971) и билирубина -метод Ван-дер-Берга в модификации Н.П.Скакуна (1956).

Для оценки активности процессов репаративной регенерации в гомогенате печени животных определяли содержание ДНК по методу Schmidt - Tanngauser (Трудолюбова, 1977).

Активность аланинаминотрансферазы (АлТ), аспартатами-нотрансферазы (АсТ), альдолазы, щелочной фосфатазы (ЩФ), ß-липопротеидов, холестерина, билирубина и показатели тимоловой пробы в сыворотке крови определяли по общепринятым методам (Меньшиков и соавт., 1987). Содержание гликогена в печени определяли спектрофотометрически по методу S. Seifter (1953). Выраженность общетоксического действия цитостатиков оценивали по изменению у животных массы селезенки и тимуса, а также по степени выраженности лейкопении (Зуева, Яременко, 1989).

При патоморфологических исследованиях печень

фиксировали в 10 % -ном растворе нейтрального формалина, смеси Карнуа. Депарафинированные гистс?логические срезы окрашивали гематоксилин-эозином по Ван-Гизону (Меркулов, 1969). При гистоэнзимологических исследованиях в свежезамороженных срезах печени выявляли содержание гликогена ШИК - реакцией, нейтрального жира - окраской Суданом черным «В» по Беренбауму, активность сукцинатдегидрогеназы (СДГ) и лактатдегидрогеназы (ЛДГ) по Нахласу (Пирс, 1962).

Статистическую обработку полученных данных проводили методом вариационной статистики, описанных в руководств. \ Е.В.Моцевичюте-Эрингене (1964) и А.А.Генкина, В.Л.Эмануэль (1995). Вычисляли среднее значение выборки (М), ошибку среднеквадратичного отклонения (т). Для оценки достоверности полученных результатов между средними значениями выборки использовали критерий Стъюдента с уровнем значимости 95 % (Р<0,05), используемом в медико-биологических исследованиях.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Основные патогенетические механизмы лекарственных гепатопатнй

Развитие многих патологических процессов в живых клетках связано с нарушением барьерной или структурной целостности биологических мембран, которая является одним из необходимых условий для нормальной деятельности ферментных систем. Важнейшим патогенетическим механизмом повреждения мембран, а также процессов дезинтеграции цитоплазмы и нарушений в липопротеинкомплексах, составляющих основу

субмикроскопической организации клеток, являются процессы пероксидации липидов. Следствием повышенного образования продуктов свободнорадикального окисления фосфолипидов биомембран является инактивация мембраносвязанных ферментов, угнетение активности процессов метаболизма ксенобиотиков, снижение резервов собственной антиоксидантной защиты.

Проведенные исследования показали, что введение животным химиотерапевтических средств сопровождается резкой активацией процессов свободнорадикального окисления липидов (табл. 1).

Таблица 1

Влияние химиотерапевтических средств на содержание продуктов ПОЛ у белых крыс и состояние антиокислительной защиты

Условия опыта МДА, мкМ/мл мин Каталаза, мкат

Интактная группа 1.02± 0.01 2.27± 0.20

Циклофосфан 2.27± 0.21* 0.85± 0.0Г

Метотрексат 3.08± 0.24* 1.70± 0.16*

6-меркаптопурин 2.26± 0.20* 1.13± 0.02*

Туберкулостатики 1.53± 0.08* 0.52± 0.04*

Тетрациклин 1,79± 0.04* 1.18± 0.08*

Парацетамол 3.78± 0.2Г 1.0510.09*

Примечание: * - здесь и далее различия достоверны по сравнению с контролем при Р< 0.05

Как следует из приведенной таблицы, повреждение печени белых' крыс химиотерапевтическими средствами с

гепатотоксическим потенциалом действия сопровождается

значительным накоплением продуктов перокспдашш линплов: содержание МДА - одного из конечных продуктов перекисного окисления липидов, возрастает в среднем в 1,5-2 раза. Народу с этим, инициация ПОЛ медикаментозными средствами сопровождается ослаблением естественной защиты тканей печени от свободнорадикальной атаки. Под действием химиопрепаратов снижается каталазная активность сыворотки крови, которая является одним из антиоксидантных ферментов, предотвращающих избыточное образование активных форм кислорода. По всей видимости, причиной снижения активности каталазы может быть вызванная гепатотоксинами деградация свободных и связанных с мембранами эндоплазматического ретикулума рибосом, которые ответственны за синтез фермента, а также за образование его мономера и тетрамера (Гонский и соавт., 1996).

В настоящее время установлено, что роль реакций пероксидации липидов в патологии клетки необходимо рассматривать в неразрывной связи с цитохром Р-450 зависимыми реакциями гидроксилирования ксенобиотиков. Наиболее значительные изменения активности мембраносвязанных ферментов обнаруживаются на стадии гибели гепатоцитов, когда морфологически выявляются очаги некрозов, а детоксицирующая функция печени резко снижена. Косвенным подтверждением деградации ключевого фермента детоксикации при повреждении печени медикаментозными средствами является нарушение фармакокинетики антипирина и его метаболитов в биологических жидкостях, а также снижение метаболизма гексобарбитала, преимущественная биотрансформация которых происходит при участии цитохром Р-450-зависимой монооксигеназной системы печени (Заводник и соавт., 1989; Шушпанова и 'соавт., 1997; Новожеева, 1998).

На рисунке 1 показано, что введение белым крысам химиотерапевтических средств сопровождается резким угнетением скорости элиминации гексенала из организма, обусловленная угнетением активности ферментов микросомального окисления. Время нахождения крыс в боковом положении под действием указанного индикатора увеличивается по сравнению с показателями у животных интактной группы в среднем на 35-45 %.

I -10 t 2D 1 00

Г

: » ï & J. •

4Y" è>->

Щ ; ЛД i V

Рис. 1. Изменение продолжительности гексеналового сна у белых крыс при повреждении печени > химиотерапевтическими средствами.

1 - интактная группа; 2 - циклофосфан; 3 - метотрексат; 4 -6-меркаптопурин; 5 - туберкулостатики; 6 - тетрациклин; 7 -' парацетамол.

( Другим составляющим компонентом системы детоксикации являются процессы конъюгации. Метаболиты, образующиеся в процессе энзиматической биотрансформации липофильных ксенобиотиков при участии цитохрома Р-450 и его изоформ, служат субстратами для ферментов 2 фазы детоксикации и связываются в реакциях конъюгации непосредственно при образовании и миграции метаболитов из гидрофобной области клетки в гидрофильную (Саприн, 1Ç9I; Bock et al., 1993). Транспорт бромсульфалеина из клетки в желчь, являясь активным процессом, зависит от интенсивности процессов конъюгации в печени и является одним из важнейших функциональных показателей состояния антитоксической функции печени (Гулак и соавт., 1985). На рисунке 2 показано, что повреждение печени белкх крыс химиопрепаратами сопровождается резко выраженным нарушением экскреторно-выделительной функции- печени: в значительной степени снижается скорость выведения бромсульфалеина с желчью, период его полувыведения увеличивается от 40 до 90' минут, тогда как у интактных животных

: о

4001

о 300 1й О

2 200

100

10 ' 50 - 90 г 130 170 '

-1

" интакт11ьйксжгроль *— ииклофосфан^™"*™ туберкулостатики тетрациклин

Рис. 2. Изменение скорости выведения бромсульфалеина с желчью при' повреждении , печени белых - крыс химиотерапевтическими средствами. " г

он соответствует 17 минутам, что свидетельствует о перестройке изоферментного. профиля, нарушении взаимодействия 1 и 2 фаз детоксикации и снижении эффективности ''функционирования детоксицирующей системы печени в целом. ' ^

Нарушение проницаемости 'клеточных мембран вследствие накопления высокореакционных метаболитов рассматривается как основной путь реализации Токсического действия ксенобиотиков. Химиотерапевтические средства с гепатотропными токсическими эффектами, являясь «возмущающими»'' факторами внешней среды, приводят к критическому уровню первичных сдвигов гомеостаза, которые протекают на; фоне характерных для данного отравления симптомов, среди которых холестаз и цитолиз являются наиболее характерными признаками повреждения органа' (Логинов, 1977; Саратиков, Скакун, 199Д).

Как показано в наших исследованиях, повреждение печени указанными химиотерапевтическими средствами сопровождается нарушением продукции и оттока желчи, нарушением синтеза холатов, билирубина и холестерина, изменением литогенных свойств желчи (табл. 2): общее количество выделенной желчи снижается в среднем- на 35-4.0 %, содержание ж'елчных кислот в сецернируемой желчи снижается на 30-40 %, билирубина - на,30-50 %, холестерина -на 20-25 % по сравнению с показателями у животных интактной группы. ' ,

При действии ксенобиотиков г'енера^ия активных форм кислорода, инициациирующая процессы перекисного окисления липидов, вызывает "нарушение структуры " и функции биомакромолекул белков, лииидов, ДНК, повреждение биомембран и

о

мембраносвязанных ферментных систем с развитием ферментемии и цитотоксических эффектов.

Таблица 2

Влияние химиопрепаратов на желчевыделительную и желчеобразовательную функции печени белых крыс

Условия опыта Общее количеств о желчи Желчные кислоты Билиру бин Холес терин

мг/100 г

Интактная группа 1489± 138 6.19 0.087 0.065

Циклофосфан 809± 67* 5.06 0.069 0.053

Метотрексат 1033± 100* . 2.86 0.088 0.062

6-меркаптопурин 945+ 94* 5.05 0.046 0.051

Ту б еркул о статик 778± 65* 3.55 0.077 0.060

Тетрациклин 918± 58* 3.40 0.031 0.066

Парацетамол 776± 39* 4.01 0.020 0.050

Таблица 3

Изменение биохимических показателей сыворотки крови при повреждении печени белых крыс химиопрепаратами

Условия опыта АлТ, мМ/мл ч АсТ, мМ/мл ч Альдолаза, мМ/мл ч

Интактная группа 1.81± 0.18 1.291 0.03* 0.241 0.01

Циклофосфан 2.63± 0.24* 1.741 0.09* 0.581 0.03*

Метотрексат 4.02± 0.44* 2.481 0.04* 0.521 0.02*

6-меркаптопурин 2.83± 0.03* 1.331 0.07* 0.4110.04*

Туберкулостатик 2.40± 0.10* 2.051 0.08* 0.631 0.03*

Тетрациклин 2.8010.10* 2.491 0.08* 0.441 0.03*

Парацетамол 3.8110.13* 2.861 0.09* 0.701 0.02*

Как следует из таблицы 3, введение белым крысам в токсических дозах химиотерапевтических средств сопровождается значительным увеличением активности мембраносвязанных ферментов в сыворотке крови, свидетельствующих о тяжести и распространенности повреждения гепатоцитов.

7т

6

5

х

га *

>- 4

и и

й 3

2 ]

I

I ;

О

Рис. 3. Изменение содержания ДНК в печени белых крыс при введении цитостатических препаратов. 1-интактная группа; 2-циклофос-фан; 3 - метотрексат; 4 - 6-меркаптопурин.

Известно, что свободнорадикальному окислению подвержены нуклеиновые кислоты: активные кислородные метаболиты оказывают как непосредственное физическое повреждение нуклеиновых оснований, так и нарушают процессы транскрипции и трансляции в результате алкилирования азотистых оснований ДНК, в результате чего возникают «сшивки» молекул ДНК (Наполов, Борисов, 1991). На рисунке 3 показано, что противоопухолевые препараты в значительной степени снижают содержание ДНК в печени крыс, что свидетельствует о подавлении синтеза и функций ДНК и угнетении процессов репаративной регенерации в печени. Наряду с этим, интегральным показателем цитотоксичности химиопрепаратов является изменение массы

тимуса и селезенки и содержания лейкоцитов в периферической крови (Зуева, Яременко, 1989). Нами установлено, что цитотоксическое действие противоопухолевых препаратов проявляется в значительном снижении весовых коэффициентов указанных внутренних органов у крыс и развитием выраженной лейкопении, что подтверждает их общетоксическое действие.

Патоморфологические исследования показали, что повреждение печени белых крыс медикаментозными средствами сопровождается развитием гемодинамических нарушений, дистрофических и некробиотических процессов в паренхиме органа в виде гидропической и зернистой дистрофии и жировой инфильтрации печени, развитием пролиферативно-инфильтративных реакций, появлением признаков внутрипеченочного холестаза, снижением содержания гликогена в цитоплазме гепатоцитов и снижением активности окислительно-восстановительных ферментов.

Таким образом, результаты экспериментальных исследований позволяют заключить, что основные патогенетические механизмы лекарственных гепатопатий реализуются на уровне резкой активации процессов пероксидации липидов и снижении антиокислительной защиты организма, что влечет за собой развитие свободнорадикальной патологии. Синдром оксидативного стресса, возникающий при воздействии лекарственных препаратов с гепатотоксическим потенциалом действия, вызывает нарушение структуры и функции биомакромолекул, ряд морфофункциональных нарушений в печени, снижение ее детоксицирующей функции и развитие синдромов, характерных для повреждения органов гепатобилиарной системы.

Фармакокоррекция лекарственных гепатопатий растительными препаратами

Выявленные основные патогенетические механизмы лекарственных гепатопатий показали, что для ослабления патологических последствий возникновения медикаментозных повреждений печени целесообразно назначение эндогенных соединений, ингибирующих либо сами активные кислородные метаболиты, либо источники их генерации. Наиболее перспективным подходом в такой биохимической профилактике является повышение устойчивости организма к воздействию ксенобиотиков с помощью естественных защитных факторов, в частности природными соединениями, близких или тождественных эндогенным веществам, участвующих в поддержании постоянства внутренней среды организма.

Полифитохол - комплексный растительный препарат, представляющий сумму экстрактивных веществ из 6 видов лекарственного растительного сырья: цветков бессмертника песчаного, цветков пижмы обыкновенной, листьев мяты перечной, листьев крапивы двудомной, корней солодки голой и плодов шиповника.

Розобтин - комплексный растительный фитопрепарат, представляющий сумму экстрактивных веществ из 5 видов лекарственного растительного сырья: корней и корневищ девясила высокого, травы золототысячника обыкновенного, цветков пижмы обыкновенной, плодов шиповникя и плодов боярышника кроваво-красного.

Фармакотерапевтическая эффективность указанных фитопрепаратов на клеточном и субклеточном уровнях сопровождается стабилизацией биологических мембран и подавлением пероксидации фоффолипидных комплексов. Полифитохол и розобтин способствуя снижению гепатотоксичности химиотерапевтических средств, уменьшают скорость накопления конечных продуктов процессов ПОЛ (табл.4). По всей видимости, фитопрепараты, инактивируя активные формы кислорода и перекисные соединения, одновременно повышают активность ферментов антиоксидантной защиты, и тем самым способствуют снижению гепатотоксичности химиотерапевтических средств, обладающих прооксидантным действием.

Таблица 4

Влияние фитопрепаратов на содержание продуктов ПОЛ и состояние антиокислительной защиты при повреждении печени белых крыс химиопрепаратами

Условия опыта МДА, мМ/мл Каталаза,

мин мкат

Циклофосфан 2.27± 0.21 0.851 0.01

Циклофосфан+розобтин 1.4310.05* 2.981 0.25*

Метотрексат 3.081 0.24 1.701 0.16

Метотрексат+розобтин 1.981 0.09* 2.761 0.04*

6-меркаптопурин 2.261 0.20 1.131 0.02

6-меркаптопурин+розобтин 1.121 0.09* 2.761 0.04*

'Губеркулостатики 1.531 0.08 0.521 0.04

Туберкулостатики+розобтин 0.681 0.05* 1.241 0.02*

Тетрациклин 1.791 0.04 1.181 0.08

Тетрациклин+тюлифитохол 0.991 0.03' 2.771 0.07*

Парацетамол 3.78± 0.21 1.0510.09

Парацетамол+розобтин 2.0510.17* 2.981 0.04*

Благоприятное влияние фитопрепаратов на оксидативные процессы в организме в патогенезе интоксикаций химиопрепаратами с гепатотоксическим потенциалом действия можно объяснить их воздействием на скорость образования диенов, кетадиенов и шиффовых оснований в митохондриях печени, также их влиянием на скорость перехвата супероксидных анион-радикалов. Полифитохол и розобтин оказывают заметное влияние на скорость восстановления нитросинего тетразолия (HCT), а также подавляют образование продктов свободнорадикального окисления липидов, освобождающихся из некротизированных гепатоцитов (табл.5).

Таблица 5

Влияние фитопрепаратов на скорость восстановления HCT и на уровень диенов, кетадиенов и шиффовых оснований в митохондриях печени белых крыс

Показатель Розобтин, 1 мг/мл Полифитохол, 1 мг/мл

% ингибирования нет 50.01 0.5 60.0+ 0.5

Уровень диенов и кетадиенов, ед. ОП/мг белка ' 0.000941 0.00005* 0.000731 0.00005*

Контроль 0.00131 0.0003

% 72 60

Уровень шиффовых оснований, ед. ОП/мг белка 0.003101 0.0002 0.02351 0.0010*

Контроль 0.027010.0030

% 11 87

Наряду с. этим, установлено, что розобтин снижает амплитуду быстрой и медленной вспышки Ре2+-индуцированной хемилюминесценции липопротеидов яичного желтка (ЛПЖ), снижая выход свечения и увеличивая время начала разгорания световой энергии, что свидетельствует о наличии выраженных антирадикальных свойств у данного фитопрепарата (табл. 6).

Таблица 6,

Влияние розобтина на интенсивность хемнлюмннес-цениии ЛПЖ

Показатель Контроль Розобтин, 0.033 мг/мл (К) Розобтин, 'А К

Амплитуда быстрой ВСПЫШКИ (I)) 1.74± 0.13 1.53± 0.08 1.65± 0.15

Скорость ПОЛ (5), у. е. 1.25± 0.19 0.46± 0.02' 0.60± 0.03'

Амплитуда медленной вспышки (Ь) 3.16± 0.22 1.70+0.20" 1.40± 0.01"

Основным источников высокореакционных ОН -радикалов в биологических средах является реакция Фентона, катализируемая ионами металлов переменной валентности (Зенков, Меныцикова, 1993). Фитопрепараты, обладая выраженной антирадикальной активностью, ингибируют гемолиз эритроцитов, стабилизируют мембраны и защищают их от повреждающего действия свободных радикалов, что свидетельствует об инактивации свободнорадикальных соединений указанного реактива. Такая же высокая мембраностабилизирующая активность выявлена при повреждении мембран эритроцитов свободнорадикальными метаболитами, возникающими при фотохимическом распаде хлорпромазина (рис. 4).

Антиоксидантное -и мембраностабилизирующее действие фитопрепаратов в полной мере реализуются на уровне стимуляции дезинтоксикационной функции печени. Установлено, что испытуемые фитопрепараты в значительной степени повышают скорость разрушения антипирина и гексобарбитала, повышают скорость выведения бромсульфалеина с желчью, что связано со

стимуляцией детоксицирующей функции поврежденного органа вследствие повышения активности моноокисгеназной системы печени.

120 |

I

1001

!

80

СЗ Г»

I 60

У

20

|

0 0,05 0,1 0,15 0,2 мЛп

—■— реаашФнкга—•— хлрпромташ —*• — вола Рис. 4. Влияние розобтина на степень гемолиза эритроцитов

Таким образом, полифитохол и розобтин при повреждении печени противоопухолевыми препаратами, сочетанным введением туберкулостатиков, антибиотиками тетрациклинового ряда и парацетамолом ингибируют процессы свободнорадикального окисления липидов, повышают активность и устойчивость мембраносвязанных ферментов, усиливают антиоксидантную защиту, стиму- лируют способность печени обезвреживать ксенобиотики, формируют защитные механизмы, направленные на поддержание внутренней среды организма при воздействии агрессивных факторов.

С рассмотренных выше позиций представляется более ясной суть защитных механизмов от повреждающего действия лекарственных препаратов с гепатотоксическим побочным действием на органном и организменном уровнях. Полифитохол и розобтин, повышая дезинтоксикационную функцию печени, нормализуют метаболизм холестерина и желчных кислот, предотвращают развитие вторичных некрозов гепатоцитов,

•------------,____________— --------»-------•

нормализуют пигментный обмен, повышая интенсивность процессов глюкуронидизации билирубина, способствуют оттоку желчи и предотвращают развитие холестатического синдрома.. Наряду с этим, розобтин и полифитохол, обладая выраженными мембраностабилизирующими свойствами, предотвращают цитолиз •печеночных клеток, снижают степень, ферментемии и предотвращают развитие признаков дистрофических изменений и некроза печеночных клеток.

Клиническое обоснование использования фитогепатопротекторов при лекарственных гепатопатиях

Развитие любых патологических состояний сопровождается нарушением в различных звеньях гомеостаза, что в совокупности обусловливает токсикоз, степень которого зависит как от распространенности процесса, так и от состояния системы естественной резистентности организма. Химиотерапия, которой принадлежит ведущая роль в лечении распространенных злокачественных новообразований и туберкулезного процесса, вызывает интенсивное образование свободных радикалов, которые при недостаточной активности эндогенной антиоксидантной защиты организма, способствуют дальнейшему нарушению биотрансформации лекарственных средств и, соответственно, развитию общего токсикоза.

Химиотерапевтические средства при лечении опухолей и туберкулеза применяются, как правило, в максимально переносимых дозах с целью поражения всех опухолевых клеток или микобактерий, то есть соблюдается принцип химиотерапевтического радикализма для достижения наибольшего эффекта. Побочное влияние химиотерапевтических средств, в частности их гепатотоксичность, часто оказывается лимитирующим при базисной терапии указанных нозологических форм, поэтому в клинической практике большое внимание уделяется вопросам детоксикации, как одному из компонентов биотерапевтического подхода к лечению больных злокачественными опухолями, туберкулезом и при других патологических состояниях.

Усиление детоксикации организма может быть достигнуто как заместительной терапией, то есть экзогенным введением детоксицирующих препаратов, так и -назначением лекарственных средств, - обеспечивающих активацию компонентов системы естественной' резистентности (Саратиков, Новожеева, 1996; Новожеева, 1997).

- При клинической оценке гепатотоксичности циклофосфана, метотрексата, 6-меркаптопурина, назначаемых больным при " /рпухолевом процессе, и сочетанного введения изониазида, рцфа'мпицина и пиразинамида при различных формах туберкулеза ч легких убгановлено, что интенсивная химиотерапия злокачественных новообразований и туберкулеза сопровождается . признаками .. гепатотоксичности ' указанных медикаментозных средств, кЛиническими проявлениями,которых являются ухудшение общего состояния больных, развитие диспепсического синдрома, изменение биохимических'показателей крови, свидетельствующих о развитии холестатического и цитолитического синдромов, развитие признаков раздражения ' паренхимы печени и печеночно-клеточной недостаточности. Наряду с этим, под влиянием указанных медикаментозных средств 4 инициируются процессы

свободнорадикального окисления 1 липидов: з сыворотке крови больных повышается содержание малонового диальдегида и диеновых конъюгатов. Наряду с этим, отмечается снижение активности ферментативных антиперекисньТх и антирадикальных механизмов 'защиты организма, снижение клиренса антипирина, характеризующие нарушение' антитоксической функции печени, развитие признаков общетоксического действия

хим'иотерапевтических средств.

Оценка фармакокоррекции гепатотоксичности

химиопрепаратов при базисной терапии злокачественных новообразований и туберкулеза легких фитогепатопротекторами показала, что указанны^ средства снижают их прооксидантное действие, , стимулируют ферментативную антиокислительную защиту организма, повышают антитоксическую функцию печени. Наряду с этим, фитопрепараты предотвращают развитие цитолитического и холестатического синдромов, снижают общую цито^оксичность медикаментозных средств, нивелируют клинические проявления их • побочного действия, не снижая эффективностй базисного лечения указанных нозологических форм.

Гепатопротекторы, как средства профилактики и лечения медикаментозных гепатопатий, могут найти применение в качестве средств подготовительного действия, вводящих организм в состояние неспецифической повышенной сопротивляемости

организма; средств, оптимизирующих' стрессорную реакцию, развивающуюся на фоне экстремальных методов лечейия, а также как средств, предупреждающих обиц^е токсическое действир химиопрепаратов (Новожеева, Чурсина и соавт.; 1987;" Саратиков,, Новожеева, 1989; МоУохКееуа й а1., 1992) и средств, оптимизирующих гомеостаз и поддерживающих организм в состоянии неспЪцифически повышенной сопротивляемости организма (Яременко, 1992), что, в конечном итогет позволяет проводить интенсАную базисную терапию указанных • нозологических форм и других патологических состояний без перерывов в курсах фармакотерапии, а также без снижения терапевтических доз (Николаев, 1990; Николаев и др., 1995 а, б).

Комплексная технология активации естественной

детоксикацин организма растительными препаратами

Научно-технический прогресс, и связанное ,с ним развитие производительных сил и Загрязнение окружающей среды, привели к тому, что в настоящее время более 50 % населения России находятся в так .называемом «третьем» состоянии, то есть «неполного» здоровья, которое характеризуется снижением репродуктивной способности человека, угнетением иммунно-биологической реактивности организма, повышением частоты возникновения аллергических заболеваний, возрастанием неблагоприятных мутаций в человеческой популяции, ускорением темпов старения организма и сокращением продолжительности жизни, появлением ранее неизвестных заболеваний (синдром напряженной адаптации, синдром хронической усталости, респираторный дистреессиндром) (Анистратенко и соавт., 1995; Кривобоков, 1995; Маянский, 1989; Муравьев 1982; Пономаренко, 1996).

По современным представлениям очищение организма от чужеродных веществ, в том числе медикаментозных средств, включает различные виды детоксикации, которые суммарно определяют тотальный клиренс. Он состоит из трех основных , частей: метаболических превращений, почетной экскреции и внепочечного очищения. Метаболические превращения занимают . особое место в детоксикации чужеродных токсических веществ, поскольку они являются основным «подготовительным» этапом для их удаления из организма. Смысл этих реакций заключается в образовании нетоксичных продуктов с большей полярностью за счет содержащихся в них нуклеофильных группировок (1 фаза). За счет вступления метаболитов чужеродных соединений в реакции конъюгации образуются конъюгаты, легко растворимые в воде, которые быстро экскретируются через почки, кожу и другие системы

элиминации (2 фаза) (Берхин, 1986; Дубищев, 1991; Кухарчук и соавт., 1992; Насонкин, Криворучко, 1991; Новожеева, Канов, 1995; Тиунов, 1981).

На основании этих рассуждений можно выделить основные звенья, состояние которых необходимо учитывать при разработке технологии детоксикации для поддержания чистоты внутренней среды организма: 1. Основные пути поступления чужеродных веществ в организм (желудочно-кишечный тракт, легкие, кожа, кровь и т.д.); 2. Биотранформационные механизмы детоксикации в печени и в других органах, а также защитные механизмы иммунной системы; 3. Основные .пути элиминации продуктов метаболизма ксенобиотиков из организма (почки, желчевыводящие пути, толстый и тонкий кишечник, кожа, легкие).

В связи с выше изложенным разработана на принципиально новой основе целенаправленная- комплексная технология " предупреждения и лечения интоксикаций, коррекции и очищения внутренней среды организма от чужеродных веществ. Для этого предлагается использование в различных сочетаниях растительных лекарственных препаратов, уменьшающих всасываемость ксенобиотиков и регулирующих их метаболизм в печени; препаратов, повышающих иммунный потенциал и обладающих антиоксидантной активностью; энтеросорбентов; средств, стимулирующих функции экскреторных органов. Этот методологический принцип повторяет отчасти эволюционно сформировавшиеся естественные механизмы детоксикации организма и практически совпадает с рекомендациями по жизнеобеспечению человека в тибетской медицине.

Разработанная схема очищения организма является универсальной, так как она затрагивает всю многоступенчатую систему очищения организма, повышает функциональную сбалансированность естественных процессов детоксикации и может быть рекомендована для оптимизации адаптивных реакций, в реабилитации больных, для профилактики заболеваний, предупреждения обострений хронических заболеваний и возможных осложнений, а также может назначаться при острых и хронических интоксикациях, связанных с поступлением чужеродных веществ в организм и для предупреждения- и развития экологически обусловленных заболеваний. Эффективность данной технологии детоксикации связана с адсорбцией ксенобиотиков, а также продуктов эндогенного генеза, ограничением их всасывания, стимуляцией биотрансформации чужеродных веществ и ускоренной элиминации их из организма, благодаря повышению активности систем детоксикации в соответствующих органах и тканях.

Представленная технология детоксикации организма разработана с учетом временных принципов и биоритмологических характеристик как в функционировании организма, так и в эффективности действия лекарственных средств (Деряга, 1985).

Данная технология детоксикации организма прошла апробацию в клинических условиях на базе Республиканского кожно-венерологического диспансера при лечении детей с атопическим дерматозом и лиц с повышенным аллергическим фоном.

Хронические интоксикации относительно низкими уровнями химических соединений в окружающей среде приводят к возникновению скрытой химической патологии, которая провоцирует развитие наиболее распространенных соматических, эндокринных, нервно-психических и экологически обусловленных заболеваний. Одним из проявлений такого влияния хронической интоксикации в экологически неблагополучных районах на организм человека являются аллергические заболевания кожи.

Одним из важных патогенетически значимых моментов, обусловливающих тяжесть и длительность течения атопического дерматоза, является синдром эндогенной интоксикации, который не только сопровождает атопический дерматоз, но и выступает поддерживающим, усугубляющим моментом его развития, оказывая повреждающее действие и определяя прогноз и исход заболевания. Возникновение и развитие синдрома эндогенной интоксикации является интегративным процессом, в котором участвуют такие патогенетические факторы, как гипоксия, инициация свободнорадикального окисления, расстройство микроциркуляции, накопление промежуточных продуктов извращенного обмена веществ, факторов воспаления и т.п. На фоне нарастающей эндогенной интоксикации возникают трофические нарушения внутриклеточной

сигнализации межклеточных отношений, рецепторной чувствительности, вторичная иммунологическая и полиорганная недостаточность (Кузнецов и др., 1997).

Детоксикация организма у детей с различными формами аллергодерматоза по указанной технологии, сочетающая достижения современной медицины и традиционного способа врачевания, позволила достичь положительной динамики кожного процесса (изменение реактивности сосудов кожи, нарушение кожного барьера), уменьшить расстройства в психо-эмоциональной сфере детей, устранить явления дисфункции со стороны желудочно-кишечного тракта и мочевыводящей системы, снизить

интенсивность процессов свободнорадикального окисления липидов в организме, добиться изменения в положительную сторону иммунологического статуса, а также на фоне выраженного клинического эффекта удлинить периоды ремиссии в течении атопического дерматита.

Таким образом, внедрение и широкое использование модульной технологии детоксикации организма, наряду с проведением специфических лечебно-профилактических

мероприятий, особенно в районах экологического неблагополучия, способствует снижению заболеваемости по группам распространенных нозологических форм, а в целом позволяет свести к минимуму последствия неблагополучной экологической нагрузки и обеспечить функционирование организма в режиме долговременной адаптации к негативным факторам внешней среды.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Одной из важнейших задач лекарственной токсикологии является изучение механизма побочного биологического действия химиотерапевтических средств, изыскание эффективных средств патогенетической терапии интоксикаций, разработка мер и методов профилактики и лечения острых и хронических отравлений лекарственными средствами. Важным направлением в изучении токсических побочных эффектов препаратов является изучение отдаленных последствий отравлений, протекающих как в виде самостоятельного заболевания, так и скрытых проявлений первичного химического повреждения.

Изучение механизма развития поражения печени при действии лекарственных средств с гепатотоксическим потенциалом действия позволило подтвердить, что систематические исследования состояния биологических мембран являются перспективными в плане разработки методов ранней диагностики и патогенетической терапии, что позволяет проводить целенаправленное доклиническое изучение новых лекарственных средств на основе современных представлений о путях процессов биотрансформации чужеродных и эндогенных соединений.

Повреждение печени химиотерапевтическими средствами сопровождается повышенным образованием активированных кислородных метаболитов, нарушением баланса в системе «активирова иные кислородные метаболиты-антиоксиданты», интенсификацией развития деструктивных процессов в гепатоцитах, снижением активности ферментов микросомальной системы окисления, развитием основных патологических синдромов,

характеризующих функциональное состояние печени, развитием выраженных патоморфологических нарушений и снижением общей дезинтоксикационной функции органа.

Фармакотерапевтическая эффективность растительных гепатопрЪтекторов полифитохола и розобтина^ реализуясь на клеточном уровне, сопровождается, стабилизацией мембран, стимуляцией биотрансформационных процессов в печени, повышением активности и устойчивости ферментных систем, формированием защитных механизмов, направленных на поддержание внутренней'Среды человека.

Особенности механизма действия фитопрепаратов, позволяют использовать фитогепатопротекторы в комплексной химиотерапии различных нозологических форм с целью лечения и профилактики лекарственных гепатопатий. Назначение фитопрепаратов при интенсивной этиотропной терапии туберкулеза легких и онкологических заболеваний, а также при приеме антибиотиков тетрациклинового ряда и нестероидных противовоспалительных средств снижает геиатотоксичность химиотерапевтических средств, что позволяет избегать отмены препаратов, прерывания курса химиотерапии или снижения терапевтических доз, а в целом повышает эффективность фармакотерапии основного заболевания.

Наряду с этим, разработаны основные принципы повышения процессов детоюсикации в организме чужеродных веществ, направленные на снижение проявлений синдрома эндогенной интоксикации и повышающие адаптационные и компенсаторные процессы в организме при действии различных токсикантов.

ВЫВОДЫ

1. Повреждение печени животных химиотерапевтическими средствами (цитостатики, противотуберкулезные препараты, тетрациклин, парацетамол) сопровождается развитием однородных симптомокомплексов, основными проявлениями которых являются развитие синдромов цитолиза ' и холестаза, нарушение метаболизирующей функции печени, развитие дистрофических процессов в печеночных клетках, снижение регенераторных процессов в печени. Наиболее выраженные гепатотоксические эффекты проявляются при комбинированном введении противотуберкулезных средств и метотрексата. Признаки синдрома холестаза в наибольшей степени проявляются при назначении

антибиотиков тетрациклинового ряда и парацетамола. Выраженное снижение дезинтоксикационной функции печени отмечается при введении крысам метотрексата, циклофосфана и нестероидных противовоспалительных средств. Развитие синдрома цитолиза и некроз печеночных клеток наиболее характерен при введении противотуберкулезных препаратов и метотрексата.

2.0бщим молекулярно-клеточным звеном в патогенезе медикаментозных повреждений печени являются нарушение структурной и функциональной целостности биомембран гепатоцитов в результате индукции перекисного окисления липидов, снижение активности антиоксидантной защиты организма, нарушение функциональной активности ферментов монооксигеназной системы печени.

3.Механизм фармакогерапевтической эффективности фитогепатопротекторов при развитии лекарственных гепатопатий основывается на ингибиции процессов свободнорадикального окисления липидов, активации эндогенной перекисной защиты организма, повышении функциональной активности микросомальных ферментов с уменьшением проницаемости клеточных мембран гепатоцитов, стимуляций секреторной функции печени, повышении интенсивности репаративных процессов в поврежденном органе.

4. Назначение гепатопротекторов в комплексной терапии туберкулеза легких и злокачественных новообразований позволяет снизить гепатотоксическое действие химиотерапевтических средств и повысить эффективность этиотропной терапии.

5. Комплексная технология активации естественных детоксикационных процессов в организме снижает проявления синдрома эндогенной интоксикации, предупреждает возникновение химических патологий,.повышает адаптационные и компенсаторные возможности организма в условиях экологического стресса.

ВНЕДРЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ В ПРАКТИКУ

1. Способы получения розобтина и полифитохола, основанные на щадящей ресурсосберегающей технологии защищены патентами РФ.

2. Нормативная документация в виде отчетов по доклиническим испытаниям гепатопротекторов, технических условий и регламентов на получение розобтина и полифитохола направлены в Фармакологический комитет РФ. После проведенных клинических испытаний полифитохола разрешен его промышленный

выпуск и применение в клинической практике. На основании результатов, полученных в ходе доклинических испытаний розобтина, получено разрешение на проведение клинических испытаний. Промышленное освоение новых гепатозащитных средств позволит обеспечить безвредными эффективными гепатозащитными средствами и ограничить импорт лекарственных препаратов данного профиля.

3. Разработаны и утверждены МЗ Республики Бурятия методические рекомендации: «Оптимизация цитостатической полихимиотерапии опухолевых заболеваний комплексным растительным препаратом розобтином»; «Оптимизация химиотерапии туберкулеза легких гепатозащитными сборами»; «Технология детоксикации организма растительными препаратами в терапии и профилактике атопического дерматита у детей»; Информационный листки РеспубликанскогоЦНТИ: «Влияние полифитохола на течение этенолового, тетрациклинового и комбинированного повреждений печени»; «Влияние растительных препаратов на состояние животных при интенсивном откорме их на барде».

4. Полученные данные о механизмах побочного гепатотоксического действия цитостатиков, противотуберкулезных средств, тетрациклина и парацетамола, лежащих в основе развития лекарственных гепатопатий, используются при преподавании курса лекций по общей фармакологии в учебно-педагогическом процессе в Бурятском государственном университете и Бурятском филиале Иркутского ГИДУВа.

5. Разработанные рецептуры полифитохола и розобтина используются в центре Восточной медицины для лечения и профилактики заболеваний органов гепатобилиарной системы («Технические условия на производство и применение полифитохола»),

6. Материалы диссертации использованы в научно-технических программах: «Создание препаратов без этанола, совершенствование технологии переработки и рациональное использование растительного сырья» (1986-1990 гг.); «Лекарственное растительное сырье Бурятии и разработка эффективных препаратов на основе тибетской медицины» (1991-1999 гг.).

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Влияние фитопрепаратов на индукцию цитохрома Р-450 и состояние биомембраи / «Цитохром Р-450 и охрана внтуренней среды человека. - М., 1985. -- С. 124 (Николаев С.М., Ажунова Т.А., Матханов Э.И., Мохосоева В.К.)

2. Влияние лекарственных препаратов на состояние цитохрома Р-450 при экспериментальном гепатпге /Тез докл. Научи.-пракг. конф. молодых ученых Сибири и Дальнего Востока. - Улан-Удэ. - 1985. - С.13. (Матханов Э.И., Ажунова Т.А., Мохосоева В.К.)

3. Влияние антигепатотоксического чая на морфофоункциональное состояние печени белых крыс при остром токсическом гепатите //Растит, ресурсы. - 1986. -Вып. 1. -- С. 132-135. (Убашеев И О., Лоншакова К.С., Николаев С.М., МатхановЭ.И., АжуноваТ.А.)

4. Репарирующее действие фитопрепаратов на монооксигеназную систему печени / Тез. докл. Республ. научн. конф,- Харьков, 1986. - С. 45-46. (Матханов Э.И., Николаев С.М., Ажунова Т.А.)

5. Влияние экстракта шлемника байкальского на функциональное состояние печени при токсическом гепатите /Актуальн. пробл. фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов. -Томск, 1987. -Т. 3. -С.23. (Ажунова Т.А.)

6. Влияние плодов Malus baccata L. на течение экспериментального гепатита у крыс // Растит, ресурсы. - 1987. - Вып. 4. - С. 125-129.(Убашеев И.О., Лоншакова К.С., Матханов Э.И., Ажунова Т.А.)

7. Влияние экстракта толокнянки обыкновенной на содержание и скорость инактивации цитохрома Р-450 // Растит, ресурсы. - 1987. - Вып. 2. - С. 111-115. (Ажунова Т.А., Николаев С.М., Самбуева З.Г., Матханов Э.И.)

8. Влияние фитопрепаратов на индукцию цитохрома Р-450 и состояние биомембран / «Цитохром Р-450 и охрана внутренней среды организма». -Новосибирск, 1987. - С. 78-79. (Матханов Э.И., Николаев С.М., Ажунова Т.А.)

9. Свободные радикалы в патогенезе и растительные фенолы при фармакотерапии повреждений гепатобилиарной системы / Свободные радикалы и биостабилизаторы. - София, 1987. - С. 66. (Николаев С.М., Ажунова Т.А., Самбуева З.Г.) ,

10. Влияние антигепатотоксического'чая на функциональное состояние печени при токсическом гепатите /Лекарственные растения в традиционной и народной медицине. - Улан-Удэ, 1987. - С.55-56. (Ажунова Т.А.)

11. Фитоэкстракты в мобилизации антиоксидантной системы организма / Гомеостатика живых и технических систем. - Иркутск, 1987. - С.44-45, (Ажунова Т.А., Матханов Э.И.)

12. Влияние антигепатотоксического чая- -на цитохром Р-450 в печени, поврежденной тетрахлорметаном / Тез.докл. Всесоюзн. конф. - Новосибирск,

1987. - С. 119 (Убашеев И.О., Лоншакова К.С., МатхановЭ.И., Ажунова Т.А.)

13. Фармакотерапия экспериментального гепатита экстрактом шлемника байкальского / Тез. докл. Респ. конф. но медицинской ботанике. - Киев, 1988. • С.23-24. (Ажунова Т.А., Шантанова Л.Н., Гомбоева С.Б.)

14. Индуцирующее, мембраностабилизирующее действие препаратов из солянки холмовой / Тез докл. Респ. конф. по мед. ботанике. - Киев. - 1988. - С. 134-135. (Матханов Э.И., Ажунова Т.А., Убашеев И.О., Лоншакова К.С.).

15. Клеточно-молекуляриая оценка безопасности суммарного растительного препарата желчегонног о действия // Хим.- фарм. жури,- 1988. - № 4. - С.445-450. (Убашеев И.О., Лоншакова К.С., Ажунова Т.А., МатхановЭ.И.)

16. Желчегонное действие экстракта толокнянки обыкновенной //Фармация. -

1988. - № 2. - С.41-43. (Ажунова Т.А., Самбуева З.Г., Николаев С.М.)

17. Влияние антигепатотоксического чая на течение - лекарственного гепатита // Антибиотики и химиопрепараты. - 1989. - № 11. — С. 859-861. (Николаев С.М., Ажунова Т.А., Самбуева З.Г.)

18. Влияние антигепатотоксического чая на функциональное состояние печени при экспериментальном токсическом гепатите / Регуляция гомеостатических систем природными соединениями. - Улан-Удэ, 1989. - С.45-48. (Ажунова Т.А., Николаев С.М., Шантанова Л.Н.)

19. Антиоксидантное и мембраностабилизирующее действие фитопрепаратов при повреждениях органов гепатобилиарной системы 7 Всесоюзн. симпоз. «Биантиоксидант». - М., 1989. - С. 11. (Ажунова Т.А., Николаев С.М., Убеева И.П.).

20. Шафран посевной как основное средство в тибетской медицине для лечения заболеваний печени // Бюлл. СО АМН СССР. - 1989. -№ 2. - С.51-54. (Убашеев И.О., МатхановЭ.И., Лоншакова К.С., Ажунова Т.А.)

21. Влияние фитопрепаратов на антитоксическую функцию печени при экспериментальном гепатите / Цитохром Р-450 и модификация макромолекул. -Ялта, 1989. - С. 275 (Ажунова Т.А., Николаев С.М.)

22. Особенности действия полифитохола на течение экспериментального гепатита и холецистита // Фармакол. и токсикол.. - 1990. - № 2. - С.43-45. (Убеева И.П., Ажунова Т.А., Самбуева 3.Г., Николаев С.М.)

23. Гепатозащитное действие комплексного препарата при повреждении печени парацетамолом / Актуальные проблемы лекарственной токсикологии. - М., 1990. - С.4. (Ажунова Т.А., Шантанова Л.Н., Николаев С.М.)

24. Теоретическое и экспериментальное обоснование применения экстракта шлемника байкальского при токсическом гепатите / Моделирование и фармакотерапия заболеваний органов пищеварения. - Улан-Удэ, 1990. -С.3-14. (Ажунова Т.А., Николаев С.М.)

25. Повреждение печени и их фармакотерапия. - Улан-Удэ, 1991. - 99 с. (Ажунова Т.А.)

26. Противовоспалительная и антимикробная активность растительных фитопрепаратов // Растит, ресурсы. - 1993. - № 3. - С. 44-47. (Ажунова Т.А., Николаев С.М., Ракшаина М.Ц., Мункоева С.М.)

27. Гепатозащитное действие полифитохола /Акт. пробл. фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов. - Томск, 1994. - С.108.(Ажунова Т.А., Лоншакова К.С., Дашинамжилов Ж.Б.)

28. Фитопрофилактика медикаментозных повреждений печени / Традиционная медицина и питание: теоретические и практические аспекты. - М., 1994. - С. 129. (Ажунова Т.А., Алексеева Э.А., Дашинамжилов Ж.Б., Дугаров С.Л.)

29. Эффективность полифитохола при сочетанном повреждении печени / Тибетская медицина: состояние и перспективы исследований. - Улан-Удэ, 1994. - С. 84-90. (Дашинамжилов Ж.Б., Ажунова Т.А.)

30. Влияние полифитохола на восстановительные процессы в печени при этаноловом гепатите / Экологическая патология: вопросы биохимии, фармакологии, клиники. - Чита, 1995. - С.145-146.(Дашинамжилов Ж.Б., Ажунова Т.А., Лоншакова К.С.)

31. Влияние полифитохола на восстановительные процессы в печени бель1х крыс при тетрациклиновом гепатите /Актуальные проблемы клинику и экспериментальной медицины. - Иркутск, 1995. - С.196-197.(Дашинамжилов Ж.Б., Ажунова Т.А., Лоншакова К.С.).

32. Эффективность полифитохола при тетрациклиновом поражении печени / Сб. научн. тр. ВСТГУ. - Улан-Удэ, 1995. - С.44-53. (Ажунова Т.А., Дашинамжилов Ж.Б., Лоншакова К.С.)

33. Модульная технология десенсибилизации организма / Тез.докл. регион, научи, конф - Хабаровск, 1995. - С. 141. (Николаев С.М., Ажунова Т.А., Шантанова Л.Н., Тарнуева С.Д.)

34. Технология детоксикации организма в решении проблем здравоохранения /Экологические проблемы микробиологии и биотехнологии Байкальского региона. ■ Улан-Удэ, 1995. - С. 55-57. (Николаев С.М., Бальжиров Б.Г., Ажунова Т.А., Шантанова Л.Н.)

35. Природные соединения в проблеме гепатопатий при химиотерапии туберкулеза / Тез. докл. У1 Национ. коигр. по болезням органов дыхания. - Новосибирск, 1995. - С. 77. (Ажунова Т.А., Дугаров С.Л., Николаев С.М.)

36. Фармакотерапевтпческая эффективность нефрофита при острой почечной недостаточности / Сб. научи, тр. -Улан-Удэ, 1995. - Вып. 2. - С. 67-71. (Шантанова Л.Н., Моидодоев А.Г., Ажунова Т.А.)

37. Оптимизация химиотерапии туберкулеза легких у больных старческого возраста / Организация медико-социалыюй помощи лицам пожилого возраста.

- Улан-Удэ, 1995. - С. 32-33 (Дугаров С.Л., Ажунова Т..А., Маслаускене Т.П., Николаев С.М.)

38. Влияние комплексного растительного препарата «розобтин» на гепатотоксичность цитостатиков из группы антиметаболитов / Экологическая патология: вопросы биохимии, фармакологии и клиники. - Чита, 1995. - С. 137. (Алексеева Э.А., Ажунова Т.А.).

39. Фитокоррекция гепатотоксичности туберкулостатических препаратов / «Актуальные проблемы клиники и экспериментальной медицины» Иркутск, 1995.- С.201-202. (Дугаров С.Л., Ажунова Т.А., Маслаускене Т.П.)

40. Технология детоксикации организма растительными препаратами /Экологическая патология: вопросы биохимии, фармакологии, клиники. -Чита, 1995. - С. 14. (Ажунова Т.А., Николаев С.М., Шантанова Л.Н., Тарнуева С.Д.)

40. Технология детоксикации и десенсибилизации организма на основе принципов

«очищения» в тибетской медицинг - Тез. докл. научн. конф. «Сохранение биологического разнообразия в Байкальском регионе: проблемы, подходы, практика»,- УланУдэ, 1996.- С. 91-92. (Ажунова Т.А., Тарнуева С.Д., Шантанова Л.Н.)

41. Модульная технология детоксикации и десенсибилизации организма растительными препаратами. - / «Традиционная медицина: теория, практика. -Чебоксары, 1996,- С. 97. (Николаев С.М., Ажунова Т.А., Тарнуева С.Д.)

42. Оптимизация базисной химиотерапии туберкулеза легких. / Тез. докл. Между

нар. конф. «Человек и лекарство». - М., 1996. - С.81. (Дугаров С.Л., Ажунова Т.А., Маслаускене Т.П.)

43. Фармакотерапевтпческая эффективность нефрофита при ишемии почек // Растит, ресурсы. - 1996. - № 1-2. - С.117-121. (Шантанова Л.Н., Мондодоев

. А.Г., Глызин В.И., Ажунова Т.А., Николаев С.М.)

44. Влияние комплексного растительного препарата полифитохола на течение алкогольного гепатита // Растит, ресурсы. - 1997. - Вып. 2. - С.64-68. (Дашинамжилов Ж.Б., Ажунова Т.А., Лоншакова К.С., Николаев С.М.)

45. Влияние полифитохола на сочетанное поражение печени / Человек и лекарство.

- М., 1997. - С. 38. Дашинамжилов Ж.Б., Ажунова Т.А:)

46. Комплексная технология «очищения» организма на основе принципов тибетской медицины / Человек и лекарство. - М., 1997. - С. 151. (Ажунова Т.А., Тарнуева С.Д., Шантанова Л.Н.)

47. Оптимизация базисной химиотерапии туберкулеза легких / Человек и лекарство.

- М., 1997. - С193. (Дугаров С.Л., Маслаускене Т.П., Ажунова Т.А.)

48. Оптимизация химиотерапии туберкулеза легких,- Там же.- С.193. (Дутаров С.Л.,

Маслаускене Т.П., Ажунова Т;А.)

49. Влияние полифнтохола на сочетанпое поражение печени. - Там же,- С.38. ( Дашннамжилов Ж.Б., Ажунова Т. А.)

50. Биантиоксиданты в терапии повреждений печени / Биантиоксидант. - Тюмень,

1997. - С. 184. (Николаев С.М., Ажунова Т.А.)

51. Влияние комплексного растительного препарата «розобтин» па токсичность

циклофосфана / Биантиоксидант. -- Тюмень, 1997. - С. 156. (Алексеева Э.А., Дагбаева В.О., Ажунова Т.А.)

52. Влияние комплексного растительного препарата полифнтохола на течение

алкогольного гепатита // Растит, ресурсы,- 1997,- С.38.-44. (Дашннамжилов Ж.Б., Ажунова Т.А., Лоншакова К.С., Николаев С.М.)

53. Влияние комплексного растительного препарата «розобтин» на гепатотоксичность метотрексата. - /«Актуальные проблемы фармакологии и поиска лекарственных препаратов,- Томск, 1997.- Т.9.- С. 4-6. (Алексеева Э.А., Ажунова Т.А., Дагбаева В.О.)

54. Влияние комплексного растительного препарата «розобгин» на гепатотоксичность цитостатиков из группы антиметаболитов.- / «Экологозависимые заболевания (биохимия, фармакология, клиника)». - Чита, 1997.-С. 137. Алексеева Э. А., Ажунова Т. А.)

55. Информационный листок Бурятского ЦНТИ «Влияние комплексного препарата

полифнтохола при тетрациклиновом, этаноловом и комбинированном поражении печени» № 8-96 1996. (Дашнаамжилоь Ж.Б., Лоншакова К.С., Ажунова Т.А., Николаев С.М.)

56. Информационный листок Бурятского ЦНТИ «Влияние растительных препаратов

на состояние животных при интенсивном откорме их на барде» № 23-87. 1987 г. (Самбуева З.Г., Балдаева С.Н." Ажунова Т.А., Лоншакова К.С., Николаев С.М.)

57. Методические рекомендации «Технология детоксикации организма растительными препаратами в терапии атопического дерматита у детей»,-Улан-Удэ, 1996. - 7 с. (Тарнуева С.Д., Ажунова Т.А., Маланов К.Ж., Баглаев Т.Н.)

58. Методические рекомендации « Оптимизация химиотерапии туберкулостатиками

туберкулеза легких растительными препаратами». - Улан-Удэ, 1997. - 5 с. (Дугаров С Л., Дугарова Е.С., Ажунова Т.А., Николаев С.М.)

59. Способ получения средства, обладающего ангигепатотоксическим действием.

Патент РФ № 1510143 от 22.05.96 г. (Николаев С.М., Даргаева Т.Д., Российская Г.И., Убеева Т.А., Ажунова Т.А., Матханов Э.И.)

60. Методические рекомендации «Оптимизация цитостатической полихимиотерапии

опухолевых заболеваний комплексным растительным препаратом розобтином». - Улан-Удэ, 1998. -6 с. (Ажунова Т.А., Алексеева Э.А., Дагбаева В.О., Баглаев Т.Н., Перинов А.П., Николаев С.М.)