Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Морфофункциональные изменения в печени, лимфоидных органах и эритроцитах при острой токсической лекарственной гепатопатии в условиях воздействия постоянного магнитного поля; фармакологическая коррекци

4856125

Михайлова Алевтина Игоревна

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ В ПЕЧЕНИ, ЛИМФОИДНЫХ ОРГАНАХ И ЭРИТРОЦИТАХ ПРИ ОСТРОЙ ТОКСИЧЕСКОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ГЕПАТОПАТИИ В УСЛОВИЯХ ВОЗДЕЙСТВИЯ ПОСТОЯННОГО МАГНИТНОГО ПОЛЯ; ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ КОРРЕКЦИЯ НАРУШЕНИЙ

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

2 4 013 2П

Курск-2011

4856125

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации.

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор,

заслуженный деятель науки РФ Конопля Александр Иванович кандидат медицинских наук, доцент Дудка Виктор Тарасович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Провоторов Владимир Яковлевич доктор медицинских наук, профессор Утешев Даниил Борисович

Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Российский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Защита состоится « » 2011 г. в /Г часов на заседании

диссертационного совета Д 208.0^9.03 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3.).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО КГМУ Минздравсоцразвития России.

Автореферат разослан « » 2011г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Пашин Е.Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Число больных с токсическим поражением различных органов ежегодно увеличивается, чему причиной в основном является современный образ жизни, характер питания, наркомания, злоупотребление алкоголем, развитие промышленности (Наумова Т.А. и др., 2003; Белоко-нова О.В., Кедровская H.A., 2009; Мамедов Я.Д., 2009; Fukushima К. et al., 2008). Особое место занимают лекарственные поражения различных органов, в первую очередь печени, играющей существенную роль в биотрансформации фармакологических средств (Прокопенко Л.Г. и др., 2001; Лазарева Г.А. и др., 2006; Конопля А.И., 2008; Кедровская H.A., 2009). Значение этой патологии возросло в связи с либерализацией доступа населения к медикаментам, появлением в открытой продаже большого количества безрецептурных средств, широким распространением агрессивной рекламы при отсутствии объективной информации о возможном побочном действии (Буеверов А.О., 2000).

Не менее актуальным в настоящее время является изучение патогенного влияния на организм факторов внешней среды, в т.ч. ПМП (Черных A.M., 2005; Глазова A.B., 2006; Дудка В.Т., 2006; Вельский В.В., 2007; Литвинова Е.С., 2007). Постоянное проживание в районах с естественным геомагнитным воздействием в сочетании с приемом гепатотоксических ксенобиотиков представляется в настоящее время не таким редким явлением, однако этот вопрос остается недостаточно изученным (Дудка В.Т. и др., 2006; Лазарев А.И. и др., 2007; Литвинова Е.С. и др., 2007). Все это ставит задачу в раскрытии механизмов нарушения воздействия как отдельных факторов внешней среды и токсических агентов, так и их сочетанного влияния и, как следствие, применения при хорошем экспериментальном обосновании способов фармакологической коррекции выявленных нарушений.

В настоящее время наблюдается повышенный интерес исследователей к изменениям структурно-функциональной организации эритроцитов при различных патологиях. Это обусловлено участием эритроцитов в процессах, связанных с поддержанием гомеостаза на уровне целого организма, кроме того, патогенетической ролью этих клеток в реализации иммунных механизмов, в том числе и при патологии печени (Конопля А.И., 2008).

Все это обосновывает необходимость комбинированной фармакотерапии при острой лекарственной гепатопатии, развивающейся на фоне воздействия ПМП препаратами с иммуномодулирующими, антиоксидантными и цитопро-текторными эффектами. Исходя из этого, представляется актуальной задачей, особенно для регионов с повышенным уровнем напряженности геомагнитного поля, в число которых входит Курская магнитная аномалия, поиск фармакологических средств и способов коррекции нарушений функции паренхиматозных, в первую очередь печени, лимфоидных органов и эритроцитов.

Цель - разработка способов фармакологической коррекции морфо-функциональных нарушений в печени, лимфоидных органах и эритроцитах при индометациновой гепатопатии на фоне воздействия постоянного магнитного поля.

Задачи исследования

1. Изучить морфофункциональные изменения в печени, тимусе, селезенке и лимфоузлах у крыс с острой индометациновой гепатопатией в условиях воздействия постоянного магнитного поля.

2. Исследовать фармакологическую эффективность применения сочетания препаратов «Лонгидаза», «Кудесан» и «Фосфоглив» для коррекции морфо-функциональных нарушений в печени, лимфоидных органах и эритроцитах при острой токсической индометациновой гепатопатии на фоне воздействия постоянного магнитного поля.

3. Оценить фармакологическую эффективность комбинации препаратов «Гепон», «Гипоксен» и «Гептрал» в коррекции морфофункциональных нарушений в печени, тимусе, селезенке, лимфоузлах и эритроцитах при острой индометациновой интоксикации и воздействии постоянного магнитного поля.

4. Установить влияние использованных сочетаний фармакологических препаратов на изменение иммунной реактивности и функциональной активности нейтрофилов периферической крови при острой токсической индометациновой гепатопатии в условиях постоянного магнитного поля.

5. Разработать эффективные способы фармакологической коррекции морфофункциональных нарушений в печени, лимфоидных органах и эритроцитах, развивающихся при острой токсической лекарственной гепатопатии в условиях воздействия постоянного магнитного поля.

Научная новизна. Установлены морфологические и функциональные нарушения в печени, лимфоидных органах, изменения структурно-функциональных свойств эритроцитов при острой токсической индометациновой гепатопатии в условиях воздействия постоянного магнитного поля. Выявлена взаимосвязь структурных изменений в гепатоцитах с патоморфологической картиной и функцией лимфоидных органов при острой индометациновой интоксикации в условиях воздействия постоянного магнитного поля.

Впервые установлено, что применение комбинаций препаратов «Лонгида-за»+«Кудесан»+«Фосфоглив» или «Гепон»+«Гипоксен»+«Гептрал» в условиях острого индометацинового токсического поражения печени и воздействия постоянного магнитного поля нормализует частично или полностью показатели адаптивного, врожденного иммунитета и структурно-функциональные свойства эритроцитов.

Впервые выявлено, что использование сочетания препаратов «Ге-пон»+«Гипоксен»+«Гептрал» более эффективно, чем комбинация «Лонгида-за»+«Кудесан»+«Фосфоглив», корригирует степень выраженности патоморфо-логических изменений в печени, лимфоидных органах и иммунометаболические нарушения при острой индометациновой гепатопатии и воздействии постоянного магнитного поля.

Практическая значимость. Установлено отрицательное влияние постоянного магнитного поля на течение и исход острой токсической лекарственной гепатопатии, вызванной введением индометацина.

Экспериментально обоснована возможность фармакологической коррекции морфофункциональных нарушений в печени, иммунной системе и структурно-функциональных свойств эритроцитов при острой индометациновой гепа-

топатии и воздействии постоянного магнитного поля. Экспериментально доказана возможность применения комбинаций препаратов «Гепон» + «Гипоксен» + «Гептрал», в меньшей степени «Лонгидаза» + «Кудесан» + «Фосфоглив» в качестве средств, оказывающих выраженный иммуномодулирующий и гепатопро-текторный эффекты при сочетанном воздействии гепатотропных токсических агентов и постоянного магнитного поля.

Опытным путем обоснована возможность совместного применения имму-номодуляторов, антиоксидантов и мембранопротекторов для эффективной коррекции нарушений иммунного статуса, морфофункционалыюго состояния гепа-тоцитов и структурно-функциональных свойств эритроцитов при токсической гепатопатии в условиях воздействия постоянного магнитного поля.

Материалы диссертации вошли в рабочие программы и используются в лекционных курсах и на практических занятиях ряда кафедр Российского, Самарского, Волгоградского и Курского государственных медицинских университетов и медицинского института Орловского государственного университета.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Нахождение в постоянном магнитном поле животных с острым токсическим индометациновым поражением печени существенно углубляет выраженность изменений иммунной реактивности, функционально-метаболической активности гепатоцитов и нейтрофилов периферической крови, процессов пере-кисного окисления липидов, структурно-функциональных свойств эритроцитов по сравнению с воздействием данных факторов по отдельности.

2. Острая индометациновая интоксикация сопровождается развитием у животных дистрофических и некротических изменений в ткани печени с нарушением ее гистоархитектоники. В лимфоидных органах развиваются выраженные инволютивные процессы. Воздействие постоянного магнитного поля существенно усугубляет выраженность альтеративных изменений в печени и инво-лютивных процессов в лимфоидной ткани, значительно снижая активность восстановительных процессов.

3. Применение комбинаций препаратов «Лонгидаза»+«Кудесан»+ «Фосфоглив» или «Гепон»+«Гипоксен»+«Гептрал» в условиях индометацинового токсического поражения печени и воздействия постоянного магнитного поля нормализует показатели гуморальной и клеточной форм иммунного ответа, фагоцитоз гранулоцитов и частично корригирует кислородзависимую активность нейтрофилов периферической крови.

4. Более эффективной фармакологической схемой коррекции структурных нарушений в печени и лимфоидных органах, функционально-метаболической активности гепатоцитов, процессов перекисного окисления липидов, структурно-функциональных свойств эритроцитов, ферментов антиоксидантного статуса является сочетание «Гепон»+«Гипоксен»+«Гептрал».

Апробация работы. Основные положения диссертации представлены на научных конференциях Курского государственного медицинского университета: I Международной дистанционной научной конференции «Инновации в медицине» (2008), Межвузовской научной конференции «Актуальные вопросы фармакологии и фармации», посвященной памяти профессора Владислава Васильевича Пичугина и 75-летию КГМУ (2009), IV Международной научной конферен-

ции молодых ученых-медиков (2010), XVI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2009), X Международном конгрессе «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии» (Казань, 1009), III съезде Российского общества патологоанатомов (Самара, 2009), совместном заседании кафедр фармакологии, патологической анатомии, гистологии, биохимии Курского государственного медицинского университета (2010).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 19 работ, в том числе в 8 изданиях, рекомендованных ВАК для публикаций материалов докторских и кандидатских диссертаций.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 130 страницах машинописного текста, иллюстрирована 17 таблицами, 10 рисунками и 18 фотографиями, состоит из введения, обзора литературы (2 главы), описания методов исследования, изложения собственных результатов (5 глав), заключения, выводов, практических рекомендаций, библиографического указателя, включающего 113 отечественных и 72 иностранных источника.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материал и методы исследования. Исследования проведены на 345 крысах Вистар массой 120-180 г. В опытах использовали животных, прошедших карантинный режим вивария Курского государственного медицинского университета и не имевших внешних признаков каких-либо заболеваний. Все животные содержались в одинаковых условиях, на обычном пищевом режиме. Для получения статистически достоверных результатов группы формировали из 8-10 животных. Все исследования проводили в одно и то же время суток с 8 до 12 часов с соблюдением принципов, изложенных в Конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других целей (г. Страсбург, Франция, 1986). Животных выводили из эксперимента передозировкой средств для наркоза. Исследованию подвергали плазму, эритроциты, нейтрофилы периферической крови, ткань печени, тимуса, селезенки, лимфатических узлов.

Дизайн исследования. Способы введения и дозировки фармакологических препаратов. Расчет дозировок препаратов для введения экспериментальным животным проводили при помощи коэффициентов пересчета доз (мг/кг на мг/м2) для крысы и человека в зависимости от массы тела (Freireich E.J., 1966) (табл. 1).

Моделирование токсической гепатопатии без и на фоне воздействия ПМП. Токсическое поражение печени моделировали внутрижелудочным введением индометацина в дозе 5 мг/кг, трехкратно, через 24 часа (Саратиков A.C., 1995).

Воздействие ПМП проводили в течение 30 дней в специально созданной установке, состоящей из высокостабилизированного источника постоянного тока и колец Гельмгольца с радиусом 1,5 м. Внутри колец создавалось ПМП с индукцией 3x10"4 Тл, вектор которого находился на суперпозиции с вертикальной составляющей вектора геомагнитного поля на территории г. Курска. Испытуемые лабораторные животные помещались в центр установки, где неоднородность поля не превышала 30%.

Таблица 1

Использованные препараты, дозировки, способы и кратность введения

интактным крысам »1 животным с острым токсическим поражением печени

Препарат Фирма-изготовитель Способ введения Разовая доза, иг/кг, МЕ/кг Схема введения

Количество введений Интервал между введениями, часы

Лонгидаза НПО «Петро-вакс Фары», Россия внутримышечно 250 МЕ/кг 5 Через 48 часов

Кудесан ЗАО «Аквион», Россия внутрижелудочно в 1% крахмальной суспензии 2,6 мг/кг 14 Через 24 часа

Фосфоглив ОАО «Фарм- стандарт-Лексредства», Россия внутрижелудочно в 1% крахмальной суспензии 1500 мг/кг лецитина, 800 мг/кг глицирризиновой кислоты 14 Через 24 часа

Гепон ООО «Имма-фарма», Россия внутрижелудочно в 1% крахмальной суспензии 1,0 мг/кг 14 Через 24 часа

Гипоксен ЗАО «Корпорация Олифен», Россия внутрибрюшинно 128,0 мг/кг 14 Через 24 часа

Гептрал Э бботт, Германия внутрибрюшинно 34,0 мг/кг 10 Через 24 часа

На первые сутки после последнего введения индометацина

Индометацин | | | + + + 15 О из

ПМП + + + + + + + + + + + + + + +

Дни 1-16 17 18 19 20 21 22 1 23 24 25 26 27 28 29 30 м

На 17-е сутки после последнего введения индометацина

Индометацин + + 1 1 Забой 1

ПМП + + + + + + + + + + + + + + + +

Дни 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16-30

Примечание: фармакологическая коррекция начиналась с 14 дня воздействия ПМП.

Оценка иммунной реактивности и функциональной активности ней-трофилов периферической крови. Для развития гуморального иммунного ответа антиген (ЭБ) вводили внутрибрюшинно однократно из расчета 2х109 клеток на 1 кг массы тела. Выраженность ГИО оценивали на пятые сутки после иммунизации путем определения в селезенке числа антителообразующих клеток (Мальберг К., Зигль Э., 1987). ГЗТ у крыс индуцировали внутрибрюшинным введением 108 ЭБ в 0,5 мл 0,15 М раствора натрия хлорида (сенсибилизирующая доза). Через четверо суток в подушечку стопы правой лапки вводили 10б ЭБ в 0,1 мл 0,15 М раствора хлорида натрия (разрешающая доза). Спустя 24 ч выделяли регионарный (по месту введения ЭБ) и контрлатерапьный подколенный лимфоузлы. О выраженности ГЗТ судили по разнице масс регионарного и контрлатерального лимфатических узлов и по разнице количества в них карио-цитов (Федосеева В.Н. и др., 1993). Взятие крови у экспериментальных животных осуществляли под наркозом путем внутрисердечного забора. Выделение нейтрофилов проводили на градиенте плотности фиколл-урографина (р=1,078).

Фагоцитарная активность нейтрофилов периферической крови оценивалась по ФП, ФЧ и ИАФ (Медведев А.Н., Чаленко В.В., 1991), кислородзависимая - по НСТ-сп. и НСТ-ст. опсонизированным и неопсонизированным зимозаном, коэффициентам активации на опсонизированный и неопсонизированный зимозан, коэффициенту опсонизации (Зинкин В.Ю., Годков В.Г., 2004).

Биохимические методы. Для оценки функционального состояния гепато-цитов в сыворотке крови стандартными наборами реактивов определяли активность аланинаминотрансферазы, щелочной фосфатазы, гамма-глутамилтранспептидазы, протромбинового индекса, ставили тимоловую пробу. Интенсивность процессов перекисного окисления липидов оценивали по содержанию в плазме крови ацилгидроперекисей и малонового диальдегида (Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г., 1977). Кроме этого, определяли активность каталазы (Королюк М.А. и др., 1988). Общую антиокислительную активность плазмы крови определяли методом, основанным на степени ингибирования аскорбат- и ферроиндуцированного окисления твина-80 до МДА. Оптическую плотность измеряли при 532 нм через 48 часов инкубации при 40°С (Галактионова Л.П. и др., 1998). Содержание стабильных метаболитов оксида азота в плазме крови определяли спектрофотометрически с помощью реактива Грисса. Результат рассчитывали по кривой с использованием стандартных растворов нитрита натрия (Голиков П.П. и др., 2003).

Исследование физико-химических свойств эритроцитов. Общее количество эритроцитов и концентрацию гемоглобина определяли по общепринятым методикам. Эритроциты получали из 5 мл гепаринизированной крови по методу Е. Beutler (1985) с незначительной модификацией. Цельную кровь отстаивали дважды в 10 мМ Na-фосфатном буфере (рН=7,4), содержащим 0,9% хлорида натрия и 3% декстрана Т-500, в течение 30 минут при температуре 37°С. После этого кровь центрифугировали, удаляли надосадочную жидкость аспирацией. Эритроцитарную массу подвергали дополнительной очистке на хроматографи-ческой колонке через HBS-целлюлозу.

В целях определения сорбционной способности эритроцитов по отношению к витальным красителям, то есть поглотительной способности мембраны, 1 мл суспензии эритроцитов смешивали в пробирке с 3 мл 0,025% раствора ме-тиленового синего, инкубировали 10 мин при комнатной температуре и центрифугировали в течение 10 мин при 3000 об/мин. При длине волны 630 нм определяли оптическую плотность исходного раствора и надосадочной жидкости в единицах экстинкции по отношению к изотоническому раствору натрия хлорида (Тогайбаев A.A. и др., 1988). Количество поглощенного красителя выражали в процентах по формуле:

ССЭ = 100- 100 С2/С,, где

ССЭ - сорбционная способность эритроцитов в % поглошенного красителя;

С| - оптическая плотность раствора до инкубации с эритроцитами в ед. экстинкции;

С г - оптическая плотность раствора после инкубации с эритроцитами, ед. экстинкции.

Исследовали также сорбционную емкость гликокаликса эритроцитов для альцианового синего, который является катионным красителем фталоцианино-вой группы и обладает способностью связываться с гликолипидами, гликопро-теидами и кислыми мукополисахаридами. В низкой концентрации альциановый

синий не повреждает клетки, не проникает в цитоплазму, но сорбируется в количестве, пропорциональном содержанию белков и углеводов в гликокапиксе, отражая степень его вязкости (Семко Г.А., 1998). Для определения сорбцион-ной емкости гликокаликса 1 мл суспензии эритроцитов, содержащий 4 • 10 клеток, смешивали с равным объемом изотонического раствора натрия хлорида, содержащего 0,005% альцианового синего, инкубировали 10 мин при температуре 21°С и центрифугировали в течение 10 мин при 1000 об/мин. При длине волны 617 нм, используя в качестве контроля изотонический раствор натрия хлорида, измеряли концентрацию красителя в надосадочной жидкости. Количество поглощенного альцианового синего рассчитывали в граммах на 1 эритроцит.

Морфологические методы исследования. После выведения животных из эксперимента для морфологического исследования забирали лимфоидные органы (вилочковую железу, селезенку, лимфатические узлы) и печень. При макроскопическом исследовании указанных органов обращали внимание на размеры, массу (органы взвешивали на электронных весах с точностью до 0,1 г или на торсионных весах), внешний вид, консистенцию, цвет и структуру ткани на разрезе. Кусочки изучаемых органов фиксировали в 10% нейтральном формалине и жидкости Карнуа. Использована заливка тканей в парафин, частично в желатину; в части случаев в криостате приготовлялись нефиксированные свежезамороженные срезы. Гистологические срезы толщиной 5-7 мкм окрашивали гематоксилином и эозином. Окраска метиловым зеленым-пиронином по Браше с контролем специфичности окрашивания рибонуклеазой применялась для выявления рибонуклеопротеидов. Для выявления жиров использовали окраски Суданом III и сульфатом нильским голубым. Нейтральные мукополисаха-риды выявляли PAS-реакцией по Мак-Манусу, гликоген - PAS-реакцией с дополнительной обработкой срезов амилазой. Колпагеновые волокна окрашивали по Ван-Гизону1.

Статистическая обработка материала. Статистическую обработку результатов исследования проводили, используя непараметрические методы: критерии Вилкоксона-Манна и Уитни, а также коэффициент ранговой корреляции Спирмена (Гублер Е.Г., Генкин А.Р., 1973). Для редукции количества данных был проведен факторный анализ (Нагшап, 1976). Статистически значимыми считали различия с р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Морфофункциональные изменения в печени, лимфондной ткани и эритроцитах при токсической индометациновой гепатопатии на фоне воздействия постоянного магнитного поля. Через сутки после последнего введения индометацина происходит повышение активности АЛТ - в 1,3 раза, ЩФ - в 1,2 раза, ГГТП - в 2,0 раза, а концентрация билирубина увеличивается в 1,4 раза. Наблюдается снижение ПТИ при неизмененном показателе ТП. При совместном воздействии постоянного магнитного поля и токсиканта в

' Примечание: морфологическая часть работы выполнена на базе патологоанатомической лаборатории ГОУ ВПО КГМУ Минздравсоцразвития России, за что выражаем сотрудникам искреннюю благодарност ь.

большей степени возрастает активность АЛТ, концентрация общего билирубина, ТП, при достоверно не изменяющихся показателях ГГТП, ЩФ и ПТИ (рис. 1).

Через 17 суток после последнего введения токсиканта наблюдалось частичное купирование синдромов холестаза (до уровня здоровых животных снижается концентрация билирубина, но активность ЩФ остается достоверно повышенной), цитолиза (нормализация активности АЛТ и снижение ГГТП). Тимоловая проба достигала уровня контрольных значений, а показатель ПТИ через 17 суток оставался сниженным по сравнению с контролем (рис. 1).

В группе животных, подвергнутых сочетанному воздействию токсиканта и постоянного магнитного поля, через 17 суток после острого отравления остаются повышенными все изучаемые биохимические показатели функциональной активности гепатоцитов: активность АЛТ выше контрольных значений в 1,5 раза и в 1,4 раза значений показателей группы с изолированным действием индо-метацина, активность ГГТП и ЩФ выше контрольных значений в 1,8 раз и в 1,2 раз соответственно. В данном эксперименте обращает на себя внимание резко выраженная гипербилирубинемия (концентрация общего билирубина возросла в 1,6 раза по сравнению с контрольной группой), не наблюдается значительных изменений показателя ТП и ПТИ (рис. 1).

При изучении формирования различных форм иммунного ответа через сутки после введения животным индометацина, в большей степени при сочетании с воздействием ПМП, наблюдается угнетение формирования гуморальной и клеточной форм иммунитета, фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови, но повышается кислородзависимая активность гранулоци-тов, особенно через 17 суток после моделирования гепатопатии.

Через сутки после острого отравления индометацином в плазме крови экспериментальных животных повышается концентрация АГП в 1,3 раза, МДА - в 1,4 раза, а активность каталазы и СОД - в 1,4 раза по сравнению с контрольной группой. Уровень СМКо через сутки после воздействия токсиканта снижался в 1,6 раза, а ОАА достоверно не изменялась.

У животных с токсической гепатопатией в условиях воздействия постоянного магнитного поля резко повышалась концентрация АГП - в 2,5 раза по сравнению с контрольной группой и в 2,0 раза при действии только индометацина. Все остальные изучаемые показатели были в пределах значений групп животных с изолированным воздействием индометацина.

Через 17 суток после воздействия токсиканта концентрация МДА, АГП, показатель ОАА достоверно не отличались от показателей контрольной группы, концентрация МДА в 1,3 раза снижалась по отношению к первым суткам исследования. Активность антиокислительных ферментов СОД и каталазы, концентрация СМмо были на уровне показателей групп животных, изучаемых в первые сутки после отравления.

ГШ

АЛТ

ГГГИ

Рис. 1. Состояние функциональной активности гепатоцитов у животных с токсическим поражением печени на фоне воздействия постоянного магнитного поля.

Обозначения: 1 - горизонтальной чертой обозначены показатели здоровых животных;

2 - показатели крыс через сутки после моделирования острой индометашшовой гепатопатии;

3 - показатели крыс через сутки после моделирования острой индометациновой гепатопатии, пребывавших в условиях постоянного магнитного поля; 4 - показатели крыс через 17 суток после моделирования острой индометациновой гепатопатии; 5 - показатели крыс через 17 суток после моделирования острой индометациновой гепатопатии, пребывавших в условиях постоянного магнитного поля.

В группе животных с острой индометациновой интоксикацией в условиях воздействия постоянного магнитного поля на 17 сутки концентрация продуктов ПОЛ (МДА, АГП) в 1,2 раза была выше, чем в группе животных с изолированным действием токсиканта. Все остальные показатели остаются без изменений по сравнению с показателями первых суток после отравления.

Анализ содержания эритроцитов и гемоглобина через сутки и через 17 суток после индометацинового воздействия, а также сочетание действия токсиканта с ПМП через сутки показал отсутствие достоверных различий по сравнению с контрольной группой. Сочетанное действие токсиканта и ПМП через 17 суток после введения индометацина приводило к снижению количества эритроцитов и гемоглобина по сравнению со всеми изучаемыми группами.

Морфологически, в отличие от животных с изолированной гепатотропной интоксикацией, при остром отравлении индометацином в условиях воздействия ПМП через 17 суток после отравления в печени восстановление структуры гепатоцитов наблюдалось лишь в центральных отделах долек в непосредственной близости с центральными венами. В других отделах долек перипортально сохранялась выраженная гиалиново-капельная и гидропическая дистрофия гепатоцитов с нарушением балочного строения и дископлексацией долек (фото 1). В лимфоидных органах у животных с острой индометациновой гепатопатией в

условиях воздействия постоянного магнитного поля развивались инволютив-ные процессы, сохраняющиеся на протяжении всего эксперимента: в тимусе развивалась акцидентальная трансформация вплоть до атрофии отдельных долек, редукция лимфоидных фолликулов селезенки с гиалинозом стромы, резкое сужение коры и опустошение паракортикальной зоны брыжеечных лимфоузлов (фото 1).

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют, что постоянное магнитное поле усугубляет развивающиеся при токсической гепатопатии мор-фофункциональные нарушения в печени, иммунной системе, оксидантные нарушения в плазме крови отравленных животных, а также проявляется несостоятельностью мембранного аппарата эритроцитов и их метаболическим дисбалансом и способствует сохранению этих нарушений на протяжении 17 суток после последнего введения токсиканта.

шттттш\

ШШшШ

шт шШ ш Аь УШт щШШШжш

ЖШШ ■;> ЛГ^^Л'* - ♦ ■ • .г • - -Г 1

тойДОАшМш шшнш

ш

, »шмришшим четкжгФ

1 ¿ШВИШВЯмЯ шШ

жт^Шштщ шт' ЩШКшШВЯШ Шйй

й.ЬиЛтй . ¿М

Фото 1. Патоморфология печени, тимуса и селезенки через ¡7 суток (а, б, а) после введения индометацина и 17 суток (г, д, е) после введения индометацина и воздействия ПМП.

Фармакологическая эффективность применения сочетания препаратов «Лонгидазы», «Кудесана» и «Фосфоглива» в условиях токсического поражения печени и воздействия постоянного магнитного поля. На фоне приема комбинации препаратов «Лонгидаза» + «Кудесан» + «Фосфоглив» через 17 суток после отравления индометацином и тридцатидневного воздействия ПМП наблюдается нормализация активности АЛТ и тимоловой пробы до уровня контроля, частичная коррекция (не до уровня нормы) активности ГГТП и

концентрации билирубина, которые соответственно снижаются в 1,3 раза и в 4,3 раза по сравнению с группой животных, не получавших препарат (табл. 2).

Таблица 2

Коррекция функциональной активности гепатоцитов, эритроцитов, иммунных и оксндантных нарушений сочетанием препаратов «Лоигидазы», «Кудесана» и «Фосфоглива»

Показатели Единицы измерении 1 2 3 4

Контрольная группа Острая токсическая индо-метациновая гепатопатия Острая токсическая индомета-циновая гепатопатия н ПМП Острая токсическая индометацииовая гепатопатия и ПМП + «Лонгидаза» + «Кудесан» + «Фосфоглив»

АЛТ Ед./ч*л 36,0±2,9 38,1±1,9 53,0±4,9'1г 39,6±4,Г-'

ггтп Ед./ч*л 7,0±1,2 9,8±1,5'' 12,З*!^"1'2 9,92±1,1"'"л

ЩФ Ед./ч*л 246,3±19,2 277,5±19,2'' 290,3±16,8"' 281,2±14,Г'

Билирубин мкмоль/л 6,5±1,6 7,6±0,9"' 40,4±1,Г1г 9,4*1,2"'"'

ПТИ % 55,7±1,4 49,7±3,0"' 46,6±2,8"' 44,2±4,4"'

ТП ед. 8-Н 3,91±0,22 3,84±0,11 4,3±0,12"'"г 3,94±0,13"'

АОК тыс./орг. 19,7±|,4 17,7±2,1 12,6±1,Г'-г

РМ мг 3,84±0,07 3,71±0,2 3,02±0,05'и 3,91±0,29"^

РК 106 2,03±0,02 2,11±0,03 1,84±0,04*'"г 2,1 ШАГ*

ФИ % 85,5±2,6 82,4±1,7 71,3±2,4"'"! 80,7*3,3'"'

ФЧ абс. 3,2±0,2 1,63±0,06'' 1,3±0,05'и 2,87±0,23'2"1

ИАФ - 2,74±0,11 1,35±0,09'' 0,93±0,02'1Д 2,32*0,03'2"1

НСТ-сп. тОЭ 0,84±0,03 0,96*0,06"' 1,|6±0,09'1'2 0,98±0,02'и

НСТ-ст. (н/з) т СЮ !,31±0,03 1,42±0,12 2,37±0, |4"1,2 1,28±0,1 Г1*

НСТ-ст (о/з) шОЭ 1,59±0,07 1,58±0,11 2,88±0,08"и 1,71±0,02"^

КАо - 1,89*0,08 1,65±0,05"' 1,62±0,05"' 1,74*0,Об"2"1

КАн - 1,56±0,06 1,48±0,06 1,18±0,05"и 1,31±0,08'"'

КО - 1,21 ±0,04 1,11 ±0,06 1,37±0,04'1"1 1,33±0,07"м

МДА мкмоль/л 2,96±0,41 3,3±0,29 4,08±0,12"'2 4,78*0,7"1'2

АГП усл. ед. 0,68±0,1 0,78±0,13 0,93±0,07"''2 0,76*0,18'"'

ОАА % 42,4±7,0 46,9±5,8 43,0±2,1 39,8*1,5'2

сод усл.ед./мл 8,2±1,3 11,1±1,9"' П,4±0,6"' 15,4*1,7''"''

Каталаза кат/л 10,3±0,8 14,6±1,9"' 14,1±1,Г' 14,6*0,62"'

СМмо мкмоль/л 4,23±0,36 2,56±0,52"' 2,81*0,2'' 4,7*0,51"2"1

Эритроциты 1*10'2/л 5,91±0,21 5,49±0,12"' 4,02±0,09"''2 5,7*0,23"-'

Гемоглобнн г% К,7=ЬО,51 13,8±0,8 ю,о±о,12"'-2 13,0*0,9''"'

ССЭ % 52,6±0,5 55,5±22,1 46,0±2,5'''2 55,1±5,2"л

СНГ 10'" г/эр. 3,8±0,03 3,15±0,Р 3,3±0,2"' 3,2*0,2''

При этом активность ЩФ и ПТИ достоверно не изменялась, их показатели не отличались от группы животных, не получавших препараты. Введение комплекса препаратов «Лонгидаза» + «Кудесан» + «Фосфоглив» полностью нормализовало формирование гуморальной и клеточной форм иммунного ответа, фагоцитарную активность полиморфноядерных лейкоцитов и частично -кислородзависимую (табл. 2).

Применение сочетания «Лонгидаза» + «Кудесан» + «Фосфоглив» позволяет нормализовать концентрацию АГП, стабильных метаболитов N0, ССЭ,

при этом наблюдается компенсаторное повышение активности СОД, содержания эритроцитов и гемоглобина. Не менялась активность каталазы, а СЕГ оставалась сниженной на 15% по сравнению с контрольной группой (табл. 2).

При гистологическом исследовании отмечается существенная сохранность структуры ткани печени по сравнению с таковой у животных, не получавших данные препараты. Однако при этом частично сохраняется гиалиново-капельная, а местами и гидропическая дистрофия гепатоцитов, в периферических отделах долек - с нарушением четкости балочного строения. В лимфоид-ных органах выраженность инволютивных изменений была существенно ниже, чем у животных с острой индометациновой интоксикацией в условиях воздействия ПМП, не получавших препараты. В тимусе часть долек мелких размеров, с узкой разрыхленной корковой зоной, в мозговой зоне имелись немногочисленные мелкие пласты ретикулоэпителиальных клеток и тельца Гассаля (фото 2). _ _

Фото 2. Патоморфология печени, тимуса и селезенки через 17 суток (а, б, в) после введения индометацина и воздействия ПМП и через 17 суток (г, д, е) после введения индомета-цииа, воздействия ПМП и применения комбинации препаратов «Лонгидаза» + «Кудесан» + «Фосфоглив».

В селезенке лимфоидные фолликулы были разных размеров, с узкими мантийными зонами, реактивные центры обнаруживались в меньшей части фолликулов (фото 2).

Фармакокорригирующие эффекты сочетания препаратов «Гепон», «Гнпоксен» и «Гептрал» при острой токсической гепатопатии и воздейст-

вии постоянного магнитного поля. Комплекс препаратов «Гепон» + «Гипок-сен» + «Гептрал» оказался более эффективным в отношении функциональной активности гепатоцитов. Использование этого сочетания нормализует концентрацию МДА (чего не наблюдалось при изучении первой фармкомпозиции), АГП, активность каталазы и концентрацию СМш, при этом активность СОД оставалась в 1,6 раза выше, чем в контрольной группе (для сравнения, при использовании схемы «Лонгидаза» + «Кудесан» + «Фосфоглив» активность СОД была выше контроля в 1,9 раз, а активность каталазы в 1,4 раз выше контроля). Аналогично предыдущей комбинации препаратов сочетание «Гепон» + «Ги-поксен» + «Гептрал» нормализует формирование гуморальной и клеточной форм иммунного ответа, фагоцитарную и частично кислородзависимую активность полиморфноядерных лейкоцитов (табл. 3).

Таблица 3

Коррекция функциональной активности гепатоцитов, эритроцитов, иммунных и оксидантных нарушений сочетанием препаратов

«Гепон», «Гипоксен» и «Гептрал» при токсической гепатопатии ______ на фоне воздействия ПМП_^___

Показатели Единицы измерения 1 2 3 4

Контрольная группа Острая токсическая нидо-метацпновая гепатопатня Острая токсическая индо-метациновая гепатопатня и ПМП Острая токсическая индометацнновая гепатопатня и ПМП + «Гепон» + «Гипоксен» + «Гептрал»

АЛТ Ед./ч*л 36,0±2,9 38,1*1,9 53,0*4,9"'"1 35,1*3,Г'

ГГТП Ед./ч*л 7,Ш,2 9,8±1,5"' 12,3*1,8"и 8,1*1,9""

ЩФ Ед,/ч*л 246,3*19,2 277,5±19,2"' 290,3*16,8"' 270,2*1 О^""

Билирубин мкмоль/л 6,5±1,6 7,6*0,9"' 40,4*1,Г1"8 7,1*1,5"-'

ПТИ % 55,7±1,4 49,7*3,0"' 46,6*2,8"' 56,2*3,в"'"*

ТП ед. Б-Н 3,91 ±0,22 3,84*0,11 4,3*0,12''"'

АОК тыс./орг, 19,7±] ,4 17,7*2,1 12,6*1, Г1"1 19,1*1,9м

РМ мг 3,84*0,07 3,71*0,2 3,02*0,05"''' 4,01*0,92'"'

РК 10" 2,03*0,02 2,11*0,03 1,84*0,04"'"' 1,97*0,03'-'

ФИ % 85,5*2,6 82,4*1,7 71,3*2,4"'"' 81,7*3,0"-'

ФЧ абс. 3,2*0,2 1,63*0,06"' 1,3*0,05"'"' 2,9|±0,2"д-1

ИАФ - 2,74±0,11 1,35*0,09"' 0,93*0,02''"' 2,38±0,04'2-'

НСТ-сп. шОО 0,84±0,03 0,96*0,06"' 1,16*0,09''''' 0,82*0,03

НСТ-ст. (н/з) тОО 1,31 ±0,03 1,42*0,12 2,37*0,14'и 1,94*0,13"'-:|

НСТ-ст. (о/з) шОБ 1,59±0,07 1,58*0,11 г^м.ов''"' 2,01*0,12"'-4

КАо - 1,89*0,08 1,65*0,05"' 1,62*0,05"' 2,45*0,16''"■'

КАн - 1,56±0,06 1,48*0,06 1,18*0,05"'"'

КО - 1,21 ±0,04 1,11*0,06 1,37*0,04"'"' 1,03*0,07"'-'

МДА мкмоль/л 2,96±0,41 3,3±0,29 4,08*0,12"'"' 3,35*0,66"''

АГП усл. ед. 0,68±0,1 0,78*0,13 0,93*0,07"'"' 0

ОАА % 42,4±7,0 46,9±5,8 43,0±2,1 39,3*2,7"'

сод усл.ед./мл 8,2±1,3 11,1*1,9"' 11,4*0,6"' 13,2*1,8"'

Катал аза кат/л 10,3±0,8 14,6*1,9"' 14,1*1,1"' 9,4*1,4""'"'

СМш мкмоль/л 4,23±0,36 2,56±0,52"' 2,81 ±0,2"' 3,93*0,34"''"'

Эритроциты 1*10'7л 5,91*0,21 5,49*0,12"' 4,02*0,09"'''' 5,3*0,34"-'

Гемоглобин г% 14,7±0,51 13,8*0,8 Ю.О^г"'"1 13,3*0,7"'"'

ссэ % 52,6±0,5 55,5*22,1 46,0*2,5"'"' 56,8*4,2'"'

СЕГ 1<Ги г/эр. 3,8*0,03 3,15*0,1"' 3,3*0,2"' ЗМОЯТ1"'

Введение отравленным животным комбинации «Гепон» + «Гипоксен» + «Гептрал» нормализует концентрацию АГП, ССЭ, СЕГ, количество эритроцитов, при этом активность СОД оставалась в 1,6 раза выше, чем в контрольной группе (для сравнения при использовании схемы «Лонгидаза» + «Кудесан» + «Фосфоглив» активность СОД была выше контроля в 1,9 раз, а активность ка-талазы в 1,4 раз выше контроля), а содержание гемоглобина повышается на 24% (табл. 3).

Морфологическая картина ткани печени не имела видимых отличий от таковой у интактных животных: нарушения в гистоархитектонике ткани отсутствовали, дистрофические изменения в гепатоцитах не выявлялись. При микроскопическом исследовании тимуса у животных, получавших комплекс препаратов «Гепон» + «Гипоксен» + «Гептрал», дольки крупные, с четким делением на зоны, корковая зона широкая, густо заселена лимфоцитами. Прослойки меж-дольковой соединительной ткани тонкие (фото 3).

Фото 3. Патоморфология печени, тимуса и селезенки через 17 суток (а, б, в) после введения индометацина и воздействия ПМП и через 17 суток (г, д, е) после введения индомета-цина, воздействия ПМП и применения комбинации «Гепон» + «Гипоксен» + «Гептрал».

В мозговых зонах встречаются единичные мелкие тимические тельца. В селезенке лимфоидных фолликулов много, они хорошо сформированы, плотно заселены лимфоцитами, в основном с широкими четкими мантийными зонами, большинство из них с реактивными центрами. Красная пульпа умеренно полнокровна, с наличием небольших скоплений плазматических клеток, немногочисленных сидерофагов и мегакариоцитов (фото 3).

Сравнительная эффективность схем фармакотерапии у животных с токсическим поражением печени, подвергнутым воздействию постоянного магнитного поля. При подсчете процента нарушенных и скорригированных показателей для каждой схемы коррекции обнаружено, что до применения схем фармакологической коррекции у животных с индометациновым поражением печени на фоне длительного воздействия ПМП от нормы отличалось 96,4% показателей. Сочетание препаратов «Лонгидаза» + «Кудесан» + «Фосфоглив» нормализовало 53,6% и корригировало 21,4% показателей. В то же время комбинация лекарственных средств «Гепон» + «Гипоксен» + «Гептрап» нормализовала 71,4% и корригировала 21,4% изученных параметров функциональной активности гепатоцитов, иммунной реактивности и оксидантного статуса (табл. 4).

Таблица 4

Фармакологическая эффективность различных комбинаций препаратов в коррекции функциональной активности гепатоцитов, иммунных и оксидантных показателен, структурно-функциональных свойств эритроцитов при токсическом поражении печени индометацнном

и воздействии постоянного магнитного поля

Ла Схем» фармакологи- Измененные «Лонгидаза» + «Куде- «Гепон» + «Гипоксен» +

п/п ческой коррекции показатели сан» + «Фосфоглив» «Гептрал»

после вве- из ннх (%): ш них (%):

дения индо- скор- нор- остав- скор- нор- остав-

метяиииа и ри- мали- шиеся риги мали- шиеся

воздействия гнро- зова- без из- рова зова- без из-

ПМП, % ваны ны менений ны ны менений

1. Функциональные свойства гепатоцитов 100 33,3 33,3 33,3 — 100 —

2. Показатели иммунной реактивности 100 — 100 — — 100 —

3. Функциональная активность нейтрофилов периферической крови 100 33,3 66,7 — 55,5 44,5 —

4. Оксидантные показатели 83,30 — 33,3 50,0 — 66,7 16,6

5. Структурно-функциональные свойства эритроцитов 100 25,0 50,0 25,0 25,0 75,0 —

Всего 96,4 21,4 53,6 21,4 21,4 71,4 3,6

Таким образом, применение комбинаций препаратов «Лонгида-за»+«Кудесан»+«Фосфоглив» или <(Гепон»+«Гипоксен»+«Гептрал» в условиях индометацинового токсического поражения печени и воздействия постоянного магнитного поля нормализует показатели гуморальной и клеточной форм иммунного ответа, фагоцитоз гранулоцитов и частично корригирует кислородза-висимую активность нейтрофилов периферической крови. Вторая комбинация препаратов более эффективно корригирует функциональную активность гепатоцитов, концентрацию в плазме крови -продуктов перекисного окисления ли-пидов и стабильных метаболитов оксида азота, активность антиоксидантных ферментов, общую сорбционную способность эритроцитов и сорбционную емкость их гликокаликса.

По степени нарастания фармакологических эффектов на изученные лабораторные показатели комбинации лекарственных препаратов располагались в следующей последовательности: «Лонгидаза» + «Кудесан» + «Фосфоглив» —> «Гепон» + «Гипоксен» + «Гептрал».

Таким образом, при острой индометациновой гепатопатии, в большей степени на фоне воздействия ПМП, на 17 сутки отмечаются нарушения лабораторных и морфологических показателей, которые частично нормализует и корригирует введение сочетания препаратов «Лонгидаза» + «Кудесан» + «Фосфоглив» и практически полностью нормализует комплекс «Гепон» + «Гипоксен» + «Гептрал». Механизм участия препаратов в коррекции морфофункционалышх нарушений обусловлен влиянием сразу на несколько патогенетических звеньев развития гепатопатии. В отношении комбинации препаратов «Лонгидаза» + «Кудесан» + «Фосфоглив» иммуиомодулирующие эффекты обусловлены входящими в состав «Лонгидазы» иммуномодулятором полиоксидонием и ферментом лидазой, который, как известно, также обладает иммуномодулирующей эффективностью. «Кудесан» не только защищает клетки от действия свободных радикалов, но и способствует восстановлению активности других антиоксидан-тов, а «Фосфоглив» также комбинированный препарат, состоящий из лецитина и глицирризиновой кислоты, которая обладает иммуномодулирующими эффектами, при этом молекулы фосфатидилхолина замещают в мембране гепатоци-тов разрушенные молекулы. Большая эффективность второй комбинации препаратов, вероятно, обусловлена фармакокинетическими особенностями и различной химической структурой препаратов, входящих в состав схемы. «Гепон», являясь синтетическим иммуномодулятором, обеспечивает коррекцию всех форм иммунного ответа. «Гипоксен» - антиоксидант, обладает электронно-акцепторными свойствами, обусловленными полифенольной структурой, а «Гептрал» восполняет дефицит адеметионина, обеспечивающего реакции трансметилирования. Кроме этого, препарат стимулирует его выработку в организме, в первую очередь в печени и мозге.

При этом общими для обеих схем препаратов эффектами являются следующие: во-первых, это прямое стимулирующее действие на эффекторные им-му но компетентные клетки, во-вторых, это воздействие на клетки поврежденных тканей, в нашем случае в первую очередь это гепатоциты для восстановления поврежденного фосфолипидного каркаса мембран клеток с восстановлением их функции и исключением появления в крови иммуносупрессирующих метаболических соединений, в-третьих, это исключение эритроцитарного механизма иммуносупрессии (воздействие на эритроциты).

Данное экспериментальное исследование открывает дальнейшие перспективы в клинике для поиска новых препаратов, в том числе и комбинированных, обладающих гепатопротекторной, иммуномодулирующей и антиокси-дантной активностью, эффективных в лечении токсической гепатопатии, развивающейся на фоне воздействия постоянных магнитных полей.

ВЫВОДЫ

1. Трехкратное с 24-часовым интервалом внутрижелудочное введение животным индометацина в дозе 5 мг/кг массы приводит к развитию цитолити-

ческого, холестатического и гепатодепрессивного биохимических синдромов поражения печени, повышению в сыворотке крови продуктов перекисного окисления липидов, активности ферментов антиоксидантной защиты, снижению содержания стабильных метаболитов оксида азота, общей сорбционной способности эритроцитов и сорбционной емкости их гликокаликса, подавлению функционально-метаболической активности нейтрофилов, угнетению развития гуморальной и клеточной форм иммунного ответа.

2. Через 17 суток после последнего введения индометацина остаются измененными показатели функциональной активности гепатоцитов, фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови. Нахождение экспериментальных животных с острой индометациновой гепатопатией в постоянном магнитном поле повышает количество нарушенных показателей с 21% до 42,4%.

3. Морфологически острая индометациновая интоксикация сопровождается развитием у животных дистрофических и некротических изменений в ткани печени с нарушением ее гистоархитектоники, в лимфоидных органах развиваются выраженные инволютивные процессы. Воздействие постоянного магнитного поля существенно усугубляет выраженность альтеративных изменений в печени и инволютивных процессов в лимфоидной ткани, сохраняющихся на протяжении 17 суток после интоксикации.

4. Применение комбинаций препаратов «Лонгидаза» + «Кудесан» + «Фосфоглив» или «Гепон» + «Гипоксен» + «Гептрал» в условиях индометаци-нового токсического поражения печени и воздействия постоянного магнитного поля нормализует показатели гуморальной и клеточной форм иммунного ответа, фагоцитоз гранулоцитов и частично корригирует кислородзависимую активность нейтрофилов периферической крови.

5. Использование сочетания препаратов «Гепон» + «Гипоксен» + «Гептрал» более эффективно, чем комбинация «Лонгидаза» + «Кудесан» + «Фосфоглив», корригирует функционально-метаболическую активность гепатоцитов, концентрацию в сыворотке крови продуктов перекисного окисления липидов и стабильных метаболитов оксида азота, активность антиоксидантных ферментов, общую сорбционную способность эритроцитов и сорбционную емкость их гликокаликса в условиях индометациновой гепатопатии и воздействия постоянного магнитного поля.

6. Комбинация препаратов «Гепон» + «Гипоксен» + «Гептрал» у животных с острой индометациновой интоксикацией в условиях воздействия постоянного магнитного поля предотвращает развитие деструктивных изменений в печени и инволютивных изменений в лимфоидной ткани, обеспечивая практически полное восстановление структурных нарушений в них к 17 суткам эксперимента.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. В регионах естественных магнитных аномалий при назначении лекарственных препаратов, обладающих гепатотоксичностью, учитывать возможное развитие при их применении структурно-функциональных нарушений в печени, лимфоидных органах и эритроцитах.

2. Рекомендовать клиническую апробацию комбинации препаратов «Ге-

пон» + «Гипоксен» + «Гептрал» при токсических поражениях различных органов и воздействии постоянного магнитного поля.

3. Рекомендовать включение в учебный процесс медицинских вузов сведений об отрицательном действии на паренхиматозные органы и лимфоидную ткань сочетания воздействия гепатотоксических агентов и постоянного магнитного поля и способах фармакологической коррекции данных нарушений.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Иатоморфологическне изменения в селезенке и их коррекция при остром индометациновом токсическом поражении печени в условиях воздействия постоянного магнитного поля / А.И. Михайлова, В.Т. Дудка, Е.С. Литвинова, А.И. Конопля // Аллергология и иммунология. - 2008. - Т. 9, № 1. -С. 169.

2. Патоморфология острой токсической индометациновой гепатопатии при длительном воздействии постоянного магнитного поля / В.Т. Дудка, А.И. Конопля,

A.И. Михайлова и др. // Материалы I Междунар. дистанц. науч. конф. «Инновации в медицине» / КГМУ; Центр-Чернозем, науч. центр РАМН; общерос. общест. организация Рос. союз молодых ученых. - Курск, 2008. - С. 92-94.

3. Быстрова, ILA. Фармакологическая коррекция нарушений функционально-метаболической активности нейтрофилов в условиях острой токсической гепатопатии и воздействия постоянного магнитного поля / H.A. Быстрова, А.И. Михайлова, В.Т. Дудка // Сб. тр. межвуз. науч. конф. «Актуальные вопр. фармакологии и фармации», посвящ. памяти проф. Владислава Васильевича Пичугина и 75-летию КГМУ (25 дек. 2009 г.). - Курск: ГОУ ВПО КГМУ Росздрава, 2009. -С. 139-140.

4. Влияние аномального магнитного поля на иммуноморфологические нарушения при острой тетрахлормстановой токсической гепатопатии /

B.Т. Дудка, Е.С. Литвинова, А.И. Михайлова и др. // Мед. иммунология. -2009. - Т. 11, № 4-5. - С. 313-314.

5. Иммуноморфологические нарушения и их коррекция при острой тетрахлормстановой токсической гепатопатии в условиях воздействия постоянного магнитного поля / Е.С. Литвинова, В.Т. Дудка, А.И. Михайлова и др. Ü Тез. докл. XVI Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство» (Москва, 6-10 апр. 2009 г.). - М., 2009. - С. 652.

6. Иммунофармакологическая коррекция морфологических изменений селезёнки при токсической индометациновой гепатопатии в условиях воздействия постоянного магнитного поля / В.Т. Дудка, Е.С. Литвинова, А.И. Михайлова и др. // Рос. аллерголог, журн. - 2009. - Вып. 1, № 3. - С. 237-238.

7. Михайлова, А.И. Иммунная реактивность, функционально-метаболические свойства нейтрофилов в условиях индометацинового поражения печени и воздействия постоянного магнитного поля / А.И. Михайлова // Сб. тр. межвуз. науч. конф. «Актуальные вопр. фармакологии и фармации», посвящ. памяти проф. Владислава Васильевича Пичугина и 75-летию КГМУ (25 дек. 2009 г). - Курск: ГОУ ВПО КГМУ Росздрава, 2009. - С. 261-262.

8. Михайлова, А.И. Эффективность использования лонгидазы, кудесана и гипоксена в условиях индометацинового поражения печени и воздействия постоянного магнитного поля / А.И. Михайлова, H.A. Быстрова, В.Т. Дудка И Сб. тр.

межвуз. науч. конф. «Актуальные вопр. фармакологии и фармации», посвящ. памяти проф. Владислава Васильевича Пичугина и 75-летшо КГМУ (25 дек. 2009 г). - Курск: ГОУ ВПО КГМУ Росздрава, 2009. - С. 262-263.

9. Морфофункциональные нарушения в печени при острой гепатотронлой интоксикации в условиях воздействия постоянного магнитного поля / В.Т. Дудка, Е.С. Литвинова, А.И. Конопля, А.И. Михайлова // Актуальные вопросы патологической анатомии: материалы III съезда Рос. общ-ва патологоанатомов (26-30 мая 2009). - Самара: ООО «ИПК «Содружество», 2009. - Т. 2. - С. 158-160.

10. Нарушения иммунной реактивности при острой токсической гепа-топатни в условиях длительного воздействия постоянного магнитного поля / В.Т. Дудка, А.И. Конопля, А.И. Михайлова и др. // Аллергология и иммунология. - 2009. - Т. 10, № 2. - С. 287-288.

11. Фармакологическая коррекция нарушений иммунного гомеостаза, возникающих при токсическом поражении печени в условиях воздействия постоянного магнитного поля / Е.С. Литвинова, В.Т. Дудка, А.И. Конопля, А.И. Михайлова // Сб. тр. межвуз. науч. конф. «Актуальные вопр. фармакологии и фармации», посвящ. памяти проф. Владислава Васильевича Пичугина и 75-летию КГМУ (25 дек, 2009 г.). - Курск: ГОУ ВПО КГМУ Росздрава, 2009. - С. 233-235.

12. Фармакологическая коррекция структурных изменений в селезенке при токсическом индометациновом поражении печени и воздействии постоянного магнитного ноля / Е.С. Литвинова, В.Т. Дудка, А.И. Михайлова и др. // Тез. докл. XVI Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство» (Москва, 6-10 аир. 2009 г.) - М., 2009.-С. 160.

13. Фармакологическая коррекция функции гепатоцитов в условиях острой токсической гепатопатии и воздействия постоянным магнитным полем / О.Н. Куз-мицкая, А.И. Михайлова, Е.С. Литвинова и др. // Сб. тр. межвуз. науч. конф. «Актуальные вопр. фармакологии и фармации», посвящ. памяти проф. Владислава Васильевича Пичугина и 75-летию КГМУ (25 дек. 2009 г.). - Курск: ГОУ ВПО КГМУ Росздрава, 2009. - С. 229-230.

14. Эффективность гепона, гипоксена и гептрала в коррекции функции гепатоцитов в условиях острого индометацинового токсического поражения печени и воздействия постоянным магнитным полем / В.Т. Дудка, А.И. Михайлова, H.A. Быстрова, В.П. Гаврилюк // Сб. тр. межвуз. науч. конф. «Актуальные вопр. фармакологии и фармации», посвящ. памяти проф. Владислава Васильевича Пичугина и 75-летию КГМУ (25 дек. 2009 г.). - Курск: ГОУ ВПО КГМУ Росздрава, 2009.-С. 185-186.

15. Иммунная реактивность, функционально-метаболическая активность нейтрофнлов и гепатоцитов при воздействии постоянного магнитного поля в условиях токсического поражения печени / В.Т. Дудка, А.И. Конопля, А.И. Михайлова и др. // Мсждунар. журн. по иммунорсабилитации. - 2010. -Т. 12, № 2. - С. 233.

16. Оксидаитные нарушения и способы их фармакологической коррекции в условиях острого токсического индометацинового поражения печени и воздействия постоянного магнитного поля / А.И. Михайлова, О.Н. Кузмицкая, C.B. Терехова и др. // Материалы IV Междунар. науч. конф. молодых ученых-медиков, 25-26 февр. 2010 г. / Под ред. В.А. Лазаренко. - Курск: ГОУ ВПО КГМУ Росздрава, 2010. - Т. 2. - С. 297-298.

17. Фармакологическая коррекция иммунометаболических нарушений в условиях токсического индометацинового поражения печени и воздействия. постоянного магнитного поля / Е.С. Литвинова, С.В. Терехова, А.И. Михайлова и др. // Меяедунар. жури, по иммунореабилитации. - 2010. - Т. 12, № 2. -С. 233.

18. Фармакологическая коррекция метаболических нарушений при экспериментальной острой токсической лекарственной гепатопатии в условиях воздействия постоянного магнитного поля / А.И. Михайлова, А.И. Конопля, В.Т. Дудка, Н.А. Быстрот» // Систем, анализ и управление в биомед. системах. - 2010. - Т.9, № 4. - С. 933-937.

19. Функциональная активность гепатоцитов и антиоксидантный статус, их фармакологическая коррекция в условиях токсического поражения печени и воздействия постоянного магнитного поля / В.Т. Дудка, А.И. Михайлова, О.Н. Кузмицкая и др. // Курский науч.-практ. вести. «Человек и его здоровье». - 2010. - № 4. - С.5-8.

ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ

АГП - ацилгидроперекиси, усл. ед.

АЛТ - аланинаминотрансфераза, ЕД/ч«л

АОК - антителообразующие клетки, тыс./селезенка

ACT - аспартатаминотрансфераза, ЕД/чм

ГЗТ - гиперчувствительность замедленного типа

ГИО - гуморальный иммунный ответ

ГГТП - гамма-глутамилтранспептидаза

ИАФ — индекс активности фагоцитоза

КАн — коэффициент активации на неопсонизированный зимозан

КАо - коэффициент активации на опсонизированный зимозан

Кат. - каталаза, кат/л

КО - коэффициент опсонизации

МДА - малоновый диальдегид, мкмоль/л

НСТ-сп. - спонтанный тест восстановления нитросинего тетразолия, mOD

НСТ-ст. - стимулированный тест восстановления нитросинего тетразолия

н/з; о/з неопсонизированным или опсонизированным зимозаном, mOD

ОАА - общая антиокислительная активность, %

ПМГТ - постоянное магнитное поле

ПТИ - протромбиновый индекс, %

РК -разница кариоцитов, 106

РМ - разница массы лимфоузлов регионарного и коптрлатерального, мг

СОД - супероксидцисмутаза, усл. ед./мл

CMN0 - стабильные метаболиты оксида азота, мкмоль/л

ССЭ - сорбционная способность эритроцитов, %

СЕГ - сорбционная емкость глиокаликса, 10"12 г/эр.

ТП - тимоловая проба, ЕД

ФИ - фагоцитарный индекс, %

ФЧ - фагоцитарное число

ЩФ - щелочная фосфатаза, ЕД/ч«л

ЭБ -эритроциты барана

Лицензия ЛР № 020862 от 30.04.99 г. Сдано в набор 21.01.2011 г. Подписано в печать 25.01.2011 г. Формат 30х42'/8 Бумага офсетная. Гарнитура Times New Rom. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 147"А". Издательство Курского государственного медицинского университета 305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3.

Число больных с токсическим поражением различных органов ежегодно увеличивается, чему причиной, в основном, является современный образ жизни, характер питания, наркомания, злоупотребление алкоголем, развитие промышленности (Белоконова О.В., Кедровская H.A., 2009; Новиков В.Е. и др., 2009; Хазанов А.И. и др., 2009; Fukushima К. et al., 2008). Особое место занимают лекарственные поражения различных органов, в первую очередь печени, играющей существенную роль в биотрансформации фармакологических средств (Прокопенко Л.Г. и др., 2001; Лазарева Г.А. и др., 2006; Конопля А.И., 2008; Кедровская H.A., 2009). Значение этой патологии возросло в связи с либерализацией доступа населения к медикаментам, появлением в открытой продаже большого количества безрецептурных средств, широким распространением агрессивной рекламы при отсутствии объективной информации о возможном побочном действии (Буеверов А.О., 1999; Конопля H.A., 2001; Хазанов А.И. и др., 2009; Pospisil М., 2001; Yoshisue К., 2001).

Не менее актуальным в настоящее время является изучение патогенного влияния на организм факторов внешней среды, в т.ч. ПМП (Черных A.M., 2005; Глазова A.B., 2006; Дудка В.Т., 2006; Вельский В.В., 2007; Литвинова Е.С., 2007). Постоянное проживание в районах естественных геомагнитных воздействий в сочетании с приемом гепатотоксических ксенобиотиков представляется в настоящее время не таким редким явлением, однако этот вопрос остается недостаточно изученным (Дудка В.Т. и др., 2004; Литвинова Е.С. и др., 2006; Лазарев А.И. и др., 2007; Díaz J.A. et al., 2009). Все это ставит задачу в раскрытии механизмов нарушения воздействия как отдельных факторов внешней среды и токсических агентов, так и их сочетанного влияния и, как следствие, применения при хорошем экспериментальном обосновании, способов фармакологической коррекции выявленных нарушений.

В настоящее время наблюдается повышенный интерес исследователей к изменениям структурно-функциональной организации эритроцитов при различных патологиях. Это обусловлено участием эритроцитов в процессах, связанных с поддержанием гомеостаза на уровне целого организма, кроме того, патогенетической ролью этих клеток в реализации иммунных механизмов, в том числе и при патологии печени (Конопля А.И., 2008; Та1аваг А. АН Н. ег а1., 2009).

Все это обосновывает необходимость комбинированной фармакотерапии при острой лекарственной гепатопатии, развивающейся на фоне воздействия ПМП препаратами с иммуномодулирующими, антиоксидантными и цитопротекторными эффектами. Исходя из этого, представляется актуальной задачей, особенно для регионов с повышенным уровнем напряженности геомагнитного поля, в число которых входит Курская магнитная аномалия, поиск фармакологических средств и способов коррекции нарушений функции паренхиматозных, в первую очередь печени, лимфоидных органов и эритроцитов.

Цель — разработка способов фармакологической коррекции морфо-функциональных нарушений в печени, лимфоидных органах и эритроцитах при индометациновой гепатопатии на фоне воздействия постоянного магнитного поля.

Задачи исследования.

1. Изучить морфофункциональные изменения в печени, тимусе, селезенке и лимфоузлах у крыс с острой индометациновой гепатопатией в условиях воздействия постоянного магнитного поля.

2. Исследовать фармакологическую эффективность применения сочетания препаратов «Лонгидаза», «Кудесан» и «Фосфоглив» для коррекции морфофункциональных нарушений в печени, лимфоидных органах и эритроцитах при острой токсической индометациновой гепатопатии на фоне воздействия постоянного магнитного поля.

3. Оценить фармакологическую эффективность комбинации препаратов «Гепон», «Гипоксен» и «Гептрал» в коррекции морфофункциональных нарушений в печени, тимусе, селезенке, лимфоузлах и эритроцитах при острой индометациновой интоксикации и воздействии постоянного магнитного поля.

4. Установить влияние использованных сочетаний фармакологических препаратов на изменение иммунной реактивности и функциональной активности нейтрофилов периферической крови при острой токсической индометациновой гепатопатии в условиях постоянного магнитного поля.

5. Разработать эффективные способы фармакологической коррекции морфофункциональных нарушений в печени, лимфоидных органах и эритроцитах, развивающихся при острой токсической лекарственной гепатопатии в условиях воздействия постоянного магнитного поля.

Научная новизна. Установлены морфологические и функциональные нарушения в печени, лимфоидных органах, изменения структурно-функциональных свойств эритроцитов при острой токсической индометациновой гепатопатии в- условиях воздействия постоянного магнитного поля. Выявлена взаимосвязь структурных изменений в гепатоцитах с патоморфо-логической картиной, и функцией лимфоидных органов при острой индометациновой интоксикации в условиях воздействия постоянного магнитного поля.

Впервые установлено, что применение комбинаций препаратов «Лон-гидаза»+«Кудесан»+«Фосфоглив» или <<Гепон»+«Гипоксен»+«Гептрал» в условиях острого индометацинового токсического поражения печени и воздействия постоянного магнитного поля нормализует частично или полностью показатели адаптивного и врожденного форм иммунного ответа и структурно-функциональных свойств эритроцитов.

Впервые выявлено, что использование сочетания препаратов

Гепон»+«Гипоксен»+«Гептрал» более эффективно, чем комбинация «Лон-гидаза»+«Кудесан»+«Фосфоглив», корригирует степень выраженности пато-морфологических изменений в печени, лимфоидных органах и иммуномета-болические нарушения* при острой индометациновой гепатопатии и воздействии постоянного магнитного поля.

Практическая значимость. Установлено отрицательное влияние постоянного магнитного поля на течение и исход острой токсической лекар-стЁенной гепатопатии, вызванной введением индометацина.

Экспериментально обоснована возможность фармакологической коррекции морфофункциональных нарушений в печени, иммунной системе и структурно-функциональных свойств эритроцитов при острой индометациновой гепатопатии и воздействии постоянного магнитного поля. Экспериментально доказана возможность применения комбинаций препаратов «Гепон» + «Гипоксен» + «Гептрал», в меньшей степени «Лонгидаза» + «Ку-десан» + «Фосфоглив», в качестве средств, оказывающих выраженный им-муномодулирующий и гепатопротекторный эффекты при сочетанном воздействии гепатотропных токсических агентов и постоянного магнитного поля.

Опытным путем обоснована возможность совместного применения иммуномодуляторов, антиоксидантов и мембранопротекторов для эффективной коррекции нарушений иммунного статуса, морфофункционального состояния гепатоцитов и структурно-функциональных свойств эритроцитов при токсической гепатопатии в условиях воздействия постоянного магнитного поля.

Материалы диссертации вошли в рабочие программы и используются в лекционных курсах и на практических занятиях ряда кафедр Российского, Самарского, Волгоградского и Курского государственных медицинских университетов и Медицинского института Орловского государственного университета.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Нахождение в постоянном магнитном поле животных с острым токсическим индометациновым поражением печени существенно углубляет выраженность изменений иммунной реактивности, функционально-метаболической активности гепатоцитов и нейтрофилов периферической крови, процессов перекисного окисления липидов, структурно-функциональных свойств эритроцитов по сравнению с воздействием данных факторов по отдельности.

2. Острая индометациновая интоксикация сопровождается развитием у животных дистрофических и некротических изменений в ткани печени с нарушением ее гистоархитектоники. В лимфоидных органах развиваются выраженные инволютивные процессы. Воздействие постоянного магнитного поля существенно усугубляет выраженность альтеративных изменений в печени и инволютивных процессов в лимфоидной ткани, значительно* снижая активность восстановительных процессов.

3. Применение комбинаций- препаратов «Лонгидаза»+«Кудесан»+ «Фосфоглив» или «Гепон»+«Гипоксен»+«Гептрал» в условиях индометаци-нового токсического поражения печени и воздействия, постоянного магнитного поля нормализует показатели гуморальной и клеточной форм иммунного ответа, фагоцитоз гранулоцитов и частично корригирует кислородзависи-мую активность нейтрофилов периферической крови.

4. Более эффективной фармакологической схемой коррекции структурных нарушений в печени и лимфоидных органах, функционально-метаболической активности гепатоцитов, процессов перекисного окисления липидов, структурно-функциональных свойств эритроцитов, ферментов ан-тиоксидантного статуса является сочетание «Гепон»+«Гипоксен»+«Гептрал».

Апробация работы. Основные положения диссертации представлены на-научных конференциях Курского государственного медицинского университета: I Международной дистанционной научной конференции «Инновации в медицине» (2008), Межвузовской научной конференции «Актуальные вопросы фармакологии и фармации», посвященной памяти профессора Владислава Васильевича Пичугина и 75-летию КГМУ (2009), IV Международной научной конференции молодых ученых-медиков (2010), XVI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2009), X Международном конгрессе «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии» (Казань, 2009), 3-м съезде Российского общества патологоанатомов (Самара, 2009), совместном заседании кафедр фармакологии, патологической анатомии, гистологии, биохимии Курского государственного медицинского университета (2010).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 19 работ, в том числе в 8 изданиях, рекомендованных ВАК для публикации материалов докторских и кандидатских диссертаций.

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 130 страницах машинописного текста, иллюстрирована 17 таблицами, 10 рисунками и 18 фотографиями, состоит из введения, обзора литературы (2 главы), описания методов исследования, изложения собственных результатов (5 глав), заключения, выводов, практических рекомендаций, библиографического указателя, включающего 113 отечественных и 72 иностранных источника.

выводы

1. Трехкратное с 24-часовым интервалом внутрижелудочное введение животным индометацина в дозе 5 мг/кг массы приводит к развитию цитоли-тического, холестатического и гепатодепрессивного биохимических сидро-мов поражения печени, повышению в сыворотке крови продуктов перекисно-го окисления липидов, активности ферментов антиоксидантной защиты, снижению содержания стабильных метаболитов оксида азота, общей сорбци-онной способности эритроцитов и сорбционной емкости их гликокаликса, подавлению функционально-метаболической активности нейтрофилов, угнетению развития гуморальной и клеточной форм иммунного ответа.

2. Через 17 суток после последнего введения индометацина остаются измененными показатели функциональной активности гепатоцитов, фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови. Нахождение экспериментальных животных с острой индометациновой гепатопатией в постоянном магнитном поле повышает количество нарушенных показателей с 21% до 42,4%.

3. Морфологически острая индометациновая интоксикация сопровождается развитием у животных дистрофических и-некротических изменений в ткани печени с нарушением ее гистоархитектоники, в лимфоидных органах развиваются выраженные инволютивные процессы. Воздействие постоянного магнитного поля существенно усугубляет выраженность альтеративных изменений в печени и инволютивных процессов в лимфоидной ткани, сохраняющихся на протяжении 17 суток после интоксикации.

4. Применение комбинаций препаратов «Лонгидаза» + «Кудесан» + «Фосфоглив» или «Гепон» + «Гипоксен» + «Гептрал» в условиях индомета-цинового токсического поражения печени и воздействия постоянного магнитного поля нормализует показатели гуморальной и клеточной форм иммунного ответа, фагоцитоз гранулоцитов и частично корригирует кислород-зависимую активность нейтрофилов периферической крови.

5. Использование сочетания препаратов «Гепон» + «Гипоксен» + «Гептрал» более эффективно чем комбинация «Лонгидаза» + «Кудесан» + «Фосфоглив» корригирует функционально-метаболическую активность гепатоцитов, концентрацию в сыворотке крови продуктов перекисного окисления ли-пидов и стабильных метаболитов оксида азота, активность антиоксидантных ферментов, общую сорбционную способность эритроцитов и сорбционную емкость их гликокаликса в условиях индометациновой гепатопатии и воздействия постоянного магнитного поля.

6. Комбинация препаратов «Гепон»+«Гипоксен»+«Гептрал» у животных с острой индометациновой интоксикацией в условиях воздействия постоянного магнитного поля предотвращает развитие деструктивных изменений в печени и инволютивных изменений в лимфоидной ткани, обеспечивая практически полное восстановление структурных нарушений в них к 17 суткам эксперимента.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. В регионах естественных магнитных аномалий при назначении лекарственных препаратов, обладающих гепатотоксичностью, учитывать возможное развитие при их применении структурно-функциональных нарушений в печени, лимфоидных органах и эритроцитах.

2. Рекомендовать клиническую апробацию комбинации препаратов «Гепон» + «Гипоксен» + «Гептрал» при токсических поражениях различных органов и воздействии постоянного магнитного поля.

3. Рекомендовать включение в учебный процесс медицинских вузов сведений об отрицательном действии на паренхиматозные органы и лимфо-идную ткань сочетания воздействия гепатотоксических агентов и постоянного магнитного поля и способах фармакологической коррекции данных нарушений.