Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.05) на тему:Особенности течения раневого процесса у крупного рогатого скота при различных состояниях иммунологического статуса

3-1

■ ' /.

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РСФСР

САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи

ЧАПАНОВ

Саид-Хасан Самадисвнч

УДК 619:616—001.4:612.017:636.2

ОСОБЕННОСТИ ТЕЧЕНИЯ РАНЕВОГО ПРОЦЕССА У КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА ПРИ РАЗЛИЧНЫХ СОСТОЯНИЯХ ИММУНОЛОГИЧЕСКОГО СТАТУСА

Специальность: 16.00.05 — Ветеринарная хирургия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

САНКТ-ПЕТЕРБУРГ 1991

Работа выполнена на кафедре общей и частной хирургии Санкт-Петербургского ветеринарного института и в Научно-исследовательской лаборатории биорегуляторов военно-ысдицинской ордена Ленина Краснознаменной академии им. С. М. Кирова.

Научные руководители: доктор ветеринарных наук, профессор Баш-киров Б. А.; доктор медицинских наук, профессор Хавипсон В. X.

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор Елисеев А. Н.; кандидат ветеринарных наук, доцепт Васильев М. Ф.

Ведущая организация: Московская ордена Трудового Красного Знамени ветеринарная академия им. К. И. Скрябина.

па заседании Специализированного совета Д 120.20.01 при Санкт-Петербургском ветеринарном институте (196084, г. Санкт-Петербург, Московский пр., д. 112).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Санкт-Петербургского ветеринарного института.

Защита состоится «

1992 г. в 13

часов

Автореферат разослан

1991 г.

Ученый секретарь Специализированного совета, доцент

Никишина И. В.

' • I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ i

т '^-Актуальность темы. В ускорении темпов развития сельского "хозяйства существенный вклад призвана внести ветеринарная наука и практика, задачи которых заключаются в разработке и внедрении наиболее прогрессивных и эффективных методов профилактики и лечения заболеваний сельскохозяйственных животных.

Ведение животноводства за последние годы на промышленной основе и высокая концентрация поголовья обусловили возрастание доли незаразных заболеваний. По данным К.К.Шакалова, Б.А.Башки-рова, Б.С.Семенова, А.В.Лебедева и др. (1987) в нашей стране более 40% от общего числа незаразных заболеваний сельскохозяйственных животных составляют хирургические болезни. Они причиняют значительный экономический уцерб животноводству снижением продуктивности, увеличением вынужденной выбраковки и падежа животных.

Исследованиями отечественных и зарубежных авторов убедительно показано отрицательное влияние иммунодефицитного состояния организма на течение рЗневого процесса. Установлено, что хирургические травмы (В.Г.Морозов, В.Х.Хавинсон, 1974; В.Н.Александров, 1982; К.Я.Гуревич и соавт., 1984; S. ¡.'Aller etal., 1982), раневая инфекция (В.И.Стручков и соавт., 1978; В.В.Нестеров, 1981; Ю.Ф. Исаков и соавт., 1990; A.Bionii etal., 1984) различные экстремальные условия (Ф..\;аццолени и соавт., 1981) приводят к подавлению иммунной реактивности.

Исходя из вышесказанного, возникает проблема иммунокоррек-ций при хирургической травме. Известные методы и лекарственные средства, используемые в клинической практике (М.Д.Машковский, 1985), не позволяют обеспечить достаточно эффективную коррекцию иммунодефицитных состояний. В связи с этим важное значение'приобретает изучение влияния имыунорегулирующих препаратов, позволя!>-щих целенаправленно и эффективно влиять на различные звенья им- . мунной системы организма (В.Г.Морозов, В.Х.Хавинсон, 1979; В.Я. Арион и соавт., 1981; А.П.Еегулевцева и соавт., 1984; Г.М.Яковлев и соавт., 1990), в том числе сельскохозяйственных животных (С.И.Лютинский, Т.А.Иванова, Э.П.Скрипник, 1988; С.И.Лютинский, Э.П.Скрипник, Т.А.Иванова, 1989; 1990).

Однако состояние иммунной системы у сельскохозяйственных животных при травматических повреждениях не изучалось, не было и

Попыток коррекции иммунодефицита при их лечении.

Цель_иссле£0Бяниз. Изучить функциональную активность иммунной системы крупного рогатого скота на различных стадиях раневого процесса и возможное влияние пептидного биостимулятора - тимогена на заживление кожно-мышечных ран. При этом были поставле-(ш следующие задачи:

1. Изучить влияние внутримышечного введения тимогена на морфологический и биохимический состав крови и факторы неспецифической защиты организма при условно асептических и инфицированных ранах.

2. Исследовать влияние внутримышечного введения тимогена на иммунологическую реактивность при условно асептических и инфицированных ранах.

3. Определить влияние фармакологической иммунокоррекции на заживление кожно-мышечных ран.

Научная новизна. Проведено комплексное исследование влияния внутримышечного введения тимогена на морфобиохимический состав крови и факторы неспецифической залиты организма крупного рогатого скота при хирургической травме.

На основании иммунологических методов исследований крови получены данные о влиянии тимогена на иммунную реактивность при различных течениях раневого процесса.

Получены данные о динамике показателей иммунологической реактивности животных с кожно-мышечными ранами.'

Проведена сравнительная оценка общепринятого способа лечения условно асептических и инфицированных ран и комплексного их лечения с тимогеном.

Показано, что у животных с кожно-мышечными ранами, выполнение первичной хирургической обработки ран целесообразно завершить наложением первичных швов с последующей коррекцией иммуно-модулятороы. При невыполнении этого условия возрастает вероятность нагноения ран. - .

Отмечено, что внутримышечное введение тимогена положительно влияет на процесс заживления кожно-мышечных ран.

Теоретическая и практическая значимость. В результате экспериментальных и клинических исследований установлено стимулирующее влияние внутримышечного введения тимогена на иммунологическую1' реактивность организма крупного рогатого скота при кожно-мышечных ранах.

Полученные результаты позволяют рекомендовать внутримышечное введение тимогена для комплексного лечения животных с асептическими и инфицированными ранами, связанными с пониженной иммунной реактивностью.

Стимулирующее влияние тимогена при его внутримышечном введении способствует сокращению сроков заживления кожно-мышечных ран крупного рогатого скота.

По результатам исследований разработано и внедрено четыре рационализаторских предложения.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на научных конференциях профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов Ленинградского ветеринарного института (Л., 1990, 1991), на межвузовской конференции молодых ученых и специалистов (Фрунзе, 1990). на межвузовской научно-практической конференций "Новые фармакологические средства в ветеринарии" (Л., 1990).

Публикации. По теме диссертации опубликовано четыре научных работы. о'

Внедрение. Результаты исследований внедрены в совхозе "Тосненский" Ленинградской области.

Структура и обЪ';м работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Диссертация содержит 239 страниц машинописного текста, 25 рисунков, 19 таблиц. Список использованной литературы включает 272 источника, в том числе 84 иностранных авторов.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Результаты изучения динамики клеточного и гуморального иммунитета и факторов неспецлфнческой защиты организма крупного рогатого скота при асептических и инфицированных ранах.

2. Данные о влиянии внутримышечного введения тимогена на морфологический и биохимический состав крови, факторы неспецифической защиты, показатели клеточного и гуморального иммунитета организма животных при заживлении асептических кожно-мышечных ран.

3. Данные о влиянии внутримышечного введения тимогена на морфологический и биохимический состав крови, факторы неспецифической защиты и показатели клеточного и гуморального иммунитета организма животных при заживлении инфицированных кожно-мы-

шечных ран.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материал и методика

Работа была выполнена в период 1989-1991 гг. в хирургической клинике кафедры общей и частной хирургии Ленинградского ветеринарного института,(научно-исследовательской лаборатории биорегуляторов Военно-медицинской академии им.С.М.Кирова и на комплексе по выращиванию молодняка крупного рогатого скота совхоза "Тосненский" Ленинградской области.

Материалом для экспериментальных исследований служили 30 телок черно-пестрой породы в возрасте П-12-месяцев, живой массой 270-290 кг. Клиническая апробация проведена на 92 больных телках 5-7 месячного возраста, массой 170-180 кг.

Для моделирования раневого дефекта был изготовлен трафарет, с помощью которого маркировали место иссечения кожно-мышечного лоскута. Раневые дефекты площадью 22 см^ наносили в заостной области лопатки. Операцию проводили после внутримышечного введения рометара в дозе 0,5-0,7 мл.

Экспериментальная часть состояла из трех серий опытов. В первой серии опытов определяли иммунный статус 10 клинически здоровых телок и затем на модели асептической (5 животных) и инфицированной (5 животных) раны изучали особенности изменений иммунной системы при различных течениях раневого процесса. Для моделирования гнойного воспаления в образовавшееся после нанесения ран углубление вводили марлевую салфетку размером 15,0x15,0 см, пропитанную аутогенной взвесью фекалий и подстилочцрго материала с добавлением микробной взвеси золотистого стафилококка из расчета I мл взвеси - 2 млрд.микробных тел. На 5-е сутки эксперимента, после появления признаков гнойного воспаления, марлевые салфетки удаляли. . - • •

Во второй серии опытов на 10 телках (5 контрольных и 5 подопытных) изучали влияние тимогена на иммунный статус и заживление асептических ран. Животных контрольной группы лечили следующим образом: после короткого новокаинового блока раны припудривали бактериостатическим порошком Нитнюка. Раны животных подопытной группы лечили по этой же схеме, но дополнительно вводи-

ли внутримышечно тимоген в дозе 5 мкг/кг живой массы в течение 3 дней после начала лечения, один раз в сутки.

В третьей серии опытов на 10 животных (5 контрольных и 5 подопытных) изучали ишуномодулирующее влияние тимогена на заживление экспериментальных инфицированных ран и состояние иммунной системы. Лечение всех животных проводили по следующей методике: раны промывали 3% раствором перекиси водорода, после под-титровки применяли антибиотик в виде новокаин-антибиотиковой блокады, припудривали порошком Еитнюка. Во второй фазе раневого процесса использовали линимент Вишневского. Кроме того, подопытным животным внутримышечно инъецировали тимоген в дозе 5 мкг/кг массы тела ежедневно в точение 5 дней однократно, после начала лечения.

В течение всего срока заживления ран за животными вели клинические наблюдения, оценивали их общее состояние, наличие и характер отека, гиперемии,, болезненности, развитие грануляций и эпителизации, тип заживления.

Исследования крзви у животных проводили до нанесения ран, а затем на 1-, 3-, 7-, 14-, 21-, 28-ой дни после начала лечения. Кровь брали пункцией яремной вены утром, перед кормлением.

Гематологические показатели (количество эритроцитов, лейкоцитов, лейкограмму) определяли общепринятыми методами (И.П.Конд-рахин и соавт., 1985), содержание гемоглобина - гемоглобинциа-нидным методом.

Содержание общего белка в сыворо*ке крови животных определяли на биохимическом анализаторе "э МА 12/16" ("Тес1ш1соп ", США) в соответствии с инструкцией к прибору; белковые фракции методом электрофореза в агаровом геле по методу В.П.Сурикова в модификации В.В.Пилько (1971).

Для оценки факторов неспецифической защиты организма выявляли активность бета-лизинов (Бухарин О.В., 1972), активность лизоцима (ДорофеЙчук В.Г., 1968), бактерицидную активность (Смирнова О.В. и Кузьмина Т.А., 1966), фагоцитарную активность нейт-рофилов (Кост Е.А. и Стенко М.И., 1968), содержание неферментных катионных белков (Пигаревский В.Е., 1981).

Популяции и субпопуляции Т-лимфоцитов определяли в тестах роэеткообразования с эритроцитами барана (Е-РОК) ( >Топ<1а1 м. е-ъа1, 1972) в модификации А.М»Цымбал й соавт.» 1983; теофийлин-чувствительные и теофиллинрезистектные лимфоциты определяли по

B.shohat , н.Joshua (1982), число "актиишх" лимфоцитов по Shon etal , 1985.

Количественные исследования иммуноглобулинов классов g-i . G2 и Ы проводили методом радиальной иммунодиффузии в геле по G.iJaiichini ct al. (1965) с moho специфическими сыворотками, полученными Ю.К.Пешкусоы и А.Б.Ыоркунасом (1977) в Институте иммунологии All Литвы.

Функциональную активность лимфоцитов в периферической кро-еи выявляли в реакции тормокения миграции лейкоцитов, индуцированную фитогемагглютпнином ("ЗегЪа ", ФРГ) (В.Г.Морозов, В.Х. Хавинсон, 1980).

Для оценки процесса заживления кожно-мышечных ран проводили цитологическое исследование раневых отпечатков (М.П.Покровская и М.С.Макаров, 1942) и ыорфометрию (Л.Н.Попова, 1942). Для гистологических исследований брали биопсию ткани через 3, 14 и 28 суток после нанесения ран, Гистоматериал фиксировали в г.идкости Буэна, уплотнение его проводили пропитыванием в парафине. Срезы окрашивали гематоксишш-эозином, азур-эозиноы и по ^тн-Гизону.

Экономическую эффективность разработанного способа лечения расчитывали согласно "Методике определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий", утвержденной ГУБ МОХ СССР (1982). Результаты опытов приведены в интернациональных единицах и обработаны методом вариационной статистики (Еремин В.П., 1975) с использованием микрокалькулятора "Электроника МК 52".

2.2. Особенности течения раневого процесса асептических и инфицированных кожно-шшечных ран в зависимости от состояния иммунного статуса

2.2.1. Оценка иммунного статуса и факторов Ешспецифической заадоты клинически здоровых телок

Изучение иммунного статуса и факторов неспецифаческой защиты здоровых животных выполнено на 10 телках, разделенных на 2 группы, по 5 голов в каждой. На животных первой группы моделировали асептические раны, второй - инфицированные.

Количество лейкоцитов в крови здоровых животных первой группы составляло 9,1 - 0,60 х Ю9//л, второй - 9,0 ± 0,49 х Ю9/'1 Содержании лимфоцитов в лейкограмме телят первой группы было равным 63,6 - 1,61$, Т—лимфоцитов - 42,4 - 1,25%, "активных" лимфоцитов - 15,5 - 1,10$, соответственно во 2 группе их число составляло 64,5 £ 1,32%, 44,1 £ 1,10%, 19,0 £ 0,83$. Коэффициент дифферэнцировки Т-клеток равнялся в 1-й группе животных 2,7 £ 0,13 ед., индекс миграции лейкоцитов 57,7 £ 2,58$, во 2-й группе 2,6 £ 0,10 ед. и 59,5 £ 3,26$.

Содержание В-л/.мроцитов у телят 1-й группы было равным 19,0 £ 1,43?, #5*10,6 £ 0,55 г/л, #-6л12,3 - 0,31 г/л, Уу М 3,1 - 0,15 г/л, во 2-й группе эти же показатели составляли 19,2 £ 1,22$, 10,1 £ 0,41 г/л, 12,8 £ 0,70 г/л, 3,5 £ 0,34 г/л.

Бактерицидная активность сыворотки крови составляла в 1-й группе 59,5 - 0,50$, Лизоцнмная 7,5 £ 0,20$, В-литическая 10,0 £ 0,44$, во 2-й группе соответственно 57,5 £ 1,05$, 8,2 £ 0,42$, 9,8 £ 0,31$.

Фагоцитарная активность нейтрофилов и содержание катионных белков составляли соответственно у животных 1-й группы 65,5 £ 0,63$ и 1,39 £ 0,52 ед., у телят 2 группы - 66,4 ± 1,23$ и 1,40 £ 0,37 ед.

Как следует из приведенных данных, в показателях клеточного и гуморального иммунитета, факторов неспецифической защиты у животных обоих групп каких-либо существенных различий не установ-1^ лено (Р > 0,05).

2.2.2. Состояние иммунной системы животных

при асептическом течении раневого процесса

Показатели иммунной системы и факторы неспецифической защиты изучали у 5 животных, которым наносили асептические раны. Было установлено, что число лимфоцитов в первые 3 суток снижалось (Р < 0,05), на 7-е же сутки течения раневого процесса их количество было близко к исходным значениям. Содержание Т-лимфоцитов через сутки после травмы снижалось на 25,7$ (Р < 0,05), через 3 суток на 21,5$ (Р<0,05), число "активных" лимфоцитов соответственно на 19,5$ (Р < 0,05) и 11,3$ (Р > 0,05), через 7 суток, эти показатели восстанавливались. Количество теофиллинрезистент-ных клеток (Ет.р.-РОК) также снижалось (£< 0,05) на I и 3-й

сутки опыта, теофиллинчувствительные клетки (Ет.ч. - РОК) подвергались незначительным' колебаниям. Коэффициент дифференцировки Т-лиыфоцитов (Ет.р. - РОК/Ет.ч. - РОК) стабильно снижался (Р<* 0,05) и достигал уровня исходных данных только на 14-е сутки после нанесения.ран. Достоверное угнетение миграции лейкоцитов отмечалось в первую неделю после нанесения травмы.

Показатели гуморального иммунитета имели тенденцию к снижению лишь на I сутки опыта, через 3 суток они оказывались близки к исходным значениям. 1'

Бактерицидная активность сыворотки крови снижалась через сутки на 6,0% (Р < 0,05), через 3 суток на 4,7^ (Р < 0,05) по сравнению с исходными данными.

Лизоциыная активность сыворотки крови снижалась (Р< 0,05) через сутки после нанесения ран, в дальнейшем снижение было незначительным.

В-литическая активность сыворотки крови в перше две недели держалась несколько ниже (Р > 0,05) уровня исходных данных.

Незначительное повышение фагацитарной активности нейтрофи-лов было нестабильным, и к концу опята она находилась в пределах изначальных показателей.

Содержание катионных белков нейтрофилах в первые 3 суток имело тенденцию к снижению (Р 0,05) и полностью восстанавливалось на 7 сутки течения раневого процесса.

Полученные нами данные свидетельствуют о угнетении клеточного иммунитета при хирургической патологии, то есть развивается временный иммунодефицит Т-звена иммунной системы.

Наши исследования подтверждаются материалами, опубликованными В.Х.ХаЕИНсоном (1979), И.И.Дерябиным и соавт. (1981),

{Л- ¿/.(1982), которые установили колебательный характер изменений показателей гуморального иммунитета. По данным этих авторов содержание В-лимфоцитов и иммуноглобулинов всех классов снижается после травмы незначительно и в .течение 10 суток восстанавливается до нормального значения.

Таким образом, при асептическом течении раневого процесса, как показывает анализ-данных, наибольшие изменения происходят в клеточном иммунитете, в гуморальном иммунитете эти изменения менее значительны.

2.2.3. Состояние иммунной системы животных при инфицированных гнойных ранах

Изучение иммунной системы и факторов неспецифической защиты телок при инфицированных ранах были проведены на 5 животных. Нами установлено, что число лимфоцитов снижалось (Р < 0,001) в первую неделю после нанесения ран и восстанавливалось только к 21 суткам. Содержание Т-лимфоцитов в крови у животных было ниже через сутки на 49,II (Р < 0,001), через 3 суток на 36,2$ (Р <

0,001), через 7 суток на 27,5$ (Р < 0,01) по сравнению с исходными данными, на 14 сутки наблюдали нормализацию этого показателя. Количество "активных" лимфоцитов, теофиллинрезистентных и теофиллинчувствительных клеток было достоверно снижено в течение первых 3-х суток. Эти показатели восстанавливались по абсолютным значениям на 7-е сутки опыта. Угнетение функциональной активности лейкоцитов продолжалось до 21 дня.

При оценке гуморального иммунитета отмечена тенденция к снижению (Р < 0,05) иммуноглобулинов классов а2 и М в первые 3 суток, В-лимфоцитов и -Тс^-].

Достоверное снижение бактерицидной и В-литической активности сыворотки крови было выявлено через 3 суток после -начала опыта, через 14 суток эти показатели были близки к начальным данным. Активность лизоцима достигала исходного значения на 7-е сутки опыта. Повышение фагоцитарной активности нейтрофилов носило стабильный характер до конца срока наблюдения. Средний цитохимический коэффициент восстанавливался лишь на 21 сутки течения раневого процесса.

Наши данные о посттравматической иммунной недостаточности у.крупного рогатого скота находят подтверждение в опытах выполненных на людях и лабораторных животных (В.Х.Хавинсон, 1979, 1986; И.И.Колкер и соавт., 1984; Г.М.Яковлев и соавт., 1989). Указанными авторами было показано,-что при травмах преимущественно подавляются клеточные механизмы иммунитета, а показатели В-систеш носят нестабильный характер.

2.3. Влияние тимогена на заживление экспериментальных асептических кожно-мышочных ран у крупного рогатого скота

■ При асептическом течении раневого процесса в первой фазе

заживления наблюдается Т-иммунодефг.цит, проявляющийся в снижении количества лп./фоцитов и функциональной активности лейкоцитов. С целью восстановления деятельности этих клеток и уменьшения тяжести заболевания мы' применяли синтетический пептид тимуса - ти-моген.

Изучение влияния внутримышечной инъекции тимогена на иммунную систому животных к стимуляцию заживления асептических ран было проведено на 10 телках (5 контрольных и 5 подопытных).

2.3.1. Влияние тимогена на состояние иммунной системы

при заживлении экспериментальных асептических ран

В первыо сутки после нанесения кожно-мыиечних ран достоверно снижалось в обеих группах количество Т-лимфоцитов, "активных" лимфоцитов (¿а - РОК), теофиллинрезистентных клеток (Ет.р. -РОК), индекс миграции лейкоцитов. Через 3 суток после начала лечения эти показатели у подопытных животных восстанавливались, в контрольной группе - через 7 суток. На 3 и 7 сутки эксперимента количество Т-лш.:фэцитов, Еа - ГОК, Ет.р. - РОК, Функциональная активность лейкоцитов у телок подопытной группы были достоверно выше в сопоставлении с аналогичными данными контрольных животных.

По нашим данным введение тимогена животным с экспериментальными кожно-мышечными ранами приводит к восстановлению темпа миграции и нормализации процессов дийсренцировки стволовых кло-ток, что -стимулирует созревание полноценных в функциональном плане Т-лимфоцитов. На это же указывают результаты исследований Т.К.Валуевой и соавт. (1977) и Л.М.Черменева (1978), полученные после введения тимозина и экстрактов из тимуса.

Поело иньекции тимогена, через 3 суток после нанесения асептических ран, количество В-ликфоцитов в крови подопытных животных было на 9,0$ выше, чем в контрольной группе. На 14 и 28 сутки опыта эта разница сохрашлась.

Количество иммуноглобулинов классов и о,, через 7 и 14 суток после тимогенотерапии в подопытной группе было выше, чем аналогичные данные у контрольных животных. Содержание гуМ нормализовалось в сыворотке крови подопытных животных через 7 суток после начала лечения, в контрольной группе через 14 суток.

Бактерицидная активность сыворотки крови у подопытных животных на протяжении всего опыта была выше, чем у телок конт-

рольной группы. Достоверное повышение было отмечено через 3 суток после тимогенотерапии на 6,2$ (Р < 0,05), через 7 суток на 5,9$ (Р< 0,05).

Лизоцимнал и в-литнческая активность сыворотки крови, начиная с 3-х суток после инъекции тимогена у подопытных .тавотных была выше, однако достоверное повышение лизоцимной активности было отмечено на 21 сутки опыта на 16,0$ (Р<0,05), а В-литической активности на 14 сутки исследования - на 13,3$ (Р< 0,05).

Фагоцитарная активность иейтрофилов в обоих группах после трап/и имела тенденции к увеличении, причем у подопытных зивот-:шх она была выше через 3 суток на 6,4$ (Р <: 0,05), через 7 суток на 7,6$ (Р < 0,05), через 14, 21 и 28 суток соответственно на 7,6$; 8,2 и 10,0$ (Р < 0,05).

Содержание общего белка в сыворотке крови у подопытных животных в первые семь дней было несколько выше (через 3 суток на 2,6$, через 7 - на 0,9$), чем у контрольных животных.

Изменения, отмеченные в протеинограмме, происходили за счет сдвигов в количестве гамма-глобулинов. Уже через 3 суток после инъекции тимогена уровень гамма-глобулинов у животных опытной группы был больше на 8,9$ (Р< 0,05), через 7 и 14 суток соответственно на 9,0$ (Р < 0,05) и 8,3$ (Р< 0,05) по сравнению с аналогичными показателям контрольных животных.

Гематологические сдвига в основном сводились к изменению показателей белой крови. В лейкограмме отмечено относительное постоянство базофилов, незначительное уменьшение числа эозино- ■ фплов в опытной группе до 5,8$, в контрольной до 5,5$. Количество лимфоцитов в крови у телок опытной группы через 3 суток после тимогенотерапии было на 10,4$ (Р<0,05), через 7 суток на 5,8$ (Р < 0,05), через 14 суток на 4,2$ (Р< 0,05) выше по сравнению с аналогичными данными у контрольных животных.

2.3.2. Влияние тимогена на. заживление асептических кожно-мышечних ран

Исследования клинической картины процесса заживления кожно-мышечных ран показали, что на 3 сутки опыта размеры воспалительного отека у подопытных животных были меньше, чем у контрольных телок, у животных подопытной группы раны быстрее освобождались от девитализированиых тканей. На 7 сутки течения раневого про-

цесса у подопытных животных по кожным краям раневого дефекта формировался внраженный эпителиальный валик. Рост эпителия находится в тесной зависимости от созревания соединительной ткани (Б.М.Костюченок, В.А.Карлов, 1990), поэтому появление эпителия у контрольных животных запаздывало. Фибрино-тканевой струп отторгается у животных подопытной группы на 10-11 сутки эксперимента, в контрольной же группе 2-3 дня спустя.

Известно, что в первые дни после нанесения травмы в ране превалируют явления воспаления и ее площадь при этом не уменьшается (Б.М.Костюченок, В.А.Карлов, 1990), а увеличивается. Результаты наших исследований дают основание считать, что увеличение ранового дефекта является следствием сокращения коллагенивых волокон кожи. На это же указывают Э.Н.Александрова (1970) и A.C. Woihl ot dl. (1982). '

В дальнейшем, начиная с 7 суток, по данным морфометрин скорость заживления ран в подопытной группе была выше, чем в контрольной группе. Так на 7 сутки эксперимента площадь раневой поверхности у толок подопытной группы была меньше на 5,7/5 (Р < 0,05), на 14 сутки - на 13,В% (Р < 0,01), на 21 сутки - на 32,8? (Р < 0,01) по сравнению с площадью у контрольных животных.

При цитологическом исследовании раневых отпечатков было выявлено, что количество там фагоцитирующих нейтрофилов и макрофагов у подопытных животных было больше, чем у контрольных животных. У толок подопытной группы клетки гисткоцитарного происхождения появлялись раньше, чем на раневой поверхности животных контрольной группы.

Гистологическое исследование биоптатов ран подопытных животных через две недели после нанесения механической травмы выявило молодую грануляционную ткань, состоящую из зрелых фибро-бластов, активную эт.телизацию, которая завершалась на 28 сутки опыта, в контрольной группе на 32-33 сутки.

Таким образом, применение тимогена при лечении кожно-ыытеч-ных ран позволило сократить продолжительность и интенсивность воспалительной фазы раневого процесса, интенсифицировать прояи-феративную фазу и ускорить наступление и течение стадии рубцевания, предотвратить осложнения в ранах, в ранние сроки восстановить иммунологическую реактивность организма, которая определила в значительной степени исход и течение раневого процесса.

2.4. Влияние тимогена на иммунный статус животных при заживлении инфицированных кожно-мышечных ран

Исследование иммунной системы показало, что тимогенотерапия восстанавливает основные показатели клеточного иммунитета черва 3-7 суток, за исключением индекса миграции лейкоцитов, который приходил к исходному уровню только спустя 14 суток после начала • лечения. В контрольной группе нормализация показателей Т-звена иммунитета отмечена в более поздние сроки, в частности коэффициента дифференцировки т-клеток через 21 день, Ет.ч. - РОК через 14 дней, содержание "нулевых" лимфоцитов и индекса миграции лейкоцитов через 28 суток.

Количество лимфоцитов в крови у телок подопытной группы после внутримышечной иньекции тимогена было через 3 суток на 14,через 7 суток на 10,9%, через 14 суток 10,6$, через 21 сутки на Ъ,А% и через 28 суток на 5,0!? больше, чем у животных контрольной группы.

При оценке гуморального звена иммунного ответа было отмечено увеличение пула циркулирующих В-лимфоцитов в крови подопытных животных через 3 суток на 0,2 х 10®/л, через 14 суток на 0,1 х х 10®/л по сравнению с данными контрольных животных, содержание ^^ восстанавливалось у подопытных животных через 7 Дйей, в контрольной группе лишь на 28 сутки исследования.

Бактерицидная активность сыворотки крови после тимогенотера-пии у телок опытной группы была больше на II, &% через 3 суток, на 8,8% через 7 суток, на 6,4$ через 14 суток .и на 21 сутки на 6,7$, чем в контрольной группе.

Лизоцимная активность сыворотки крови в подопытной группе была достоверно выше на 3 и 21 сутки опыта по сравнению с аналогичными значениями контрольных животных.

Фагоцитарная активность нейтрофилов кшс в подопытной, так и в контрольной группе после начала лечения имела тенденцию к повышению, при этом фагоцитарная активность нейтрофилов крови у подопытных животных была выше чем у телок контрольной группы.

Средний цитохимический коэффициент в подопытной группе на протяжении всего периода наблюдения был выше, чем в контрольной группе.

Альфа-глобулины в сыворотке крови у подопытных животных после тимогенотерапии находились относительно на более высоком уровне в течение всего опыта, чем количество их у животных конт-

рольной группы. Количество гамма-глобулинов в сыворотке крови подопытных животных было достоверно выше на 3 и 7 сутки эксперимента по сравнению с данными контрольной круппы.

2.4.1. Влияние тимогена на заживление

инфицированных кожно-мышечных ран

Анализ наблюдений за клинической картиной заживления ран показал, что в первые трое суток особенностей в течении раневого процесса между группами не обнаружено. Начиная с 4 суток цитологические исследования отпечатков с раневой поверхности выявили, что гроцент фагоцитирующих нейтрофилов и макрофагов у животных подопытной группы был больше, чем в контрольной группе. В более ранние сроки появлялись полибласты и фибробласты.

Согласно данным морфометрии площады раневой поверхности у подопытных животных была меньше, чем у контрольных через 7 суток на 5,5?, через 14 суток на 13,через 21 сутки на 33,7%.

Через 14 суток после нанесения травмы раны животных опытной группы полностью заполнялись грануляционной тканью и с поверхности покрывались тонкой фибриновой пленкой. По граю раневого дефекта формировался эпителиальный ободок.

Через 28 суток раневая поверхность у подопытных животных полиостью эпителизовалась, у контрольных^ телок процесс эпители-вации заканчивался спустя 32-33 суток с момента нанесения травмы.

Таким образом, анализ проведенных гистоморфологических исследований выявил, что включение тимогена в комплексное лечение оказывает выраженный терапевтический э^ект.

Клиническая апробация применения тимогена в комплексном лечении спонтанных ран выполнена на 93 больных телках с различными диагнозами: раны, флегмоны, абсцессы.

Экономическая эффективность примененного способа лечения ран составила на I рубль затрат 7.17 рубля.

выводи

^ I. У крупного рогатого скота кожно-мышечная травма сопровождается снижением активности Т-снстемы иммунитета. При асептическом течении раневого процесса в первые трое суток снижается количество Т-лимфоцитов на 22,5$ и Т-активних клеток на 11,3$, число Т-хелперов на 22,1%, Т-супрессоров на 14,7л, индекс Т-лимфоцитов понижается на 14,8 ед., увеличивается миграция лейкоцитов на 47/2,

повышается содержание "нулевых" лиы|оцитов на 27,2$.

. 2. У животных с инфицированными ранами показатели клеточного иммунитета в течение 7 суток после нанесения ран держатся ьи-же исходных значений: количество Т-лимфоцитов снижается на 17,5$, Т-хелперов на 16,6$. Т-супрессоров на 17,7$, увеличивается процент миграции лейкоцитов через 7 суток на 89$, через 14 суток на 38$, повышается содержание "нулевых" клеток на 16$.

3. Внутримышечные иньекции тимогена животным, имещим кож-но-мышечные ранения, активирует иммунную систему больных, применение препарата способствует повышению числа Т-лимфоцитов через 3 суток на 24$, через 7 суток на 11,5$, через 14 суток на 8,1$, через 21 сутки на 5,6%, через 28 суток на 4,7$, числа Т-хелперов соответственно на: 25,6$, II,9,5$, 10,8$, 12,6 по сравнению с контрольной группой. Индекс миграции лейкоцитов восстанавливается в подопытной группе на 7 сутки, а в контрольной на 21 сутки течения раневого процесса.

4. После тимогенотерапии у животных с асептическими ранами стимулируются неспецкфические факторы защиты: бактерицидная активность сыворотки крови увеличивается через 3 суток на 6,6$, через 7 суток на 6,3$, через 14 суток на 5,5$, через 21 сутки на 5,9$, через 28 суток на 7,3$, фагоцитарная активность нейтрофи-лов соответственно на: 7,1$, 8,2$, 8,4$, 8,9$, 11,2$ по сравнению с данными животных контрольной группы.

5. У животных с инфицированными ранами внутримышечное введение тимогена способствует повышению общего числа Т-лимфоцитов через 3 суток на 11,5$, через 7 суток на 33,0$, через 14 суток на 20,9$, через 21 сутки на 19,1$, через 28 суток на 6,9$, Т-хелперы соответственно на: 14,0$, 21,8$, 13,6$, 15,7$, 12,1$ по сравнению с аналогичными показателя;,га животных контрольной группы.

6. После тимогенотерапии у животных с инфицированными ранами бактерицидная активность сыворотки крови увеличивается спустя 3 суток на 13,6$, через 7 суток на 9,8%, через 14 суток на 6,7$, через 21 сутки на 7,1$, через 28 суток на 5,6$, фагоцитарная активность нейтрофилов соответственно на: 5,5$, 7,6$, 8,1$, 9,4$, 6,4$ по сравнению с данными животных контрольной группы.

7. Количество общего белка в его фракций, за исключением гамма-глобулинов, в сыворотке крови после введения тимогена существенно не изменяется.

8. Применение тимогена в дозе 5 мкг/кг массы тела способст-

вует сокращению сроков заживления ран на 4-5 суток по сравнению с периодом заживления ран у животных контрольной группы.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРВД0ЕЕШ51

1. Для сокращения сроков заживления асептических ран у крупного рогатого скота рекомендуется в комплексном лечении использовать тимоген в дозе 5 мкг/кг массы тела ежедневно однократно в течение 3 дней.

2. С целью сокращения сроков заживления инфицированных ран

у крупного рогатого скота в комплексном лечении следует применять тимоген в дозе 5 мкг/кг массы тела ежедневно однократно в течение 5 дней.

Список работ, опубликованных пр теме диссертации:

1. Папанов С.С. Клинико-гематологические изменения у телок при лечении кожно-мышечных ран тимогеном // хирургические болезни с/х животных. Сб.научи.тр. Лен.вет.ин-та: в.105, Л., 1990.-

С.166-169.

2. Папанов С.С. Влияние тимогена на некоторые показатели неспецифической защиты организма при заживлении экспериментальных кожно-мышечных ран у телок // Тез.докл.межвуз.науч.-практ. конф.- Фрунзе, 1990. пасть 2.- С.15-16. ,

3. Папанов С.С. Применение тимогена при лечении инфицированных ран у крупного рогатого скота // Тез.докл. к 2-й межвуз.науч. -практ.конф.- Л., 1990.- С.29.

4. Папанов С.С. Иммунокорригирупцее влияние тимогена при экспериментальных гнойных ранах у крупного рогатого скота // Тез. докл.науч.конф. ЛЕИ.- Л., 1991,- С.91-92.

PHl.Tta.BirP. 3rc.i33S.Txp.irO. 13.'Л. бесплатно.