Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Особенности ферментного спектра крови и молока у коров в зависимости от реакции на туберкулиновые пробы

На правах рукописи

Платонова Юлия Владимировна

□□3054841

Особенности ферментного спектра крови и молока у коров в зависимости от реакции на туберкулиновые пробы

16.00.02 - Патология, онкология и морфология животных

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Саратов - 2007

003054841

Работа выполнена на кафедре биотехнологии, органической и биологической химии ФГОУ ВГТО «Саратовский государственный аграрный университет им Н И Вавилова»

Научный руководитель'

Официальные оппоненты

доктор медицинских наук, профессор Блинов Валерий Анатольевич

доктора ветеринарных наук, профессор Дёмкин Григорий Прокофьевич

кандидат биологических наук, Додонов Михаил Михайлович

Ведущая организация. ФГОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет им К Д Глинки»

Защита состоится «-5"» алуугл—У. 2007 г в _3._часов на заседании диссертационного совета Д 220.061.01 в ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ» по адресу 410012, г. Саратов, ул Театральная пл 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ им Н И. Вавилова» по адресу 410005, г. Саратов, ул Соколовая, 335.

Отзывы направлять по адресу. 410012, г Саратов, Театральная площадь, 1, ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ», диссовет Д 220 061 01

Автореферат разослан «¿6» г и размещен на сайте www. ssau mt

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. Значительный экономический урон животноводству наносит массовый убой крупного рогатого скота, позитивно реагирующего на туберкулиновые реакции Результатом этого является недополучение приплода, снижение продуктивности, увеличение затрат, связанных с проведением комплекса профилактических, диагностических и оздоровительных мероприятий, а также необходимость выбраковки мяса при убое больного скота (А Н Шаров, 2000, А X. Найманов и др, 2004, Ю А Кассич и др , 2004; К Т Шенжа-нов, 2004, T.J Ryan, 2000, J М Polloc, 2000; Н Kohler, 2000, W.I Morrison, 2000) Несмотря на очевидную актуальность, многие стороны этой проблемы (диагностика, клиника, их взаимосвязь с нарушениями метаболизма и продуктивностью и т д.) крупного рогатого скота с различной реакцией на туберкулиновые пробы до сих пор исследованы недостаточно Между тем, реакция на туберкулин и ее модификации имеют фундаментальную значимость для оценки распространенности туберкулеза среди крупного рогатого скота (ММ Додонов, 2003, С Pearson et al, 1977, К Kwiatek, 1988, R. Miciora et al., 1991) Исходя именно из этих диагностических аллергических проб в настоящее время верифицируется диагноз заболевания (И.И Румачик, 1990, В.Ф Мартынов и соавт, 1991, А И Кузин, 1992, А Н Шаров и со-авт , 2000, Ю.А Кассич и соавт., 2004, D L.Whipple et al, 2001)

Особое место в понимании патогенеза болезни, как известно, принадлежит обмену веществ Однако сведения о сдвигах метаболизма в организме животных, положительно реагирующих на туберкулиновые пробы немногочисленны, нередко противоречивы и не дифференцированы в зависимости от их вида. Весьма недостаточно сведений о механизмах образования и качественном составе молока таких коров Так, например, практически отсутствуют данные, об изменении активности ферментов в молоке у животных, реагирующих на KAM (-), на туберкулин (+) или на туберкулин и KAM (=) Кроме того, в литературе даже не обсуждается вопрос об индуцибельности и корреляционных взаимосвязях ферментов крови и молока у животных, в зависимости от их реакции на туберкулиновые пробы

Разработка указанных вопросов может наметить пути нивелирования метаболических расстройств, понять тонкие механизмы образования составных частей молока и осуществлять коррекцию его качественного состава, раскрыть новые стороны влияния аллергических реакций замедленного типа на организм жвачных Более того, комплексная оценка сдвигов обмена веществ, особенно ферментного спектра крови и молока, позволит разработать дополнительные критерии, характеризующие специфичность процесса, что особенно важно для высокопродуктивных коров Исходя из этих представлений, актуальность темы расценивается как современная и перспективная

Цель и задачи исследования. Цель работы состояла в том, чтобы установить особенности спектра ферментов крови и молока коров с разной реакцией на туберкулиновые пробы и выявить у них отличия индукции ферментов на экзогенные стимулы

Для реализации этой цели были поставлены следующие задачи

1 Изучить клиническую картину и активность некоторых ферментов крови коров черно-пестрой породы в зависимости от реакции на туберкулиновые пробы

2 Установить особенности субстратной и гормональной индукции ферментов крови коров с разной реакцией на туберкулиновые пробы

3 У коров, в зависимости от реакции на туберкулиновые пробы, изучить качественный состав молока, в т ч спектр ферментов, а также степень их индукции под влиянием экзогенных стимулов

4 Изучить корреляционные взаимосвязи между ферментами крови и молока у коров с различной реакцией на туберкулиновые пробы

Объект исследования. Крупный рогатый скот с разной реакцией на туберкулиновые

пробы

Предмет исследования. Активность ферментов крови и молока у коров, по-разному реагирующих на туберкулиновые пробы

Научная новизна. Впервые установлены различия в активности некоторых ферментов крови и молока у коров в зависимости от реакции на туберкулиновые пробы. У животных, реагирующих на KAM (-) ферментный спектр крови и молока, его физико-химические свойства практически не отличаются от здоровых животных. Напротив, у коров, реагирующих на туберкулин (+) и на туберкулин и KAM (=), в крови и молоке развивается дисбаланс ферментов, относящихся к разным классам

Впервые изучены корреляционные взаимосвязи одноименных и разноименных ферментов крови и молока. Показано, что у коров, реагирующих на туберкулин (+) и на туберкулин и KAM (=) вклад ферментов крови в аналогичные показатели молока оказывается более значительным, чем у здоровых и коров, реагирующих на KAM (-) У коров подопытных групп корреляционные связи между разноименными ферментами крови и молока изменяются в зависимости от реакции организма на туберкулиновые пробы, свидетельствуя о своеобразии у них механизмов молокообразования

Разработана схема и определены дозы субстратов и гормона для индукции ферментов крови и молока у крупного рогатого скота Впервые показано, что у коров с позитивной реакцией на туберкулиновые пробы понижена резистентность некоторых ферментов крови и молока к индуцирующему действию экзот енных стимулов

Теоретическая и практическая значимость работы. На основании изучения ферментного спектра крови и молока коров, их корреляционных взаимосвязей и отчетливых особенностей индукции ферментов, раскрыты ранее неизвестные стороны изменения метаболизма в организме коров в зависимости от их реакции на туберкулиновые пробы Эти результаты имеют значение для более глубокого понимания патогенеза болезни и могут использоваться для верификации диагноза

Полученные данные следует использовать в практической деятельности в качестве дополнительных тестов при углубленной диагностике туберкулеза жвачных, что необходимо для обоснованной выбраковки больных животных, особенно среди коров с высокой продуктивностью

Апробация и реализация результатов исследования. Результаты научных исследований доложены, обсуждены и одобрены на Всероссийских научно-практических конференциях, посвященных 117-й - 119-й годовщинам со дня рождения Н.И Вавилова (г Саратов, 24-26 ноября 2004 г., 23-25 ноября 2005 г , 4-8 декабря 2006г), на научно-практических конференциях профессорско-преподавательского состава и аспирантов по итогам научно-исследовательской и учебно-методической работы (г Саратов, 4-8 февраля 2005; 4-8 февраля 2006), на Международной научно-практической конференции «Современные технологические и селекционные аспекты развития животноводства России в рамках межведомственной координационной программы» (г. Дубровици, 18-21 октября, 2005г), на VI Всероссийской научно-практической конференции «Ветеринарная медицина Современные проблемы и перспективы развития» (г Саратов, 200бг), на Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы развития АПК» (г. Саратов, сентябрь 2006г), на Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной патологии, физиологии, биотехнологии, селекции животных» (г Саратов, 2007г).

Публикация результатов исследования. Основные положения диссертации опубликованы в 13 работах Одна работа опубликована в издании рекомендованном ВАК

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 141 страницах и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, трех глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и списка литературы, включающего 291 источник литературы, в том числе 56 зарубежных Работа иллюстрирована 25 таблицами и 20 рисунками

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1 Особенности ферментного спектра крови коров с разной реакцией на туберкулиновые пробы

2 Субстратная и гормональная индукция ферментов крови коров, по-разному реагирующих на туберкулиновые пробы

3 Особенности качественного состава, спектра ферментов молока и их индукции у коров, реагирующих на туберкулиновые пробы

4 Характерные корреляционные взаимосвязи между ферментами крови и молока у коров с различной реакцией на туберкулиновые пробы

2 МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена в 2003-2005 гг на базе СХПК «Штурм» Новобурасского района, СХП «Садомское» Базарнокарабулакского района Саратовской области и в научной лаборатории кафедры биотехнологии, органической и биологической химии ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ».

При постановке диагноза учитывали результаты эпизоотологическнх исследований, данные патологоанатомического вскрытия, а дифференциацию специфических реакций проводили симультанной пробой с комплексным аллергеном из атипичных микобактерий (KAM) В опытах находились 82 коровы черно-нестрой породы, которые были разделены следующим образом 1 группа - контрольная (22 коровы), они не реагировали как на туберкулин, так и на KAM, 2 группа - животные реагировали в большей степепи на KAM (-), чем на туберкулин (17 коров), 3 группа - животные с ярко выраженной реакцией на туберкулин (+) (24 коровы), 4 группа - животные, которые имели ярко выраженную реакцию на туберкулин и на KAM (=) (19 коров) В процессе исследования было выполнено несколько разных серий экспериментов и каждая опытная группа для сравнения имела контрольную, т е группу аналогов

В крови и молоке коров определяли активность следующих ферментов' аспартатами-нотрансферазы (ACT) и аланинаминотрансферазы (АЛТ) динитрофенилгидразиновым методом Рейтмана-Френкеля, с помощью наборов фирмы «Lachema» (S Rietraan. 1957), лактатде-гидрогеназы (ЛДГ) - реактивами набора «Lachema» (Н S Spiegel, 1972), щелочной фосфата-зы - (ЩФ) набором фирмы Vital Diagnostics, унифицированным методом по «конечной точке» (В С Камышников, 2000), каталазы - по методу Баха и Зубковой (О.Д. Кушманова и др , 1983), пероксидазы - методом, основанном на способности фермента катализировать окисление бензидина перекисью водорода в n-хинондиимид (В С Камышников, 2000) В молоке, кроме указанных ферментов, определяли содержание общего белка, казеина, лактозы, сухою остатка, золы, а также измеряли его плотность и титруемую кислотность (Г.С Инихов, 1956, В А Блинов, 1995).

При проведении опытов были обнаружены существенные различия в активности ферментов крови и молока у коров, неодинаково реагирующих на туберкулиновые пробы Это позволило предположить о различной степени индукции ферментов у коров контрольной и опытных групп Подобных исследований у крупного рогатого скота, по-разному реагирующих на туберкулиновые пробы, ранее не проводилось Исходя из этого нами, сначала на 15 кроликах была разработана технология индукции ферментов и подобраны экзогенные стимулы, способные изменять активность исследованных энзимов Такими субстратными и гормональными индукторами оказались фосфатный буфер (Диахим*- Буфер-Г), молочная кислота (40%, ОКП 26 3451 0331, Вектон), глицерин (чда, Германия, Лаверна) и гидрокортизон-ацетат (Гедеон-Рихтер, Венгрия)

После получения этих данных, эксперименты были проведены на крупном рогатом скоте Фосфатный буфер рН 6,8-7,2, вводили коровам внутрь в дозе 2,5 мл на 1 кг живой массы Молочную кислоту задавали per os из расчета 0,6 мл на кг, предварительно разбавив ее водой в соотношении 1.3 Глицерин также вводили per os из расчета 2 г на 1 кг живой массы коров Гидрокортизон-ацетат инъецировали в предлопаточную область внутримышечно, из расчета 2,2 мг/кг. Указанные индукторы активности ферментов вводили животным натощак Забор крови проводили из яремной вены до дачи препаратов, а затем через 3, 6 и 24 часа после их приема Следует подчеркнуть, что при этих воздействиях активность ферментов крови, а также молока через сутки не отличалась от тощаковых значений

Статистическую обработку полученных данных осуществляли на персональном компьютере Pentium IV с помощью стандартного пакета статистических программ Microsoft Excel Достоверность различий определяли методом вариационной статистики с использованием критерия Стьюдента. Различия считали достоверными при Р<0,05

3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1 Активность ферментов крови у коров с разной реакцией на туберкулиновые пробы

Установлено (таблица 1), что активность всех исследованных нами ферментов крови у контрольных животных и коров, реагирующих на КАМ (-), была практически одинаковой. У коров, же реагирующих на туберкулин (+) или на туберкулин и КАМ (=) активность АСТ, ДЦГ, ЩФ оказалась выше, чем в контроле на 10,0 - 23,2% (Р<0,02) В то же время активность каталазы и нероксидазы в крови больных животных имела иную направленность, она не повышалась, а понижалась, соответственно на 11,8 - 13,3% и на 32,6 - 34,1% (Р<0,02)

Следовательно, в крови у коров, позитивно реагирующих на туберкулиновые пробы, развивается явный дисбаланс ферментов, относящихся к разным классам Полученные дан-

ные позволяют считать, что изменение активности ферментов следует использовать в качестве дополнительного диагностического теста у коров, по-разному реагирующих на туберкулиновые пробы Они предполагают также применение соответствующих, патогенетически обоснованных корригирующих мероприятий

Таблица I - Активность ферментов крови у обследованных коров

N. Группы \ животных Показатели N. Контроль Реагирующие на КАМ(-) Реагирующие на туберкулин(+) Реагирующие на туберкулин и KAM (=)

1 2 3 4

АС Г. мккат/л 0,168±0,006 0,168 ±0,010 0,196±0,005 0,196±0,008

АЛТ, мккат/л 0,160-Ь0,009 0,145±0,010 0,177±0,008 0,176±0,010

ЛДГ, мккат/л 3,23±0,05 3,24±0,08 3,66±0,05 3,6710,04

ЩФ, нмоль/(с-л) 436,4±24,0 467,0±18,0 537,5±18,0 536,1±13,0

Каталаза, (ката-лазное число) 15,50±0,07 15,38±0,18 13,68±0,26 13,43±0,36

Пероксидаза (% активности) 51,6±1,4 50,4±1,7 34,8±2,8 34,0±3,8

3.2 Особенности индукции ферментов крови

Установлено, что после введения коровам per os фосфатного буфера в крови у них лишь незначительно и статистически не достоверно изменялась активность ACT, АЛТ, ЛДГ, каталазы и пероксидазы Иная картина оказалась характерной для щелочной фосфатазы Активность этого фермента статистически достоверно повышалась через 3 часа после введения фосфатного буфера только у контрольных коров и коров, реагирующих на KAM (-), соответственно на 33,3 и 27,8% (Р<0,05) У коров, реагирующих на туберкулин (+) и на туберкулин и KAM (=) полностью отсутствовала индукция щелочной фосфатазы в ответ на введение фосфатного буфера Оказалось (рисунок 1), что общий подъем активности ЩФ в контрольной группе коров составил 22,9%, тогда как у животных 2 и 4 групп он был равен соответственно 19,3 и 2,3% Что касается животных 3 группы, то у них общая активность этого фермента было даже пониженной, на 3,4% Иными словами, у больных коров развивается отчетливо выраженная резистентность щелочной фосфатазы в ответ на действие специфического индуктора

Далее, в качестве субстратного индуктора была использована молочная кислота После ее введения не наблюдалось достоверных изменений активности ACT, ЩФ, каталазы и пероксидазы у животных всех групп Под действием лактата у коров контрольной группы и коров, реагирующих на KAM (-), статистически достоверно повысилась только активность

ЛДГ через 3 часа на 18,8-20,3% (Р<0,05), а через 6 часов - на 30,6-26,3% (Р<0,01) У коров же 3 и 4 подопытных групп активность ЛДГ под влиянием лактата не изменялась Расчетные данные показали (рисунок 1), что общий подъем активности ЛДГ в контрольной группе коров составил 18%, тогда как у животных 2 и 3 групп он был равен соответственно 15,9 и 2,1% Что касается животных 4 группы, то у них общая активность этого фермента оказалась сниженной - на 1%

В то же время у животных, реагирующих на туберкулин (+), на туберкулин и KAM (=), под действием лактата произошла индукция АЛТ Так, у коров, реагирующих на туберкулин (+) активность этого фермента через 6 часов после введения молочной кислоты увеличилась на 24,6% (Р<0,02), у реагирующих на туберкулин и KAM (=) через 3 часа - на 15,9% (Р<0,05), а через 6 часов - на 29,8% (Р<0,02) Итак, у больных животных на введение молочной кислоты увеличивается активность не лактатдегидрогеназы, а индуцируется активность аланинаминотрансферазы

Под влиянием нагрузки глицерином, статистически значимо изменялась активность лишь ACT и АЛТ. Причем эти сдвиги были весьма своеобразными У контрольных коров и коров, реагирующих на KAM (-) активность трансаминаз увеличилась, по сравнению с тоща-ковыми показателями, через 3 и 6 часов А у коров, реагирующих на туберкулин (+) и на туберкулин и KAM (=), лишь через 6 часов и в гораздо меньшей степени При анализе общего подъема активности ACT оказалось (рисунок 1), что в контрольной группе коров и у животных 2-й группы он составил 31,5% и 53,2% В то же время у животных 3 и 4 групп подъем активности ACT под влиянием глицерина был равен соответственно 16,5 и 10,9% Следовательно, животные с явной положительной реакцией на туберкулиновые пробы весьма неадекватно реагировали повышением активности ACT и АЛТ в ответ на введение глицерина

Гидрокортизон у коров контрольной и подопытных групп более широко изменял спектр ферментов крови У контрольных коров и коров, реагирующих на KAM (-) наблюдалось увеличение активности ACT и АЛТ через 3 и 6 часов после его введения У животных, реагирующих на туберкулин (+) и туберкулин и KAM (=), активность ACT и АЛ'Г под влиянием гормона повышалась лишь к 6-му часу, причем в гораздо меньшей степени Иными словами, для животных 3 и 4 групп была характерна запоздалая реакция в ответ на гормональный стимул Общий подъем активности АЛТ (рисунок 1) составил у контрольных коров и коров, реагирующих на KAM (-) 22,9 и 24,8%, а у реагирующих на туберкулин (+) и туберкулин и KAM (=) - 13 и 11,6% Введение гидрокортизона способствовало статистически достоверному возрастанию активности ЛДГ через 3 и 6 часов только у коров первых двух групп У коров, же положительно реагирующих на туберкулиновые пробы, напротив, активность этого фермента снижалась на 6,3-8%

Таким обр а ¡ом, впервые показано, что у коров, положительно реагирующих, на туберкулиновые пробы а) понижена чувствительность ряда ферментов к индуцирующему действию внешних стимулов, б) развивается дисбаланс в ферментном спектре крови, в) в ответ на специфический индуктор может повышаться активность ряда других ферментов

55 -

45 -

35 -

25 ■

8 15-1

I

>о _

О 5

-5

II

III

IV

□ к

Е =

Рисунок 1 - Изменение в крови коров общей активности ЩФ (I) под влиянием фосфатного буфера, ЛДГ (И) - лактата, ACT (Ш) - глицерина и AJIT(IV) - гидрокортизона

3.3 Сдвиги качественного состава молока

При анализе физико-химических показателей молока было установлено, чго они у контрольных коров и коров, реагирующих на KAM (-), оказались практически одинаковыми В то же время у коров, реагирующих на туберкулин (+) и реагирующих на туберкулин и KAM (=), нами отмечено снижение плотности молока, титруемой кислотности, на 14%-17% (Р<0,01), сухих веществ, на 8,0-10,3% (Р<0,02) В молоке у этих коров, содержание белка и казеина было ниже на 4,0-8,6% (Р<0,02), а уровня лактозы - на 2,3-3,0% (Р<0,02)

Своеобразные изменения были присущи и ферментам молока (таблица 2). Так, в молоке у коров, реагирующих на туберкулин (+) и на туберкулин и KAM (=) статистически достоверно по сравнению с контролем была повышена активность ACT, AJIT и ЛДГ В то же время у них активность щелочной фосфатазы и пероксидазы в молоке была на 24,3-48,8% (Р<0,02) ниже, чем в норме

Таблица 2 - Активность ферментов молока у обследованных коров

Группы животных Показатели Контроль Реагирующие на КАМ(-) Реагирующие на туберкулин(+) Реагирующие на туберкулин и КАМ (=)

1 2 3 4

ACT, мккат/л 0,030±0,003 0,028±0,006 0,042*0,003 0,04210,004

АЛТ, мккат/л 0,027±0,003 0,025*0,003 0,032±0,002 0,034±0,001

ЛДГ, мккат/л 0,49±0,02 0,49*0,03 0,63±0,03 0,67*0,05

ЩФ, нмоль/(с*л) 152,9±9,0 150,1±12,0 115,8*5,1 111,2*8,4

Каталаза, (ката-лазное число) 0,48±0,04 0,48±0,07 0,52*0,05 0,53*0,08

Пероксидаза (% активности) 45,9±2,8 45,5±1,2 27,3*2,7 23,5*4,4

Таким образом, впервые нами установлено, что у коров 3 и 4 групп активность ACT, АЛТ и ЛДГ оказалась статистически достоверно выше, как в крови, так и в молоке, по сравнению с контрольными животными Причем, активность этих ферментов в молоке повышалась значительнее, чем в крови Это с большой долей вероятности указывает на повышенный синтез ACT, АЛТ и ЛДГ в молочной железе коров, явно реагирующих на туберкулиновые пробы

Отчетливо выраженный дисбаланс установлен нами и в отношении других ферментов Так, активность пероксидазы у больных коров оказалась в одинаковой степени пониженной как в крови, так и в молоке Это может свидетельствовать о беспрепятственном переходе фермента из крови в молоко. Вместе с тем, активность щелочной фосфатазы увеличивалась в крови коров 3 и 4-й групп, но была снижена в молоке этих животных Иными словами, транспорт щелочной фосфатазы в молоко больных коров был затруднен Что касается каталазы, то ее активность в крови коров с подозрением на туберкулез значительно снижалась, оставаясь, однако, неизменной в молоке у этих животных, по-видимому, за счет адекватного синтеза в самой молочной железе

3.4 Влияние индукторов на активность ферментов молока

Было установлено, что фосфатный буфер, введенный коровам per os, практически не изменял в молоке у них активность исследованных нами ферментов, даже щелочной фосфа-тазы В то же время под влиянием лактата в молоке коров контрольной группы и коров, реагирующих на KAM (-) через 6 часов активность лактатдегидрогеназы увеличивалась соответственно на 52,2% (Р<0,02) и 45,8% (Р<0,05) Однако, она совершенно не изменялась в молоке коров, реагирующих на туберкулин (+) или туберкулин и KAM (-) Общий подъем аюивно-сти ЛДГ молока (рисунок 2) под действием молочной кислоты был равен у контрольных коров 28,9, у коров реагирующих на KAM (-) - 22,2, а у коров 3 и 4 группы соответственно 8,1 и 4,9% Иными словами, у коров последних двух групп развивается своеобразная «глухота», резистентность ЛДГ к индуцирующему действию лактата. Как установлено далее, у коров не только в крови, но и в молоке под влиянием лактата повышалась активность АЛТ Однако только у коров 3 и 4 групп Так, у животных, реагирующих на туберкулин (+) она оказалась больше, чем натощак на 59,4% (Р<0,05), а у реагирующих на туберкулин и KAM (=) - на 62,2% (Р<0,05) Активность ACT, ЩФ, каталазы и пероксидазы в молоке под влиянием лактата изменялась незначительно и статистически не достоверно

Для некоторых групп коров весьма эффективным индуктором ферментов молока оказался глицерин После его введения у коров контрольной группы активность ACT молока через 3 часа увеличилась в 2,5 раза (Р<0,02), а через 6 часов - в 2 раза (Р<0,05) У коров, реагирующих на KAM (-) через 3 часа активность ACT молока увеличилась в 2,7 раза (Р<0,05), а через 6 часов - в 3 раза (Р<0,05) Вместе с тем у животных, реагирующих на туберкулин (+) активность АС Г в молоке повысилась только через 6 часов, причем, всего на 47% (Р<0,05) У животных же, реагирующих на туберкулин и KAM (=), индукции ACT мы не наблюдали вовсе Общий подъем активности ACT молока под действием глицерина (рисунок 2) составлял у контрольных коров 82,6%, у коров, реагирующих на KAM (-) активность фермента увеличилась в 1,5 раза, а у коров 3 и 4 группы соответственно на 18,9 и 10,7% Повышение активности другой трансаминазы. АЛТ, под влиянием глицерина мы зафиксировали лишь у коров, реагирующих на KAM (-), в 2 раза (Р<0,05) Остальные исследованные нами ферменты молока под влиянием глицерина статистически значимо не изменялись

Наконец, под влиянием гормонального стимула, у контрольной группы коров активность ACT молока увеличилась к 6-му часу эксперимента, в 2 раза (Р<0,05), а у коров, реагирующих на KAM (-) - на 59,4% (Р<0,05) У коров, реагирующих на туберкулин (+), на туберкулин и KAM (=) инъекция гидрокортизона никакого влияния на активность этого фермента молока не оказала Близкая к описанной картина наблюдалась нами также в отношении АЛТ и ЛДГ молока Под влиянием гидрокортизона активность АЛ'Г молока статистиче-

ски достоверно увеличивалась в 2 раза (Р<0,05), но только через 6 часов опыта и только у коров, реагирующих на KAM (-) Общий подъем активности АЛТ молока под действием гидрокортизона (рисунок 2) составлял у контрольных коров 79,6%, у коров, реагирующих на KAM (-) - 55%, а у коров 3 и 4 группы соответственно 13,5 и 10,4 % Активность ЛДГ также возрастала лишь к 6-му часу эксперимента, как у коров контрольной группы, так и коров, реагирующих на KAM (-), соответственно на 54,2% (Р<0,01) и 47,9% (Р<0,02) У коров, реагирующих на туберкулин (+) и на туберкулин и KAM (=) этот фермент молока индукции не подвергался

о с

3

о О

I

II

III

□ к

Рисунок 2 - Изменение в молоке коров общей активности ЛДГ (I) под влиянием лактата, ACT (II) - глицерина и АЛТ(Ш) - гидрокортизона

3.5 Корреляционные взаимосвязи ферментов крови и молока

Взаимосвязи ферментов крови и молока у обследуемых коров оценивались нами в двух направлениях Сначала были проанализированы корреляционные связи между разноименными ферментами крови и молока у коров всех четырех групп. У контрольной группы коров из 30 исследуемых признаков высокие и средние корреляционные взаимосвязи обнаружены нами в 11 случаях Это, высокие положительные и отрицательные, взаимосвязи между АЛТ крови и ACT молока, ЛДГ крови и ACT молока, каталазой крови и ACT, АЛТ молока (г соответственно 0,841, -0,716, -0,775, -0,732) У этих животных средние положительные и отрицательные связи установлены между ACT крови и АЛТ, каталазой молока (г 0,677 и -0,633); между ЛДГ крови и АЛТ, щелочной фосфатазой, каталазой молока (г соответственно -0,694,-0,505, 0,619), между щелочной фосфатазой крови и АЛТ молока (г -0,551), каталазой крови и щелочной фосфатазой молока (г -0,645)

У коров, реагирующих на KAM (-) описываемых взаимосвязей оказалось больше - 17 нз 30 Так, статистически значимая корреляция установлена между ACT крови и АЛТ, ЛДГ и щелочной фосфатазой молока (г 0,845, 0,915, 3,040), АЛТ крови и ACT и ЛДГ молока (г 0,845, 0,880), ЛДГ крови и щелочной фосфатазой молока (г -0,980), щелочной фосфатазой крови и каталазой молока (г 0,975), каталазой крови и щелочной фосфатазой молока (г 0,752), пероксидазой крови и ЛДГ молока (г 0,787) Средние взаимосвязи оказались характерными между ACT крови и пероксидазой молока (г 0,522), АЛТ крови и пероксидазой молока (г 0,597). ЛДГ крови и каталазой молока (г 0,657); щелочной фосфатазой крови и АЛТ, пероксидазой молока (г соответственно -0,648 и 0,528), пероксидазой крови и ACT, АЛТ и щелочной фосфатазой молока (г 0,612, 0,558, -0,518) Полученные данные позволяют предположить, что у коров, реагирующих на KAM (-) увеличена лабильность взаимосвязей исследованных нами признаков

Что касается коров, реагирующих на туберкулин (+), то у них исследуемые признаки оказались взаимосвязаны гораздо реже, чем у контрольных коров и коров, реагирующих на KAM (-) Высоких и средних, положительных и отрицательных взаимосвязей у них было всего 4 из 30-ти Это взаимосвязи между ACT крови и АЛТ молока (г 0,720), АЛТ крови и ACT молока (г 0.866), ЛДГ крови и пероксидазой молока (г -0,632); щелочной фосфатазой крови и каталазой молока (г -0,761) По нашему мнению, такие результат свидетельствуют о «разбалансировке» ферментного спектра крови, а значит и метаболизма больных коров

В последней группе коров, которые реагировали на туберкулин и KAM (=), взаимосвязей между ферментами крови и молока, оказалось - 13 из 30 Так, высокие связи установлены между ACT крови и АЛТ, щелочной фосфатазой, каталазой молока (г 0,836, -4,900, 0,572), АЛТ крови и ACT, каталазой молока (г 0,917, 0,660), ЛДГ крови и ACT, АЛТ, щелочной фосфатазой, каталазой и пероксидазой молока (г соответственно 0,591, 0,552, -0,519, 0,590, -0,699). щелочной фосфатазой крови и каталазой молока (г -0,532), пероксидазой крови и ЛДГ, щелочной фосфатазой молока (г -0,590,0,582)

Следовательно, у обследованных коров корреляционные связи между разноименными ферментами крови и молока изменяются в зависимости от реакции организма на туберкулиновые пробы Причем, у них развивается более широкая и менее регулируемая лабильность таких важных метаболитов гомеостаза как ферменты

Далее были изучены корреляционные связи между одноименными ферментами крови и молока (таблица 3) Установлено, что с увеличением активности ACT и АЛТ в крови у всех обследованных животных возрастает активность этих ферментов и в молоке Причем, корреляционные связи всегда были более тесными у коров 3 и 4-й групп Четких коррелятивных различий между ЛДГ крови и молока у коров контрольной группы и коров, реагирующих на

KAM (-) нам установить не удалось В то же время у коров, реагирующих на туберкулин (+) корреляция оказалась средней положительной, а у коров, реагирующих на туберкулин и KAM (=) - высокой положительной Следовагельно, в процессе заболевания, изменяются взаимосвязи между ЛДГ крови и молока Причем, корреляция по мере усугубления болезни, становится более выраженной и тесной, отражая возможность индукции синтеза ЛДГ в самой молочной железе

Эти практически значимые факты, установленные нами впервые, могут иметь несколько объяснений. По-видимому, у животных с отчетливой реакцией на туберкулиновые пробы увеличивается проницаемость молочных цистерн вымени для ряда ферментов крови В результате, в молоке у них повышается активность ACT, АЛТ и особенно ЛДГ. Не исключено также, что сама молочная железа больных коров оказывается способной к биосинтезу указанных ферментов

Отрицательные коррелятивные взаимосвязи в отношении щелочной фосфатазы крови и молока обнаружены нами у всех обследованных групп животных Это подтверждает сделанное нами ранее заключение об уменьшении активности щелочной фосфатазы в молоке животных с разной реакцией на туберкулиновые пробы Кроме того, корреляционные взаимосвязи твердо свидетельствуют о том, что ЩФ не синтезируется молочной железой коров, а заболевание этот синтез не индуцирует

У больных животных постепенно ослабевают корреляционные связи между каталазой крови и молока они из средних положительных становятся слабыми положительными Такие взаимосвязи, вероятнее всего характеризуют возможность синтеза каталазы в молочной железе коров с явно выраженной реакцией на туберкулиновые пробы

Корреляционные взаимосвязи между пероксидазой крови и молока у контрольных коров были слабо отрицательными, у коров, реагирующих на KAM (-) - слабо положительными, а у животных, реагирующих на туберкулин (+) и на туберкулин и KAM (=) - более тесными, вплоть до высоких положительных Это, на наш взгляд, отражает значительную степень индукции пероксидазы в молочной железе коров, реагирующих на туберкулин (+) и на туберкулин и KAM (=)

Таким образом, результаты наших исследований позволили установить ранее неизвестные изменения ферментного спектра в организме коров с разной реакцией на туберкулиновые пробы. Выявлены особенности сдвигов активности ферментов крови и молока коров, реагирующих на KAM (-), туберкулин (+) и туберкулин и KAM (=) под влиянием субстратных и гормональных индукторов Установлены особенности ферментного спектра молока и

\ Группы хживотных Показателях Контроль Реагирующие на КАМ(-) Реагирующие на туберкулин(4) Pear ирующие на туберкулин и KAM (=)

1 2 3 4

ACT крови -ACT молока 0,903 1,000 1,000 1,000

АЛТ крови -АЛТ молока 0,746 0,785 0,901 0.942

ЛДГ крови -ЛДГ молока -0,678 0,173 0,562 0,724

ЩФ крови -ЩФ молока -0,488 -0,697 -0,096 -0,325

Катал аза крови -каталаза молока 0,645 -0,279 0,008 0,028

Пероксидаза крови -пероксидаза молока -0,049 0,079 0,772 0,849

раскрыты новые механизмы образования составных частей молока у коров, в зависимости от их реакции на туберкулиновые пробы Полученные данные могут иметь значение для более глубокого понимания механизма действия туберкулиновых проб, а также служить дополнительными диагностическими критериями при постановке соответствующего диагноза.

4 ВЫВОДЫ

1 В крови у коров, реагирующих на туберкулин (+), на туберкулин и KAM (=), по сравнению со здоровыми и реагирующими на KAM (-) животными, повышается активность аспартатаминотрансферазы, лактатдегидрогеназы и щелочной фосфатазы, при одновременном существенном снижении активности каталазы и пероксидазы

2 Впервые установлено, что у коров с разной реакцией на туберкулиновые пробы понижена чувствительность ряда ферментов к индуцирующему действию внешних стимулов У коров, реагирующих на туберкулин (+), на туберкулин и KAM (=) отсутствовала индукция щелочной фосфатазы в ответ на введение фосфатного буфера, лактатдегидрогеназы - на введение молочной кислоты, глицерина и гидрокортизона, развивалась запоздалая и ослаб-

ленная реакция аспартатаминотрансферазы и алаиинаминотрансферазы на введение глицерина и гидрокортизона

3 Молоко коров, реагирующих на туберкулин (+), на туберкулин и KAM (=), по сравнению с контрольными и коровами, реагирующими на KAM (-), имеет меньшую плотность и титруемую кислотность, в нем снижено содержание общего белка, казеина, лактозы и сухих веществ

4 Установлено, что в молоке у коров, реагирующих на туберкулин (+), на туберкулин и KAM (=) увеличивается активность аспартатаминотрансферазы, алаиинаминотрансферазы и лактатдегидрогеназы и снижается активность щелочной фосфатазы и пероксидазы

5 Установлено ранее не известное влияние субстратных (фосфатный буфер, лактат, глицерин) и гормональных (гидрокортизон-ацетат) индукторов на активность ферментов молока коров У коров, реагирующих на туберкулин (+) под влиянием лактага в молоке увеличивается активность алаиинаминотрансферазы, но не лактатде! идрогеназы, глицерина - активность аспартатаминотрансферазы. У коров, реагирующих на туберкулин и KAM (=) после введения лактата наблюдается увеличение активности аланинаминотрансферазы, а не лактатдегидрогеназы

6 Впервые показано, что из 30 разноименных признаков (ферментов) у контрольной группы коров взаимосвязаны 11, у коров, реагирующих на KAM (-) - 17, на туберкулин (+) -4, а на туберкулин и KAM (-) - 13 У коров, реагирующий на туберкулин (+), на туберкулин и KAM (=), ослабляется регулирующее влияние организма на качественный состав молока

7 У коров, реагирующих на туберкулиновые пробы вклад ферментов крови в аналогичные ферменты молока существенно отличается от нормы Высокие корреляционные связи между трансаминазами, лактатдегидрогеназой и пероксидазой крови и молока у коров, реагирующих на туберкулин (+), на туберкулин и KAM (=) свидетельствуют о более значительном вкладе активности указанных ферментов крови в аналогичные ферменты молока, чем у коров контрольной группы и реагирующих на KAM (-)

5 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1 Изменение ферментного спектра крови коров с различной реакцией на туберкулиновые пробы следует использовать в качестве дополнительного диагностического критерия при дифференциации неспецифических реакций у крупного рогатого скота, обследуемого на наличие туберкулеза

2 Полученные результаты необходимы для оценки метаболического, resp. ферментативного, статуса коров, по-разному реагирующих на туберкулиновые пробы При проведении углубленной верификации диагноза у крупного рогатого скота, особенно высокопродук-

тивных пород, впервые предложено использовать субстратную и гормональную индукцию ферментов, которая значительно отличается у больных животных от нормы

3 Данные об изменении составных частей молока коров, реагирующих на туберкулиновые пробы, следует учитывать при использовании такого молока в технологических процессах

4 Материалы диссертации рекомендуется использовать в учебном процессе при подготовке специалистов ветеринарного профиля, на курсах повышения квалификации, а также при подготовке учебников и учебно-методических пособий

6 СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Платонова, Ю В Изменение активности ферментов крови коров больных туберкулезом / Ю В Платонова // Материалы Всероссийской научно-практической конференции посвященной 117-й годовщине со дня рождения академика Николая Ивановича Вавилова -Саратов- СГАУ, 2004 - С 42-44

2 Платонова, Ю В Изменение составных частей молока у коров реагирующих на туберкулиновые пробы / Ю В Платонова, В А Блинов // "Современные технологические и селекционные аспекты развития животноводства России в рамках межведомственной координационной программы". Материалы 3 Международной научно-практической конференции -Т 1. - Дубровици, 2005. - С 269-270

3 Платонова, Ю В Ферментный спектр молока у коров, подозреваемых в заболевании туберкулезом // Молодые ученые АПК Поволжского региона Сб науч работ /ЮВ Платонова. - Саратов СГАУ, 2005 -С. 209-212

4 Платонова, Ю В Субстратная и гормональная индукция ферментов у кроликов породы шиншилла / Ю В. Платонова // Материалы конференции посвященной 118-й годовщине со дня рождения академика Николая Ивановича Вавилова - Саратов. СГАУ, 2005 - С 8486

5 Платонова, Ю.В. Индукция ферментов молока у коров, реагирующих на туберкулиновые пробы / Ю В Платонова // Ветеринарная медицина Современные проблемы и перспективы развития Материалы VI Всероссийской научно-практической конференции - Саратов, 2006 — С.272-275.

6 Платонова, Ю В Субстратная и гормональная индукция ферментов крови, у коров реагирующих на туберкулиновые пробы / Ю В Платонова // Ветеринарная медицина Современные проблемы и перспективы развития Материалы VI Всероссийской научно-практической конференции - Саратов, 2006 - С 275-279.

7. Платонова, Ю В Характеристика ферментного спектра крови коров с подозрением на туберкулез / Ю В Платонова, В А Блинов //Ветеринария Поволжья - 2006. - №2(11)-С 46-48

8 Платонова, Ю В. Определение активности ферментов крови у коров, по-разному реагирующих на туберкулиновые пробы / Ю В Платонова // Информационный листок №8 -2006. - Саратов. Саратовский ЦНТИ, 2006 - 2с

9. Платонова, Ю В Изменение составных частей и ферментного спектра молока у коров, реагирующих на туберкулиновые пробы / Ю В. Платонова // «Актуальные проблемы развития АПК»' Материалы Всероссийской научно-практической конференции - Саратов СГАУ, 2006.-С 74-76

10 Платонова Ю В Ферментный спектр крови и молока у коров, реагирующих на туберкулиновые пробы / Ю В Платонова, В А Блинов // Практик - 2006. - №4 - С 62-67

И Платонова. ЮВ Корреляционные взаимосвязи ферментов крови и молока у коров, по-разному реагирующих на туберкулиновые пробы / Ю.В. Платонова // Материалы конференции посвященной 119-й годовщине со дня рождения академика Николая Ивановича Вавилова - Саратов СГАУ, 2006 - С 77-82

12 Платонова Ю.В Особенности ферментного спектра крови у коров положительно реагирующих на туберкулиновые пробы / Ю.В Платонова, В.А. Блинов // Вестник Саратовского госагроуниверситета им Н И Вавилова - Саратов' СГАУ, 2006 — №6 Выпуск 2 -С 6-8.

13. Платонова Ю В Индукция ферментов крови у коров, реагирующих на туберкулиновые пробы / Ю В Платонова // Актуальные проблемы ветеринарной патологии, физиологии, биотехнологии, селекции животных Материалы Всероссийской научно-практической конференции - Саратов'«Саратовский источник», 2007 - С. 103-106

Подписано к печати 16 02 2007 Формат А5 Гарнитура Times New Roman Печать RISO. 1 печ л Тираж 100 экз Заказ №24

Отпечатано в типографии "Техно-Декор" 410012, г. Саратов, ул. Московская, 160 тел 50-78-88,51-19-93,51-23-30

Актуальность темы.

Значительный экономический урон животноводству наносит массовый убой крупного рогатою скога, позитивно реагирующего на туберкулиновые реакции. Результатом этого является недополучение приплода, снижение продуктивности, увеличение затрат, связанных с проведением комплекса профилактических, диагностических и оздоровительных мероприятий, а также необходимость выбраковки мяса при убое больного скота (А.Н. Шаров, 2000; А.Х. Найманов и др., 2004; Ю.А. Кассич и др., 2004; К.Т. Шенжанов, 2004; T.J. Ryan, 2000; J.M. Polloc, 2000; II. Kohler, 2000; W.I. Morrison, 2000). Несмотря на очевидную актуальное!ь, многие стороны этой проблемы (диагностика, клиника, их взаимосвязь с нарушениями метаболизма и продуктивностью и т.д.) крупного рогатого скота с различной реакцией на туберкулиновые пробы до сих пор исследованы недостаточно. Между тем, реакция на туберкулин и ее модификации имеют фундаментальную значимость для оценки распространенности туберкулеза среди крупного poiaioio скота (М.М. Додонов, 2003; С. Pearson et al., 1977; К. Kwiatek, 1988; R. Miciora et al., 1991). Исходя именно из этих диагностических аллергических проб в настоящее время верифицируется диагноз заболевания (И.И. Румачик, 1990; В.Ф. Мартынов и соавт., 1991; А.И. Кузин, 1992; А.Н. Шаров и соавт., 2000; Ю.А. Кассич и соавт., 2004; D.L.Whipple et al., 2001).

Особое место в понимании патогенеза болезни, как известно, принадлежит обмену веществ. Однако сведения о сдвигах метаболизма в организме животных, положительно реагирующих на туберкулиновые пробы немногочисленны, нередко противоречивы и не дифференцированы в зависимости от их вида. Весьма недостаточно сведений о механизмах образования и качественном составе молока таких коров. Так, например, практически отсутствуют данные, об изменении активности ферментов в молоке у животных, реагирующих на КАМ (-), на туберкулин (+) или на туберкулин и КАМ (=). Кроме тою, в лшературе даже не обсуждается вопрос об индуцибельпости и корреляционных взаимосвязях ферментов крови и молока у животных, в зависимости от их реакции на туберкулиновые пробы.

Разработка указанных вопросов можем наметить пути нивелирования метболических расстройств, понять тонкие механизмы образования составных частей молока и осуществлять коррекцию его качественною состава, раскрыть новые стороны влияния аллергических реакций замедленного типа на организм жвачных. Более того, комплексная оценка сдвиюв обмена веществ, особенно ферментного спектра крови и молока, позволит разработать дополнительные критерии, характеризующие специфичность процесса, что особенно важно для высокопродуктивных коров. Исходя из этих представлений, актуальность темы расценивается как современная и перспективная.

Цель и задачи исследования.

Цель работы состояла в том, чтобы установить особенности спектра ферментов крови и молока коров с разной реакцией на туберкулиновые пробы и выявить у них отличия индукции ферментов на экзогенные стимулы.

Для реализации эюй цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить клиническую картину и активность некоторых ферментов крови коров черно-пестрой породы в зависимости от реакции на туберкулиновые пробы.

2. Установи п> особенности субстратной и гормональной индукции ферментов крови коров с разной реакцией на туберкулиновые пробы.

3. У коров, в зависимости от реакции на туберкулиновые пробы, изучить качественный состав молока, в i. ч. спектр ферментов, а также степень их индукции под влиянием экзогенных стимулов.

4. Изучить корреляционные взаимосвязи между ферментами крови и молока у коров с различной реакцией на туберкулиновые пробы.

Объект исследования. Крупный рогатый скот с разной реакцией на 1уберкулиновые пробы.

Предмет исследования. Активность ферментов крови и молока у коров, по-разному реагирующих на туберкулиновые пробы.

Научная новизна.

Впервые установлены различия в активности некоторых ферментов крови и молока у коров в зависимости от реакции на туберкулиновые пробы. У животных, реагирующих на КАМ (-) ферментный спектр крови и молока, его физико-химические свойства практически не отличаются от здоровых животных. Напротив, у коров, реагирующих на туберкулин (+) и на туберкулин и КАМ (=), в крови и молоке развивается дисбаланс ферментов, относящихся к разным классам.

Впервые изучены корреляционные взаимосвязи одноименных и разноименных ферментов крови и молока. Показано, что у коров, реагирующих на туберкулин (+) и на туберкулин и КАМ (=) вклад ферментов крови в аналогичные показатели молока оказывается более значительным, чем у здоровых и коров, реагирующих на КАМ (-). У коров подопытных групп корреляционные связи между разноименными ферментами крови и молока изменяются в зависимости от реакции организма на туберкулиновые пробы, свидетельствуя о своеобразии у них механизмов молокообразования.

Разработана схема и определены дозы субстратов и гормона для индукции ферментов крови и молока у крупного рогатого скота. Впервые показано, что у коров с позитивной реакцией на туберкулиновые пробы понижена резистентность некоторых ферментов крови и молока к индуцирующему действию экзогенных стимулов.

Теорегическая и практическая значимос(ь работы.

На основании изучения ферментного спектра крови и молока коров, их корреляционных взаимосвязей и отчетливых особенностей индукции ферментов, раскрыты ранее неизвестные стороны изменения метаболизма в opiammie коров в зависимости ог их реакции на туберкулиновые пробы. Эти резульraibi имеют значение для более глубокою понимания патогенеза болеши и могут использоваться для верификации диагноза.

Полученные данные следует использовать в практической дея1ельносги в качестве дополнительных тестов при углубленной диагностике туберкулёза жвачных, что необходимо для обоснованной выбраковки больных животных, особенно среди коров с высокой продукшвносгью.

Апробация и реализация резулыагов исследования.

Результаты научных исследований доложены, обсуждены и одобрены на Всероссийских научно-практических конференциях, посвященных 117-й -119-й годовщинам со дня рождения П.И. Вавилова (г. Саратов, 24-26 ноября 2004 г.; 23-25 ноября 2005 г.; 4-8 декабря 2006г.), на научно-практических конференциях профессорско-преподавательского состава и аспирантов по итогам научно-исследовательской и учебно-методической работы (г. Саратов, 4-8 февраля 2005; 4-8 февраля 2006), на Международной научно-пракжческой конференции «Современные технологические и селекционные аспек1ы развития животноводства России в рамках межведомственной координационной программы» (г. Дубровици, 18-21 октября, 2005г.), на VI Всероссийской научно-практической конференции «Ветеринарная медицина Современные проблемы и перспективы развития» (г. Саратов, 2006г.), на Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы развития АПК» (г. Саратов, сентябрь 2006г.), на Всероссийской научпо-пракжческой конференции «Актуальные проблемы ветеринарной патологии, физиологии, биотехполо1 ии, селекции животных» (г. Саратов, 2007г.).

Публикация результатов исследования.

Основные положения диссертации опубликованы в 13 работах.

Объем и сI рукгура диссертации.

Диссер1ация изложена на 141 страницах и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, трех глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и списка лиiepaiypbi, включающею 291 источник литературы, в гом числе 56 зарубежных. Работа иллюстрирована 25 таблицами и 20 рисунками. Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Особенности ферментного спектра крови коров с разной реакцией на туберкулиновые пробы.

2. Субстратная и гормональная индукция ферментов крови коров, по-разному peai ирующих на туберкулиновые пробы.

3. Особенности качественного состава, спек фа ферментов молока и их индукции у коров, реагирующих на 1уберкулиновые пробы.

4. Характерные корреляционные взаимосвязи между ферментами крови и молока у коров с различной реакцией на туберкулиновые пробы.

ВЫВОДЫ

1. В крови у коров, реагирующих на туберкулин (+), на туберкулин и КАМ (=), по сравнению со здоровыми и реагирующими на КАМ (-) животными, повышается активность аспартатаминотрансферазы, лактатдегидрогеназы и щелочной фосфатазы, при одновременном существенном снижении активное i и каталазы и пероксидазы.

2. Впервые установлено, чю у коров с разной реакцией на туберкулиновые пробы понижена чувствительность ряда ферментов к индуцирующему действию внешних стимулов. У коров, реагирующих на туберкулин (+), на туберкулин и КАМ (=), отсутствовала индукция щелочной фосфагазы в ответ на введение фосфатного буфера, лактатдегидрогеназы -на введение молочной кислоты, глицерина и гидрокортизона, развивалась запоздалая и ослабленная реакция аспартатаминотрансферазы и аланинаминотранеферазы на введение глицерина и гидрокортизона.

3. Молоко коров, реагирующих на туберкулин (+), на туберкулин и КАМ (=), по сравнению с контрольными и коровами, реагирующими на КАМ (-), имеет меньшую плопюсть и титруемую кислотность, в нем снижено содержание общего белка, казеина, лактозы и сухих веществ.

4. Установлено, что в молоке у коров, реагирующих на туберкулин (+), на туберкулин и КАМ (=), увеличивайся активность аспартатаминотрансферазы, аланинаминотранеферазы и лакчатдегидрогеназы и снижается активность щелочной фосфатазы и пероксидазы.

5. Установлено ранее не извей ное влияние субстратных (фосфатный буфер, лактат, глицерин) и гормональных (гидрокортизон-ацетат) индукторов на активность фермешов молока коров. У коров, реагирующих на туберкулин (+), под влиянием лакчага в молоке увеличивается активность аланинаминотранеферазы, но не лактатдегидро1 еназы, глицерина -активность аспартатаминотрансферазы. У коров, реагирующих на туберкулин и КАМ (=), после введения лактата наблюдается увеличение активности аланинаминотранеферазы, а не лактатдегидрогеназы.

6. Впервые показано, чю из 30 разноименных признаков (ферментов) у контрольной группы коров взаимосвязаны 11, у коров, реагирующих на КАМ (-) - 17, на туберкулин (0 - 4, а на туберкулин и КАМ (=) - 13. У коров, реагирующих на губеркулин (+), на туберкулин и КАМ (=), ослабляется регулирующее влияние организма на качественный состав молока.

7. У коров, реагирующих на туберкулиновые пробы, вклад ферментов крови в аналогичные ферменты молока существенно отличается от нормы. Высокие корреляционные связи между трансаминазами, лактатдегидрогеназой и пероксидаюй крови и молока у коров, реагирующих на туберкулин (+), на туберкулин и КАМ (=), свидетельствуют о более значительном вкладе активносш указанных ферментов крови в аналогичные ферменты молока, чем у коров контрольной группы и реагирующих на КАМ (-).

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Изменение ферментной) спектра крови коров с различной реакцией на туберкулиновые пробы следуei использовать в качестве дополнительного диа1 ностическою критерия при дифференциации неспецифических реакций у крупного рогатого скота, обследуемою на наличие туберкулеза.

2. Полученные результаш необходимы для оценки метаболического, resp. ферментативного, статуса коров, по-разному реагирующих на туберкулиновые пробы. При проведении углубленной верификации диагноза у крупного рогатого скота, особенно высокопродуктивных пород, впервые предложено использовать субс i ратную и гормональную индукцию ферментов, которая значительно отличается у больных животных от нормы.

3. Данные об изменении составных частей молока коров, реагирующих на туберкулиновые пробы, следует учитывать при использовании такого молока в технологических процессах.

4. Материалы диссертации рекомендуется использовать в учебном процессе при подготовке специалистов ветеринарного профиля, на курсах повышения квалификации, а также при подготовке учебников и учебно-методических пособий.