Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Изучение влияния инфицированности вирусом лейкоза и гельминтозов на проявление аллергических туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота

На правах рукописи

РГ0 ОД

ъ ЦК ж

СОРОКИНА АРИНА ИГОРЕВНА

ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ИНФИЦИРОВАННОСТИ ВИРУСОМ ЛЕЙКОЗА И ГЕЛЬМИНТОЗОВ НА ПРОЯВЛЕНИЕ АЛЛЕРГИЧЕСКИХ ТУБЕРКУЛИНОВЫХ РЕАКЦИЙ У КРУПНОГО

РОГАТОГО СКОТА

16.00.03. — ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Благовещенск - 2000

Работа выполнена в Дальневосточном Зональном научно-исследовательском ветеринарном институте Российской академии сельскохозяйственных наук

Научный руководитель -

кандидат ветеринарных наук Васильченко Геннадий Анатольевич

Научный консультант -

доктор ветеринарных наук, профессор, член-корреспондент РАСХН Макаров Юрий Анатольевич

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, профессор В.Ц.Цыдыпов

кандидат ветеринарных наук, заслуженный ветеринарный врач РФ Я.Г.Диких

Ведущее учреждение - Институт Экспериментальной Ветеринарии Сибири

и Дальнего Востока г.Новосибирск

На заседании диссертационного совета К 120.07.01. в институте ветеринарной медицины и зоотехнии Дальневосточного государственного арарного университета по адресу: 675005, Амурская область, г.Благовещенск, ул. Политехническая, 86, ДальГАУ

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Дальневосточного государственного аграрного университета.

Автореферат разослан ¿-¿-¿¿фе^р 2000 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

доцент Н.М.Мандро

Защита диссертации состоится /«Г

¿^ел&Л^Р 2000 г.

/7т. бя

4 V/* /•

1.ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность. При проведении профилактических диагностических исследований в благополучных хозяйствах часто обнаруживают реагирующих на туберкулин животных, у которых при дальнейших исследованиях на туберкулез не находят характерных для туберкулеза изменений, а при лабораторных исследованиях не выделяют культур микобактерий. В таких случаях некоторые авторы связывают появление аллергических туберкулиновых реакций с инфицированностью животных вирусом лейкоза крупного рогатого скота (Пономарева В.Д., Гольдштейн В.Д., 1972; Смирнов П.Н. с соавт., 1992; Яблоков Д.Д., Чалибина А.И, 1997) или различными гельминтозами (Банников А.А., 1968; Сосов Р.Ф., 1969; Молев с соавт., 1971 и др.)

В животноводческих хозяйствах Амурской области инфицированность животных вирусом лейкоза крупного рогатого скота и различные гельминтозы имеют широкое распространение. На фоне благополучия животноводства области по туберкулезу крупного рогатого скота реагирующие животные выявляются при плановых диагностических исследованиях во многих благополучных стадах. В такой ситуации имеется необходимость исключения возможного влияния инфицированности животных вирусом лейкоза крупного рогатого скота и заражения различными гельминтозами на проявление аллергических туберкулиновых реакций.

1.2. Цель и задачи исследований.

Цель работы - изучить влияние инфицированности животных вирусом лейкоза и гельминтозов на проявление аллергических туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота.

Для достижения этой цели на разрешение были поставлены следующие задачи:

1. Изучить эпизоотическую ситуацию по туберкулезу, лейкозу и гельминтозам крупного рогатого скота в Амурской области.

2. Изучить влияние инфицированности животных вирусом лейкоза на проявление аллергических туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота.

3. Изучить влияние гельминтозов на проявление аллергических туберкулиновых реакций.

1.3. Научная новизна. Установлено, что инфицирование животных вирусом лейкоза крупного рогатого скота и гельминтозы не влияют на проявление аллергических туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота.

1.4. Практическая ценность. В результате проведенных исследований установлено, что в благополучном по туберкулезу крупного рогатого скота стаде аллергические реакции на туберкулин не связаны с

3

инфицированностью животных вирусом лейкоза крупного рогатого скота и различными гельминтозами, а могут быть обусловлены контаминацией объектов внешней среды кислотоустойчивыми сапрофитами. Поэтому в случае выявления в благополучных хозяйствах реагирующих на туберкулин животных и отсутствии у них характерных для туберкулеза изменений и отрицательных результатах бактериологических исследований для выявления причин аллергических туберкулиновых реакций рекомендуется проводить бактериологические исследования проб с объектов внешней среды, что позволяет установить причину аллергических реакций и предотвратить необоснованный убой животных.

1.5. Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на ученых советах ДальЗНИВИ (1997-1999 гг.); на международной научной конференции «Болезни животных Дальнего Востока» (Благовещенск, 1999 г.), общеуниверситетской тематической научной конференции, посвященной 50-летию ДальГАУ (Благовещенск, 2000 г.)

Основные положения, выводы и практические предложения, изложенные в диссертации, обсуждены и одобрены на межлабораторном заседании научных сотрудников ДальЗНИВИ (2000).

1.6. Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 4 научных работы и 2 находятся в печати.

1.7. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 102 страницах машинописного текста, иллюстрирована 5 таблицами, 6 рисунками. Она состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований, выводов, практических предложений и приложения. Список литературы включает 262 источника, из них 40 иностранных.

1.8. Внедрение результатов исследований. Предложения по усовершенствованию диагностики туберкулеза крупного рогатого скота использовались Всероссийским научно-исследовательским институтом бруцеллеза и туберкулеза животных при разработке региональной программы борьбы с лейкозом и туберкулезом крупного рогатого скота (№ 110-01 от 27.04.2000).

1.9. Основные положения, выносимые на защиту. Результаты исследований по изучению эпизоотической ситуации по туберкулезу, лейкозу и гельминтозам в Амурской области и влияние этих заболеваний на проявление аллергических туберкулиновых реакций, предложения по усовершенствованию диагностики туберкулеза.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследований

Работа выполнялась в 1997-2000 гг. в лаборатории эпизоотологии, диагностики и профилактики туберкулеза животных Дальневосточного Зонального научно-исследовательского Ветеринарного Института, вУправлении ветеринарии и ветеринарных лабораториях Амурской области, Амурском Государственном Научном Центре Ветеринарной медицины и колхозе «Искра» Ивановского района.

Эпизоотическую ситуацию по туберкулезу, лейкозу и гельминтозам крупного рогатого скота в Амурской области изучали по материалам ветеринарной отчетности, отчетов производственных лабораторий, Центра Ветеринарной Медицины, отчетов ДальЗНИВИ.

Кровь на лейкоз крупного рогатого скота исследовали в РИД.

Исследования на туберкулез проводили согласно «Наставления по диагностике туберкулеза животных».

Исследования на гельминтозы проводили методом лярво и овоскопии (методами Фюллеборна и Котельникова-Хренова), а так же полным и частичным гельминтологическим вскрытием, совместно с лабораторией паразитологии (Петрухин М.А.)

Перед началом проведения исследований была выяснена эпизоотическая ситуация по туберкулезу, лейкозу и гельминтозам в Амурской области и по результатам этих исследований было выбрано благополучное по туберкулезу крупного рогатого скота хозяйство, в котором животные реагировали на лейкоз, а так же были заражены различными гельминтами. Аллергические реакции на туберкулин у животных этого хозяйства наблюдались в предыдущие годы при проведении плановых диагностических исследований на туберкулез.

Выяснение влияния инфицированности животных вирусом лейкоза на проявление аллергических туберкулиновых реакций проводили путем сопоставления результатов исследований животных на лейкоз и на туберкулез.

Изучение влияния различных гельминтозов на проявление аллергических туберкулиновых реакций проводили в динамике во все фазы развития гельминтов в условиях спонтанного заражения и на фоне агельминтозной ситуации после дегельминтизации.

Вначале изучили гельминтозную ситуацию в стаде после спонтанного заражения на пастбище и на этом фоне провели в течении зимне-стойлового содержания трехкратное аллергическое исследование поголовья на туберкулез.

При читке реакции на туберкулин у реагирующих на туберкулин животных брали для гельминтологических исследований пробы фекалий из прямой кишки и определяли видовой состав и степень поражения гельминтами

5

реагирующих на туберкулин животных. Перед выгоном животных на пастбище провели исследование на туберкулез и на гельминтозы и провели дегельминтизацию животных нилвермом и фенбендазолом в дозе 10 мг/ кг по действующему веществу. В течении пастбищного периода животных дважды исследовали на туберкулез. Затем исследования по выяснению роли гельминтозов в проявлении аллергических туберкулиновых реакций провели в период половой зрелости гельминтов (январь), после чего провели дегельминтизацию. Через I месяц после дегельминтизации исследовали животных на туберкулез и на гельминтозы. Заключительные исследования по выяснению роли гельминтозов на проявление аллергических туберкулиновых реакций провели после окончания пастбищного периода и постановки животных на стойловое содержание.

2.2. Эпизоотическая ситуация по лейкозу, гельминтозам и туберкулезу крупного рогатого скота в Амурской области

Анализ отчетов государственной ветеринарной службы и исследования производственных лабораторий и соответствующих лабораторий ДальЗНИВИ показал, что в Амурской области регистрируется заболевание животных туберкулезом, лейкозом и различными гельминтозами.

Но эпизоотическая ситуация по этим заболеваниям не стабильна и меняется в зависимости от различных факторов, в том числе и от эффективности профилактических и оздоровительных мероприятий.

2.2.1. Эпизоотическая ситуация по лейкозу крупного рогатого скота в

Амурской области

Анализ ветеринарной отчетности за 1985-1997 гг. показал, что положительные реакции на лейкоз регистрируются в 18 из 20 районов Амурской области. При этом к лейкозу восприимчивы все породы скота, разводимые в Амурской области, но инфицированность вирусом лейкоза крупного рогатого скота животных молочных пород значительно выше, чем мясной (табл.1.).

Таблица 1.

Результаты серологического исследования в РИД крупного рогатого скота разных пород в Амурской области

Порода Исследовано всего, голов Реагировало в РИД

голов %

черно-пестрая 235 25 10,6

костромская 182 19 7,7

симменталы 392 19 4,8

герифорды 147 3 2

всего 959 61 6,4

Наиболее инфицированы ВЛКРС коровы - 6,46 %, а наименее инфицирован молодняк до 1 года - 0,96 %. Инфицированность ВЛКРС по возрастным группам представлена в табл.2.

Таблица 2.

Инфицированность крупного рогатого скота вирусом лейкоза по возрастным

группам

Возрастная группа Исследовано всего, голов Выделено реагирующих РИД (+)

голов %

крупный рогатый скот: всего 94094 4027 4,28

молодняк до 1 года 19043 182 0,96

молодняк до 2-х лет 17397 768 4,41

нетели 4007 140 3,49

коровы 31163 2014 6,46

быки 494 22 4,45

Анализ количества инфицированных ВЛКРС животных с 1985 по 1997 г. показал, что их количество постоянно увеличивается (рис.1.).

7

Рис. 1. Динамика количества реагирующих РИД животных в Амурской

области.

Изучение влияния инфицированности животных вирусом лейкоза крупного рогатого скота на проявление аллергических туберкулиновых реакций проводили в колхозе «Искра» Ивановского района Амурской области. В этом хозяйстве на момент начала исследований в РИД на лейкоз реагировало 46,6 % маточного поголовья крупного рогатого скота.

2.2.2. Эпизоотическая ситуация по гелыиинтозам крупного рогатого скота в Амурской области

По данным М.А.Петрухина (1975), Н.М.Городовича с соавт. (1997) у крупного рогатого скота в Амурской области зарегистрированы следующие возбудители паразитозов: парамфистомы, эуритремы, фасциолы, ориентобильхарции, цистицерки, мониезии, остертагии, сетарии, эзофагостомы, мецистоцирры, трихостронгилы, кооперии, буностомы, стронгилоиды, гемонихии, хабертии, телязии, диктикаулы, эймерии, кокцидии и возбудитель псороптоза.

Установлено, что в желудочно-кишечном тракте крупного рогатого скота в основном паразитируют: парамфистомы, эуритремы, остертагии, эзофагостомы, мецистоцирры, трихостронгиллы, кооперии, буностомы, стронгилоиды и эймерии.

Наибольшая зараженность скота желудочно-кишечными нематодами наблюдается в Зейско-Буреинской предлесостепной и в Амуро-Зейской притаежной зонах.

Стронгилоидоз и эймериоз наблюдаются в основном у животных до 1-1,5 лет.

Парамфистомоз распространен почти во всех районах и в отдельных хозяйствах экстенсивность инвазии достигает 100 %.

В хозяйстве, где проводились исследования по выяснению роли заболеваемости животных различными гельминтозами в проявлении аллергических туберкулиновых реакций маточное поголовье на период начала проведения исследований было заражено следующими гельминтозами: парамфистомоз - 75 %, эзофагостомоз - 40 %, мецистоцирроз - 60 %, остертагиоз - 50 %, коопериоз - 40 %, трихостронгилез - 40 %, буностомоз - 5 %, мониезиоз - 10 %. Кокцидиоз установлен у 20 % исследованных животных.

2.2.3. Эпизоотическая ситуация по туберкулезу крупного рогатого скота

в Амурской области

Последний цикл развития эпизоотического процесса туберкулеза крупного рогатого скота в Амурской области начался в 1983 г. В течении этого цикла неблагополуными по туберкулезу были 29,6 % ферм крупного рогатого скота в 6 районах области.

Наибольший подъем количества неблагополучных пунктов наблюдался в 1985-1988 гг., а в дальнейшем по мере проведения противотуберкулезных мероприятий их количество неуклонно снижается до полного оздоровления ферм от туберкулеза (рис 2.).

Рис.2. Динамика движения неблагополучных по туберкулезу крупного рогатого скота пунктов в Амурской области (1983-1997 г.)

Наибольшее количество неблагополучных пунктов было в хозяйствах Серышевского, Бурейского и Завитинского районов, где неблагополучными по туберкулезу были практически все фермы крупного рогатого скота. В

9

Ивановском районе, где проводились исследования, неблагополучным по туберкулезу был животноводческий комплекс колхоза «Зарево», где туберкулез имел широкое распространение и оздоровление его проведено методом полной замены поголовья. Другой неблагополучный пункт в Ивановском районе - колхоз «Луч» с небольшим охватом поголовья туберкулезом был оздоровлен методом исследований и удалением из стада больных животных в течении 1 года

Колхоз «Искра» Ивановсого района благополучен по туберкулезу крупного рогатого скота, но при плановых диагностических исследованиях периодически обнаруживают реагирующих на туберкулин животных. При ветеринарно-санитарной экспертизе и лабораторных исследованиях на туберкулез диагноз не подтверждается.

2.3. Изучение влияния инфицированности животных вирусом лейкоза крупного рогатого скота на проявление аллергических туберкулиновых

реакций

В колхозе «Искра» Ивановского района Амурской области при исследовании поголовья на лейкоз выявлено 46,6 % реагирующих в РИД животных. Гематологические исследования крови от этих животных были отрицательными.

При исследовании поголовья этого стада на туберкулез аллергические реакции на месте введения туберкулина с увеличением складки кожи на 3 и более миллиметра обнаружены у 23, и менее 3 миллиметров у 33 голов. Из 56 животных, имеющих какую-либо реакцию на месте введения туберкулина совпадающие реакции в РИД получены в 8 случаях.

Из них в 4 случаях реакции на туберкулин согласно действующему наставлению по применению туберкулинов для диагностики туберкулеза животных не учитываются, и только в четырех случаях животные считались реагирующими на туберкулин.

Таким образом, в стаде, в котором 46,6 % животных положительно реагировало в РИД выявлено 5,5 % животных с увеличением складки кожи на месте введения туберкулина на 3 и более миллиметра и 7,9 % с увеличением складки кожи менее 3 миллиметровИз 46,6 % серопозитивных в РИД животных у 1,9 % наблюдалось совпадение положительных результатов исследования в РИД на лейкоз и внутрикожной туберкулиновой пробы на туберкулез, из них половина аллергических туберкулиновых реакций оценивалась увеличением складки кожи на месте введения туберкулина менее 3 миллиметров, т. е. практически не учитывается. Сопоставление

10

результатов исследования поголовья данного стада на лейкоз и на туберкулез представлены на рис.3. ,

Рис.3. Результаты исследований на лейкоз и на туберкулез коров колхоза «Искра» Ивановского района.

Как видно из рис.3., почти половина поголовья этого стада инфицирована вирусом лейкоза крупного рогатого скота. Количество реагирующих на туберкулин животных в этом стаде составило всего 5,5 %. Одновременно реагировали на туберкулез и на лейкоз 0,96 % поголовья. Такое незначительное количество совпадающих на лейкоз и на туберкулез результатов исследований позволило сделать заключение о том, что инфицирование животных вирусом лейкоза крупного рогатого скота не влияет на проявление аллергических туберкулиновых реакций.

В хозяйстве, где проводились исследования, в течении зимнестойлового содержания поголовья крупного рогатого скота у животных паразитировали различные виды гельминтов. Перед выгоном животных на пастбище зараженность их гельминтами выглядела следующим образом (табл. 3.)

0 реагирующие на туберкулин . □ реагирующие на туберкулин и в РИД □ нереагирующие животные_

□ реагирующие в РИД 0 реагирующие на туб'

2.4. Изучение влияния гельминтозов на проявление аллергических туберкулиновых реакций

Таблица 3.

Зараженность гельминтами и кокцидиями крупного рогатого скота в колхозе «Искра» Ивановского района

Группа животных За раженность (%)

1 парамфистомоз эзофагостомоз со О О. & к я о н о я я 1> остертагиоз коопериоз трихостронгилез буностомоз мониезиоз кокцидиоз стронгилоидоз

молодняк до 1года 0 0 0 0 0 0 0 0 25 0

молодняк старше года 45 30 25 0 0 0 50 20 20 0

коровы 75 40 60 50 40 40 5 10 20 0

Как видно из таблицы, свободным от гельминтов был только молодняк до 1 года, который не выпасался на пастбище. Остальные животные были заражены гельминтами, при этом наибольшая зараженность отмечена у коров. На таком гельминтологическом фоне в этом стаде реагировало 1,6 % поголовья. К концу зимне-стойлового периода содержания животных количество реагирующих на туберкулин животных в этом стаде увеличилось до 5,5 %. Дегельминтизация животных освободила организм животных от гельминтов (лишь у некоторых животных обнаруживались еденичные личинки и яйца гельминтов в исследуемой пробе), но это не привело к снижению количества реагирующих на туберкулин животных, а наоборот, их количество увеличилось до 7,7 %.

Отмечены некоторые различия в зараженности животных гельминтами по стаду и у реагирующих на туберкулин до дегельминтизации и после нее (табл.4.)

Таблица 4.

Результаты исследований на гельминтозы до и после дегельминтизации

Количество зараженных животных %

до дегельминтизации после дегельминтизации

Гельминтозы из числа из числа

по стаду реагирующих на туберкулин по стаду реагирующих на туберкулин

парамфистомы 75 61,5 - -

мониезии 10 15,4 - -

эзофагостомы 40 84,6 7,5 -

мецистоцирры 60 100 7,5 -

остертагии 50 100 42,5 32

кооперии 40 76,9 - -

трихостронгилы 40 53,6 - 4

буностомы 5 - - -

кокцидии 20 30,7 - -

Кроме парамфистомоза, который по стаду более широко распространен, чем среди реагирующих, остальные гельминтозы обнаружены больше у реагирующих на туберкулин животных, чем среди нереагирующих.

Мецистоцирроз и остертагиоз обнаружен у всех реагирующих на туберкулин животных. А из числа нереагирующих зараженность составляет соответственно 60 и 50 %.

После дегельминтизации в стаде выявлена незначительная зараженность эзофагостомозом, мецистоциррозом и остертагиозом. А у реагирующих на туберкулин животных, из 8 выявленых до дегельминтизации гельминтозов, обнаружены только 2 - остертагии и трихостронгилы, при этом зараженность животных этими гельминтами была незначительной.

Количество реагирующих на туберкулин животных в этом стаде на фоне агельминтозной ситуации не снизилась по сравнению с их количеством до дегельминтизации, а увеличилась на 2 %. По окончании пастбищного периода в этом стаде реагировало на туберкулин 6,5 % поголовья. В дальнейшем при изучении влияния на проявление туберкулиновых реакций половозрелых форм гельминтов, установлено, что ко времени их половой зрелости (январь) в стаде реагировало на туберкулин 1,5 % поголовья. Зараженность животных гельминтозами в этот период составляла: эзофагостомозом - 40 %, мецистоциррозом - 20 %, остертагиозом - 60 %, коопериозом - 30 %, трихостронгиллезом - 10 %, парамфистомозом - 10 %. После проведения алергических и гельминтологических исследований

провели дегельминтизацию. После дегельминтизации зараженность животных гельминтозами снизилась и составила: парамфистомоз - 30 %, остертагиоз - 5%, коопериоз - 5 %, трихостронгиллез - 10%. При этом интенсивность заражения животных гельминтозами была незначительной. Количество реагирующих на туберкулин животных в стаде на этот период составило 2,26 %. По окончании пастбищного периода содержания животных интенсивность инвазии значительно возросла, а количество реагирующих на туберкулин животных осталось на том же уровне, что и после дегельминтизации, (рис.4.).

□эзофагостомы ймеиистоцирры СЗостертагии □кооперии

Ипарамфистомы Остронгилоиды Ибуностомы □ трихостронгиллы

_- количество реагирующих на туберкулин (%)

Рис.4. Зависимость проявления туберкулиновых реакций от зараженности животных различными гельминтозами.

2.5. Дифференциация туберкулиновых реакций у крупного рогатого

скота

Анализ результатов исследований поголовья стада коров колхозя "Искра" Ивановского района Амурской области в течении года показал, что количество реагирующих на туберкулин животных не одинаково прикаждом исследовании (рис.5.).

1,5

О

февраль май

июль октябрь январь

1997

1998

Рис.5. Динамика выявления реагирующих на туберкулин животных в благополучном хозяйстве (колхоз "Искра" Ивановского района)

Как видно из рисунка, в период зимне-стойлового содержания животных количество реагирующих на туберкулин животных в стаде минимально и не превышает 1,6 % поголовья. Максимальное количество реагирующих на туберкулин выявляется с мая по октябрь (от 5,5 % до 7,7 %).

Сопоставление результатов аллергических исследований в течении года показало, что состав реагирующих на туберкулин животных менялся при каждом исследовании.

В течении года проведено 4 аллергических исследования поголовья: первое - в феврале, второе - в мае, третье - в июле, четвертое - в октябре. При первом исследовании на туберкулин реагировало 7, при втором - 23, при третьем - 32 и при четвертом - 24 головы. Из 7 реагирующих при первом исследовании аллергические реакции при втором исследовании проявились у 5 (71,4 %) голов. При третьем и четвертом исследовании алергическая реакция на введение туберкулина у них отсутствовала. Из 23 реагирующих на введение туберкулина животных при втором исследовании, в третьем исследовании аллергические реакции у всех этих животных отсутствовали. Но если взять во внимание животных, у которых при втором исследовании увеличение складки кожи было незначительным, которое не учитывается при оценке реакции на введение туберкулина (до 3 миллиметров), то у 5 из них при третьем исследовании складка кожи на месте введения туберкулина

увеличилась до 3 и более миллиметров и животные перешли в категорию реагирующих на туберкулин.

При третьем исследовании на туберкулин прореагировало 32 головы. Все они при предыдущих исследованиях не реагировали на внутрикожное введение туберкулина. При следующем исследовании аллергические реакции сохранились только у двух из них, а у остальных (93,75 %) отсутсвовали. Из 24 реагирующих при четвертом исследовании животных аллергические реакции на месте введения туберкулина ранее регистрировались при втором исследовании у 2 животных. При оценке реакций на введение туберкулина у животных этого стада установлено увеличение складки кожи в месте введения от 3 до 13 миллиметров. Кроме этого, до 7,9 % поголовья реагировало на введение туберкулина увеличением складки кожи менее 3 миллиметров.

При ветеринарно-санитарной экспертизе изменений, характерных для туберкулеза не обнаружено. Отмечено только незначительное увеличение лимфатических узлов и их гиперплазия.

При лабораторных исследованиях биоматериала от реагирующих на туберкулин животных и из объектов внешней среды выделены идентичные культуры, которые росли на элективных питательных средах после обработки серной кислотой. Рост культур наблюдался на 10-13-й день после посева. При пересеве этих культур на обычную среду Левенштейна-Иенсена, с салицилатом натрия и на МПА рост культур наблюдался на всех перечисленных средах на следующий день после посева.

Не смотря на то, что эти культуры выросли на питательной среде после обработки серной кислотой (т.е., они проявили кислотоустойчивость), при дифференциальной окраске мазков из этих культур они окрасились как частично кислотоустойчивые, т.е. в процессе культивирования они частично утратили кислотоустойчивость.

При исследовании объектов внешней среды по окончании пастбищного периода из почвы пастбищ получен рост желтых сухих колоний округлой формы с ровными краями. Рост наблюдался в течение 10 дней. В мазках из этих культур обнаружены кислотоустойчивые кокки.

3. ВЫВОДЫ

1. Лейкоз крупного рогатого скота в Амурской области имеет широкое распространение и диагностируется серологически (РИД) в 18 из 20 районов области. Все породы крупного рогатого скота, разводимые в Амурской области восприимчивы к лейкозу, но инфицированность

16

коров молочных пород значительно выше, чем мясных (черно-пестрые - 10,6; костромская - 7,7; симментальская - 4,8; герифордовская - 20 %).

2. Из желудочно-кишечных гельминтозов у крупного рогатого скота в хозяйствах Амурской области широкое распространение имеют парамфистомоз, эзофагостомоз, мецистоцирроз, остартагиоз, коопериоз, трихостронгиллез, буностомоз, мониезиоз. При этом зараженность в стаде этими гельминтами в условиях спонтанного заражения на пастбище доходит соответственно до 75; 40; 60; 50; 40; 40; 5 и 10 % поголовья. Молодняк до года, который не выпасался на пастбище свободен от гельминтов. Молодняк старше года заражен буностомозом - до 50, парамфистомозом - до 30, мецистоциррозом -до 25 и мониезиозом - до 20 % поголовья.

3. Туберкулез крупного рогатого скота в Амурской области был широко распространен в 1984-1988 годах в шести районах области и охватил 29,6 % ферм крупного рогатого скота. В настоящее время Амурская область оздоровлена от этого заболевания и благополучие стойко сохраняется как в благополучных, так и в оздоровленных стадах.

4. Инфицирование животных вирусом лейкоза крупного рогатого скота не оказывает влияния на проявление аллергических туберкулиновых реакций.

5. Заражение животных гельминтами и паразитирование их в организме животных в любой фазе их развития не оказывает влияния на проявление аллергических туберкулиновых реакций.

6. Аллергические исследования крупного рогатого скота на туберкулез необходимо проводить независимо от эпизоотической ситуации по лейкозу и гельминтозам.

7. В случае отсутствия при диагностическом убое характерных для туберкулеза изменений и отрицательных результатах бактериологических исследований необходимо проводить исследование проб с объектов внешней среды животноводческих ферм и пастбищ на наличие микобактерий.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Аллергические исследования крупного рогатого скота проводить независимо от эпизоотической ситуации по лейкозу и гельминтозам. В случае отсутствия при диагностическом убое характерных для туберкулеза изменений и при отрицательных результатах бактериологических исследований биоматериала проводить исследование объектов внешней среды животноводческих ферм и пастбищ на наличие микобактерий.

5. СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Зависимость туберкулиновых реакций от заболеваемости животных гельминтозами / Г.А.Васильченко, Ю.А.Макаров, М.А.Петрухин, А.В.Квартников, А.И.Сорокина // Бюл. науч. исслед. / ДальЗНИВИ. -Благовещенск, 1998,- С.7-12.

2. Васильченко Г.А., Сорокина А.И. Туберкулез крупного рогатого скота на Дальнем Востоке России // Науч. конф. ДальГАУ, 31 марта-1 апреля, 1999 г. - Благовещенск, 1999.

3. Васильченко Г.А., Сорокина А.И. Туберкулез крупного рогатого скота на Дальнем Востоке России // Междунар. науч. конф. «Болезни животных Дальнего Востока», Благовещенск, 23-25 июля 1999 г. -Благовещенск, 1999.

4. Сапрофиты / Ю.А.Макаров, Г.А.Васильченко, А.И.Сорокина, М.А.Петрухин // Вет.газ. - 1999. -№ 9-10. -С.7.

Сдано в набор 0.5. VI. 2000 г. Подписано к печати 06.VI.2000 г. Тираж 100 экземпляров. Заказ 098. Цена договорная

Издательство «Полисфера», лицензия ПЛД № 29-22

г.Благовещенск, ул. им. Горького, 95, тел.: 44-49-80

Инфекционные болезни животных наносят большой ущерб сельскому хозяйству. Благодаря ветеринарной науке против инфекционных заболеваний разработаны и успешно применяются для лечения и профилактики различные вакцины и сыворотки. Особенно эффективно их применение против острых инфекционных заболеваний. При хронических инфекциях животных (туберкулез, бруцеллез) лечение не применяется. Для их профилактики применяется вакцинация поголовья. При этом против бруцеллеза используется несколько вакцин с различными схемами их применения в различных регионах, при этом вакцина применяется как на взрослом поголовье, так и на молодняке. Против туберкулеза используется вакцина БЦЖ, при этом в животноводстве она используется в основном на молодняке, а взрослое поголовье остается незащищенным от туберкулеза.

Поэтому основной метод профилактики туберкулеза животных -недопущение заноса возбудителя туберкулеза в стадо и контроль благополучия.

Контроль благополучия стада по туберкулезу проводится профилактическими диагностическими исследованиями поголовья внутрикожной туберкулиновой пробой. При этом в неблагополучном хозяйстве все реагирующие на туберкулин животные считаются больными и подвергаются убою. В благополучном хозяйстве выявление реагирующих на туберкулин животных является сигналом тревоги и подразумевает проведение комплекса дополнительных исследований с целью подтверждения или исключения туберкулеза из-за наличия псевдо и г парааллергических реакций на туберкулин.

Актуальность. При проведении профилактических диагностических исследований в благополучных хозяйствах часто обнаруживают реагирующих на туберкулин животных, у которых при дальнейших 4 исследованиях на туберкулез не находят характерных для туберкулеза изменений, а при лабораторных исследованиях не выделяют культур микобактерий. В таких случаях некоторые авторы связывают появление аллергических туберкулиновых реакций с инфицированностью животных вирусом лейкоза крупного рогатого скота (Пономарева В.Д., Гольдштейн В.Д., 1972; Смирнов П.Н. с соавт., 1992; Яблоков Д.Д., Чалибина А.И., 1997) или различными гельминтозами (Банников A.A., 1968; Сосов Р.Ф., 1969; Молев с соавт., 1971 и др.)

В животноводческих хозяйствах Амурской области инфицированность животных вирусом лейкоза крупного рогатого скота и различные гельминтозы имеют широкое распространение. На фоне благополучия животноводства области по туберкулезу крупного рогатого скота реагирующие животные выявляются при плановых диагностических исследованиях во многих благополучных стадах. В такой ситуации дифференциация туберкулиновых реакций является актуальной задачей ветеринарной науки и практики.

Цель и задачи исследований.

Цель работы - установить этиологию аллергических туберкулиновых реакций в благополучных по туберкулезу хозяйствах.

Для достижения этой цели на разрешение были поставлены следующие задачи:

1. Изучить эпизоотическую ситуацию по туберкулезу, лейкозу и гельминтозам крупного рогатого скота в Амурской области.

2. Изучить влияние инфицированности вирусом лейкоза на проявление аллергических туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота.

3. Изучить влияние гельминтозов на проявление аллергических туберкулиновых реакций. 5

Научная новизна. Установлено, что инфицирование вирусом лейкоза и гельминтозы не влияют на проявление аллергических туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота.

Практическая ценность. В результате проведенных исследований установлено, что в благополучном по туберкулезу крупного рогатого скота стаде аллергические реакции на туберкулин не связаны с инфицированностью животных вирусом лейкоза крупного рогатого скота и гельминтозами, а могут быть обусловлены контаминацией объектов внешней среды кислотоустойчивыми сапрофитами.

Поэтому в случае выявления в благополучных хозяйствах реагирующих на туберкулин животных и отсутствии у них характерных для туберкулеза изменений и при отрицательных результатах бактериологических исследований для выявления причин аллергических туберкулиновых реакций рекомендуется проводить бактериологические исследования объектов внешней среды, что позволяет установить причину аллергических реакций и предотвратить необоснованный убой животных. Аллергические исследования на туберкулез рекомендуется проводить независимо от эпизоотической ситуации по лейкозу и гельминтозам. Внедрение результатов исследований.

Предложения по усовершенствованию диагностики туберкулеза крупного рогатого скота использовались Всероссийским научно-исследовательским институтом бруцеллеза и туберкулеза животных при разработке региональной программы борьбы с лейкозом и туберкулезом крупного рогатого скота (№ 110-01 от 27.04.2000 г.).

На защиту выносятся результаты исследований по изучению эпизоотической ситуации по лейкозу, гельминтозам и туберкулезу крупного рогатого скота в Амурской области и влияние этих заболеваний на проявление аллергических туберкулиновых реакций, предложения по усовершенствованию диагностики туберкулеза. 6

Диссертационная работа выполнялась в соотвествии с темой НИР лаборатории эпизоотологии, диагностики и профилактики туберкулеза животных ДальЗНИВИ по государственной НТП «Ветеринарная медицина» задание 02.02. «Изучение проявления туберкулиновых реакций в хозяйствах с неблагополучной эпизоотической ситуацией по лейкозу и паразитарным болезням» (1997-2000 гг.). 7

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Для прижизненной диагностики туберкулеза применяется внутрикожная туберкулиновая проба. В качестве диагностического средства при этом используется туберкулин.

Этот препарат был впервые получен и предложен для этой цели Р.Кохом в 1890 г. В начале автор попытался использовать его для лечения больных туберкулезом, но не получил желаемого эффекта. Тем не менее, полученный им препарат оказался ценным для диагностики туберкулеза.

В дальнейшем разными исследователями совершенствовались способы приготовления препарата и методы его применения.

Гельман Г.Х.(1886) при изучении биохимических свойств возбудителя туберкулеза животных получил вытяжку - продукт жизнедеятельности микобактерий и использовал его для диагностики скрытых форм туберкулеза у крупного рогатого скота путем подкожного введения. В 1890 г. Гельман Г.Х. вместе с Владимировым A.A., Креслингом К.И. и другими исследователями провели сравнительное изучение приготовленного ими туберкулина с туберкулином Коха и получили тождественные результаты.

Изготовил по собственной методике и предложил вытяжку из туберкулезных бактерий Буйвид О.Ф. (1890). Он детально разработал и улучшил методику изготовления туберкулина в большом количестве. Вышелесский С.Н. (1912) подчеркивал решающее значение туберкулина, как наиболее эффективного средства и несложного способа диагностики туберкулеза у животных при скрытом его течении. Диагностическая ценность туберкулина зависит от его физико-химических свойств, которые обуславливаются методами приготовления и очистки препарата. 8

В туберкулине необходимо наличие не только высокоспецифической субстанции, но и отсутствие в нем продуктов, обладающих сенсибилизирующим действием на макроорганизм. Технология приготовления альттуберкулина не предусматривала очистки препарата от балластных веществ, что могло служить причиной неспецифических реакций. Достижением в области усовершенствования туберкулинов явилось получение очищенного препарата - ППД-туберкулина (протеинпурифиед-дериват).

Усовершенствование существующих аллергенов, а так же поиски новых продолжаются и в настоящее время. В ВИЭВ разработан новый способ получения активных протеинов из бактериальной массы микобактерий и предложен новый ППД-туберкулин (Устинова Г.И., 1978; Коромыслов Г.Ф., 1983).

Шевырев Н.С. с соавт. (1992) разработал методику получения нового аллергена «УФ-туберкулина», при которой количество этапов производства диагностикума снижается в 2 раза, а цикл получения продукции является замкнутым. Он получил туберкулин путем ультрафильтрации культурального фильтрата возбудителя туберкулеза через фильтрующие мембраны со сдерживающейся способностью 100 кДА.

До 1982 г. туберкулин готовили из микобактерий туберкулеза бычьего и человеческого вида, но затем биологическая промышленность стала выпускать моноштамный туберкулин из возбудителя туберкулеза бычьего вида, так как он оказался более активен и специфичен, чем туберкулин, изготовленный из двух видов. Одной из сложных и актуальных проблем является проблема стандартизации туберкулина. 9

Методы стандартизации туберкулинов основаны на определении уровня биологической активности испытуемого препарата в отношении соответствующего эталона при постановке кожных проб. При этом должно учитываться свойство самого препарата, малая степень сенсибилизации и специфичность аллергии организма животного на туберкулин (Яблокова, 1969) так как незначительное снижение активности и специфичности диагностикума может существенно изменить эпизоотическую ситуацию и привести к значительному экономическому ущербу (Ткаченко О., Короленко П, 1998)

Первый международный стандарт для альттуберкулина был изготовлен и утвержден в 1928 г. в Англии Организацией Здравоохранения Лиги Наций. Единицей активности туберкулина определили количество туберкулина, которое не вызывало слишком сильной реакции и выявляло 90 % туберкулиноположительных лиц при испытании препарата на инфицированных туберкулезом людях.

Второй стандарт альттуберкулина изготовили в 1935 г. и за одну международную единицу приняли активность, которая содержится в 0,01 мл препарата.

Третий международный стандарт альттуберкулина установили в 1965 г. Международной единицей определялась активность, содержащаяся в 0,01111 мл препарата, и каждый миллилитр этого стандарта содержит 90000 МЕ.

10

Для ППД-туберкулина для млекопитающих в 1952 г. международная единица была установлена как содержащаяся в 0,000028 мг стандарта и было основано на сравнении с международным стандартом старого туберкулина. Величину единицы отобрали по весу, который соответствовал международной единице для старого туберкулина.

Для медицины в нашей стране был создан национальный стандарт сухого очищенного туберкулина и, в качестве основы стандарта использовали серию туберкулина 73, а в 1963 г. был разработан национальный стандарт сухого очищенного туберкулина для млекопитающих ППД-Л с единицей активности 0,00006 мг вещества.

В 1971 г. был утвержден ГОСТ на туберкулин для млекопитающих для ветеринарных целей. (Колычев A.M. с соавт., 1991)

Для исследования животных и птицы на туберкулез применяют стандартные очищенные ППД-туберкулины для млекопитающих и птиц. Туберкулин для млекопитающих, изготовленный из штаммов бычьего вида, содержит в диагностической дозе 10000 = 2000 туберкулиновых единиц в 0,2 мг препарата растворенного в 0,2 мл растворителя (Шаров А.Н. с соавт., 1984).

ППД-туберкулин содержит в себе белок (73-90 %), 4-5 % полисахаридов, 1% нуклеиновых кислот и 11 % липидов. Белок содержит восемнадцать аминокислот, половина которых представлена глутаминовой и аспарагиновой кислотами, лейцином, аланином, аринином (Шевелев, 1971).

11

В составе отечественного ППД-туберкулина для млекопитающих с помощью перекрестного иммунофореза было обнаружено около 20 антигенов из которых половина антигенов преципитировалась антителами, шесть из них встречались во всех полученных сериях препарата, в некоторых антигенах были обнаружены детерминанты, общие с антигенными детерминантами атипичных микобактерий, три антигена были специфичны для M.bovis и идентичны антигенам безальбумозного туберкулина из штамма ANS (Лысенко А.П., 1989).

В настоящее время существует несколько методов применения туберкулина: подкожный, внутрикожный, коньюктивальный, пальпебральный и др.

Вишневский А.П. (1937) указывал, что основным недостатком подкожной туберкулинизации является в первую очередь снижение чувствительности кожи к туберкулину при подкожном его введении повторно через полтора года после первой туберкулинизации, подъем температуры тела животного, и в следствии этого, болезненное состояние животных, потери молока у дойных коров. После туберкулинизации животных нельзя было поить водой для избежания колебания температурной кривой, а так же трудоемкость метода. Недостатками же глазной пробы является то, что на недостоверность результатов влияли посторонние моменты ( пыль, трава и др.) вызывающие конъюктивит. Поэтому наиболее

12 простой и надежной туберкулиновой пробой явилась внутрикожная туберкулиновая проба.

Оценка реакции на введение туберкулина проводится по учету утолщения складки кожи на месте введения туберкулина до и после введения. Реагирующим на туберкулин считаются животные, у которых складка кожи через 72 часа после введения препарата увеличилась на 3 и более миллиметра.

В благополучных по туберкулезу хозяйствах аллергическая диагностика является «сигнальной». В таких хозяйствах иногда отмечают случаи выявления реагирующих на туберкулин животных, у которых при убое не находят изменений свойственных туберкулезу. Такие аллергические реакции называют неспецифическими. Большинство исследователей связывают возникновение таких реакций с сенсибилизацией организма животных атипичными, паратуберкулезными микобактериями и M.avium (Г.А.Юдин , 1987), наличием глистных инвазий и рядом других причин.

Неспецифические реакции разделяют на парааллергические, которые связаны с сенсибилизацией организма различными видами микобактерий и псевдоаллергические, которые связаны с небактериальной этиологией.

Некоторые исследователи связывают проявление неспецифических туберкулиновых реакций с белковым перекормом и, в следствии этого, нарушением обмена веществ (Г.А.Юдин , 1973), стрессовыми факторами, такими как транспортировка, смена климата (Водолазкий Д.К., 1980; Бокун А.О., 1982; Падалица A.M., 1998), климатическими факторами, такими как

13 сезонная зависимость (Банников A.A. с соавт., 1968; Бокун А.О., 1982; Ходун JI.M., Курдюк В.П., 1987; Шевцив М.В., 1989), гнойно-некротическими процессами в грудной и брюшной полости (Урбан В.П. с соавт., 1970; Кокуричев П.И., Сахаров С.Ф., 1973; Бузмаков И.Г. с соавт., 1980), актиномикозом (Молев с соавт., 1971), нокардиозом (Щуревский B.C. с соавт., 1981), чувствительностью кожи (Шаров А.Н., Ауштрова К.Н., 1990), непатогенными кислотоустойчивыми сапрофитами (Тузова Р.В., 1966; Кузин А.И., 1982) и рядом других причин.

4.ВЫВОДЫ

Лейкоз крупного рогатого скота в Амурской области имеет широкое распространение и диагностируется серологически (РИД) в 18 из 20 районов области. Все породы крупного рогатого скота, разводимые в Амурской области восприимчивы к лейкозу, но инфицированность коров молочных пород значительно выше, чем мясных (черно-пестрая - 10,6 %, костромская - 7,7 %, симментальская - 4,8 %, герифордовская - 20 %). Наиболее инфицировано вирусом лейкоза маточное поголовье - 6,46 %, а наименее - молодняк до 1 года - 0,96 %.

Из желудочно-кишечных гельминтозов у крупного рогатого скота в хозяйствах Амурской области широкое распространение имеют парамфистомоз, эзофагостомоз, мецистоцирроз, остертагиоз, коопериоз, трихостронгиллез, буностомоз, мониезиоз. При этом зараженность коров в стаде этими гельминтами в условиях спонтанного заражения на пастбище доходит соотвественно до 75; 40; 60; 50; 40; 40; 5 и 10 % поголовья. Молодняк до 1 года, который не выпасался на пастбище свободен от гельминтов. Молодняк старше года заражен буностомозом - до 50, парамфистомозом - до 45, эзофагостомозом - до 30, мецистоциррозом - до 25 и мониезиозом - до 20 % поголовья. Туберкулез крупного рогатого скота в хозяйствах Амурской области был широко распространен в 1985-1988 годах в шести районах области и охватил 29,6 % ферм крупного рогатого скота. В настоящее время Амурская область оздоровлена от этого заболевания и благополучие стойко сохраняется как в благополучных, так и в оздоровленных стадах.

70

4. Инфицирование вирусом лейкоза не оказывает влияния на проявление аллергических туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота.

5. Заражение животных гельминтами и паразитирование их в организме животных в любой фазе их развития не оказывает влияния на проявление аллергических туберкулиновых реакций.

6. Аллергические исследования крупного рогатого скота на туберкулез необходимо проводить независимо от эпизоотической ситуации по лейкозу и гельминтозам.

7. В случае отсутствия при диагностическом убое характерных для туберкулеза изменений и при отрицательных результатах бактериологических исследований проводить исследование объектов внешней среды животноводческих ферм и пастбищ на наличие микобактерий.

72