Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Морфофункциональные нарушения головного мозга крыс при интоксикации этанолом, барбамилом и их фитотерапия

На правах рукописи

РАЗУВАЕВА ЯНИНА ГЕННАДЬЕВНА

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ НАРУШЕНИЯ ГОЛОВНОГО МОЗГА КРЫС ПРИ ИНТОКСИКАЦИИ ЭТАНОЛОМ, БАРБАМИЛОМ

И ИХ ФИТОТЕРАПИЯ

16.00.02 - патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Улан-Удэ, 2003

Работа выполнена в Институте общей и экспериментальной биологии Сибирского отделения Российской академии наук.

Научный руководитель:

доктор биологических наук

Лоншакова Клара Сергеевна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор

кандидат биологических наук

Хибхенов Лопсондоржо Владимирович

Абидуева Лыгжима Ранжуровна

Ведущая организация: Восточно-Сибирский государственный технологический университет.

Защита состоится « 05 »декабря 2003 года в

часов на заседании диссертационного совета Д-220.006.01 в Бурятской сельскохозяйственной академии им. профессора В.Р. Филиппова (670024, г. Улан-Удэ, ул. Пушкина, 8).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Бурятской сельскохозяйственной академии им. профессора В.Р. Филиппова.

Автореферат разослан « ноября 2003 года.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат ветеринарных наук, доцент

Р Г. А. Игумнов

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В последние десятилетия проблема употребления веществ, вызывающих при систематическом приеме психическую и физическую зависимость, среди населения России стала чрезвычайно актуальной. Так, по данным наркологических диспансеров с 1991 по 2000 гг. число'больных .с алкогольной зависимостью увеличилось в 4 раза, а больных с наркотической зависимостью - в 9 раз (Г.Г. Заиграев, 2002; В.В. Киржанова? 2002; Е.А. Кошкина, 2002). При этом, психоактивные вещества, применяемые как постоянно, так и эпизодически, вызывают широкий спектр патологических изменений со стороны всех внутренних органов, а основными точками их приложения являются сердечно-сосудистая, гепатобилиарная и нервная системы (B.C. Пауков, 2001).

Формирование алкогольной и наркотической зависимости обусловлено нарушением функционирования различных биохимических и физиологических процессов, протекающие в организме, многие из которых можно рассматривать в качестве первичных патогенетических факторов. К таким факторам можно отнести дезорганизующее действие психрактивных веществ на клеточные мембраны (М.А. Константинопольский, 1992; Л.Ф. Панчёнко, 1994; С. Li, 1994; J. Salonen, 1997; S-Y. Chen, 2000), торможение синтеза РНК и белков (П.Б. Казакова, 1990; В.И. Сергиенко, 1993; П.Д. Шабанов, 1998; В.Н. Ярыгин, 1994), изменение функциональной активности нейромедиаторных систем мозга (И.П. Анохина, 2000; С.Ю. Калишевич, 1994; J.T. Coull, 1994) и другие метаболические последствия введения в организм ПАВ, которые приводят к морфологическим изменениям в большинстве мозговых структур и негативно сказываются на познавательных функциях мозга (JI.E. Бородкина, 2002; Г.В. Ковалев, 1990; П.И. Сидоров, 2000; П.Д. Шабанов, 2000).

На сегодняшний день в клинике алкоголизма и наркомании применяется широкий набор лекарственных средств: ноотропы, антидепрессанты, адапто-гены, витамины и др. (А.Г. Гофман, 1999; П.Д. Шабанов^ 1998). Несмотря на то, что все эти средства принадлежат к различным фармакологическим группам, их влияние направлено на нормализацию структурно-функционального состояния головного мозга и высших интегративных процессов - памяти, внимания, мышления. Однако, эти средства не всегда могут обеспечить достаточный терапевтический эффект при симптоматическом лечении нарушений высших функций мозга, и при этом их применение нередко приводит к нежелательным, часто токсическим проявдениям, что резко снижает качество лечения (А.Г. Гофман, 1999; А Я. Гриненко, 1993; В. Gabiyel, 1994).

Изложенное выше обосновывает необходимость поиска новых лекарственных-средств, безвредных для организма и обладающих нейропротектор-ным действием. Особого внимания заслуживают лекарственные средства растительного происхождения, издавна применявшиеся в народной и традиционных медицинах при заболеваниях нервной системы, и широко изучающиеся

•5 I РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ |

5 БИБЛИОТЕКА I

в последнее время при различных функциональных нарушениях центральной нервной системы, вызванных интоксикацией, травмой мозга, гипоксией, алкоголизмом и другими патологическими состояниями (Г.Х. Дамдинова, 2001; И.Л. Зеленская, 2000; И.В. Шилова, 2001).

В соответствии с вышесказанны^, нами разработано новое растительное средство, условно названное «Ноофит», в состав которого входят: шлемник байкальский, левзея сафлоровидная, валериана лекарственная, мята перечная, горец птичий, крапива двудомная, тысячелистник обыкновенный.

Цель исследования. Целью настоящей работы явилось определение особенностей морфофункциональных нарушений головного мозга при действии этанола и барбамила и оценка фармакотерапевтической эффективности фи-тосредства «Ноофит» при интоксикациях ими.

Исходя из указанной цели исследования, были сформулированы следующие задачи:

1) изучить особенности влияния этанола и барбамила на структурные изменения головного мозга крыс и связанные с ними нарушения когнитивных процессов в условиях эксперимента;

2) исследовать фармакотерапевтическую эффективность «Ноофита» при алкогольном и барбамиловом повреждениях головного мозга;

3) изучить влияние «Ноофита» на процессы обучения и памяти у интактных животных и при действии факторов, вызывающих амнезию: гипоксия, электросудорожный шок;

4) выявить основные механизмы нейропротекторного действия «Ноофита». Научная новизна. В данной работе впервые изучено нейропротекторное

действие нового средства «Ноофит» при алкогольном и барбамиловом повреждениях головного мозга. В работе впервые установлена ноотропная активность «Ноофита», которая выражается в улучшении процессов обучения и памяти у интактных животных, и при действии факторов, вызывающих амнезию.

Установлено, что дурное средство обладает антигипоксической, спазмолитической и противосудорожной активностью. Базисным молекулярно-клеточным механизмом ^нейропротекторного действия «Ноофита» является его способность ингибировать свободнорадикальное окисление и стабилизировать биологические ц^мбраны.

Практическая значимость работы. Экспериментально обоснована возможность коррекции фитрсредством «Ноофит» морфофункциональных повреждений головного мозга этанолом и барбамилом и связанных с ними нарушений процессов обучения и памяти, что позволяет рекомендовать данное средство для клинических исследований.

Материалы диссертационной работы используются в учебном процессе на курсах патанатомии, патофизиологии, фармакологии и клинической фармакологии медицинского факультета Бурятского государственного университета

морф.; «* > »

' '< *

. Л

Положения, выносимые на защиту:

алкоголь и барбамил, вызывают значительные морфофункциональные

нарушения головного мозга в условиях эксперимента;

новое растительное средство «Ноофит» обладает выраженной фармако-

терапевтической эффективностью при алкогольном и барбамиловом

повреждениях головного мозга;

«Ноофит» обладает ноотропным типом действия;

основными механизмами, определяющими нейропротекторное действие «Ноофита», следует считать его антиоксидантное, мембраностабилизи-рующее, антигипоксическое, противосудорожное, спазмолитическое действия. '

Апробация материалов диссертации. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на:

научно-практической конференции «Биологически активные добавки и перспективы их применения в здравоохранении» (Улан-Удэ, 2001); Южно-Сибирской международной конференции студентов и молодых ученых (Абакан, 2001);

Международной научно-практической конференции «Устойчивое развитие сельского хозяйства в бассейне озера Байкал» (Улан-Удэ, 2002); Всероссийской научной конференции «Актуальные проблемы адекватного питания в эндемичных регионах» (Улан-Удэ, 2002); IX, X Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2002,2003);

научно-практической конференции, посвященной 70-летию службы контроля качества лекарственных средств в Бурятии (Улан-Удэ, 2003); международной научной конференции «Возрастная физиология и патология сельскохозяйственных животных», посвященной 90-летию В.Р. Филиппова (Улан-Удэ, 2003);

научно-практической конференции «Биологически активные добавки в профилактической иклинической медицине» (Улан-Удэ, 2003). Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 научных работ. Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 135 страницах компьютерного текста и состоит из введения, пяти глав, выводов, списка литературы, включающего 233 источника, из которых 80 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 14 таблицами, 9 рисунками и 21 микрофотографиями.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования выполнены на 640 белых крысах линии Вистар обоего пола с исходной массой 160-180 г.

«Ноофит» исследовали в форме отвара, приготовленного по ГФ СССР XI издания (1990). Отвар «Ноофита» вводили внутрижелудочно животным в

объеме 1,0 мл/100 г массы. В отдельных опытах исследовали «Ноофит» В'объ-емах 0,3 и 0,5 мл/100 г массы животного. В качестве препарата сравнения во всех экспериментах использовали синтетический ноотропный препарат J пир-ацетам, в дозе 200 мг/кг массы (T.Ä. боронина, 2000; Г.В. Ковалев, 1990):

Алкогольную интоксикацию у лабораторных животных вызывали внут-рижелудочным введением крысам 40 % этанола в объеме 9 мл/кг массы животного в течение 45 дней (А.И. Майский, 200Ö). Барбамил вводили белым крысам внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг массы Животного ежедневно в течение 4 недель Гаевый, 1980). Выбор бкрбамййа связан с тем, что введение этого вещества вызывает привыкание с «классическими» проявлениями физической зависимости подобно морфину и этанолу (И.П. Анохина, 1990). «Ноофит» и пирацетам вводили внутрйжелудочно ежедйёвно через 6-8 часов после каждого введения этанола или барбамила. Животным контрольной группы вводили в эквивалентном объеме дистиллированную воду по аналогичной с^еме. Через сутки после последнего введения психоактивного вещества животных умерщвляли мгновенной декапитацией. .

Для оценки морфофункционального состояния головного мозга подопытных животных использовали ряд гистологических, гистохимических и гисто-энзимологических методов. Для'проведения гистологических методов материал фиксировали в 10 % нейтральном формалине и 96° этаноле, обей'оживапи в спиртах восходящей концентрации, заливали в парафин-целлоиЙйк. Помимо общепризнанного метода - окраски гематоксилин-эозином/,'п^^еняли специфические методы окраски нервной ткани: крезилвиолетом по Нис'слю для выявления, хроматофильного вещества и ядер нервных клеток',1 по Дубранскому и Миягава-Александровской - на олигодендроглию,' по Шпильмейруна мие-линовые волокна (Е.Г. Елисеева, 1967; Г.А. Меркулов, 1969). 1 '

Кроме качественного анализа микропрепаратов, окуренных по методу

Ниссля, на микроскопе МБИ-10 при увеличении 7x40 проводили морфомет-

рическое исследование клеточного состава в разных областях головного мозга.

Так, в III, V слоях коры головного (мозга в 20 полях зрения'и мозжечке в 100

клетках подсчитывали количество разных по структуре нейронов: нормохром-

ных, умеренно и резко гиперхромных, умерено и резко гипохромй^Ц' «клеток-

теней». Также был проведен морфометрический анализ клеток гигтйкампа по

степени окраски крезилвиолетом. Клетки были разделены ца 2 группы: темные

с резкой степенью гиперхромии и светлые, имеющие светлое ;ядро и разное

/-»Iii! Ii!'1 ' содержание тигроидного вещества в цитоплазме. Определялось'количество (в

%) темных и светльрс клеток по отношению к с^ще^су^е^клеток.

Для гистохимических и гистоэнзим^ргических' мётодов исследования готовили свежезамороженные срезы на криостате 'МК-^ Свежезамороженные срезы опрашивали на содержание липидов Суданом черным «В» по Берейбау-му, активность сукцинатдегидрогеназы (СДГ) выявляли по Нахласу (Э. Пирс,

1962). В; парафиновых, срезах определяли содержание РНК по Браше (Г.А. Меркулов, 1969),[ г; ¡око- .,<„.[ .. -

Для оценки сор;гоянЩ| процессов перекисного окисления,липидов в гомо-генатах ¡ткани головного мозга определяли содержание малонового диапьдеги-да (МДА)'(Ю.А. Владимиров, 1972), уровень активности катал азы (М.А. Короток, 1988).. ' , , _

' Острую токсичность «Ноофита» проводили по методу Кербера (Е,В. Арзамасцев, 2000). Класс токсичности определяли по классификации К.К. Сидорова (1973).

Мембраностабилизируюшую активность «Ноофита» определяли in vitro по степени торможения перекисного и осмотического гемолиза отмытых эритроцитов человеками.Е. Ковалев, 1986).

Влияние «Ноофита» на спонтанную двигательную активность, ориентировочно-исследовательскую реакцию и эмоциональность животных изучали с помощью теста «открытое поле» (Г.В. Ковалев, 1990; J.Bures, 1963).

■ Влияние на процессы обучения и памяти у интактных крыс исследовали при выработке условной реакции пассивного избегания (УРПИ), условного рефлекса с положительным подкреплением в Т- образном лабиринте условной реакции зрительной дифференцировки (УРЗД) (Т.А. Воронина, 2000).

Нарушения обучения и памяти у крыс вызывали введением 40% этанола в объеме 9 мл/кг в течение 45 дней, введением барбамила в дозе 25 мг/кг, в течение 4 недель, воздействием электросудорожного шока (70-100 мА, 0,2-0,5 с), гипоксической гипоксией и гиперкапнией, непосредственно после выработки условного рефлекса (Т. А. Воронина, 2000).

Антигипоксическое действие «Ноофита» исследовали на 4 моделях: нор-мобарической гипоксии с гиперкапнией (Л.Д. Лукьянова, 1989), острых гицо-барической (В.А. Березовский, 1985), гемической (Ю.Ф. Костюченко,1982), гистотоксической (А.П. Караев, 1989) гипоксий. Антигипоксическое действие «Ноофита» и пирацетама оценивали по продолжительности жизни животных.,

Противосудорожную активность «Ноофита» исследовали на моделях камфорных и стрихниновых судорог (Т.А. Воронина, 2000). При этом оценивали латентный период развития судорог, выраженность клонической и тонической фаз, общую продолжительность судорожного периода и выживаемость животных.

По величине реакции тонкой кишки белых крыс на введение карбахолина и адреналина изучали спазмолитическую активность «Ноофита» (R.F. Furchott, 1967).

Статистическую обработку данных проводили с помощью параметрического критерия Стьюдента и непараметрического критерия Вилкоксона-Манна-Уитни. Различия считались достоверными при Р< 0,05. (В.И. Серженко,

2001). ..,;„ ,0ii

• " / ¡Н

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Морфофункциональные изменения головного мозга при алкогольной

интоксикации и их коррекция фитосбором «Ноофит» При микроскопическом исследовании коры головного мозга животных, потреблявших в течение 45 дней этанол, обнаружййаются значительные изменения в структуре нейронов Ш и V слоев. При этом в III слое изменения направлены в сторону увеличения гиперхромных клеток, а в V - в сторону увеличения гипохромных клеток (табл.1).

При количественном анализе нейронов III слоя коры мозга установлено, что у животных, потреблявших этанол, количество нормохромных клеток снижается на 65,7 %, умеренно гиперхромных клеток - на 23,4 %, при этом увеличивается количество резко гиперхромных клеток (на 68,1 %) по сравнению с таковыми у животных интактной группы (табл. 1). Гиперхромные клетки образуют скопления, их тела атрофируются, истонченные дендриты прослеживаются на значительном протяжении. Незначительно увеличиваются количество гипохромных клеток, находящихся в состоянии периферического и тотального хроматолиза с мелкоячеистой вакуолизацией цитоплазмы, число «клеток-теней», явления сателлитоза и нейронофагии.

По мнению некоторых авторов (Д.Д. Орловская, 1986), гиперхромофилия является эквивалентом заторможенного состояния и характеризуется как ги-поксическое повреждение головного мозга (Гипоксия, 2000). Вакуольная дистрофия нейронов отражает нарушение их липопротеинового каркаса, что свидетельствует о тяжелых необратимых изменениях, увеличение числа резко г гипохромных нейронов, «клеток-теней» и замещение погибших нейронов гли-ей указывает на истощение резервных возможностей нейронов головного мозга. Наличие большого количества измененных нейронов является еще одним из признаков выраженной гипоксии мозга (H.H. Боголепов, 2001).

При морфометрическом исследовании нейронов V слоя коры мозга крыс, потреблявших этанол, наблюдается снижение количества нормохромных (на 64,6 %) и умеренно гиперхромных клеток (на 42,9 %) по сравнению с таковыми у животных интактной группы (табл.1). При этом резко увеличивается количество резко гипохромных клеток, находящихся в состоянии набухания с вакуолизацией цитоплазмы. При алкогольной интоксикации в этом слое незначительно увеличивается количество резко гиперхромных, сморщенных нейронов. На микропрегаратах они встречаются по 2-3 в поле зрения.

Степень гипоксических изменений головного мозга и других органов определяется также по снижению активности митохондриальных ферментов (B.C. Пауков, 1991). Так, в наших исследованиях при просмотре микропрепаратов, окрашенных по Нахласу, выявлено снижение активности СДГ во всех слоях коры головного мозга.

По мнению некоторых авторов (В.И. Сергиенко, 1993), гистотоксические изменения, вызванные введением ПАВ, в первую очередь связаны с наруше-

нием водного обмена. В наших исследованиях при введении этанола наблюдаются выраженные гидропические изменения, которые выражаются в появлении перицеллюлярного и периваскулярного отеков и дренажных форм оли-годендроглиоцитов. Последние, по мнению некоторых авторов (Э.Н. Попова, 1984), являются компенсаторно-приспособительной реакцией, направленной на поддержание функции нейронов в ранние сроки алкогольной интоксикации.

Таблица 1

Влияние «Ноофита» и пирацетама на количество разных типов нейронов в III, V слоях коры мозга и клеток Пуркинье в мозжечке у белых крыс при алко-

Тип клеток Группы животных

Интактная (Н20) Контрольная (этанол + Н20) Опытная (этанол + «Ноофетг», 1,0 мл/100 D Опытная (этанол+ пирацетам, 200 мг/кг)

III слой

Нормохромные 7,6±0,75 2,6±0,57** 4,810,56* 4,9±0,78*

Умеренно гиперхромные 4,7±0,31 3,6±0,59 2,0±0,41* 2,9±0,17

Резко гиперхромные 2,2±0,14 6,9±1,18** 4,7±0,81 4,7±0,43

Умеренно гипохромные 2,6±0,37 3,5±0,29 4,7+0,20* 3,8±0,55

Резко гипохромные 1,3+0,52 1,8±0,45 1,6±0,46 1,5+0,20

«Клетки-тени» - 1,4±0,16 0,1±0,05* 0,4±0,08*

V слой .

Нормохромные 7,9±0,95 2,8+0,61** 4,9±0,73* 3,3±0,15*

Умеренно гиперхромные 2,8±0,26 1,6±0,44** 2,2±0,41 2,3±0,32

Резко гиперхромные 2,3±0,12 2,7±0,23 , , 2,5±0,20 2,7±0,28

Умеренно гипохромные 4,4±0,32 5,3±1,25 4,7±0,55 4,8±0,73

Резко гипохромные » 1,3±0,17 2,3±0,20** 1,8±0,06 2,2±0,32

«Клетки-тени» - 2,7±0,19** 2,2+0,20 2,6±0,40

Мозжечок

Нормохромные 38,3±3,00 20,515,2** 29,7±2,30 24,1 ±2,40

Умеренно гиперхромные 23,4±1,20 4,1±0,53** 19,2±1,97* 20,5± 1,69*

Резко гиперхромные 24,8±4,29 37,8±8,31** 26,8±2,19* 3б,0±3,18

Умеренно гипохромные 6,2±1,26 4,3±0,30, 16,6±1,72* 9,2+0,76*

Резко гипохромные 0,9±0,29 7,5±0,82** 2,5±0,19* 0,5±0,22*

«Клетки-тени»|. 4,8±0,91 25,8±3,23** 6,9±0,94* 8,1 ±0,81*

Примечание. Здесь и далее: * - значения достоверны по сравнению с данными у животных контрольной группы при Р<0,05;** - значения достоверны по сравнению с данными у животных интактной группы при Р< 0,05.

Введение белым крысам «Ноофита» вызывает снижение количества резко гиперхромных нейронов в III слое на 68,1 % и резко гипохромных в V слое -на 21,7 %, а также уменьшение количества «клеток-теней» в этих слоях коры мозга по сравнению с контролем (табл. 1). Введение пирацетама вызывает достоверное снижение количества резко гиперхромных клеток в III, но не влияет на число рез*о гипохромных клеток в V слое коры головного мозга. На фоне введения этих средств происходит увеличение количества нормохромных, умеренно гипо- и гиперхромных клеток, активности СДГ в коре головного мозга; | что-свидетельствует о повышении функциональной активности нейронов (Орловская Д. Д., 1986).

При морфометрическом исследовании микропрепаратов коры мозжечка (табл.1) установлено, что при алкогольной интоксикации наибольшим изменениям подвергаются клетки Пуркинье (табл.1). Так, суммарное количество регрессивных форм клеток Пуркинье при введении этанола составляет 71,1 % от общего числа нейронов, что в 2 раза больше, чем у животных интактной группы. Эти изменения в основном направлены в сторону увеличения количества гиперхромных, пикнотических нейронов и «клеток-теней». Зернистый и молекулярный слои мозжечка при алкогольной интоксикации не подвергаются изменениям. >>..<'

При незначительном повышении нормохромных клеток на фоне введения «Ноофита» и пирацетама (табл. 1) происходит существенное увеличение количества умеренно гипер- (на 78,6 и 80,0, % соответственно) и гипохромных (на 74?1 и 53,2 % соответственно) клеток Пуркинье и снижение регрессивных клеточных форм по сравнению с контролем. Эти морфометрические данные позволяют судить о повышении функциональной активности клеток Пуркинье при введении «Ноофита» и пирацетама. , '

Высказывается предположение, что в проявлении феномена предпочтения значительную роль играет гиппокамп как центральная структура лимби-ческой системы (А.Ф. Савоненко, 1997; M.D^De Bellis, 2000). Нами проведен морфометрический анализ клеток гиппокампа !по степени окраски1 крезилвио-летом. Нервные клетки гиппокампа у интактных животных являются -светлыми и однородными по форме, содержат большое округлое ядро и узкий ободок цитоплазмы. Согласно усредненным количественным даннымГ(Н1И., Артюхр-на, 2002), такие светлые клетки являются доминирующими в гиппокампе и составляют в среднем 95% от общего числа нейронов. Остальные 5% клеток в данных структурах составляют темные, гиперхромные клетки. Tak,"npk введении этанола происходит повышение количества гиперхромных клеток на 72,8% по сравнению с данными в интакТной группе (рис. I):1 ' /( |!'1' <■'

При введении животным «Ноофита» на микропрепаратах гиппокампа были обнаружены отдельные гиперхромные клетки, которые не образовывали очаговых скоплений, и их количество (рис.1) было снижено на 4.3,8,% по сравнению с таковым у животных контрольной группы. ... , - ,

<

Рис. 14. Влияние «Ноофита» и пирадетама на количество гиперхромных клеток в гиппокампе при алкогольной интоксикации у белых крыс.

.' - 1'

Исследование глиальных, элементов (олигодендроглии и микроглии) не выявщю ййкаких значимых изменений, лишь отмечены появление дренажных олигодердр|оглиоцитов и пролиферация их около погибших нейронов, что носит компенсаторный характер (Э.Н. Попова, 1984).

При доступном нам световом увеличении видимых изменений миелино-вых волокон не было обнаружено,-.эти данные подтверждались гистохимической'реакциейна жир по Берекбауму.

/ " - U , L '!_ |

' Морфофункциональные йзменения головного мозга при барбами-ловой интоксикации и их коррекция фитосбором «Ноофит»

Результаты гистологических исследований позволили установить, что структурные изменения головного мозга при введении барбамила сходны с таковыми при ^алкогольной интоксикации. Так, в коре мозга увеличивается количество гиперхромных клеток и клеток в состоянии набухания и хромато-• лиза, но в разных-соотношениях, в разных областях коры. Во II - III слоях ко-

ры мозга отмечается "выраженное увеличение количества гиперхромных клеток, в среднем оно 'увеличивается в 4 раза по сравнению с таковым у интакт-' ных животных (Табл. 2). Тела таких клеток несколько уменьшены в размерах,

выявляются истончённые базальные дендриты и более толстый апикальный дендрит.

При гистохимическом исследовании этих структур было обнаружено понижение содержания РНК в цитоплазме клеток и активности СДГ. Преобладающие в коре мозга явления гиперхромного "окрашивания нейронов, умень-

■Интактная (диет, вода) □Контрольная (этанол + диет вода) ■Опытная (этанол + Ноофит, 1,0 мл/100 г) □ Опытная (этанол +, пирацетам, 200 мг/кг)

шение в них РНК и активности СДГ свидетельствуют о выраженном понижении функциональной активности клеток коры (Э.Н. Попова, 1984).

I

' Таблица 2

Влияние «Ноофита» и пйраце^ама на количество разных типов нейронов в Ш, V слоях коры мозга и клеток Пуркинье в мозжечке у белых крыс при бар _бамилойой интоксш&ции (М±т)_

Тип клеток Группы животных

Интактная №0) Контрольная (барбамил + Н20) Опытная (барбамил + «Но-офит», 1,0 мл/100 г) Опытная (барбамил +пирацетам, 200 мг/кг)

Шслой

Нормохромные 7,6±0,75 2,210,28** 3,5±0;33* . 3,5±0,26*

Умеренно гиперхромные 4,7+0,31 2,1±0,27** 1,6±0,1б 2,1 ±0,32

Резко гиперхромные 2,2±0,14 8,6±0,22** 3,9±0,15* 4,4±0,72*

Умеренно гипохромные 2,6±0,37 2,5±0,57 5,1±0,26* 3,7±0,23

Резко гипохромные 1,3±0,52 2,4±0,73 2,5±0,26 2,6±0,58

«Клетки-тени» - , 1,4±0,26** 1,6+0,32 2,5±0,46*

V слой

Нормохромные 7,9±0,95 2,2±0,32** 3,6±0,46* 3.,9±0,58* .

Умеренно гиперхромные 2,8+0,26 1,4±0,18** • 2,2±0,29* 2,4±0,41* .

Резко гиперхромные 2,3±0,12 5,1±0,49** 4,3±0,44 3,8±0,38

УмереннЬ' гипдхромные 4,4+0,32 4,3±0,45 4,0±0,64 4,0±0,35

Резко гипохрогЛйые 1,3±0,17 3,6±0,58** 2,9±0,33 3,1±0,36

«Клетки-тени» - 2,2±0,32** 1,6±0,32 1,8±0,39

Мозжечок

Нормохромные 38,3±3,00 9,5±0,76** 24,2±2,26* 22,0±2,34*'

Умеренно гиперхромные 23,4±1,20 7,6+0,91** 17,3±1,17* 16,5±1,50*

Резко гиперхромные 24,8+4,29 39,5+2,38**. 29,5±2,?5* 30,3±2,89

Умеренно гипохромные 6,2±1,26 8,1 ±0,72 4,1±0,51* . 6,4±0,50

Резко гипохромные 0,9±0,29 10,2±1,01** 6,3+0,43* 7,1±0,78*

«Клетки-тени» 4,8±0,91 24,4±2,01** 19,0±1,58* 17,9±2,55*

Наиболее выраженные изменения наблюдаются в V слое (табл.3), они выражаются в значительном снижении числа нормохромных (на 72,2%), умеренно гиперхромных клеток (на 50 %) и увеличении числа резко гипо-(63,0 %), гиперхромных (на 54,9 %) клеток и «клеток-теней» (в 2,2 раза) по сравнению с

интактным контролем. Исчезновение тифоидного вещества сопровождается развитием набухания различной степени. Большинство из этих клеток подвержены гидропическим изменениям, содержат вакуоли средних и гигантских размеров.

В отличие от алкогольной при барбамиловой интоксикации в V слое на фоне резкого увелйчения^шгичества гипохромных клеток увеличивается количество резко пшёрхровЩгх клетоЙ^оторые образуют скопления. При этом отдельные клетки сморщиваются, их апикальные дендриты, штопорообразно извиваясь, прослеживаются на длительном расстоянии. Все вместе образуют мозаичную картину с явлениями выпадения нейронов, нейронофагии и сател-литоза.

При введении «Ноофита» и пирацетама (табл.2) наблюдается более сглаженная гистологическая картина. Увеличивается количество нормохромных, умеренно гипо- и гиперхромных клеток, повышается активность фермента СДГ во всех слоях коры, уменьшается количество гиперхромных сморщенных нейронов в Ш и V слоях коры. Гиперхромные нейроны встречаются в поле зрения единично, не образуя скоплений. Гипохромия представлена в основном периферическим хроматолизом, часть клеток содержит мелкие и среднего размера вакуоли. «Клетки-тени» и нейронофагия обнаруживаются местами.

Как известно, кора мозжечка очень чувствительна к действию психоактивных веществ (В.И. Сергиенко, 1993; K.G. Ва Кег, 1999; J.J. Walker, 1997; J.D. Thomas, 1998). Так, в наших исследованиях введение барбамила вызывает токсикогипоксические изменения в клетках Пуркинье, сходные с изменениями при алкогольной интоксикации. При этом введение барбамила по сравнению с этанолом вызывает более значимые изменения: увеличивается количество «клеток-теней», резко гипохромных клеток с наличием в цитоплазме вакуолей средних и гигантских размеров.

Введение «Ноофита» (табл. 2) вызывает повышение количества нормохромных клеток на 60,7 %, умеренно гиперхромных - на 56,1 %, снижение числа резко гипер- и гипохромных клеток на 25,3 и 37, 6 % соответственно, «клеток-теней» - на 22,1 % по сравнению с таковыми у животных интактной группы.

Изменения в гиппокампе при барбамиловой интоксикации соответствовали таковым при введении этанола. Под действием барбамила (рис. 2) происходит увеличение количества гиперхромных пикнотических клеток на 74,9 % по сравнению с таковым у животных интактной группы. По сравнению с контролем введение «Ноофита» и пирацетама вызывает снижение числа таких клеток на 34,5 и 36,6 % соответственно.

■хГ 1

Ш Интактная (диет, вода) □ Контрольная (барбам ил + диет вода) ■Опытная (барбамил + "Ноофит", 1,0 мл/100 г) _□ Опытная (барбамил+пирацетам, 200 мг\кг)_

11 , Ш

Рис.2. Влияние, «Ноофита» и пирацетама на количество гиперхромных клеток в гиппокампе при барбамиловой интоксикации у белых крыс.

I

Механизмы действия «Ноофита»

По классификации К.К. Сидорова (1973) исследуемое нами растительное средство «Ноофит» можно отнести к группе относительно безвредных лекарственных средств.

По мнению некоторых авторов (Гипоксия, 2000; Н.В. Гуляева, 1994; И.А. Завалишин, 1996), ключевым звеном в гибели нейронов является активация перекисного окисления липидов. Так, в наших исследованиях введение этанола и барбамила вызывает повышение содержания МДА (на 67,1 и 70,8,% соответственно) и снижение активности антиоксидантного фермента,- каталазы (на 70,8 и 61,5 % соответственно) в гомогенатах головного,мозга по сравнению с данными в интактной группе. Наши данные позволяет предположить, что улучшение гистологической картины головного, мозга крыс, получавших исследуемое средство, вероятно, обусловлено мембранозащитным и антиокси-дантным действиями «Ноофита». Так, введение «Ноофита» на фоне алкогольной и барбамиловой интоксикации вызывает снижение МДА (на 46,6 и 50 % соответственно) и повышение активности каталазы (на 37,7 и 47,7 % соответственно) в гомогенатах головного мозга по сравнению с контролем.

Установлено, что «Ноофит» оказывает тормозящее влияние на гемолиз эритроцитов, вызванный реактивом Фентона. Так, введение отвара в инкуба- £

ционную среду снижает гемолиз эритроцитов на 66,8 %, а в разведениях 1:5, 1:10, 1:50 и 1:100 - на 52,6; 51,3; 44,4 и 42,7 % соответственно по отношению к контролю. Данные, полученные при исследовании «Ноофита» на осмотический гемолиз, свидетельствуют о том, что максимальный мембраностабилизи-рующий эффект достигается при введении отвара и составляет 70% относительно контроля.

Наличие антиоксидантной и мембраностабилизирующей активностей у исследуемого фитосбора связано с наличием в нем растений, содержащих, главным образом, фенодьные соединения (В,А. Хазанов, 1999). Известно, что растительные полифенолы являются ловущкеми свободных радикалов, защищают организм от оксидантного стресса, блокируют процессы ПОЛ, меняют структурные характеристики биологических мембран (N.C. Cook, 1996; L. Packer, 1999). К природным антиоксидантам относят также витамины Е (L. Packer, 1999), A (D.V. Crabtree, 1997; Н. Tsuchihashi, 1995), К (N.C. Cook, 1996; L. Packer, 1999), содержащиеся,в большом количестве в крапиве двудомной, горце птичьем, левзее сафлоровидной, тысячелистнике обыкновенном (Н.В. Казаринова, 1991; В.В. Телятьев, 1991).

При изучении ноотропных свойств фитосбора было выявлено, что курсовое введение его интактным животным, вызывает снижение пассивно-оборонительной реакции' как в тесте.готкрытое поле, так и в Т-образном лабиринте, и, как следствие, повышает поисково—исследовательскую активность и скорость выработки рефлексам положительным пищевым подкреплением; стимулирует когнитивные функции у крыс, что выражается в ускорении выработки условных рефлексов и сохранности памятного следа в отдаленные после обучения сроки в тестах УРЗД и УРПИ, Наиболее выраженный эффект, сопоставимый с эффектом,' дирацетама, наблюдается при введении «Ноофита» в объемах 0,5 и 1,0 мл/100г массы животного.

В экспериментах ;на животных, установлена способность ноотропов ослаблять нарушения процессов,обучении-и памяти, вызванные приемом этанола, наркотических.:анальгетиков, ,терапией транквилизаторами, нейролептиками и других депрессантами ЦНС (A.F, Гофман А.Г., 1999; Г.В. Ковалев, 19.99; Н.Г. Чобанов, 1994).'Способность влиять на условно-рефлекторную деятельность крыс, нарушенную алкогольной интоксикацией, характерна и для растительных средств с ноотропным уипом действия (Е.Д. Гольдберг Е.Д., 1994; Г.Х Дамдинова, 2000).' ■ > ,

Результаты исследовайий показали, что введение этанола в течение 45 дней не влияет на выработку > условного рефлекса у белых кры;с, однако, приводит к' стойким нарушениям мнестических функций. Эти данные согласуются с результатами исследований других авторов (Ю.В. Буров, 1985; П.Д. Шабанов, 1998), показавших, что этанол нарушает выработку условного рефлекса только после 4 месяцев введения. Однако, даже однократное введение этанола, по мнению этих же авторов, приводит к нарушениям процессов памяти, что согласуется г результатами наших исследований. Введение барбамила в дозе 25 мг/кг вызывает стойкие нарушения процессов обучения и памяти в тесте УРПИ. Так; у животных, получавших барбамил, латентный .период захода в темный отсек снижается'по сравнению , с интактным контролем во все сроки исследовйний на 13$; 57,8; 59,3 %.

Установлено, что «Ноофит» в объеме 1,0 мл/100 г обладает антиамнести-

ческим эффектом на фоне алкогольной и барбамиловой интоксикации. Так, латентный период у животных, получавших «Ноофит», значительно превышает таковой у животных контрольных групп во все сроки исследований.

Также установлено, что «Ноофит» в исследуемых объемах улучшает процессы обучения1 и памяти на фоне амнезии, вызванной максимальным электросудорожным Шоком и гипоксией. При этом антиамнестическое действие исследуемого средства наиболее выражено при введении его животным в объеме 1,0 мл/1 ООг массы. .

Высокой антиамнестической активностью ноотропы обладают в условиях амнезии, вызванной гапоксией (Т.А. Воронина, 2001; В.А. Хазанов, 2000; 1.С.БогтеЫ, 1999). Наши исследования показали, что «Ноофит» в условиях нормобарической гипоксии с гиперкапнией обладает антиамнестическим эффектом, повышая когнитивные функции у крыс, что проявляется в выработке условного рефлекса и сохранности памятного следа на протяжении всех сроков эксперимента по сравнению с контролем.

Известно, что ноотропные препараты обладают довольно высокой активностью в условиях различного вида гипоксий (Т.А. Воронина, 2001; А.Д. Лукьянова, 2001). Противогипоксические эффекты, присущие химическим соединениям, в полной мере выявляются и у флавоноидсодержащих растительных препаратов (И.Л. Зелинская, 2000; Л.Д. Лукьянова, 2000; В.А. Хазанов, 1999).

Результаты наших исследований показали, что «Ноофит» оказывает анти-гипоксическое действие при нормобарической гипоксии с гиперкапнией, острых гипобарической, гемической и гистотоксической гипоксиях, увеличивая среднюю продолжительность жизни животных. Наиболее выраженный эффект наблюдается при курсовом введении животным «Ноофита» в объеме 1,0 мл/100 г.

На моделях камфорных и стрихниновых судорог установлено, что «Ноофит» обладает противосудорожной активностью. Он удлиняет латентный период и укорачивает время судорог. Данный эффект обусловлен тем, что в состав компонентов сбора входят растения, биологически активные вещества которых обладают противосудорожным действием: флавоноиды байкалин и скутеллярин, входящие в состав шлемника байкальского, эфирное масло валерианы лекарственной (Г.В. Крылов, 1992; В.В. Телятьев, 1991; А.Д. Турова, 1984).

Установлено, что введение «Ноофита» достоверно снижает величину ( спазма, вызванного карбохалином, уменьшает реакцию гладкой мускулатуры на адреналин. В основе спазмолитического действия «Ноофита» лежит способность биологически активных веществ, содержащихся в данном сборе (эфирные масла, флавоноиды, алкалоиды, дубильные вещества, органические кислоты и др.), ослаблять спазмы гладкомышечных органов (Г.В. Крылов, 1992; В.В. Телятьев, 1991; А.Д. Турова, 1984).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что введение этанола и барбамила вызывает нарушения морфофункционального состояния центральной нервной системы, что выражается в изменении структур головного мозга животных, активации ПОЛ и. нарушении высших интегративных функций мозга. Введение барбамила вызывает более значимые структурные изменения во всех исследуемых отделах головного мозга по сравнению с таковыми при введении этанола. п - ,()

Исследование фармакотерапевтической эффективности нового растительного средства «Ноофит» показало, что его курсовое введение на фоне алкогольной и барбамиловой интоксикаций оказывает выраженное нейропротек-торное действие, которое характеризуется нормализацией морфофункционального состояния головного мозга. Так, на фоне введения «Ноофита» снижается количество • регрессивных нейронов (резко гипо- и гиперхромных, «клеток-теней»), увеличиваются количество функционально активных нейронов (умеренно гипо- и гиперхромных) и активность митохондриального фермента - СДГ.

Установлено, что «Ноофит» обладает ноотропным типом действия. Так, курсовое введение «Ноофита» улучшает организацию исследовательских движений, активирует выработку условных рефлексов с положительным и отрицательным подкреплением, замедляет угашение памятного следа при краткосрочном и долгосрочном запоминании. Исследуемое средство устраняет амне-зирующее влияние этанола, барбамила, электрошока и гипоксии.

Полученные в работе данные свидетельствуют о том, что реализации ней-ропротекторного действия «Ноофита» способствует антигипоксическая, про-тивосудорожная, спазмолитическая активность изучаемого средства, обусловленная широким спектром биологически активных веществ, содержащихся в указанном средстве: флавоноидов, алкалоидов, эфирных масел, комплекса витаминов, органических кислот, макро- и микроэлементов, полисахаридов и других веществ (Г.В. Крылов, 1992; В.В. Телятьев, 1991; А.Д. Турова., 1984).

Установлено, что одним из базисных механизмов нейропротекторного действия «Ноофита» является его мембраностабилизирующая и ангиокси-дантная активность, обусловленная, главным образом, комплексом фенольных соединений (В.А. Хазанов, 1999).

ВЫВОДЫ

1. Введение этанола и барбамила вызывает, значительные структурные изменения преимущественно в коре головного мозга, коре мозжечка и гиппо-кампе и связанные с ними нарушения процессов обучения и памяти у лабораторных животных.

2. Основными механизмами повреждающего действия этанола и барбамила являются активация свободнорадикального окисления липидов' и сниже-

ние активности системы антиоксидантной защиты.

3. .Применение «Ноофита» вызывает нормализацию морфофункционального состояния головного мозГа у животных на фоне алкогольной и барбамило-вой интоксикаций.

4. «Ноофит» улучшает процессы обучения и памяти у интактных животных , и у крыс, подвергнутых влиянию различных факторов,, вызывающих амне- , зию: этанола, барбамила, гипоксии, электросудорожного шока.

5. Механизмами нейропротекторного действия «Ноофита» являются его антиоксидантное, мембраностабйлизирующее, антигипоксическое, проти-восудорожноё и спазмолитическое - действия.

Практические рекомендации

1. Результаты проведенных исследований «Ноофита» позволяют рекомен-■ довать его для исследований в наркологической клинике.

2. Данные, изложенные в настоящей работе, могут быть использованы в учебном процессе в курсе лекций по морфологии и фармакологии.

Список опубликованных работ

1. Разуваева Я.Г., Убашеев И.О., Прокопьев В.Н.' Противовоспалительная активность многокомпонентного растительного бредства-// Биологически активные добавки и перспективы их применения в'здравоохранеиии. -Улан-Удэ,2001.-С.63-64. ' ' ■ ' '"< м' /'"<"/ ■

2. Разуваева Я.Г. Противосудорожное действие многокомпонентного растительного средства // Тез. докл. Южнб-Сибирской международной конференции студентов и молодых ученый- Абакан, 2001. СЛ55.

3. Разуваева Я.Г., Убашеев И.О., Про&сЙьё& В.Н. Влйянйе многокомпонентного растительного сбора на повёДенч'ескиё показатели крыс в тесте «открытое поле» у крыс // Мат,' межд: научно-практ. конф. «Устойчивое развитие сельского хозяйства в бассейне оз. Байкал». - Улан-Удэ, 2002. -С. 126-128. 11 " ; ''

4. Разуваева Я.Г., Убашеев И.О.^ Прокбпьев В.Н. Использование многокомпонентного растительного средства1 в'качестве мембраностабилизи-рующей биоактивной добавки // Тез. докл. Всероссийской науч. конференции «Актуальные проблемы адекватного питания в эндемичных регионах». - Улан-Удэ, 2002. - С. 47-48.

5. Разуваева Я-Г., Убашеев И.О., Леднева И.П., Етобаева И.Г., Прокопьев В.Н. Изучение влияния многокомпонентного растительного средства на холинергическую и адренергическую реакции гладкой мускулатуры // Тез. докл. IX. Российского национального конгресса «Человек и лекар-

, . ство». - Москва, 2002. - С. 684.

6. Разуваева Я.Г., Убашеев И.О., Прокопьев В.Н., Багинова Е.П. Влияние многокомпонентного растительного средства на течение экспериментальной гилоксической гипоксии // Мат. науч.-практ. конф., посвященной 70-летию службы контроля качества лекарственных средств в Бурятии. - Улан-Уда, 2003. - С. 98-99.

7. Разуваева Я.Г., Убашеев И.О., Прокопьев В.Н. Влияние многокомпонентного растительного средства на течение гемической гипоксии у белых крыс // Тез. докл. X. Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - Москва, 2003. - С. 651-652.

8. Разуваева Я.Г., Убашеев И.О., Прокопьев В.Н. Влияние многокомпонентного растительного средства на функциональное состояние нервной системы / // Практическая фитотерапия. - Москва, 2002. - № 4. - С. 4-9.

9. Убашеев И.О., Разуваева Я.Г., Прокопьев В.Н. Влияние фитосбора «Но-офит» на течение экспериментальной гипобарической гипоксии // Мат. международ. Науч. конф. «Возрастная физиология и патология сельскохозяйственных животных», посвященной 90-летию В.Р. Филиппова. -Улан-Удэ, 2003. - С. 83-84.

10. Разуваева Я.Г., Убашеев И.О., Прокопьев В.Н., Бартанов А.И. Влияние фитосбора «Ноофш» на экспериментальные нарушения когнитивных функций, вызванные электросудорожным шоком // Мат научно-практ. конференции «Биологически активные добавки в профилактической и клинической медицине». - Улан-Удэ, 2003. - С. 65-66.

ч

i

V

Подписано в печать 03.11.2003 г. Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Объем 1,2 печ. л. Тираж 100. Заказ № 150.

Отпечатано в типографии Изд-ва БНЦ СО РАН, 670047 г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6.

Р18 5 1 4

i

i

i

i

Актуальность темы. В последние десятилетия проблема употребления веществ, вызывающих при систематическом приеме психическую и физическую зависимость среди населения России, стала чрезвычайно актуальной. Так, по данным наркологических диспансеров с 1991 по 2000 гг. число больных с алкогольной зависимостью увеличилось в 4 раза, а больных с наркотической зависимостью - в 9 раз [56, 65, 73]. При этом, психоактивные вещества, применяемые как постоянно, так и эпизодически, вызывают широкий спектр патологических изменений со стороны всех внутренних органов, а основными точками их приложения являются сердечно-сосудистая, гепатобилиарная и нервная системы [18, 100, 105, 127, 198].

Формирование алкогольной и наркотической зависимости обусловлено нарушением функционирования различных биохимических и физиологических процессов, протекающих в организме, многие из которых можно рассматривать в качестве первичных патогенетических факторов. К таким факторам можно отнести дезорганизующее действие психоактивных веществ на клеточные мембраны [69, 103, 163, 195, 212], торможение синтеза РНК и белков [59, 124, 146, 153], изменение функциональной активности нейромедиаторных систем мозга [4, 62, 167] и другие метаболические последствия введения в организм ПАВ, которые приводят к морфологическим изменениям в большинстве мозговых структур и негативно сказываются на познавательных функциях мозга [18, 66, 127, 146].

На сегодняшний день в клинике алкоголизма и наркомании применяется широкий набор лекарственных средств: ноотропы, антидепрессанты, адаптогены, витамины и др. [41, 146]. Несмотря на то, что все эти средства принадлежат к различным фармакологическим группам, их влияние направлено на нормализацию структурно-функционального состояния головного мозга и высших интегративных процессов - памяти, внимания, мышления. Однако, эти средства не всегда могут обеспечить достаточный терапевтический эффект при симптоматическом лечении нарушений высших функций мозга, и при этом их применение нередко приводит к нежелательным, часто токсическим проявлениям, что резко снижает качество лечения [41, 43, 174].

Изложенное выше обосновывает необходимость поиска новых лекарственных средств, безвредных для организма и обладающих нейропротекторным действием. Особого внимания заслуживают лекарственные средства растительного происхождения, издавна применявшиеся в народной и традиционных медицинах при заболеваниях нервной системы, и широко изучающиеся в последнее время при различных функциональных нарушениях центральной нервной системы, вызванных интоксикацией, травмой мозга, гипоксией, алкоголизмом и другими патологическими состояниями [47, 57, 147].

В соответствии с вышесказанным, нами разработано новое растительное средство, условно названное «Ноофит», в состав которого входят: шлемник байкальский (Scutellaria baicalensis Georgi), левзея сафлоровидная (Rhaponticum carthamoides WILLD), валериана лекарственная (Valeriana officinalis L.), мята перечная (Mentha piperita L.), горец птичий (Polygonum aviculare L.), крапива двудомная (Urtica dioica L.), тысячелистник обыкновенный (Achillea millefolium L.).

Цель исследования. Целью настоящей работы явилось определение особенностей морфофункциональных нарушений головного мозга при действии этанола и барбамила и оценка фармакотерапевтической эффективности фитосредства «Ноофит» при интоксикациях ими.

Исходя из указанной цели исследования, были сформулированы следующие задачи:

1) изучить особенности влияния этанола и барбамила на структурные изменения головного мозга крыс и связанные с ними нарушения когнитивных процессов в условиях эксперимента;

2) исследовать фармакотерапевтическую эффективность «Ноофита» при алкогольном и барбамиловом повреждениях головного мозга;

3) изучить влияние «Ноофита» на процессы обучения и памяти у ин-тактных животных и при действии факторов, вызывающих амнезию: гипоксия, электросудорожный шок;

4) выявить основные механизмы нейропротекторного действия «Ноофита».

Научная новизна. В данной работе впервые изучено нейропротекторное действие нового средства «Ноофит» при алкогольном и барбамиловом повреждениях головного мозга. В работе впервые установлена ноотропная активность «Ноофита», которая выражается в улучшении процессов обучения и памяти у интактных животных, и при действии факторов, вызывающих амнезию.

Установлено, что данное средство обладает антигипоксической, спазмолитической и противосудорожной активностью. Базисным молекулярно-клеточным механизмом нейропротекторного действия «Ноофита» является > его способность ингибировать свободнорадикальное окисление и стабилизировать биологические мембраны.

Практическая значимость работы. Экспериментально обоснована возможность коррекции фитосредством «Ноофит» морфофункциональных повреждений головного мозга этанолом и барбамилом и связанных с ними нарушений процессов обучения и памяти, что позволяет рекомендовать данное средство для клинических исследований. ' Материалы диссертационной работы используются в учебном процессе на курсах патанатомии, патофизиологии, фармакологии и клинической фармакологии медицинского факультета Бурятского государственного университета МО РФ.

Положения, выносимые на защиту:

- алкоголь и барбамил вызывают значительные морфофункциональные нарушения головного мозга в условиях эксперимента;

- новое растительное средство «Ноофит» обладает выраженной фарма-котерапевтической эффективностью при алкогольном и барбамило-вом повреждениях головного мозга;

- «Ноофит» обладает ноотропным типом действия;

- основными механизмами, определяющими нейропротекторное действие «Ноофита», следует считать его антиоксидантное, мембраноста-билизирующее, антигипоксическое, противосудорожное, спазмолитическое действия.

Апробация материалов диссертации. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на:

- научно-практической конференции «Биологически активные добавки и перспективы их применения в здравоохранении» (Улан-Удэ, 2001);

- Южно-Сибирской международной конференции студентов и молодых ученых (Абакан, 2001);

- Международной научно-практической конференции «Устойчивое развитие сельского хозяйства в бассейне озера Байкал» (Улан-Удэ, 2002);

- Всероссийской научной конференции «Актуальные проблемы адекватного питания в эндемичных регионах» (Улан-Удэ, 2002);

- IX, X Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2002, 2003);

- научно-практической конференции, посвященной 70-летию службы контроля качества лекарственных средств в Бурятии (Улан-Удэ, 2003);

- Международной научной конференции «Возрастная физиология и патология сельскохозяйственных животных», посвященной 90-летию В.Р. Филиппова (Улан-Удэ, 2003);

- научно-практической конференции «Биологически активные добавки в профилактической и клинической медицине» (Улан-Удэ, 2003).

Диссертация выполнена в лаборатории безопасности биологически активных веществ Отдела биологически активных веществ Института общей и экспериментальной биологии Сибирского отделения Российской академии наук и в соответствии с программой и планом научно-исследовательских работ (№ гос. per. 01.9.40003183) по теме: «Создание информационного банка данных по тибетской медицине и разработка новых лекарственных препаратов», утвержденной 06.12.95 года Председателем СО РАН.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 научных работ.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 135 страницах компьютерного текста и состоит из введения, пяти глав, выводов, списка литературы, включающего 233 источника, из которых 80 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 14 таблицами, 9 рисунками и 21 микрофотографиями.

выводы

Введение этанола и барбамила вызывает значительные структурные изменения преимущественно в коре головного мозга, коре мозжечка и гиппокампе и связанные с ними нарушения процессов обучения и памяти у лабораторных животных. Основными механизмами повреждающего действия этанола и барбамила являются активация свободнорадикального окисления липидов и снижение активности системы антиоксидантной защиты.

Применение «Ноофита» вызывает нормализацию морфофунк-ционального состояния головного мозга у животных на фоне алкогольной и барбамиловой интоксикаций.

Ноофит» улучшает процессы обучения и памяти у интактных животных и у крыс, подвергнутых влиянию различных факторов, вызывающих амнезию: этанола, барбамила, гипоксии, электросудорожного шока.

Механизмами нейропротекторного действия «Ноофита» являются его антиоксидантное, мембраностабилизирующее, антигипок-сическое, противосудорожное и спазмолитическое действия.

Практические рекомендации

Результаты проведенных исследований «Ноофита» позволяют рекомендовать его для исследований в наркологической клинике.

Данные, изложенные в настоящей работе, могут быть использованы в учебном процессе при чтении лекций и проведении практических занятий по морфологии и фармакологии.