Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Фармакологическая коррекция антиоксидантами этанолиндуцированных изменений интенсивности протеолиза в головном мозге

На правах рукописи

ХОДОС Ольга Александровна

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ КОРРЕКЦИЯ АНТИОКСИДАНТАМИ ЭТАНОЛИНДУЦИРОВАННЫХ ИЗМЕНЕНИЙ ИНТЕНСИВНОСТИ ПРОТЕОЛИЗА В ГОЛОВНОМ МОЗГЕ

14.03.06. - фармакология, клиническая фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

г ь янв 2015

005558318

Смоленск - 2014

005558318

Работа выполнена в Учреждении образования «Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет», на кафедре органической химии.

Научный руководитель

доктор медицинских наук, профессор Саяек Марина Михайловна

Официальные оппоненты:

Митрохин Николай Михайлович - доктор биологических наук, профессор, ОАО «Всероссийский научный центр по безопасности биологически активных веществ», генеральный директор.

Климкина Елена Ивановна - кандидат медицинских наук, доцент, ГБОУ ВПО «Смоленская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации, доцент кафедры фармакологии с курсом фармации ФПК и ППС.

Ведущая организация:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования „Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова" Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Защита состоится »„шха2015 г. в /с? &£часов

на заседании диссертационного совета Д 208.097.02 при Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Смоленская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации (214019, г. Смоленск, ул. Крупской, 28)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО «Смоленская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации, на сайте http://www.smoIgma.ru Автореферат разослан « /С» _201^г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Яйленко Анна Андриановна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы исследования

Злоупотребление алкоголем является одной из наиболее актуальных медицинских и социально-демографических проблем современного общества [Айзберг О. Р., 2007; Беленичев И.Ф. и др., 2009; Жарко В.И., 2007; Щеглова Н.С. и др., 2013; Dranitsaris G.M. et al., 2009] и занимает одно из первых мест как причина заболеваемости, смертности и сокращения продолжительности жизни населения во многих странах мира [Dranitsaris G.M. et al., 2009].

Избыточное поступление экзогенного этанола в организм сопровождается патологическими изменениями в обмене углеводов, липидов, белков, нейроме-диаторов, гормонов, активацией свободно-радикальных процессов в тканях [Вер-нигора Н. А., 2010; Пархоменко Ю. М., 2007; Щеглова Н.С. и др., 2013; Cunningham J.A., McCambridge J., 2012; George A.K. et al., 2007; Ozburn A. R. et al., 2013], которые приводят к нарушению функций и серьезному поражению всех органов, в том числе и головного мозга, с поражением структурных компонентов которого связаны психическая зависимость человека от алкоголя, развитие абстинентного синдрома [Калинина А.Г., 2009; Лелевич C.B., 2012; Feng H.J., 2007; Modi S., 2011].

Для предотвращения гибели нейронов, вызванной свободными радикалами, в настоящее время рекомендуется использование антиоксидантных лекарственных средств. Антиоксиданты используются в лечении широкого круга заболеваний, в том числе и при интоксикациях этанолом. Представителями данной группы лекарственных средств являются Мексидол (этилметилгидроксипиридина сукци-нат) и Тиотриазолин (морфолиний 3-метил-1,2,4,-триазолин-5-тиоацетат).

Для функционирования головного мозга важную роль играют протеолити-ческие ферменты, избыточная активация которых может служить одним из патогенетических механизмов повреждения ЦНС при различных заболеваниях [Mengzhou X. et al., 2009; Savage L.M. et al., 2008], однако изменение активности протеолитических ферментов на фоне потребления этанола изучено фрагментарно. В целях установления новых механизмов воздействия Мексидола и Тиотриа-золина на центральную нервную систему было проведено исследование влияния данных лекарственных средств на протеолиз на фоне интоксикации этанолом.

Степень разработанности проблемы

Вопросы применения антиоксидантов этилметилгидроксипиридина сукци-нат (Мексидол) и морфолиний 3-метил-1,2,4,-триазолин-5-тиоацетат (Тиотриазо-

лин) главным образом освящены в работах отечественных ученых. Особенности фармакологических эффектов Мексидола и возможность его применения в различных отраслях медицины исследовались многими авторами [Андреева H.H., 2009; Братко В.И., 2012; Воронина Т.А., 2009, 2012; Короткина Р.Н., 2006; Ма-ранчева Н.М., 2012; Новиков В.Е., Лосенкова С.О., 2004; Павлов И.С., Медведева JI.A. 2005; Попова O.A., 2013; Тарасова Е. Ю., Коростелева В.П., Ямашев Т.А., 2014; Яковлев В.А., 2005 и др.]. Большое количество исследований также было проведено по изучению лекарственного средства Тиотриазолин [Визир В.А., 2006; Гарелик П.В., Колешко C.B., Зинчук В.В., 2009; Дунаев В.В., 2007; Ковш Е.В., 2010; Мацкевич С.А., 2010; Опрышко В.И., 2012; Сиренко Ю.Н., 2012; Якименко Д.О., Шутурминский В.Г., Чулак O.JL, 2013 и др.]. Тем не менее, несмотря на широкий круг научных вопросов, отраженных в данных исследованиях, изучение способности Мексидола и Тиотриазолина оказывать влияние на активность трип-синоподобных и цистеиновых протеиназ, а также регулировать протеолиз при интоксикации этанолом в ткани головного мозга и сыворотке крови ранее не проводилось.

Диссертационная работа выполнена в рамках гранта Белорусского республиканского фонда фундаментальных исследований «Роль протеолитических ферментов и их эндогенных ингибиторов в развитии нейродегенеративных процессов при алкогольном поражении головного мозга», договор № Б11М-049 от 15 апреля 2011 года,№ гос. регистрации: 20113420, дата регистрации: 19.09.2011 года.

Цель исследования

Изучить влияние антиоксидантов Мексидол (этилметилгидроксипиридина сукцинат) и Тиотриазолин (морфолиний 3-метил-1,2,4,-триазолин-5-тиоацетата) на протеолиз в ткани головного мозга.

Задачи исследования

1. Изучить активность протеиназ и их эндогенных ингибиторов в ткани головного мозга и сыворотке крови крыс при однократном и длительном введении этанола.

2. Установить влияние Мексидола на интенсивность протеолиза в ткани головного мозга и сыворотке крови крыс при длительном приеме этанола.

3. Оценить эффекты Тиотриазолина на активность протеолитических ферментов и их эндогенных ингибиторов в ткани головного мозга и сыворотке крови крыс при длительном применении этанола.

Научная новизна исследования

Впервые проведено исследование влияния этанола (в моделях однократного и хронического введения) на активность протеолитических ферментов и их эндогенных ингибиторов в ткани головного мозга и сыворотке крови в эксперименте.

Изучено влияние Мексидола на активность протеиназ и их ингибиторов в ткани больших полушарий, мозжечка и в сыворотке крови крыс при длительном потреблении этанола.

Исследовано воздействие Тиотриазолина на интенсивность протеолиза в ткани больших полушарий, мозжечке и сыворотке крови экспериментальных животных при длительном приеме этанола.

Изучено влияние Мексидола и Тиотриазолина на протеолиз в эксперименте in vitro.

Теоретическая и практическая значимость работы

Теоретическая значимость представленного диссертационного исследования заключается в расширении и углублении современных знаний о механизмах развития алкогольного повреждения центральной нервной системы. Установлено, что хроническая алкогольная интоксикация приводит к нарушению нормального физиологического баланса в системе протеиназы-эндогенные ингибиторы в ткани головного мозга и сыворотке крови. Обнаружено, что Мексидол и Тиотриазолин способны восстанавливать протеиназо-ингибиторный баланс в ткани головного мозга после длительной хронической алкогольной интоксикации.

Практическая значимость. Проведенные исследования показывают, что Мексидол и Тиотриазолин в эксперименте влияют на систему протеолиза в ткани головного мозга и сыворотке крови при алкогольном поражении головного мозга, поэтому целесообразно проведение клинических испытаний для подтверждения нового свойства лекарственных средств Мексидол и Тиотриазолин: способность нормализовать протеиназо-ингибиторный баланс в сыворотке крови лиц с алкогольным поражением головного мозга, что в дальнейшем может быть использовано для проведения патогенетически обоснованной терапии.

Методология и методы исследований

Объектом исследования являлись экспериментальные животные (самцы крыс линии «Wistar»).

Предметом исследования была активность протеолитических ферментов и их эндогенных ингибиторов при алкогольном поражении головного мозга.

В работе использовались следующие методы:

- Биохимические: определение активности протеиназ и их эндогенных ингибиторов, определение содержания белка в ткани головного мозга крыс.

- Гистоморфологические исследования головного мозга крыс.

- Физико-химические: определение концентрации этанола в крови с помощью газовой хроматографии.

Основные положения, выносимые на защиту

1. При однократном внутрибрюшинном введении 25 % раствора этанола в дозе 2,5 грамм на килограмм массы тела животного не отмечено изменения интенсивности протеолиза в ткани головного мозга, тогда как выявлено нарушение протеиназо-ингибиторного баланса в сыворотке крови крыс через 90 минут после введения этанола: отмечено повышение активности эндогенных ингибиторов цис-теиновых протеиназ.

2. Этанол при длительном потреблении (в течение 16 и 29 недель) вызывает нарушение баланса активности протеолитических ферментов и их эндогенных ингибиторов: в ткани головного мозга наблюдается увеличение активности трипси-ноподобных и цистеиновых протеиназ и снижение активности эндогенных ингибиторов трипсиноподобных протеиназ, тогда как активность эндогенных ингибиторов цистеиновых протеиназ в ткани головного мозга не подвергается изменению; в сыворотке крови экспериментальных животных при потреблении этанола в течение 16 недель увеличивается активность агпротеиназного ингибитора, в то время как через 29 недель отмечается снижение активности агпротеиназного ингибитора и а2-макроглобулина. При длительном потреблении этанола в сыворотке крови не изменяется общая протеолитическая активность и активность эндогенных ингибиторов цистеиновых протеиназ.

3. Мексидол в дозе 10 мг/кг массы тела восстанавливает протеиназо-ингибиторный баланс: активность трипсиноподобных протеиназ и их эндогенных ингибиторов в ткани головного мозга крыс восстанавливается до уровня контрольных значений через 1 сутки после отмены этанола, активность цистеиновых протеиназ в ткани головного мозга, а также активность агпротеиназного ингибитора и а2-макроглобулина сыворотки крови стабилизируется до уровня контроля через 7 суток. Мексидол не обладает прямым ингибирующим действием на активность протеиназ в опытах in vitro, однако несколько увеличивает активность агпротеиназного ингибитора в сыворотке крови крыс, не подвергавшихся воздействию этанола, тогда как не влияет на другие изучаемые показатели как в ткани головного мозга, так и в сыворотке крови.

4. Тиотриазолин в дозе 50 мг/кг массы тела восстанавливает баланс активности трипсиноподобных протеиназ и их эндогенных ингибиторов в ткани головного мозга крыс через 7 суток после отмены этанола, активность цистеиновых протеиназ и их эндогенных ингибиторов - через 3 суток. Тиотриазолин частично восстанавливает протеиназо-ингибиторный баланс сыворотки крови: активность ai-протеиназного ингибитора через 7 суток остается ниже уровня контрольных значений. Тиотриазолин не оказывает влияния на ггротеолиз в ткани головного мозга и сыворотке крови крыс, не подвергавшихся воздействию этанола и в эксперименте in vitro.

Степень достоверности и апробация результатов

Степень достоверности результатов исследования достигнута за счет применения в качестве методологической базы фундаментальных трудов зарубежных и отечественных ученых в области фармакологии, биохимии, статистики.

Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на следующих научных мероприятиях: 1-м международном медицинском конгрессе студентов и молодых ученых «MedEspera 2006» (Молдова, Кишинев, 2006г.); 59-й итоговой научно-практической конференции студентов и молодых ученых «Актуальные вопросы современной медицины и фармации» (Витебск, ВГМУ, 2007г.); международной конференции «Протеолиз, механизмы его регуляции и роль в физиологии и патологии клетки» (Минск, 25 - 26 октября 2007г.); 3-ем съезде токсикологов России (Москва, 2-5 декабря 2008 г.); 9-й международной научно-практической конференции студентов и молодых ученых «Студенческая медицинская наука 21 века» (Витебск, ВГМУ 2009г.); международной научно-практической конференции «Белорусские лекарства» (HAH Беларуси, Минск, 2 — 3 ноября 2010 г.); 66-й научной сессии университета «Достижения фундаментальной, клинической медицины и фармации» (Витебск, ВГМУ, 2011г.); 11-й международной научно-практической конференции студентов и молодых ученых «Студенческая медицинская наука 21 века» (Витебск, ВГМУ, 2011г.); Всероссийской научной конференции с международным участием «Дни биохимии в СПбГМУ» (Санкт-Петербург, 13-15 марта 2011 г.).

Диссертационная работа получила положительную оценку на совместном заседании научного межкафедрального семинара кафедр общей и клинической биохимии, органической химии, общей и клинической фармакологии с курсом ФПК и ПК, патологической физиологии, нормальной физиологии, патологической анатомии, судебной медицины, неврологии и нейрохирургии, психиатрии и наркологии, а также проблемной комиссии «Профилактика зависимости человека

от психоактивных веществ» УО «Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет» (протокол № 7 от 19 ноября 2014 г.).

Личный вклад соискателя

Соискателем самостоятельно осуществлялся подбор лабораторных животных для экспериментов, выполнялся контроль потребления животными растворов этанола и воды, взвешивание крыс, наблюдения за ними. Лично автором были подготовлены образцы крови для определения концентрации этанола, образцы сыворотки крови, приготовлены экстракты головного мозга для дальнейших биохимических исследований, произведена фиксация образцов головного мозга для морфологических исследований. Автором самостоятельно выполнены следующие методы исследований: определение активности трипсиноподобных протеиназ сыворотки крови, активности ах-протеиназного ингибитора, а2-макроглобулина и эндогенных ингибиторов цистеиновых протеиназ сыворотки крови; определение активности трипсиноподобных и цистеиновых протеиназ и их эндогенных ингибиторов в экстрактах ткани головного мозга крыс; определите содержания белка в сыворотке крови и экстрактах ткани головного мозга; определение концентрации этанола в крови. Диссертантом самостоятельно произведены математические расчеты, проведена статистическая и графическая обработка полученных данных, интерпретация результатов исследования, теоретическое обобщение результатов и написание работы. Морфологические исследования проводились на базе кафедры патологической анатомии УО «Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет». Выбор темы исследования, планирование работы и ее методическое решение, а также аналитическая трактовка полученных результатов осуществлялись совместно с научным руководителем.

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 27 печатных работ, из них 2 в научных журналах, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки Российской Федерации, 8 в научных журналах, включенных в перечень изданий, рекомендованных ВАК Республики Беларусь.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 177 стандартных страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов ис-

следований, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов и практических рекомендаций.

Работа иллюстрирована 60 рисунками и документирована 12 таблицами. В список литературы, использованной для написания диссертации, включено 292 источника, из которых 166 работ отечественных и 126 работ зарубежных авторов.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

Настоящая работа выполнена на кафедре органической химии и на базе ЦНИЛ УО «Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет». Эксперименты проводились на самцах крыс линии «Wistar» (п=343), поставляемых из питомника «Рапполово» (Российская Федерация). В работе использовали три модели алкогольной интоксикации:

- острая алкогольная интоксикация, которая воспроизводилась путем однократного внутрибрюшинного введения экспериментальным животным опытных групп 25% раствора этилового спирта в дозе 2,5 грамм этанола на килограмм массы тела животного (Давыдов Б.И. и др., 1991, Hayashi М. et al., 2006).

- полупринудительная хроническая алкогольная интоксикация длительностью 4 месяца, которая достигалась путем ежедневного предоставления экспериментальным животным 30% раствора этилового спирта (Попова Э.Н., 1997).

- полупринудительная хроническая алкогольная интоксикация в течение 29 недель путем предоставления животным опытных групп 15% раствора этанола ad libitum (Пауков С. В. и др., 2001, Gericke С. A. et al., 2006, Museridze D. P. et al., 2006, Razvodovskii Yu. E. et al., 2005). Для данной экспериментальной модели предварительно проводилась оценка чувствительности центральной нервной системы к действию этанола и отбор животных, предрасположенных к добровольному потреблению алкоголя с помощью теста «этанолового наркоза» (Ю.В. Буров, Н.Н. Ведерникова, 1985). Для эксперимента использовали только животных, предрасположенных к добровольному потреблению алкоголя. Введение лекарственных препаратов опытным группам крыс осуществлялось в хвостовую вену в следующих дозах: Мексидол - 10 мг/кг массы тела животного, Тиотриазолин - 50 мг/кг массы тела животного.

Активность протеолитических ферментов и их эндогенных ингибиторов в экстракте ткани головного мозга и сыворотке крови крыс определяли спектрофото-метрически по интенсивности расщепления высокостабильного в растворе, низкомолекулярного хромогенного субстрата Ы-а-бензоил-В,Ь-аргинин-пара-нитроанилида (БАПНА). Для определения активности протеиназ в сыворотке

крови применяли метод, описанный Erlanger В. и др.(1961 г.). При определении активности ai-протеиназного ингибитора и а2-макроглобулина сыворотки крови в качестве базовой использовали методику, предложенную Хватовым Т.А. и Беловой В.Б. (1981 г.). При изучении эндогенных ингибиторов цистеиновых протеиназ в сыворотке крови применяли метод Lenney J.F. (1979 г.). Эти методики были модифицированы для изучения активности трипсиноподобных и цистеиновых протеиназ и их эндогенных ингибиторов в экстрактах ткани головного мозга крыс. Содержание белка в экстрактах больших полушарий головного мозга и мозжечков крыс определяли по методу Lowry О.Н. et al. (1951 г.).

Для гистологических исследований срезы окрашивали гематоксилином и эозином и по Нисслю. Структурно-функциональную организацию в срезах коры головного мозга экспериментальных животных изучали микроскопически при увеличении хЮ, 20, 40, 100, 200, 400.

Концентрацию этилового спирта в крови экспериментальных животных контролировали с помощью метода газовой хроматографии путем анализа равновесной парогазовой фазы над жидкостью, для чего использовали газовый хроматограф «Цвет 500М» с пламенно-ионизационным детектором (Шишкин С.Н. и др., 1988, Столяров Б.В. и др., 1988).

Статистическая обработка полученных данных проводилась с использованием пакета прикладных компьютерных программ. Для сравнения групп использовали непараметрические методы: тест Краскела-Уоллиса (ANOVA по Краскелу-Уоллису) и тест Манна-Уитни, применяли поправку Бонферрони при оценке значения р. При представлении результатов статистического анализа приводили данные медианы, доверительные интервалы для каждой из групп, название статистического критерия и точное значение р (Реброва О.Ю., 2003).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Этанол при однократном внутрибрюшинном введении экспериментальным животным в дозе 2,5 грамм на килограмм массы тела не изменял по сравнению с ко1гтролем активность протеиназ и их эндогенных ингибиторов в ткани головного мозга. При этом в сыворотке крови активность эндогенных ингибиторов цистеиновых протеиназ увеличивалась на 87 % через 90 минут после внутрибрюшинного введения животным раствора этанола.

При хронической интоксикации этанолом в течение 16 недель в ткани головного мозга активность трипсиноподобных протеиназ увеличивалась на 184,55 %, а через 24 часа после отмены этанола - на 241,05 %. Активность ингибиторов трипсиноподобных протеиназ головного мозга крыс через 24 часа после отмены этанола снижалась на 19,04 % по отношению к контролю. Активность лизосо-

мальных цистеиновых протеиназ снижалась по сравнению с контролем на 38,69 % при хронической алкогольной интоксикации и увеличивалась на 78,06 % при отмене этанола. В сыворотке крови общая протеолитическая активность и активность а2-макроглобулина не подвергалась изменению по отношению к контролю, тогда как активность агпротеиназного ингибитора при отмене этанола увеличивалась на 6,02 %. Активность эндогенных ингибиторов цистеиновых протеиназ сыворотки крови при хронической алкогольной интоксикации длительностью 16 недель увеличивалась по сравнению с контролем на 126,08 % и соответствовала контролю при отмене этанола.

При интоксикации этанолом длительностью 29 недель в ткани больших полушарий головного мозга активность трипсиноподобных протеиназ через 1 сутки после прекращения доступа животных к раствору этилового спирта увеличилась по сравнению с контролем на 94,59 % (р=0,0042), тогда как через 3 и 7 суток она не отличалась от контрольных значений (р=0,4750, р=0,1985 (таблица 1). Активность трипсиноподобных протеиназ в экстрактах ткани мозжечка крыс через 1 сутки после отмены этанола увеличивалась на 88,01 % по отношению к контролю (р=0,0066). Через 3 и 7 суток отмены этанола данный показатель соответствовал контрольным значениям (р=0,5677 и р=0,1160 соответственно).

Таблица 1

Активность протеиназ и их эндогенных ингибиторов в экстракте ткани больших полушарий головного мозга и мозжечке крыс

Показатель Контрольная группа ] сутки после отмены этанола 3 суток после отмены этанола 7 суток после отмены этанола

Большие полушария головного мозга

Активность трипсиноподобных протеиназ, нмоль/ч-мг белка 50,604 (42,013 -68,243) 98,472* (77,794128,230) 56,925 (40,36287,339) 44,245 (38,60755,843)

Активность эндогенных ингибиторов трипсиноподобных протеиназ, нмоль/с-мг белка 0,488 (0,429-0,508) 0,388* (0,352-0,403) 0,374* (0,353 - 0,401) 0,363* (0,343-0,392)

Активность цистеиновых протеиназ, нмоль/чмг белка 18,737 (14,844 -21,822) 31,395 (21,48238,951) 32,293* (22,969^46,032) 22,773 (6,24057,180)

Активность эндогенных ингибиторов цистеиноивых протеиназ, нмоль/ч-мг белка 20,736 (15,545 -29,109) 19,391 (9,290 - 45,069) 15,557 (7,589-28,176) 24,335 (17,80431,662)

Продолжение таблицы 1 Ткапь мозжечка

Активность трипсиноподобных протеиназ, нмоль/ч-мг белка 35,054 (25,07949,423) 65,908* (52,10087,900) 34,709 (27,31554,254) 28,367 (24,39833,957)

Активность эндогенных ингибиторов трипсиноподобных протеиназ, нмоль/с-мг белка 0,498 (0,478-0,549) 0,451* (0,415-0,467) 0,444 (0,421-0,488) 0,481 (0,433 - 0,509)

Активность цистеиновых протеиназ, нмоль/чмг белка 28,243 (22,914 -35,898) 37,782 (28,65650,073) 32,486 (25,54639,434) 27,918 (23,32634,497)

Активность эндогенных ингибиторов цистеиновых протеиназ, нмоль/ч-мг белка 26,964 (19,725 -31,066) 21,099 (9,836 - 25,319) 24,316 (20,36630,339) 22,834 (13,94227,048)

Примечания:

1. Данные представлены в виде медианы (-95% - +95%) - доверительный интервал.

2* - статистически значимые различия показателей по отношению к контролю

Активность эндогенных ингибиторов трипсиноподобных протеиназ в больших полушариях головного мозга крыс через 1 сутки после отмены этанола уменьшалась на 20,55 % (р=0,0027) по сравнению с контрольной группой, через 3 суток - снижалась на 23,32 % (р=0,0042), через 7 суток - на 25,69 % (р=0,0027). Активность эндогенных ингибиторов трипсиноподобных протеиназ в экстракте ткани мозжечка через 1 сутки после отмены этанола по отношению к контролю снижалась на 9,41 % (р=0,0027), а через 3 и 7 суток не отличалась от контроля (р=0,0222 и р=0,1160). Таким образом, изменения активности трипсиноподобных протеиназ в экстракте ткани больших полушарий головного мозга и мозжечке крыс при хронической алкогольной интоксикации длительностью 29 недель носили однонаправленный характер. Активность кислых лизосомальных цистеиновых протеиназ в больших полушариях головного мозга не отличалась от контроля через 1 сутки отмены алкоголя, через 3 суток увеличивалась на 72,34 % (р=0,0042), тогда как к 7 суткам вновь устанавливалась на уровне контрольных значений (р=0,2530). Изменения активности цистеиновых протеиназ в экстракте мозжечка не были статистически значимыми (р=0,1480). Активность эндогенных ингибиторов цистеиновых протеиназ в экстрактах ткани больших полушарий головного мозга и мозжечке не изменялась ни в один из сроков отмены этанола.

В сыворотке крови при хронической интоксикации этанолом длительностью 29 недель изменения общей протеолитической активности не были статистически значимыми (р=0,1797). Активность cti-протеиназного ингибитора через 1 сутки отмены этанола не отличалась от контроля, тогда как через 3 суток снижалась на 11,44 % (0,0027), а через 7 суток - на 9,49 % (р=0,0027). Активность а2-макроглобулина снижалась по сравнению с контролем через 1 сутки после отмены этанола на 52,63 % (р=0,0044), 3 суток - 42,98 % (р=0,0027), 7 суток - 48,24 % (р=0,0027), тогда как активность эндогенных ингибиторов цистеиновых протеиназ в сыворотке крови крыс данных экспериментальных групп не подвергалась изменению пи в один из изучаемых сроков после отмены этанола. Полученные данные свидетельствуют о том, что после хронической интоксикации этанолом длительностью 29 недель происходит нарушение нормального физиологического баланса в системе протеиназы/эндогенные ингибиторы в ткани больших полушарий головного мозга, мозжечке, а также сыворотке крови экспериментальных животных.

При изучении гистологических срезов головного мозга было установлено, что острая и хроническая интоксикация этанолом приводили к нарушениям в гистологической организации головного мозга, что выражалось в изменениях микро-циркуляторного русла, развитии в нейроцитах реактивных, дистрофически-атрофических и дистрофически-некротических изменений, а также значительном снижении содержания в них тигроида. Увеличение срока интоксикации этанолом приводило к нарастанию выраженности этих изменений.

Нарушение протеиназо-ингибиторного баланса и гистологической организации головного мозга может служить основанием для применения фармакологической коррекции. Для этой цели были выбраны антиоксиданты Мексидол и Тиот-риазолин.

Проведенные исследования показали, что антиоксиданты Мексидол и Тиот-риазолин не оказывали влияния на протеолиз in vitro. Полученные результаты могут свидетельствовать о том, что, видимо, Мексидол и Тиотриазолин не обладают прямым эффектом на интенсивность протеолиза in vitro, что не исключает возможности регуляции активности протеолитических ферментов и их эндогенных ингибиторов in vivo опосредованным путем.

Введение Мексидола животным, у которых не было доступа к этанолу, не оказало влияния на протеолиз в головном мозге крыс. В сыворотке крови крыс, не подвергавшихся воздействию этанола, введение Мексидола увеличило активность ai-протеиназного ингибитора на 2,6% (р=0,0081) через 3 суток, но не оказало влияния на данный показатель в другие изучаемые сроки. При этом Мексидол не оказазывал влияния на другие показатели, изучаемые в сыворотке крови.

Тиотриазолин не оказывал воздействия на протеолиз ни в ткани головного мозга, ни в сыворотке крови крыс, не имевших достуйа к раствору этанола.

Проведение фармакологической коррекции с помощью антиоксидантов Мексидол и Тиотриазолин способствовало нормализации протеолиза после хронической интоксикации этанолом (таблица 2). Так, на фоне введения Мексидола и Тиотриазолина, активность трипсиноподобных протеиназ в экстрактах ткани больших полушарий головного мозга и мозжечка крыс стабилизировалась до уровня контроля во все сроки отмены этанола.

Введение Мексидола нормализовало активность эндогенных ингибиторов трипсиноподобных протеиназ на уровне контрольных значений в больших полушариях головного мозга и в мозжечке крыс в изучаемые сроки отмены этанола. После применения препарата Тиотриазолин активность эндогенных ингибиторов трипсиноподобных протеиназ в больших полушариях головного мозга крыс через 1 сутки после отмены этанола не отличалась от контроля (р=0,3173), через 3 суток увеличивалась на 16,59% (р-0,0066), через 7 суток происходила нормализация данного показателя до контрольного уровня (р=0,0222). Активность эндогенных ингибиторов трипсиноподобных протеиназ в ткани мозжечка после введения Тиотриазолина стабилизировалась на уровне контрольных значений через 1, 3 и 7 суток после отмены этанола.

При использовании Мексидола активность кислых лизосомальных цистеи-новых протеиназ в больших полушариях головного мозга через 1 сутки после отмены этанола увеличивалась на 97,96% (р=0,0023) в сравнении с контролем, через 3 суток - на 71,24% (р-0,0011), а через 7 суток не отличалась от контроля (р=0,4452). После введения препарата Тиотриазолин активность цистеиновых протеиназ в ткани больших полушарий головного мозга через 1 сутки после отмены этанола увеличивалась на 128,35% (р=0,0011), а через 3 (р=0,8356) и 7 суток (р=0,0512) стабилизировалась до уровня контрольных значений. В мозжечке активность цистеиновых протеиназ после фармакологической коррекции с помощью этилметилгидроксипиридина сукцината и тиотриазолина соответствовала контролю во все сроки отмены этанола (р=0,4694).

Активность эндогенных ингибиторов кислых лизосомальных цистеиновых протеиназ в ткани больших полушарий головного мозга (р=0,2546) и мозжечка (р=0,1436) не отличалась от контроля как при разных сроках отмены этанола, так и при использовании фармакологической коррекции.

Таблица 2

Активность иротеиназ и их ингибиторов в ткани головного мозга крыс при хронической интоксикации этанолом на фоне фармакологической коррекции

Показатель Контрольная группа I сутки после отмены этано- ла+ Мекси-дол 1 сутки после отмены этано-ла+Тиот риазо-лин 3 суток после отмены этанола+ Мексидол 3 суток после отмены этано-ла+ Ти-отриазо-лин 7 суток после отмены эта- нола+ Мексидол 7 суток после отмены этано-ла+ Ти-отриазо-лин

Большие полуша| >ия головного мозга

Активность трипсино-подобных протеиназ, нмоль/ч-мг белка. 50,604 71,833 62,151 55,585 72,636 40,945 63,544

(42,013 68,243) (50,42385,352) (50,06773,5499) (35,21086,919) (66,01281,261) (27,83956,911) (47,22278,437)

Активность эндогенных ингибиторов трип-синопо-добных протеиназ, нмоль/с-мг белка. 0,488 0,425 0,427 0,395 0,569* 0,439 0,547

(0,429 0,508) (0,3750,459) (0,3940,498) (0,3460,438) (0,5190,637) (0,3740,486) (0,4950,592)

Активность ЦИСТЕ ино- вых протеиназ, нмоль/ч-мг белка. 18,737 37,093* 42,787* 32,087* 19,208 22,751 29,863

(14,844 21,822) (23,89458,540) (27,82953,317) (26,14049,384) (3,31461,188) (9,66743,000) (16,63238,844)

Активность эндогенных ингибиторов цис-теиновых протеиназ, нмоль/ч-мг белка. 20,736 31,816 25,696 26,998 22,770 25,426 36,937

(15,545 29,109) (28,76734,594) (20,68230,096) (17,21036,776) (12,55234,892) (16,02337,075) (21,64242,898)

Ткань мозжечка

Активность трипсино-подобных протеиназ, нмоль/ч-мг белка. 35,054 33,535 32,595 29,979 29,823 34,044 27,274

(25,079 49,423) (22,92948,333) (22,13937,225) (20,46039,615) (22,55137,592) (20,47244,981) (19,27943,796)

П эодолжение таблицы 2

Активность эндогенных ингибиторов трипсиноподобных протеиназ, нмоль/с-мг белка. 0,498 0,451 0,491 0,423 0,538 0,487 0,533

(0,478 0,549) (0,4120,486) (0,4280,548) (0,3820,482) (0,5060,577) (0,4570,534) (0,4990,562)

Активность цистеиновых протеиназ, нмоль/ч-мг белка. 28,243 30,031 32,808 26,073 32,559 25,896 36,961

(22,914 35,898) (25,54632,829) (18,24543,252) (18,36236,114) (25,45736,948) (19,66533,423) (25,23744,804)

Активность эндогенных ингибиторов цистеиновых протеиназ, нмоль/ч-мг белка. 26,964 24,163 29,416 29,660 23,317 30,906 26,312

(19,725 31,066) (18,50729,731) (25,13937,298) (22,51137,136) (14,81429,525) (21,39137,186) (15,11734,178)

Примечания:

1. Данные представлены в виде медианы, (-95% - +95%) - доверительный интер--вал.

2* — статистически значимые различия показателей по отношению к контролю.

Таким образом, использование Мексидола и Тиотриазолина способствовало восстановлению протеиназо-ингибиторного баланса в ткани больших полушарий головного мозга и мозжечке крыс при хронической алкогольной интоксикации на фоне отмены этанола. Мексидол нормализует активность трипсиноподобных про-теиназ и их эндогенных ингибиторов в ткани больших полушарий головного мозга и мозжечке крыс до уровня контрольных значений во все изученные сроки отмены этанола, при этом приводит к стабилизации активности цистеиновых про-теиназ больших полушарий головного мозга только к 7 суткам. Тиотриазолин стабилизирует активность эндогенных ингибиторов трипсиноподобных протеиназ в ткани больших полушарий головного мозга крыс до уровня контрольных значений через 7 суток после отмены этанола, устраняет дисбаланс активности цистеиновых протеиназ и их эндогенных ингибиторов через 3 суток, тогда как в ткани мозжечка нормализует все исследуемые показатели через 1 сутки после отмены этанола.

В сыворотке крови изменения общей протеолитической активности после введения препаратов Мексидол и Тиотриазолин не были статистически значимыми во все сроки отмены этанола. После использования Мексидола активность а1-протеиназного шнпбитора сыворотки крови снижалась на 8,94% (р=0,0042) через 3 суток после прекращения доступа к раствору этанола, тогда как через 1 и 7 суток не отличался от контроля (р=0,0184 и р=0,0222 соответственно), а без введения препарата оставалась сниженной на 3 и 7 сутки. При введении Тиотриазолина активность агпротеиназного ингибитора через 1 сутки после отмены этанола не отличалась от контроля (р=0,0222), тогда как через 3 суток уменьшалась на 10,67% (р=0,0082), а через 7 - на 12,32% (р=0,0027).

При введении Мексидола через 1 сутки после отмены этанола активность а2-макроглобулина была на 46,49% ниже по отношению к контролю (р=0,0066), через 3 суток — на 53,07% ниже (р=0,0027), а спустя 7 суток восстанавливалась до контрольных значений (р=0,5203). Активность аг-макроглобулина сыворотки крови после применения препарата Тиотриазолин уменьшалась через 1 сутки отмены этанола на 59,21% (р-0,0082), но нормализовалась до контрольных значений уже через 3 и 7 суток (р=0,0124 и р=0,1160 соответственно). При введении Мексидола и Тиотриазолина активность эндогенных ингибиторов цистеиновых протеиназ в сыворотке крови крыс не подвергалась изменению ни в одном случае независимо от срока отмены этанола.

Таким образом, применение Мексидола позволяет полностью стабилизировать все изучаемые показатели в сыворотке крови через 7 суток после отмены этанола. Однако, использование Тиотриазолина оказалось менее эффективным в отношении арпротеиназного ингибитора так как даже через 7 суток после отмены этанола на фоне применения указанного лекарственного средства данный показатель оставался несколько сниженным по сравнению с контролем.

При изучении гистологической структуры головного мозга, было обнаружено, что применение Мексидола сопровождалось положительным его воздействием на состояние сосудов микроциркуляторного русла, что выражалось, главным образом, в нормализации сосудистого тонуса с исчезновением участков спазми-рования сосудов, оптически пустых капилляров, уменьшении степени периваску-лярного отека уже к исходу 1 сугок после его введения. По сравнению с группой животных, которым препарат не вводили, увеличивалось количество клеток с явлениями компенсаторно-приспособительного характера (увеличение количества клеток с высоким содержанием тигроида). Введение Тиотриазолина после хронической алкогольной интоксикации на фоне отмены этанола также способствовало уменьшению выраженности в нейроцитах дистрофически-атрофических и дистрофически-некротических изменений.

Данные результаты свидетельствуют о том, что Мексидол и Тиотриазолин при хронической интоксикации этанолом способны нормализовать активность протеолитических ферментов и их эндогенных ингибиторов в ткани больших полушарий головного мозга и мозжечка, а также оказывать положительное воздействие на гистологическую структуру головного мозга.

ВЫВОДЫ

1. При однократной острой алкогольной интоксикации в головном мозге не установлено статистических значимых различий активности трипсиноподобных и цистеиновых протеиназ, а также их эндогенных ингибиторов, тогда как в сыворотке крови через 90 минут после введения этанола на 87% увеличивалась активность эндогенных ингибиторов цистеиновых протеиназ (р=0,0012), при этом отмечены нарушения структурно-функциональной организации головного мозга: происходят изменения микроциркуляторного русла, в нейроцитах развиваются реактивные, дистрофически-атрофические и дистрофически-некротические изменения, значительно снижается содержание тигроида в нейроцитах.

2. Хроническая интоксикация этанолом приводит к нарушению протеиназо-ингибиторного баланса в ткани головного мозга и сыворотке крови крыс, а также вызывает гемодинамические нарушения в микроциркуляторном русле головного мозга и, как следствие, нарастание в динамике метаболических (снижение содержания в нейроцитах вещества Ниссля) и необратимых дистрофических изменений атрофического (карио- и цитопикноз) и некротического (карио- и цитолизис, ка-риорексис) характера, что определяет нарушение функциональной активности головного мозга.

3. Мексидол нормализует активность трипсиноподобных протеиназ и их эндогенных ингибиторов в ткани больших полушарий головного мозга и мозжечке крыс до уровня контрольных значений во все изученные сроки отмены этанола, при этом приводит к стабилизации активности цистеиновых протеиназ больших полушарий головного мозга только к 7 суткам (р=0,4452). Мексидол способствует нормализации протеиназо-ингибиторного баланса сыворотки крови через 7 суток после отмены этанола. При хронической алкогольной интоксикации Мексидол оказывает вазо- и нейропротекгорное действие на ткань головного мозга, что определяется его модулирующим влиянием на метаболизм в ткани головного мозга и состояние гемодинамики, о чем свидетельствовали повышение содержания вещества Ниссля, снижение деструктивных процессов в нейроцитах и вазомоторных нарушений в микроциркуляторном русле.

4. Тиотриазолин стабилизирует активность трипсиноподобных протеиназ и их эндогенных ингибиторов в ткани больших полушарий головного мозга крыс до уровня контрольных значений через 7 суток после отмены этанола (р=0,0222), а в ткани мозжечка через 1 сутки, в то время как дисбаланс активности цистсиновых протеиназ и их эндогенных ингибиторов устраняется в ткани больших полушарий головного мозга через 3 суток (р=0,8356), а в ткани мозжечка через 1 сутки после отмены этанола (р=0,4694). Тиотриазолин частично восстанавливает протеиназо-ингибиторный баланс сыворотки крови в изучаемые сроки отмены этанола: он стабилизирует общую протеолитическая активность, активность эндогенных ингибиторов цистеиновых протеипаз и а2-макроглобулина, однако активность аг протеиназного ингибитора через 7 суток остается достоверно ниже контроля (р=0,0027). Введение тиотриазолина нормализует энергетический метаболизм в нервной ткани, оказывает стимулирующее действие на синтетические процессы в клетках, определяет повышение синтеза рибонуклеопротеидов с увеличением содержания вещества Ниссля и снижение выраженности деструктивных изменений нейроцитов.

5. Мексидол и Тиотриазолин в эксперименте in vitro не влияют на активность трипсиноподобных, цистсиновых протеиназ и их эндогенных ингибиторов в экстракте ткани головного мозга крыс, а также не оказывают влияния на общую протеолитическую активность, активность ai-протеиназного ингибитора, а2-макроглобулина и активность эндогенных ингибиторов цистеиновых протеиназ в сыворотке крови крыс.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Проведенные экспериментальные исследования позволяют предположить, что Мексидол и Тиотриазолин могут нормализовать баланс протеиназ и их эндогенных ингибиторов в ткани головного мозга и сыворотке крови при алкогольном поражении головного мозга у людей. Поэтому можно рекомендовать проведение клинических испытаний для подтверждения нового свойства лекарственных средств Мексидол и Тиотриазолин: способность нормализовать протеиназо-ингибиторный баланс в сыворотке крови лиц с алкогольным поражением головного мозга, что в дальнейшем может быть использовано для проведения патогенетически обоснованной терапии.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Ходос, O.A. Особенности протеолиза в ткани головного мозга крыс при хронической алкогольной интоксикации / O.A. Ходос, Л.Г. Гидранович, М.М.

Сачек // Вестник Витебского государственного медицинского университета. — 2008. - Т. 7. - №1. - С. 24 - 31.

2. Ходос, O.A. Активность протеиназ и их эндогенных ингибиторов в экстракте ткани головного мозга и сыворотке крови крыс при острой алкогольной интоксикации / O.A. Ходос, Л.Г. Гидранович, М.М. Сачек // Вестник Витебского государственного медицинского университета. - 2011. - Т. 10. -№2.-С. 20-25.

3. Ходос, O.A. Воздействие этилметилгидрокснпиридина сукцината н ти-отриазолина на структурно-функциональную организацию головного мозга крыс после хронической интоксикации этанолом / O.A. Ходос, И.В. Самсоно-ва, Л.Г. Гидранович, М.М. Сачек // Вестник Витебского государственного медицинского университета. — 2011. - Т.10. — №3. — С 158 —167.

4. Ходос, O.A. Влияние препарата тиотриазолин на активность протеиназ и их ингибиторов в ткани головного мозга крыс после хронической интоксикации этанолом / O.A. Ходос, Л.Г. Гидранович, М.М. Сачек // Вестник Витебского государственного медицинского университета. — 2011. — Т.10. — №3. — С 168-177.

5. Ходос, O.A. Эффекты этанола на протеолиз в ткани головного мозга и сыворотке крови экспериментальных животных / O.A. Ходос II Проблемы здоровья и экологии. -2011.- Т.29. - №3. - С. 122 -127.

6. Ходос, O.A. Влияние этилметилгидрокснпиридина сукцината на протеолиз в ткани головного мозга крыс после хронической интоксикации этанолом / O.A. Ходос, Л.Г. Гидранович, М.М. Сачек // Здравоохранение. - 2011. -№12.-С. 72-76.

7. Ходос, O.A. Действие этилметилгидрокснпиридина сукцината и тиот-риазолина на протеолиз в эксперименте in vitro / O.A. Ходос, Л.Г. Гидранович, М.М. Сачек // Вестник Витебского государственного медицинского университета. - 2011. - Т.10. - №4. - С 168 -172.

8. Ходос, O.A. Протеолиз и структурно-функциональная организация головного мозга крыс после хронической интоксикации этанолом / O.A. Ходос // Достижения медицинской науки Беларуси. - 2012. - Вып. 17. - С. 146 - 147.

9. Ходос, O.A. Влияние этилметилгидрокснпиридина сукцината и тиот-риазолина на протеолиз в ткани головного мозга при хронической алкогольной интоксикации в условиях отмены этанола / O.A. Ходос Н Современные проблемы науки и образования. [Электронный ресурс]. — 2013. - № 1. — Режим доступа: www.science-education.ru/107-8418.

10. Ходос, O.A. Этилметилгидрокснпиридина сукцинат и морфолиний-2-метил-1,2,4-триазолил-5-тиоацетат: влияние на протеолиз в сыворотке крови

крыс / O.A. Ходос И Фундаментальные исследования. - 2014. - №5 (6). - С. 1229 -1231.

11. Ходос, О. А. Исследование активности протеолитических ферментов и их эндогенных ингибиторов в экстракте ткани головного мозга крыс / O.A. Ходос // Актуальные вопросы теоретической и практической медицины: Сборник научных статей науч.-практ: конф., Гомель, 1-2 дек. 2005 г. - Гомель, 2006. - Т. 2. - С. 128 -130.

12. Ходос, O.A. Характеристика активности цистеиновых протеиназ и их эндогенных ингибиторов в экстракте ткани головного мозга крыс при хронической алкогольной интоксикации / O.A. Ходос // Актуальные вопросы современной медицины и фармации: материалы 59-й итоговой науч.-практ. конф. студентов и молодых ученых, Витебск, 26 - 27 апреля 2007 г. - С. 276 - 278.

13. Ходос, O.A. Протеиназо-ингибиторный баланс при экспериментальном алкоголизме / O.A. Ходос, Л.Г. Гидранович, М.М. Сачек // Протеолиз, механизмы его регуляции и роль в физиологии и патологии клетки: Тезисы докладов Между-нар. конф., Минск, 25 —26 октября 2007г. - С. 73 —74.

14. Ходос, O.A. Протеиназы и их эндогенные ингибиторы в экстрактах ткани головного мозга крыс при острой алкогольной интоксикации / O.A. Ходос // Протеолиз, механизмы его регуляции и роль в физиологии и патологии клетки: Тезисы докладов Междунар. конф., Минск, 25 — 26 октября 2007г. - С. 72 - 73.

15. Ходос, O.A. Острая алкогольная интоксикация: активность протеиназ и их эндогенных ингибиторов в экстракте ткани головного мозга крыс / O.A. Ходос II Материалы межрегиональной научно-практической конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Молодежь и наука: итоги и перспективы» YSRP-2008, Саратов, 19-21 ноября 2008 г. - С. 105.

16. Ходос, O.A. Хроническая интоксикация этанолом: баланс системы про-теиназы-ингибиторы и структурно-функциональная организация головного мозга / O.A. Ходос, Л.Г. Гидранович, М.М. Сачек, И.В. Самсонова // 3-й съезд токсикологов России: тезисы докладов, Москва, 2-5 декабря 2008 г. - С. 325 -327.

17. Ходос, O.A. Формирование экспериментального алкоголизма и синдрома отмены этанола у крыс / O.A. Ходос И Студенческая медицинская наука XXI века: материалы IX междунар. науч.-практ. конф., Витебск, 29 - 30 октября 2009 г. - С. 287-290.

18. Ходос, O.A. Алкоголь-индуцированные изменения протеолиза и гистологической структуры головного мозга крыс / O.A. Ходос, Л.Г. Гидранович, М.М. Сачек, И.В. Самсонова // Материалы I Российского национального конгресса по наркологии с международным участием, Москва, 24 - 27 ноября 2009 г. — С. 44 -45.

19. Ходос, O.A. Ингибиторы протеолиза и морфологическая организация головного мозга при алкогольных интоксикациях / O.A. Ходос, Л.Г. Гидранович, М.М. Сачек, И.В. Самсонова // Психиатрия и современное общество: материалы III съезда психиатров и наркологов Республики Беларусь, Минск, 3-4 декабря 2009 г.-С. 164-165.

20. Ходос, O.A. Влияние отечественного препарата Мексибел на интенсивность протеолиза в ткани головного мозга крыс на фоне отмены этанола после хронической алкогольной интоксикации / O.A. Ходос, Л.Г. Гидранович, М.М. Сачек // Белорусские лекарства: материалы международной научно-практической конференции, Минск, 2-3 ноября 2010 г. - С. 194 - 197.

21. Ходос, O.A. Трипсиноподобные протеиназы и их эндогенные ингибиторы в больших полушариях головного мозга и мозжечке крыс после хронической алкогольной интоксикации / O.A. Ходос, Л.Г. Гидранович, М.М. Сачек // Достижения фундаментальной, клинической медицины и фармации: материалы 66-й научной сессии сотрудников университета, Витебск, 27 - 28 января 2011 г. - С. 161 -162.

22. Ходос, О. А. Структурно-фунхциональные изменения головного мозга после хронической интоксикации этанолом на фоне введения этилметилгидрок-сипиридина сукцината и тиотриазолина / О. А. Ходос, С.В. Бурделев, Ю.А. Филиппов, М.А. Кротов // Студенческая медицинская наука XXI века: материалы 11 междунар. науч.-практ. конф., Витебск, 3-4 ноября 2011 г. - С. 236 - 237.

23. Ходос, O.A. Протеолитические ферменты больших полушарий головного мозга и их эндогенные ингибиторы после хронической алкогольной интоксикации / O.A. Ходос // Дни биохимии в СПбГМУ: материалы Всероссийской научной конференции с международным участием, Санкт-Петербург, 13-15 марта 2011 г.-С. 66.

24. Ходос, OA. Интенсивность протеолиза в ткани головного мозга крыс, непредрасположенных к добровольному потреблению этанола на фоне хронической алкогольной интоксикации / O.A. Ходос, Л.Г. Гидранович // Достижения фундаментальной, клинической медицины и фармации: Материалы 69-й научной сессии университета., Витебск, 29 - 30 января 2014 г. - С. 234 - 236.

25. Rhodos, О. Proteolysis in brain tissue extract and blood serum in rats at acute alcohol intoxication / O.A. Rhodos // Curierul medical. Special edition. The 1st International Medical Students and Young Doctors Congress MedEspera 2006, Republic of Moldova, Chisinau, 18 - 20 May, 2006. - P. 32.

26. Rhodos, O.A. Serine and cysteine proteinases in brain tissue extract in rats at chronic alcohol intoxication / OA. Rhodos // Украинский научно-медицинский молодежный журнал. - 2007. - № 3. — С. 50 - 51.

27. Khodos, O.A. Cysteine proteinases in brain tissue extract in rats at chronic alcohol intoxication / O.A. Khodos // Медицинская наука: современные достижения и инновации: материалы междунар. науч.-практ. конф. молодых ученых, Харьков, 22 ноября 2007 г. - С. 84.

/ )

24 /

Автореферат

Ходос Ольга Александровна

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ КОРРЕКЦИЯ АНТИОКСИДАНТАМИ ЭТАНОЛИНДУЦИРОВАННЫХ ИЗМЕНЕНИЙ ИНТЕНСИВНОСТИ ПРОТЕОЛИЗА В ГОЛОВНОМ МОЗГЕ

Подписано в печать/f, С/ /^}-, Формат 30x421/8. Бумага типографская №2. Гарнитура Times New Rom. Усл. печ. л. 1,57. Усл.-изд. л. 1,69. Тираж 100 экз. Заказ № 3 . Издатель и полиграфическое исполнение УО «Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет» ЛП №02330/453 от 30.12.2013 Пр. Фрунзе, 27, 210023, г. Витебск