Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Ноотропное действие комплексного растительного средства "Полиноофит"

На правах рукописи

□ОЗОВТ494

ДЫМШЕЕВА ЛАРИСА ДОРЖИЕВНА

НООТРОПНОЕ ДЕЙСТВИЕ КОМПЛЕКСНОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СРЕДСТВА «ПОЛИНООФИТ»

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Улан-Удэ, 2006

003067494

Работа выполнена в Институте общей и экспериментальной биологии Сибирского отделения Российской академии наук

Научный руководитель: доктор медицинских наук

Маланов Ким Жапович

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Цыренжапова Октябрина Даши-Дондобовна

кандидат медицинских наук, доцент Базаров Цыремпил Нимаевич

Ведущая организация: Иркутский государственный институт

усовершенствования врачей Министерства здравоохранения и социального развития РФ

Защита состоится «26» января 2007 года в 10 часов на заседании Диссертационного совета К 003. 028.01. в Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН по адресу: 670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахья-новой, 6.

С диссертацией можно ознакомиться в центральной научной библиотеке Бурятского научного центра СО РАН.

Автореферат разослан « ¿3» декабря 2006 года.

Ученый секретарь

диссертационного совета, - Хобракова Валентина

кандидат биологических наук у^--0^ Бимбаевна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В последние десятилетия значительно возрос интерес исследователей и врачей разных специальностей к проблеме нарушений когнитивных функций при неврологических заболеваниях. Известно, что так называемые ассоциативные зоны коры головного мозга, участвующие в когнитивной деятельности, существенно превышают по площади первичные корковые поля. Поэтому большинство органических заболеваний, поражающих головной мозг, сопровождаются когнитивными нарушениями (В.В.Захаров, 2006; M.D.Lezak, 1985). Когнитивные нарушения развиваются вследствие сосудистой патологии, черепно-мозговых травм, нейроинфекций, интоксикаций, нейродегенеративных и других неврологических заболеваний (Г.Я. Авруцкий, 1981; Т.А.Воронина, 1989; Н.Д. Авсеенко, 1997; M.L. Florio M.L., 1995). Сосудистые заболевания головного мозга - одна из ведущих причин заболеваемости, смертности и инвалидизации как в России, так и во всем мире (О.В. Воробьева, 2005; Е.И.Чуканова, 2005; С.З.Умаров, 2006; Н. Adams, R. Adams et al., 2005). Ежегодно в мире инсульт переносят около 10 млн. человек, в России - более 450 тыс., и по этому показателю наша страна занимает одно из первых мест (З.А. Суслина, 2003; М.А.Гуревич, 2006). После сосудистой катастрофы примерно у половины больных отмечаются когнитивные расстройства, которые приводят к социально-бытовой дезадаптации (И.В.Дамулин, 2003; М.А.Гуревич, 2006; A. DiCarlo, М. Baldereschi et al, 2000). Одним из основных направлений адекватной патогенетической терапии заболеваний, обусловленных органическим поражением головного мозга, в том числе цереброваскулярных заболеваний, признается применение препаратов, обладающих ноотропными и нейропротективными свойствами (Г.В.Ковалев, 1990; М.М.Одинак, 2001; О.В.Воробьева, 2005; Е.И.Чуканова, 2005; В.В.Захаров, 2006). Кроме того, учитывая способность ноотропных препаратов улучшать процессы обучения и памяти, интеллектуальные способности, их применение возможно не только при различных заболеваниях, но и у практически здоровых лиц для увеличения творческой активности и повышения устойчивости центральной нервной системы к экстремальным условиям (Т.А. Воронина, 2000). В педиатрической практике ноотропы применяются для восстановления задержки умственного развития у детей и фармакотерапии гиперактивности с дефицитом внимания (Н.Н.Заваденко, 2006; C.K.Conners, 1985).

В связи с этим, актуальность поиска новых лекарственных средств с ноотропным действием, безвредных для организма, не вызывает со-

мнений. Заслуживающими особого интереса являются растительные средства, издавна применявшиеся в народной и традиционных медицинах при заболеваниях нервной системы (И.Л.Зеленская, 2000; Г.Х.Дамдинова, 2001; Д.А.Муравьева, 2002; Е.Е.Лесиовская, 2003; J. Kleijnen et al., 1992).

Основными преимуществами растительных средств являются: высокая фармакотерапевтическая эффективность, наличие широкого спектра фармакологической активности, отсутствие негативных побочных эффектов, низкая токсичность при длительном применении (С.М.Баторова, 1989; С.М.Николаев, 1998,2004).'

В соответствии с вышеизложенным, разработано новое средство (жидкий полиэкстракт), условно названное «Полиноофит», в состав которого входят корни шлемника байкальского (Scutellaria baicalensis Georgi), пиона уклоняющегося (Paeonia anómala L.) и кровохлебки аптечной (Sanguisorba officinalis L.), трава сушеницы топяной (Gnaphal-ium uliginosum L.) и горца птичьего (Polygonum aviculare L.), побеги пятилистника кустарникового (Pentaphylloides fruticosa (L.) О. Schwartz) и плоды шиповника (Rosa L. Spp.).

Цель исследования - определение ноотропных свойств и оценка фармакотерапевтической эффективности комплексного экстракта «Полиноофит» при экспериментальных нарушениях когнитивных функций.

Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи:

1) изучить ноотропные свойства экстракта «Полиноофит» на ин-тактных животных;

2) определить фармакотерапевтическую эффективность «Поли-ноофита» при нарушениях когнитивных процессов у белых крыс при воздействии факторов, вызывающих амнезию: гипоксия, электросудорожный шок, этанол, старение;

3) сопоставить эффективность «Полиноофита» и препарата сравнения - пирацетама;

4) выявить основные механизмы ноотропного действия «Полиноофита».

Научная новизна. В работе определены ноотропные свойства и установлена фармакотерапевтическая эффективность нового многокомпонентного фитоэкстракта «Полиноофит». Показано, что введение «Полиноофита» приводит к улучшению процессов обучения и памяти как у интактных животных, так и при воздействии амнестических факторов различной этиологии (гипоксия, электросудорожный шок, этанол, старение). Кроме того, исследуемое средство способствует норма-

лизации морфофункционального состояния головного мозга при ги-поксическом повреждении. В основе ноотропного действия «Полино-офита» лежат антигипоксические, антиоксидантные и мембраностаби-лизирующие свойства.

Практическое значение работы. Экспериментально обоснована возможность коррекции фитоэкстрактом «Полиноофит» нарушений памяти и обучаемости при заболеваниях центральной нервной системы, сопровождающихся когнитивными нарушениями, а также профилактического применения у практически здоровых лиц.

Новые сведения, касающиеся фармакологической активности и фармакотерапевтической эффективности данного средства, используются в учебном процессе на занятиях по фармакологии, фитотерапии и неврологии медицинского факультета Бурятского государственного университета.

Положения, выносимые на защиту:

1. Экстракт «Полиноофит» обладает ноотропным действием на ин-тактных животных и выраженной фармакотерапевтической эффективностью при экспериментальных нарушениях когнитивных функций.

2. «Полиноофит» обладает нейропротекторным действием при ги-поксических повреждениях головного мозга.

3. Основными механизмами ноотропного и нейропротекторного действия «Полиноофита» следует считать его антигипоксические, антиоксидантные и мембраностабилизирующие свойства.

Апробация материалов диссертации. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на:

- Республиканской геронтологической конференции «Пожилой человек. Качество жизни» (Улан-Удэ, 2002);

- X, XII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2003, 2005);

- международной конференции молодых ученых «Актуальные проблемы современной науки» (Самара, 2003);

- научно-практической конференции «Биологически активные добавки в профилактической и клинической медицине» (Улан-Удэ, 2003);

- III конференции молодых ученых России «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины» (Москва, 2004);

- научно-практической конференции «Развитие традиционной медицины в России» (Улан-Удэ, 2004);

- международной научно-практической конференции «Monos -15. Дорно-орнийн анагаах ухааны хосолмол тогтолцоо» '(Улан-Батор, 2005);

- III Российской научно-практической конференции «Актуальные проблемы инноваций с нетрадиционными природными ресурсами и создания функциональных продуктов» (Москва, 2005);

- научно-практической конференции «Актуальные вопросы профилактической медицины» (Улан-Удэ, 2005);

- Всероссийской конференции с международным участием «Биоразнообразие экосистем внутренней Азии» (Улан-Удэ, 2006).

Работа выполнена в Отделе биологически активных веществ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН в соответствии с проектом №146 «Разработка лекарственных и профилактических препаратов для медицины. Фундаментальные основы и реализация», утвержденным президиумом СО РАН.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 16 научных работ.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 109 страницах компьютерного текста и состоит из введения, 6 глав, выводов, списка литературы, включающего 253 источника, из которых 53 на иностранных языках. Работа иллюстрирована 13 таблицами, 9 рисунками и 6 микрофотографиями.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования выполнены на 610 белых крысах линии Вистар обоего пола с исходной массой 160-200 г, содержавшихся в стандартных условиях вивария. Содержание животных осуществлялось в соответствии с правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и научных целей (Страсбург, 1986).

«Полиноофит» исследовали в виде жидкого экстракта, полученного экстрагированием на 40% этиловом спирте. Экстракт перед экспериментами с целью исключения влияния этанола деалкоголизировали путем выпаривания на роторном испарителе до 1/10 от исходного объема, остаток доводили дистиллированной водой до заданного объема.

«Полиноофит» вводили внутрижелудочно животным в объемах 0,1; 0,3 и 0,5 мл/100г массы животного. В качестве препарата сравнения использовали синтетический ноотропный препарат - пирацетам в дозе 200 мг/кг (Г.В. Ковалев, 1990; Т.А. Воронина, 2000).

Оценку острой токсичности «Полиноофита» проводили по методу Кербера (Е.В.Арзамасцев, 2000). Класс токсичности определяли по классификации К.К. Сидорова (1973).

Для изучения кардиотропного действия экстракта проводили исследование его влияния на характер электрокардиограмм (ЭКГ) у белых крыс (Руководство по экспериментальному...., 2000).

Поисково - исследовательскую реакцию и эмоциональное поведение оценивали по методике «открытое поле» (Г.В Ковалев, 1990; J. Bures, О. Buresova, 1979). Влияние на процессы обучения и памяти исследовали при выработке у крыс условной реакции пассивного избегания, условного рефлекса с положительным подкреплением в Т- образном лабиринте (Г.В.Ковалев, 1990; Т.А.Воронина, 2000; J. Bures, O.Buresova, 1979), условной реакции зрительной дифференцировки (Н.Д.Авсеенко, 1997; Т.А.Воронина, 2000). Влияние «Полиноофита» на нарушения когнитивных функций у белых крыс изучали в условиях моделирования разных форм амнезии: амнезии, вызванной максимальным электросудорожным шоком (МЭШ) (80 мА, экспозиция 0,2- 0,5 сек.)( Руководство по экспериментальному...., 2000); острой нормоба-рической гипоксией с гиперкапнией (Т.А.Воронина, 2000); введением 40% этанола в объеме 9 мл/кг в течение 45 дней (М.Д. Гаевый, 1980), а также на гериатрической модели - на старых крысах (13-14 месячного возраста).

Антигипоксическое действие «Полиноофита» исследовали на 4 моделях: нормобарической гипоксии с гиперкапнией (Л.Д.Лукьянова, 1989), острых гипобарической (В.А. Березовский, 1985), гемической (Ю.Ф.Костюченко, 1982) гистотоксической (А.П. Караев, 1989) и оценивали по продолжительности жизни животных.

Влияние «Полиноофита» на морфофункциональные изменения структур головного мозга при гипоксическом повреждении изучали с помощью морфологических методов исследований структур головного мозга (Микроскопическая техника..., 1996; Н.Н.Боголепов, 2001).

Антиоксидантные свойства данного экстракта определяли в гомо-генатах ткани головного мозга крыс в постгипоксическом периоде по содержанию продукта перекисного окисления липидов - малонового диальдегида (МДА) (Ю.А.Владимиров, 1972) и уровня активности ка-талазы в гомогенатах головного мозга крыс по методу М.А.Королюк и соавт.(1988).

Мембраностабилизирующие свойства «Полиноофита» определяли in vitro по степени торможения перекисного и осмотического гемолиза отмытых эритроцитов человека (И.Е.Ковалев, 1986).

Церебропротекторное действие «Полиноофита» оценивали на модели острой ишемии головного мозга, которую вызывали путем одномоментной билатеральной окклюзии обеих общих сонных артерий у

крыс. Регистрировали количество выживших животных в течение 24 часов.

Статистическую обработку данных проводили с помощью параметрического критерия Стьюдента и непараметрического критерия Манна-Уитни. Различия считались существенными при Р<0,05 (В.И.Сергиенко, 2001).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Определение фармакологических свойств «Полиноофита»

При определении острой токсичности «Полиноофита» по методу Кербера при внутрибрюшинном и внутрижелудочном введении деал-коголизированного экстракта в максимально возможном объеме (3-4 мл) явных признаков интоксикации и гибели животных в течение 14 суток не наблюдалось. При внутрибрюшинном введении экстракта в готовой лекарственной форме в объемах от 10 до 40 мл/кг массы животные погибали преимущественно в течение 1-2 суток от начала введения «Полиноофита», иэ50 исследуемого экстракта соответствовала 22 мл/кг. При внутрижелудочном введении средства в объемах от 10 до 50 мл/кг ЬО50 составила 31 мл/кг.

Таким образом, полученные результаты позволяют отнести исследуемое многокомпонентное растительное средство к группе практически нетоксичных веществ. Выявленная ЬО50 при введении экстракта животным без предварительной дезалкоголизации обусловлена присутствием 40% этанола в готовой лекарственной форме испытуемого растительного средства.

При изучении влияния исследуемого средства на функциональное состояние миокарда выявлено, что «Полиноофит» не оказывает отрицательного влияния на электрофизиологические параметры миокарда у белых крыс. Отсутствие влияния на сердечно-сосудистую и другие жизненно важные системы организма, как один из компонентов «фармакологической нейтральности», является важной особенностью ноо-тропных препаратов (Г.В.Ковалев, 1990).

В результате исследования ноотропных свойств экстракта «Полиноофит» выявлено, что его курсовое введение интактным животным стимулирует поисково-исследовательское поведение, ускоряет процессы адаптации, снижая уровень страха и тревожности, ослабляет пассивно-оборонительную реакцию в тесте «открытое поле». Указанные эффекты наиболее выражены при введении исследуемого экстракта в объеме 0,5 мл/100г массы животного.

Под влиянием экстракта ускоряется выработка рефлекса с положительным подкреплением при обучении в Т-образном лабиринте (рис. ]}. Результаты исследований показали, что у крыс, получавших «Подино-офит», в объемах 0,1; 0,3 и 0,5 мл/100г массы, на 10-й день обучения сокращается время достижения от старта до кормушки на 16%, 33% и 56% соответственно по сравнению с данными у животных, получавших дистиллированную воду (рис !.), При воспроизведении рефлекса после недельного перерыва сохранность памятного следа в группе животных, получавших экстракт в объеме 0,5 мл/100г массы наблюдалась у всех животных, во всех остальных группах этот показатель составил 50%.

■ выло.пчошч К 0.1 - г ч ибучиыиися СЧГУЧМИШГПС» Сп\ргнсинс рефлекс»

рСЗКЧИИ.С Ж НПО П ¡Ы.Ч ИЛ Л01ГЬ,П/П А ивотных на 10 через 7 .ШСИ Дп

■ Контрольная Я "Полйноофнт", 0,3 мл/100!' ЁЗ I [иргщетам, 200 мг/кг

□ "Полиноофит".0,] мл/ЮОг

□ "! 1оЩноофит\ 0,5 мл/ЮОг

Рис. 1. Влияние «Полиноофита» на выработку у крыс условного рефлекса с положительным подкреплением ез Т-образном лабиринте.

Таким образом. «Полиноофит» оказывает позитивное дснствие на процессы обучения и памяти у интактных крыс. При этом наиболее выраженный эффект, сопоставимый с эффектом пирацетама, отмечается при использовании «Полиноофита» в объеме 0,5 мл/ЮОг массы.

Установлено, что курсовое введение «Полиноофита» в объемах 0,1; 0,3 и 0,5мл/100г массы животного улучшает процессы обучения и памяти у интактных крыс, ускоряя у них выработку условного рефлекса пассивного избегания (УРПИ), что проявлялось в сокращении латентного периода и уменьшении времени пребывания в темном «опасном» отсеке экспериментальной камеры. Наиболее выраженный эффект, сопоставимый с эффектом препарата сравнения пирацетама, наблюдался при использовании экстракта в объеме 0,5 мл/100г массы животного.

При изучении влияния экстракта «Полиноофит» на процесс обучения крыс условному избавлению на основе различения зрительных сигналов (свет) с отрицательным подкреплением выявлено, что курсовое введение исследуемого средства в объемах 0,3 и 0,5мл/100г массы улучшает у них формирование условного рефлекса зрительной диффе-ренцировки (УРЗД) (табл. 1.).

Таблица 1

Влияние «Полиноофита» и пирацетама на выработку условной реакции зрительной дифференцировки у интактных крыс

Группы животных Количество проб, затраченных на обучение Время поиска безопасного отсека в 1 пробе, с Время выполнения реакции, с

До первого правильного ответа До критерия обучения

Контрольная (Н20), п=10 8,4±0,75 30,8±1,22 15,3±0,98 8,7±0,96

Опытная («Полиноофит», 0,1 мл/100 г) п=10 9,1±0,55 30,0± 1,63 15,1±1,39 8,4±0,6

Опытная («Полиноофит», 0,3 мл/100г)п-10 7,3±0,35 24,3±1,3* 8,8±0,9* 7,8±0,5

Опытная («Полиноофит», 0,5 мл/100г) п=10 5,0±0,58* 16.9±1,54* 7,5±0,79* 6,8±0,51

Опытная (Пирацетам, 200мг/кг), п=10 5,4±0,83 17,4±1,08* 5,8±0,66* 7,2±0,66

Примечание: * - значения достоверны по сравнению с данными у животных контрольной группы при Р<0,05; п - количество животных в группе.

Влияние «Полиноофита» на процессы обучения и памяти при воздействии факторов, вызывающих амнезию

Установлено, что «Полиноофит» в объеме 0.5мл/100г улучшает процессы обучения и памяти на фоне амнезии, вызванной максимальным электросудорожным шоком (МЭШ) (табл.2), что проявлялось в увеличении латентного периода на 35%, снижении времени пребывания в темном отсеке на 50% через 1 час после обучения по сравнению с таковыми у животных контрольной группы и более прочной сохранности памятного следа через 7 суток. Введение испытуемого средства в объемах 0,1 и 0,3 мл/100 г не оказывало какого-либо существенного влияния на процессы обучения. При этом антиамнестическое действие указанного экстракта менее выражено по сравнению с аналогичным действием пирацетама.

Таблица 2

Влияние «Полиноофита» и пирацетама на сохранение условного рефлекса пассивного избегания у белых крыс на фоне амнезии, вызванной максимальным электросудорожным током

№ Группы животных До обучения Через 1 час Через 24 часа Через 7 суток

Латентный период, с

1. Интактная (Н20) п=10 5,4±0,56 164,4±17,05 145,5±17,64 108,2± 19,41

2. Контрольная (МЭШ+Н,0), п=10 8,4±1,9 88,0±10,5** 83.4±12,01** 22,7± 11,02**

3. Опытная (МЭШ+«Поли-ноофит», 0.1мл/100г), п=10 7,0±0,34 88.2±11,2 76.5±21.4 36.6±9,3

4. Опытная (МЭШ+ «Полиноофит», 0,3мл/100г). п=10 8.12±1.03 84,0±2,7 55,25±1,9* 40,6± 1.48*

5 Опытная (МЭШ+ «Полиноофит». 0.5мл/100г). п= 10 9,0±1.53 119.6±4,23* 91.2±4.02** 52,25±4,9*

6. Опыт- ная(МЭ111+пирац е-там.200мг/кг) п=10 6.0±0.76 142.9± 17.06* 102.9± 17.37 62.0±10.6

Примечание: * - значения достоверны по сравнению с данными у животных контрольной группы при Р <0,05; ** - значения достоверны по сравнению с данными у животных интактной группы при Р <0,05.

В следующей серии опытов установлено, что хроническая алкоголизация вызывает у животных нарушения памяти, а исследуемый экстракт на этом фоне в объеме 0,5 мл/100г оказывает антиамнестическое действие, улучшая сохранность памятного следа по сравнению с показателями крыс, получавших этанол. Данный эффект был сопоставим с действием пирацетама.

Также выявлено, что при естественном старении у животных достоверно ухудшаются показатели обучаемости и памяти, а курсовое введение исследуемого экстракта улучшает у них процессы выработки и сохранения условного рефлекса с положительным пищевым подкреплением в Т-образном лабиринте. Данный эффект сопоставим с эффектом пирацетама.

В результате исследований установлено антиамнестическое действие «Полиноофита» при нормобарической гипоксии, что проявляется в выработке УРПИ и сохранности памятного следа на протяжении всех сроков эксперимента по сравнению с показателями животных контрольной группы.

К механизму действия «Полиноофита»

Многие исследователи считают, что ноотропный эффект является вторичным и базируется на антигипоксическом действии (Т.А. Воронина, 2000; L. Packer, G. Rimbach et al., 1999), т.е. способности устранять токсическое влияние недостатка кислорода на функциональную активность мозга. Противогипоксические эффекты, характерные для синтетических препаратов, выявляются и у флавоноидсодержащих фитосредств (И.Л. Зеленская и соавт., 2000; Л.Д. Лукьянова, 2000). Противогипоксический эффект НП выявляется на различных моделях гипоксии и характеризуется, прежде всего увеличением продолжительности выживания в этих условиях (Т.А. Воронина и соавт., 1992, 1998; Т.А. Voronina, O.A. Kuterova, 1988). В результате наших исследований установлено, что «Полиноофит» оказывает противогипоксиче-ское действие при нормобарической гипоксии с гиперкапнией (рис.3), острых гипобарической, гемической и гистотоксической гипоксиях, увеличивая среднюю продолжительность жизни белых крыс. Наиболее выраженный эффект наблюдается при курсовом введении животным экстракта в объеме 0,5 мл/ЮОг массы.

Группы животных

■ Гилокеия+вода □ Гипоксия+пПо(Пмиоофит", 0,1 мл/ЮОг

В Гипоксия+"По;ш1юофигн, 0,3мл/1 ООг □ Гипоксия+''ПсиШноофит", 0,5м.ч/100г ЕЗ Гипоксия +г(й рацетам, 200м г/Кг

Рис. 2. Влияние «Полинеофита» и пирацетама на продолжительность жизни белых крыс при острой норм »барической гипоксии с гиперкаипией.

Антигипоксическое действие «Полиноофита» подтверждают морфологические исследования. При изучении влияния «Полиноофита» на морфометрические показатели головного мозга крыс при гипоксиче-ском повреждении установлено, что в группе животных, получавших экстракт, на фоне гипобарической гипоксии наблюдали меньшее количество нейронов с различными типами повреждений, чем у животных контрольной группы. Повышение устойчивости организма к гипоксии под влиянием «Полиноофита» можно объяснить наличием в нем биологически активных веществ (полифенолов, каротиноидов, витаминов Е. С), способных к антиокислитель ной активности.

По мнению некоторых авторов, ключевым звеном в гибели нейронов является активация перекисного окисления липидов (Н.В.Гуляева, 1994; И.А.Завалишин, 1996). В центральной нервной системе опасность развития оксидантного стресса выше, чем в других системах, что определяется значительной интенсивностью окислительного метаболизма и низкой активностью ферментативных антиокси-дантных систем в головном мозге (И.А.Завалишин, 1996; З.А.Суслина и соавт., 2005; Д.В.Кандыба,2006). Известно, что активация свободно-

радикальных процессов при гипоксии вызывает накопление продуктов ПОЛ (Косолапое В.А.,1998; З.А.Суслина и соавт., 2005)

Так, в наших исследованиях, гипобарическая гипоксия вызывает повышение содержания МДА почти вдвое и снижение активности антиоксидантного фермента - каталазы на 33,7% в гомогенатах головного мозга по сравнению с данными в интактной группе. Наши данные позволяют предположить, что ноотропное и нейропротекторное действие «Полиноофита», вероятно, обусловлено мембранозащитным и ан-тиоксидантными свойствами экстракта. Так, введение «Полиноофита» в объемах 0,1; 0,3 и 0,5 мл/100г и пирацетама в дозе 200мг/кг снижает содержание МДА на 50,0; 65,6; 64,5 и 48,9% соответственно и повышает активность каталазы соответственно на 56,0; 59,0; 76,0 и 76,0% по сравнению с данными в контрольной группе (табл. 3).

Таблица 3

Влияние « Полиноофита» на концентрацию малонового диаль-дегида и активность каталазы в гомогенатах ткани головного мозга белых крыс при гипобарической гипоксии

Группы животных Показатели

МДА, нмоль/гткани Активность каталазы, мкат/ г ткани

Интактная (Н20) 4,7± 0,14 3,89±0,002

Контрольная (гипоксия + Н20) 9,6±0,39* 2,58±0,015*

Опытная (гипоксия + «Полиноофит», 0,1 мл/100 г) 4,8± 0,14** 4,03+0,1**

Опытная (гипоксия + «Полиноофит», 0,3 мл/100г) 3,3±0,06** 4,12±0,033**

Опытная (гипоксия +«Полиноофит», 0,5 мл/100г 3,4±0,14** 4,55±0,043**

Опытная (гипоксия +Пирацетам, 200 мг/кг) 4,9+0,15** 4,37+0,051**

Примечание: *- значения достоверны по сравнению с данными у животных интактной группы при р< 0,05; **- значения достоверны по сравнению с данными у животных контрольной группы при р<0,05.

При изучении мембраностабилизирующих свойств исследуемого экстракта установлено, что «Полиноофит» оказывает тормозящее

влияние на гемолиз эритроцитов, вызванный как реактивом Фентона (рпс.З). гак и дистиллированой водой.

Так, введение данного экстракта в концентрациях, соответствующих 0.1; 0.3 мл и 0,5 мл/100г массы животного снижает перекисный гемолиз на 40,78; 49,02 и 51,0% соответственно по отношению к контролю (рис.З.).

¡Контроль □ "Полиноофит", 0,5 мл/100г

Г'Полиноофит",0.3млЛ00г 0"Полиноофит", 0,1 мл/1 ООг

Перекисный гемолиз,%

Рнс.З. Влияние «Полииоофн1та» на гемолиз Эритроцитов, вызванный реактивом Фентона.

В концентрациях, соответствую щи х 0,3 и 0,5мл/100г степень осмотического гемолиза снижается на 64.0 и 73,0% соответственно относительно показателей контроля. Выраженное антиокешинтное и мембра-ностабилизирующес действие исследуемого экстракта связано с наличием в его составе растений, содержащих, главным образом, фенол ь-ные соединения (В.А.Хазанов и соавт.,1999; И.Г.Николаева, 2006). Известно, что растительные полифенолы являются ловушками свободных радикалов и блокируют процессы перекисного окисления липидов (N.C.Cook. 1996: L.Packer, 1999). К природным антиоксидантам относятся также витамины С, А. Е, К, а также аминокислоты иистин. ме-тионин, тирозин (С.М.Николаев и соавт.,1992), содержащиеся в компонентах исследуемого экстракта (В.В.Телятьев, 1991;В.П.Лебедев. 2003; Д.А.Муравьева, 2002; С.Я.Соколов, И,П. Замотаев. 2000).

По данным многих авторов (Г.В. Ковалев, 1990; Б.И. Бенькович, 2000; Т.А.Воронина, 2000) в спектре фармакологической активности ноотропных препаратов отмечается позитивное сочетание стимулирующего влияния на высшие интегративные функции с неспецифическим церебропротективным действием. В наших опытах установлено церебропротекторное действие «Полиноофита» при острой ишемии головного мозга.

Так, за период наблюдения (24 часа) в контрольной группе выживаемость составила 20%, а средняя продолжительность жизни составила 16,3±1,0 часов. Курсовое введение «Полиноофита» в объемах 0,3 и 0,5 мл/100г массы животных и пирацетама в дозе 200 мг/100г, увеличило количество выживших животных на 30, 40 и 40% соответственно по сравнению с показателем животных контрольной группы. «Полино-офит» в объеме 0,1 мл/100г массы животных не оказывал влияния на выживаемость.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о наличии у комплексного растительного экстракта «Полиноофит» ноотроп-ного эффекта. Курсовое введение «Полиноофита» улучшает когнитивные функции у животных, что выражается в повышении эффективности и объема поисково-исследовательских движений, ускорении выработки условных рефлексов, упрочении памятного следа после обучения. Исследуемый экстракт снижает амнезирующее влияние агрессивных факторов: этанола, электрошока, различных видов гипоксии; а также при естественном старении. Курсовое введение «Полиноофита» в экспериментальных объемах оказывает выраженное нейропротектор-ное и антиоксидантное действие на фоне острой гипобарической гипоксии, что выражается в увеличении продолжительности жизни, нормализации морфофункционального состояния головного мозга, снижении содержания в гомогенатах головного мозга МДА и повышении активности антиоксидантного фермента каталазы. Также данный экстракт оказывает церебропротекторное действие при острой ишемии головного мозга. Эффекты «Полиноофита» в большинстве случаев сопоставимы, а в ряде случаев превосходят эффекты препарата сравнения пирацетама. Кроме того, выявлено, что «Полиноофит» относится к группе практически нетоксичных лекарственных средств, не оказывает отрицательного влияния на электрофизиологические параметры миокарда у белых крыс.

Полученные данные свидетельствуют о том, что среди основных механизмов в проявлении ноотропного и нейропротекторного эффектов «Полиноофита» являются его антигипоксические, мембрано-протекторные и антиоксидантные свойства, обусловленные широким спектром биологически активных веществ, содержащихся в испытуемом средстве: флавоноидов, эфирных масел, витаминов, микро- и макроэлементов, полисахаридов и других веществ (А.Д.Турова, Э.Н. Са-пожникова, 1984;. В.В.Телятьев, 1991; Г.В.Крылов, 1992).

ВЫВОДЫ

1. «Полиноофит» обладает выраженным ноотропным эффектом у интактных животных, что выражается в улучшении выработки условных рефлексов, стимуляции поисково-исследовательских реакций и более прочной сохранности памятного следа на разных сроках исследований.

2. «Полиноофит» предупреждает развитие нарушений когнитивных функций у животных при воздействии амнези-рующих факторов (электрошок, этанол, старение) и повышает устойчивость организма животных к гипоксическим воздействиям.

3. По выявленному ноотропному эффекту «Полиноофит» сопоставим с таковым препарата сравнения - пирацетама, а в некоторых случаях превосходит его действие.

4. Основные механизмы ноотропного и нейротропного эффектов «Полиноофита» обусловлены антигипоксическими, антиоксидантными и мембраностабилизирующими свойствами.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Фармакотерапевтическая эффективность «Полиноофита», установленная в результате проведенных исследований, позволяет рекомендовать его в качестве профилактического и лечебного средства в составе комплексной терапии заболеваний центральной нервной системы, включая состояния, сопровождающиеся нарушением когнитивных функций.

2. Данные, изложенные в настоящей работе, используются в учебном процессе по фармакологии, фитотерапии и неврологии на медицинском факультете Бурятского государственного университета.

Список опубликованных работ

1. Намсараева Г.Т., Дымшеева Л.Д., Дамдинова Г.Х. Эффективность комплексного растительного средства при начальных формах церебро-васкулярных заболеваний по данным формализованной оценки динамики неврологических, когнитивных, поведенческих и эмоционально-аффективных нарушений // Вестник Бурятского Университета. - Вып.2. - Серия 11 «Медицина». - Улан-Удэ, 2002. - С.46-50.

2. Намсараева Г.Т., Дымшеева Л.Д., Дамдинова Г.Х., Тарнуев В.А. Ноотропная активность комплексного растительного средства по данным выработки условной реакции пассивного избегания // Материалы республиканской геронтологической конференции «Пожилой человек. Качество жизни». - Улан-Удэ, 2002. - С. 19-22.

3. Дымшеева Л.Д. Влияние комплексного растительного средства на когнитивные функции белых крыс // Материалы X Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - Москва, 2003. -С.713.

4. Дымшеева Л.Д., Николаев С.М. Влияние комплексного экстракта «Полиноофит» на обучаемость и память у животных // Труды 4-й Международной конференции молодых ученых «Актуальные проблемы современной науки». - Самара, 2003. - С.12-14.

5. Дымшеева Л.Д. Мембраностабилизирующее действие комплексного растительного средства «Полиноофит» // Материалы научно-практической конференции «Биологически активные добавки в профилактической и клинической медицине». - Улан-Удэ, 2003. - С.95.

6. Дымшеева Л.Д., Маланов К.Ж. Влияние растительного средства «Полиноофит» на сохранение памятного следа у животных после ам-нестического воздействия // Материалы научно-практической конференции «Биологически активные добавки в профилактической и клинической медицине». - Улан-Удэ, 2003. - С.90-92.

7. Дымшеева Л.Д., Дамдинова Г.Х. Антигипоксическое действие экстракта «Полиноофит» // Сб. тезисов III конференции молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины». - Москва, 2004. - С.337.

8. Дымшеева Л.Д., Разуваева Я.Г., Дамдинова Г.Х. Антиоксидант-ная активность экстракта «Полиноофит» при гипоксии мозга // Материалы научно-практической конференции «Развитие традиционной медицины в России». - Улан-Удэ, 2004. - С.67-69.

9. Николаев С.М., Цыренжапов A.B., Дымшеева Л.Д., Олейников Д.Н., Санжиева Д.В. Кардиотропное действие природных биологиче-

ски активных веществ // Бюлл. ВСНЦ СО РАМН.- Иркутск, 2004. - № 6. - С.137-138.

Ю.Дамдинова Г.Х., Дымшеева Л.Д., Николаева И.Г., Разуваева Я.Г. Влияние комплексного растительного средства «Полиноофит» на процессы обучения и памяти у белых крыс // Материалы международной научно-практической конференции «Monos-15. Дорно-орний анагаах ухааны хосолмол тогтолцоо». - Улан-Батор, 2005. - С. 135-137.

11.Разуваева Я.Г., Дымшеева Л.Д., Дамдинова Г.Х. Коррекция комплексным растительным средством ноофит нарушений процессов обучения и памяти у белых крыс на фоне алкогольной интоксикации // Материалы III Российской научно-практической конференции «Актуальные проблемы инноваций с нетрадиционными природными ресурсами и создания функциональных продуктов». - Москва, 2005. - С.116.

12.Разуваева Я.Г., Дымшеева Л.Д., Дамдинова Г.Х. Антиамнестиче-ское действие экстракта «Полиноофит» при амнезии, вызванной максимальным электросудорожным шоком // Тез. докл. Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - Москва, 2005. -С.637.

13.Разуваева Я.Г., Дамдинова Г.Х., Дымшеева Л.Д. Фитопрофилак-тика нарушений интегративных функций мозга // Мат. научно-практической конференции «Актуальные вопросы профилактической медицины». - Улан-Удэ, 2005. - С.177-180.

И.Николаева И.Г., Дымшеева Л.Д. Количественное определение суммы флавоноидов в ноотропном сборе // Тезисы всероссийской конференции с международным участием «Биоразнообразие экосистем внутренней Азии». - Улан-Удэ, 2006. - С.104.

15.Разуваева Я.Г., Дымшеева Л.Д., Дамдинова Г.Х., Николаева И.Г. Морфофункциональная оценка нейропротекторного действия комплексного растительного средства «Полиноофит» при гипобарической гиопоксии // Сибирский медицинский журнал. - Иркутск, 2006. - №4. -С.63-65.

16.Разуваева Я.Г., Дамдинова Г.Х., Дымшеева Л.Д., Гулевич A.A. Ноотропные средства растительного происхождения из арсенала традиционной медицины // Сб.научных трудов «Химия и биологически активные природные соединения». - Улан-Удэ, 2006. - С.69-78.

Подписано в печать 21.12.2006 г. Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Объем 1,25 п.л. Тираж 100. Заказ № 68.

Отпечатано в типографии Изд-ва БНЦ СО РАН 670042 г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6.

Актуальность темы. В последние десятилетия значительно возрос интерес исследователей н врачей разных специальностей к проблеме нарушений когнитивных функиий при неврологических заболеваниях. Известно, что так называемые ассоциативные зоны коры головного мозга, участвующие в когнитивной деятельности, существенно превышают но площади первичные корковые ноля. Поэтому большинство органических заболеваний, поражающим головной мозг, сопровождаются когнитивными нарушениями 192, 235], Когнитивные нарушения развиваются вследствие сосудистой патологии, черепно-мозговых травм, нейроннфекцмй, интоксикаций, нейродетенератнвных и других неврологических заболеваний [5, 6, 41, 222], Сосудистые заболевания головного мозга - одна из ведущих причин заболеваемости, смертности и инвалилизации как в России, так и но всем мире |37. 183, 193. 202], Ежегодно в мире инсульт перекосят около 30 млн. человек, в России - более 450 тыс., н по этому показателю наша страна занимает одно из первых мест [66, 172]. После сосудистой катастрофы примерно у половины больных отмечаются когнитивные расстройства, которые приводят к социально-бытовой дезадаптации (66,72,218].

Одним из основных направлений адекватной патогенетической терапии заболеваний, обусловленных органическим поражением головного мозга, в том числе исрсброваскулярных заболеваний, признается применение препаратов, обладающих ноотропными И нейропротектнаными свойствами [37. 92, 101* 141, 193], Кроме того, учитывая способность ноотропных препаратов улучшать процессы обучения и памяти, интеллектуальные способности, их применение возможно не только при различных заболеваниях, но и у практически здоровых лиц (44] для увеличения творческой активности и повышения устойчивости центральной нервной системы к экстремальным условиям. В педиатрической практике ноотроиы применяются для восстановления задержкн умственного развития у детей и фармакотерапии гипсрактивности с дефицитом внимания [85, 213].

В связи е этим, актуальность поиска новых лекарственных средств с ноотропным действием, безвредных для организма, не вызывает сомнений. Заслуживающими особого интереса являются растительные средства, издавна применявшиеся в народной и традиционных медицинах при заболеваниях нервной системы [71,93,113, 127, 234].

Основными преимуществами растительных средств являются: высокая фар-макотерапсвтичсская эффективность, наличие широкого спектра фармакологической активности, отсутствие негативных побочных эффектов, низкая токсичность при длительном применении [17, 129,131,132,133].

В соответствии с вышеизложенным, разработано новое средство (жид* кий полиэкстракт), условно названное «Полиноофнт», в состав которого входят корми шлемника байкальского (Scutellaria baicalcnsis Gcorgi), пиона уклоняющегося (Paeonia anomala L.) и кровохлебки аптечном (Sanguisorba officinalis L.), трава сушеницы топяной (Gnaphaltum uliginosum L.) и горца птичьего (Polygonum aviculare L.)* побеги пятилистника кустарникового (Penlaphyllotdes frmicosa (L.) O.Schwartz) и плоды шиповника (Rosa L.Spp.).

Цель исследования - определение ноотронных свойств и оценка фар-макотераисвтической эффективности комплексного экстракта «Полиноофит» при экспериментальных нарушениях когнитивных функций. Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи:

1) изучить ноотропные свойства экстракта «Полнноофнт» на ннтактных животных;

2) определить фармакотерапевти ческу ю эффективное! ь «Поли ноофита» при нарушениях когнитивных процессов у белых крыс при воздействии факторов, вызывающих амнезию: гипоксия, электросудорожный шок, этанол, старение;

3) сопоставить эффективность «Полиноофнта» и препарата сравнения - tin ранетами;

4) выявить основные механизмы ноотропного действия «Полиноофнта)».

Научная новизна, В работе определены ноотропныс свойства и установлена фармакотерапевтическая эффективность нового многокомпонентного фитоэкстракта «Полиноофит». Показано, что введение «Полиноофнта» приводит к улучшению процессов обучения и памяти как у ннтактных животных, так и при воздействии амнестическнх факторов различной этнологии {гипоксия, электросудорожный шок, этанол, старение). Кроме тою. исследуемое средство способствует нормализации морфофункционального состояния головного моэга при гнпокснческом повреждении. В основе ноо-тропного действия «Полиноофнта» лежат амтигипокснчсскнс. антиоксидант-ные и мембраностабилнзирующне свойства.

Практическое значение работы. Экспериментально обоснована возможность коррекции фитоэкетрактом «Полиноофит» нарушений памяти и обучаемости при заболеваниях центральной нервной системы, сопровождающихся когнитивными нарушениями, а также его профилактического применения у практически здоровых лиц.

Новые сведения, касающиеся фармакологического действия и фармако-терапеатической эффективности данного средства, используются в учебном процессе на занятиях по фармакологии, фитотерапии и неврологии на медицинском факультете Бурятского государственного университета.

Положении, выносимые на защиту':

1. Экстракт «Полиноофит» обладает ноотропным действием на интактныч животных и выраженной фармакотерапевтической эффективностью при экспериментальных нарушениях когнитивных функций.

2. «Полиноофнт» обладает иейропротекторным действием при гипокснчс-ских повреждениях головного мозга,

3. Основными механизмами ноотропного н нейропротекторною действия «Полнноофита» следует считать его аитнгипоксические, антнокенлантные и мембраностабилизирующие свойства.

Апробации материалов диссертации. Основные положения диссертационной работы доложены н обсуждены на:

- Республиканской ('ероктологической конференции «Пожилой человек. Качество жнзнн» (Улан-Улэ, 2002);

- X, XII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» {Москва, 2003,2005);

- международной конференции молодых ученых «Актуальные проблемы современной науки» (Самара» 2003);

- научно-практической конференции «Биологически активные добавки в профилактической н клинической мелниннс» (Улан-Удэ, 2003);

- Ill конференции молодых ученых России «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины» (Москва, 2004);

- научно-практической конференции «Развитие традиционной медицины в России» (Улан-Удэ, 2004);

- международной научно-практической конференции «Monos -15. Дор-но-орнийн анагаах ухалны хосолмол тополиоо» (Улан-Батор. 2005);

- Ill Российской научно-практической конференции «Актуальные проблемы инноваций с нетрадиционными природными ресурсами и создания функциональных продуктов» (Москва, 2005);

- научно-практической конференции «Актуальные вопросы профилактической медицины» (Улан-Удэ, 2005);

- Всероссийской конференции с международным участием «Бноразно-образне экосистем внутренней Азин» (Улан-Удэ» 2006),

Работа выполнена в Отделе биологнчески активных веществ Института общей к экспериментальной биологии СО РАМ в соответствии с проектом №146 «Разработка лекарственных и профилактических препаратов для медицины. Фундаментальные основы и реализация», утвержденным президиумом СО РАН,

Публикации, По теме диссертации опубликовано 16 научных работ.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 109 страницах компьютерного текста и состоит из введения, 6 глав, выводов, списка литературы, включающего 253 источника, т которых 53 на иностранных языках. Работа иллюстрирована 13 таблицами, 9 рисунками и 6 микрофотографиями.

ВЫВОДЫ

1. «Полнноофнт» отлнчается выраженным ноотропным эффектом у нн-тактных животных, что выражается в улучшении выработки условных рефлексов, стимуляции поисково-исследовательских реакций и более прочной сохранности памятного следа на разных сроках исследований.

2. «Полнноофнт» предупреждает развитие нарушений когнитивных фу икни й у животных при воздействии ампозирующих факторов (электрошок, этанол, старение) и повышает устойчивость организма животных к гн-покснческим воздействиям.

3. По выявленному ноотропному эффект)1 «Полнноофнт» сопоставим с таковым препарата сравнения - пнранетама, а в некоторых случаях превосходит его действие,

4. Основные механизмы ноотропного эффекта «Полнноофнта» обусловлены антигнпоксическими. антнокекдантными и мембраностабнлиэирую-щнмн свойствами.

П РА КТИ Ч КС КИЕ РЕ КОМ FJ1ДАЦИИ Фармакотерапсвтическая эффективность «Полнноофнта», установленная к результате проведенных исследований, позволяет рекомендовать его в качестве профилактического и вспомогательного лечебного средства в составе комплексной терапии заболеваний центральной нервной системы, включая состояния, сопровождающиеся нарушением когнитивных функций.

2. Данные, изложенные в настоящей работе, используются в учебном процессе по фармакологии, фитотерапии и неврологии на медицинском факультете Бурятского государственного университета.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о наличии у комплексного растительного экстракта «Полмноофнт» ноотропного эффекта. Курсовое введение «Полиноофита» улучшает когнитивные функции у ннтактнш животных, что выражается в повышении эффективности и объема поисково-исследовательских движений, ускорении выработки условных рефлексов, упрочении памятного следа после обучения. Исследуемый полнэкстракт снижает амнезнрующее влияние агрессивных факторов: этанола, электрошока, различных видов гипоксии; а также при естественном старении. Курсовое введение «Полниоофита» в экспериментальных объемах окатывает выраженное иейропротекториое и антиоксидантное действие на фоне острой гнпоба-рической гипоксии, что выражается в увеличении продолжительности жизни, нормализации морфофункционатьиого состояния головного мозга; снижении содержания в гомогенатах мозга малонового диальдегида и повышении активности антнокендантного фермента каталазы. Также данный экстракт оказывает церебропротекторное действие прн острой ишемии головного мозга Кроме того, выявлено, что «Полиноофнт» относится к группе практически нетоксичных лекарственных средств, не оказывает отрицательного влияния на злектрофизиологическне параметры миокарда у белых крыс.

Полученные данные свидетельствуют о том, что среди основных механизмов в проявлении ноотропного и нейропротекторного эффектов «Полниоофита и являются его антитип оке нч ее кне, мембранопротекторные н ангн-окендантиые свойства, обусловленные широким спектром биологически активных веществ, содержащихся в испытуемом средстве: флавоноидов, эфирных масел, витаминов, микро- и макроэлементов, полисахаридов и других веществ (107, 175,181J.