Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Морфофункциональные изменения гепатобилиарной системы при синдроме мультисистемного истощения свиней

На правах рукописи

Лысак Александр Сергеевич

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ГЕПАТОБИЛИАРНОЙ СИСТЕМЫ ПРИ СИНДРОМЕ МУЛЬТИСИСТЕМНОГО ИСТОЩЕНИЯ СВИНЕЙ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология 16.00.02 - патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

п. Персиановский - 2009

003487537

Работа выполнена в Государственном научном учреждении «Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт» Российской академии сельскохозяйственных наук

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор Карташов Сергей Николаевич

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Паршин Павел Андреевич

Заслуженный деятель науки РФ, доктор биологических наук, профессор Дмитриев Анатолий Федорович

Ведущая организация:

ФГОУ ВПО «Волгоградская государственная сельскохозяйственная академия»

Защита состоится 22 декабря 2009 года в 1500 часов на заседании диссертационного совета ДМ 220.028.03 при ФГОУ ВПО «Донской государственный аграрный университет» по адресу: 346493, Ростовская область, Октябрьский (с) район, п. Персиановский, ДонГАУ.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Донской государственный аграрный университет» и на сайте университета www. dongau.ru.

Автореферат разослан « До » ноября 2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Цирковирус свиней второго типа (ЦВС-2) является возбудителем болезни поросят, впервые зарегистрированной в Канаде в 1991 году, и в связи с поражением различных систем организма названной «синдромом послеотьемного мультисистемного истощения» (СПМИ, цирковирусной инфекции). Болезнь характеризуется проявлением комплекса клинических признаков, включающих потерю веса, отставание в росте, одышку, диарею, желтуху и пневмонию (Орлянкин Б.Г. и др., 2002; Clark E.G., 1997; Allan G.M. et al., 1998; Mankertz A. et al„ 2000; O'Connor B. et a.l, 2001 и др.). В естественных условиях цирковирусной инфекции чаще отмечают у поросят 6-15 недельного возраста, у которых регистрируют наибольший отход, при этом пик заболеваемости приходится на 10-ти недельный возраст. Экономический ущерб, наносимый свинокомплексам болезнями, ассоциированными с ЦВС-2, может быть значительным, что связано с потерями от недополучения продукции и высокой смертностью поросят послеотьемного периода (Sato К. et al., 2001; Harding J.C., 2004). . Кроме того, в связи с возрастающим интересом в плане использования свиней в качестве доноров, ЦВС-2 может также представлять собой потенциальную угрозу здоровью людей при передаче через орган, ткань или клеточную трансплантацию (Сатина Т.А., 2003; Орлянкин Б.Г., 2005).

У инфицированных животных наиболее часто вирус обнаружен в клетках лимфовдной и гепатобилиарной системах, вместе с тем в литературе нет данных по морфологическим изменениям гепатобилиарного тракта у свиней при цирковирусной инфекции, что и послужило целью нашего исследования.

Цели и задачи исследования. Выяснить эпизоотическую ситуацию по цирковирусной инфекции свиней в Ростовской области, изучить морфофункциональные изменения гепатобилиарной системы у свиней инфицированных ЦВС-2 при разной выраженности синдрома послеотьемного мультисистемного истощения.

Для решения данной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить нозологический профиль инфекционных заболеваний в Ростовской области и место в нем цирковирусной инфекции.

2. Выяснить клинические проявления и распространение гепатопривного синдрома при цирковирусной инфекции у свиней.

3. Изучить особенности морфологических показателей печени и биохимического статуса свиней при цирковирусной инфекции с гепатопривным синдромом и без него.

4. Изучить морфофункциональные изменения гепатобилиарной системы у свиней при цирковирусной инфекции с разным клиническим течением заболевания.

5. Изучить изменения гепатоцитов при цирковирусной инфекции методом электронной микроскопии.

Научная новизна. Выяснена эпизоотическая ситуация по инфекционным болезням свиней в т.ч. по цирковирусной инфекции свиней в хозяйствах Ростовской области. Изучены клинические особенности течения цирковирусной инфекции с гепатопривным синдромом. Выяснены морфологические и биохимические изменения крови при цирковирусной инфекции с гепатопривным синдромом и без него. Установлены критерии постановки диагноза на гепатопривный синдром у свиней при цирковирусной инфекции. Изучена гистологическая картина печени при разном клиническом течении цирковирусной инфекции, впервые проведены электронномикроскопические исследования печени при цирковирусной инфекции свиней.

Теоретическая и практическая значимость работы.

Морфофункциональные изменения гепатобилиарной системы могут быть использованы для комплексной диагностики синдрома послеотьемного мультисистемного истощения свиней. Полученные данные по морфофункциональным изменениям гепатобилиарного тракта у свиней больных животных могут использоваться в учебном процессе по специальностям «Биология», «Ветеринария» и «Зоотехния», написании учебных пособий и практических рекомендаций.

Реализация результатов исследований. Результаты исследований используются при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий по эпизоотологии и патанатомии в ФГОУ ВПО «Донской государственный аграрный университет», в работе Ростовской областной ветеринарной лаборатории, СББЖ г. Новочеркасска.

Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на ежегодных заседаниях ученого совета ГНУ «Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт» в 2006-2008 гг. и на 4 всероссийских научно-практических конференциях в г.Новочеркасске.

Публикации. По материалам диссертационной работы опубликованы 7 научных работ, из них 3 - в рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследований, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы. Работа изложена на 139 страницах компьютерного текста, содержит 15 таблиц, 59 иллюстраций. Библиографический список включает 183 источника, в том числе 174 зарубежных.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Клинические признаки цирковирусной инфекции позволяют установить наличие гепатопривного синдрома, но точно диагноз ставят на основании биохимических критериев поражения печени

2. Морфологические изменения в печени соответствуют клиническому течению цирковирусной инфекции и имеют свои особенности при

субклиническом, с гепатопривном и без гепатопривного синдрома течении заболевания.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ МАТЕРИАЛЫ, МЕТОДЫ И ОБЪЕМЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Материалы, методы и объемы исследований Работа выполнена с 2005 по 2008 гг. в лаборатории функциональной диагностики болезней сельскохозяйственных животных и лаборатории болезней свиней ГНУ СКЗНИВИ Россельхозакадемии, Ростовской областной ветеринарной лаборатории, а также в хозяйствах Ростовской области.

В опытах использовали 240 поросят крупной белой породы в возрасте 4-х, 5-и и 6-и месяцев. Было создано по четыре группы животных каждого возраста по 20 голов в каждой. В первые группы животных вошли здоровые поросята, во вторые группы были отобраны животные с субклиническим течение цирковирусной инфекции. В третьи группы были отобраны поросята с клинически выраженным течением заболевания без признаков поражения гепатобилиарного тракта, и наконец в четвертые группы животных были отобраны поросята с клинически выраженной цирковирусной инфекцией с признаками поражения гепатобилиарного тракта (гепатопривным синдромом).

За подопытными животными было установлено постоянное клиническое наблюдение, при этом учитывали процент заболеваемости, выздоровления и падежа. Ежедневно проводили клиническое обследование поросят, а лабораторные исследования проводили при первичном, повторном осмотрах и при выздоровлении.

Для изучения эпизоотической ситуации по цирковирусной инфекции было проведено обследование поголовья свиней в 15 хозяйствах Ростовской области, проанализированы результаты лабораторных исследований ГУРО «Ростовская областная ветеринарная лаборатория» и лаборатории болезней свиней ГНУ СКЗНИВИ Россельхозакадемии.

Клиническое исследование больных животных проводили по общепринятой методике с последующим занесением результатов исследований в соответствующие протоколы или истории болезни.

Диагностику цирковирусной инфекции проводили в ГУРО «Ростовская областная ветеринарная лаборатория» с помощью тест-системы для выявления ДНК вируса в патологическом материале методом полимеразно-цепной реакции (ПЦР) с электрофоретической детекцией продуктов амплификации в агарозном геле. Дифференциальная диагностика с лептоспирозом проводилась методом микроаглютинации в ГУРО «Ростоблветлаборатория»

Морфологические и биохимические исследования крови проводились в ГУРО «Ростовская областная ветеринарная лаборатория» и лаборатории болезней свиней ГНУ СКЗНИВИ РАСХН.

Морфологический анализ крови включал: определение числа эритроцитов и лейкоцитов в сетке камеры Горяева, определение концентрации гемоглобина гемоглобинцианидным методом, гематокрита по методике,

предложенной И. И. Архангельским и JI. П. Сошенко (1993), определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ), выведение лейкограммы по общепринятым методикам.

Биохимический анализ крови включал определение следующих показателей: щелочной фосфатазы по ферментативному гидролизу п-нитрофенилфосфата, активности аспартатаминотрансферазы и аланинаминотрансферазы по методу Райтмана-Френкеля, а-амилазы - по Каравею, глюкозы - орто-толуидиновым методом, мочевины - с помощью био-лахема-теста, белка - с помощью биуретовой реакции, билирубина - по методу Ендрашика-Грофа, альбумина - по реакции с бромкрезоловым зеленым, креатинина - методом Яффе.

Из биохимических исследований, характеризующих воспалительный процесс, проводили определение С-реактивного белка - методом реакции преципитации в капилляре.

Гистологические исследования проводились по общепринятой методике с окраской гематоксилином и эозином, а также окраской по Масону .

Статистическую обработку результатов исследований проводили по H.A. Плохинскому (1970), Хитоси Кумэ (1990) с использованием компьютерной техники.

2.2. Особенности инфекционного нозологического профиля у свиней в Ростовской области, и место в нем цирковирусной инфекции

Ростовская область представляет собой зону со сложной эпизоотической обстановкой по инфекционным болезням. В хозяйствах региона ежегодно переболевают инфекционными болезнями от 40 до 95% поросят. Из общего количества павших поросят в 2005-2008 годах гибель их от инфекционных болезней составила 40,7%.

Мы провели ретроспективный анализ уровня заболеваемости свиней инфекционными болезнями в Ростовской области за период 2004-2008 г. Изучали удельный вес цирковирусной инфекции в сравнительном аспекте и в динамике.

За 5 лет (2004-2008 гг.) инфекционная патология свиней представлена, в основном, бактериальными заболеваниями и составляет 52,4% от общей инфекционной патологии. Цирковирусная инфекция занимает 2-е место после микоплазмоза (18,6% и 26,7% соответственно). Кроме этого, регистрировали РРСС и колибактериоз - по 9,8%, ПВИС - 8,22%, пастереллез - 6,15%. На долю остальных заболеваний приходилось в сумме не более 15 %.

ш

7.00'/

200Й

30015

ЛИМ

/

20%

40%

60%

40%

...... /

ши%

Рис. 1. Удельный вес цирковирусной инфекции в инфекционной патологии свиней в Ростовской области в период с 2004 по 2008 годы

Анализ удельного веса цирковирусной инфекции в общей инфекционной патологии свиней (рис. 1) показал, что за период с 2004 но 2008 гг. заболеваемость составила в среднем 24,28%. При этом за этот период цирковироз занимал относительно стабильное значение - от 21,4% а 2005 году до 25,8% в 2008 году. При этом по инцидентности инфекционной патологии цирковирусная инфекция занимает второе место после микоплазмоза.

МО

120

(4 й> 100

| о 80

д с ы 60

X

ц

о X 40 •

7.0 -

0

5-10 10-15 15-20 20-7.5 Возраст пороспг (недели!

Рис. 2. Заболеваемость поросят в зависимости от возраста В результате анализа заболеваемости поросят синдромом мультисистемного истощения в зависимости от возраста установлено, что из 524 поросят, у которых вирус был выделен методом ПЦР, 254 голов (48,4%) были 10-15 недельного возраста, 165 голов - в возрасте 15-20 недель (31,4%),

105 голов ■ и возрасте 5-10 недель (20,03%). Г1ик заболеваемости приходится на возраст 8-18 недель (рис. 2).

Динамика заболеваемости, смертности и летальности при ЦВИС, а также ассоциации цирковирусной инфекции и респираторно-реиродуктивного синдрома, которая наиболее часто регистрируется в Ростовской области, была проанализирована за 2007-2008 годы. Заболеваемость среди поросят циркоиирусной инфекцией и ассоциацией ЦВИС + РРСС на 1000 голов составила соответственно 331 и 785 голов в 2007 году, а в 2008 году - 460 и 764 соотнетстпсшго (габл.1).

Таблица 1

Динамика заболеваемости, смертности и летальности при

цирковирусной инфекции и ассоциации ЦВИС+РРСС у свиней

J. Носприим'жных ол жи ночных, год Заболело, гол. Пало, гол. Заболеваемость на 1000 голов Смертность на 1000 голов Летальность, %

ЦВИС

2007 1262 418 34 331 27 8,13

2008 986 454 29 460 29 6,39

ЦВИС+РРСС

2007 745 585 157 785 211 26,84

2008 867 662 213 764 246 32,18

Ц 2007 году смертность при синдроме мультисистемного истощения составила 27 голов на 1000 восприимчивых свиней при летальности 8,13%. В 2008 году эти показатели существенно не изменились — смертность составила 29 голов на 1000 восприимчивых животных, а летальность - 6,39%. При ассоциативном течении цирковирусной инфекции с респираторно-ренродуктивным синдромом смертность увеличивается в 7,8-8,5 раз, а легальность увеличивается в 2007 году на 26,84%, а в 2008 году - на 32,18%.

2.3. Клиническое течения цирковирусной инфекции у поросят с гепатопривным синдромом

Среди 524 животных, которым был поставлен диагноз цирковирусная инфекции у 83 были выявлены клинические признаки поражения тгатобилиарного тракта, а при последующем биохимическом исследовании вираж печеночных трансфераз и повышение уровня билирубина выявлено еще у 118 животных, таким образом, поражение генатобилиарного тракта у свиней больных цирковирусной инфекцией определялось в 201 случае, что составило 62%. При гистологическом исследовании поражение печени отмечалось у всех заболевших животных.

1$ зависимости от тяжести проявления цирковирусной инфекции течение заболевания условно подразделяют на: субклиническое, умеренное и тяжелое.

Субклиническое течение болезни характеризуется отсутствием клинических признаков, и заболевание можно выявить только с помощью гистологических исследований.

Так, например, гистологические изменения печени при субклиническом течении заболевания мы обнаруживали во всех случаях, причем преимущественно регистрируется лимфоцито-плазматическое воспаление. При субклиническом течении заболевания дефицит массы тела составлял ие более 10%

При умеренном течении синдрома мультисистемного истощения поросят, дефицит массы тела составлял от 10 до 30%, кроме того, отмечались клинические признаки заболевания, такие как угнетение, одышка, плохой аппетит, у некоторых животных отмечается диарея. В печени практически в равной степени отмечают грануломатозное, лимфоцито-плазматическое воспаление, а также некроз и дегенерация гепатоцитов. Начинает проявляться интерстициальный и грануломатозный гепатит.

При последней стадии заболевания, дефицит массы тела составил более 30%, выраженная астения, у некоторых животных до адинамии. Отмечаются все вышеуказанные гистологические изменения в печени от 31 до 84%, кроме того в 52% случаев регистрируется интерстициальная пневмония.

Таблица 2

Частота встречаемости симптомов при СПМИ, %_

Клинические симптомы Клиническое проявление заболевания

Субклиничсское Клинически выраженное Терминальная стадия

Снижение массы тела 7 84 100

Астения 12 54 100

Одышка 3,7 54 100

Хрипы - 15 100

Выделения из носа - 10 94

Диарея - 34 91

Тахикардия - 74 84

Кашель - 10 84

Повышение температуры - 30 54

Желтушность (бледность) - 3,5 44

Конъюнктивиты - 13 24

Артриты - 3,5 20

Частота встречаемости симптомов при синдроме мультисистемного истощения приведена в таблице 2. Кроме того, нами отмечены клинические признаки характерные для поражения печени: желтушность (от легкой до охряной), анорексия, диарея, болезненность в области печени. Нами были отобраны животные с клинически выраженным течением заболевания, у которых отмечались признаки поражения гепатобилиарного тракта, всего таких животных было 37 голов. Показатели этих животных мы сравнивали с животными у которых отмечались клинические признаки заболевания без признаков поражения гепатобилиарной системы.

Нами были в сравнительном аспекте изучены морфологические и биохимические изменения крови у животных с поражением гепатобшшарной системы, и у которых поражений гепатобилиарной системы клинически не отмечалось.

2.4. Результаты морфологических и биохимических исследований крови у норосш с цирковирозом и гепатопривным синдромом

При субклииическом течении цирковирусной инфекции число эритроцитов и количество гемоглобина по мере течения заболевания снижается с 5,751.1,46 х10,2/л и 97,1±9,08 г/л до 4,5±0,83 х1012/л и 97,2±11,54 г/л, ири клинически выраженном течении заболевания без признаков поражения печени с 4,08+ 1,29 х1012/л и 89,71± 10,67 г/л до 3,5±0,75 ><1012/л и 86:1:10,65 г/л, и при клинически выраженном течении заболевания с поражением печени с 3,43±1,24 х1012/л и 74,54±9,1 г/л до 2,81±0,44х1012/л и 79,5+1,32 г/л соответственно. Уровень лейкоцитов у здоровых свиней в 6-и месячном возрасте, составил 16,07+2,37* 109г/л., тогда как этот же показатель у свиней с субклиническим течением цирковирусной инфекции составил 12,4+3,35х109г/л, а при клинически выраженной цирковирусной инфекции составил 9,55+1,7х109г/л, 7,2±2,07хЮ9г/л, соответственно у животных без гепатопришюго синдрома и с гепатопривным синдромом, что на 40,57 % и 55,2 % меньше чем у здоровых животных, таким образом, лейкопения у свиней больных цирковирусной инфекцией с гепатопривным синдром выражена сильнее на 15%, чем у животных без гепатопривного синдрома.

Дли животных контрольной группы характерна активность аланинамшютрансферазы в сыворотке крови соответственно до 81,84±5,43, тогда как в первой, второй и третьей опытной группах соответственно эти показатели были 105,7+10,1; 147,14±8,82; 181,17+8,53 Е/л (р<0,001). Увеличение активности щелочной фосфатазы с 78,46+8,3 Е/л в I опытной группе, до 132,37+5,9 Е/л в III группе (р<0,001), относительно показателей у животных контрольной группы составило 145,86%, 203,46% и 246,09% соответственно. А показатель билирубина у животных в группе с гшатонривным синдромом составил 17,92±1,5 мкмоль/л, что превышает клинический порог по проявлению желтухи. Уровень глюкозы у свиней, первой опытной группы составил 4,54±0,2 ммоль/л. У свиней, контрольной группы был 5,69±0,3 ммоль/л. А в группе животных второй и третьей опытных групп составил 4,42+0,14; 4,27±0,19 ммоль/л соответственно, что на 20,21%, 22,32% и 24,96% меньше чем у животных контрольной группы. У животных второй опытной группы по сравнению со свиньями контрольной и первой опытной группы отмечается статистически значимая гипопротеинемия и гиноальбумипемия, тогда как уровень глобулинов менялся незначительно, что объясняет резкое снижение альбумии-глобулинового соотношения.

Результаты биохимических исследований крови у свиней с разным клиническим течением цирковирусной инфекции представлены в таблице 3.

Таблица 3

Биохимические показатели крови у свиней при цирковирусной инфекции _______в возрасте 4 мес._____

Показатели контроль« ая группа опытные группы

Субклини чсское течение клинически выраженное течение

без гепатопривного синдрома с гепатонрив. синдромом

Общий белок, г/л 67,58±2,2 68,52±4,61 57,1+3,34* 55,14±3,43*

Альбумин, г/л 32,77±3,21 32,36±2,31 24,15±2,17* 18,93+2,21*

Глобулин, г/л 34,81±2,76 36,16±3,54 32,95±3,68 36,21±3,58

Аланинамипотрансфераза, Е/л 81,84+5,43 105,7+10,1 147,14±8,82 181,17±8,53

Щелочная фосфатаза, Е/л 53,79±5,81 78,46±8,3 109,44±5,29 132,37±5,9

Мочевина, ммоль/л 4,77±1,04 6,3±1,53 9,43±0,84 15,5±0,93

Билирубин, мкмоль/л 4.37±0,74 7,52±0,77 10,3±1,07 17,92±1,5

Глюкоза, ммоль/л 5,69±0,3 4,54±0,2 4,42±0,14 4,27±0,19

рН плазмы 7,32±0,02 7,32+0,02 7,33+0,01 7,34±0,01

Калий ионизированный, ммоль/л 4,46±0,32 4,17±0,1 3,81±0,17 3,2±0,3

Протромбиновое время, с 10,32±1,2 9,72±1,12 11,4+1,3 14,01±1,35

Сиаловые кислоты, ммоль/л 1,89±0,64 2,78±0,42 3,14±0,64 4,02±0,61

Фибриноген, г/л 3,2±0,61 3,69±0,51 5,04±0,61 9,03±0,72

С-рсактивный белок - 1 2 3

Лактатдегидрогеназа Е/л 54,11+9,13 194,7±6,42 350,73±3,45 411,64±3,25

* - р<0,001, но сравнению с первой и второй группами

Таким образом критерием гепатопривного синдрома у свиней больных цирковирусной инфекцией является увеличение активное™ аланинаминотрансферазы до 181,17±8,53 Е/л, щелочной фосфатазы до 172,5±12,44 Е/л, билирубина до 14,01±1,75 мкмоль/л, и снижения уровня альбумина до14,62±3,3 г/л, отмечается более глубокая лейкопения и анемия чем у животных без гепатопривного синдрома.

2.5. Результаты морфологических исследований печени

Для решения поставленных задач нами было обследовано 249 свиней с диагнозом цирковирусная инфекция, который был поставлен методом выделения ДНК РСУ-2 в ПЦР. Все животные были подвергнуты эвтаназии или посмертному патологоанатомическому вскрытию с последующим морфологическим исследованием печени.

Всех животных можно разделить на 4 группы: животные носители, животные с субклиническим течением, с легким течением и тяжелым течением заболевания. У животных первой группы, несмотря на выделение

ДОК РСУ-2 методом ПЦР, патологоанатомических изменений в печени не обнаруживалось, и синдром мультисистемного истощения не наблюдался.

Ця

Шй

[ я"

•ш

ш

»«а

гЭ

а.

Рис. 1. Нарушение балочкой структуры вследствие множественных дегенеративных изменений гена'гадатов (карионикноз, кариолизис,

кариомегалии, тени ядер).

. шШ * V

-шшшщш

& ; ! Рис.2. Густой лерипортальный мононуклеарный инфильтрат. Внутрицитоплазмениые включения, выраженная зернистая дистрофия, апоптоз гепатоцитов Гематоксилин с эозином, !0><40.

, ЗД? Ж й- ¿ЯШ

& а

Рис. 3. Ацидофильные тельца Гематоксилин с эозином, 10x40.

шшшм

Рис. 4. Тотальная гиалиновокапельная дистрофия с незначительными участками каликвационного некроза.

У животных второй группы заболевание протекало субклинически. Субюшюическое течение болезни было определено у больных поросят после эвтаназии. При этом симптомы болезни отсутствовали, но в печени имелись минимальные гистологические изменения. Они характеризовались одно- или многоцентральным распределением лимфоцитов и плазматической рассеянной инфильтрацией в портальной триаде и печеночных дольках. Генатоциты были гистологически нормальными.

Легкое течение заболевания характеризовалось лишь более низкими живой массой и привесами. У некоторых животных отмечались периодические диареи, хотя свиньи охотно принимали корм и оставались подвижными. Патологоанатомические изменения определяли после эвтаназии. У этих животных и печени отмечались невыраженные гистологические изменения, харак теризующиеся лимфоцит арными инфильтратами портальных триад и печеночных долек, Отмечались фокальные некрозы, локальные расширения синусов с инфильтрацией лимфоцитами и мононуклеарными клетками (рис. 1,2). Генатоциты были гистологически нормальными. В группе животных с тяжелым течением заболевания исследовались поросята, умершие перед запланированной датой эвтаназии, или находившиеся в предсмертном

состоянии, с выраженным синдромом послеотьемного мультиеистемного истощения.

I- 'С

*7

' . Л: ^Д," -:':«''1' Л'

ш -

" «'':."■ > -г.'-;А'

•• --„V!

а* , ,:•>< « Ц.'

Рис. 5. Формирование нредциррогическое состояние.

в

и

. л»

.1

>-•-■

1

К» I -1

ложных долек, Рис. 6. Гидроиическая дегенерация гепатоцитов;

расширение центральной пены. Гематоксилин с эозином, 40x10

= -л •

- «£*• - • - ■"

$ МП;.

Я-

шШШш

Рис. 7. Обширные лейкоцитарные инфильтраты, в генатоцитах сохранен гликоген, ШИК 40* 10.

* ' V :ч

--1".

• '■ '-'Ц? а

Рис. 8. Узел регенерации гепатоцитов, калйквациоиый некроз. Гематоксилин с эозином, 10x40

Патоморфологические изменения в печени у свиней с тяжелым течением послеотьемного мультиеистемного истощения, чаще всего соответствовали портальному и лобулярному морфологическим вариантам поражения органа. При портальном варианте обнаруживали отёк и расширение портальных трактов с инфильтрацией их лимфогистиоцитарными элементами (рис. 2, 7). Гепатоциты находились в состоянии гидропической и жировой дистрофии (рис. 5, 6). При лобулярном варианте гепатита чаще обнаруживались некрозы печёночных клеток, иногда они носили сливной характер, располагались преимущественно в центральных отделах печёночных долек. Реже синдром послеотьемного мультиеистемного истощения протекал по перипортальному варианту. Для него характерно было наличие инфильтрации портальных трактов макрофаг ами, лимфоцитами, инфильтрат мог проникать внутрь дольки, разрушая пограничную пластинку. Отмечалась лимфоцитарная и моноцитарная инфильтрация портальных трактов от умеренной до выраженной, единичные ступенчатые некрозы гепатоцитов, гепатоцшы в состоянии гидропической дистрофии слабой и умеренной степени.

В портальных трактах отмечалась пролиферация эпителия в междолысовых желчных протоках. Однослойное строение тяжей (балок) гепатоцитов местами было нарушено, отмечалась выраженная их извитость, и узлы регенерации, гепатоциты выстраивались в виде розеток, но уже в этих розетках регенерации отмечался каликвационный некроз (рис. 8). Слой гепатоцитов, непосредственно прилегающий к портальному тракту, так называемая замыкающая пластинка, даже при тяжелом течении заболевания оставалась гистологически интактна. В синусоидах отмечалась дегенерация эндотелиальных клеток, местами их десквамация и гибелью гепатоцитов и пролиферацией клепок Купфера. В гепатоцитах центральных отделов долек отмечалась шдроиическая или баллонная дистрофия. Вместе с тем рассеяно, но всем дольками печени встречались гепатоциты в состоянии геалиповокапелыюй дегенерации, которая местами доходила до формирования телец Каунсильмена, крайней степени гиалиновокапельной дегенерации с некрозом гепатоцита (рис. 3, 4). Для тяжелого течения пирковироза особенно характерно проникновение инфильтрата из лимфоцитов, макрофагов, плазматических клеток через пограничную пластинку в печеночную дольку, что не отмечалось при более легком течении заболевания. Некрозы носили ступенчатый характер, но локально отмечались мостовидные и субмассивные поражения. Деструкция гепатоцитов сочеталась с очаговой или диффузной пролиферацией звездчатых ретикулоэндоте-лиоцитон и клеток холлангиол.

Таким образом, при субклиническом течении цирковирусной инфекции отмечаются незначительные лимфоцитарные инфильтраты, и ацидофильные тельца Каунсильмена (соответствующие апоптозу), при клинически выражением течении цирковирусной инфекции преимущественно отмечается мелкоочаговая гранулема с эозинофильным компонентом, при цирковирусной инфекции с генатоиривным синдромом развиваются дистрофические и шяфобиотичсасие изменения гепатоцитов, участки каликвационного некроза с формированием ступенчатых некрозов, пролиферацией гепатоцитов с формированием розеток, и последующим их некрозом. На фоне гадроинчсской и жировой дистрофии отмечается дессиминированная гианиноиоканельная дегенерация гепатоцитов с формированием телец Кауисильмана. При электронной микроскопии выявляются: набухание митохондрий гепатоцитов, гиперпролиферация гладкого и шероховатого эндошшматического ретикулома, кариопикноз; вакуоли, электропозитивные цитошшматичесше включения, жировые капли в цитоплазме гепатоцитов.

3. ВЫВОДЫ

1. За 5 лег (2004-2008 гг.) инфекционная патология свиней в Ростовской области представлена, в основном, бактериальными заболеваниями и составляет 52,4% от общей инфекционной патологии. Цирковирусная инфекция занимает 2-е место после микоплазмоза (18,6% и 26,7% соответственно). Кроме этого, регистрировали РРСС и колибактериоз - по

9,8%, ПВИС - 8,22%, пастереллез - 6,15%. На долю остальных заболеваний приходилось в сумме не более 15 %.

2. Среди 524 животных, которым был поставлен диагноз цирковирусная инфекция у 83 были выявлены клинические признаки поражения гепатобилиарного тракта, а при последующем биохимическом исследовании вираж печеночных трансфераз и повышение уровня билирубина выявлено еще у 118 животных. Таким образом, поражение гепатобилиарного тракта у свиней больных цирковирусной инфекцией определялось в 201 случае, что составило 62%. При гистологическом исследовании поражение печени отмечалось у всех заболевших животных.

3. При субклиническом течении цирковирусной инфекции число эритроцитов и количество гемоглобина по мере развития заболевания снижается с 5,75±1,46 хЮ12/л и 97,1±9,08 г/л до 4,5±0,83 х1012/л и 97,2±11,54 г/л, при клинически выраженном течении заболевания без признаков поражения печени с 4,08± 1,29 *1012/л и 89,71+ 10,67 г/л до 3,5±0,75 хЮ12/л и 86± 10,65 г/л, и при клинически выраженном течении заболевания с поражением печени с 3,43±1,24 хю12/л и 74,54±9,1 г/л до 2,81±0,44х1012/л и 79,5±1,32 г/л соответственно.

4. Уровень лейкоцитов у здоровых свиней в 6-ти месячном возрасте, составил 16,07±2,37хЮ9г/л, тогда как этот же показатель у свиней с субклиническим течением цирковирусной инфекции составил 12,4±3,35хЮ г/л, а при клинически выраженной цирковирусной инфекции составил 9,55+1,7х109г/л, 7,2±2,07х109г/л, соответственно у животных без гепатопривного синдрома и с гепатопривным синдромом, что на 40,57 % и 55,2 % меньше чем у здоровых животных. Лейкопения у свиней больных цирковирусной инфекцией с гепатопривным синдром выражена сильнее на 15%, чем у животных без гепатопривного синдрома.

5. Критерием гепатопривного синдрома у свиней больных цирковирусной инфекцией является увеличение активности аланинаминотрансферазы до 181,17±8,53 Е/л, щелочной фосфатазы до 172,5±12,44 Е/л , билирубина до 14,01±1,75 мкмоль/л, и снижения уровня альбумина до14,62±3,3 г/л.

6. Для субклинического течения цирковирусной инфекции характерны незначительные лимфоцитарные инфильтраты, и отдельные ацидофильные тельца Каунсильмена (соответствующие апоптозу и гиалиново-капельной дегенерации). Для клинически выраженного течения цирковирусной инфекции без гепатопривного синдрома, преимущественно отмечается мелкоочаговая гранулема с эозинофильным компонентом. Для цирковирусной инфекции с гепатопривным синдромом характерно развитие диссеменированных дистрофических и некробиотических изменений гепатоцитов, множественные участки каликвационного некроза с формированием ступенчатых некрозов, пролиферацией гепатоцитов с формированием розеток, и последующим их некрозом. На фоне гидропической и жировой дистрофии отмечается диссеминированная

гиалиновокапельная дегенерация гепатоцитов с формированием телец Каунсильмана.

7. При электронной микроскопии печени у поросят с цирковирусной инфекцией выявляются: набухание митохондрий гепатоцитов, гиперпролиферация гладкого и шероховатого эндоплазматического ретикулома, кариопикноз; вакуоли, электропозитивные цитоплазматические включения, жировые капли в цитоплазме гепатоцитов.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Клиническую оценку состояния свиней при цирковирусной инфекции необходимо давать с учетом клинических признаков, биохимических исследований крови и данных гистологического исследования печени.

2. Полученные сведения о морфофункциональных особенностях гепатобилиарной системы могут быть использованы в качестве исходных критериев для оценки и прогнозирования тяжести течения цирковирусной инфекции свиней.

3. Материалы диссертационной работы могут быть использованы в научных целях, при составлении учебных и справочных пособий, чтении лекций, ведении лабораторно-практических занятий по специальности ветеринария и зоотехния.

5. СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ:

1.Бутенков, А.И. Количественные и качественные изменения индигенной микрофлоры у поросят при заболеваниях желудочно-кишечного тракта / А.И. Бутенков, С.Н. Карташов, O.A. Миронова, A.C. Лысак // «Современное состояние и перспективы развития патологии, морфологии и онкологии животных». Материалы Всероссийской научно-практич. конф. г. Новочеркасск, 2008.-c.6-9.

2.Ключников, А.Г. Патоморфологическая характеристика лимфатических узлов при цирковирусной инфекции свиней / А.Г. Ключников, С.Н. Карташов, Д.А. Андреев, A.C. Лысак // Современное состояние и перспективы развития патологии, морфологии и онкологии животных». Материалы Всеросс. научно-практич. конф. - г.Новочеркасск, 2008. -С. 89-94.

3.Карташов, С.Н. Морфофункциональные изменения в печени при цирковирусной инфекции у поросят / С.Н. Карташов, А.Г. Ключников, ДА. Андреев, A.C. Лысак // Современное состояние и перспективы развития патологии, морфологии и онкологии животных». Материалы Всеросс. науч.-практич. конф. -г.Новочеркасск, 2008. -С. 94-96.

4.Карташов, С.Н. Сопутствующие инфекции при синдроме послеотъемного мультисистемного истощения свиней / С.Н. Карташов,

А.Г. Ключников, А.М. Ермаков, A.C. Лысак // Труды Кубанского государственного аграрного университета. Научный журнал Серия «Ветеринарные науки» № 1(чЛ) 2009 г. - С. 45-47.

5.Карташов, С.Н. Поражение гепатобилиарного тракта при цирковирусной инфекции у свиней / С.Н. Карташов, А.Г. Ключников, A.C. Лысак, Д.А. Андреев //Труды Кубанского государственного аграрного университета. Научный журнал Серия «Ветеринарные науки» №1(ч.1)2009 г.-С. 47-50

6.Карташов, С.Н. Патоморфологическая характеристика печени и почек при цирковирусной инфекции свиней / С.Н. Карташов, А.Г. Ключников, Д.А. Андреев, A.C. Лысак // Труды Кубанского государственного аграрного университета. Научный журнал Серия «Ветеринарные науки» № 1(ч.2) 2009 г. - С, 35-37.

7. Карташов, С.Н. Состояние гепатобилиарного тракта при цирковирусной инфекции у свиней / С.Н. Карташов A.C. Лысак // «Повышение продуктивности сельскохозяйственных животных и птицы на основе инновационных достижений». Материалы Всероссийской научно-практич. конф. г.Новочеркасск, 2009,- с. 89-91.

Лысак Александр Сергеевич

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ГЕПАТОБИЛИАРНОЙ СИСТЕМЫ ПРИ СИНДРОМЕ МУЛЬТИСИСТЕМНОГО ИСТОЩЕНИЯ

СВИНЕЙ

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Подписано в печать 18.11.09 Печать оперативная Усл. печ. л. 1 Заказ X" 2955 Тираж 100 экз. Издятелъско-полиграфяческий комплекс «Биос» РГУ 344091, г.Ростов-на-Дону, ул.Зорге, 28/2, корпус.5 «В»

Актуальность темы. Цирковирус свиней второго типа (ЦВС-2, PCV-2) является возбудителем болезни поросят, впервые зарегистрированной в Канаде в 1991 году, и в связи с поражением различных систем организма названной «синдромом послеотъемного мультисистемного истощения» (цирковирусной инфекции). Болезнь характеризуется проявлением комплекса клинических признаков, включающих потерю веса, отставание в росте, одышку, диарею, желтуху и пневмонию. В естественных условиях цирковирусной инфекции чаще отмечают у поросят 6-15 недельного возраста, у которых регистрируют наибольший отход, при этом пик заболеваемости приходится на 10-ти недельный возраст. У инфицированных животных вирус обнаружен в клетках лимфоидной системы (макрофагах, дендритных клетках, Т- и В- лимфоцитах), являющихся клетками-мишенями для ЦВС-2 (Орлянкин Б.Г. и др., 2002; Clark E.G., 1997; Allan G.M. et al., 1998; Mankertz A. et al., 2000; O'Connor B. et a.l, 2001 и др.). Интенсивное размножение вируса в клетках иммунной системы приводит их к гибели и развитию иммунодефицитного состояния. У таких животных создаются условия для возникновения вторичных инфекций, вызываемых условно-патогенными микробами (Segales J. et al., 2001). Вместе с тем исследований лимфоидных тканей свиней при цирковирусной инфекции свиней недостаточно, нет данных по распределению Т- и В-лимфоцитов в лимфатических узлах свиней при разной тяжести заболевания, что и определило цель нашего исследования.

В России ЦВС-2 был впервые обнаружен в 2000 году. Цирковирусная инфекция была установлена у свиней во многих из обследованных хозяйств РФ. В то же время неизученным оставался широкий круг проблем, связанных с этой инфекцией: степень распространения цирковирусов среди домашних свиней и диких кабанов, генетическое разнообразие вируса, циркулирующего на территории России, вовлечённость ЦВС-2 в различные формы инфекционной патологии свиней. Экономический ущерб, наносимый свинокомплексам болезнями, ассоциированными с ЦВС-2, может быть значительным, что связано с потерями от недополучения продукции и высокой смертностью поросят послеотъемного периода (Sato К. et al., 2001; Harding J.C., 2004). Кроме того, в связи с возрастающим интересом в плане использования свиней в качестве доноров, ЦВС-2 может также представлять собой потенциальную угрозу здоровью людей при передаче через орган, ткань или клеточную трансплантацию (Сатина Т.А., 2003; Орлянкин Б.Г., 2005).

Цели и задачи исследования. Выяснить эпизоотическую ситуацию по цирковирусной инфекции свиней в Ростовской области, изучить морфофункциональные изменения гепатобилиарной системе у свиней инфицированных ЦВС-2 при разной выраженности синдрома послеотъемного мультисистемного истощения.

Для решения данной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить нозологический профиль инфекционных заболеваний в Ростовской области и место в нем цирковирусной инфекции

2. Выяснить клинические проявления и распространение гепатопривного синдрома при цирковирусной инфекции у свиней

3. Изучить особенности морфологических показателей печени и биохимического статуса свиней при цирковирусной инфекции с гепатопривным синдром и без него

4. Изучить морфофункциональные изменения гепатобилиарной системы у свиней при цирковирусной инфекции с разным клиническим течением заболевания.

5. Изучить изменения гепатоцитов при цирковирусной инфекции методом электронном микроскопии.

Научная новизна. Выяснена эпизоотическая ситуация по инфекционным болезням свиней в т.ч. по цирковирусной инфекции свиней в хозяйствах Ростовской области. Изучены клинические особенности течения цирковирусной инфекции с гепатопривным синдромом. Выяснены морфологические и биохимические изменения крови при цирковирусной инфекции с гепатопривным синдромом и без него. Установлены критерии постановки диагноза на гепатопривный синдром у свиней при цирковирусной инфекции. Узучена гистологическая картина печени при разном клиническом течении цирковирусной инфекции, впервые проведена электронномикроскопические исследования печени при цирковирусной инфекции свиней

Теоретическая и практическая значимость работы.

Морфофункциональные изменения гепатобилиарной системы могут быть использованы для комплексной диагностики синдрома послеотъемного мультисистемного истощения свиней. Полученные данные по морфофункциональным изменениям гепатобилиарного тракта у свиней больных животных могут использоваться в учебном процессе по специальностям «Биология», «Ветеринария» и «Зоотехния», написании учебных пособий и практических рекомендаций.

Реализация результатов исследований. Результаты исследований используются при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий по эпизоотологии и патанатомиии в ФГОУ ВПО «Донской государственный аграрный университет», в работе Ростовской областной ветеринарной лаборатории, СББЖ г. Новочеркасск.

Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на ежегодных научно-практических конференциях ФГОУ ВПО «Донской государственный аграрный университет», ГНУ «СевероКавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт» в 2006-2008 гг. и на 3 всероссийских научно-практических конференциях гг. Ростове, Воронеже, Краснодаре, Новочеркасске.

Публикации. По материалам диссертационной работы опубликованы 8 научные работы, из них 1 — в рецензируемых изданиях, рекомеандованных ВАК РФ.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора

4. ВЫВОДЫ

1. За 5 лет (2004-2008 гг.) инфекционная патология свиней представлена, в основном, бактериальными заболеваниями и составляет 52,4% от общей инфекционной патологии. Цирковирусная инфекция занимает 2-е место после микоплазмоза (18,6% и 26,7% соответственно). Кроме этого, регистрировали РРСС и колибактериоз - по 9,8%, ПВИС — 8,22%, пастереллез — 6,15%. На долю остальных заболеваний приходилось в сумме не более 15 %.

2. Среди 524 животных, которым был поставлен диагноз цирковирусная инфекции у 83 были выявлены клинические признаки поражения гепатобилиарного тракта, а при последующем биохимическом исследовании вираж печеночных трансфераз и повышение уровня билирубина выявлено еще у 118 животных, таким образом, поражение гепатобилиарного тракта у свиней больных цирковирусной инфекцией определялось в 201 случае, что составило 62%. При гистологическом исследовании поражение печени отмечалось у всех заболеваших животных.

3. При субклинической форме цирковирусной инфекции число эритроцитов и количество гемоглобина по мере течения заболевания снижается с 5,75±1,46 *10,2/л и 97,1±9,08 г/л до 4,5±0,83 хЮ,2/л и 97,2±11,54 г/л, при клинически выраженном течении заболевания без признаков поражения печени с 4,08± 1,29 *ю12/л и 89,71± 10,67 г/л до 3,5±0,75 *ю12/л и 86±10,65 г/л, и при клинически выраженном течении заболевания с поражением печени с 3,43±1,24 *ю12/л и 74,54±9,1 г/л до 2,81±0,44хЮ12/л и 79,5±1,32 г/л соответственно.

4. Уровень лейкоцитов у здоровых свиней в 6-и месячном возрасте, составил 16,07±2,37хЮ9г/л., тогда как этот же показатель у свиней с субклиническим течением цирковирусной инфекции составил 12,4±3,35хЮ9г/л, а при клинически выраженной цирковирусной инфекции составил 9,55±1,7хЮ9г/л, 7,2±2,07хЮ9г/л, соответственно у животных без гепатопривного синдрома и с гепатопривным синдромом, что на 40,57 % и

55,2 % меньше чем у здоровых животных, лейкопения у свиней больных цирковирусной инфекцией с гепатопривным синдром выражена сильнее на 15%, чем у животных без гепатопривного синдрома.

5. Критерием гепатопривного синдрома у свиней больных цирковирусной инфекцией является увеличение активности алланинаминотрансферазы до 181,17±8,53 Е/л, щелочно фосфотазы до 172,5±12,44 Е/л , билирубина до 14,01±1,75 мкмоль/л, и снижения уровня альбумина до 14,62±3,3 г/л.

6. Для субклинического течения цирковирусной инфекции характерны незначительные лимфоцитарные инфильтраты, и отдельные ацидофильные тельца Каунсильмена (соответствующие апопатозу и гиалиново-капельной дегенерации). Для клинически выраженного течении цирковирусной инфекции без гепатопривного синдрома, преимущественно отмечается мелкоочаговая гранулема с эозинофильным компонентом. Для цирковирусной инфекции с гепатопривным синдромом характерно развитие диссеменированных дистрофических и некробиотических изменений гепатоцитов, множественные участки каликвационного некроза с формированием ступенчатых некрозов, пролиферацией гепатоцитов с формированием розеток, и последующим их некрозом. На фоне гидропической и жировой дистрофии отмечается дессиминированная геалиновокапельная дегенерация гепатоцитов с формированием телец Каунсильмана.

7. При электронной микроскопии печени у поросят с цирковирусной инфекцией выявляются: набухание митохондрих гепатоцитов, гиперпролиферация гладкого и шероховатого эндоплазматического ретикулома, кариопикноз; вакуоли, электропозитивные цитоплазматические включения, жировые капли в цитоплазме гепатоцитов.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Клиническую оценку состояния свнией при цирковирусной инфекции необходимо давать, с учетом клинических признаков, биохимических исследований крови и данных гистологического исследования печени.

2. Полученные сведения о морфофункциональных особенностях гепатобилиарной системы могут быть использованы в качестве исходных критериев для оценки и прогнозирования тяжести течения цирковирусной инфекции свиней.

3. Материалы диссертационной работы могут быть использованы в научных целях, при составлении учебных и справочных пособий, чтении лекций, ведении лабораторно-практических занятий по специальности ветеринария и зоотехния.

117