Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Микобактериозы крупного рогатого скота, инфицированного вирусом лейкоза (эпизоотология, патогенез и диагностика)

АКАДЕМИЯ АГРАРНЫХ НАУК РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ БЕЛОРУССКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ВЕТЕРИНАРИИ им. С.Н.ВЫШЕЛЕССКОГО

3 Г Б ОД

На правах рукописи

ХОЛОД Андрей Андреевич

УДК 619:616.98:579.873.21-07:636.2

МИК0ЕАКТЕРИ03Ы КРУШОГО РОГАТОГО СКОТА,

ИНФИЦИРОВАННОГО ВИРУСОМ ЛЕЙКОЗА (ЭПИЗООТОЛОГИЯ, ПАТОГЕНЕЗ И ДИАГНОСТИКА)

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

МИНСК - 1994

Работа выполнена в Белорусском научно-исследовательском институте экспериментальной петеринарии имени С.Н.Вышелесского

Научные руководители: доктор ветеринарных наук Г.А.Объедков

кандидат ветеринарных наук А.Г.Дрогун

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Р.В.Тузова

доктор ветеринарных наук, профессор Л.М.Луцевич

Ведущее учреждение: Витебская Государственная академия ветеринар^ медицины

Запета состоится часов

на заседании специализированного совета Д.020.47.01 в Белорусском научно-исследовательском институте экспериментальной ветертарии имени С.Н.Вышелесского (223020, гЛ&нск, п/о Дуниевщина, БелНИИЭВ] С диссертацией могао ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан " " 1994 г.

Ученый секретарь специализированного совета, доктор ветеринарных наук,

профессор В.Я.Линник

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

I.I. Актуальность темы. Развитие животноводства в значительной море зависит от эпизоотической ситуации по инфэкшоннкм бо-гезням, особенно хроническим (туберкулез, лейкоз и другие).

В Республике Беларусь широко распространена заболеваемость крупного рогатого скота туберкулезом и лейкозом, приносящими значительный экономический ущерб, обусловленный преждевременной выбраковкой и убоем высокопродуктивных животных и, как следствие, нарушением селекционно-племенной работы (Юсковец М.К., 1963; Ту-зова Р.В., 1983; Лемеш В.М., Дрогун А.Г. и др., 1987).

Несмотря на достигнутые успехи в изучении этиологии, патогенеза, диагностике и профилактике туберкулеза, многие вопросы остаются недостаточно изученными.

В частности ряд исследователей ( Freerksen Е.,< I960", Марг-ма О.В., 1982, 1986; Солонеко A.A., Румачик И.И., 1988) отмечают, что некоторые виды атипичных микобактерий патогенны для отдельных видов животных. Кроме того у людей и животных они вызывают заболевания, называемые микобактеряозсми.

В дифференциальной диагностике микобактериозов некоторые авторы (Sehl lesser Т1цЛ9б5; Чепик Г.В., I978*,Chol et аЦ, 1983; Кассич Ю.Я. и flp.,-I985;Chavez al¿987; Овдиенко Н.П.,

1990; Донченко A.C., 1991) предложили симультанную аллергическув пробу с двумя туберкулинвми (ПДЦ туберкулин для млекопитающих и птиц). Другие авторы (Шаров А.Н., 1985) предлагают использовать для симультанной аллергической пробы ППД туберкулин для млекопитающих и НАМ.

Недостатками этих методов является необходимость диагностического убоя значительного количества реагирующих животных, что

ограничивает широкое применение его в практике.

Для совершенствования дифференциальной диагностики туберкулиновых реакций были испытаны и предложены: реакция лизиса лейкоцитов (Дуцевич Л.Ы., 1975; Самилло С.К., 1989), внутривенная туберкулиновая ¡роба (Глинникова З.А., Григорьев М.М., 1982; Сысоев В.А., 1985; Соtr 1 na N4ll 1986; Козин А.Н., 1987; Нуратинов P.A., 1987), иммуноферментный анализ (Лысенко А.П. и др., 1987; Цунская Н.И., Аппельганц Л,Т., 1991).

Однако мнения об эффективности этих методов разноречивы, что вызвало необходимость разработки системы диагностических исследований приемлемой для хозяйств республики, независимо от эпизоотической ситуации.

В последние годы особенно остро возник вопрос о дифферент-ояьной диагностике в хозяйствах, в которых животные инфицированы микобактериями и вирусом лейкоза.

Подобная проблема возникла и в других регионах СНГ. В частности, в НИИ экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока проводилась работа по изучению иммуноморфологических особенностей у животных при сочетенноы инфицировании микобакте-риями и вирусом лейкоза, частоты одновременного реагирования животных на ППД туберкулин для млекопитающих и антиген вируса лейкоза крупного рогатого скота {Смирнов П.Н., 1986; Матер C.H.I992). Ими были получены данные об отягчающем влиянии инфекции вируса лейкоза крупного рогатого скота на развитие экспериментального туберкулеза, а также о взаимном усилении патологических процессов

Б Республике Беларусь предпринимались попытки изучения со-четанного течения туберкулеза и лейкоза (Лемеш В.М., Дрогун А.Г., 1978). Однако они были направлены преимущественно на изучение гематологического профиля, костного мозга и патоморфологических

особенностей, без учета спектра туберкулиновых реакций.

В связи с вышеизложенным в Беларуси возникла настоятельная необходимость изучения возможности с очет энного туберкулезно-лей-козного процесса, взаимовлияния обе.« возбудителей на течение инфекционного процесса, разработке методов диагностики.

1.2. Цель исследований. Разработка системы дифференциальной диагностики туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота на основе изучения иммуноморфогенеза при сочетанном инфицировании животных микобактеривми и вирусом лейкоза.

1.3. Задачи.

1. Изучить эпизоотическую ситуацию по микобаятериозам и лейкозу крупного рогатого скота в Республике Беларусь.

2. Изучить имцуноморфогенез при сочетанном инфицировании крупного рогатого скота микобактериями и вирусом лейкоза в естественных и экспериментальных условиях.

3. Усовершенствовать дифференциальную диагностику микобак-териозов крупного рогатого скота при сочетанном течении с лейкозом.

1.4. Научная новизна. Изучена и проанализирована эпизоотическая ситуация по туберкулезу крупного рогатого скота в республике и отдельных хозяйствах.

Впервые изучен иммуноморфогенез при ассоциированном инфицировании крупного рогатого скота микобактериями и вирусом лейкоза. Установлено, что на начальном этапе сочетанием патологического процесса, обусловленного Ьа*и и вирусом лейкоза, у животных превалирует реакция иммунной системы на ЬоуН , проявляющаяся гиперчувствительн остью замедленного типа и изменениями морфологического состава крови, а с дня - ослаблением выраженности этих показателей.

Ассоциированное течение процесса, обусловленного ü, scrofula-ceua и вирусом лейкоза характеризуется кратковременной (до 15 дней) гиперчувсгвительносгыо замедленного ту.па с преобладанием иммунных реакций к вирусу лейкоза крупного рогатого скота.

Разработана и апробирована в хозяйствах "Методика зондированного исследования специфичности туберкулиновой реакции у коров", позволяющая более достоверно осуществлять прижизненную диагностику туберкулеза крупного рогатого скота и снизить необоснованный убой продуктивных животных после первичной туберкулинизации.

1.5. Практическая ценность работы. На основании полученных результатов рааработана и утверждена в Главном управлении ветеринарии Министерства сельского хозяйства и продовольствия БССР "Методика зондированного исследования специфичности туберкулиновой реакции у коров" (1991).

Положения диссертации использованы в "Методичеоких указаниях по диагностике лейкоза крупного рогатого скота в Республике Беларусь" (утверждены Научно-техническим Советом Министерства оельского хозяйства и продовольствия Реопублики Беларусь в 1993 году).

1.6. Апробация работы. Материалы диооергации доложены на III Всеооюзной конференции по эпизоотологии (Новосибирск, 1991), на эаседаниях Ученого Совета БелНИИЭВ им.С.Н.Вшелеоокого (Минск, 1989-1994), на совещании в Главном управлении вегеринарии Гос-агропрома БССР (Минск, 1990), межлаборагорном совещании научных оогрудников БелНИИЭВ им. С.Н.Вышелеоского (Минск, 1994).

1.7. Публикации результатов исследований.

По теме диссертации опубликовано 6 научных работ.

1.8. Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 131 странице машинописного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуздение результатов исследований, еызсды, практические предложения, список литературы и приложение. Работа иллюстрирована 13 таблицами и 4 рисунками. Список литературы включает 255 источников, из них 81 иностранный.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материалы и методы. Работа выполнялась в 1988-1993 годах в лабораториях по изучении туберкулеза и лейкоза БелНИИЭВ им. С.Н.Вышелесского, в хозяйствах и мясокомбинатах республики.

При выполнении исследований использовали эпизоотологический, аллергический, клинический, патологоанатомический, бактериолога« ческий и бактериоскопический методы, а также внутривенную туберкулиновую и биологическую пробы, реакцию прямого леЯкоцитолизиса.

Изучение опизоотической обстановки по туберкулезу а республике за 1983-1993 годы проводили путем анализа материалов Государственной ветеринарной отчетности, а также результатов исследований яивотных в хозяйствах республики.

Туберкулиновой пробой исследовали 4880 голов крупного рогатого скота в благополучных по туберкулезу хозяйствах, но с наличием в стаде инфшированных ВЛКРС животных (в соответствии с "Инструкцией о мероприятиях по профилактике и ликвидации туберкулеза животных", утвержденной ГУВ Госагропрома СССР в 1986 году). Патологоанатсыически гсследовали после убоя 48 голов крупного рогатого скота и 96 морских свинок.

Бактнриоскопически исследовали 728 мазков, окрашенных по Шль-Нильсену, методом световой микроскопии.

Диагностические исследования крупного рогатого скота на

лейкоз проводили в соответствии с "Методическими указаниями по диагностике лейкоза крупного рогатого скота" (I9öü). Для постановки реакции иммунодиффузии (РИД) в геле агара использовали коммерческий диагностический набор (производства Курской биофабрики).

На животных, реагировавших в симультанной пробе в равной степени и больше на ПОД туберкулин для млекопитающих, проводили внутривенную туберкулиновую пробу, при положительных результатах которой дополнительно проводили реакцию лизиса лейкоцитов.

В опытах использовали 120 морских свинок, 60 кроликов, 15 телок и коров.

Опыт по изучению иммуноморфОгенеза у инфицированных вирусом лейкоза животных, экспериментально зараженных Мч bovis я »c»»fu Ueeun проводили в виварии института. С этсй целью в благополучие по туберкулезу крупного рогатого скота хозяйстве было подобрано 9 голов крупного рогатого скота, инфицированного в^руоом лейкоза, живой массой свыше 300 кг. Из них по три животных были заражены bovis, Ц, sorofuUceu» и три - инфицированные ВДКРС (контроль). Кроме того, из 6 клинически здоровых животных, три были заражены Ii« bovis , а три служили контролем.

До заражения микобактеридми животные на введение туберкулином не реагировали.

Заражение подопытных животных проводили дозой I мг бакмассы на I кг живой массы четырехнедельными культурами ^ bovis (штамм 8), и ^ itt«fuUc«UB (штамм B*l49«J, полученные из ВИЭВ йм.Я.Р.Коваленко.

У подопытных животных кожную чувствительность выявляли симультанной аллергической пробой, применяя сухой очищенный ППД

туберкулин для млекопитающих и птиц, а также КАШ через 15, 45, £

Опыт проведен Г.А.Объедковым, В.А.Сюоюкиным и М.М.Григорьевым.

75, 120, 150 и 180 дней после заражения.

Внуграненную туберкулиновую пробу ставили по методике, утвержденной ГУВ Госкомиссии СМ СССР по продовольствию и закупкам I2.0I.I9S0 г. Учет и оценку реакций проводили через 3, 6, 9 и 24 часа после введения туберкулина. Реагирующими считала stiaojv шх, у которых температура тела повышалась на один и более градусов.

Для определения чувствительности лейкоцитов к специфическому аллергену у животных использовали реакцию лизиса лейкоцитов (РЛЛ или прямого лейкоцитолизиса), которую ставили по методике М.И.Чернышевой (1968). Для постановки реакции кровь от крупного рогатого скота брали из яремной вены в биологические пробирки, содержащие раствор гепарина.

По 0,4 мл гепаринизированной крови от каадого животного помещали в две пробирки. В первую (опытную) добавляли 0,1 мл (400 мкг) раствора сухого очищенного (ПДД) туберкулина для млекопитающих, во вторую -'0,1 мл физиологического раствора для исключения несдецифцческого лизиса лейкоцитов (контроль). Параллельно с кровью от инфицированных ВЛКРС и экспериментально зара-яенных мдкобактериямя животных ставили реакцию лизиоа лейкоцитов с лейкозным антигеном.

Подсчет колячеогва лейкоцитов выполняли в камере Горяева по общепринятому методу. Затем штатив о пробирками помещали в repjoorar при 37°С на четыре чаоа я вогряхивали через каадне 1520 минут. После инкубации проводили повторный двукратный подсчет количества лейкоцитов в опытной я контрольной пробирках и выводили средние показатели.

Процент оставшихся лейкоцитов после инкубации в опытной и

конгрольной пробирках определяли по соотношению количества лейкоцитов после и до инкубации, а лизированных лейкоцитов - вычитанием из оставшихся лейкоцитов.

Показатель специфического лизиса лейкоцитов в процентах определяли путем вычитания процента лизированных лейкоцитов в опытной в конгрольной пробирках.

Количество лейкоцитов и лейкоцитарную формулу определяли по общепринятым методикам.

При патологоанатомическом исследования осмотру подвергали подчелюстные, заглоточные, бронхиальные, средосгенные, портальные, брыжеечные, надвымянные лимфатические узлы, легкие, печень, селезенку, молочную железу, плевру, кишечник и другие органы. Материал для лабораторного исследования отбирали согласно "Нао-гавления по диагностике туберкулеза животных" (утвержденного 17В Госагропрома СССР, 1986).

Бактериологическое исследование проводили по методикам, описанным в вышеуказанном наставлении.

Мазки-отпечатки из органов, мазки из суспензии и культуры микобактерий окрашивали по Циль-Нильсену и просматривали под микроскопом.

В биопробе изучали сеноибилизкрующие и патогенные свойства культур микобактерий. У выделенных культур атипичных микобактерий определяли тинкториальные свойства, скорость и характер роста колоний на питательных средах.

Статистическую обработку результатов с вычислением среднего арифметического отклонения (Ы^м) осуществляли с использованием "Методических указаний", разработанных на кафедре патологической анатомии Вягебсхого ветеринарного института (1985). Вероятность различий (Р) определяли по таблицам Стьюдента.

2.2. Результаты исследояаний.

2.2.1. Эпизоотическая ситуация по микобантермозам и лейкозу крупного рогатого скота.

Анализ ветеринарной отчетности по туберкулезу крупного рогастого скота в республике показал, что начиная с 1986 года отмечается устойчивая тенденция к снижению инфицированности животных возбудителем туберкулеза (с 0.11 в 1984 году до 0,01 процента а 1993 году).

Инфицированность крупного рогатого скота атипичными микобан-тераямн в 1991-1993 годах была в пределах 0,43-0,46 процента от всего поголовья, а до этого колебалась в пределах от 0,21 до 0,54 процента.

Количество хозяйств, в которых выявлялся реагирующий на туберкулин для млекопитающих скот и при убое не обнаруживались характерные для туберкулеза изменения достигало максимума в 1990 году (1580), к 1993 году эта цифра уменьшилась до 1369.

Количество хозяйств, в которых у скота, реагировавшего на введение туберкулина для млекопитающих обнаруживались гранулемы, к .1993 году уменьшилось по сравнению с 1985 годом в 3,4 раза.

Таким образом, в 605? хозяйств республики у благополувдого по туберкулезу крупного рогатого скота (преимущественно коровы) отмечена повышенная чувствительность к ППД туберкулину для млекопитающих, что подтверждает актуальность проблемы туберкулеза и необходимость совершенствования противотуберкулезных ыеропртятий.

Инфицированность скота вирусом лейкоза по республик* в 1989-1993 годах была в пределах от 9 (в 1993 году) до 15,6 процента (в 1992 году).

В областях республики этот показатель значительно варьировал.

Так, наиболее низкая инфипированность крупного рогатого скота вирусом лейкоза отмечалась в Могилевской, а высокая - в Гомельской, Витебской и Брестской областях. В этих же областях число хозяйств, в которых были зарегистрированы инфицированные вирусом лейкоза животные превышал 96Ж и несколько менее - в Могиленской и Минской областях (93,5 и 85,

Таким образом, наряду с широким распространением инфекции вируса лейкоза в Беларуси 857% хозяйств отмечено ассоциированное инфицирование скота вирусом лейкоза и микобактериями.

2.2.2. Особенности течения и проявления инфекции обусловленной ассоциацией микоба^ктерий и вирусом лейкоза.

У экспериментально зараженных возбудителем туберкулеза и атипичнъми микобактериями животных, которые в естественных условиях были инфицированы вирусом лейкоза крупного рогатого скота, в течение всего периода наблюдений отмечено удовлетворительное клиническое состояние, без признаков снижения упитанности и продуктивности. Температура тела всех животных была в пределах нормы (38,0-38,9°С).

У животных, инфицированных вирусом лейкоза и зараженных М.Ьо-vlз отмечено достоверное увеличение количества лейкоцитов на 15 и до 45 дней после заражения и составляло в среднем 11,4^0,14 тыс/мкл (Р*0,05), в то время как в контрольной группе клинически здорового скота - 7,7^0,14 ткс/мкл. Одаако при последующих исследованиях на 75, 120, Z50, 180 дни после заражения существенных различий в количестве лейкоцитов не наблюдалось,

У крупного рогатого скота, инфицированного вирусом лейкоза и зараженного ^ strofuleceuu достоверное увеличение количества лейкоцитов по сравнению с такими же показателями у здоровых животных контрольной группы отмечали на 30,45 и 75 дни после эара-

женил. Среднее количество лейкоцитов у животных згой группы составляло на 30 день после заражонкя 13,2+1,1 гыс/мкл, на 45 день -12,9+0,14 гыс/мкл и на 75 день - 10,1+0,35 гыс/мкл. У животных, зараженных только Ьоун отмечены достоверные различия б количестве лейкоцитов, начиная с 30 дня после заражения, по сравнению с аналогичными показателями у клинически здоровых животных контрольной группы (соответственно 16,8+1,1 и 0,2+0,35 гыс/мкл).

Достоверные различия в количестве лейкоцитов наблюдались и у животных, инфицированных только вирусом лейкоза, на 45 и 75 дни после заражения (соответственно 12,8+1,1 и 12,3+0,35 гыс/мкл).

Таким образом, при сочетанием течении микобактериоза л инфекции вируса лейкоза крупного рогатого скота у животных хотя и наблюдаются явления нарушения лейкоиоэза (увеличение количества лейкоцитов), однако они не позволяют объективно судигь о взаимовлиянии возбудителей обеих инфекций на течение и проявление патологического процесса.

Несколько иная картина выявляется при изучении морфологического состава крови. У животных, инфицированных вирусом лейкоза, до заражения микобактериями, по сравнению с контрольной группой, количество палочкоядерних нейтрофилов составляло соответственно 1,5+0,71 и 5,5^0,71, а также лимфоцитов - соответственно 85,0+1,4, в контрольной группе - 71,0+1,4.

К 15 дню после заражения Ьоун в крови животных, инфицированных ВЛКРС отмечалось достоверное увеличение количества эозино-филов (с 3,5+0,71 до 9,5+1,3), палочкоядерних нейтрофилов (о 1,5^ 0,71 до 5,5+0,71) и уменьшение числа лимфоцитов (с 82,5г7,7 до 77,5+2,1), хотя все вышеуказанные показатели не превышала пределов физиологической нормы. В отличие от этого, в кровя у животных, зараженных И* зегоЫасеця отмечали преимущественно

увеличение количества эозинофилов (с 1,5 до 5,5 процента).

На 45-Й и 7o-V\ дни после заражения у животных всех групп существенных изменений в лейкоформулах не отмечено, кроме коров, инфицированных М., scrofuUceua , у которых установлено достоверно» увеличение количества эозинофилов (с 1,5^0,71 до 6,520,71).

На 180 день после заражения у животных, зараженныхНч scrofula и инфицированных вирусом лейкоза, повторно отмечали достоверное (Р<Ю,05) увеличение количества палочкоадерных нейтрофилов (до 5,5-0,71), что может указывать на регенеративные процессы в кров:

Таким образом, результаты собственных исследований свидетел ствуют о том, что при ассоциированном инфицировании животных«.,Ьо\ и вирусом лейкоза на начальном этапе более сильными антигенными свойствами обладают типичные микобартерии, вызывая аллергическу реакцию организма и изменения морфологического состава крови (дцерный сдвиг влево). И наоборот, атипичные микобактерии не ока эывают существенного влияния на иммунный ответ у животных, инфицированных вирусом лейкоза.

По налим данным, у спонтанно инфицированного вирусом лейкоза и экспериментально зараженного Ii* bovis скота, через 15 дней отмечалось утолщение кожной складки на введение ППД туберкулина для млекопитающих и KAM в среднем на им, а на туберкулин

для птиц - на 5,0^1,4 мм.

У животных, инфицированных вирусом лейкоза и зараженных Мчз Ги1«свивутолщение кожной складки на ППД туберфлин для млекопитающих составляло в среднем 1,6^0,57 мм, на KAM.- 3,5^0,71 мм, а на сухой очищенный ППД туберкулин для птиц - 4,5^2,1 мм.

На 45 день после заражения животныхМ^асгоГи1«свив реакции на все туберкулины отличались малой интенсивностью (1,72-0,35мм в то время как у инфицированного вирусом лейкоза и зараженного

возбудителем туберкулеза скота реакция на ПЛД туберкулин для млекопитающих была резко выраженной, утолщение кожной складки составляло 13,5^2,3 мм по ср&гненип с аналогичными показателями на введение 1ШД туберкулина для птиц (3,5-0,71 мм).

К 75 дню наблюдений у животных всех вышеуказанных групп интенсивность кожных реакций была низкой как на введение туберкулина для млекопитающих, так и на КАМ (соответственно 3,5-2,1 и 2,5^0,71 мм) и сохранялась примерю на таком уровне до кснпа наблюдений (6 месяцев).

У с*ота,?зараженного Ьоуп , но не инфицированного вирусом лейкоза, начиная с 45 дня после заражения, интенсивность внутрикожных туберкулиновых реакций была высокой (20,5^1,4 мм).

При внутривенном введении туберкулинфля млекопитающих,инфицированным вирусом лейкоза животным и зараженным возбудителем туберкулеза, у двух животных повышение температуры тела достигало I,5°С.

У животных, зараженных только возбудителем туберкулеза, повышение температуры тела после введения туберкулина для млекопитающих достигало 1,4-.1,6сС.

Кроме того, у животных этих групп наблюдалась анафилактическая реакция, которая сопровождалась тремором мускулатуры конечностей и крупа, учащением пульса и дыхания, общим угнетением, слабостью. Это проявлялось наиболее отчетливо в период наибольшего подъема температуры (на 6-9 час). Через 2 часа после максимального подъема температуры эта реакция значительно ослабевала.

У животных, зараженных атипиодыми микобактерикми, максимальное повышение температуры тела составляло 0,3°С за весь период наблюдений.

Через 24 часа после введения туберкулина для млекопитающих у всех животных температура тела была на уровне, предшествовавшем введению туберкулина.

Таким образом, у большинства животных, зараженных возбудителем туберкулеза бычьего вида при внутривенном введении туберкулина для млекопитающих характерно значительное повышение температуры тела на 1,5°С выше уровня до введения аллергена.

Феномен повышенной чувствительности лейкоцигов к специфическому антигену (ППД туберкулин для млекопитающих) был использован для разработки методов определения степени сенсибилизации организма.

У животных, инфицированных вирусом лейкоза и зараженных м, bovis при исследовании через 15 дней средний показатель специфического лизиса лейкоцигов с ППД туберкулином для млекопитающих составлял -16,9+2,6 (Pt'0,05), на 45 и 75 дни после заражения - соответственно -23,8+5,2 и -22,7+1,2. На 150 день после заражения средний показатель прямого лейкоцитолизиса у всех животных этой группы был незначительно увеличен по сравнению о контролем и составлял соответственно -13,1±4,7 и -5,7^2,1.

У скота, инфицированного вирусом лейкоза и зараженного^ЗС1 fulaceun за весь период наблюдений средний показатель прямого лейкоцитолизиса составлял в среднем -7,5^0,78, а у клиничеокя здоровых животных- в пределах от -3,1+0,78 до 5,6+0,84.

Кроме того, у животных, инфицированных вирусом лейкоза отмечали прямой лейкоцитолизис о лейкозным антигеном (-13,6+1,2).

Таким образом, специфический лейкоцитолизис у животных, за' раженных возбудителем туберкулеза, отмечался уже на 15 день пос> ле заражения и удерживался до конца наблюдений (5 месяцев). По» затели специфического лейкоц/.голкзиса у животных в опыте нараст;

не единовременно, что, по-видимому, связано с индивидуальной иммунологической реактивностью организма животного. У скота, зараженного и* зсгвМасеиш , отмечался незначительный неспецифический лей-ксиитолизис. У животных, инфицированных вирусом лейкоза, также отмечался прямой лейкочитолизис с лейкозным антигеном на протяжении всего периода наблюдений.

У животных, зараженныхbovu на 45 день после заражения титры антител к вирусу лейкоза в разведении 1:2 выявлены у 66,6$, а в разведении 1:4 и 1:8 - у 33,3ft животных. Через 120 и 180 дней после заражения у животных вышеуказанной группы титры антител в разведении 1:4 и 1:2 выявлены соответственно у 66,в%> и 33,3% животных.

У животных, инфицированных вирусом лейкоза и зараженных ас го ful«евин на 45, 120 и 180 дни после заражения титры антител к вирусу лейкоза в разведениях 1:2 и 1:4 установлены у 100%, а в разведениях 1:8 и 1:16 - у 33,животных.

Таким образом, анализ динамики синтеза антител показал, что с 4-го месяца после заражения происходит снижение титра антител к вирусу лейкоза у спонтанно инфицированного вирусом лейкоза крупного рогатого скота и экспериментально зараженного возбудителем туберкулеза, что, по-видимому, связано с угнетающим действием на иммунную систему ассоциации двух этих инфекционных агентов.

Полученные нами результаты показывают, что при сочетанном течении в эксперименте инфекции вируса лейкоза и туберкулеза, у крупного рогатого скота снижается (функциональная активность как клеточного, так и 1уморального эвена иммунокомпетентной системы.

При патологоанатбмическом исследовании у животных, зараженных bovu, в брыжеечных, средостенных, бронхиальных, заглоточных лимфоузлах были обнаружены патегномоничные для туберкулеза изменения, интенсивность которых была разной.

У животных, зараженныхМц 3crofuUc«uo макроскопических изменений не обнаруживали.

Таким образом, было установлено в опытах на крупном рогатом скоте, что bovii вызывает образование типичных для туберкулеза гранулем, в отличие от scrofalaceuo . Эпизоотическая значимое! последних состоит в том, что они обусловливают кратковременную aj лвргию к ППД-туберкулину для млекопитающих и тем самым осложняют дифференциальную диагностику туберкулеза.

2.2.3. Усовершенствование дифференциальной диагностики мико-бактериозов у инфицированного вирусом лейкоза крупного рогатого скота.

В хозяйствах "Ведрич" Речицкого, "Светлый дуть", "Советская Белоруссия" и иБеняконский"Вороновского, "Парижская коммуна" Смо-левичского районов с инфииированностью скота вирусом лейкоза от 0,5 до 12 процентов аллергически внутрикожной пробой было обследс вано на-^беркулез 4880 голов крупного рогатого скста. Из этого поголовья 436 животных реагировали на введение туберкулина. Для дифференциации туберкулиновых реакций 168 особям внутривенно вводили туберкулин для млекопитающих и у 22 из них отмечено повышение температуры тела выше 1°С. Но признаков органической реакции у них не установлено. В последующем с кровью от этих животных, а также от 25 других коров, реагировавших на введение туберкулина, дополнительно провели реакцию лизиса лейкоцитов и в 4 пробах был отмечен положительный результат. При патоморфологическом исследовании свойственных для туберкулеза изменений не установлено, а при бактериологическом исследовании выделены атипичные микобакте-рии 2, 3 и 4 групп по классификации Раньона.

Таким образом, внутривенная туберкулиновая проба к специфический лизис лейкоцитов у инфицированного мккобактериями туберку-

леза крупного рогатого скота в присутствии туберкулина для млекопитающих позволяют достаточно объективно судить об аллергическом состоянии организма, дополняют представление о патогенезе заболевания и рекомендуются для дифференциальной диагностика туберкулиновых реакций, как у неинфицированного.гак и у инфицированного вирусом лейкоза крупного рогатого скота, а также в разработке научно-обоснованных и эффективных мероприятий.

На основе обобщения комплексных исследований апробирована и предлагается для применения "Схема прижизненной дифференциальной диагностики туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота, б хозяйствах о ассоциированным инфицированием животных микобактерия-ми и вирусом лейкоза", позволяющая обеспечить более высокую эффективность мер борьба и профилактики туберкулеза за счет следующих факторов:

а) более высокой достоверности (80-90$) дифференциация туберкулиновых реакций;

б) предотвращения необоснованного убоя животных после первичной ту беркулинязации;

в) проведения целенаправленного отбора животных для диагностического убоя и, как следствие, сокращение необоснованной выбраковки продуктивного скота;

г) сокращения срока постановки диагноза на туберкулез.

Параллельно рекомендовано лря ассоциированном инфицировании животных микобактериями и вирусом лейкоза крупного рогатого скота первично проводить отбор материала для диагностики лейкоза, а затем губеркулинязацию.

Применение схемы наиболее целесообразно для ферм (стад) с выявлением свыше 10 реагирующих на туберкулин для млекопитапсих животных.

3.шведы.

1. В Республике Беларусь инфицированный микобактериями разных видов и вирусом лейкоза крупный рогатый скот выявляется соответ-

V. ственно в 60 и 94 процентах хозяйств, в том числе сочетанное инфицирование животных обоими возбудителями в 57 процентах.

2. На начальном этапе инфекционного процесса, обусловленного

U4 bovis и вирусом лейкоза у животных превалирует реакция иммун ной системы на Мн bovis , проявляющаяся гиперчувствительностью замедленного типа и изменениями морфологического состава крови (сдвиг лейкоформулы влево), а с 75 дня - ослабление выраженности этих показателей.

3. Инфекционный процесс, обусловленный U^scrofulaceum и вирусом лейкоза, характеризуется кратковременной (до 15 дней) гиперчувст вительностью замедленного типа с преобладанием иммунных реакций к вирусу лейкоза крупного рогатого скота.

4. При сочетанной инфекцли у крупного рогатого скота U« bovis

и вируса лейкоза увеличение уровня специфического лизиса лейкоци тов до -22,7*1,2 является дополнительным тестом для диагностики туберкулиновых реакций на ранних стадиях патологического процесс

5. ЕИутривенная туберкулиновая проба с ППД туберкулином для млекопитающих эффективна как у крупного рогатого скота, инфицирован ного только микобактериями, так и в ассоциации с вирусом лейкоза и рекомендуется для предотвращения необоснованного убоя животных

6. Наиболее эффективным в системе мероприятий по борьбе и профилактике туберкулеза крупного рогатого скота является комплекс методов, включающий внутрикожную обычную и симультанную аллергическую пробы, а также внутривенную пробу и реакцию лизиса лейкоцитов, позволяющий достоверно дифференцировать туберкулиновые

реакции как у неянфицированного, гак и у инфицированного вирусом лейкоза крупного рогатого скога.

4. ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРАКТИКИ.

1. Для дифференциальной диагностики туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота инфицированного микобактериямя, а также ВЛКРС и микобактериями применять "Методику зондированного исследования специфичности туберкулиновой реакция у коров", включающую внутрикожную обычну» и симультанную аллергическую, а также внутривенную пробы и реакцию лизиса лейкоцитов. Утверждена Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства и продовольствия БССР (1991 г.),

2. Методические указания по диагностике лейкоза крупного рогатого скота в Республике Беларусь. Рассмотрены и утверждены на Научно-техническом Совете Министерства сельокого хозяйства и продовольствия Республики Беларусь (1993).

СПИСОК РАБОТ,ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Характеристика оистемы мероприятий по профилактике я борьбе о туберкулезом крупного рогатого скота £ Белорусской ССР / Г.А.Обьедков, М.М.Григорьев, А.А.Холод, Н.В.Савицкий // Тез. докл. III Воеооюа. конф. по эпизоотология, Новосибирск, 24-26 сентября 1991 г. /ВАСХНИЛ, РАСХН. ИЭВСиДВ. - Новосибирск.

1991. - С. 139.

2. Холод A.A. Факторы, влияющие на снижение напряженности эпизоотической ситуации при туберкулезе крупного рогатого скота //

Tea. докл. III Всесоюз. конф. по эпизоотологии, Новосибирск, 24-26 сенгября 1991 г. / ВАСХНИЛ. РАСХН. ИЭВСиДВ.- Новосибирск.-1991.- С. 152.

3. Холод A.A., Ярмош З.П., Григорьев М.М. ЭВМ в изучении и прогнозировании эпизоотического процесса при туберкулезе крупного рогатого скота // Тез. докл. III Всесоюз. конф. по эпизоотологии, Новосибирск, 24-26 сенгября 1991 г./ ВАСХНИЛ. РАСХН. ИЭВСиДВ.- Новосибирск, 1991, - С.153.

4. Холод A.A., Объедков Г.А., Савицкий Н.В. Некоторые показатели эпизоотической ситуации по туберкулезу крупного рогатого окота в Белоруссии // Ветеринарная наука - производству. - Труды БелНИИЭВ.- Минок, 1991. - Вып.29.- С.25-27.

5. Холод AJI., Объедков Г.А., Григорьев М.М. Аллергическая реакция при внутривенном введении туберкулина для млекопитающих в дифференциальной диагностике никобактеряозов крупного рогатого скота // Ветеринарная наука - производству. - Труды БелНИИЭВ.-Минск, 1993. - Вып. 31. - С.87-91.

6. Внутривенная туберкулиновая проба для дифференциальной диагностики ыикобактериоза у крупного рогатого окота / Ы.М.Григорьев, Г.А.Объедков, А.А.Холод, ВЛ.Сюсюкян // Современные аспекты фтизиопульмонологии; Сб. науч. работ. - Минск, 1994. -

С.148-152.