Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Изучение особенностей эпизоотологии и усовершенствование специфической профилактики болезни Марека в промышленных птицехозяйствах

РГО од.

С ° '■СЛЙКТ^ПЙТЕРБУРГСКИИ ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи

НЯ ВЕРА Чясловас Зигмович

УДК: 619:616.98:578.828.1:636.5

ИЗУЧЕНИЕ ОСОБЕННОСТЕЙ ЭПИЗООТОЛОГИИ И УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ БОЛЕЗНИ МАРЕКА В ПРОМЫШЛЕННЫХ ПТИЦЕХОЗЯЙСТВАХ

16.00.03 — ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

САНКТ-ПЕТЕРБУРГ

1993

г

Работа выполнена в Литовском ветеринарном институте и птицехо-зяйствах Литвы.

Научный руководитель: член-корреспондент РАСХН, доктор ветеринарных наук, профессор Коровин Р. Н.

Официальные оппоненты:! доктор ветеринарных наук, профессор А. Н. Борисенкова; доктор ветеринарных наук, профессор В. П. Зеленский.

Ведущая организа! ™ арная академия. 1

на заседании специали; . 0.20.02 при Санкт-Петербургском ветеринарном институте по адресу: 196084, г. Санкт-Петербург, Черниговская ул., д. 5.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ветеринарного института.

Защита состоится

1993 г. в

часов

Автореферат разослан

Ученый секретарь Специализированного совета

1993 г.

М. В. Шустрова

i. общая характеристика работы

Актуальность проблемы. Болезнь Марека (БМ) у кур, вызываемая онкогенным герпесзирусом, является серьезной проблемой для современного птицеводства, так как наносит значительный эксно.-мический ущерб и нарушает селекционно-генетическую работу. Потери от этого заболевания, включая стоимость вакцин и мероприятий по вакцинации, во всем мире составляют 943 млн. долларов В ГОД { Powell P.c. , 1986).

Современные методы борьбы с БМ основываются на осуществлении комплекса профилактических мероприятий, с ее главным звеном - специфической профилактикой (Коровин Р.Н. и др., 1965, Николаева И.П. и др., 1990К В Литве с этой целью используется жидкая вакцина из штамма ФС-126 вируса герпеса индеек (ВГИ). в птицехозяйствах, где применяют эту вакцину, в последние годы участились случаи появления, высоковирулентных штаммов вируса болезни Марека СВБМ) (schat к.a. etai., 1982;'witter r.l. et al.1989), более тяжело стала протекать эта болезнь.

По статистическим данным на территории Литвы пало от БМ в 1989 г. около 216 тыс.птиц, в 1990 г. 200 тыс.птиц.

Следует отметить, что в последние годы в Литве не проводилось целенаправленных исследований по изучению распространения и особенностей эпизоотологии БМ в неблагополучных птицехозяйствах на фоне широкого применения специфической профилактики, не исследовалась и эффективность применения отдельных вакцин.

Сравнительно новым направлением повышения эффективности специфической профилактики БМ явилось предложение о сочетанном применении вакцин с иммуномодуляторами (Придыбайло Н.Д., 1991).

Цель работы. Изучить особенности эпизоотологии БМ в неблагополучных птицехозяйствах Литвы на фоне широкого применения вакцин и усовершенствовать в соответствии с полученными результатами мероприятия по ее профилактике.

Задачи исследований:

- изучить особенности эпизоотологии болезни Марека в пти- .

цехоэяйствах, используших специфическую профилактику заболевания;

- оценить эффективность ряда вакцин против болезни Марека в экспериментальных и производственных условиях;

- разработать меры по повышению эффективности специфической профилактики болезни Марека;

- разработать практические рекомендации по профилактике болезни Ыарека в неблагополучных лгицехозяйствах.

Научная новизна. В Литве установлена острая и классическая формы БЫ. Изолированы 2 штамма-изолята вируса острой формы и один штамм-изолят вируса классической формы БЫ. Изучены биологические свойства изолятов, выявлен удельный вес БЫ в числе других заболеваний птиц, определен экономический ущерб, наносимый болезнью промышленному птицеводству. Изучены эпизо-отологические особенности'БЫ в промышленных птицехозяйствах на фоне широкого применения вакцин. Впервые в Литве испытан в сравнении ряд вакцин в экспериментальных и производственных условиях. Предложена качественно новая методика культивирования ВГИ для производства вакцины против БМ из штамма ФС-126 ВГИ. Впервые в Литве проведено сравнительное изучение тималина и ганглиина в комбинации с вакциной против БМ из штамма ФС-126 ВГИ с целью повышения, эффективности специфической профилактики заболевания.

Практическая значимость. Выделены три ценных для научных исследований штамма-изолята ВБМ, и дана им полная биологическая характеристика. Разработаны новые предложения в инструкцию для производства вакцин против БМ из штамма ФС-126. Внедрены в практику иммуномодуляторы тималин и ганглиин для совместного применения с вакциной против БМ. Разработаны практические рекомендации по профилактике БМ в неблагополучных хозяйствах. Разработано "Временное наставление по применению жидкой вакцины против БМ из штамма ФС-126 ВГИ", утвержденное директором Государственной ветеринарной службы Литвы.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на республиканском семинаре "Профилактика болезни Марека" (Кайшядорис, 1990); семинаре ветеринарных врачей птицефабрик (Вильнюс, 1991); межреспубликанской научно-практической конференции "Современные проблемы ветеринарии" (Кайшядорис,1993).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано б ра-

_ бот.

" Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 138 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения получен-

них результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Список литературы включает 223 источника. Работа иллюстрирована 21 таблицей и тремя диаграммами.

й. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы

Диссертационная работа выполнялась в период с 1990 по 1993 гг. в Литовском ветеринарном институте и в птицехозяйст-вах Литовской Республики. Тема диссертационной работы является фрагментом комплексных исследований, проведенных по государственным программам НИР по теме "Разработать и внедрить в практику эффективные методы диагностики и, специфической профилактики против вирусных болезней птиц"(I99I-I993 гг.).Номер государственной регистрации 195646.

• Производственные испытания вакцин против БМ осуществлены на ЮодшиляйСкой, Вевисской и Гирялес птицефабриках Литвы. Для выполнения вирусологических исследований использовали sw -эмбрионы, которые получали из Литовского института экологии и Онкологического института Российской МАН.

При эпизоотологическом обследовании птицехозяйств руководствовались соответствующим положением I и 2 вариантов "Временной инструкции о мероприятиях по борьбе с болезнью Марека (нейролимфомптоэом птиц)", разработанной во ВНИВИП и утвержденной ГУБ МСХ СССР 01.11.71 и 25.01.74 г. При диагностике БМ использовали методики клинико-морфологических исследований, гистологический метод,биопробу на цыплятах и куриных эмбрионах, реакцию диффузионной преципитации (РДП). Выделение от больной птицы и идентификацию вируса БМ проводили по методике, изложенной в "Методических указаниях по лабораторной диагностике болезни Марека (нейролимфоматоэа птиц)", утвержденных ГУВ МСХ СССР I марта 1979 "г.

Дифференциальную диагностику БМ осуществляли по одобренной в 1979 г. ГУВ МСХ СССР "Схеме дифференциально-диагностических признаков болезни Марека, лимфоидного лейкоза,

инфекционного энцефаломиэлита (ИЭМ) и E-авитаминоза", утвержденной в 1974 г. в качестве приложения к инструкции по борьбе с EU и согласно ГОСТ 125586-83.

Для исследований применяли производственные серии жидкой вакцины из штамма ФС-126 ВГИ производства Курской биофабрики России, сухой вакцины фирмы ТАД (ФРГ) и жидкой вакцины фирмы "Риме", а также опытные лабораторные образцы жидкой вакцины, приготовленной из штамма ФС-126 ВГИ в условиях производственного отдела Литовского ветеринарного-института.

Титрацию вируса проводили ПО методике Calnek B.W. et al.(1972) модифицированной во ВНИиТИБП. Титр вируса выражали в'фокусооб-раэуювих единицах (ФОЕ) в I мл. Для титрации вируса использовали первичные культуры куриных и перепелиных эмбриональных фиб-робластов СКЭФ и ПЭФ), которые готовили по общепринятой методике. Определение инфекционной активности ВГИ в очине пера проводили путем выделения из очинов маховых перьев, по методике Сле— пенко Т.Б. и др. (I960). В экспериментальных исследованиях цыплят заражали штаммом-изолятом, выделенным нами от кур из птицефабрики Гирялес и штаммом "Конкур" ВБМ, полученного из ВГНКИ ветпрепаратов и стандартизации. При изучении влияния иммуномо-дяторов тималина и ганглиина на повышение эффективности вакцинации против БМ использовали производственные серии тималина, изготовленные на заводе медицинских препаратов С.-Петербургского мясокомбината и ганглиина, производства Пермского НПО "Био-мед". Было поставлено 2 опыта, в которых использовали 700 цыплят суточного возраста. В одном опыте было 5 групп однодневных цыплят по 70 голов в,каждой. Црплят 1-ой группы обрабатывали аэрозолем ганглиина в дозе 2,5 мг/м^ препарата. Препарат растворяли в.70 см^ физраствора с добавкой 3,5 г порошка обезжиренного молока. На второй день их вакцинировали, добавляя ган-глиин в дозе 100 мкг/кг живой массы. lfciiumT 2-ой группы обрабатывали аэрозолем тималина в дозе 1,5 мг/м^ препарата. На второй день их вакцинировали, добавляя к вакцине тималин в количестве 40 мкг/кг живой массы. Цыплят 3-ей группы вакцинировали на второй день. 4-ая группа птиц служила контролем патогенно--го рируса. Цыплят 5-й группы заражали интактно.Всех цыплят первых четырех групп заражали изолятом ВБМ в 14-суточном возрасте, выделенным от больной БЫ птицы на птицефабрике Гирялес. Продолжительность опыта составила 130 дней. Сравнительное изучение

вакцин против БМ осуществили на птицефабриках: Вевиссквя, Содши-ляйская и Гирялес на поголовье 3217 тыс.голов. Комиссионные ис-' пытания иммуномодуляторов тималина и ганглиина проводили на птицефабрике Гирялес на поголовье 54 тыс.цыплят.. Статистическая обработка результатов исследования проведена согласно рекоменда,-ций, приведенных в учебном пособии В.П.Еремина (1975).

2.2. Распространение БМ и экономический ущерб,причиняемый заболеванием прошшленным птицехоэЯпствзм Литовской Республики

В 1990-1993 гг. нами при плановом эпизоотологическом обследовании но БМ птицепоголовья в 12 птипехозяйствах Литвы было установлено во всех хозяйствах клиническое проявление этой болезни. Так, на Вевисской птицефабрике, являющейся основным производителем яиц и имеющей среднее поголовье кур-несушек до 1,5 млн. голов, выявлен ВБМ в возрастной группе шплят 70-130 дней в 63,6+7,2%, а у I3I-I70 дневных - в 38,4+9,5% от количества исследованных. В период 1990-1993 гг. сохранность птицы составила 89-92$. ■

На Водшиляйской племптицефабрике мнсных линий - кросс "Гибро-6" со среднегодовым поголовьем кур-несутаек ВО тыс. голов сохранность птицы составила в 1990-1993 гг. 91,3-95,4%. ВБМ выявлен в возрастной группе цыплят 55-112 дней в 53,8+5,04% от количества исследованной птицы, а среди птиц II2-I50 дней -в 41,6+5,37% случаев исследования.

На птицефабрике Гирялес, специализированной на промышленное производство яиц, среднегодовое поголовье кур-несушек составляет 273,9 тыс.голов. Сохранность птицы d 1990-1993 гг. колебалась в пределах 90,2-95,4%. ВБМ выявлен в возрастной группе цыплят 70-130 дней в 48,6+5,8% случаев, а среди птиц 131170 дней - в 29,34+4,74% случаев.

На других птицефабриках установили носительство ВБМ среди восприимчивого поголовья в 45,45+3,17%.

По нашим данным экономический ущерб от острой формы БМ, обусловленный падежом, вынужденным убоем, снижением продуктивности птицы и качества продукции, достигал на Водшиляйской птицефабрике 155-425 лита, на Вевисской птицефабрике 185-567 лита и нв птицефабрике Гирялес - 176-315 лита на каждую тысячу голов птицы в годовом обороте стада.

В птицехозяйствах Литвы пало от БЫ в 1989 г. - 216 тыс., в 1990 г. - 205 тыс., в 1991 г. - 157 тыс и 1992 г. - 97 тыс голов птицы. Сокращение падежа от БЫ объясняется тем,что уменьшилось общее количество птицы на Ы% по сравнению с 1989 г. Удельный вес падежа от БЫ остался таким же, а на Вевисской и Юодшиляйской птицефабрике он увеличился.

; 2.3. Биологические свойства полевых штаммов-изолятов ББМ

От кур неблагополучных хозяйств, пораженных оотрой и классической формой БМ, нами выделено 2 штамма-изолята вируса острой формы БМ (№№ 1,2) и один - классической формы БМ 3). Эти штам-мы-изоляты испытаны в биопробе на цыплятах и куриных эмбрионах. Проведено Зошта на вир -цыплятах, полученных из Онкологического института. Данные биопробы на цыплятах отражены в таблице I.

Таблица I

Характеристика классической и острой формы БМ у ___экспериментально зараженных птиц_

Показатель Классическая форма БМ .Острая форма БМ

Инкубационный период (дней) 61-100 58-115

Выявлено цыплят с признаками БМ(%) 47,22+4,36 .35,14+5,13

Заболеваемость (%\ 43,12+6,75 95,27+6,14

Поражения (56): патологоанатомические 43,12+6,75 95,27+6,14

в нервах 47,16+5,65 8,79+2,84

во внутренних органах 43,90+7,18 81,23+5,36

Гистологические изменения {%): 100 100

в нервах 77,80+7,19 17,27+4,18

,во внутренних органах 17,00+5,13 100

Выявлены антитела к вирусу БМ в сыворотке крови (%) 82,14+4,36 100

Выявлен антиген вируса БМ в перьевых фолликулах (%) 30,16+3,11 100

Выявлены специфические изменения в биопробе на куриных эмбрионах (%) 38,16+4,31 • 60,16+8,45

Разница учитываемых показателей при классической и острой фермах БМ статистически достоверна (Р^0,001).

У опытных цыплят клинические признаки и патоморфологические изменения во внутренних органах и нервах начали проявляться с 28

дня жизни. У птиц, экспериментально зараженных штаымом-изолятом • вируса классической формы БМ, антитела выявились раньше (с 20 дня), чем у птиц, зараженных штаммами-изолятами вируса острой формы БМ (с 27 дня).

2.4. Эпизоотолорические особенности проявления классической и острой форм болезни Марека

-

БМ в птицехозяйствах республики характеризовалась контаг -иозностыэ. Ее диагностировали у птицы всех возрастов и всех разводимых пород и линий. Она быстро распространялась между • птицехозяйствами прй наличии определенных производственных связей.

Выраженной сезонности заболевания птиц БМ не установили.

В исследуемых неблагополучных по БМ хозяйствах применяли жидкую вакцину из штамма ФС-126ВГИ. В птицехозяйстве Гирялес БМ протекала в классической форме.

' Особенности проявления динамики этой формы БМ сводилась к тому, что в' 1990 г. первые клинические случаи заболевания регистрировали среди цыплят 38-62-дневного возраста. Самое большое количество больных устанавливали среди цыплят в возрасте 61140 дней. Интенсивность заболевания БЫ с 1990 по 1992 гг. постепенно снижалась. При этом частота заболеваемости птицы уменьшилась на 9,45%.

Стадийность БМ с тенденцией к эпизоотическому течению наблюдали на Вевисской птицефабрике, неблагополучной по острой форме БМ. Изучение клинических особенностей заболевания показало, что первые случаи БМ были зарегистрированы в 1990-1992 гг. среди цыплят 58-120-дневного возраста, а.самое большое количество больных - среда цыплят в возрасте 80-150 дней.

При изучении динамики проявления острой формы БМ на Юодши-ляйской птицефабрике первые клинические случаи заболевания были зарегистрированы в 1990 г. среди цыплят 35-61-дневного возраста, а саюе большое количество пораженных'БМ птиц пришлось на цыплят 57-130-дневнсгс возраста.

По нуицефабрккгм заболеваемость (в %) составила: Гирялес-24,19+6,42; Вевисски« - 26,58+2,64; ВодшиляЙскяя - 26,61+2,14; смертность !в %): Г:;рялес - 2,03(0,51; Вевисскяя - 7,4+0,51;

Юодшанская - 8,12+0,64; летальность (в %): Гирялес - 46,38+3,56; Вевисская - 42,32^3,64; Юодшанская - 50,16+5,14,

Удельный вес гибели птицы от БМ составил (в %): 9,21+2,48 (п/ф Гирялес), 29,41+6,72^. (п/ф Вевисская), 46,14+0,355? (п/ф Юодшиляйская).

У птиц, больных классической формой БМ, к доминирующим поражениям мы отнесли: утолцение седалишых и крестцовых нервов, в то время как при острой форме устанавливали преимущественно опухолевые поражения во внутренних органах. Различия в клиническом проявлении БМ объясняются вероятнее всего неодинаковой вирулентностью вируса этой болезни.

2.5. Сравнительная эффективность ряда вакцин против БЫ в экспериментальных и производственных условиях

При исследовании инфекционного титра различных серий вакцин, поступающих в Литовскую Республику, мы руководствовались Техническими- условиями (ТУ 46-21-157-80) на вирус-вакцину жидкую куль-туральную против болезни Марека из штамма ФС-126 ВГИ. Указанные исследования выполняли в течение 1990-1993 гг. За этот период нами было исследовано 106 серий вакцины, что составило 40674,65 тыс.доз Вакцины против БМ. При этом было установлено,что 16 серий не соответствовали стандарту.

В дальнейшем мы провели сравнительное, изучение иммуногенной активности вакцин из штамма ФС-126 ВГИ в экспериментальных условиях. Опыт проводили на 4 группах цыплят, по 35 голов в каждой.

Первую группу цыплят вакцинировали вакциной, изготовленной в лаборатории института (03.06.91) , вторую - вакциной Юрской биофабрики (серия 1170491), третью - вакциной фирмы "ТДЦ". Все вакцины применяли в дозе 1000 Ф0ЕУ0,2 мл внутримышечно. Четвертая группа была контрольной. Цыплят в 14-суточном возрасте всех четырех групп заражали вирулентным штаммом ВБМ "Конкур", полученным из ВГНКИ. П&вших птиц вскрывали и определяли у них наличие БМ. Оставшихся в конце опыта птиц убивали и выявляли у них изменения в органах и тканях, характерные для БМ. Установили , что эффективность вакцинации в первой группе составила " $2,4, во второй - 100 и в третьей 92,4$. 8 этом опыте также изучали влияние вакцины на прирост массы птицы. Установили, что у вакцинированных цыплят средний вес был выше от 139,76 до 164,91 (Р^ 0,001), чем у контрольных.

Сравнительное изучение иммунногенной активности вакцин из штамма ФС-126 ВГИ проводили в 1990-1992 гг. на Водшиляйской, Ве-

висской и Гирялеекой птицефабриках» Эти хозяйства~были~благопо—-----------

лучными по острым инфекционным болезням, за исключением болезни Марека.

На Юодшиляйской птицефабрике в опыты было взято 466490 цыплят кросса Гибро-6 суточного возраста, которых прививали в инкубаторе аппаратом ИП-I в дозе-от 1100 до 2250 ФОЕ на цыпленка. Перед применением вакцины были проверены на инфекционную активность.

Для иммунизации использовали жидкую вирусвакцину против БМ производства Курской биофабрики (V-м серий), фирмы "Риме" (одна серия) и лиофилизированную из штамма ФС-126 ВГИ фирмы "ТАД". Учитывали обшй отход птиц и дифференцированно - от БМ. Первые случая Ш установили на 57 день. Самое большое проявление БМ -от 48 до 75% наблюдали с ИЗ по 130 день. Удельный вес БМ среди павших птиц был от 14,8 до 56,7/5.

Установлено,что после применения вакцины производства Курской биофабрики в дозе 1000 $0Е/0„2 мл смертность от ',БМ составила I,6j.0,24%. Случаев БМ было на 13#> больше, чем при использовании вакцины в дозе 2124 Ф0Е/0,2 мл и на 18,2% больше после вакцинации в дозе 2250 <Ь0Е/0,2 мл.

Вакцина фирмы "ТДД", применяемая в доле l£>00 Ф0Е/0,2 мл, уменьшала количество случаев БМ на 26,9%,.по сравнению с вакциной Курской биофабрики, применяемой в дозе 1000 ФОЕ/0,2 мл.

Применение вакцины фирмы "Риме" в дозе 1407 ФОЕ/0,2 мл оказалось малоэффективным: количество случаев БМ в 2.Д раза было большим по сравнению с эффективноетью вакцины Курской биофэбри-ков в дозе 1000 ФОЕ/0,2 мл (Р^-0,05).

На Вевисской птицефабрике в опыты было взято 1250,3 тыс, цыплят суточного возраста, которых также прививали в инкубаторе в дозе от 1083 до 2450 ФОЕ/0,2 мл. Для иммунизации использовали вакцину против БМ производства Юрской биофабрики и фирмы "Риме". Первые случаи БМ наблюдали начиная с 61 дня жизни. Самое большое проявление БМ наблюдали с 61 по 140 день жизни. Удельный вес БМ среди павших птиц был от 6,1 до 15,9%. При этом было установлено,что после вакцинации птицы вакциной Курской биофабрики в дозе 1083,9 ФОЕ/0,2 мл смертность от БМ составила 1,44+0,03%. При увеличении дозы до 2450 фое/0,2 мл

количество случаем уменьшилось на 48,2% (Р^-0,001), чем при инокуляции дозы 1063 Ф0Е/0„2 мл. Одновременно установили, что при ува личенив дозы вакцины фирмы "Риме" до 2192 ФОЕ/0,2 мл так же резко повышается .ее. эффективность.

На птицефабрике Гирялес в опыты было взято 1494 тыс.голов цыплят суточного возраста, кросса - легорн, которых прививали в инкубаторе в дозе от 1143 до 2216 Ф0Е/0,2 мл. Первые случаи БМ были установлены на 61 день жизни. Проявление БМ увеличивалось до 140 дней жизни птиц и колебалось в пределах 42-75%. Удельный вес БМ среди павших птиц был от 1,59 до 13,6$. Для иммунизации использовали вакцины против БМ производства Курской биофабрики и фирмы "Риме". После вакцинации птицы вакциной Курской биофабрики в дозе 1143 Ф0Е/0,2 мл смертность от БМ среди вакцинированного поголовья составила 1,20+0,26$. При применении вакцины фирмы "Риме" в дозе 2174 <Е0Е/0,2 мл увеличивалось количество случаев БМ на 11,8^, по сравнению с вакциной Курской биофабрики, примененной в дозе 1143 Ф0Е/0,2 мл. Наши опыты показали, что самой низкой йммуногенной активность!) обладала вакцина фирмы "Риме".

2.6. Усовершенствование методики культивирования

вакционного вируса герпеса индеек штамма ФС-126

Степень иммуногенности вакцины против болезни Марека, как показали электронномикроскопические исследования, выполненные сотрудниками ВНИВИП и ВНИТИБП, зависила от количества сформированных зрелых вирусных частиц. Максимальный же выход полностью сформированных частиц зависит от целого ряда факторов: клеточной системы, питательных сред, сроков культивирования. В настоящей-работе представлены данные по подбору оптимальных условий культивирований вакцинного штамма ФС-126 ВГИ. Работа проведена с ис. -пользованием куриных ер? -эмбрионов,

В опытах по подбору наиболее чувствительной системы использовали 24- и 48-часовую культуру клеток. Клеточные культуры выращивали в 50 мл флакончиках (для титрации) и вращающихся колбах с поверхностью 1785 см^ американской фирмы "ВеПсст.

При исследовании влияния возраста культуры на титр ВГИ третьего пассажа'установили,что чувствительнее была 24-х часовая культура, при использовании которой было получено больше вируса на 26,4$ (Р/,0,05).

По нашим данным оптимальным вариантом для выращивания культур клеток является среда в составе (в 50 - ГЛАЭ, 20 - среда Игла, 20 - среда 199 и 10 - сыворотка крови крупного рогатого скота. При тйтрации" вируса культуры клеток выращивали^только^на среде в составе: 90% ГЛАЭ и 10% сыворотки крови крупного рогатого скота. Используя различные поддерживающие питательные среды и разные их соотношения, установили,что наиболее оптимальной поддерживающей средой является смесь сред - Игла и 199 в соотношении 3:1.

Результаты опытов по определению максимального накопления вируса в зависимости от сроков культивирования показали, что инфекционная активность вируса с увеличением срока культивирования некоторое время возрастает, а затем падает. Важен и второй установленный •нами факт: инфекционная активность вируса, снятого через 24 часа, составила 2,5x10^ +0,6x10^, после 48 часов -7,4х10б+0,7хЮ6 и после 72 часов - 2,4x10^+0,8х107 ФОЕ на одну колбу.

Большое значение имеет величина заражающей дозы вируса. Мы установили,что самый лучший выход вируса получается при заражении культур клеток в дозе 350-400 ФОЕ/см2 монослоя. Процессы репродукции вируса герпеса индеек, слабовыраженные при малых дозах,

проявляются активным формированием и накоплением .вирусных частиц при средних дозах заражения.

Как показали наши исследования, большое значение имеет посевная концентрация клеток в суспензии для увеличения выхода вируса. С этой целью мы изучили под биологическим микроскопом монослой 24-х часовой культуры клеток. По нашим данным, нужна посевная концентрация 1,3-1,5 миллион/мл живых клеток для того, чтобы к 24-м часам вырос пригодный для заражения монослой. Это зависит, кроме того, и от качества сыворотки крови и от питательных сред..

Мы изучали условия получения наибольшего количества вируса при употреблении минимального количества сред на американской роллерной установке "ВеНсо" .Полученные данные представлены в таблице 2.

Из таблицы 2 видно,что количество ростовой среды на I см^ поверхности бутыли согласно инструкции по изготовлению вакцины составило 0,56 мл, а по результатам наших исследований - 0,22мл, то есть в 2,5 раза меньше (Р/_0,001). Соответственно количество

поддерживающей среда на I см5* поверхности бутыли составило в 5 раз (Р£0,001) меньше,чем регламентируется действуюией инструкцией по изготовлению вакцины. Выход вируса на I сы^ поверхности бутыли был также выше на

Таблица 2

Сравнительные данные о потребности питательных срея для культивирования вируса герпеса индеек_

Перечень показателей

Рекомендации инструкции по изготовлению вакцины

Данные собственных исследований

Количество ростовой среды на одну бутыль (мл)

Количество ростовой среды на I см*- поверхности бутыли (мл)

Количество поддерживающей среды на X бутыль (мл)

Количество поддерживаювей среда (мл) на I см* поверхности бутыли

Выход вакцинного вируса от I бутыли (тыс.доз)

Выход вируса на поверхность I см>- бутыли ФОЕ

800 0,56 800

0,56 12,5+3,4

400 0,22 200

0,11

18,4+4,2'

8802,8+2394,3 10308,1+2352,9

Изучено также влияние скорости вращения бутылей На рост монослоя и выход вируса. Оптимальный рост монослоя мы получали в том случае, когда бутыли враиались первые 4 часа после посева 0,13 раз/мин, остальное время до заражения 0,2 раза/мин. Этот режим вращения бутылей считаем оптимальным и после заражения монослоя культуры клеток ВП1. Нами отработана методика приготовления посуды для выращивания клеток без механического воздействия на'посуду и без кипячения, что подробно изложено в диссертации.

2.7. Влияние иммуноыодуляторов тималинв и ганглиина на повышение неспецифической резистентности у цыплят и эффективности вакцинации их против Ш

Исследование проводили в экспериментальных условиях в виварии института и в производственных условиях птицефабрики Ги-рялес. Для распыления аэрозоля иммуноыодуляторов применяли элект-роаэроэольный аппарат для вакцинации животных (авторы Рейнет Я.Ю.

и др., авт.свид. № 389789). Основные данные аппарата: дисперсность аэрозольных частиц: а) физических до 5 мкм - 96,85%;

б) бактериальных до 7 мкм - 95,76%.

В экспериментальных условиях лучший коэффициент эффективности иммунизации цыплят нами получен в опытах, где вакцину при-_________

меняли в сочетании с ганглиином. Он равнялся 0,7+2,06 и 97+2,04%. Коэффициент эффективности при вакцинации в группах с тималином равнялся 94,2+2,85 и 96,8+2,13%, а при использовании одной вакцины - 87,6+4,СБ и 84,9+4,31%. Анализ полученных результатов в первом опыте показывает,что совместное применение вакцины с ган- ■ глиином дало более высокую защиту против БМ на 9,7$, чем одна вакцина (Р^0,05). и на 2,7% чем вакцины с тималином (Р/0,05).

Последуюпий опыт по изучению действия ганглиина и тимали-на на результаты вакцинации против БМ провели комиссионно в производственных условиях на птицефабрике Гирялес на 54 тыс.голов птицы. В опыте принимали промышленную вакцину Ссерии 318 12 91) из штамма ФС-126 ВГИ, которую получили из .Курской биофабрики.

Подопытную птицу разделили на 3 группа по 18 тыс.голов. Цыплятам первой группы применили иммуномбдулятор ганглиин с вакциной, второй группы - иммуномодулятор тималин с вакциной. Цыплята третьей группы были привиты только вакциной.

Сохранность птицы в первой и второй группах была почти одинакова и составила 86,5 и 86,4%. Сохранность птицы в первой группе была выше на 7,7% и второй на 7,6%, чем в третьей группе

(рго.ооп.

Смертность от БМ в .первой группе составила 0,82%, во второй-0,93% и в третьей - 1,48% случаев.

От БМ во второй группе пало на 0,11% больше,чем в первой (Р/1.0,05). Исхода из этого можно утверждать,что ганглиин и тималин на проявление БМ действовали одинаково.

Удельный вес БМ среди павших цыплят в первой группе был меньше на 0,66%, а во второй группе на 0,55%, чем в контрольной группе (Р^.0,001).

При использовании иммуномодулятора ганглиина увеличивался прирост среднесуточной массы одной головы на 3,9 г и тималина - на.3,8 г, по сравнению с третьей группой ^¿0,001).

..По данным опыта определили экономический эффект, полученный в результате применения ганглиина и тималина. В первой

группе был получен экономический эффект 11108,33 лита, во второй - 10451,1 лита (по информации Госбанка Литвы в среднем в октябре 1993 г. 3,2 лита равнялось 1000 руб).

3. В Н В 0 Д Ы

1. С использованием комплексных методов исследования изучено распространение болезни Марека в Литве. Болезнь диагностирована во всех обследованных птицеводческих хозяйствах, в которых установлено ее клиническое проявление и вирусоносительство среди восприимчивой птицы. Острая форма заболевания выявлена в двух птицехозяйствах.

2. Зараженность кур вирусом болезни Марека в неблгополучных хозяйствах колебалась от 29,34+4,74 до 63,6+7,2%.

3. Выделен один штамм-изолят вируса - классической формы

БМ и 2 изолята вируса острой формы БМ. Они обладали различной вирулентностью для 1-й 20-дневных цыплят и куриных эмбрионов 6-дневной инкубации. Высокую вирулентность проявили штаммы-изоляты вируса острой формы БМ, низкую - штамм-изолят классической формы БМ. По антигенным свойствам они были идентичны типовому штамму вируса БМ.

4. В условиях промышленных птицехозяйств как для острой, так и для классической форм БМ характерны высокая контагиоз-ность, стационарность и отсутствие сезонности ее проявления.

5. В неблагополучных птицехозяйствах яичного направления классическая форма БМ причиняла экономический удерб до 176-216 лита на 1000 голов птиц. Ушерб, наносимый острой формой БМ, составлял до 155-567 лита на 1000 голов птиц.

6. При обследовании в 1990-1993,гг. 106 серий (40074,05 тыс.доз) вакцины против БМ из ВГИ на инфекционную активность установили, что 6 серий (4000,1 тыс.доз) не соответствовали стандарту и были выбракованы, а 10 серий вакцины были применены с коррекцией дозировок по ФОЕ.

7. Эффективность вакцинации против болезни Марека в экспериментальных и производственных, опытах оказалось разность. В эксперименте на spf -птице она составила 92,4-ЮО^.Доста-. точная эффективность от применения вакцины из штамма ФС-126

ВГИ получена только.на птицефабрике Гирялес и не достигнут такой ■ эффект на птицефабриках Юодшиляйской и Вевисской. В птах хозяйствах. рекомендовали применять бивалентную вакцину.

8. В экспериментальных условиях применение иммуномодулято-ров тималина и ганглиина с жидкой вакциной увеличивало эффективность вакцинации до 9,7-12,5%, в производственных условиях эффективность зашиты против БМ увеличивалась в 2,5"раза.---------------------

9. Предложенная нами методика для производства жидкой вакцины против БМ из штамма ФС-126 ВГИ позволяет экономить ростовую среду в 2,5 раза, а поддерживающую - в 5 раз, при этом выход ви-' руса на I см2 поверхности бутыли увеличивается на 15%.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Временное наставление по применению жидкой культуральной вакцины против болезни Марека из штамма ФС-126 ВГИ. Утверждено

директором Государственной ветеринарной службы Литвы 25.02.1993 г. (№ 3-2).

2. Изменения к инструкции по производству жидкой культуральной вакцины из штамма ФС-126 ВГИ. Рассмотрены и одобрены Ученом Советом Литовского ветеринарного института 28.06.1993 г..протокол #5.

• I

5. СПИСОК РАБОТ,ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Нявера Ч., Алексеюнас А. Почему не эффективна вакцина против БМ//Ветеринария Литвы. - Вильнюс, 1991. - С.6-9.

2. Нявера Ч., Алексеюнас А., Багдонас И. Сравнительное изучение иммуногенности ряда вакцин против БМ//Тезисы докладов научной конф.ЛВИ. - Кайшядорис, 1993. - С.65-66 (на литовском и английском языках)..

3. Нявера Ч., Алексеюнас А. Новый метод приготовления посуды для выращивания культур клеток/УТезисы докладов научной конф. ЛВИ.-Кайшядорис,1993.-С.150 (на литовском и английском языках).

4. Алексеюнас А., Нявера Ч., Багдонас Й., Алексеюненв И. Биологические свойства выделенных трех штаммов изолятов ВБМ//Те-зисы докладов научной конф.ЛВИ.-Кайшядорис,1993.-С.63-64 (на литовском и английском языках).

5. Нявера Ч., Алексеюнас А.Сравнеитльное изучение эффективности рада вакцин против болезни Марека//Ветеринария Литвы.-Вильнюс, 1993. -№ 2. - С.13-14 (на литовском языке).