Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Интерферон с неинактивированным индуктором при некоторых инфекционных болезнях молодняка животных

? Г Б ОД

2 2 ШОП ШЗ

На правах рукописи

БУРДЕЙНЫЙ Василий Владимирович

ИНТЕРФЕРОН С НЕИНАКТИВИРОВАННЫМ ИНДУКТОРОМ ПРИ НЕКОТОРЫХ ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЯХ МОЛОДНЯКА ЖИВОТНЫХ (ПОЛУЧЕНИЕ, СВОЙСТВА, ПРИМЕНЕНИЕ)

16.00.03- ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Санкт-Петербург - 1998

Работа выполнена в кафедре эпизоотологии, микробиологии и вирусологии Костромской государственной сельскохозяйственной

академии

Научный консультант: Лауреат премии Правительства РФ,

доктор биологических наук К.Н.Груздев

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук Н.Д.Придыбайло

доктор ветеринарных наук, профессор П.Н.Сисяпш

Лауреат Государственной премии РФ, доктор ветеринарных наук Б.А.Кругликов

Ведущая организация - Всероссийский научно-исследовательский

институт защиты животных

Защита состоится и^кЭМЛ-1998 г. в часов на заседании дис-

сертационного совета Д 120.20.02. при Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины (196084, г. Санкт-Петербург, ул. Черниговская, д. 5)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины. Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета, ___

доктор ветеринарных наук ¿^-¿¿с -. М.В.Шустрова

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность темы. Повышише сохранности и выращивание здорового молодняка животных является одной из важнейших задач ветеринарной науки и практики. Её успешному решению во многом препятствуют факторно-инфекционные желудочно-кишечные и респираторные болезни, удельный вес которых в отдельных хозяйствах достигает 60-80% общей заболеваемости. Наличие большого числа и пггаммовое разнообразие возбудителей, проявление на фоне поражения иммунной системы не только у молодняка, но и у маточного поголовья, сложность диагностики и ряд других факторов крайне осложняют борьбу с ними (В.П.Урбан и др., 1978, 1984, 1990, 1992; Р.А.Цион, 1978, 1981; Г.М.Громов, ММ.Широбокова, 1983; В.П.Урбан, 1983, 1985; Е.В.Андреев, 1984; А.Ю.Кассич, 1986; Г.Ф.Коромыслов, Ю.Н.Федоров, 1988; Ю.Н.Федоров, 1988, 1996; М.И.Немченко, 1989; П.И.Притулин, Т.П.Калмыкова, 1989; Е.С.Воронин и др., 1990, 1991; Н.Л.Соколова, 1990; В.Г.Квачев, А.Ю.Кассич, 1991; П.И.Жданов, 1997; А.Мауг, 1980; J.Wetzke et al., 1982; И.Сизов, И.Зарков, И.Т.Иванов, 1986). Применение традиционных средств не всегда приводит к разрыву эпизоотической цепи, создавая тем самым предпосылки для возникновения болезни, а также системы паразит-хозяин.

Вот почему в последнее время резко возрос интерес к использованию сравнительно новой группы препаратов - шггерферонов (ИФН), обладающих не только противовирусным, но и иммуномодулирую-щим, радиопротективным, антипролиферативным действиями и рядом других биологических свойств (В.Д.Соловьев и др., 1980, 1981; Л.Н.Покидышева и др., 1982; Ф.И.Ершов, В.М.Ждаиов, 1985; А.А.Смородшщев и др., 1989; Ф.И.Ершов, 1996; H.Selbitz and an., 1980; J.Werenne, 1985; Z.Borecky, 1989; F.Lefevre, 1989; M.Kandefer-Szezzen et al., 1992). Однако, несмотря на большое число исследований, большинство разработок в ветеринарии заканчивалось на уровне лабораторных опытов, а сфера практического использования ИФН ограничивалась преимущественно областью медицины (К.Н.Груздев, 1992).

В настоящее время в ветеринарии прослеживаются два направления, первое из которых базируется на применении человеческих реком-бинаитных ИФН (экзогенная интерферонизация) - миксоферона, кинорона (В.Г.Богуш, 1993; С.С.Григорян, В.Н.Прохоров, 1996), второе - на использовании интерфероногенов (эндогенная интерферонизация) для стимуляции выработки клетками организма животных собственного ИФН (К.Н.Груздев, 1989, 1992; Н.П.Бацанов и др., 1997). Достоинством первого метода следует считать безвредность препаратов, широкий спектр действия, достижение дозозависимой концентрации, недостатком - видовую специфичность ИФН, короткий период полураспада, необходимость многократного введения, а также трудность производства больших количеств. Достоинством второго метода является

то, что ИФН продуцирует сам организм и нет необходимости в частом введении, а основным недостатком - токсичность многих индукторов, малый интервал между эффективной и токсичной дозой и др. Выделяется из этой группы новый препарат - свиной лейкоцитарный ИФН с неинактивированным индуктором (СЛИНИ), в котором раннее противовирусное действие экзогенного ИФН дополняется более поздним и продолжительным действием эндогенного, индуцированного вирусом ньюкаслской болезни. Он показал высокую лечебно-профилактическую эффективность при оспе, болезни Ауески, вирусном трансмиссивном гастроэнтерите у свиней (Д.Ф.Осидзе и др., 1984, 1985; И.Д.Фесенко и др., 1988; А.Г.Шахов и др., 1989; К.Н.Груздев, 1992).

Вместе с тем вопросы широкомасштабного применения ИФН в ветеринарной практике еще далеки от своего решения, поскольку пока недостаточно изучен весьма огромный спектр их возможного применения при болезнях не только вирусной, но и бактериальной этиологии, не определены какие виды препаратов - рекомбинантные или природные более перспективны для использования, в том числе и при болезнях молодняка, требуется совершенствование существующих и создание новых ветеринарных препаратов ИФН, оптимизация схем применения, определение показаний для клинического использования. Все это определило направленность настоящих исследований.

1.2. Цель и задачи исследований. Целью исследований явилась разработка системы мероприятий, способных обеспечить широкомасштабное применение ИФН в ветеринарной практике для экстренной профилактики и лечения при инфекционных болезнях молодняка, сопровождающихся признаками острых желудочно- кишечных расстройств.

Исходя из этого, реализация достигалась решением следующих задач:

1. На основании данных литературы и собственных эпизоотоло-гических наблюдений обосновать использование ИФН в качестве эффективных средств экстренной профилактики и лечения при инфекционных болезнях молодняка, сопровождающихся признаками острых желудочно-кишечных расстройств.

2. Разработать систему мер обеспечивающих широкомасштабное использование СЛИНИ в ветеринарной практике:

2. 1. Усовершенствовать технологический процесс получения препарата СЛИНИ, сделав его более доступным для ветеринарной практики. Внедрить усовершенствование в производство путем включения в официальные ТУ.

2. 2. Разработать более простую и более удобную для практики методику применения СЛИНИ и доказать ее лечебно - профилактическую эффективность в свиноводческих хозяйствах. Внедрить разра-

ботанную методику в практику путем включения в официальное наставление по применению.

2. 3. Экспериментально показать возможность перорального пути введения СЛИНИ поросятам. Разработать технологию получения препарата в форме, приемлемой для выпойки животным. Апробировать препарат в условиях свиноводческого хозяйства и разработать необходимую научно-техническую документацию: регламент получения и контроля, наставление но применению.

2. 4. Расширить сферу применения СЛИНИ путем испытания при вирусных инфекциях собак. Внедрить полученные данные в практику путем включения в официальное наставление по применению.

2. 5. Изучить антибактериальное действие СЛИНИ и других препаратов ИФН in vitro. Экспериментально обосновать возможность их применения при бактериальных инфекциях in vivo.

2. 6. Изучить в сравнительном плане эффективность природных и рекомбинантных ИФН.

3. Экспериментально обосновать целесообразность применения видоспецифического ИФН при инфекционных болезнях собак. Разработать технологию получения лейкоцитарного ИФН собак с неинак-тивированньтм индуктором и определить его лечебно - профилактическую эффективность. Разработать необходимую научно-техническую документацию (ТУ и наставление по применению).

4. Разработать и внедрить в ветеринарную практику схемы и методы применения изамбена и дейтифорина.

5. Провести опыты по определению отдельных показателей иммунного статуса коров костромской породы в терминальный период беременности и показать возможность его стабилизации иммунотроп-ными препаратами для повышения устойчивости новорожденного молодняка к неонатальным болезням.

1.3. Научная новизна. Впервые :

- установлена возможность перорального применения СЛИНИ в ветеринарной практике при инфекционных болезнях новорожденных поросят, сопровождающихся признаками острых желудочно-кишечных расстройств;

- разработана и апробирована новая лекарственная форма СЛИНИ, предназначенная для перорального применения;

- показана эффективность применения СЛИНИ при чуме, инфекционном гепатите, парвовирусном энтерите собак;

- установлена способность инфицированных вирусом ныокасл-ской болезни (ВБН) тканей и оболочек куриного эмбриона индуцировать в суспензии лейкоцитов ИФН со свойствами иммунного ИФН;

- определена в сравнительном плане эффективность ИФН природного и рекомбинантного происхождений;

- получены данные по тестированию иммунного статуса коров костромской породы в терминальный период беременности;

- апробированы изамбен и дейтифорин для лечебно - профилактических обработок при болезнях новорожденных поросят, сопровождающихся признаками острых желудочно - кишечных расстройств.

1.4. Практическая ценность. Разработаны меры обеспечивающие широкомасштабное использование СЛИНИ в ветеринарной практике:

1. Усовершенствована технология производства СЛИНИ с внесением предложенных изменений в официальные ТУ: проведена замена индуктора ИФН-ВБН штамма Н на более безопасный - Бор-74; определение остаточного вируса - индуктора в куриных эмбрионах (КЭ) заменено на более дешевую и менее трудоемкую методику титрации в культуре куриных фибробластов; удлинен срок хранения препарата с 6 до 12 мес; доказана возможность фасовки, сушки и хранения препарата в объемах 2см3, что более удобно для индивидуального применения при работе в небольших хозяйствах.

2. Укорочена схема профилактического применения СЛИНИ у новорожденных поросят - число введений препарата уменьшено с трех до двух, а интервалы - с 72 до 48 час, инъекционное введение СЛИНИ одно - двудневным поросятам рекомендовано заменить на перораль-ное.

3. Расширена сфера применения СЛИНИ - не только при вирусных, но и ассоциативных болезнях новорожденных поросят, а также при чуме, инфекционном гепатите, парвовирусном энтерите собак. Приказом по ДВ Минсельхозпрода России № 13-14-2/391 от 1.09.95 г. СЛИНИ внедрен в промышленное производство и ветеринарную практику.

Разработана технология получения видоспецифического лейкоцитарного ИФН собак с неинактивированным индуктором (догоферон). Испытания показали его более высокую, чем СЛИНИ, лечебно - профилактическую эффективность при вирусных болезнях собак.

Доказано, что более перспективным направлением в ветеринарии является применение ИФН природного происхождения.

Предложены для применения два новых лечебно-профилактических препарата - дейтифорин и изамбен, последний из которых может быть использован также как иммуномодулятор (иммуностимулятор) при иммунодефицитах и при вакцинации пгиды против болезни Ньюкасла.

Положено начало определению среднерегиональных параметров иммунного статуса коров костромской породы с учетом их физиологического состояния, возрастных и сезонных характеристик, что позволит в дальнейшем вести иммунологический мониторинг.

Подготовлены и утверждены нормативно-технические документы: 1 .Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода России "Интерферон лейкоцитарный свиной с неинактивированным индуктором сухой (ТУ, наставление по применению)";

2.Ректором Костромской государственной сельхозакадемии: "Интерферон лейкоцитарный свиной с неинактивированным индуктором сухой для перорального применения" (опытно-промышленный регламент на производство, ТУ на опытную партию для широкого производственного испытания, временное наставление по применению); "Интерферон лейкоцитарный собак с неинактивированным индуктором сухой" (ТУ на опытную партию для широкого производственного испытания, временное наставление по примененшо).

1.5. Апробация работы. По материалам диссертации сделаны сообщения: на заседаниях Ученого Совета Костромской ГСХА и Костромского НИИСХ 1993-1994 гг.; на Всесоюзной научной конференции по проблемам эпизоотологии "Актуальные вопросы эпизоотологии" (г. Казань, 1983); на научно-практической конференции ИСХИ (г. Иваново, 1982) и конференциях "Пути интенсификации сельскохозяйственного производства Ивановской обл." (г. Иваново, 1985), "Внедрение достижений передового опыта п агропромышленном комплексе Ивановской обл." (г. Иваново, 1991), "Актуальные проблемы науки в сельскохозяйственном производстве" (г. Иваново, 1995); на зональной научно-практической конференции "Актуальные проблемы пауки в сельскохозяйственном производстве" (г. Иваново, 1993); на конференции, посвященной 70-летию МВА "Актуальные проблемы ветеринарной и зоотехнической науки и интенсификации животноводства" (г. Москва, 1990); на научно-практических конференциях "Ученые аграрники -сельскохозяйственному производству" (г. Кострома, 1993 - 1996); на межвузовской научно-практической конференции "Актуальные проблемы науки в АПК" (г. Кострома, 1997);на научно-методической конференции "Внедрение достижений науки и передового опыта в сельскохозяйственное производство Ярославской обл." (г. Ярославль, 1993); на межвузовской научно-методической конференции (г. Ярославль, 1995);на межгосударственной научно-практической конференции "Актуальные проблемы ветеринарно-санитарного контроля сельскохозяйственной продукции" (г. Москва, 1995).

1.6. Публикация результатов исследований. Основные научные положения по теме диссертации изложены в 35 опубликованных научных статьях.

1.7. Объем и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 322 страницах машинописного текста и включают введение, обзор литературы, собсгвенные исследования, обсуждение материалов, выводы, практические предложения, приложение. В список литературы

включены 307 работ отечественных и 131 зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 68 таблицами и 9 рисунками.

1.8. Внедрение результатов исследований. Лейкоцитарные интер-фероны свиней и собак с неинактивированным индуктором внедрены с положительным эффектом в практику работы свиноводческих хозяйств Ивановской обл., районных, городских и областных станций по борьбе с болезнями животных в г.Иваново, Костроме.

Результаты исследований вошли составной частью в нормативные документы, утвержденные на: республиканском уровне Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода России - ТУ 9381- 0494185 -95 на производство и наставление по применению интерферона лейкоцитарного свиного с неинактивированным индуктором сухого №13-42/391, а также ректором Костромской ГСХА - опытно-промышленный регламент и ТУ на производство, временное наставление по применению интерферона лейкоцитарного свиного с неинактивированным индуктором сухого путем выпойки; ТУ на производство и временное наставление по применению интерферона лейкоцитарного собак с неинактивированным индуктором сухого.

1.9. Основные положения, выносимые на защиту: результаты разработок технологических усовершенствований, схем и методов применения лейкоцитарных ИФН с неинактивированным индуктором, получения новых форм препарата ИФН.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1.Материалы и методы исследовании

Экспериментальную часть работы выполняли в период с 1981 г. по 1997 г. в лабораториях кафедр эпизоотологии, микробиологии и вирусологии Костромской и Ивановской государственных сельскохозяйственных академий, институте инженерной иммунологии Минбио-прома России, ВГНКИ ветпрепаратов. Производственные испытания проводили на базе городских, районных, областных станций по борьбе с болезнями животных, совхозов, колхозов, ТОО Ивановской, Костромской, Владимирской и Московской областей.

В работе использовали штаммы вирусов: везикулярного стоматита штамм Индиана с титром 105'5-60 ТЦД50/СМ3, ньюкаслской болезни штамм Н с титром Ю859-5 ТЦД5о/см3, пггамм Бор-74 с титром Ю8'°-9-0 ТЦД50/СМ3, трансмиссивного гастроэнтерита свиней штамм Мюллер с титром 105 ЛД50/СМ3, инфекционного гепатита плотоядных штамм Альт с титром Ю5'5 ТЦД50/СМ3 и бактерий (стафилококки, эшерихии, сальмонеллы и другие) из коллекции микроорганизмов кафедр, вакцинные их варианты или полевые штаммы.

Для культивирования вирусов применяли первично-трипси-пизированные культуры клеток и их субкультуры, почки щенка собаки, фибробласты эмбрионов кур, диплоидную культуру клеток М-19.

Экспериментальную часть работы на животных проводили на базе свинокомплексов "Боровое" и "Ворожино", колхоза "Маяк", ОГ1Х ,;Манихино" ВГНКИ ветпрепаратов, лаборатории кафедры эпизоотологии, микробиологии и вирусологии Костромской ГСХА. Использовано белых мышей - 886, белых крыс -12, поросят - 203, морских свинок

- 192, куриных эмбрионов - 617, коров - 57, телят - 38, собак - 78, кроликов - 96.

Научно-производственные опыты выполняли на 14611 животных (74 опытных и 58 контрольных групп, свиней - 6731 и 6650, крупного рогатого скота - 482 и 438, собак - 186 и 124 соответственно).

В качестве индукторов невирусной природы использовали изам-бен - иодметилат 4-(1-бензил) карбамидопиридинид (производное изо-никотиновой кислоты), дейтифорин - 2-(1 -Аминоэтил) нонборнана гидрохлорид и левамизол (декарис) в виде 7,5% водного раствора.

Для изучения иммуномодулирующего действия ИФН и индукторов использовали коммерческие серии вакцин против болезни Ньюкасла из штамма Ла-Сота, колибактериоза, сальмонеллеза, клебсиелле-за, и протейной инфекции телят, поросят, ягнят и пушных зверей.

Культивирование вирусов, определение их титра, постановку серологических реакций проводили по общепринятым методам.

Использовали пять видов ИФН: природные - коммерческие серии СЛИНИ и экспериментальные - СЛИНИ-П, лейкоцитарный ИФН собак с неинактивированным индуктором (догоферон); рекомбинантные

- миксоферон, производства фирмы "Агроген", реальдирон, производства фирмы "Санитас". Получение опытных партий ИФН проводили на базе института иммунологии Минмедбиопрома России и ВГНКИ совместно с В.И. Марченко, Л.А.Денисовым и К.Н.Груздевым.

При совершенствовании технологи! получения СЛИНИ определяли влияние сроков хранения, объемов при сушке на активность препарата. Получение новой лекарственной формы, предназначенной для перорального применения - СЛИНИ-П, проводили по стандартной методике производства свиного лейкоцитарного ИФН.

Безвредность ИФН (видоспецифических и гетерологичных) определяли на различных видах животных - свиньях, собаках, кроликах, морских свинках, белых мышах и крысах.

Антивирусные, антибактериальные, иммуномодулирующие и лечебно- профилактические свойства ИФН изучали в лабораторных и производственных условиях. О возможности перорального применения ИФН судили по динамике его содержания в крови одно-двудневных поросят по сравнению с аналогичными показателями в контрольной

группе животных, а протективные свойства - при заражении однодневных'поросят вирусом ТГС штаммом Мюллер.

При разработке схем и методов применения ИФН в свиноводстве оценивали в сравнительном imane эффективность: классических схем обработок (внутримышечно, трехкратно, с интервалом 72 час) свиноматок или свиноматок с приплодом и в нашей модификации (только поросят); различных методов введения - в инъекционной форме и путем выпойки; укороченных схем - обработка дву- и трехкратно, с интервалами 48 и 72 час; коммерческих и опытных препаратов; природных и рекомбинантных ИФН; на ранних или поздних стадиях заболевания.

Лечебную и профилактическую эффективность комбинированного препарата- миксокина (рекомбинантные ИФН-а и ФНО-а) учитывали при желудочно-кишечных и респираторных болезнях телят и поросят.

Антивирусную активность СЛИНИ при чуме (ЧП) определяли на собаках на фоне базисной терапии в сравнении со специфической сывороткой или при сочетанном их применении.

При изготовлсшш догоферона руководствовались регламентом производства СЛИНИ в нашей модификации. Превентивные свойства препарата определяли на модели экспериментального инфекционного гепатита плотоядных (ИГП) в сравнении со СЛИНИ и реальдироном. Результаты учитывали по заболеваемости, сохранности животных, образованию специфических антител. Протективные свойства догоферона в производствешшх условиях изучали при ЧП, ИГП, парвовирус-ном энтерите (ПВЭ) собак.

Антибактериальное действие ИФН-СЛИНИ, догоферона, мик-соферона, реалъдирона in vitro определяли по отношению к 16 штаммам грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов.

Превентивное действие СЛИНИ и реальдирона in vivo изучали на модели экспериментальной эшерихиозной инфекции.

Лечебные, профилактические и иммуномодулирующие свойства дейтифорина и изамбена изучали в лабораторных и производственных условиях на клеточных культурах, телятах, поросятах.

Антителостимулирующее действие изамбена определяли при вакцинации кур против болезни Ньюкасла.

С целью контроля за применением СЛИНИ, левамизола, изамбена, изучения влияния сезонных и возрастных факторов проводили иммунологические исследования коров костромской породы, а также полученного от них приплода. Количество эритроцитов, лейкоцитов, лейкоформулу определят! общепринятыми методами (И.П. Кондра-хин и др., 1985, В.Е.Чумаченко и др, 1990), фагоцитарную активность нейтрофилов - по В.М.Митюшникову (1985),количество Т-лимфоцитов методом спонтанного розегкообразования с эритроцитами барана по

M. Jondal et al. (1972, 1973) в модификации А. И. Цымбала и соавт. (1983), теофиллинчувствительных (Етч-РОК) и теофиллинрезистентных (Етр-РОК) - по В. Shonat, Н. Toshua (1982), В-лимфоцитов - по А. И. Цымбалу и соавт. (1983), нулевых клеток - по S. S. Froland, L. В. Natvig (1973) и М. Jondal et al. (1973).

Результаты опытов обрабатывали методом вариационной статистики с применением критериев Стьюдента и К. Пирсона, (Г.Ф.Лакин, 1990) на персональном компьютере, совместимом с IBM PC/AT, с использованием интегрального пакета Excel, а также на микроЭВМ МК-52 с применением прикладных программ вычислений статистических характеристик (В.М. Егоров и др. 1989).

2.2.Г1рименение ИФН в свиноводстве

2.2.1.Краткая характеристика эпизоотической ситуации в свиноводческих комплексах

В специализированных свиноводческих хозяйствах Ивановской обл. падеж молодняка от болезней различной этиологии составляет 95,6 - 97,5% от общего, в том числе на долю поросят до отъемного возраста приходится от 53,1 до 70,5%.

Ведущее место занимают заболевания, сопровождающиеся поражением желудочно-кишечного тракта. Они носят преимущественно инфекционный характер, формируя стационарное неблагополучие, протекают в виде ассоциативных (смешанных) 1шфекций, проявляясь в зависимости от степени воздействия техногенных и других факторов, в эпизоотической или энзоотической формах.

Инфекционная патология представлена вирусным трансмиссивным гастроэнтеритом (ВТГЭС), рота- и парвовирусной инфекциями, колибактериозом, сальмонеллезом, в меньшей степени - дизентерией, рожей свиней и др. У новорожденных поросят этот показатель на 99,4% определяется ВТГЭС, 0,6% - колибактериозом и сальмонеллезом. Отход молодняка от инфекционных болезней составляет 61,3%, в том числе у поросят доотъемиого возраста- 73,0%.

Антитела к вирусу ТГСЭ у племенных хряков и свиноматок в диагностических титрах 4,6±0,4-5,8±0,1 log обнаруживали у 8,1-83,7% обследованных, в то время как у поросят доотъемного возраста - только в единичных случаях. Однако при использовании методом ИФА число положительных результатов у молодняка достигало 7,3-32,6%о.

Антитела к ротавирусу обнаруживали у 17,6-60,4% свиноматок, 50,0-52,5% хряков, 82,2% ремонтного поголовья. При использовании иммуноферментного метода вирус находили как у взрослого поголовья, так и у поросят - в 20,0; 61,1 и 12,2-19,0% случаев соответственно.

Число животных, имеющих антитела к парвовирусу в титре 7,2+0,1-8,0±0,1 log, достигало 88,6-93,4%, однако с титрами 10,0 log и

выше (свидетельство свежего заражения) пе превышало 5,0-6,0%. Среди молодняка количество серопозитивных животных с возрастом увеличивается - от 61,5% у одно-полутора- до 91,4% у пяти-шестимесячных.

Таким образом, наши результаты согласуются с данными П.Е.Жданова (1997) о том, что массовые желудочно-кишечные болезни поросят в специализированных хозяйствах носят инфекциошшй характер полифакторной этиологии с проявлением инфекционного и эпизоотического процессов. Положительный результат в борьбе с ними может быть достигнут при использовании препаратов, воздействующих как на возбудителя, так и на восприимчивое животное.

2.2.2. СЛИНИ в инъекционной форме при обработке различных половозрастных групп свиней

В соответствии с наставлением СЛИНИ применяют при оспе, болезни Ауески и ВТГЭС трехкратно, внутримышечно свиноматкам в дозе 1 млн МЕ за 2 - 3 дня до, в день и спустя 2 -3 дня после опороса, а в случае возникновения заболевания хотя бы у одного поросенка в помете, всем новорожденным по 100 тыс МЕ трехкратно, в 1 - 4 - 7/8 -дневном возрасте. Однако при массовых проявлениях заболевания у молодняка обработки могут запаздывать, увеличится расход препарата, схема не всегда вписывается в технологическую карту ветеринарных обработок.

На 2278 (12 групп) опытных и 2908 (9 групп) контрольных животных апробировали три схемы применения СЛИНИ в инъекционной форме: в соответствии с наставлением и в нашей модификации (обработка только поросят).

Установлено, что в опытных группах по сравнению с контрольными проявление болезни у поросят было отчетливо менее интенсивным. Выздоровление у большинства из них наступало на 2 - 5 дней раньше. Во всех группах наблюдали сходную динамику отхода, причем наиболее высокий процент павших (от общего показателя) приходился на молодняк до 10-дневного возраста: в группах - контрольной, обработанных свиноматок, свиноматок и приплода, только поросят - 66,7; 77,0; 60,0 и 58,3% соответственно. В первых двух из них отмечали повторное увеличение отхода у молодняка 16 - 25-дневного возраста -22,2 и 33,3% соответственно, совпадающего с периодом выраженного иммунодефицита.

Сохранность в опытных группах по сравнешпо с контрольными при обработке свиноматок была выше на 7,07+2,16, свиноматок с приплодом - 8,57 ±1,84 и только поросят - 9,63±0,33%. Тенденция к увеличению данного показателя в группах, связанных с непосредственной обработкой молодняка обусловлена действием не только экзо-, но и эндогенного ИФН, поскольку выделения вируса-индуктора, по данным К.Н. Груздева (1992), из организма свиноматок не происходит.

Таким образом, модифицированная схема с учетом технологичности, экономичности и других критериев позволяет ограничиться обработкой только новорожденных поросят.

2.2.3. СЛИНИ в инъекционной форме при обработке новорожден-

ных поросят по модифицированной схеме

Неудобством в использовании многих препаратов является их невысокая технологичность. Применительно к используемой ранее форме свиного лейкоцитарного ИФН - необходимость инъекций не менее 2-3 раз в день в течение 5-6 суток, в то время как в отношении СЛИНИ количество введений сведено до трех.

Анализ показал, что с учетом эпизоотической обстановки при эн-зоотичности проявления заболевания, сопровождающегося признаками расстройств деятельности желудочно-кишечного тракта, обработки молодняка можно заканчивать раньше.

На трех опытных и контрольных группах (п= 116,294, 52 и 55, 293, 51 соответственно) испытана модифицированная схема, предусматривающая двукратную обработку новорожденных поросят СЛИНИ с интервалом 48 час. Сохранность молодняка в опытных группах была на 8,1 - 10,3 % выше, чем в контрольных. Различий по этому показателю при дву- или трехкратной (в соответствии с наставлением) обработках не наблюдали - 9,47±0,69 и 9,63+0,23% (Р>0,05). Препарат способствовал более интенсивному росту и развитию поросят, живая масса которых при отъеме составляла 6,26±0,15 против 5,21+0,20 кг в контрольных группах.

Напш данные свидетельствуют о возможности применения СЛИНИ с профилактической целью по укороченной схеме при уменьшении числа инъекций с трех до двух и сокращении интервалов-с 72 до 48 час.

2.2.4. СЛИНИ при выпойке новорожденным поросятам

(иероральное применение)

Исходя из патогенеза болезней у новорожденных поросят, протекающих с поражением желудочно-кишечного тракта, местная аппликация ИФН должна быть более эффективной, однако при этом не исключена деструкция препарата. Предпосылкой для разработки нами пероралытого метода служило то, что в СЛИНИ содержится большое количество балластного белка - до 80 мг/см3, способного хотя бы частично защитить ИФН от соляной кислоты и протеаз; наличие в препарате остаточного вируса-индуктора, способствующего выработке локального (эндогенного) ИФН; переваривающая способность желудочно-кишечного тракта новорождетгых меньше, чем у взрослых, а проницаемость слизистой - больше.

В первой серии опытов определяли возможность поступления ИФН в кровь из кишечника одно- и двудневных поросят (п=10 и 15) после выпойки СЛИНИ в дозе 105 МЕ/гол. Контрольной группе животных (п=10) препарат вводили внутримышечно. Отмечена сходная динамика циркуляции ИФН в крови - обнаружение в первые два часа от момента введения, первоначально в несколько меньших титрах при пероральном применении с последующим выравниванием и нахождением до 5 час. Полученные результаты свидетельствуют о том, что ИФН в форме СЛИНИ мало разрушается в желудочно-кишечном тракте поросят, проникает в ткани кишечной стенки и далее в кровь.

Во второй серии опытов 18 однодневных поросят заразили вирулентным штаммом Мюллер вируса ТГЭС в дозе 5 ЬОзо/гсм3. Животным опытной группы (п=9) СЛИНИ вводили пероралыю в дозе 105 МЕ/см3 за 24, 2 и спустя 24, 48 часов после заражения, а контрольной (п=9) - по аналогичной схеме среду 199. В опытной группе на 5-й день заболело 4 поросенка, которые погибли на 12-16-й день после заражения, а у остальных 5 (55,5%) клинических признаков заболевания не отмечали, однако на 30-й день в сыворотке крови обнаружили специфические антитела в титре 1:8-1:16. Животные контрольной группы заболели на 2-й день после заражения и пали к концу первой недели.

В третьей серии опытов в производственных условиях на четырех опытных (п=783) и контрольных (п=818) группах установили, что двукратная выпойка СЛИНИ одно-трехдневным поросятам с профилактической целью способствовала повышению сохранности и приростам живой массы на 11,4±0,6 (Р<0,05) и 5,4-9,0% соответственно. По своей эффективности данный способ превосходил инъекционный.

Более высокая эффективность пероралыюго метода объясняегся не только системной, но и местной активацией эффекторных клеток иммунной системы и, тем самым, значительным расширением пула клеток, вовлеченных в интерфероногенез.

2.2.5. СЛИНИ при различных способах применения с лечебно -профилактической целью

При энзоотичности проявлений заболеваний у молодняка эффективны различные методы и способы применения СЛИНИ - как в классическом, так и в модифицированном вариантах.

Проверку действенности указанных методов, зависимость этого показателя от полноты охвата поголовья обработками провели при массовых диареях новорожденных поросят, отход среди которых в течение первых 10-15 дней жизни достигал 40-60%. Патологоанатомиче-ские изменения были наиболее выражены в тонком отделе кишечника. Методом ИФА в 26,5% случаев обнаруживали вирус ТГЭС, очень редко - рат а вирус, при бактериологическом исследовании - энтеропато-генные серотипы эшерихий 08, 020 и др.

В первой серии опытов поросята в пометах были разделены на две группы - опытную (п = 50) и контрольную (п = 48). Установили, что при 50% охвата обработками СЛИНИ достоверно повышает на 24,1% сохранность и на 12,1 % приросты живой массы.

Последующие опыты выполнили в двух вариантах: в первом, как и в предыдущей серии, помет делили на две части - опыт и контроль (по 5 групп, п=251 и 293 соответственно), во втором - учет проводит! по гнездам (4 опытные, п=56 и одна контрольная, п=38).

Сохранность поросят в опытных группах по сравнению с контролем в первом и втором вариантах увеличивалась на 11,5-28,1%) и 19,6-44,0%. При частичной обработке поросят в помете результат был выше при трехкратных пероральных обработках - 28,1% (Р<0,01), несколько ниже при дву- и трехкратном внутримышечном введении -соответственно 27,5 и 22,8% (Р<0,05) и почти в два раза ниже при двукратном пероральном его введении - 11,5%.

При обработке всех поросят в гнезде трехкратное пероральное или внутримышечное применение СЛИНИ повышало сохранность на 44,0 (Р<0,001) и 35,8% (Р <0,01), против 28,1и 22,8% при выборочном.

Степень выраженности протективного действия препарата определялась также характером эпизоотического процесса. Если при энзо-отичности проявления желудочно-кишечных болезней разница в эффективности перорального и внутримышечного использования не превышала 2%, то в условиях эпизоотичносги она составляла 8,2 и 12,9% (при трех- и двукратном применении соответственно).

Таким образом, с профилактической целью обработку поросят можно проводить по укороченной схеме - двукратно, а с лечебно-профилактической -препарат вводить не менее трех раз.

Работа по совершенствованию технологии производства СЛИНИ позволила внести изменения в ТУ по сравнению с предыдущими положениями. Основные из mix: произведена замена интерфероногена - ВБН из штамма Н на штамм - Бор-74; определение титра остаточного вируса- индуктора в КЭ заменено на более дешевую и менее трудоемкую титрацию в культуре куриных фибробластов; удлинен срок использования препарата с 6 до 12 мес, поскольку установлено, что длительное хранение при 2-10° С не сказывается отрицательно на качественных его характеристиках; наряду с фасовкой, сушкой и хранением препарата в емкостях по 75 см3 доказана возможность использования для этих целей фасовки по 2 см3 - дозы более удобной для применения.

При получен™ СЛИНИ в качестве вируссодержащего материала от КЭ использовали аллантоисную жидкость (АЖ), поскольку ВБН накапливается в ней в титре 108 ЦПД5а/0,1 см3. Это обеспечивает обработку лейкоцитов в наиболее оптимальной дозе - 10 ЦПД50 на одну клетку. Содержать вируса в тканях и желтке КЭ не превышает 105 и 10 ЦПД5о/о,1 см3. Максимальный выход ИФН через 24 и 72 час при обра-

ботке лейкоцитов АЖ, гомогенатом тканей, АЖ в сочетании с гомоге-натом составляет соответственно 1,0±0,4х105и 1,5±0,3х104; 6,0±0,6х103и 6,8±0,6х103; 1,9±0,3х104 и 9,0±0,2х103 МЕ/см3. Гомогенатиндуцирован-ный ИФН (особенно в образцах, взятых через 72 час после биосинтеза), по своим свойствам отличается от индуцированного АЖ. Он синтезируется в высоких титрах в более поздние сроки индукции, почти полностью разрушается в кислой среде (рН 2,2) и лишь частично нейтрализуется антисывороткой против вирусиндуцированного ИФН, что указывает на наличие примеси другого типа ИФН - иммунного. Полученные результаты свидетельствуют об отсутствии экономической целесообразности использования гомогената КЭ в качестве индуктора, однако указывают на новые пути подхода при конструировании оригинальных форм препаратов ИФН.

В соответствии с требованиями выпускаемые биопрепараты должны быть стерильными в отношении посторонней микрофлоры. В работе В.П.Урбана и соавт. (1989) показано, что наиболее стабильные результаты, независимо от концентрации микроорганизмов в образцах, можно получить при дозе у-облучения 16 кГр и выше. В наших опытах облучение в дозе 20 кГр приводило не только к стерилизации образцов ИФН, но и к резкому снижению их противовирусной активности. Последнее в большей степени выражено при обработке СЛИНИ в жидкой форме, в меньшей степени - в сухой (соответственно уровень активности снижался с 6,0+0,52 до 2,33±0,67 и 3,33±0,33 log, Р<0,05). Основываясь на данных Н.В.Григановой, А.Н.Дроздова (1987), подобную закономерность можно объяснить радиолизом воды и возникновением вследствие этого высокореакционноспособных радикалов Н-, ОН-, ОШ-, гидратированных электронов, молекулярных продуктов Н2О и Ш, которые, вступая в реакцию с органическими молекулами, вызывают их повреждение. Данный способ не дает существенных преимуществ по сравнению с кислотным методом инактивации остаточного вируса-индуктора в СЛИНИ, и тем самым подтверждает целесообразность сохранения остаточного вируса в препаратах.

2.2.6. Получение новой формы СЛИНИ, предназначенной для лерорального применения

СЛИНИ получали в соответствии со стандартной методикой. Добавку готовили из отработанных КЭ (ткани, оболочки, желток, скорлупа) после отбора вируссодержащей АЖ, которые вначале авто-клавировали, а затем тщательно измельчали в гомогенизаторе. Полученный гомогенат смешивали с жидким СЛИНИ (1:2), разливали по 4 см3 в пенициллиновые флаконы, лиофилизировали и герметизировали. В качестве дополнительного контроля при определении безвредности препарат скармливали белым мышам и крысам, поросятам в дозе 100, 200 и 500 тыс ME ежедневно в течение 10 суток. Установлено, что неи-

нактивированный вирус-интерфероноген должен быть введен в лекарственную форму на ранних стадиях технологического цикла. По основным параметрам СЛИНИ-П близок СЛИНИ (табл.1)

Характеристика СЛИНИ - П

Таблица 1

Наименование показателя

Характеристика и норма

Внешний вид, запах, цвет

Массовая доля влаги, % не более Растворимость в воде, мин

рН суспензии Содержание микрофлоры Противовирусная активность МЕ/см3, не менее

Содержимое белка в надосадочной жидкости после выпадения в осадок нерастворившихся частиц, мг/см3 Токсичность в культуре клеток

Безвредность тест-доз при внутри-брюшинном введении мышам, внутрикожно в лапку морским свинкам, внутримышечно кроликам и перорально поросятам Титр остаточного вируса индуктора ТЦД5о/См3 в пределах

Порошок желто-коричневого цвета с запахом вареного яйца 4,0

Растворимость частичная. При размешивании образуется суспензия, взвешенные частицы которой оседают в течение 5 мин 7, 3 ± 0, 5 не допускается 3 хЮ4

80, 0±10, 0

Не должно быть дегенерации клеток, начиная с разведения препарата 1:128 и более

безвреден

103- 105

Влияние СЛИНИ-П на интенсивность постнатального развития и сохранность поросят изучали в двух сериях опытов. В первой из них (п=108, животные 5 опытных и 6 контрольных пометов) установили, что двукратная обработка с интервалом 48 час, в дозе 105 МЕ/гол способствует увеличению сохранности на 9,8% и приростам живой массы -6,2% (5,16±0,03 против 4,88+0,15 кг). В неблагополучном по колибакте-риозу хозяйстве (вторая серия, п=77, 3 опытных и одна контрольная группы) СЛИНИ-П по протективным свойствам превосходил генно-инженерный - миксоферон. Сохранность и среднесуточные приросты живой массы в опытных группах составляли 86,4; 72,7% и 258; 247 г соответственно против 59,1% и 219 г в контроле. Эффективность приме-

нения препарата была наиболее высокой в случае его раннего применения: при начале обработок поросят в однодневном возрасте сохранность к отъему составила 86,4%, среднесуточные приросты - 258 г, в трехдневном - 72,7% и 246 г соответственно.

Наши данные свидетельствуют о целесообразности создания новой лекарственной формы ИФН - СЛИНИ-П, позволяющей также удешевить производство, упростить применение, повысить экономичность за счет включения в состав препарата идущие ранее в отход некоторые компоненты сырья. Доля только одних отработанных КЭ, контаминированных шггерфероногеном - ВБН, в соответствии с промышленным регламентом производства СЛИНИ, на единицу готовой продукции составляет 1,1 г, а на один производственный цикл - 11 кг.

2.2.7. Миксокин при заболеваниях поросят и телят

Одним из путей, ведущих к повышению клинической эффективности рекомбинантных ИФН, является их обогащение другими цито-кинами. Учитывая короткий период полураспада, они по сравнению с антибиотиками являются экологически более чистыми.

Подобный препарат - миксокин, состоящий из рекомбинантных вариантов человеческих ИФН-а(реальдирон) и ФНО-а(рефнолин), испытан при заболеваниях поросят (п=208, 3 опытные и контрольные группы) и телят (п=800, 2 опытные и контрольные группы), сопровождающихся диарейным или респираторным синдромом.

Трехкратная интраназальная обработка животных с интервалом 72 час с профилактической или лечебной целью в дозе ИФН-а и ФНО-а 1000 и 10 (препарат М1) или 10000 и 10 (препарат М2) МЕ/кг живой массы ведет к увеличению отхода поросят в опытных группах по сравнению с контролем на 5,1-24,7%, а заболеваемости телят - на 8,0-15,0%. Отрицательное действие миксокина обусловлено ФНО-а, поскольку в группах животных, обработанных препаратом с большим содержанием ИФН-а, оно выражено в меньшей степени.

Полученные результаты согласуются с данными М.П.Потапнева, Д.В. Печковского (1992) о том, что ФНО-а является одним из основных цитокинов, сопровождающих воспалительную реакцию. Стимулируя в малых дозах иммунную систему, в больших он оказывает токсическое действие. Поэтому введение экзогенного ФНО-а на фоне повышенного содержания в организме животного утяжеляет инфекционный процесс (Е.В.Солохин и др.; 1994).

Следовательно, применение данного цитокина в ветеринарии при инфекционных болезнях оправданно лишь при строгом контроле за уровнем содержания эндогенного ФНО-а.

2.3. Применение ИФН при вирусных болезнях собак

Решение данного вопроса при вирусных болезнях собак включало изучение эпизоотической ситуации в регионе, определение противовирусной активности гетерологичных, природных и рекомбинантных ИФН, получение и оценку видоспецифических препаратов.

2.3.1. Характеристика эпизоотической ситуации по вирусным болезням собак в регионе

Анализ эпизоотической ситуации в регионе по вирусным болезням собак указывает на значительное распространение ЧП и ПВЭ (рис.1).

А 2

«.75% В 2 С 2

40,03%

1994 г.

1995 г.

Рис.1 Удельный вес ЧП(1), Г1ВЭ(2), ИГП(З) в заболеваемости собак в г.Иваново (А, В), г.Косгроме (С)

Болезни регистрируются среди всех возрастных групп, но чаще у животных 2-6, 8-9 и 12-36 мес возраста. Предварительный клинический диагноз "подозрение на чуму" подтвержден методом ИФА в 45,2% случаев, наиболее часто у 4-, 6- и 7-мес щенков, в меньшей степени в группах 5-, 8- и >12-мес животных. Около трети щенков - 32,5%, привитых в 2-3 мес возрасте, заболевают спустя 4-5 мес. Чаще всего регистрируется ЧП на фоне предыдущей иммунизации ассоциированными (поливалентными) вакцинами, что согласуется сданными П.Е. Игнатова (1995) о более низком их протективном действии по сравнению с моновакцинами. Подобное может быть связано с интерференцией между входящими в состав препарата вирусами. Индивидуальные компоненты, не обладая иммунодепрессивным действием, при введении в различных комбинациях вызывают иммуносупрессию (Т^-РЫШрв Л а!., 1989). Особенно проблематично включение в состав ассоциированных вакцин парвовируса (Р.Яатас1а55 й а1.,1983).

Мы полагаем, что проблема борьбы с вирусными болезнями собак должна решаться с позиций проведения серологического контроля за маточным поголовьем (перед вязкой или щенением) и молодняком в 1-1,5 мес возрасте, точной диагностики и применения мер, направлен-

ных на разрыв эпизоотической цепи. Вакцинация должна проводиться только с учетом эпизоотической ситуации и иммунограммы.

2.3.2. Определение антивирусной активности ИФН на собаках

Решение поставленной задачи на первом этапе осуществлялось путем определения безвредности гетерогенного препарата для собак -СЛИНИ, который вводили трем группам животных (п=4 в каждой) внутримышечно, трехкратно, с интервалом 72 час в дозах 2х105, 5х105, 106 МЕ/гол. Препарат не вызывал у собак общих и местных реакций, исключая три случая кратковременной пирогенной реакции в дозах 5х105 - 1х10б МЕ/Зсм3. Подобный ответ присущ данному классу препаратов и носит индивидуальный и дозозависимый характер.

При сравнительной оценке различных способов лечения 164 собак при ЧП наиболее ощутимые результаты получены от дополнительного включения в схемы обработок специфической сыворотки и СЛИНИ, в меньшей степени - сыворотки или СЛИНИ (сохранность в опытных и контрольных группах составила 84,0; 76,9; 75,0 и 52,9% соответственно). Ангисыворопсу применяли в соответствии с наставлением, а СЛИНИ - в инъекционной форме, двукратно, с интервалом 4872 час, собакам массой до 3 кг - 100 тыс, свыше 3 кг - 200 тыс МЕ.

Эффективность средств этиотропной терапии определялась формой болезни и была наиболее высокой на ранних стадиях, что согласуется с данными В.И.Уласоваи соавт. (1990), П.Е.Игнатова (1995),а от дополнительного включения в схему СЛИНИ - на 7 день и более, а также при нервной форме ЧП. Подобное обусловлено действием не только ИФН, но и вирусом - индуктором, другими цитокинами, содержащимися в препарате СЛИНИ - ФНО, ИЛ-1 и др. Их прямой и синергидный эффект, очевидно, способствует быстрой инициации нормальных каскадов цитокиновых реакций, что в итоге приводит к быстрой нормализации уровня аутоиммунных реакций, особенно нормализации соотношения Етр-РОК/Етч-РОК. Данное положение согласуется с результатами опытов Г.А.Груздевой и соавт.(1994), получивших положительные результаты при использовании лейкинферона у людей с демиелинюирующим токсико-аллергическим процессом, сходным и имеющим место при ЧП (П.Е.Игнатов, 1994, 1995). Хотя СЛИНИ является гетерологичным в отношении собак, наличие у свиного лейкоцитарного ИФН множественных активных участков в молекулах позволяет лучше входить в контакт с рецепторами клеток других видов животных, вызывая тем самым противовирусный эффект.

Проведенные исследования дают право судить о более широкой возможности использования СЛИНИ с лечебной целью в гетерологич-ных биологических системах.

2.3.3. Получение и испытание лейкоцитарного ИФН собак с неинактивированным индуктором

При получении догоферона в качестве клеток - продуцентов использовали лейкоциты. Выбор определялся доступностью исходного сырья и менее трудоемкой методикой его получения.

За основу использовали модифицировагашга регламент на производство СЛИНИ с дополнениями, учитывающими специфику данного вида животных. Основные стадии технологического процесса предусматривают: получение крови от здоровых собак, выделение клеток продуцентов - лейкоцитов (получение плазмы и контроль ее стерильности, отделение лейкоцитов и их получение для биосинтеза ИФН); получение вируса - индуктора с проведением соответствующих контролен (на активность, содержание посторонней микрофлоры, подлинность); биосинтез ИФН (предобработка лейкоцитов вирусом - индуктором, приготовление инкубационной смеси, инкубация и осаждение лейкоцитов с последующим контролем ИФН- содержащей жидкости па стерильность и антивирусную активность); приготовление лекарственной формы (разлив препарата, лиофильная сушка, укупорка, упаковка, маркировка); контроль готового продукта (контроль внешнего вида, массовой доли влаги, растворимости, содержагам посторонней микрофлоры, антивирусной активности, содержания белка,токсичности, безвредности, рН, остаточного вируса-индуктора).

Догоферон соответствовал качественным характеристикам свойственным данному классу препаратов (табл.2)

На экспериментальной модели инфекционного гепатита у 25 собак установлено более высокое протективное действие видоспецифи-ческих ИФН в сравнении с гетерологичными, природных- перед ре-комбинантными. Догоферон в дозе 100 тыс МЕ/гол полностью защищал щенков от заболевания, СЛИНИ-в 71,4% случаев, в остальных -способствовал более легкому проявлению болезни. При использовании реальдирона из 7 зараженных, заболело 4 щенка (57,1%), один из которых пал (14,3%), в контрольной группе сохранность составила 50%. Препараты оказывали иигибируюгцее действие на выработку антител, степепь выраженности которого определялась видом ИФН. Серопози-тивность при использовании реальдирона и СЛИНИ отмечалась у 5 и 4 животных и догоферона - только у 2. Уменьшение числа щенков, не давших антительный ответ при заражении вирусом, особенно на фоне применения видоспецифического препарата, следует рассматривать как результат подавления репродукции вируса, ограничения антигенного стимула и обусловленного этим снижения иммунологической реакции. Вероятность подобного ответа следует учитывать при одновременном применении препаратов ИФН и вакцин, содержащих живой вирус.

Характеристика лейкоцитарного ИФН собак с неинактивированным индуктором (догоферон)

Наименование показателей

Характеристики и нормы

•Внешний вид

Массовая доля влаги

., Растворимость, рН, содержание бежа

Наличие механических примесей, плесени, неразби-вающихся хлопьев, :осадка в растворе Стерильность

Активность Токсичность

Безвредность

Титр остаточного вируса-индуктора

Однородный порошок светло-коричневого цвета, в растворе красно-коричневый с опалесценциёй от 1,0 до 3,0 %

Хорошо.растворяется в дистиллированной воде в течение 3±1 мин., рН раствора- 7,5±0,3, содержание белка не должно превышать 80,0 мг/см3

не допускается

Посевы на питательные среды не должны давать рост микрофлоры в течение 10-дн выдерживания при 36-37 и 20-22° С

Титр активности должен быть не ниже 1x105 МЕ/ см3

В разведении 1:128 не должен вызывать в течение 22+1 час дегенерации гомологичной или диплоидной культуры клеток М-19

Внутрибрюшинное введение 0,5 см3 белым мышам, внутрикожное - морским свинкам в план-тарную поверхность задних лапок 0,3 см3, внутримышечное- щенкам собак 2,5-3- мес возраста 5,0 см3 не должно вызывать заболевания в течение 5 (белые мыши) и 10 (морские свинки, щенки) суток наблюдения

от 103 до 105 ЦПД 50/см

Результаты производственных испытаний показали,, что внутримышечное введение догоферона, двукратно, с интервалом 48-72 час, в мдйзе,100-200. тыс МЕ/гол на фоне базисной терапии при ЧП, ИГП и ;ПВЭ способствует более легкому течению болезни, уменьшению про- должительности при ЧП и ИГП с 3,60±0,48 до 2,92±0,29, при ПВЭ - с 6,33±0,83 до 4,10±0,48 (Р<0,05) дн, повышению сохранности животных на 21,1 при ЧП,ИГП (Р<0,05) и 10,7% при ПВЭ.

Лечебная эффективность более выражена на ранних стадиях заболевания, особенно при ПВЭ, что возможно обусловлено исключительно короткой фазой репликации парвовируса и быстрой динамикой болезни. Парвовирус является также слабым интерфероногеном и, тем

самым, не обеспечивает в короткие сроки выработку эндогенного ИФН (К.Н.Груздев, 1992).

Обобщая результаты опытов по использованию ИФН при вирусных болезнях собак констатируем, что природные ИФН с неинактиви-рованным индуктором (догофероп, СЛИНИ) по сравнению с рекомби-нантными обладают более широким спектром иммунобиологического действия, опосредованного не только ИФН, но и его индуктором, а также комплексом других цитокинов, синтезированных лейкоцитами в процессе интерфероногенеза. В связи с этим их следует рассматривать как эффективные средства экстренной профилактики и терапии, отдавая предпочтение видоспецифическим препаратам.

2.4. Изучение антибактериальной активности ИФН

Решение поставленной задачи включало изучение антибактериальной активности ИФН - природных (СЛИНИ, догоферон) и реком-бинантных (миксоферон, реальдирон). Опыты in vitro проводили с 16 штаммами микроорганизмов (стафилококки, стрептококки, эшерихии, сальмонеллы и др.) музейного происхождения или выделенных из патологического материала в свиноводческих хозяйствах. Испытаны дозы препаратов от 500 до 2000 МЕ/см3.

На первом этапе антибактериальное действие ИФН определяли по задержке роста микроорганизмов в жидких средах визуально или на плотных - по количеству выросших на агаре колоний, на втором - по показателям оптической плотности бульонных культур в опытных и контрольных пробах, определяемых с помощью КФК-2 сразу после добавления ИФН и после 20-22-час инкубации, на третьем - по схеме второго, но данные выражали условной величиной - коэффициентом роста микроорганизмов (КРМ), который отражал соотношение показателей, учтенных после инкубации, к первоначальным. Число выше единицы свидетельствовало о низкой антибактериальной эффективности препарата, ниже - о высокой.

Действие препаратов in vivo изучали на модели эшерихиозной инфекции, которую воспроизводит! путем внутрибрюшинного заражения 280 белых мышей 3,4х10б микробных клеток (0,5 см3 E.coli cepo-типа 08). На 154 белых мьппах (10 опытных групп и одна контрольная, п=14 в каждой) определяли протективное действие СЛИНИ и реальди-рона в дозах 1х102, 0,5х103, lxlO3, 2х103 и 5x103 МЕ/гол.

В опытах in vitro в разных модификациях природные ИФН оказывали выраженное антибактериальное действие на грамположитель-ную микрофлору, в меньшей степени - на грамотрицательную. Реком-бинантные ИФН в малой степени ингибировали рост микроорганизмов, а в отношении Micrococcus lysodeicticus действие было даже оппо-зитным. Результаты исследований по определению антибактериальной активности ИФН в дозе 1000 МЕ/см3 представлены в табл.3.

Антибактериальная активность интерферонов в дозе 1000 МЕ/см3,

М+т

Вид бактерий КРМ

контроль | СЛИНИ | догоферон | миксоферон

1.E.coli 10,39±0,38 1,03±0,05 3,32±0,28 9,77±0,80

2. S. agalactiae 6(09±0,76 0,84+0,06 1,29+0,06 6,27+0,11

3. S. haemolyticus 10,31+0,28 0,89±0,06 1,13±0,09 9,95±0,37

4. S. epidermidis 8,09±0,87 0,74+0,06 0,98±0,09 7,84±0,92

5. Micrococcus 9,97+0,21 0,ЗОЮ,06 0,57±0,05 10,94±0,05 lysodeicticus

6. Sarcinaflava 9,46±0,57 0,70+0,03 1,71±0,09 8,62+1,04

7. Вас. subtilis 23,64+2,09 0,78±0,09 1,50+0,14 10,06±1,62

8.Вас. anthracis 23,03±2,09 0,56±0,09 2,85±0,13 10,41±1,10 (шт.СТИ)

9. Вас. anthracoides 26,19 ±2,76 0,74+0,08 2,91±0,21 7,92±0,64

Природные ИФН - СЛИНИ, догоферон по своей активности превосходили мгассоферон, однако весьма достоверно различались между собой по ингибирующему действию - более активное у СЛИНИ (Р^0,05 - 0,01). Избирательность действия ИФН можно объяснить различиями в строении клеточной стенки бактерий и, как следствие, неодинаковой проницаемостью для них (С.А.Печеркина и др., 1982), а также способностью препарата при прямом контакте убивать микробную клетку или нарушать её биоэнергетику (Н.Я.Спивак, 1987). Более высокая устойчивость грамнегативной микрофлоры может быть также обусловлена наличием у нее фактора АСПИ-активности - способности инактивйровать антибактериальную активность препаратов ИФН (О.В.Бухарин и др., 1994).

Протективное действие ИФН in vivo определяется не только их видом, но и сроками введения препаратов - до, одновременно или в разные сроки после заражения. СЛИНИ, инъецированный мышам в дозе 103 ME за 12 час до заражения, защищал от гибели 85,7% животных, одновременно - 78,6%, спустя 12 час - 57,0%, реальдирон - 57,0; 43,0; 43,0% при сохранности в контрольных группах 43,0; 50,0; 43,0% соответственно. Действие СЛИНИ носит дозозависимый характер. Оптимальная доза для мышей составляет lxlO3 ME, её увеличение в 2-5 раз не приводит к усилению защитного эффекта, уменьшение - снижает выживаемость животных.

Следовательно, механизм действия природных и рекомбинант-ных препаратов ИФН различен. Как и при вирусных, так и при бактериальных инфекциях протективное действие препаратов природного происхождения опосредовано не только ИФН, но и неинактивироваН-ным индуктором, а также комплексом других цитокинов, входящих в

их состав в незначительных количествах, но действующих синергидно. Указанное свидетельствует о перспективности природных ИФШвете-ринарии.

2.5. Изучение индукторов ИФН и противовирусных препаратов на

животных

Решение данной проблемы включало выбор доступных для ветеринарной практики препаратов - изамбена и дейтифорина, определение их противовирусной, антибактериальной и интерфероногенной активности, возможности применения на различных видах животных, разработку способов и схем использования, определение лечебно-профилактической эффективности.

В опытах с тест-культурами эшерихий и стафилококков препараты в концентрации 0,01; 0,1; 1,0 и 10 мг/см3 антибактериального действия не оказывали. Однако дсйтифорин и изамбен в дозах 0,078 и 1,25 мг/см3 после 24 час контакта защищали клетки диплоидной культуры М-19 от размножения эталонного ВВС штамма Индиана. Дейтифорин в концентрации 1 и 10 мг/см3 стимулировал выработку лейкоцитами ИФН в титре 1:8 и 1:16 соответственно. Изамбен подобного действия не оказывал.

Препараты были нереактогенными и безвредными при перораль-ном (в соответствии с наставлением) и инъекционном способах применения не только для телят, но и для свиней при однократных, а также многократных (курсовых) обработках в дозах 10, 15, 30 (изамбен) и 1, 2, 3 (дейтифорин) мг/кг живой массы.

Применение препаратов (п=80) в хозяйствах, неблагополучных по колибактериозу телят, существенно не отразилось на сохранности молодняка (Р>0,05). Отмечали тенденцию к уменьшению продолжительности болезни при использовании изамбена, при этом пероральное применение по эффективности превосходило внутримышечное (Р<0,05).

При ведущей роли в этиопатогенезе массовых желудочно-кишечных болезней вируса ТГЭС в опытах на 572 новорожденных поросятах (по 4 группы, 296 в опытных и 276 в контрольных) дейтифорин способствовал повышению сохранности на 32,3% (Р<0,001), изамбен -на 22,9% (Р<0,01), в то время как при их сочетанном применении этот показатель не превышал 15,4%. При использовании препаратов в инъекционной форме (339 животных в опытных и 292 - в контрольных группах) получены аналогичные результаты.

Дейтифорин и изамбен оказывали выраженное терапевтическое действие (6 опытных групп, п=64 и одна контрольная, п=62). При начале лечения в первый день проявления клиники ВТГЭС эффективность дейтифорина составила 80,0, второй - 50,0, изамбена - 60,0 и 45,5%.

При диареях, ведущая роль в этиопатогенезе которых принадлежала энтеробактериям, эффективность иротективного действия дейти-форина и изамбена при пероральной обработке поросят (по 4 группы, 699 опытных и 561 контрольных) и внутримышечной (по 3 группы, 599 опытных и 561 контрольных) не превышала 7,4 - 9,6%.

Защитное действие изамбена при бактериозах выше, чем дейти-форина, при в прозах - наоборот. Подобное обусловлено не только прямым противовирусным действием дейтифорина, но и его интерферон,огенной активностью. Действие же изамбена опосредовано стимуляцией фагоцитарного звена иммунной системы, а также нормализацией иммунорегуляторного комплекса.

Проведенными опытами показана возможность применения дейтифорина и изамбена на новом виде животных - свиньях путем выпойки или в инъекционной форме. Рациональное их использование требует постоянного контроля за эпизоотической ситуацией в хозяйстве.

2.6. Применение иммуномодуляторов для стабилизации иммунного статуса беременных животных

2.6.1. Сезонные изменения иммунограммы у коров костромской

породы

В осенний период наблюдается тенденция к увеличешио абсолютного числа (Г/л) лейкоцитов (5,70+0,27 и 6,65+0,52), нейтрофилов (2,21±0,18 и 2,36±0,22) при обратной картине у эозинофилов (0,71+0,09 и 0,65±0,12), моноцитов (0,15±0,02 и 0,09±0,04) и сохранении стабильного уровня базофилов (0,05±0,01 и 0,05±0,01). В то же время относительное содержание (%) моноцитов весной выше (Р<0,001). Весной не обнаруживается юных форм нейтрофилов, а осенью наблюдается увеличение как их относительного (0,64+0,22; Р<0,01), так и абсолютного числа (0,06±0,01; Р<0,001). В весенний период характерна более высокая активность фагоцитарного звена иммунитета. Осенью наблюдается достоверное снижение или тенденция к этому относительного и абсолютного числа Т-лимфоцитов (45,5±2,90 и 18,64+1,70, Р<0,01; 1,18±0,11 и 0,65+0,10, Р<0,001), а также и их субпопуляций - Етр-РОК (35,27±2,12 и 10,82±1,90, Р<0,001; 0,91+0,08 и 0,34+0,09, Р<0,001) и Етч-РОК (10,23±3,28 и 7,82±2,32; 0,26±0,08 и 0,ЗОЮ,12), в связи с чем иммуноре-гуляторный комплекс Етр-РОК/Етч-РОК снижается с 3,4 до 1,4. В то же время относительное и абсолютное число нулевых клеток и лимфоцитов резко возрастает (25,86±4,0 и 62,95±5,57, Р<0,001; 0,65+0,10 и 2,19+0,22, Р<0,001; 45,73±2,51 и 51,68±2,28; 2,59±0,18 и 3,48±0,37, Р<0,05 соответственно). В осенний период наблюдается значительный разброс параметров гематологических и иммунологических показателей (крайние значения от среднего - минимальные и максимальные). Одна-

ко наиболее существенным при оценке иммунограммы у коров костромской породы является обнаружение животных с отрицательными значениями Етч-РОК (весной-14,3, осенью-13,0%) и нулевых клеток (весной - 5,7%).

2.6.2. Возрастные изменения иммунограммы у коров костромской

породы

Объектом исследований являлись 35 коров, разделенных на четыре возрастные группы: 3-4 (п=6), 5-6 (п=13), 7-8 (п=9) и >9-летнего (п=7) возраста.

Установлено, что картина белой крови и большинство иммунологических показателей претерпевает отчетливую возрастную динамику. Наиболее альтернативные показатели регистрируются в двух группах животных - 3-4 и >9-летнего возраста. Содержание лейкоцитов, относительное и абсолютное число нейтрофилов и их сегментоядерных форм, моноцитов, эозинофилов с возрастом увеличивается с последующим возвратом к исходносодержащему уровню с небольшими ко-лебапиями в ту или иную сторону. В то же время относительное число лимфоцитов имеет обратную динамику (61,50+2,92; 49,84±4,24; 46,33+4,93; 60,71+5,91), а абсолютное - постоянно уменьшается (3,67±0,40; 2,82+0,40; 2,74±0,24; 2,70±0,63). Показатели, отражающие содержание Т-лимфоцитов, изменяются незначительно. Наиболее высокие значения относительного и абсолютного числа Етр-РОК отмечаются у коров 5-6 и 7-8-летнего возраста (25,67±2,03; 34,83+3,44; 30,44±2,86; 28,85+4,88 и 0,95±0,14; 0,90±0,11; 0,86+0,14; 0,88±0,15), в то время как Етч-РОК - в младшей и старшей возрастных группах (17,00±6,53; 11,33+4,40; 12,56+4,76; 18,29±6,40 и 0,68+0,26; 0,42+0,17; 0,37+0,14; 0,54+0,17). Относительное число В-лимфоцитов с возрастом незначительно увеличивается с восстановлением к исходносодержащему уровню у коров > 9-летнего возраста (от 24,67+1,95 до 29,77±2,71). Абсолютные показатели были наиболее высокими в младшей возрастной группе, снижаясь до стабильного уровня с 0,91+0,13 до 0,81±0,11 -0,82+0,14. Относительное и абсолютное число нулевых клеток колеблется в пределах 32,67±6,12-23,08±4,05 и 1,13±0,17-0,83±0,22 с наиболее высокими значениями в группе 3-4-летних коров.

Фагоцитарная активность нейтрофилов с учетом сезонных и возрастных характеристик была наиболее высокой в весеншш период у коров 5-6 и 7-8-летнего возраста, осенью - у животных младшей и старшей возрастных групп.

Следовательно, по основным показателям клеточного, гуморального, фагоцитарного звеньев иммунитета к группе риска относятся коровы 3-4 и >9-летнего возраста.

2.6.3. Влияние ИФН и иммуномодуляторов на клеточные и гуморальные факторы иммунитета

Исследования проведены на 33 коровах (три опытные и одна контрольная группа). Через 2 дн после иммунизации ГОА-формол-тиомерсаловой вакциной против колибактериоза за 60 и 45 дней до родов животным первой опытной группы внутримышечно инъецировали СЛИНИ в дозе 103 МЕ, второй - пероралыю задавали изамбен в виде водного раствора из расчета 20 мг/кг живой массы, третьей - инъецировали внутримышечно 7,5% раствор левамизола из расчета 0,04см3/кг, контрольной - внутримышечно вводили изотонический раствор хлорида натрия. Для проведения гематологических и иммунологических исследований методом случайной выборки отобрали по 5 коров из каждой группы. Кровь исследовали до и спустя 8 дней после каждой обработки и в день родов.

Первичный ответ у коров контрольной группы на вакцинацию сопровождается уменьшением количества лейкоцитов с последующим увеличением их числа с наиболее высокими показателями после отела, лимфоцитозом, повышенным содержанием Т-лимфоцитов, в основном, за счет значительного прироста Етч-РОК, свидетельствующего о значительно выраженном иммуносупрессирующем действии препарата. Показатель иммунорегуляторного комплекса Етр-РОК/Етч-РОК в контрольной группе составлял 1,4, в то время как у обработанных СЛИНИ и изамбеном - 2,6. После первой вакцинации уменьшается число нулевых клеток, которое за месяц до отела восстанавливается до исходносодержащего уровня с последующим значительным выбросом клеток в кровяное русло во время родов. Подобная динамика Т-клеточного звена наблюдается также при использовании для обработки СЛИНИ. Однако у коров после родов, как относительное, так и абсолютное число Т-лимфоцитов, Етр-РОК было значительно выше, чем в контрольной группе при близких значениях Етч-РОК - 49,0+5,28, 35,33+4,41, 13,67±6,28 и 35,25±7,65, 20,75±9,02, 14,50±7,19%; 2,08±0,48, 1,55+0,44, 0,53+0,20 и 1,35+0,39, 0,86+0,45, 0,50+0,23 соответственно. Аналогичная динамика показателей, характеризующих Т- клеточное звено, сохраняется при использовании изамбена при наиболее выраженном различии в значениях иммунорегуляторного комплекса - 2,6 и 1,4 соответственно. Действие левамизола выразилось в ранней отмене иммуносупрессорной функции клеток, регулирующих взаимоотношение мать - плод, что при определенных условиях может привести к нарушению физиологического течения беременности. Применение препаратов во всех группах способствует уменьшению супрессирующего действия вакцины и нормализации показателей иммунорегуляторного комплекса Етр-РОК/Етч-РОК. Динамика содержания В- лимфоцитов характеризуется увеличением на первое введение вакцины во всех группах, близкими по значениям у коров контрольной группы и об-

работанных изамбеном - 38,60±11,04 и 39,0±9,01%, более высокими показателями при обработке СЛИНИ и левамизолом 53,0±10,44 и 55,0+7,98% соответственно. В дальнейшем содержание B-клеток во всех группах уменьшается, что соответствует физиологическому состоянию коров.

Проведенные исследоватш показали, что СЛИНИ, изамбен и левамизол способствуют нормализации иммунного статуса у беременных коров костромской породы. Показатели не выходят за пределы границ нормативных значений (В.Е. Чумаченко и др., 1990) .

2.6.4. Характеристика заболевания телят в раннем возрасте

Желудочно-кишечные болезни у телят в хозяйствах центра Нечерноземной зоны РФ характеризуются широким распространением, почти поголовным охватом и значительным отходом (до 34,4%). Они обусловлены ассоциацией различных возбудителей, которые проявляют свою патогенность при определенных условиях. В 54,5% проб от больных животных обнаружены энтеробактерии и ротавирусы, причем в 41,7% случаев получены совпадающие результаты бактериологического и вирусологического исследований. У телят до 10-дн возраста чаще выделяются микроорганизмы из рода Proteus и Enterobacter, 6-15 - ротавирус, 6-10 и 16-20 - эшерихии. Ротавирус регистрируется только в 37,5% случаев, в ассоциации с энтеробактером - 50,0%, кишечной палочкой -12,5%.

Первая волна заболевания у телят 1-3-дн возраста обусловливается бактериями, вторая, более продолжительная (Р<0,01) и злокачественная, у 6-15-дн животных - ротавирусом или вируспо-бактериаль-ной ассоциацией.

Клинические признаки болезни у телят, полученных от невакци-нированных коров, отмечаются сразу после рождения. При уровне отхода до месячного возраста 34,4%, около 10-12% из них погибает в течение первых 2-3 дн жизни, а основная масса - в 5-12-дн возрасте. Отмечается тенденция к повышешюму отходу среди молодняка, полученного от коров первых двух отелов, с меньшей массой тела при рождении, более высокая устойчивость бычков, чем телочек. У части телят (массой_<15-16 и >40 кг) наблюдается увеличение щитовидной железы, изреженность шерстного покрова. Традиционные средства симптоматической и патогенетической терапии оказывают незначительный эффект. Вакцинация стельных коров против колибактериоза, сальмонел-леза, клебсиеллеза и других инфекций, обусловленных бактериями, способствует более легкому проявлению первой волны болезни, не оказывая существенного влияния на общую заболеваемость, но повышая на 5-7% сохранность молодняка до 20-дн возраста. Начало первой и второй волны заболевания у телят, полученных от вакинированных и

нспривитых коров, отмечается на 3,06+0,40 и 6,83+0,82 день, продолжительностью 2,36±0,44 и 6,25±1,21 дн при 65,5% сохранности.

Таким образом, массовые желудочно-кишечные болезни у телят могут быть обусловлены ассоциацией микроорганизмов из сем. ЕШегоЬаЛепасеае и ротавирусом. С учетом особенностей клинических проявлений, прогрессирующего отхода новорожденных на фоне малой эффективности мер, направленных на улучшение условий содержания, рационального применения лекарственных препаратов можно судить об их обусловленности иммунодефицитом смешанного характера. Рождение молодняка с определенными пороками развития свидетельствует о воздействии на них неблагоприятных факторов еще в период внутриутробного развития.

2.6.5. Клеточные и гуморальные факторы неспецифического иммунитета у новорожденных телят

Исследован материал от 20 новорожденных телят, полученных от коров 4 опытных и контрольной групп (п=5 в каждой).

Полученные данные свидетельствуют о наличии у телят контрольной группы Т-иммунодефицита, увеличенном содержании в крови малодифференцированных клеток. Обработка коров СЛИНИ, изамбеном и левамизолом способствует активации Т-клеточного и фагоцитарного звеньев иммунитета. Относительное число тотальных лимфоцитов и Етр-РОК в опытных группах выше, чем в контрольных: Т-лимфоциты - 34,50±5,45; 34,50+7,37; 40,00±6,77 и 21,00±7,64; Етр-РОК - 31,00±9,45; 20,17±4,09; 23,20±5,37 и 14,20±4,26 соответственно. В контрольной, первой (СЛИНИ) и второй (изамбен) опытных группах выявляли телят с отрицательными значениями Етч-РОК, в то время как у животных третьей группы данный показатель был высоким -16,80+2,68. Изамбен оказывает ингибирующее влияние на кроветворную систему, что выражается опосредовано у молодняка уменьшением абсолютного числа лейкоцитов, лимфоцитов и связанных с ними компонентов (Т-лимфоцитов, Етр- и Етч-РОК). Вместе с тем в группе отмечается наиболее оптимальный показатель иммунорегуляторного комплекса - 3,14. Применение препаратов способствует повышению физиологической активности лимфоцитов, что нашло отражение в уменьшении как относительного, так и абсолютного числа нулевых клеток по сравнению с контролем. Различия в показателях содержания В-клеток в группах незначительны и близки к значениям, установленным А.М.Цымбалом и др. (1983), А.Ю.Кассичем (1986).

Общая фагоцитарная активность и интенсивность фагоцитоза в опытных группах (особенно во второй) выше, чем в контрольных. Заболеваемость и сохранность телят второй (изамбен), третьей (лева-мизол) опытных групп на 25,0-28,6 и 11% соответствешю ниже, чем в остальных. Уменьшается продолжительность болезни и более позднее

ее проявление (Р<0,05). Аналогичная динамика отмечается в первой опытной группе, однако разлитая с контрольной не достоверны.

Полученные результаты свидетельствуют о возможности использования иммунотропных препаратов для стабилизации иммушгого статуса беременных животных с целью повышения устойчивости к болезням новорожденного молодняка.

2.6.6. Влияние ИФН и иммуномодуляторов на антителообразование

В опытах на коровах (3 опытных, одна контрольная группы, п=35) не наблюдали стимулирующего действия СЛИНИ, изамбена, левамизола при обработках в продуктивную фазу антителообразова-ния после иммунизации убитыми моно- и ассоциированными вакцинами против эшерихиоза, сальмонеллеза, клебсиеллеза, протейной инфекции. Тигры антител в контрольной группе были выше после первой и второй вакцинации, а также после отела (исключая первичный ответ на обработку левамизолом)- 8,8+0,33; 10,6±0,27; 9,7±0,46 против 7,8±0,66; 9,8±0,59; 9,1±0,47 (СЛИНИ), 7,6+0,44; 9,2±0,96; 7,3±1,28 (изамбен), 9,1+0,74; 8,3±0,28; 7,5±1,16(левамизол) log соответственно.

В то же время обработка кур изамбеном в сочетании с живой вакциной Ла-Сота против ньюкаслской болезни способствует значительному приросту гемагглютининов, титры которых коррелируют со сроками и методами иммунизации. Выпойка препарата курам до вакцинации не оказывает значительного влияния на антителообразование (Р>0,05), одновременно с вакциной - достоверно повышает титры гемагглютининов (Р<0,05), в продуктивную фазу независимо от методов иммунизации, путем выпойки или аэрозольно, действие наиболее эффективно (Р<0,001-0,05). Возможно, при выпойке вакцины препарат обеспечивал не только системную, но и местную активацию эффек-торных клеток иммунной системы.

Проведенные исследования показывают, что действие препаратов на антителообразование неоднозначно и зависит от ряда факторов. Оно может быть стимулирующим, ингибирующим или индифферентным и определяется дозовыми и временными параметрами применения, характеристикой самого препарата, исходным уровнем иммуно-компетентных клеток, стадией развития иммунного ответа, экспериментальной моделью, в которой он тестируется. Однако определяющим моментом является физиологическое состояние животного - лабильный показатель, зависящий от условий кормления, содержания и ряда других факторов. В связи с этим использование иммуностимуляторов в некоторых случаях может быть малоэффективным.

з.в ыводы

1.Наличие у интерферонов иммуномодулирующего, противовирусного и антибактериального действия, неспецифичного в отноше-

нии возбудителей, делают их одним из главных средств экстренной профилактики и терапии при инфекционных болезнях молодняка животных полифакторной этиологии.

2.Пероральное и внутримышечное введение свиного лейкоцитарного интерферона с неинактивироваиным индуктором в дозе 100 тыс МЕ характеризуется сходной динамикой циркуляции ИФН в крови одно- двудневных поросят: обнаружением в первые два часа и нахождением в течение 5-6 часов в титрах 1:32 - 1:512.

3.Модифицированная схема применения свиного лейкоцитарного интерферона с неинактивироваиным индуктором в инъекционной форме, основанная на обработке только поросят, уменьшении интервалов между введениями с 72 до 48 час, числа введений в зависимости от эпизоотической ситуации с трех до двух,не уступает по эффективности рекомендованной наставлением,что позволяет с учетом технологичности, экономичности и других критериев рекомендовать ее для широкого внедрения в производство.

4.В экспериментальных условиях пероралыюе применение свиного лейкоцитарного интерферона с неинактивироваиным индуктором за 24 и 2 час до и через 24 и 48 час после заражения летальной дозой вируса трансмиссивного гастроэнтерита предохраняет от гибели 55,5% поросят. В производственных условиях данный метод не уступает по эффективности инъекционному, способствуя повышению сохранности молодняка доотъемного возраста при массовых проявлениях желудочно-кишечных болезней на 29,03±6,70 против 26,43±3,52, а при энзоотичности - на 11,40±0,60 и 9,63±0,33% соответственно.

5.Максимальный выход интерферона при получении новой формы препарата для перорального применения (СЛИНИ-П) достигается при множественности заражения 10 ТЦДзо штамма Бор74 вируса болезни Ньюкасла на одну клетку, наиболее высокая противовирусная активность - без инактивации остаточного вируса-индуктора. Инфицированные вирусом оболочки и ткани куриного эмбриона кроме интерферона-а индуцируют в суспензии лейкоцитов фракцию со свойствами иммунного интерферона.

В производственных условиях СЛИНИ-П по сравнению с миксо-фероном в большей степени увеличивает сохранность и приросты живой массы тела у поросят доотъемного возраста.

6. Свиной лейкоцитарный интерферон с неинактивироваиным индуктором проявляет гсгерологичную активность в организме других видов животных, что позволяет использовать его в сочетании с другими препаратами при чуме, инфекционном гепатите и парвовирусном энтерите плотоядных.

7. Новая форма видоспецифического природного препарата лейкоцитарного интерферона собак с неинактивироваиным индукто-

ром (догоферон), в условиях эксперимента при инфекционном гепатите плотоядных обладает более выраженным протективным действием, чем гетерологичный (СЛИНИ) и рекомбинантный (реальдирон).

Препараты природного происхождения (догоферон, СЛИНИ) в дозе 100 тыс МЕ/гол в большей степени, чем рекомбинантный -реальдирон, интерферируют с иммунным ответом на заражение при серопозитивности у 28,6 ; 57,2 и 71,4% собак соответственно.

8.Лейкоцитарные интерфероны свиней и собак с неинактивиро-ванным индуктором обладают по сравнению с рекомбинантными (миксоферон, реальдирон) не только более выраженной противовирусной, но и антибактериальной активностью в отношении грампози-тивных (стафилококки, стрептококки, микрококки и др.), так и грам-негативных микроорганизмов (эшерихии, сальмонеллы).

9.Введение СЛИНИ в дозе 3000 МЕ/гол одновременно или до заражения предохраняет от гибели 78.6 - 85.5% белых мышей при экспериментальной эшерихиозной инфекции, чего не наблюдается при использовашш реальдирона.

10. Природные лейкоцитарные интерфероны свиней и собак с неинактивированным индуктором обладают более высоким и широким спектром противовирусного, антибактериального и иммуномо-дулирующего действия, чем рекомбинантные, что расширяет сферу их клинического использования не только при заболеваниях вирусной, но и бактериальной этиологии и делает, с учетом доступности исходного сырья для получения, более перспективными препаратами для применения в ветеринарной практике.

П.Изамбен и дейтифорин обладают противовирусным действием и индуцируют выработку ИФН (дейтифорин). Препараты безвредны для телят и поросят при внутримышечном или пероральном применении в дозах 10,0 и 1,0 мг/кг три раза в день или однократно 30,0 и 3,0 мг/кг массы тела соответственно. В свиноводческих хозяйствах при энзоотичности по вирусным болезням они увеличивают сохранность молодняка доотьемного возраста на 5,8-7,4%, а при массовых проявлениях - эффективность возрастает в 4-5 раз и более. Перораль-ное введение изамбена курам в продуктивную фазу антитслообразо-вания достоверно повышает титры гемагглютишшов при вакцинащш против ньюкаслской болезни.

12. Иммунный статус коров костромской породы в терминальный период беременности определяется сезонным и возрастным факторами. Весенний период характеризуется более высокими показателями фагоцитарного звена, Етр-РОК и В-лимфоцитов, наличием животных с отрицательными значениями Етч-РОК и нулевых клеток, осенний - резким уменьшением числа Т-лимфоцитов, снижением показателя иммунорегуляторного комплекса, высоким уровнем нулевых

клеток, наличием животных с отрицательными значениями Етч-клеток.

По основным параметрам клеточного, гуморального и фагоцитарного звеньев иммунитета к группе риска относятся коровы до четырех и старше девятилетнего возраста.

13. Иммунный статус одно-двудневных телят характеризуется лимфоцитозом, низкими показателями Т-клеточного звена, высоким содержанием в крови малодифференцированных клеток.

Стабилизация иммунного статуса беременных коров путём двукратного применения СЛИНИ, изамбена, левамизола за 60-45 дней до отела способствует увеличению числа лейкоцитов, Т-лимфоцитов, Етр-РОК и повышению устойчивости к желудочно-кишечным болезням полученного от них приплода.

14. Предложенные усовершенствования технологического процесса, более простая и доступная для практики методика применения, существенное расширение сферы лечебно-профилактического использования, включение всех этих предложений в официально утвержденные ТУ и наставление способны обеспечить широкомасштабное применение свиного лейкоцитарного интерферона с неинактивированным индуктором для экстренной профилактики и терапии при массовых инфекционных болезнях молодняка полифакторной этиологии.

4.ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Научные разработки вошли в следующие утвержденные нормативно-технические документы:

1. "Интерферон лейкоцитарный свиной с неинактивированным индуктором сухой" ТУ 9381-0494185-95. Утв. Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода России 1.09.1995 г.

2. Наставление по применению интерферона лейкоцитарного свиного с неинактивированным индуктором сухого № 13- 4- 2/391.Утв. Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода России 1.09. 1995г.

3. ТУ.на опытную партию "Интерферон лейкоцитарный свиной с неинактивированным индуктором сухой для перорального применения" для широкого производственного испытания (протокол №6 Ученого Совета КГСХА от 24 июня 1994г, утв. ректором К ГСХА 22.04.1997г)

4. Временное наставление по применению интерферона лейкоцитарного свиного с неинактивированным индуктором сухого для перорального применения для широкого производственного испытания (протокол №6 Ученого Совета КГСХА от 24 июня 1994г, утв. ректором К ГСХА 22.04.1997г)

5. Опытно-промышленный регламент на производство интерферона лейкоцитарного свиного с неинактивированным индуктором су-

хого для перорального применения (протокол №6 Ученого Совета КГСХА от 24 июня 1994г, утв. ректором К ГСХА 22.04.1997г)

6. ТУ на опытную партию "Интерферон лейкоцитарный собак с неинактивированным индуктором сухой", для широкого производственного испытания (протокол №12 Ученого Совета КГСХА от 24.12.1993г, утв. ректором КГСХА 22.04.1997г)

7. Временное наставление по применешпо интерферона лейкоцитарного собак с неинактивированным индуктором сухого, (протокол №12 Ученого Совета КГСХА от 24.12.1993г, утв. ректором КГСХА 22.04.1997г)

Высокая эффективность интерферона лейкоцитарного с неинактивированным индуктором позволяет рекомендовать его для экстренной профилактики и терапии при массовых желудочно-кишечных болезнях у новорожденных поросят полифакторной этиологии, а также при чуме, инфекционном гепатите и парвовирусном энтерите плотоядных.

При энзоотичности проявления заболевания у поросят можно ограничиться обработкой только молодняка в дозе 1 ООтыс МЕ/гол, число введений препарата уменьшить с трех до двух, а интервалы между инъекциями сократить с 72 до 48 час, внутримышечное введение одно-двудневным поросятам заменить на пероральное. Целесообразней применение видоспецифических природных интерферонов, чем реком-бииантных.

5.СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Муратов С.И., Бурдейный В.В., Ефимова H.A. Специфическая профилактика колибактериоза телят //Профилактика и лечение инфекционных и инвазионных болезней скота в условиях концентрации животноводства: Сб.науч.тр. /МВА.- М.,1982,- Т. 124.-С. 14-17.

2. Бурдейный В.В., Ефимова H.A., Алеутская J1.K. и др. Эффективный метод профилактики колибактериоза новорожденных телят //Индивидуальное развитие и профилактика болезней животных в условиях промышленного животноводства Ивановской обл.: Сб.науч.тр. / МВА,-М., 1985. - С.11-18.

3. Бурдейный В.В., Соколов Б.Л.., Дмитриев О.Н., Петрова И.Н. Особенности острых респираторных заболеваний у телят в откормочном комплексе // Там же.- С.22-26.

4. Бурдейный В.В.,Ефимова H.A.,Алеутская Л.К.,Тымтышев В.А. Некоторые вопросы эпизоотологии, клиники и специфической профилактики колибактериоза поросят в свиноводческих комплексах //Профилактика и лечение инфекционных и инвазионных болезней свиней и крупного рогатого скота в условиях Ивановской обл.; Сб.науч.тр ./МВА.- М.,1986,- С.4-10.

5. Бурдейный В.В., Соколов Б.К., Дмитриев О.Н. и др. Серопрофилактика острых респираторных заболеваний телят в откормочном комплексе//Там же.-С. 11-18.

6. Бурдейный В.В.,Дудников С.А.,Иванов О.В.,Монова Н.С. Ко-либактериоз поросят и меры борьбы с ним в условиях промышленного свиноводства // Актуальные проблемы ветеринарной и зоотехнической науки в интенсификации животноводства: Матер, конф. поев. 70-летию MBA. - М.,1990.-С.131-132.

7. Бурдейный В.В.,Саврасов И.И..Дудников С.А. и др. Использование интерферона в условиях свиноводческого комплекса //Тез.докл. 3-й Всес.конф. по эпизоотологии,- Новосибирск. 1991,-С.300-301.

8. Бурдейный В.В. Применение интерферонов в ветеринарии // Внедрение достижений науки и передового опыта в с.-х. производство: Матер, науч.-метод. конф.- Ярославль, 1993.- С. 121-123.

9.Бурдейный В.В. Эффективность применения лейкоцитарного интерферона с неинактивироватшым индуктором при вирусных болезнях свиней. //Онтогенез.профилактика и лечение болезней с.-х. животных: Сб.науч.тр./ Ив.СХИ. - М.,1993,- С. 87-90.

10.Бурдейный В.В.,Даниленко В.Ф.,Бухтиарова Т.А. Изамбен -новый препарат при острых желудочно-кишечных заболеваниях телят и поросят-сосунов //Новые фармакологические средства в ветеринарии: Тез.докл. к 5-й Межгос. межвуз. науч.-практ. конф.-СП6.Д993.-С.8-9.

11.Бурдейный В.В..Иванов О.В.,Монова Н.Г. и др. Интерферон при острых желудочно-кишечных заболеваниях поросят-сосунов //Актуальные проблемы науки в с.-х. производстве: Тез. докл. зональной науч. - практ. конф,- Иваново, 1993,- С.210.

12.Монова Н.Г.,Иванов О.В.,Бурдейный В.В. Сравнительная эффективность различных способов лечения собак при чуме плотоядных//Там же,- С. 210.

13.Бурдейная Р.В.,Бурдейный В.В. Влияние антибиотиков на качество мяса//Возрастная морфофизиология и профилактика болезней животных в сельхоз.предприятиях различного типа: Сб.науч.тр. / Ив. СХИ.-М.,1994.-С. 141-144.

14.Бурдейный В.В., Даниленко В.Ф., БухтиароваТ.А. Эффективность применения изамбена и дейтифорина при острых желудочно-кишечных болезнях поросят-сосунов //Там же.-С. 63-67.

15.Бурдейный В.В..Денисов А.Л.,Мамциева Г.А. Экспериментальное обоснование возможности применения интерферона при вирусных болезнях //Ученые аграрники - с.-х. производству: Тез. докл. науч.практ.конф,- Кострома,1994,- С.40-41.

16.Бурдейный В.В. Дейтифорин и изамбен при инфекционных заболеваниях свиней и птицы // Матер.докл.межвуз.науч.метод.конф.-Ярославль, 1995,- ч. II,- С. 45-48.

17.Бурдейный В.В. Особенности проявления острых респираторных заболеваний телят в межхозяйственных предприятиях //Сб.науч.тр./Костромская ГСХА.-Кострома, 1995.-С.58-61.

18.Бурдейный В.В. Острые желудочно-кишечные заболевания поросят - эпизоотология, профилактика и меры борьбы //Вопросы селекции и технологии производства продуктов животноводства,охотоведения и продовольствия: Тез. докл. регион, межвуз. науч. конф. - Киров,1995,-вып.1,- С. 130-131.

19.Бурдейный В.В. Применение миксокина при пневмоэнтеритах телят и поросят //Актуальные проблемы науки в сельхоз.нроизв.: Тез.докл.науч,- -практ.конф,- Иваново, 1995.-С. 218.

20.Бурдейный В.В. Результаты применения изамбена и дейтифо-рина в свиноводческих хозяйствах с различной эпизоотической ситуацией //Новые фармакологические средства в ветеринарии: Матер. 7-й Межгос.межвуз.науч.-практ.конф.- СПб., 1995,- С.8-9

21.Бурдейный В.В.,Груздев К.Н.,Марченко В.И..Денисов Л.А. Применение интерферонов при гастроэнтеритах поросят-сосунов //Ветеринария, 1995,- N И .- С. 22-25.

22.Бурдейный В.В.,Груздев К.Н.,Марченко В.И.,Денисов Л.А. Свиной лейкоцитарный интерферон с неинактивированным индуктором при заболеваниях поросят, протекающих с диарейным синдромом //Ученые аграрники с.-х. производству: Матер, науч. практ. конф.-Кострома,1995.-С.76-79.

23.Бурдейный В.В., Груздев К.Н., Марченко В.И., Денисов Л.А. Свиной лейкоцитарный интерферон - совершенствование технологии изготовления и его применение в ветеринарной практике //Актуальные проблемы вет. сан. контроля с.-х. продукции: Тез. докл. Межгос. науч. -практ. конф.- М., 1995.- С. 78.

24.Бурдейный В.В..Парамонова Н.Ю.,Бурдейная Р.В. Иммунный статус коров костромской породы //Актуальные проблемы вет. сан. контроля с.-х. продукции: Тез. докл. Межгос. науч.- практ. конф.-М., 1995.-С .79-80.

25.Бурдейный В.В.,Парамонова Н.Ю.,Бурдейная Р.В. и др. Болезни новорожденных телят - клиника,эпизоотология и некоторые показатели естественной резистентности //Ученые аграрники - с.х. производству: Матер.науч.-практ.конф.- Кострома, 1995,- С. 44-46.

26.Бурдейный В.В. Результаты и перспективы применения интерферонов в ветеринарной практике //Сб.творческих работ.- Кострома, 1996,- С. 44- 46.

27.Бурдейный В.В. Эффективность различных видов интерферона при инфекционном гепатите плотоядных в условиях эксперимента

//Новые фармакологические средства в ветеринарии: Матер. 8-й Межгос.межвуз.науч,- практ.конф,- СП6..1996.-С. 70-71.

28.Бурдейный В.В.,Парамонова Н.Ю.,Бурдейная Р.В. Влияние некоторых иммуностимуляторов на иммунный статус стельных коров и резистентность молодняка // Там же,- С. 68-69.

29.Бурдейный В.В.,Парамонова Н.Ю.,Бурдейная Р.В. Показатели иммунного статуса коров костромской породы в зависимости от сезона //Актуальные проблемы науки в АПК: Матер.науч.-практ. конф.- Кострома, 1996.-T.I.-C. 3-4.

30.Бурдейпый В.В.,Парамонова Н.Ю.,Бурдейная Р.В. Показатели клеточного и гуморального иммунитета у коров костромской породы различного возраста // Там же.-С.7-8.

31.Бурдейный В.В.,Шигарева А.Г.,Бурдейная JI.B. Повышение резистентности организма новорожденных телят //Там же,- С. 5-6.

32.Бурдейный В.В. Современные концепции и перспективы применения интерферонов в ветеринарии //Актуальные проблемы науки в АПК: Тез. докл. межвуз. науч.- практ. конф. - Кострома, 1997. - С.11

33.Бурдейный В.В.,Бурдейная Р.В. Антибактериальная активность препаратов интерферона // Там же,- С. 10

34.Бурдейный В.В., Бурдейная Р.В., Кузьмин A.A. Влияние препарата ВБ-1 на антитслообразовапие при вакцинации кур против нью-каслской болезни //Актуальные проблемы науки в е.- х. производстве: Тез.докл. науч.- практ. конф.- Иваново, 1997.-С.157

35.Бурдейный В.В., Монова Н.Г., Иванов О.В., Федорова H.A. Некоторые вопросы эпизоотологии при вирусных болезнях собак //Морфофизиология, профилактика и лечение животных и рыб: Сб.науч. тр. / ИвГСХА.-М.,1997.- С. 110-113.