Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.01) на тему:Разработка и применение препаратов интерферона и биологически активных добавок в ветеринарии

На правах рукописи

БОЯРИНЦЕВ ЛЕОНИД ЕВГЕНЬЕВИЧ

РАЗРАБОТКА И ПРИМЕНЕНИЕ ПРЕПАРАТОВ ИНТЕРФЕРОНА И БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ДОБАВОК В ВЕТЕРИНАРИИ

16.00.01. -диагностика болезней и терапия животных 16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Воронеж -2003

-А

На правах рукописи

БОЯРИНЦЕВ ЛЕОНИД ЕВГЕНЬЕВИЧ

РАЗРАБОТКА И ПРИМЕНЕНИЕ ПРЕПАРАТОВ ИНТЕРФЕРОНА И БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ДОБАВОК В ВЕТЕРИНАРИИ

16.00.01.-диагностика болезней и терапия животных 16.00.03-ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологней и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Воронеж-2003

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте патологии, фармакологии и терапии РАСХН, Всероссийском государственном научно-исследовательском институте контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов МСХ РФ, НПФ «Агробиоцентр», НПФ «Биофид»

Научные консультанты:

доктор ветеринарных наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ, член-корреспондент РАСХН

доктор биологических наук, профессор

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук

Шахов Алексей Гаврилович Груздев Константин Николаевич

Паршин Павел Андреевич

доктор ветеринарных наук, профессор,

заслуженный деятель науки РФ

Артемов Борис Тихонович

доктор медицинских наук, профессор,

заслуженный деятель науки РФ Ведущая организация:

Земсков Андрей Михайлович

Курская государственная сельскохозяйственная академия им. И.И. Иванова

Защита состоится «

2003 года в «-^''^Гчасов на заседании диссертационного совета Д 006.004.01 при Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте патологии, фармакологии и терапии (394087, г. Воронеж, ул. Ломоносова, 114 6). Тел. (0732) 53-65-94. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНИВЙПФиТ.

Автореферат разослан

2003 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Т.Н. Ермакова

РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ? БИБЛИОТЕКА | С.Пьт*рбург/> '

09 "" '

\

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Постановлением координационного совещания Юбилейной Международной конференции «Теоретические и практические аспекты возникновения и развития болезней животных и защита их здоровья в современных условиях», посвященной 30-летию создания Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института патологии, фармакологии и терапии (3-4 октября 2000 г) были определены следующие основные направления исследований болезней молодняка сельскохозяйственных животных:

- разработка комплексной диагностики иммунодефипитных состояний молодняка всех видов животных и эффективных лечебно-профилактических и им-мунокоррегирующих препаратов для предупреждения патологии органов пищеварения и дыхания и терапии больных животных;

- создание экологически безопасной системы ветеринарной защиты молодняка от нарушений обмена веществ и возникающих на этой основе желудочно-кишечных, респираторных и факторных инфекционных болезней с применением высокоэффективных лечебно-профилактических и иммуномодулирующих препаратов.

Инфекционные заболевания животных вирусной и бактериальной этиологии, болезни полиэтиологической и незаразной природы, приводят к значительным потерям вследствие падежа и снижения продуктивности. Важным предрасполагающим фактором, способствующим возникновению инфекционных болезней, является снижение устойчивости животных к возбудителям, возникающее на фоне иммунодефицитов различной этиологии.

Анализ причин заболеваемости животных в последние годы показывает, что на фоне спорадических случаев, небольших вспышек или эпизоогай отдельных классических инфекций и появления новых малоизученных болезней основной ущерб животноводству наносят факторные инфекции, клинически проявляющиеся у маточного поголовья нарушениями воспроизводительной функции, а у молодняка диарейным и респираторными синдромами (А.Г. Шахов, 1997,1999).

Эти проблемы остро стоят в Северо-Восточном регионе Нечерноземной зоны РФ, к которому относятся Кировская, Костромская, Нижегородская, Свердловская и Пермская области, республики Коми, Марий Эл, Мордовия, Чувашия и Удмуртия. Широкое распространение в регионе получили вирусные и смешанные вирусно-бактериальные желудочно-кишечные и респираторные инфекции молодняка, который, как правило, рождается гипотрофичным. Заболеваемость телят раннего возраста достигает более 80 %, а падеж - 40-50 % (П.Н. Сисягин, P.E. Ким, 1998).

Широкое бессистемное применение антибиотиков, нитрофуранов, сульфаниламидных препаратов (без учета чувствительности к ним микроорганизмов, циркулирующих в хозяйствах) не всегда дает положительный результат, но, как правило, приводит к угнетению иммунного ответа у животных.

В связи с вышеизложенным актуальным становится применение препаратов, обладающих свойствами иммуномодуляторов, проявляющих противовирусное и антибактериальное действие непосредственно или опосредованно за счет стимуляции иммунной системы, а также средств, повышающих иммуногенность существующих вакцин.

В настоящее время большие надежды возлагают на препараты интерферонов и интерфероногенов, являющихся неспецифическими средствами защиты организма от болезней различной этиологии. Для интерферонов характерно антивирусное, иммуностимулирующее, антибактериальное, антипролиферативное действие. Интерферонизация может быть пассивной, когда организм насыщается экзогенным, полученным в другой системе, препаратом интерферона, и активной, когда при помощи различных стимуляторов (индукторов) организм вырабатывает собственный эндогенный гомологичный интерферон. Применение интерфероногенов является более перспективным направлением (К.Н. Груздев, 1989).

Существование в организме животных высококомпетентной системы интерферона, сформировавшейся в процессе эволюции, и многообразие обнаруженных и изученных к настоящему времени физиологических функций интерферона несомненно указывает на их контрольно-регуляторную роль в сохранении гомеостаза. По значимости система интерферона приближается к системе иммунитета, а по универсальности ее превосходит (В.М. Жданов, Ф.И. Ершов, 1983).

Использование интерферонов в комплексе лечебно-профилактических мероприятий не следует противопоставлять применению вакцин, специфических сывороток, лекарственных средств. В настоящее время необходимо дальнейшее изучение показаний к применению интерферонов, разработка методов и схем их применения, в том числе в комплексе с другими биологически активными препаратами и кормовыми добавками.

Одной из причин возникновения факторных инфекций является также необеспеченность высокопродуктивных животных полноценными кормами и несоответствие их качества физиологическим потребностям животных, являющиеся следствием антропогенных аномалий микроэлементного состава почв, воды, кормов (В.Т. Самохин, 1999, 2000; А.Г. Шахов, 1999; и др.).

Учитывая вышеизложенное, для профилактики массовых болезней животных основные усилия целесообразно направить на стабилизацию и оптимизацию кормовой базы животноводства, введение в рацион премиксов, содержащих биологически активные вещества и препаратов, повышающих резистентность организма и обладающих лечебно-профилактическими свойствами.

Решение указанных проблем возможно путем применения иммуностимуляторов (препаратов интерферона и интерфероногенов) в комбинации с другими биологически активными препаратами. Учитывая их перспективность нами в соответствии с требованиями к лекарственным средствам ветеринарного назначения проведены комплексные исследования по изучению фармакологических,

токсических и биологических свойств лигавирина, иммуноферона, биостима, промивита и фармавита и внедрение их в ветеринарную практику.

Работа выполнена в соответствии с государственными заданиями и была включена в следующие темы:

- Hill ВГНКИ ветпрепаратов «Изучить активность индукторов интерферона на животных» № гос. регистрации 01840063396 за 1981-1985 гг.;

- НТП «Интерферон» раздел 02.17.Д. ВГНКИ ветпрепаратов за 1986-1990 гг., задание 02.13. Д. Всесоюзной межведомственной программы «Интерферон»;

- Общесоюзной научно-технической программы «Молодняк»: «Разработать и внедрить комплексные экологически чистые системы получения и выращивания высокорезистентного молодняка с.-х. животных», раздел 03.26.М ВНИ-ВИПФиТ за 1990-1995 гг.;

- Программа фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению Агропромышленного комплекса РФ на 1996-2000 гг., РАСХН, по разделу «Ветеринарная медицина» 04. «Разработать общую теорию патологии сельскохозяйственных, промысловых и диких млекопитающих, птиц, рыб, пчел и на ее основе создать экологически чистую систему их ветеринарной защиты».

Цель исследований. Разработать и изучить препараты интерферонов (лига-вирин и иммуноферон), биологически активную добавку биостим-К и витамин-но-минеральные добавки промивит и фармавит и внедрить их в ветеринарную практику и животноводство.

В соответствии с поставленной целью решались следующие задачи:

- разработать технологию получения лигавирина, иммуноферона, биостима, промивита и фармавита;

- изучить токсические свойства препаратов;

- изучить интерфероногенные, противовирусные и иммуностимулирующие свойства препаратов интерферона;

- разработать показания к применению препаратов;

- разработать схему комплексного применения интерферонов с биологически активными добавками

Научная новизна. Впервые теоретически и экспериментально обоснована возможность применения биологически активных препаратов с разным механизмом действия для повышения естественной резистентности и иммунобиологической реактивности организма, сохранности и продуктивности животных, в том числе интерферонов (лигавирин, иммуноферон) для профилактики инфекционной и незаразной патологии и лечения больных животных; биостима для профилактики нарушений обмена веществ, повышения естественной резистентности и продуктивности животных и птицы, профилактики желудочно-кишечных заболеваний и лечения больных животных; промивита и фармавита -для нормализации обменных процессов, профилактики и лечения гипо- и авитаминозов, гипомикроэлементозов. Изучен механизм действия препаратов.

Установлено, что лнгавирин и иммуноферон обладают противовирусными и иммуномодулирующими свойствами; препараты биостим, промивит и фармавит нормализуют обменные процессы у животных.

Практическая значимость работы. На основании результатов исследований разработаны и утверждены нормативная документация, регламентирующая технологический процесс производства препаратов, показатели качества и методы их контроля, наставления по применению в ветеринарии, которые одобрены Ветфармбиосоветом и утверждены Департаментом ветеринарии МСХ РФ, и технические условия, согласованные с Всероссийским государственным научно-исследовательским институтом контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов и Департаментом ветеринарии МСХ РФ:

1. Лигавирин ТУ 9337-001-32886413-97 и «Наставление по применению препарата лигавирин в ветеринарии», одобрено Ветфармбиосоветом и утверждено Департаментом ветеринарии МСХ РФ 02..06.1997;

2. Иммуноферон ТУ 9337-002-32886413-98 и «Наставление по применению препарата иммуноферон в ветеринарии», одобрено Ветфармбиосоветом и утверждено Департаментом ветеринарии МСХ РФ 15.05.1998;

3. Биостим-К ТУ 9337-002-52333343-02 и «Наставление по применению био-стима-К в ветеринарии», одобрено Ветфармбиосоветом и утверждено Департаментом ветеринарии МСХ РФ 19.03.2002;

4. Промивит ТУ 9337-001-52333343-01 и «Наставление по применению проми-вига в ветеринарию), одобрено Ветфармбиосоветом и утверждено Департаментом ветеринарии МСХ РФ 25.12.2001;

5. Фармавит ТУ 9355-001-10920471-01 и «Наставление по применению препарата фармавит для профилактики и лечения гиповитаминозов, нарушений обмена веществ и повышения продуктивности животных и птицы», одобрено Ветфармбиосоветом и утверждено Департаментом ветеринарии МСХ РФ 05.07.2001.

Препарат фармавит, не имеющий аналогов, удостоен золотой и платиновой медалей Госстандарта РФ.

По результатам лабораторных исследований, широкого производственного испытания и экспертной оценки препаратов и документации Ветфармбиосоветом и ВГНКИ ветпрепаратов, а также обобщения данных литературы, разработаны:

1. «Методические рекомендации по определению интерферонсинтезирующей активности лейкоцитов сельскохозяйственных животных». - ВГНКИ ветпрепаратов. - ВАСХНИЛ. -1986;

2. «Методические рекомендации по испытанию индукторов интерферона на сельскохозяйственных животных» - ВГНКИ ветпрепаратов. - ВАСХНИЛ. -1986;

3. Методы тестирования естественной неспецифической резистентности животных /Методические рекомендации/ - НПФ «Агробиоцентр», Комитет сельского хозяйства Кировской области. -1997;

4. Определение иммунобиологического статуса сельскохозяйственных животных /Методические рекомендации/ - НПФ «Агробиоцентр», Комитет сельского хозяйства Кировской области. -1997;

5 «Методические рекомендации по проведению научно-хозяйственных опытов по применению комплексных кормовых добавок в кормлении молодняка свиней». - НИИСХ Северо-Востока. - РАСХН. - 1997;

6. «Методические рекомендации по профилактике и лечению болезней минеральной и витаминной недостаточности у свиней». - НИИСХ Северо-Востока -РАСХН. -1997;

7. «Методы тестирования иммунологической резистентности сельскохозяйственных животных» /Методические рекомендации/. - ВНИВИПФиТ. - РАСХН. -1999;

8. «Применение новых биологически активных препаратов в ветеринарии и животноводстве» /Рекомендации/ - ВНИВИПФиТ. - РАСХН. - 1999;

9. «Витаминная недостаточность пушных зверей, ее профилактика и лечение» /Рекомендации/ ВНИВИПФиТ. - РАСХН, ВГНКИ ветпрепаратов. - 2000;

10. «Лечение и профилактика инфекционных болезней собак» /Рекомендации/ -ВНИВИПФиТ. - РАСХН. - 2001;

11. «Физиология, биохимия и иммунология млекопитающих (пушных зверей)» (Допущено МСХ РФ в качестве учебного пособия для студентов высших учебных заведений по зооветеринарным специальностям). - Киров. - 2002;

12. «Изучение физиологических показателей крови животных с использованием современных биохимических и иммунобиологических тестов» (Допущено МСХ РФ в качестве учебного пособия для студентов высших учебных заведений по зооветеринарным специальностям). - Киров. - 2003;

13. «Физиологическая потребность клеточных пушных зверей в витаминах и применение витаминных препаратов в звероводстве» (Допущено МСХ РФ в качестве учебного пособия для студентов высших учебных заведений по зооветеринарным специальностям). - Киров. - 2003.

Указанные методические рекомендации и учебные пособия позволяют объективно оценивать биологические и токсические свойства препаратов, а также совершенствовать все этапы испытания и внедрения в практику ветеринарной медицины и животноводства высокоэффективных и безопасных средств, которые необходимы для исследователей, проводящих скрининг новых биологически активных веществ.

Материалы диссертационной работы внедрены в учебный процесс при чтении курса «Физиология сельскохозяйственных животных» на биологическом факультете Вятской государственной сельскохозяйственной академии и могут быть использованы в других вузах при подготовке специалистов биологического, ветеринарного и зоотехнического профиля. Основные положения, выносимые на защиту:

- о биологической активности препаратов интерферона (лигавирин, иммуно-ферон), биостима, промивита и фармавита;

- профилактическая и лечебная эффективность лигавирина, иммуноферона, биостима, промивита и фармавита при инфекционных и незаразных болезнях животных;

- о комплексном применении препаратов интерферона с биологически активными добавками в ветеринарии.

Апробация результатов исследований. Материалы исследований доложены и одобрены на: заседании секции «Эпизоотология и профилактика инфекционных болезней животных» отделения ветеринарии ВАСХНИЛ, Москва, 1985; Региональном симпозиуме социалистических стран по интерферону, Юрмала, 1988; Республиканском семинаре «Использование интерферонов в ветеринарии» Киев, 1989; I Всесоюзной научной конференции «Биологически активные вещества в звероводстве, кролиководстве и оленеводстве» Москва, 1989; Научно-производственной конференции «Внедрение достижений науки, передового опыта на уровень современных требований» Киров, 1990; Всесоюзной научно-технической конференции «Современные проблемы иммунологии, биотехнологии, генной и клеточной инженерии в ветеринарной медицине» Н. Новгород, 1990; Всесоюзной конференции «Физиология продуктивности животных - решение продовольственной программы СССР» Таллин, 1990; Научно-производственной конференции «Проблемы интенсификации производства молока» Минск, 1991; Международном симпозиуме «Физиологические основы повышения продуктивности хищных пушных зверей» Петрозаводск, 1991; Региональной межвузовской научной конференции, Киров, 1995; I Всероссийском симпозиуме по машинному доению сельскохозяйственных животных. Оренбург, 1995; Всероссийской конференции, посвященной 100-летию Вятской сельскохозяйственной опытной станции /НИИСХ Северо-Востока/, Киров, 1995; Международного координационного совещания "Экологические проблемы патологии, фармакологии и терапии животных" Воронеж, 1997; Всесоюзной научной конференции, посвященной 75-летию ВНИИОЗ, Киров, 1997; Международной межвузовской научно-практической конференции "Региональные проблемы прикладной экологии" Белгород, 1998; Научно-практической конференции "Эффективность развития свиноводства в современных условиях рыночной экономики" Москва, 1998; II Международном симпозиуме «Физиологические основы повышения продуктивности хищных пушных зверей» Петрозаводск, 1998; Научно-производственной конференции посвященной 190-летию высшего ветеринарного образования в России и 100-летию ветеринарной науки Санкт-Петербурга. С.-Петербург, 1998; Научно-производственной конференции «Теория и практика использования БАВ в животноводстве» Киров, 1998; Международной научно-практической конференции «Проблемы патологии, санитарии и бесплодия в животноводстве», посвященной 100-летию со дня рождения академиков АН Белорусии X. С. Горегляда и М. К. Юсковца. Минск, 1998; Всероссийской конференции с «Пробиотики и пробиотические продукты в профилактике и лечении наиболее распространенных заболеваний человека» Москва, 1999; Международной научно-производственной конференции, посвящен-

ной 100-летию со дня рождения член-корр.ВАСХНИЛ В.Т.Котова «Экологические аспекты эпизоотологии и патологии животных» Воронеж, 1999; Международной научной конференции, посвященной 70-летию образования зооинженер-ного факультета. Казань, 1999; Юбилейной конференции, посвященной 70-летию зооинженерного факультета Вятской государственной сельскохозяйственной академии, Киров, 2000; Международной конференции «Теоретические и практические аспекты возникновения и развития болезней животных и защита их здоровья в современных условиях», посвященной 30-летию ВНИВИПФиТ РАСХН, Воронеж, 2000; I Международной конференции «Современные вопросы ветеринарной медицины и биологии», Уфа, 2000; Заседании секции «Незаразные болезни животных» отделения ветеринарной медицины РАСХН, Воронеж, 1999; Заседании секции «Патология, фармакология и терапия» отделения ветеринарной медицины РАСХН, Воронеж, 2000; Международной научно-производственной конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии, Казань, 2001; Международной конференции «Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях», Воронеж, 2002.

Публикация результатов исследований. Основные результаты исследований опубликованы в 54 научных работах, в т.ч. в 10 методических рекомендаций, 2 учебных пособиях, 1 коллективной монографии (в соавторстве).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 300 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материала и методов исследований, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений, списка использованной литературы, включающего 409 источников, из них 270 отечественных и 139 зарубежных авторов, приложений. Работа иллюстрирована 88 таблицами, 9 рисунками.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте патологии, фармакологии и терапии РАСХН; Всероссийском государственном научно-исследовательском институте контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов МСХ РФ; НПФ «Агробиоцентр» и «Биофид».

В проведении ряда комплексных исследований принимали участие: В.В. Клименко, А.Г. Шахов, А.И. Ануфриев, К.Н. Груздев, В.И. Дорожкин, С.Н. Козлов; В. Г. Хапугин, В.И. Шардаков, которым автор выражает искреннюю признательность за оказанную помощь и плодотворное сотрудничество.

Лабораторные образцы лигавирина изготовлены в Институте биохимии и физиологии микроорганизмов РАН (г. Пущино); иммуноферона в НПФ «Агробиоцентр», биостима-К и промивита в НПФ «Биофид»; фармавита в НПП «Фармакс» (г. Киров).

Экспериментальная часть работы выполнена на 856 белых мышах, 190 мышах линии С57ВЬ/6, 1590 белых крысах, 290 морских свинках, 50 кроликах, 40

курах, 430 куриных эмбрионах, 280 цыплятах, 36 телятах, 250 поросятах, 20 коровах, 40 свиноматках, 30 норках. Производственные испытания препаратов проведены на 515 телятах, 1011 поросятах, 25630 цыплятах, 150 норках. Эффективность препаратов оценивали по их влиянию на сохранность, продуктивность и клинико-физиологические показатели животных.

При выполнении работы проводили токсикологические, физико-химические, вирусологические, гематологические, биохимические, бактериологические, иммунологические, морфологические и гистохимические исследования с применением современных методов.

Острую и хроническую токсичность, аллергенную, эмбриотоксическую, тератогенную и мутагенную активность препаратов оценивали в соответствии с «Методическими указаниями по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве», утвержденными ГУВ СССР (1991).

Исследование острой токсичности препаратов проводили на белых мышах, белых крысах, а хронической - на белых крысах самцах популяции «Вистар». Влияние их на функциональное состояние ЦНС оценивали по продолжительности действия гексенала (100 мг/кг), барбитала натрия (200 мг/кг) и хлоралгидрата (300 мг/кг), а противосудорожное влияние - при внутрибрюшинном введении коразола (100 мг/кг). При изучении противовоспалительных свойств в качестве флогогенного агента использовали 2%раствор формалина (0,05 мл).

Кумулятивные свойства препаратов определяли на белых крысах. Влияние их на функцию печени и почек крыс изучали с помощью биохимических тестов.

Исследование аллергизирующего действия препаратов проводили методом эпикутанных аппликаций на морских свинках.

Определение остаточных количеств лигавирина в органах и тканях животных, а также в молоке и моче проводили на ИК-спектрофотометре по стандартной методике.

Изучение эмбриотоксической и тератогенной активности лигавирина проведены на 262 белых крысах-самцах (190 опытных и 72 контрольных) при ежедневной даче их на протяжении всей беременности. На 21 день беременности крыс декапетировали. В яичниках подсчитывали количество желтых тел, в матке - мест имплантации, резорбций, количество живых и мертвых плодов. Для определения влияния лигавирина на животных в зависимости от сроков беременности учитывали пред- и постимплантационную гибель плодов.

Степень мутагенной активности препаратов исследовали на индикаторных штаммах сальмонелл ТА 1535, ТА 1537, ТА 1538, ТА 98, ТА 100, предложенных Эймсом (1973), а также учитывали ахроматические повреждения хромосом - пробелы (гепы), нарушения целостности одной или обеих хроматид, не сопровождающиеся смещением фрагментов и структурные аберрации - фрагменты и обмены; доминантные летальные мутации (ДЛМ) в зародышевых клетках мышей линии DBA C57BL/6. Исследование проводили на протяжении 5 недель, т.е. в пре- и постмейотические стадии сперматогенеза.

Гистологические препараты органов и тканей животных готовили по методике, описанной в руководстве В.М.Меркурьева (1979).

Ветеринарно-санитарную оценку мяса животных, получавших препараты, проводили в соответствии с «Правилами ветеринарно-санитарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санигарной экспертизы мясных продуктов» (1985).

Механизм фармакологического действия препаратов изучали согласно «Методическим рекомендациям по изучению новых препаратов для коррекции метаболизма в организме животных», утвержденных ДВ РФ (1998).

В экспериментах использовали первично трипсинизированные КК фиброб-ластов эмбрионов кур (ФЭК), почек эмбриона свиньи (ПЭС), почек поросенка (1111), почек эмбриона коровы (ПЭК), почек теленка (ПТ), КК мышиных фиб-робластов линии Ь-929, диплоидная КК фибробластов эмбриона человека (ДКЧ М-19), перевиваемая линия клеток ЛЭК (легких эмбриона коровы), перевиваемая линия клеток МДВК (почек теленка), КК лейкоцитов свиньи и коровы.

Приготовление КК проводили согласно общепринятым методикам (Осидзе Д.Ф. и др., 1975; Голубев Д.Б. и др., 1976; Дьяконов Л.П. и др., 1980).

Диплоидные и перевиваемые КК получали во Всероссийском научно-исследовательском институте экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко (ВИЭВ), Институте вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН, Институте полиомиелита и вирусных энцефалитов РАМН.

Для культивирования диплоидных и перевиваемых КК использовали полистироловые 96-луночные панели, на дне которых в процессе инкубирования при 37°С в присутствии 5% углекислого газа формируется хорошо видимый монослой.

КК лейкоцитов свиньи и коровы готовили по методике В.Д. Соловьева и Т.А. Бектемирова (1966).

В качестве классического индуктора интерферона (ИФН) использовали вирус болезни Ньюкасла (ВБН) штамм «Н», а в качестве тест-вирусов при титровании ИФН - вирус везикулярного стоматита (ВВС) штамм «Индиана» и вирус болезни Ауески (ВБА) штамм «ВГНКИ».

Для определения антивирусной активности иммуноферона использовали вирусы болезни Ауески (ВБА) «ВГНКИ», «Арский»; трасмиссивного гастроэнтерита свиней (ТГС), энтеровирусной болезни свиней, миксомы кроликов штамм «В-82» и фибромы Шоупа, алеутской болезни норок (АБН) штамм «П-1». Определяли инфекционный титр вирусов по Риду и Менчу (1937), титр ВБН штамм «Н» и ВВС штамм «Индиана» - по гибели эмбрионов (ЛД/50 мл), а ВБА - по гибели белых мышей (ЛД/50). Вирусы получали в ВГНКИ ветпрепаратов, Институте вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН.

Антибактериальную активность иммуноферона изучали на различных штаммах стафилококков, сальмонелл, эшерихий и псевдомонад.

Уровень ИФН в сыворотках крови животных определяли титрованием ИФН-содержащих образцов в КК, результат которого учитывали при полной дегене-

рации клеток в контрольных пробирках (необработанных ИФН). Титром ИФН считали концентрацию, обратную его наибольшему разведению, вызывающему задержку ЦПД в 50% КК (ИЕ/50 мл).

Термостабильность, устойчивость к действию протеолитического фермента трипсина и кислой среды противовирусного вещества сыворотки крови животных, которое образуется после введения лигавирина (ИФН), изучали по Локкар-ту (1973) и рекомендациям комиссий ВОЗ (1978, 1980).

Получение лейкоцитарного интерферона животных проводили согласно «Методическим рекомендациям по определению ингерферонсинтезирующей способности лейкоцитов с.-х. животных» ВАСХНИЛ (1986).

Для определения типов циркулирующих ИФН а- (лейкоцитарный) и у- (иммунный) в цельной крови использовали перевиваемые КК. Количественное определение их в сыворотке и плазме крови животных проводили твердофазным иммуноферментным методом (ИФА) с применением пероксидазы хрена в качестве индикаторного фермента.

Определение антивирусной активности иммуноферона (ИФ) in vitro в КК проводили методом титрования вирусов в присутствии ИФН по В.Д. Соловьеву и Т.А. Бектемирову (1970).

Бактериостатическое действие иммуноферона оценивали по задержке роста микроорганизмов в жидкой питательной среде (МПБ), который оценивали в единицах оптической плотности бактериальной суспензии на ФЭКе. Бактерицидное действие ИФ определяли на твердой питательной среде (МПА) в отношении штаммов стафилококков. Количество выросших колоний (КОЕ) использовали как показатель жизнеспособности клеток.

Противовирусное действие лигавирина изучали на белых мышах на модели болезни Ауески. Для выбора инфицирующей дозы, обеспечивающей гибель 8090% животных, вирус БА штамм «Арский» титровали на мышах при интраце-ребральном его введении. Исследования проводили в соответствии с «Методическими рекомендациями по испытанию индукторов интерферона на с.-х. животных» ВАСХНИЛ (1986).

Противовирусную активность лигавирина в отношении вируса миксомы и фибромы Шоупа изучали на кроликах по методике определения иммунизирующей дозы вакцинных штаммов (ВГНКИ ветпрепаратов).

При получении препарата лигавирин были использованы методы биотехнологии: энзиматическая трансформация, фракционирование, концентрирование, ионообменная и афинная хроматография.

Очистку иммуноферона проводили методом аффинной хроматографии на сефарозе и гельфильтрацией на биогеле Р-100.

Исследования сывороток крови крыс (при изучении влияния препаратов на функцию печени и почек) на содержание щелочной фосфатазы, у-глютамина, глюкозы, белка, мочевины, креатинина, хлоридов проводили на биохимическом анализаторе (ФП-901) с диагностическим набором «Биолотест».

Для изучения влияния лигавирина на антителопродуцирующую функцию В-лимфоцитов селезенки мышей линии С57ВЬ/6 и титр гемагтлютининов иммунизацию их проводили ЭБ в/брюшинно в оптимальных и субоптимальных дозах. Число АОК в селезенке определяли визуально по зонам гемолиза в агарозе на 5-й, а титр гемагтлютининов - на 7 и 14 день после иммунизации.

Для определения развития реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) мышей линии СВА и С57В1У6 иммунизировали внутривенно в дозе 2-105ЭБ. Разрешающую дозу ЭБ (1-Ю8 ЭБ в 0,04 мл физраствора) вводили в подушечку задней лапки на 5 день после иммунизации. Местную воспалительную реакцию оценивали через 24 ч.

Для развития реакции «трансплантант против хозяина» (РТПХ) мышам линии (СВАхС57В1_) Р1 в подушечку правой задней лапы вводили 2-Ю6 клеток лимфоузлов родительского генотипа (СВА). В левую лапу вводили такое же количество клеток сингенных лимфоузлов. На 9 день животных убивали и определяли число клеток в 5 мл гомогената правого (опытного) и левого (контрольного) лимфоузлов.

При исследовании влияния лигавирина на фагоцитарную активность перито-неальных макрофагов, миграцию которых в брюшную полость мышей линии С57ВЬ/6 вызывали 4% раствором гидролизованного крахмала, в качестве антигена использовали ЭБ. Определяли фагоцитарный индекс (ФИ) и индекс завершенности фагоцитоза (ИЗФ).

Исследование клеточных и гуморальных факторов иммунитета проводили в соответствии с рекомендациями «Методы тестирования иммунологической резистентности с.-х. животных» РАСХН (1999).

Профилактическую и лечебную активность препаратов оценивали по их способности восстанавливать у животных и птиц показатели гемопоэза, обмена веществ, неспецифическую резистентность. Морфологические и биохимические исследования проводили общепринятыми методами, а также с помощью наборов (Лахема) и прибора ААБ-З.

Эффективность применения препаратов в хозяйствах Кировской, Пермской, Свердловской, Тюменской областей, республиках Удмуртии и Коми определяли по снижению заболеваемости и падежа, повышению сохранности животных, их продуктивности, воспроизводительных показателей и качества животноводческой продукции.

Полученный в опытах цифровой материал подвергнут математической обработке методом вариационной статистики по Стьюденту. Разница считалась достоверной при Р<0,05 (А.Т. Усович, П.Т. Лебедев, 1970). Для статистической обработки также использовали соответствующие программы ПВК Электроника МС 0585, ЭВМ ЕС-1022 и пакет прикладных программ 8ТАТС11АРН1С8 на ШМРС.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Разработка в изучение препарата лнгавнрин

3.1.1. Технология получения

Лигавирин включает комплекс биополимеров (модифицированные, водорастворимые, фенолпропаноидные полимеры, полисахариды, пептиды лигнина), выделенный из природного растительного сырья с использованием методов биотехнологии. Препарат получают путем экстракции слабощелочным водным раствором опилок, соломы, лузги подсолнуха, подвергнутых предварительной частичной биодеградации и модификации ксилотрофными грибами РкикЛиэ овйтеайю с последующим кислотным осаждением, промывкой и сушкой.

Лигавирин представляет собой водный раствор (рН=6,7-7,0) биологически-активного растительного концентрата (5-10%) и хлористого натрия (0,5-1%). Химический состав растительного концентрата: сахар - не более 20% ; белок -не более 20% ; остальная часть - лигнины (по Класону). В качестве АДВ препарат содержит пептиды, имеющие аминокислотный состав, мае., %: аспарагино-вая кислота -14,8-20,5; треонин - 4,3-5,3; серин - 4,8-5,3; глутаминовая кислота

- 17,4-19,1; пролин - 6,2-7,1; глицин - 5,5-10,3; аланин - 5,9-6,4; валин - 5,35,8; метионин - 0,8-1,1; изолейцин - 3,8-4,6; лейцин - 8,0-8,8; тирозин - 1,1-1,4; фенилаланин - 5,1-5,6; лизин - 2,0-2,2; гистидин - 3,0-3,3; аргинин - 3,9-4,4; полисахариды, имеющие углеводный состав, мае., %: глюкоза - 15-40; ксилоза

- 60-80; рамноза - 2-4; модифицированный водорастворимый лигнин (75-85%). В целом лигавирин содержит, мае., %: пептида - 12-21; полисахариды - 3-5; модифицированный водорастворимый лигнин - 75-85.

Препарат выпускают в 2 формах: сухая с концентрацией действующего вещества 300 мг в 1 г и жидкая - 3 мг в 1 куб. см.

3.1.2. Токсические свойства

Острую токсичность лигавирина изучали на 36 мышах-самцах (СВАхС57В Ь/6)-Р1 с массой 32-34 г. Препарат вводили однократно подкожно. Для определения ЛД/50 были использованы дозы: 400, 600, 800 и 1000 мг/кг. Животным контрольной группы вводили физраствор. Наблюдение за подопытными животными вели в течение 2-х недель. В результате проведенных исследований не установлено изменений в поведении и появление каких-либо клинических признаков у животных опытных групп, заметных отклонений в их массе тела, а также в потреблении количества корма и воды. При вскрытии декапетированных животных не отмечено видимых патоморфологических изменений.

Лигавирин оказался нетоксичным. Даже 1000 мг/кг (доза в 10000 раз, превышающая эффективную лечебно профилактическую) не вызывала гибели мышей. Поэтому ЛД/50 установить не удалось, так как более высокую дозу препарата ввести практически не возможно. Не установлено ЛД/50 и для сухой перо-ральной формы препарата при однократном применении.

Хроническая токсичность лигавирина была изучена на 3 группах по 20 белых крыс-самцов популяции «Вистар» с массой тела 240-250 г. Животным 1-й группы препарат вводили в дозе 50 мг/кг, 2-й - 100 мг/кг подкожно в течение 10 дней. Животные 3 группы служили контролем. Установлено, что многократное применение лигавирина даже в больших дозах не вызывало каких-либо изменений на месте введения препарата. Не отмечено отклонений в организме крыс и при даче препарата через рот (при введении в желудок). По сравнению с контролем достоверных изменений в динамике массы тела животных опытных групп не установлено. Анализ результатов исследования крови крыс позволяет сделать вывод о том, что многократное введение препарата в дозах, в 500 и 1000 раз превышающих лечебную, не оказало существенного влияния на гематологические показатели животных, за исключением достоверного увеличения количества лейкоцитов при использовании 100 мг/кг.

При изучении влияния лигавирина на функциональное состояние центральной нервной системы (ЦНС) мышей установлено, что его введение в дозе 10 мг/кг практически не изменило продолжительность наркоза от гексенала, бар-битал натрия и хлоралгидрата. Препарат не оказывал существенного влияния на мышечный тонус и координацию движений животных.

При исследовании противовоспалительных свойств лигавирина препарат в дозе 0,5 мг/кг вводили белым мышам внутрибрюшинно. Лигавирин применяли за 30 мин. до и одновременно с введением формалина в подушечку задней правой лапки мыши. Установлено, что введение препарата несколько уменьшало отек, вызываемый формалином, однако разница с контролем была незначительной.

Результаты исследований влияния лигавирина на функцию печени и почек белых мышей показали, что ежедневное подкожное введение им препарата не вызывало существенных изменений в содержании в сыворотке крови креатини-на, хлоридов, белка, глюкозы, у-ГТ и ЩФ у животных.

При изучении хронической токсичности на крысах материал для патоморфо-логических исследований отбирали дважды: сразу после окончания введения лигавирина (1 серия) и спустя 3 недели (2 серия). Макроскопическим осмотром установлено, что через 3 недели после прекращения применения лигавирина (2 серия) местная реакция на препарат у животных отсутствовала.

При гистологическом исследовании легких, сердца почек и печени животных, убитых через 3 недели после прекращения введения лигавирина (2 серия), не установлено нарушений в системе кровообращения и наличия дистрофических, некробиотических и воспалительных реакций.

Местное действие лигавирина изучено на кроликах, при этом не выявлено признаков дерматита, отека, эритемы, трещин, корок, пигментации на месте введения препарата. Лигавирин не оказывал местного раздражающего действия в течение 7 суток (срок наблюдений).

При исследовании аллергизирующего действия лигавирина через 12-24 ч на месте аппликации только у одной из 10 морских свинок наблюдали аллергическую реакцию в виде слабой эритемы.

Возможность индукции аллергических реакций немедленного типа, сопряженных с появлением гомоцитотропных антител в ответ на введение лигавирина, оценивали также на морских свинках по оптимальной для выявления аллер-гизации схеме. Разрешающая доза свинкам 1-й группы при внутрисердечном введении препарата составила 100 мкг, что в 3 раза превосходила суммарную сенсибилизирующую дозу, а животным 2-й группы - 300 мкг, что соответствовало суммарной сенсибилизирующей дозе. Наблюдения за животными обеих групп в первые 5-10 минут после введения им разрешающих доз препарата не выявило признаков анафилактической реакции. Отмеченные редкие почесывания мордочки не подлежат оценке по 4-бальной системе.

Безвредность лигавирина для телят и поросят определяли по общему состоянию животных, их поведению, температурной реакции, изменению массы тела, продуктивности, функции кроветворения, морфологических и биохимических показателей крови. После применения лигавирина в различных дозах все вышеперечисленные показатели у телят и поросят находились в пределах нормы, за исключением перераспределения глобулиновых фракций в сыворотке крови: происходило снижение содержания а-глобулинов и увеличение количества у-глобулинов. Содержание последних у поросят через 3 суток после введения лигавирина на 27,7% превосходило исходные данные. Аналогичные результаты были получены и в опыте на телятах.

Изучены остаточные количества лигавирина в органах и тканях животных после однократного и курсового введения препарата. Лигавирин использовали в дозе 0,1 мг/кг массы тела при курсовом введении (в течение 5 суток). Пробы органов, тканей и жидкостей для исследования брали через 24 ч, а пробы молока и мочи спустя 6, 12 и 24 ч после инъекции. Высокая специфичность ИК-спектров препарата позволила идентифицировать его с высокой степенью точности в различных тканях и жидкостях на ИК-спектрофотометре по стандартной методике. Полученные результаты не выявили кумуляции препарата в различных органах и тканях животных и птицы, а также в молоке. Установлено, что через 6 ч после однократного и спустя 12 ч после курсового введениях он выводится из организма с мочой.

Эмбриотоксическое и тератогенное действие лигавирина изучали на крысах с 1 по 17 день беременности при однократном подкожном введении в дозах 100 (п=72) и 1000 (п=190) мг/кг (последняя доза в 10000 раз превышала оптимальную эффективную терапевтическую дозу). На 21 день беременности крыс дека-петировали и все плоды были изучены макроскопически, определены их масса и краниокаудальный размер.

У плодов крыс, обработанных лигавирином в дозе 100 мг/кг (1 группа), аномалий развития не обнаружено. При введении препарата в дозе 1000 мг/кг (2 группа) выявлено отклонение (менингоцеле, сросшиеся плаценты, подкожные

геморрагии) у 9 плодов (0,64%). Уровень предимплантационной гибели зигот, так же как и постимплангационная гибель эмбрионов (лигавирин вводили на 5 день беременности) были достоверно выше при введении более высокой дозы препарата.

Показатели средней массы и длины плодов у животных 2-ой группы были достоверно ниже. В некоторых случаях при введении лигавирина в дозе 1000 мг/кг отмечали дистрофические изменения в плаценте. Средние массы плацент на 1, 6, 14, 15, 16 и 17 дни беременности крыс этой группы достоверно отличались (Р<0,05) от таковых после введения препарата в дозе 100 мг/кг. При осмотре и микроскопическом исследовании внутренних органов эмбрионов по Вильсону у одного (0,45%) из них в 1-ой группе установлена гидроцефалия Среди плодов 2-ой группы (п=700) отклонения (гидроцефалия, кровоизлияния) выявлены у 12 (1,71%).

При микроскопическом измерении костей скелета плодов по Доусону установлены достоверные отличия (Р<0,05) размеров центров окостенения в отдельных их частях.

Таким образом, эмбриотоксическое и тератогенное действие лигавирина проявляется только при однократном подкожном введении его в дозе 1000 мг/кг, последняя в 10000 раз превышает эффективную лечебно-профилактическую дозу.

Для исследования хромосомных аберраций использовали мышей (линии C57BL/6). Лигавирин вводили одно- и трехкратно в дозе 10 мг/кг массы тела. Установлено, что через 24 ч после трехкратного введения препарата зарегистрировано 8 поврежденных клеток (1,6%), содержащих 5 (1%) гепов и 3 (0,6%) одиночных фрагмента. Среди 470 просмотренных метафаз контрольной серии обнаружили 4 (0,85%) гепа и 2 (0,43%) одиночных фрагмента, т.е. 6 (1,28%) аномальных клеток. Сравнение полученных данных в опыте и контроле не выявило достоверных различий (табл. 1).

Для определения генных мутаций на индикаторных штаммах микроорганизмов Salmonella typhimurium использовали методику Эймса в модификации Л.М. Фонпггейна. Установлено, что лигавирин в исследованных дозах не индуцировал мутации типа замены основания в молекуле ДНК микроорганизмов S. typhimurium штаммов ТА 1535 и ТА 100 и мутации типа сдвига считывания генетического кода в штаммах ТА 1537, ТА 1538 и ТА 98 (табл. 2).

Для изучения способности лигавирина индуцировать доминантные летальные мутации в зародышевых клетках мышей линии DBA C57BL/6 препарат применяли в дозе 10 мг/кг. Исследование проводили в течение 5 недель, т.е. на протяжении пре- и постмейотических стадий сперматогенеза, при этом определяли число выживших и мертвых эмбрионов. Проведенные исследования показали, что препарат не индуцировал доминантные летальные мутации в зародышевых клетках мышей.

Таблица 1

Влияние лигавирина на уровень хромосомных аберраций в клетках костного мозга линейных мышей

Схема Экспо- Число Гепы (пробелы): Фрагменты Хромосомные Всего поврежденных

введения зиция мышей: метафаз: число: %+ (оданочные) аберрации метафаз

число: %+ число: %+ число: %+

Лигавирин 6 ч 5 440 3 0,68±0,39 1 0,22±0,22 1 0,22±0,22 4 0,90±0,45

(однократно) 24 ч 5 490 4 0,81±0,40 2 0,40±0,28 2 0,40+0,28 6 1,20±0,49

48 ч 5 430 3 0,69±0,39 1 0,23±0,23 1 0,23+0,23 4 0,93±0,46

Контроль 6 ч 5 400 2 0,50±0,35 1 0,25±0,25 1 0,25±0,25 3 0,75±0,43

24 ч 5 500 4 0,80±0,40 2 0,40±0,28 2 0,40±0,28 6 1,20±0,49

48 ч 5 420 3 0,71±0,40 1 0,24±0,24 1 0,24±0,24 4 0,95±0,47

Лигавирин

3-х кратно) 24 ч 5 500 5 1,00±0,44 3 0,60+0,34 3 0,60±0,34 8 1,60±0,56

Контроль 24 ч 5 470 4 0,85±0,42 2 0,43±0,30 2 0,43±0,30 6 1,28±0,52

Таблица 2

Результаты оценки мутагенной активности лигавирина на индикаторных штаммах Salmonella typhimurium

Препарат Количество ревертантов на чашках со штаммами Степень мута-

Название Доза ТА 1535 ТА 1537 ТА 1538 ТА 98 ТА 100 генного эффекта

мкг/чашка (балл)

Лигавирин: од 9,75±2,3 10,75±2,34 10,5±3,12 18,0±4,7 50,5±5,4б 0

1,0 10,0±3,1 11,25+3,12 10,75±2,3 19,5±3,1 48,5±4,68 0

10,0 10,0±3,1 10,75±3,12 9,0±3,12 1,0+3,9 52,5±3,9 0

100,0 10,7±3,9 10,0±2,34 10,2±2,34 20,2±4,7 49,0±5,46 0

1000,0 10,2±2,34 9,25±0,78 9,25±1,56 19,25±4,7 50,5±5,46 0

Контроль:

физраствор 0,1 мл 10,0±1,56 10,75±2,34 10,0±1,56 23,0±5,46 49,5+4,7 0

ДЦДТДП 100,0 н/и н/и 431,0+26,31 468,7±24,9 н/и н/и

профлавин 500,0 н/и 30,7±4,68 н/и н/и н/и н/и

нитрозометил-

мочевина 100,0 =2000 н/и н/и н/и =2000 н/и

Таким образом, лигавирин в исследуемых дозах не вызывает хромосомных, генных и геномных мутаций.

3.1.3. Интерфероногенная активность

Для титрования ИФН был использован метод оценки противовирусной активности по задержке ЦПД тест-вируса на клетки, обладающий средней чувствительностью, но дающий наиболее воспроизводимые результаты. В качестве тест-вируса использовали ВВС штамм «Индиана», высоко чувствительный к интерферону.

Для определения ИФН и его типов (лейкоцитарный-а и иммунный-у) в цельной крови животных использовали гомологичные КК. Индукция ИФН в цельной крови in vitro максимально приближена к условиям in vivo и осуществляется в присутствии аутологичной сыворотки, где сохраняется соотношение всех клеточных и гуморальных компонентов.

Установлено, что ингибитор сыворотки крови животных, образующийся после введения лигавирина, отвечал основным требованиям, предъявляемым к ИФН: не разрушался при прогревании и в условиях кислой среды в течение суток и не был устойчив к действию трипсина

При более детальном изучении ИФН, индуцированного лигавирином на мышах, установлено 2 его вида («ранний» - пик продукции через 4-8 ч после введения препарата и «поздний» - спустя 24 ч), которые значительно отличались друг от друга по физико-химическим свойствам. Наблюдаемые различия указывают на наличие в крови животных смеси разных ИФН, экспрессируемых различными генами в ответ на индукцию препарата.

В опытах на мышах установлено, что лигавирин даже в дозе 0,1 мг/кг индуцирует синтез ИФН в значительных количествах, определяемых уже через 3-5 ч после парентерального его введения. Однако максимальные уровни ИФН достигались при введении более высоких доз препарата. Лигавирин индуцирует синтез «раннего» ИФН с пиком продукции через 6-8 ч после его введения. Уровень «позднего» ИФН, определяемого через 24 ч, колебался, но, как правило, был низкий и составлял 40 ед/0,1 мл крови. Дозозависимая продукция ИФН наблюдалась в довольно узких пределах, выше которых уровень его мало изменялся.

Наиболее выраженной продукция интерферона под влиянием лигавирина отмечена у кроликов. Препарат стимулировал у них индукцию эндогенного ИФН при всех использованных дозах и методах введения, однако максимальные титры (640-1280 ед/мл) были выявлены через 6 ч после внутримышечного введения лигавирина в дозе 0,1-0,5 мг/кг, затем его уровень быстро снижался.

Наиболее высокий уровень ИФН в крови мышей выявляли при внутривенном и внутрибрюшинном введении, близкие к нему титры наблюдали при ин-траназальном и аэрозольном, а наименьший - при интрацеребральном введении. Исследование распределения интерферона в органах и тканях показало, что наиболее высокий уровень ИФН регистрировали в месте введения индуктора

Лигавирин, как и подавляющее число известных индукторов ИФН, вызывал развитие гипореактивности (рефрактерности, иммунологической толерантности) на повторное введение индуктора в опытах in vitro и in vivo (на мышах). При некоторых схемах применения индуктора удавалось частично или полностью избежать развития рефракторной фазы. Развитие ее также удавалось предотвратить сменой индукторов.

При изучении интерфероногенной активности лигав ирина на сельскохозяйственных животных установлено, что ингибитор сыворотки крови поросят и телят, полученный после введения препарата, отвечал основным требованиям, предъявляемым к ИФН: не разрушался при температуре 56°С и под действием кислой среды и не был устойчив к трипсину.

Лигавирин индуцировал продукцию ИФН при всех использованных дозах и методах введения. Наибольшее содержание ИФН в сыворотках крови животных обнаруживали через 6-12 ч после введения препарата в дозе 0,1 мг/кг (1280 ед/мл). На 3 сутки после введения интерфероногена уровень его снижался до 1040 ед/мл, а через 96 ч он уже не выявлялся. Наиболее оптимальная доза индуктора составляла 0,5 мг/кг, увеличение ее не влияло на повышение уровня ИФН (табл. 3). При многократном применении лигав ирина (ежедневно в течение недели) у поросят отмечено явление гипореактивности: после 3-й инъекции тигры интерферона снижались на 1-2 log2, минимальный уровень наблюдался после 4 инъекции препарата. В последующие сутки его уровень в сыворотке крови животных постепенно восстанавливался.

Таблица 3

Интерфероногенная активность лигавирина на поросятах и телятах

Доза Метод Титры интерферона (ИЕ 50/мл) после введения (часы) мг/кг введения 0 6 12 24 48 72 96

поросята

0,05 в/м 0 640-1280 640-1280 320 80 10-20 0

0,1 в/м 0 1280 640-1280 320-640 160 20-40 0

0,5 в/м 0 1280 1280 640 160-320 40 0

0,05 п/к 0 1280 640-1280 640 160-320 20-40 0

0,1 п/к 0 640-1280 1280 640 160 40 0

телята

0,05 п/к 0 640 640 160-320 80 10-20 0

0,1 п/к 0 1280 640 320 80-160 20-40

0,05 в/м 0 1280 640 320 160 20

0,1 в/м 0 1280 640-1280 320 80-160 40

Таким образом, лигавирин является высокоактивным индуктором ИФН.

Для количественного определения а-ИФН в сыворотке крови животных был использован твердофазный метод ИФА. Наивысший пик продукции ос-ИФН наблюдали через 6 ч после введения лигавирина в дозе 0,1 мг/кг (для свиней - 347 пкг/мл и для коров - 196 пкг/мл), через 12-24 ч уровень его постепенно снижался, а спустя двое суток не выявляли.

3.1.4. Противовирусная активность При сравнительном изучении противовирусной активности лигавирина и высокомолекулярного индуктора дсРНК-ларифан (разработан в институте микробиологии им. А.Кир хинштейна) в КК ПЭС в отношении ВБА штамм «ВГНКИ» наиболее выраженное снижение урожая вируса отмечено после применения препарата в дозе 100 мкг/мл (5,4 ЦПД 50/мл), у дсРНК противовирусная активность составила - 4,9 ^ ЦПД 50/мл.

Антивирусную активность лигавирина изучали и на белых мышах, которые чувствительны к ВБА (штамм «Арский») при различных способах заражения, особенно при интрацеребральном его введении. Болезнь Ауески (БА) белых мъппей проявлялась выраженными клиническими признаками (зуд, расчесы, нервные явления) с летальным исходом.

Таблица 4

Активность лигавирина в отношении вируса болезни Ауески

Параметры Смертность на 14 день Средняя % выжива- % защиты Р

абсолютная % продолж. емости

жизни (дни)

Доза лигавирина (мг/кг):

0,01 15 75,0 8,0 25,0 25,0 >0,05

0,1 10 50,0 9,5 50,0 50,0 <0,01

0,5 9 45,0 10,0 55,0 55,0 <0,01

Контроль 20 100,0 7,0 0 0

Схема введения лигавирина и вируса:

За 24 ч 12 60,0 40,0 25,0 >0,05

За 4 ч 9 45,0 55,0 40,0 <0,05

За 24 и 4 ч 6 30,0 70,0 55,0 <0,01

Через 24 ч 15 75,0 25,0 10,0 >0,1

Контроль 17 85,0 15,0

Инфекционный титр ВБА для мышей составил 103 ЛД 50/0,02 мл, а инфицирующая доза, вызывающая гибель 80-90% животных, равнялась 500 ЛД 50/0,02 мл, которая и была использована при изучении защитного действия лигавирина. Испытаны различные дозы, методы и схемы применения индуктора. Наиболее эффективная доза лигавирина (0,5 мг/кг) обеспечивала выживаемость 55% жи-

ватных (Р<0,001). При введении препарата за 4 ч до заражения защитный эффект составил 40% (Р<0,05). Профилактическая эффективность индуктора при его однократном введении снижалась до 25% при увеличении срока между введением препарата и последующим заражением до 24 ч (Р>0,05). При двукратном введении препарата за 24 и 4 ч до заражения защитный эффект оказался наибольшим 55% (Р<0,01). Лечебная эффективность лигавирина была ниже профилактической (табл. 4).

Таким образом, проведенные исследования на белых мышах свидетельствуют о том, что лигавирин является эффективным противовирусным препаратом.

Введение лигавирина кроликам с профилактической целью при последующем их заражении предварительно оттитрованной высокой дозой вирулентного вируса БА (10 ЛД/50) вызывает увеличение средней продолжительности жизни в 2 раза (на 4,25 суток) по сравнению с контролем.

При изучении антивирусной активности лигавирина в отношении вируса миксомы и фибромы Шоупа установлено, что наибольший защитный эффект обеспечивает введение препарата за 4 ч до заражения вирусом миксомы (степень подавления репродукции вируса составила 2-2,5 и вирусом фибромы Шоупа (1,5-1,751§).

Противовирусную активность лигавирина в отношении вируса Алеутской болезни норок (АБН) оценивали по появлению специфических противовирусных антител в реакциях иммуноэлектроосмофореза (РИЭОФ) и иммунофер-ментного анализа (ИФА) после заражения животных опытной и контрольной групп вирулентным штаммом «П-1». Проведенные исследования выявили, что препарат обладает некоторым противовирусным действием и в отношении вируса АБН.

3.1.5. Иммуномодулирующие свойства

Влияние лигавирина (0,5 и 0,025 мг/кг) на гуморальные и клеточные факторы иммунитета изучали на мышах линии С57ВЬ/6, иммунизированных субоптимальной и оптимальной дозой антигена (ЭБ). Препарат вводили за 10, 7, 4 дней до иммунизации, одновременно с ней и спустя 24 ч. Эффективность лигавирина зависела от времени введения и дозы антигена (АГ): при иммунизации мышей субопгимальной дозой АГ препарат стимулировал антителопродукцию, а оптимальной - подавлял количество АОК в селезенке животных при применении лигавирина до иммунизации. Однако при введении его за 10, 7, 4 и 1 день до иммунизации, титр гемагглютининов повышался и при использовании оптимальной дозы АГ, что можно увязать с улучшением клеточной дифференциров-ки под влиянием интерферона, индуцированного индуктором. Применение препарата в указанных дозах через 24 ч после введения АГ не влияло на продукцию антител.

Введение лигавирина одновременно с сенсибилизирующей дозой ЭБ мышам линии С57В1У6 не оказывало направленного действия на реакцию гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ), а применение его мышам линии СВА вы-

зывало выраженный ингибирующий эффект. Лигавирин в дозе 0,5 мг/кг подавлял реакцию ГЗТ у мышей при введении его до и после иммунизации.

Введение препарата независимо от дозы до и одновременно с лимфоцитами родительского генотипа не влияло на интенсивность реакции «трансплантант против хозяина» (Р11IX), а применение его в дозе 0,5 мг/кг после введения родительских лимфоцитов в значительной степени подавляло РТПХ.

Лигавирин стимулировал завершенность фагоцитоза ЭБ перитонеальными макрофагами при применении его 4-х кратно до введения антигена и однократно одновременно с ним. Фагоцитарный индекс (ФИ) при этом существенно не изменялся.

Таким образом, лигавирин как в терапевтической дозе (0,5 мг/кг), так и в дозе, в 20 раз меньшей (0,025 мг/кг) оказывает на иммунную систему мышей различных генетических линий иммуномодулирующее действие, которое было более выраженным под влиянием терапевтической дозы. Действие препарата на иммунную систему во многом зависело от условий проведения эксперимента (линия мышей, доза АГ, последовательность введения препарата и т.д.).

Установлено, что предварительное введение лигавирина за 24 и 4 ч до иммунизации мышей вакциной против болезни Ауески подавляло формирование иммунитета: индекс защиты от заражения ВБА штамм «Арский» составил соответственно 35% и 25%, тогда как применение одной вакцины защищало 50% животных. Стимулирующий эффект наблюдали при одновременном введении индуктора и вакцины (защита составила 55%) или при применении индуктора через 24 ч после иммунизации (65%).

Лигавирин, введенный одновременно с инактивированной вакциной против БА, вызывал некоторый иммуностимулирующий эффект в опыте на кроликах, который выражался в снижении тяжести заболевания при заражении вирусом БА в дозе 5 ЛД/50 и увеличении уровня антител на один логарифм по сравнению с контролем (введение одной вакцины).

Применение лигавирина коровам за 30 суток до предполагаемого отела, телятам в возрасте 10, 30 и 60 дней, свиноматкам за 14 и 7 дней до опороса и поросятам в возрасте 10, 45 и 60 дней показало, что препарат оказывает выраженное иммунотропное действие на организм животных, воздействуя на ослабленные звенья иммунитета, выполняя роль иммунокорректора. Под влиянием лигавирина отмечено увеличение количества Т- и В-лимфоцитов, фагоцитарной активности нейтрофилов, показателей фагоцитарного индекса и НСТ-теста (теста с тетразолием нитросиним) у взрослых животных и молодняка всех возрастных групп.

Применение препарата стельным коровам и телятам в возрасте 10, 30 и 60 дней оказывало выраженное стимулирующее действие на некоторые факторы гуморального иммунитета, проявляющееся повышением в сыворотке крови содержания общего белка, показателей комплемента, лизоцима и бактерицидной активности сыворотки крови.

3.1.6. Лечебно-профилактическая эффективность

Лечебно-профилактическая эффективность лигавирина на крупном рогатом скоте изучена в условиях Лугоболотной опытной станции ВНИИ кормов им. Вильямса РАСХН. Препарат вводили коровам (п=20) за 30 дней до отела подкожно по 10 мл трехкратно с интервалом в 48 ч, телятам (п=20), полученным от них, на 2, 4, 6, 8 и 10 день после рождения по 2 мл. Применение препарата по указанной схеме обеспечивало 100% сохранность телят (в контроле - 90%) и в 2 раза сокращало продолжительность болезни их простой диспепсией.

Изучение лечебной эффективности лигавирина при диарее поросят неинфекционной этиологии проведено в АО «Заречье» Кировской области. Препарат * (сухая форма) предварительно растворяли в воде и применяли животным (п=15) перорально в дозе 1 мг/кг в течение 5 дней. Лечебная эффективность лигавирина составила 80%.

Производственное испытание лигавирина для повышения сохранности цыплят-бройлеров (п=25 тыс.) проведено на птицефабрике «Костинская». Сухую форму препарата после растворения применяли перорально в дозе 1 мг/кг (по действующему веществу) один раз в сутки суточным цыплятам и на 15-20 дни выращивания. Установлено, что падеж цыплят в 1-ом контрольном зале был на 36%, во 2-ом - на 27%, в 5-ом на 51% и 6-ом на 41% больше, чем в опытном зале. Средняя масса цыплят, которым применяли лигавирин, была выше, чем в контроле соответственно на 7,14,20 и 41%.

Испытание эффективности лигавирина для профилактики болезни Марека проведено на 29,3 тыс. цыплят на Зуевской птицефабрике. Под опытом находилась одна батарея птичника - 4,9 тыс. цыплят, в контроле 5 батарей - 24,4 тыс. голов в возрасте 70 дней. Растворенный лигавирин применяли методом выпаивания в течение 4 дней. Учет эффективности проводили с 96 по 123 день выращивания. Установлено, что падеж цыплят в опытной группе составил 0,2%, в контроле - 0,5%.

На базе Кировской городской ветеринарной станции проведено испытание лигавирина для лечения различных заболеваний животных. В период с 1994 по 1996 тт. препарат испытали на 1705 животных (собаки с диагнозом чума плотоядных, вирусный энтерит, папилломатоз и стафилококкоз; кошки, больные > панлейкопенией, вирусным стоматитом, калицевирозом, фарингитом; коровы и козы с диагнозом папилломатоз, мастит; свиньи и птица, больные гастроэнтеритом). Практически все животные после лечения выздоровели. Обнадеживающие результаты были получены при чуме плотоядных, вирусных энтеритах и стафи-лококкозах у щенят 10-дневного возраста и старше.

Эффективность лигавирина при гипотрофии телят оценивали в одном из хозяйств, где в течение года было зарегистрировано 251 животное с признаками гипотрофии, что составило 30,8% от общего количества телят. Масса тела их в 25-дневном возрасте была на 24% меньше, чем у здоровых животных (Р<0,05), а сохранность соответственно составила 58% и 96%.

Таблица 5

Иммунологические показатели телят на 25 сутки после лечения лигавирином

Показатели Нормотрофики Гипотрофики Контрольные Опытные (лигавирин)

Эритроциты, 1012/л 8,4±0,3 7,1±0,1* 8,4±0,03**

Гемоглобин, г/л 114±4,3 86,5±4,1* 113±4,0**

Лейкоциты, 10% 9,5±0,3 7,1±0,2* 9,1±0,26**

Лимфоциты, % 53,7+2,3 44,2±1,9* 55,512,1**

Лимфоциты, 109/л 5,1±0,7 3,1±0,6* 5,1±0,4**

Т-лимфоцитфы, % 29,0±2,2 25,5±1,8 36,8±2,67**

Т-лимфоциты, 109/л 1,48±0,03 0,8+0,04* 1,9±0,05**

«Активные» Т-лимфоциты, % 15,7±1,07 12,3±0,4* 20,5+1,6**

«Активные» Т-лимфоциты, 109/л 0,8+0,1 0,4±0,02* 1,1±0,02**

Т-хелперы, % 19,0±1,07 15,8±0,8* 31,9+2,67**

Т-хелперы, 109/л 0,97±0,01 0,49±0,02* 1,6±0,03**

Т-супрессоры, % 9,8±0,7 8,4±0,9 4,9+0,66**

Т-супрессоры, 109/л 0,5±0,03 0,26±0,02* 0,25±0,03

Коэффициент дифференциации 1,9±0,03 1,9±0,04 6,5+0,7**

«Нулевые» лимфоциты, % 62,7±2,7 67,7+3,6 55,2+3,0**

«Нулевые» лимфоциты, 109/л 3,2±0,2 2,1±0,08* 2,8+0,04**

РТМЛ с ФГА, % 94,0±3,9 118,3±4,9* 92,0±2,7**

БАСК, % 45,8+1,5» 39,5±1,2* 46,5+1,02**

ЛАСК, % 33,5±0,7 32,6+1,9 33,7±0,97

Активность р-лизинов, % 13,1 ±0,49 9,1±0,36* 14,8±0,99**

В-лимфоциты, % 8,6±0,1 6,2±0,7 9,7±1,07*

В-лимфоциты, 109/л 0,4±0,02 0,2±0,02* 0,5±0,03**

Иммуноглобулины, мг/мл: 01 6,9±0,1 5,8±0,06* 7,2±0,16**

в2 8,6±0,1 7Д±0,2* 8,7±0,2*

М 1,1±0,07 0,7±0,03 1,3±0,1**

* - (Р<0,05) по сравнению с нормотрофиками ** - (Р<0,05) по сравнению с контрольной группой

При гипотрофии у телят отмечено ослабление механизма терморегуляции, функций дыхательной и сердечно-сосудистой систем, снижение содержания гемоглобина на 23% (Р<0,05), лейкоцитов на 24% (Р<0,05), концентрации Т-лимфоцитов (в т.ч. хелперных и супрессорных субпопуляций клеток), подавление фактора торможения миграции лимфоцитов под влиянием ФГА (РТМЛ),

свидетельствующее о нарушении функционирования «активных» Т-лимфоцитов, снижение числа В-лимфоцитов, которое составило 41,7% от их уровня у здоровых телят, бактерицидной активности сыворотки крови за счет уменьшения активности р-лизинов, и количества ¡¡*М на 25%.

В результате проведенных исследований установлено, что наиболее эффективной и экономически целесообразной оказалось трехкратное (с интервалом в 72 часа) подкожное введение препарата в дозе 0,1 мг/кг новорожденным телятам, начиная с 1 дня жизни и повторно двукратно в возрасте 15 дней. Применение лигавирина способствовало нормализации температуры тела, пульса и дыхания у животных, повышало интенсивность роста. Уже спустя 15 суток после начала применения лигавирина масса тела у гипотрофиков увеличилась и стала близкой к таковой у нормотрофиков, а сохранность их за период наблюдения достигла 97% (в контроле 80%).

Применение лигавирина сопровождалось повышением содержания в крови телят гемоглобина, лимфоцитов, нормализацией показателей популяций лимфоцитов крови (Т-лимфоцитов, «активных»Т-лимфоцитов, Т-хелперов), снижением количества «нулевых», малодифференцированных лимфоцитов на 18,5% на 25 сутки опыта.

Под влиянием лигавирина происходила нормализация фактора торможения миграции лейкоцитов: он снижался по сравнению с контролем на 25 сутки - на 22% (табл. 5), а содержание В-лимфоцитов, 1§ О уже на 15 сутки приближалось к норме, в то время как в контроле (телята-гипотрофики), где лечение проводилось традиционными средствами, эти показатели оставались на низком уровне. Содержание ^ М у животных на 25 сутки опыта было на 46% выше, чем в контроле (Р<0,05), а БАСК на 15 сутки существенно возрастала, достигая величины здоровых животных, и происходило это за счет повышения активности Р-лизинов крови, так как лизоцимная активность крови существенно не менялась.

Под влиянием лигавирина отмечены повышение содержания глюкозы в сыворотке крови, уменьшение активности аланин-аминотрансферазы (АЛТ) (Р<0,05), по-видимому, вследствие уменьшения проницаемости мембран клеток печени. О нормализующем влиянии лигавирина на метаболические процессы свидетельствовали показатели концентрации общего билирубина в сыворотке крови животных.

3.2. Разработка и изучение препарата иммуноферон

3.2.1. Технология получения

Препарат получают из сыворотки (плазмы) крови свиней, крупного рогатого скота после предварительной индукции эндогенного гомологичного ИФН растительным интерфероногеном.

Продуцентами (донорами) являются животные, которым предварительно за 6-12 ч до взятия крови внутримышечно вводят лигавирин в дозе 0,1 мг/кг (по действующему веществу). Сыворотку крови получают способом отстоя или

нитрирования крови с последующим сепарированием и дефибринированием плазмы. |

Метод отстоя основан на получении сыворотки в результате свертывания крови (переход фибририногена в фибрин), постепенного уплотнения, сжимания (ретракции) сгустка, который удерживает форменные элементы. Основные этапы: взятие крови, хранение ее, отделение сыворотки, консервирование, расфасовка, контроль.

Метод цитрирования крови с последующим высаливанием фибрина с помощью хлористого кальция включает: получение крови, сепарирование, отделение плазмы, дефибринирование, отстаивание, фильтрацию, консервирование, расфасовку и контроль.

Иммуноферон представляет собой смесь двух ИФН-а (I тип) и ИФЫ-у (П тип). Полученный препарат с активностью 1200 ЕД/мл (5,5-103 ЕД/мг белка) ^ очищали с помощью крупнопористого стекла с контролируемым размером пор (СРв-10-500) и последующей аффинной хроматографией на сефарозе. Дальнейшую очистку и определение молекулярной массы проводили гель-фильтрацией на биогеле Р-100. Иммуноферон имеет молекулярную массу 51 КД и антивирусную активность 1,3-10б ЕД/мг белка.

При электрофорезе в полиакриламидном геле (ПААГ) с добавлением додецилсульфата препарат представлен одной полосой с электрофоретической подвижностью, соответствующей молекулярной массе 28-30 КД. Серологически он был родственен человеческому у-ИФН, поскольку нейтрализовался монокло-нальными антителами к последнему. Молекулярная масса а-ИФН в препарате составляла около 20 КД, а содержание его, выявляемое твердофазным ИФА, -500-600 пкг/мл,

3.2.2. Токсикологическая оценка препарата

Острая токсичность иммуноферона (ИФ) изучена на белых мышах после однократного подкожного его применения в дозах МО6 и 2-106 МЕ/мл. Все животные к концу срока наблюдения (14 дней) оказались живы. ЛД/50 для препа- „ рата установить не удалось, т.к. более высокую дозу препарата ввести оказалось практически невозможно.

Исследование хронической токсичности препарата проводили на крысах- * самцах. Иммуноферон вводили подкожно в объеме 5 и 10 мл один раз в сутки в течение 10 дней. У животных не отмечено изменений на месте введения препарата, достоверных колебаний в динамике массы тела и гематологических показателях. В опытах на кроликах не выявлено местного раздражающего действия, а на морских свинках аллергизирующего действия иммуноферона.

Препарат при подкожном и внутримышечном введении оказался безвредным для новорожденных телят (4-6 мл) и поросят-сосунов - (2 мл).

3.2.3. Биологическая активность Иммуноферон в дозе М03-1-104 МЕ/мл обладал выраженной противовирусной активностью в КК ПЭС и ФЭК в отношении различных штаммов вируса БА, подавляя их репродукцию на 10-100 ТЦЦ/50. В гетерологичной клеточной системе (ФЭК) степень подавления репродукции вируса оказалась ниже, чем в гомологичной (ПЭС). Это свидетельствует о видоспецифичности ИФ. Противовирусная активность иммуноферона была более выраженной при внесении его в КК ПЭС за 24 ч до заражения.

Иммуноферон проявил выраженную активность в отношении вируса везикулярного стоматита подавляя репродукцию 1000 ТЦЦ/50 вируса. ИФ угнетал также репродукцию всех исследованных штаммов вируса TTC и энгеровирусов свиней на 1-2 1g, однако коронавирусы к нему были менее чувствительны. С увеличением концентрации ИФ угнетение репродукции энтеровирусов было более выраженным.

Препарат оказывал бактериостатическое действие на все исследованные штаммы стафилококков, сальмонелл, кишечной палочки и псевдомонад. Наиболее чувствительными были стафилококки, а устойчивыми - псевдомонады. Влияние ИФ на стафилококки сопровождалось уменьшением количества КОЕ (колоний образующих единиц) в 10-100 раз. Следовательно, препарат обладает антивирусными и антибактериальными свойствами.

Влияние иммуноферона на показатели клеточного и гуморального иммунитета изучено на стельных коровах, телятах разных возрастов, супоросных свиноматках и поросятах. Под действием препарата у всех животных отмечено увеличение количества Т- и В-лимфоцитов, показателей ФАН, ФИ и НСТ-теста. У стельных коров (п=10) и телят (п=15) отмечено положительное влияние ИФ на гуморальные факторы иммунитета, которое проявлялось повышением комплемента, БАСК, ЛАСК.

При испытании противовирусной активности препарата при экспериментальной БА поросят (п=25) установлено, что ИФ обладает выраженным антивирусным действием при введении его в дозе 2-Ю5 ТЦЦ 50/мл за 24 ч до заражения или при одновременном введении с вирулентным вирусом. У животных, обработанных иммунофероном, клинических признаков заболевания не наблюдали. Лечебное действие препарата отмечено при использовании его не позднее 4-х дней после заражения, т.е. в начальной стадии развития болезни. У животных после введения ИФ в указанный срок клинические признаки заболевания исчезали.

3.2.4. Лечебно-профилактическая эффективность Производственное испытание препарата ИФ при TTC показало, что при использовании его с профилактической целью поросятам 1-10-дневного возраста (п=28) в дозе 1 мл через каждые 2 дня в течение 6 суток (3 инъекции) сохранность животных составила 71%, в то время как в контроле (п=20) падеж составил 70%.При введении ИФ с лечебной целью в дозе 2 мл по той же схеме (п=22)

наблюдали выздоровление и 68% сохранность поросят, в контроле (п=15) падеж составил 73%. Обработка препаратом супоросных свиноматок обеспечивала высокую сохранность новорожденных поросят.

Испытание иммуноферона на поросятах (п=24) и телятах (п=107) в хозяйствах, стационарно неблагополучных по вирусно-бактериальным инфекциям, показало, что применение препарата с профилактической целью телятам 1-20 дневного возраста обеспечивало их сохранность на 92%, заболеваемость составила 20% (в контроле соответственно 66% и 87%); сохранность поросят, обработанных иммунофероном, составила 92,9% (в контроле - 50%), а среднесуточный прирост массы тела последних соответственно составил - 213,0±15,9 г и 116,9±21,5г.

Изучение эффективности ИФ в стационарно неблагополучном хозяйстве по TTC и колибактериозу поросят в возрасте от 1 до 20 дней (п=3920) показало, что он обеспечивает повышение иммунореактивности организма, снижение заболеваемости поросят гастроэнтеритами на 18-36%, увеличение сохранности на 1116% и прироста массы тела животных - на 0,2-0,6 кг. Применение препарата через 48 ч после вакцинации супоросных свиноматок (за 30 и 15 дней до опороса) способствовало повышению в 2-4 раза титра антител к вирусу TTC, уменьшению заболеваемости поросят на 18,5-25,0% и падежа на 3-4%, увеличению прироста массы тела животных к отъему на 7-9%.

В условиях птицефабрики изучено влияние иммуноферона на напряженность иммунитета у цыплят при вакцинопрофилактике болезни Ньюкасла и их сохранность. Цыплят опытной группы (п=24 тыс.) иммунизировали с одновременным введением препарата в вакцину (200 БД на 1 мл) трехкратно с интервалом в 48 ч аэрозольным методом из расчета 2 мл/куб. м. при экспозиции 40 мин. Птицу контрольной группы (п=33 тыс.) только вакцинировали. Наблюдение вели в течение 7 месяцев. Применение ИФ с вакциной способствовало двукратному повышению титра антител к возбудителю болезни Ньюкасла и снижению выбраковки птиц в 1,6 раза.

Изучено влияние иммуноферона на реактогенность и иммуногенность вакцины против инфекционного ларинготрахеита (ИЛТ) птиц из штамма «ВНИИБП». Цыплятам опытной группы (п=200) в 30-дневном возрасте в форме аэрозоля применяли вакцину в дозе 5 ЭИД/50. Перед распылением в вакцину вводили ИФ из расчета 100 ЕД на 1 мл. Цыплятам контрольной группы (п=200) применяли только вакцину. Введение препарата в вакцину обеспечивало повышение напряженности иммунитета, снижение реактогенности биопрепарата и поствакцинального отхода птицы по сравнению с контролем.

За 3 года иммунофероном в хозяйствах Кировской области и других регионах России обработано более 100 тыс. поросят и 20 тыс. телят, что позволило снизить заболеваемость поросят в период подсоса на 15-25%, телят до 1 мес. возраста - на 20-44% и падеж соответственно на 14-80% и 8-34%. В хозяйствах за 1-3 года среднесуточные приросты массы тела поросят-сосунов увеличились на 8-50%, телят - на 12-30%.

Дальнейшие испытания препарата показали, что применение его новорожденным телятам и поросятам на 1 и 3 день жизни повышало их сохранность до 96% (в контроле не более 80%), и прирост массы тела в среднем на 20-25%. Повторное введение ИФ 2-х месячным поросятам и телятам, а также стельным коровам и супоросным свиноматкам после их иммунизации против колибактерио-за способствовало повышению в 2-4 раза титра агглютининов в сыворотке крови животных.

3.3. Разработка н изучение бностнма-К

3.3.1. Технология получения препарата, его токсикологическая оценка и биологическая активность

Биостим-К - природное вещество, выделенное из торфяников Кировской области. Препарат является продуктом взаимодействия торфа с водными растворами гидроксида и карбоната натрия.

Биостим-К представляет собой прозрачную жидкость темно-коричневого цвета со слабым специфическим запахом. Массовая доля влаги - 95,7%: гуматов натрия в пересчете на сухое вещество - 3%; рН - не более 9.

При изучении острой токсичности биостима-К на мышах установлено, что пероральное введение его в дозах 30,0 мг/кг (в пересчете на действующее вещество) не вызывает отклонений в клиническом состоянии, при увеличении до 60 мг/кг у них были отмечены частичный отказ от корма и незначительное угнетение. ЛД/50 для препарата определить не удалось, так как более высокие дозы животным ввести практически невозможно, а испытанные количества не вызывали гибели животных. Аналогичные результаты были получены при исследовании острой токсичности на белых крысах. Максимальная доза (240 мг/кг), которую удалось ввести животным, не вызывала их гибели.

Многократное применение (хроническая токсичность) биостима-К в течение 3-х месяцев в дозах 2,0 мл/кг не оказало токсического воздействия на организм крыс.

При исследовании препарата на безвредность на телятах и поросятах установлено, что он в рекомендованных дозах не вызывал отклонений в физиологическом состоянии и гематологических показателях животных.

3.3.2. Лечебно-профилактическая эффективность

Введение препарата биостим-К в рацион коров (п=400) из расчета 4 мл на кг корма ежедневно в период стойлового содержания привело к увеличению удоя на 16,6%, а в пастбищный сезон - на 17,5%; среднесуточного прироста молодняка в первые 6 мес.- на 14,1%; снижению затрат кормов на 1кг молока на 14,7% и на 1 кг прироста массы тела телят - на 10,8%.

Применение биостима-К стельным коровам за 2 мес. до отела сопровождалось рождением более жизнеспособного молодняка, предупреждением заболе-

ваемости телят диареями. В контрольной группе у 72% животных регистрировали желудочно-кишечные расстройства.

Применение препарата в этой же дозе бычкам (п=200) в период их заключительного откорма (11-14 мес.) обеспечило повышение среднесуточного прироста массы тела на 21,6% и улучшение качественных показателей мяса (белок, жир, энергетическая питательность). В мясе увеличилось содержание кальция, фосфора и незаменимых аминокислот.

Достоверное увеличение массы печени, почек, селезенки и легких свидетельствуют об улучшении процессов обмена, дыхания и кроветворения.

Использование препарата поросятам-отъемышам (п=80) в дозе 0,4 мл/кг способствовало увеличению среднесуточного прироста массы тела на 16,4% по сравнению с контролем.

Дача биостима-К свиноматкам (п=10) за 30 дней до предполагаемого опороса и полученным от них поросятам-сосунам повышала массу тела и жизнеспособность поросят, профилактировала их заболеваемость и падеж.

Применение препарата цыплятам-бройлерам (п=130) на фоне общих профилактических мероприятий привело к снижению заболеваемости гепатитами - на 11%,колибакгериозом на 28%, падежа от болезней органов пищеварения - на 10%, повышению среднесуточного прироста массы тела на 17,8% в сравнении с контролем, способствовало лучшему усвоению витаминов, каратиноидов из комбикорма и позволило создать к 2-недельному возрасту достаточное депо их в печени, что способствовало повышению продуктивности и улучшению качества мясной продукции.

При изучении препарата на продуктивность кур-несушек (п=16) отмечено увеличение интенсивности яйценоскости на 29%; яичной массы на 19,4%. В яйцах повышалось содержание витаминов, улучшалось состояние скорлупы, качество и сортность яиц.

3.4. Разработка и изучение препаратов промивит и фармавит

3.4.1. Технология получения

Препараты промивит и фармавит разработаны с учетом геохимических особенностей Северо-Восточного региона, к которому относится Кировская область. Промивит включает необходимый набор витаминов и микроэлементов, предназначен для крупного рогатого скота и свиней. Фармавит - комплексный препарат, состоящий из витаминов, морских водорослей, спирулина и аминокислот (метионин, таурин). Выпускают фармавит по 28 рецептам, предназначенным для различных видов животных, пушных зверей и птицы.

Препараты применяются с целью профилактики нарушений обмена веществ и повышения продуктивности животных.

Обоснованием для разработки препаратов послужил выявленный дефицит в почвах, растениях, кормах и соответственно в рационах животных кобальта - на 73%, меди - на 70%, цинка - на 49%, йода - на 80%.

3.4.2. Токсикологическая оценка препаратов

В опытах по изучению острой токсичности промивита и фармавита на белых мышах установлено, что введение их в дозах 0,5-2,0 г/кг не вызывает отклонений в клиническом состоянии животных. При увеличении их количества до 3,04,0 г/кг регистрировали угнетение, а при введении 6,0-14,0 г/кг - отказ от корма. Однако ЛД/50 для препаратов определить не удалось, так как более высокие дозы ввести животным не представилось возможным, а испытанные количества не вызывали гибели мышей.

Аналогичные результаты получены при изучении острой токсичности на белых крысах. Угнетение и отказ от корма наблюдали при введении 20-25 г/кг. ЛД/50 промивита и фармавита также определить не удалось, т.к. максимально возможное количество препаратов (25 г/кг), которое удалось ввести животным, гибель их не вызывало.

При применении препаратов в течение 3 мес. в дозах 1% и 10% от массы корма не выявлено отрицательного действия их на организм, что подтвердилось отсутствием изменений в массе тела и гематологических показателях животных.

Исследования, проведенные на сельскохозяйственных животных (телята, свиньи), птице и пушных зверях, подтвердили безвредность препаратов в рекомендуемых дозах.

3.4.3. Лечебно-профилактическая эффективность

Применение промивита-К телятам-молочникам (п=100) способствовало увеличению среднесуточного прироста массы тела к 49-му дню выращивания на 30%, к 120 дню - на 28,5% по сравнению с контролем. Заболеваемость телят гипотрофией и их сохранность составили в опыте 5 и 98%; в контроле соответственно 20 и 91%.

Абсолютный прирост массы тела ремонтного молодняка (п=100) через 3 месяца применения промивита-К составил 104,8 кг и был в 2 раза больше, чем у животных контрольной группы.

Включение промивита-К в рацион дойных коров (п=50) сопровождалось увеличением среднесуточного удоя через 3 мес. с начала его применения с 14 до 15,9 кг (на 13,6%), который превышал контрольный показатель на 2 кг. Препарат способствовал и повышению содержания жира в молоке до 4,05%.

Применение промивита-С и фармавига-С для обогащения рационов поросят на доращивании (п=80) привело к увеличению среднесуточного прироста массы тела соответственно на 360,0 и 368,0 г, что на 19,3% и 22,1% больше, чем в контроле. В опытных группах на прирост 1 кг массы тела было израсходовано меньше энергии (к. ед.) на 7 и 8,7% и переваримого протеина на 5,2 и 6,5%.

Второй научно-производственный опыт был проведен на свиноматках (п=30), которым препараты применяли в период второй половины супоросно-сти. В результате применения фармавита-С и промивита-С было получено поро-

сят на 1 свиноматку соответственно на 22,4 и 14,1% больше, чем в контроле, а сохранность к 21 дню повысилась на 7,9% и 2,3%; масса тела на 20,5 и 15,9%.

При изучении эффективности применения фармавита-А на 20 тыс. цыплят в условиях птицефабрики установлено благоприятное влияние препарата на их развитие: сохранность птицы повысилась на 19,4%, прирост массы тела в 1,4 раза, а затраты корма на 1 кг прироста массы тела снизились на 1 кг, улучшилось качество мяса птицы.

Применение фармавита-П норкам основного стада стандартного окраса в дозе 1 г в сутки с декабря по июнь позволило увеличить выход щенков на одну самку на 0,77, в пересчете на 1000 самок было дополнительно получено 770 щенков.

Молодняку норок препарат фармавиг-П в той же дозе применяли с июля по ноябрь включительно. При убое отмечали улучшение качества шкурок. В опытной группе имелось особо крупных шкурок сорта «А» - 9,5%, сорта «Б» -57,1%, в то время как в контроле шкурок сорта «А» не было, а сорта «Б» имелось 31,5%.

3.5. Разработка схем комплексного применения интерферонов с биологически активными препаратами

Разработанные нами новые БАП, относящиеся к разным классам и группам БАВ (лигавирин, биостим-К, промивит) рекомендованы для комплексного применения в ветеринарии и животноводстве. Применение лигавирина, биосгама-К и промивита в течение ряда лет в хозяйствах Кировской области и других регионах позволило значительно повысить экономическую эффективность производства молока и мяса.

Применение БАП л актирующим коровам и молодняку крупного рогатого скота в заключительный период откорма способствовало увеличению удоя молока на корову на 13,3%; выхода телят на 100 коров на 8,2%; среднесуточного прироста массы тела молодняка на 13,7-17,2% и снижению затрат кормов при производстве молока и мяса.

В таблице 6 представлены экономические и производственные показатели эффективности применения БАП в молочном скотоводстве в течение 5 лет

Комплексное применение БАП на свиноматках (п=90) сопровождалось увеличением количества поросят в помете на 20,9%; массы тела их при рождении на 30% и сохранности на 7% (таблица 7).

Применение БАП поросятам (п=150) на доращивании и ремонтным свинкам (п=100) сопровождалось достоверным увеличением среднесуточного прироста массы тела на 30,2-64,1%; сохранности на 9% и снижению заболеваемости их желудочно-кишечными, респираторными и болезнями обмена веществ на 19%.

Использование БАП при откорме свиней также положительно повлияло на производственные показатели: повысились среднесуточный прирост массы тела

на 10,6-12,4%; сохранность поросят на 10,2% и снизились заболеваемость на 18,5%.

Таблица 6

Производственные и экономические показатели эффективности применения БАП в молочном скотоводстве

Показатели 1995 г 1996 г 1997 г 1998 г 1999 г

Поголовье коров, голов 450 450 450 450 450

Количество чистопородных

коров, % 84 87 90 92 94

Среднегодовой надой, кг 3708 3862 4050 4011 4325

Средняя жирность молока, % 3,59 3,61 3,67 3,67 3,72

Приплод, голов 366 369 419 437 439

Выход телят на 100 коров, голов 81 82 93 97 97

Вынужденный убой молодняка, голов 100 92 68 58 39

Сохранность приплода, % 71,6 74,5 83,8 86,7 91,1

Животные с гинекологическими

заболеваниями, голов 258 245 219 218 187

Количество мертворожденных телят

и абортов у коров 36 33 25 24 20

Сервис период, дней 90 89 84 83 82

Расход кормов на 1 кг молока,

корм, ед.:

всего 1,13 1,09 1,06 1,03 1,02

Прибыль, тыс. руб.: 244,5 133,6 398 431 442

в т.ч. от реализации молока 68,7 24,7 192 205 260

от реализации мяса 175,8 109,1 206 226 182

Рентабельность производства (%):

молока 17,4 5,2 38,8 42,9 49,7

мяса 46,4 28,3 55,5 58,5 40,0

Применение БАП в свиноводческих хозяйствах Северо-Восточного региона привело к снижению заболеваемости поросят, повышению их сохранности до 95-97% (в контроле - 89-95%). Профилактическая и лечебная эффективность мероприятий с применением БАП составила соответственно 94,3-96,5% и 91,293,6%. Под действием препаратов отмечено улучшение репродуктивных качеств свиноматок, об этом свидетельствовало увеличение количества поросят в помете на 3-5%, а также среднесуточного прироста массы тела поросят на 12,0-17,6% и снижение затрат кормов на 3-5%. _______

"рОсГнАЦИОНАЛЬН

библиотека I С-Четербург ! ОЭ ТОО «"

Таблица 7

Влияние БАП на воспроизводительные качества свиноматок и сохранность

поросят

Показатели Группа

Контрольная Опытная

Количество свиноматок (голов) 90 90

Получено поросят (голов) 774 936

Получено поросят на 1 свиноматку (голов) 8,6 10,4

Средняя масса 1-го животного

при рождении (кг) 1,0 1,3

Масса помета при рождении (кг) 8,6 13,5

Количество поросят в помете при отъеме (гол.) 7,5 9,8

Сохранность, % 87,2 94,2

Масса тела 1-го животного при отъеме 17,5 18,6

Масса помета при отъеме (кг) 131,25 182,28

Среднесуточный прирост (г) 294,6 308,9

Всего поросят при отъеме (гол.) 675 882

Таким образом, комплексное применение новых БАП способствует повышению продуктивности, воспроизводительной способности и резистентности крупного рогатого скота и свиней, снижает затраты кормов, предохраняет молодняк от респираторной, желудочно-кишечной патологии и болезней, связанных с нарушением обмена веществ, значительно снижает тяжесть заболеваний и падеж животных, усиливает рост и развитие молодняка.

4. ВЫВОДЫ

1. Разработанные препараты лигавирин и иммуноферон с присущими им противовирусными и иммуномодулирующими свойствами целесообразно выделить в группу интерферонов и индукторов интерферона.

2. Лигавирин, полученный путем экстракции растительного сырья, подвергнутого предварительной частичной биодеградации и модификации ксилотроф-ными грибами Ркигойв ой^еаЦи, представляет собой комплекс биополимеров (модифицированные, водо-растворимые, фенолпропаноидные полимеры), содержащие пептиды - 12-21%, полисахариды - 3-5%, модифицированный водорастворимый лигнин - 75-85%.

3. Лигавирин в дозе 1000 мг/кг (в 10000 раз превышающая эффективную лечебно-профилактическую) не вызывает гибели белых мышей и крыс, препарат не обладает местным раздражающим, аллергенным и кумулятивными свойства-

ми, не вызывает эмбриотоксическое и тератогенное действие, хромосомных аберраций, генных и геномных мутаций, безвреден для телят и поросят.

4. Ингибитор сыворотки крови животных, образующийся после введения лигавирина, отвечает основным требованиям, предъявляемым к интерферону: не разрушается при прогревании (56°С в течение 1 ч), устойчив к действию кислой среды (рН=2) в течение суток и чувствителен к протеолитическому ферменту трипсину. Лигавирин, введений перентерально белым мышам и кроликам в дозе 0,1-0,5 мг/кг, индуцирует синтез «раннего» эндогенного интерферона (640-1280 ед/мл) спустя 4-6 ч, титр которого зависит от дозы и схемы применения интер-фероногена. Наиболее оптимальной дозой лигавирина для телят и поросят является 0,1 мг/кг, увеличение ее не приводит к повышению уровня интерферона. Наивысший пик продукции а-интерферона после введения индуктора у свиней (347 пкг/мл) и коров (196 пкг/мл) регистрируется через 6 ч.

5. Лигавирин в дозе 100 мкг/мл подавляет репродукцию вируса болезни Ауе-ски (штамм «ВГНКИ») на 5,4 lg ЦПД 50/мл в ЮС ПЭС. Препарат обладает противовирусной активностью в отношении вируса болезни Ауески (штамм «Ар-ский») при введении его белым мышам за 4 ч до заражения. Коэффициент защиты составляет 55%. Применение лигавирина кроликам с профилактической целью при заражении их вирусом болезни Ауески в дозе 10 ЛД/50 сопровождается увеличением инкубационного периода развития инфекции и средней продолжительности жизни животных.

6. Лигавирин оказывает выраженное иммуномодулирующее действие на ослабленные звенья клеточного и гуморального иммунитета у крупного рогатого скота и свиней, сопровождающееся увеличением количества Е-РОК, ЕАС-РОК, ФАН, ФИ, НСТ-теста, показателей общего комплемента, ЛАСК и БАСК.

7. Применение лигавирина с лечебной целью при диареях телят и поросят различной этиологии обеспечивает их высокую сохранность (соответственно 100 и 80%), сокращает падеж при чуме плотоядных, вирусных энтеритах и ста-филококкозах щенят; а при гипотрофии телят приводит к увеличению их массы тела и сохранности на 17%, нормализует показатели иммунитета, увеличивая содержание «активных» Т-лимфоцитов, Т-хелперов, БАСК, РТМЛ, содержание В-лимфоцитов, Ig G и M, снижая концентрацию «нулевых» малодифференциро-ванных лимфоцитов.

8. Препарат иммуноферон, полученный из сыворотки (плазмы) крови животных после предварительной индукции интерфероногеном, представляет собой смесь ИФН-а и ИФН-у, безвреден для лабораторных животных, телят и поросят при многократном применении.

9. Иммуноферон в гомологичной КК ПЭС подавляет репродукцию различных штаммов вируса болезни Ауески, TTC, энтеровирусов свиней на 10-100 ТЦД/50. Препарат обладает бактериостатическим свойством в отношении различных штаммов сальмонелл, эшерихий, псевдомонад и особенно стафилококков, уменьшая количество КОЕ в 10-100 раз.

10. Иммуноферон обладает выраженным антивирусным действием при введении его кроликам за 24 ч до или одновременно с заражением их вирулентным штаммом вируса болезни Ауески в дозе 2-105 ТЦД 50/мл. Применение иммуно-ферона новорожденным телятам и поросятам на 1 и 3 день жизни повышает их сохранность до 96% и в 2-4 раза увеличивает титры агглютининов у вакцинированных стельных коров, супоросных свиноматок и молодняка к эшерихиозному антигену.

11. Препарат биостим-К представляет собой продукт взаимодействия торфа с водными растворами гидроксида и карбоната натрия, жидкость темно-коричневого цвета. Массовая доля влаги - 95,7%; гуматов натрия в пересчете на сухое вещество - 3%; рН - не более 9. Препарат в дозах 30-60 мг/кг безвреден для белых мышей, максимальная доза (240 мг/кг), которую удалось ввести белым крысам, не вызывала их гибели. Многократное применение биостима-К в течение 3-х мес. в дозе 2,0 мл/кг не оказывает токсического воздействия на организм крыс. Препарат в исследованных дозах безвреден для сельскохозяйственных животных и птицы.

12. Применение биологически активной добавки биостим-К л актирующим коровам в дозе 4,0 мл на кг корма повышает надой молока в стойловый период на 16,6%; в пастбищный - на 17,5%; среднесуточный прирост молодняка на до-ращивании на 14,1% и бычков в заключительный период откорма на 21,6%. Применение препарата стельным коровам за 2 месяца до отела способствует получению от них более жизнеспособных телят и в значительной степени профи-лактирует желудочно-кишечные болезни.

13. Назначение биостима-К поросятам-отъемышам в дозе 0,4 мл/кг повышает среднесуточный прирост массы тела на 16,4%; а применение его свиноматкам во 2-ой половине супоросности сопровождается повышением массы тела и жизнеспособности поросят, снижением их заболеваемости и падежа.

14. Введение в рацион цыплятам-бройлерам биостима-К снижает падеж от болезней органов пищеварения на 10%, заболеваемость колибактериозом на 28% и повышает их среднесуточный прирост массы тела на 17,8%. Применение препарата курам-несушкам сопровождается повышением яйценоскости на 29%; яичной массы на 19,4%; качества и сортности яиц.

15. Витаминно-минеральные препараты промивит и фармавит безвредны для лабораторных и сельскохозяйственных животных. Применение промивита-К сопровождается увеличением среднесуточного прироста массы тела телят-молочников на 28,5-30,0%, снижением их заболеваемости и падежа от гипотрофии соответственно на 15 и 7%; повышением среднесуточного удоя у коров на 13,6%.

16. Обогащение биологически активными добавками промивит-С и фарма-вит-С рационов поросят на доращивании увеличивает прирост массы тела соответственно на 19,3 и 22,1%; применение их свиноматкам во 2-ой половине супоросности повышает количество живых поросят в помете на 14,1 и 22,4%. Фар-мавит-А эффективен при выращивании цыплят, повышает их сохранность на

19,4% и прирост массы тела в 1,4 раза. Применение фармавита-П норкам основного стада увеличивает выход щенков на 1000 самок на 770 голов, улучшает качество шкурок.

17. Комплексное применение биологически активных препаратов в производственных условиях позволяет повысить надой молока коров на 13,3%; жирность его на 0,57%; выход телят на 8,2%; прирост их массы тела на 13,7-17,2%; увеличивает количество поросят в помете на 20,9%, массу тела их при рождении на 30%, при откорме на 10,6-12,4%; сохранность - на 10,2% и снижет заболеваемость ремонтных свинок на 19%.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для животноводства и ветеринарии разработаны и внедрены:

1. Лигавирин ТУ 9337-001-32886413-97, согласованные с ВГНКИ ветпрепара-тов и ДВ МСХ РФ, утверждены НПФ «Агробиоцентр» и «Наставление по применению препарата Лигавирин в ветеринарии», одобрено Ветфармбиосоветом 24.04.1997 (протокол №2) и утверждено ДВ МСХ РФ 02.06.1997;

2. Иммуноферон ТУ 9337-002-32886413-98, согласованные с ВГНКИ ветпре-паратов и ДВ МСХ РФ, утверждены НПФ «Агробиоцентр и «Наставление по применению препарата Иммуноферон в ветеринарии», одобрено Ветфармбиосоветом 17.12.1997, протокол №5 и утверждено ДВ МСХ РФ 15.05.1998; № 000627-0п;

3. Биостим-К ТУ 9337-002-52333343-02, согласованные с ВГНКИ ветпрепара-тов и ДВ МСХ РФ, утверждены НПФ «Биофид» и «Наставление по применению Биостима-К в ветеринарии», одобрено Ветфармбиосоветом 28.09.1999, протокол №4 и утверждено ДВ МСХ РФ 19.03.02; (Ю1371-ОП;

4. Промивиг ТУ 9337-001-52333343-01, согласованные с ВГНКИ ветпрепаратов и ДВ МСХ РФ, утверждены НПФ «Биофид» и «Наставление по применению промивита в ветеринарии», одобрено Ветфармбиосоветом 24.05.1995, протокол №3 и утверждено ДВ МСХ РФ 25.12.2001; № (Ю1321-ОП;

5. Фармавит ТУ 9355-001-10920471-01, согласованные с ВГНКИ ветпрепаратов и ДВ МСХ РФ, утверждены ЗАО «Фармакс» и «Наставление по применению препарата Фармавит для профилактики и лечения гиповитаминозов, нарушений обмена веществ и повышения продуктивности животных и птиц», одобрено Ветфармбиосоветом 15.05.01, протокол №2 и утверждено ДВ МСХП РФ 05.07.01; Регистрационные номера: ПВР-2-2.1/00697; ПВР-2-2.1/00698; ПВР-2-2.1/00699; ПВР-2-2.1/00700; ПВР-2-2.1/701; ПВР-2-2.1/00702; ПВР-2-2.1/00703; ПВР-2-2.1/00704; ПВР-2-2.1/00705; ПВР-2-2.1/00706.

Для определения токсических, иммунологических свойств новых биологически активных препаратов и их практического применения разработаны:

1. «Методические рекомендации по испытанию индукторов интерферона на сельскохозяйственных животных». - ВГНКИ ветпрепаратов. - ВАСХНИЛ. -1986;

2. «Методические рекомендации по определению интерферонсинтезирующей способности лейкоцитов сельскохозяйственных животных». - ВГНКИ ветпрепаратов. - ВАСХНИЛ. -1986;

3. «Методы тестирования естественной неспецифической резистентности животных (Методические рекомендации). - НПФ «Агробиоцентр», Комитет сельского хозяйства Кировской области. -1997;

4. «Определение иммунологического статуса сельскохозяйственных животных (Методические рекомендации). - НПФ «Агробиоцентр», Комитет сельского хозяйства Кировской области. -1997;

5. «Методические рекомендации по проведению научно-хозяйственных опытов по применению комплексных кормовых добавок в кормлении молодняка свиней». - НИИСХ Северо-Востока. - РАСХН. -1997;

6. «Методические рекомендации по профилактике и лечению болезней минеральной и витаминной недостаточности у свиней». - НИИСХ Северо-Востока. -РАСХН. -1997;

7. «Методы тестирования иммунологической резистентности сельскохозяйственных животных». - ВНИВИПФиТ,- РАСХН. - 1999;

8. «Применение новых биологически активных препаратов в ветеринарии и животноводстве» (Рекомендации). - ВНИВИПФиТ. - РАСХН. -1999;

9. «Витаминная недостаточность пушных зверей, ее профилактика и лечение» (Рекомендации). - ВГНКИ ветпрепаратов, ВНИВИПФиТ. - РАСХН. - 2000;

10. «Лечение и профилактика инфекционных болезней собак» (Рекомендации). - ВНИВИПФиТ,- РАСХН. - 2001.

Материалы диссертационной работы нашли отражение в следующих учебных пособиях, которые могут быть использованы в учебном процессе при подготовке специалистов широкого биологического профиля, а также ветеринарных и зоотехнических специальностей:

1. «Физиология, биохимия и иммунология млекопитающих (пушных зверей)» (Допущено МСХ РФ в качестве учебного пособия для студентов высших учебных заведений по зооветеринарным специальностям). - Киров. - 2002;

2. «Изучение физиологических показателей крови животных с использованием современных биохимических и иммунобиологических тестов» (Допущено МСХ РФ в качестве учебного пособия для студентов высших учебных заведений по зооветеринарным специальностям). - Киров. - 2003;

3. «Физиологическая потребность клеточных пушных зверей в витаминах и применение витаминных препаратов в звероводстве» (Допущено МСХ РФ в качестве учебного пособия для студентов высших учебных заведений по зооветеринарным специальностям). - Киров. - 2003.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Бояринцев Л.Е., Селиванов A.B., Груздев К.Н. Методические рекомендации по испытанию индукторов интерферона на сельскохозяйственных животных. - ВГНКИ ветпрепаратов. -ВАСХНИЛ. - М. - 1986.-12 с.

2. Бояринцев Л.Е., Селиванов A.B., Груздев К.Н. Методические рекомендации по определению интерферонсинтезирующей способности лейкоцитов сельскохозяйственных животных. - ВГНКИ ветпрепаратов. - ВАСХНИЛ. -М,- 1986. -11 с.

3. Селиванов A.B., Бояринцев Л.Е., Груздев К.Н. Испытание индукторов интерферона на животных. // Ветеринария. -1987. - №10. - с. 29-31.

4. Бояринцев Л.Е. Неспецифическая профилактика и лечение вирусных болезней животных с помощью индукторов интерферона. // Тез. докл. науч-но-техн. конф. «Роль молодых ученых и специалистов с./х в ускорении научно-техн. прогресса». - Киров. -1988. - с. 6-7.

5. Бояринцев Л.Е. Определение интерферониндуцирующей активности индукторов интерферона на кроликах. И Тез. докл. Республ. семинара. «Использование интерферонов в ветеринарии». - Киев. -1989. - с. 4-5.

6. Шахов А.Г., Положенко Э.Г., Бояринцев Л.Е., Груздев К.Н. Эффективность иммуноферона при диареях поросят. // Тез. докл. Республ. семинара. «Использование интерферонов в ветеринарии». - Киев. - 1989. - с. 3435.

7. Бояринцев Л.Е. Экономическая эффективность применения индукторов интерферона для предотвращения массового отхода зверей от вирусных инфекций. // Сб. научи, тр. ВНИИОЗ. «Повышение экономической эффективности производства звероводческой пушнины». - Киров. - 1989. - с. 35-37.

8. Бояринцев Л.Е. Перспективы применения индукторов интерферона в звероводстве и кролиководстве. // Сб. научн. тр. НИИПЗК. «Биологически активные вещества в звероводстве, кролиководстве и пантовом оленеводстве». - М. - 1989. - т. 36. - с. 82-88.

9. Бояринцев Л.Е. Методы испытания индукторов интерферона, перспективных для использования в звероводстве и кролиководстве. // Сб. научн. тр. НИИПЗК. «Биологически активные вещества звероводстве, кролиководстве и пантовом оленеводстве». - М. -1989. - т. 36. - с. 88-95.

Ю.Бояринцев Л.Е. Защитное действие дсРНК при болезни Ауески. // Изучение индуктора интерферона - дсРНК - в различных биологических системах. -Рига. - «Зинатне». -1989. - с. 59-67.

11.Бояринцев Л.Е. Использование интерферонов в ветеринарии. Обзорно-аналитический материал. - Киров. -1990. - 24 с.

12.Бояринцев Л.Е., Ивановский A.A. Возрастные особенности естественной резистентности крупного рогатого скота. // «Матер, научно-производ.

конф. «Внедрение достижений науки, техники и передового опыта на уровень современных требований». - Киров. - 1990. - с. 76.

13.Бояринцев JI.E., Ивановский A.A. Методические аспекты изучения активности факторов неспецифического иммунитета у телят. // Матер, научно-производ. конф. «Внедрение достижений науки, техники и передового опыта на уровень современных требований». - Киров. - 1990. - с. 78-79.

14.Шахов А.Г., Бояринцев JI.E., Положенко Э.Г. Способ определения неспецифической резистентности организма животных. // Сб. научн. тр. ВНИИНБЖ. «Биологические основы и технологические приемы повышения устойчивости с./х. животных к незаразным болезням». - Воронеж. -1990.-с. 102-108.

15.Бояринцев JI.E. Перспективы применения индукторов интерферона в ветеринарии. // Тез. докл. Всесогоз. научно-техн. конф. «Современные проблемы иммунологии, биотехнологии, генной и клеточной инженерии в ветеринарной медицине». - М. -1990. - с. 152-153.

16.Варганов А.И., Конопельцев И.Г., Бояринцев J1.E., Парфенов В.В. Чувствительность микроорганизмов, вызывающих маститы коров, к интерферону. // Межвузов, сб. научн. тр. «Разработка эффективных методов диагностики особо опасных инфекционных болезней животных». - Казань. -1990.-с. 59-61.

17.Бояринцев Л.Е. Интерфероновый статус норок в норме и при патологии. // Тез. докл. международ, симп. «Физиологические основы повышения продуктивности хищных пушных зверей». -Петрозаводск. -1991. - с. 12.

18.Шахов А.Г., Положенко Э.Г., Парфенов В.В., Бояринцев Л.Е. Методика получения интерферонов животных. // Сб. научн. тр. ВНИВИПФиТ. «Научные основы профилактики и лечения незаразных болезней с./х. животных». - Воронеж. -1991. - с. 122-125.

19.Шахов А.Г., Положенко Э.Г., Бояринцев Л.Е., Шпагонов Ю.П. Методические аспекты изучения индукторов интерферона для применения в ветеринарии. // Сб. научн. тр. ВНИВИПФиТ. «Важнейшие итоги исследований по изучению заболеваний с./х. животных незаразной этиологии, их профилактика и лечение». - Воронеж. -1992. - с. 137-139.

20.Бояринцев Л.Е., Исупов Б. А. Разработка и применение профилактической минерально-витаминной добавки «Промивит» в свиноводстве. //Матер, докладов Регион, межвузов, научн. конф. «Вопросы селекции и технологии производства продукции животноводства, охотоведения и природопользования». -Киров. - 1995. - с. 95-96.

21.Шахов А.Г., Бояринцев Л.Е., Клименко В.В. Методические принципы тестирования интерферонового статуса с.-х. животных. // Матер, международ. координ. совещания. «Экологические проблемы патологии, фармакологии и терапии животных». - Воронеж. - 1997. - с. 155-159.

22.Шахов А.Г., Бояринцев Л.Е., Клименко В.В. Интерфероновый статус животных в норме и при различных заболеваниях. // Матер, международ, ко-

ордин. совещания. «Экологические проблемы патологии, фармакологии и терапии животных». - Воронеж. - 1997. - с. 159-161.

23.Бояринцев JI.E., Клименко В.В., Хапугин В.Г. Методы тестирования естественной неспецифической резистентности животных /Методические рекомендации/ - НПФ «Агробиоценгр». -Киров. - 1997. - 45 с.

24.Бояринцев JI.E., Клименко В.В., Хапугин В.Г. Определение иммунологического статуса сельскохозяйственных животных Методические рекомендации/ - Киров. 1997. - 48 с.

25.Бояринцев JI.E., Клименко В.В., Хапугин В.Г., Голев JI.H. Методические рекомендации по проведению научно-хозяйственных опытов по применению комплексных кормовых добавок в кормлении молодняка свиней. -НИИСХ Северо-Востока. - РАСХН - 1997,- 35 с.

26.Бояринцев JI.E., Клименко В.В., Хапугин В.Г., Голев Л.Н. Методические рекомендации по профилактике и лечению болезней минеральной и витаминной недостаточности у свиней. - НИИСХ Северо-Востока. - РАСХН. -1997.-55 с.

27.Голев Л.Н., Клименко В.В., Бояринцев Л.Е., Хапугин В.Г. Использование биологически активных препаратов в свиноводстве. // Свиноводство. -1998.-№2.-с. 13-15.

28.Бояринцев Л.Е., Клименко В.В. Лигавирин - новый высокоактивный супериндуктор интерферона и иммуномодулятор для животных. // Матер, научно-производ. конф., посвященной 190-летию высшего ветеринарного образования в России и 100-летию ветеринарной науки. - С.-Петербург. -1998.-ч. 1. — с. 45-46.

29.Бояринцев Л.Е., Клименко В.В., Груздев К.Н. Разработка и испытание иммунобиологического препарата иммуноферон. // Тез. докл. научн. конф. «Теория и практика использования биологически активных веществ в животноводстве». -Киров. - 1998. - с. 13-14.

30.Бояринцев Л.Е., Клименко В.В., Шардаков В.И. Лигавирин - высокоактивный супериндуктор интерферона и иммуномодулятор для животных. // Тез. докл. научн. конф. «Теория и практика использования биологически активных веществ в животноводстве». - Киров. - 1998. - с. 14-15.

31.Бояринцев Л.Е., Клименко В.В., Тютюнник H.H. Интерфероновый статус пушных зверей в норме и при патологии. // Матер. П международ, симп. «Физиологические основы повышения продуктивности хищных пушных зверей». - Петрозаводск. -1998. - с. 16-17.

32.Бояринцев Л.Е., Клименко В.В., Тютюнник H.H. Определение иммунологического статуса у норок-гипотрофиков и его иммунокоррекция. // Матер. П международ, симп. «Физиологические основы повышения продуктивности хищных пушных зверей». - Петрозаводск. - 1998. - с. 36.

33.Клименко В.В., Бояринцев Л.Е., ДомскийИ.А. Экспериментальное изучение препарата лигавирин при алеутской болезни норок. // Матер. П меж-

дународ. симп. «Физиологические основы повышения продуктивности хищных пушных зверей». - Петрозаводск. - 1998. - с. 57-58.

34.Бояринцев Л.Е., Шахов А.Г., Ануфриев А.И. Методы тестирования иммунологической резистентности сельскохозяйственных животных. - ВНИ-ВИПФиТ. - РАСХН. -1999. -с.56 с.

35.Бояринцев Л.Е., Шахов А.Г., Ануфриев А.И. Применение новых биологически активных препаратов в ветеринарии и животноводстве /Рекомендации/. — ВНИВИПФиТ. - РАСХН. - 1999. - 41 с.

36.Клименко В.В., Бояринцев Л.Е., Беляева Т.А. Влияние пробиотиков на рост и развитие домашних животных. // Тез. Всеросс конф. с международ, участием. «Пробиотики и пробиотические продукты в профилактике и лечении наиболее распространенных заболеваний человека». - М. - 1999. -с. 62.

37.Хапугин В.Г., Клименко В.В., Бояринцев Л.Е., Леонтьев Ю.Н., Кассин В. А. Широкий производственный опыт использования пробиотиков в животноводстве Кировской области. // Тез. Всерос. конф. с международ, участием. «Пробиотики и пробиотические продукты в профилактике и лечении наиболее распространенных заболеваний человека». - М. - 1999. - с. 77.

38.Шардаков В.И., Хапугин В.Г., Клименко В.В., Бояринцев Л.Е., Груздев К.Н., Малик Н.И. Влияние пробиотиков на иммунологический статус животных. // Тез. Всерос. конф. с международ, участием «Пробиотики и пробиотические продукты в профилактике и лечении наиболее распространенных заболеваний человека». - М. -1999. - с. 78.

39.Шахов А.Г., Бояринцев Л.Е., Груздев К.Н. Иммуноферон - новый биологический препарат для животных. // Матер, международ, научно-производ. конф., посвященной 100-летию со дня рождения член-корр. ВАСХНИЛ В.Т. Котова. «Экологические аспекты эпизоотологии и патологии животных». - Воронеж. - 1999. - с. 234-236.

40.Шахов А.Г., Бояринцев Л.Е., Клименко В.В. Ингерферониндуцирующая и иммуномодулирующая активность лигавирина. // Матер, международ, на-учно-проювод. конф., посвященной 100-летию со дня рождения член-корр. ВАСХНИЛ В.Т. Котова. "«Экологические аспекты эпизоотологии и патологии животных"» - Воронеж. - 1999. - с. 236-238.

41 .Бояринцев Л.Е., Карпов В.В. Иммунобиологический статус телят разной степени физиологической зрелости. // Матер, международ, научн. конф., посвященной 70-летию образования зоофака. «Незаразные болезни животных». - Казань. - 2000. - с. 69-71.

42.Бояринцев Л.Е., Тютюнник Н.Н., Груздев К.Н. Тестирование интерферо-нового статуса у пушных зверей. // Сб. научн. тр. Института биологии КНЦ РАН «Проблемы экологической физиологии пушных зверей». - Петрозаводск. - 2000. - в. 2. - с. 59-65.

43.Бояринцев Л.Е., Тютюнник H.H., Клименко В.В., Шахов А.Г. Оценка иммунного статуса у взрослых норок. // Сб. научн. тр. Института биологии КНЦ РАН «Проблемы экологической физиологии пушных зверей». -Петрозаводск. - 2000. - в. 2. - с. 65-71.

44.Бояринцев Л.Е., Шахов А.Г. Результаты комплексного применения интерферона с другими биологически активными препаратами. // Матер, международ, конф., посвященной 30-летию ВНИВИПФиТ «Теоретические и практические аспекты возникновения и развития болезней животных и защита их здоровья в современных условиях». - Воронеж. - 2000. - т. 2. -с. 135-137.

45.Бояринцев Л.Е., Клименко В.В., Хапугин В.Г. К вопросу о применении препаратов интерферона и интерфероногенов в ветеринарии. // Сельскохозяйственная биология. - 2000. - №6. - с. 114-117.

46.Газизов В.З., Бояринцев Л.Е., Карпов В.В., Казаков B.C. Определение иммунологических показателей телят при гипотрофии. // Сб. научн. тр. ВГСХА. «Аграрная наука Северо-Востока Европейской части России на рубеже тысячелетий - состояние и перспективы». - Киров. - 2000. - т. 3. -ч. 2.-с. 17-18.

47.Бояринцев Л.Е. Комплексное применение иммуностимулятора и других биологически активных препаратов на молодняке. // Сб. научн. тр. «Современные вопросы ветеринарной медицины и биологии». - Уфа. - 2000. -с. 52-53.

48.Бояринцев Л.Е., Шахов А.Г., Ануфриев А.И. Витаминная недостаточность пушных зверей, ее профилактика и лечение. /Рекомендации/ -ВГНКИ ветпрепаратов. - ВНИВИПФиТ. - РАСХН. - 2000. - 70 с.

49.Бояринцев Л.Е., Торопов В.В. Применение биостима при гипотрофии телят. // Матер, международ, научн. конф., посвященной 70-летию образования зооинженерного факультета. «Незаразные болезни животных». -Казань. - 2000. - с. 67-69.

50.Бояринцев Л.Е., Шахов А.Г., Ануфриев А.И. Лечение и профилактика инфекционных болезней собак /Рекомендации/ - ВИНИВИПФиТ. -РАСХН.-2001.-33 с.

51.Бояринцев Л.Е.. Иммуномодулирующая активность лигавирина при гипотрофии. // Ветеринария. - 2002. - №9. - с.41-44.

52.Газизов В.З., Жданов С.Л., Бояринцев Л.Е.. Физиология, биохимия и иммунология млекопитающих (пушных зверей). /Допущено МСХ РФ в качестве учебного пособия для студентов высших учебных заведений по зооветеринарным специальностям/. - Киров. - 2002. - 280 с.

53.Бояринцев Л.Е., Газизов В.З., Жданов С.Л. и соавт. Изучение физиологических показателей крови животных с использованием современных биохимических и иммунобиологических тестов. (Допущено МСХ РФ в качестве учебного пособия для студентов высших учебных заведений по специальности «Зоотехния»), -Киров. - 2003. - 56 с.

54.Бояринцев Л.Е., Газизов В.З., Жданов С.Л. и соавт. Физиологическая потребность клеточных пушных зверей в витаминах и применение витаминных препаратов в звероводстве. (Допущено Министерством сельского хозяйства в качестве учебного пособия для студентов высших учебных заведений по специальности «Зоотехния»), -Киров. - 2003. - 72 с.

Подписано в печать 14.04.2003. Уч.-изд.л. 2,01.

Тираж 110._Заказ 5._

Отдел оперативной полиграфии Кировского ЦНТИ 610000, г.Киров, ул.Энгельса, 67

2og>£-/)

Актуальность темы. Постановлением координационного совещания Юбилейной Международной конференции «Теоретические и практические аспекты возникновения и развития болезней животных и защита их здоровья в современных условиях», посвященной 30-летию создания Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института патологии, фармакологии и терапии (3-4 октября 2000 г) были определены основные направления исследований болезней молодняка сельскохозяйственных животных:

- разработка комплексной диагностики иммунодефицитных состояний молодняка всех видов животных и эффективных лечебно-профилактических и иммунокоррегирующих препаратов для предупреждения патологии органов пищеварения и дыхания и терапии больных животных;

- создание экологически безопасной системы ветеринарной защиты молодняка от нарушений обмена веществ и возникающих на этой основе желудочно-.кишечных л респираторных л факторных инфекционных болезней с применением высокоэффеюзиадых лечебно-профилактических я иммувомпдулирую-щих препаратов.

Инфекционные заболевания животных вирусной и бактериальной этиологии, -ассоциированные заболевания потпгугиологической природы, незаразные бопезни животных приводят .к значительным потерям, вследствие падежа, заболеваемости, потери продуктивности. Многие вирусы, бактерии и другие патогенные микроорганизмы, являющиеся причиной ассоциативных вирусяо-бактериальных заболеваний телят, поросят, сельскохозяйственной лгацы, клеточных пушных зверей, болезней невыясненной этиологии, создают объектив

Вяжним этиологическим фактором итншсмгтетти» инфвуципнниу болезней является снижение устойчивости организма животного х возбудителям болезней, возникающее на фонеиммунодефицитов различной этиологии. средств специфической л леспецифической

Анализ причин заболеваемости животных в последние годы показывает, что на фоне спорадических случаев, небольших вспышек или эпизоотий отдельных классических инфекций и появления новых малоизученных болезней основной ущерб животноводству наносят факторные инфекции, клинически проявляющиеся у маточного поголовья нарушениями воспроизводительной функции, а у молодняка диарейным и респираторными синдромами. Практически повсеместная энзоотия зз стационарность факторных инфекций свидетельствуют о том, что они не случайны и возникают как следствие постоянно присутствующих в среде обитания животных неблагоприятных факторов, закономерно вызывающих неспецифические изменения в .организме, и обязательного носитедьства у животных возбудителей. Последние выполняют роль конечного эффектора (разрешающего фактора), определяя ншодогически дифференцируемую патологию [264,265].

Эти проблемы, которые стоят в таком относительно благополучном регионе как Центрально-Черноземная зона, имеют место и в Северо-Восточном регионе Нечерноземной зоны РФ, к которому относятся Кировская, Костромская, Нижегородская, Свердловская и Пермская области, республики Коми, Марий Эл, Мордовия, Чувашия, Удмуртия. Серьезную угрозу в регионе представляют инфекционные желудочшькшпечньле л респираторные болезни .молодняка. Широкое распространение получили вирусные и смешанные вирусно-бактериапьные инфекции молодняка, который рождается гипотрофичным, заболеваемость телят раннего возраста достигает более 30 %, в падеж - 40-50%.

Широкое бессистемное применение антибиотиков, дихрофуранов, хульфа-шшамидных препаратов (без учета чувствительности к ним микроорганизмов, циркулирующих в хозяйствах) не всегда дает положительный результат, но, как правило, приводит к угнетению иммунного ответа у животных.

В связи с вышеизложенным актуальным становится применение препаратов, обладающих свойствами иммуномодудяторов, проявляющих противовирусное я антибактериальное ^действие непосредственно или опосредованно за счет стимуляции иммунной системы, препаратов, повышающих иммуногенность существующих вакцин.

В настоящее время большие надежды связывают с препаратами интерферо-нов, являющихся неспецифическими средствами защиты организма от вирусных инфекций. Для интерферонов характерными являются противовирусные, иммуностимулирующие, антибактериальные и антипролиферативные свойства.

Интерферонизация может быть пассивной, когда организм насыщается экзогенным, полученным в другой биологической системе готовым препаратом интерферона и активной, когда при помощи различных стимуляторов (индукторов) организм сам вырабатывает собственный эндогенный интерферон.

Использование интерферонов в комплексе лечебно-профилактических мероприятий не следует противопоставлять их вакцинам, сывороткам и другим биологическим и фармакологическим препаратам. В настоящее время актуальным является дальнейшее углубленное изучение показаний к применению интерферонов и индукторов его образования, отработка схем и методов их введения, в том числе и в комплексе с другими биологически активными препаратами.

Концепция существования в организме животных высококомпетентной системы интерферона, сформировавшейся в процессе эволюции, и многообразие обнаруженных и изученных к настоящему времени физиологических функций интерферона несомненно указывает на их контрольно-регуляторную роль в сохранении гомеостаза [80].

По значимости система ИФН приближается к системе иммунитета, а по универсальности даже превосходит ее [77]. Именно универсальность интерферона, делающего его важнейшим фактором неспецифической резистентности, послужила основанием для предложения интегрального понятия «интерфероно-вый статус».

Необходимость исследования динамики изменений ингерферонового статуса (ИФН-стаггуса) при испытаниях новых препаратов интерферона и иммуно-модуляторов, разработке схем их применения диктуется концептуальным подходом, предусматривающим правильное и рациональное использование сисгемы интерферона (ИФН) как терапевтического средства, формирующего неспецифическую резистентность к вирусным заболеваниям в норме и действующую при естественном выздоровлении при патологии.

Роль факторов (БАВ), способствующих повышению питательности и усвоению корма, всегда была в центре внимания ученых и животноводов. Продуктивность животных зависит не только от наличия в достаточном количестве в рационе протеши, жиров я углеводе», но и от количества и соотношения витаминов, макро- и микроэлементов и других биологически активных веществ (БАВ). Одной из главных причин возникновения факторных инфекций является необеспеченность высокопродуктивных животных полноценными кормами и несоответствие качества кормов физиологическим потребностям животных, выражающееся феноменом антропогенных аномалий микроэлементного состава почв, воды, кормов, микробиоценоза почв, пищеварительного тракта животных [265]. Установлено также, что при использовании большого числа БАВ с разными свойствами может усиливаться или ослабляться их активное начало, стимулируются или ингибируются первоначальные свойства основных компо-чййнгизв«оршэв «"темташаа»изменяете* егшеяа» их использования в процессе образования продукции.

Учитывая вышеизложенное, для профилактики массовых болезней животных основные усилия целесообразно направить на стабилизацию и оптимизацию кормовой базы животноводства, за счет введения в рацион премиксов, содержащих БАВ и препаратов, повышающие резистентность организма и обладающих лечебно-профилактическими свойствами.

Разработка схем комплексного применения иммуностимуляторов (препаратов интерферона) в комбинации с другими БАЛ позволит решить многие вышеперечисленные проблемы ветеринарии и животноводства.

Учитывая перспективность данной группы препаратов, в соответствии с требованиями к лекарственным средствам (приказ ДВ МСХиП РФ № 31 от 23.10.95) нами проведены комплексные исследования по выяснению фармакологических, токсикологических и биологических свойств препаратов лигавирин, иммуноферон, биостим, промивит, фармавит с целью их внедрения в ветеринарную практику.

Работа выполнена в соответствии с государственным заданием и была включена в следующие темы:

- Hill ВГНКИ ветпрепаратов «Изучить активность индукторов интерферона на животных», № гос. регистрации 01840063396 за 1981-1985 гг.;

- НТО «Интерферон», раздел 02.17 Д. ВГНКИ ветпрепараггов за 1986-1990 гг., задание 02.13.Д. Всесоюзной межведомственной программы «Интерферон»;

- Общесоюзной научно-технической программы «Молодняк»; «Разработать и внедрить комплексные экологически чистые системы получения и выращивания высокорезистентного молодняка с/х животных», раздел 03.26.М ВНИИНБЖ за 1990-1995 гг.;

- Программа фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению Агропромышленного комплекса РФ на 1996-2000 гг. РАСХН, по разделу «Ветеринарная медицина» 04. «Разработать общую теорию патологии сельскохозяйственных, промысловых и диких млекопитающих, шиц, рыб, пчел и на ее основе создать экологически чистую систему их ветеринарной защиты».

Цель исследований. Разработать и изучить препараты интерферонов (лига-вирин, иммуноферон), биологически активную добавку биостим-К и витамин-но-минеральные добавки промивит и фармавит и внедрить их в ветеринарную практику и животноводство.

В соответствии с поставленной целью решались следующие задачи:

- разработать технологию получения лигавирина, иммуноферона, биостима, промивига и фармавита;

- изучить токсические свойства препаратов;

- изучить интерфероногенные, противовирусные и иммуностимулирующие свойства препаратов интерферона;

- разработать показания к применению препаратов;

- разработать схему комплексного применения препаратов интерферона с биологически активными добавками.

Научная новизна. Впервые теоретически и экспериментально обоснована возможность применения биологически активных препаратов с разным механизмом действия для повышения естественной резистентности и иммунобиологической реактивности организма, сохранности и продуктивности животных, в том числе згатерферояов (лигавирин и иммуноферон) для профилактики инфекционной и незаразной патологии л лечения больных животных; биостима для профилактики нарушений обмена веществ, повышения естественной резистентности и продуктивности животных, профилактики желудочно-кишечных заболеваний и лечения больных животных; промивита и фармавита - для нормализации обменных процессов, профилактики и лечения гипо- и авитаминозов, гипомикроэлементозов. Изучен механизм действия препаратов.

Установлено, что лигавирин и иммуноферон обладают противовирусными и иммуномодулирующими свойствами; препараты биостим, промивит и фарма-вит нормализуют обменные процессы у животных.

Пракшчсстсая значимость работы. На основании результатов исследований разработаны и утверждены нормативная документация, регламентирующая технологический процесс производства препаратов, показатели качества и методы их контроля, наставления по применению в ветеринарии, которые одобрены Ветфармбиосоветом и утверждены Департаментом ветеринарии Мин-сельхоза РФ и технические условия, согласованные с ВГНКИ ветпрепаратов и

- «Наставление по применению препарата лигавирин в ветеринарии», одобрено Вегфармбиосовегом (протокол № 2 от 24.04.97), утверждено ДВ МСХ РФ 02.06.97 и ТУ 9337-001-32886413-97, согласованные с ДВ МСХ РФ и ВГНКИ ветпрепаратов, утверждены НПФ «Агробиоцентр»;

- «Наставление по применению препарата иммуноферон в ветеринарии», одобрено Ветфармбиосоветом (протокол № 5 от 17.12.97) № 000627-0, утверждено ДВ МСХ РФ 15.05.98 и ТУ 9337-002-32886413-98, согласованные с ДВ МСХ РФ и ВГНКИ ветпрепаратов, утверждены НПФ «Агробиоцентр»;

Наставление по применению Биостима-К в ветеринарии», одобрено Ветфармбиосоветом (протокол № 4 от 28.09.99) № 001371-011, утверждено ДВ МСХ РФ 19.03.02 и ТУ 9337-002-52333343-02, согласованные с ДВ МСХ РФ и ВГНКИ ветпрепаратов, утверждены НПФ «Биофид»;

- «Наставление по применению промивита в ветеринарии», одобрено Ветфармбиосоветом (протокол № 3 от 24.05.95) № 001321-0п, утверждено ДВ МСХ РФ 25.12.01 и ТУ 9337-001-52333343-01, согласованные с ДВ МСХ РФ и ВГНКИ ветпрепаратов, утверждены НПФ «Биофид»;

- «Наставление по применению препарата фармавит для профилактики и лечения гиповитаминозов, нарушений обмена веществ и повышения продуктивности животных и птиц», одобрено Ветфармбиосоветом (протокол № 2 от 15.05.2001 г.). Регистрационные номера: ПВР-2-2.1/00697; ПВР-2-2.1/00698; ПВР -2-2.1/00699; ПВР-2-2.1ДЮ700; ПВР-2-2.1/00701; ПВР -2-2.1/00702; ПВР -2-2.1/00703; ПВР-2.2.1/00704; ПВР-2-2.1/00705; ПВР-2.2.1/00706. Утверждено ДВ МСХ РФ 05.07. 2001 г и ТУ 9355-001-10920471-01, согласованные с ДВ МСХ РФ и ВГНКИ ветпрепаратов, утверждены ЗАО «Фармакс».

По результатам лабораторных исследований, широкого производственного испытания и экспертной оценки препаратов и документации Ветфармбиосоветом и ВГНКИ ветпрепараггов, а также обобщения данных литературы, разработаны:

- Методические рекомендации по определению интерферонсингезирующей активности лейкоците« сельскохозяйственных животных. - ВГНКИ ветпрепаратов. - ВАСХНИЛ. -1986;

- Методические рекомендации по испытанию индукторов интерферона на сельскохозяйственных животных. - ВГНКИ ветпрепаратов. - ВАСХНИЛ. -1986;

- Методы тестирования естественной неспецифической резистентности животных /Методические рекомендации/. - НПФ «Агробиоцентр», Комитет сельского хозяйства Кировской области. -1997;

- Определение иммунологического статуса сельскохозяйственных животных /Методические рекомендации/. — НПФ «Агробиоцентр», Комитет сельского хозяйства Кировской области. - 1997;

- «Методические рекомендации по проведению научно-хозяйственных опытов по применению комплексных кормовых добавок в кормлении молодняка свиней». — НПФ «Агробиоцентр», НИИСХ Северо-Востока. — РАСХН. -1997;

- «Методические рекомендации по профилактике и лечению болезней минеральной и витаминной недостаточности у свиней». - НПФ «Агробиоцентр», НИИСХ Северо-Востока. - РАСХН. -1997;

Методы тестирования иммунологической резистентности сельскохозяйственных животных» /Методические рекомендации/. — ВНИВИПФиТ. -РАСХН. -1999;

- «Применение новых биологически активных препаратов в ветеринарии и животноводстве» /Рекомендации/. - ВНИВИПФиТ. - РАСХН. - 1999;

- «Витаминная недостаточность пушных зверей, ее профилактика и лечение» /Рекомендации/. -ВГНКИ ветпрепаратов, ВНИВИПФиТ. -РАСХН. - 2000.

- «Лечение и профилактика инфекционных болезней собак» /Рекомендации/. -ВНИВИПФиТ. - РАСХН. -2001;

- «Физиология, биохимия и иммунология млекопитающих (пушных зверей)» (Допущено МСХ РФ в качестве учебного пособия для студентов высших учебных заведений по зооветеринарным специальностям). - Киров. - 2002;

- «Изучение физиологических показателей крови животных с использованием современных биохимических и иммунобиологических тестов» (Допущено МСХ РФ в качестве учебного пособия д ля студентов высших учебных заведений по зооветеринарным специальностям). - Киров. - 2003;

- «Физиологическая потребность клеточных пушных зверей в витаминах и применение витаминных препаратов в звероводстве» (Допущено МСХ РФ в качестве учебного пособия для студентов высших учебных заведений по зооветеринарным специальностям). — Киров. — 2003.

Указанные методические рекомендации и учебные пособия позволяют объективно оценивать биологические и токсические свойства препаратов, а также совершенствовать все этапы испытания и внедрения в практику ветеринарной медицины высокоэффективных и безопасных средств, которые необходимы д ля ^следователей, лршодящих скрининг довых биологически активных веществ.

Препарат Фармавит, не имеющий аналогов, удостоен золотой и платиновой медалей Госстандарта РФ.

Материалы диссертационной работы внедрены з учебный процесс при чте-жи курса «Физиология сельскохозяйственных животных» на биологическом факультете Вятской государственной сельскохозяйственной академии и могут быть использованы в других вузах при подготовке специалистов биологического, ветеринарного и зоотехнического профиля. Основные дмпжстю. выносимые на защиту:

- о биологической активности препаратов интерферона (лигавирин, иммуно-феронХ биостима, промивита и фармавита;

- профилактическая и лечебная эффективность лигавирина, иммуноферона, биосгома, лромивига л фармавита лри инфекционных и незаразных болезнях животных;

- о комплексном применении препаратов интерферона с биологически активными добавками з ветеринарии

Адвобашд виулышд ассшмнццй. Материалы исследований доложены и обсуждены на: заседании секции «Эпизоотология и профилактика инфекционных болезней животных» отделения ветеринарии ВАСХНИЛ, Москва, 1985; Региональном симпозиуме социалистических стран по интерферону, Юрмала, 3988; Республиканском семинаре «Использование интерферонов в ветеринарии», Киев, 1999; I Всесоюзной научной конференции «Биологически ты в профилактике и лечении наиболее распространенных заболеваний человека», Москва, 1999; Международной научно-производственной конференции посвященной 100-летию со дня рождения члена-корр. ВАСХНИЛ В.Т. Котова, Воронеж, 1999; Международной научной конференции, посвященной 70-летию образования зооинженерного факультета, Казань, 1999; Юбилейной конференции посвященной 70-летию зооинженерного факультета ВГСХА, Киров, 2000; Международной конференции «Теоретические и практические аспекты возникновения и развития болезней животных и защита их здоровья в современных условиях», посвященной 30-летию ВНИВИПФиТ, Воронеж, 2000; I Международной конференции «Современные вопросы ветеринарной медицины и биологии», Уфа, 2000; Международной научно-производственной конференции по вопросам ветеринарной медицины и животноводства, Казань, 2001; Заседании секции «Незаразные болезни животных» отделения ветеринарной медицины РАСХН, Воронеж, 1999; Заседании секции «Патологии, фармакология и терапия» отделения ветеринарной медицины РАСХН, Воронеж, 2000; научно-практической конференции «Современные проблемы природопользования, охотоведения и звероводства», посвященной 80-летию ВНИИОЗ, Киров, 2002; Международной конференции «Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях», Воронеж, 2002. активные вещества в звероводстве, кролиководстве и оленеводстве», Москва, 1989; Научно-производственной конференции «Внедрение достижений науки, передового опыта на уровень современных требований», Киров, 1990; Всесоюзной научно-технической конференции «Современные проблемы иммунологии, биотехнологии, генной и клеточной инженерии в ветеринарной медицине», Н. Новгород, 1990; Всесоюзной конференции «Физиология и продуктивность животных - решение продовольственной программы СССР», Таллин, 1990; Научно-производственной конференции «Проблемы интенсификации производства молока», Минск, 1991; Международном симпозиуме «Физиологические основы повышения продуктивности хищных пушных зверей», Петрозаводск, 1991; Региональной межвузовской научной конференции, Киров, 1995; I Всероссийском симпозиуме по машинному доению сельскохозяйственных животных, Оренбург, 1995; Всероссийской конференции, посвященной 100-летию Вятской с/х опытной станции, Киров, 1995; Международном координационном совещании «Экологические проблемы патологии, фармакологии и терапии животных», Воронеж, 1997; Всесоюзной научной конференции, посвященной 75-летию ВНИИОЗ, Киров, 1997; Международной межвузовской научно-практической конференции «Региональные проблемы прикладной экологии», Белгород, 1998; Научно-практической конференции «Эффективность развития свиноводства в современных условиях рыночной экономики», Москва, 1998; П Международном симпозиуме «Физиологические основы повышения продуктивности хищных пушных зверей», Петрозаводск, 1998; Научно-производственной конференции посвященной 190-летию высшего ветеринарного образования в России и 100-летию ветеринарной науки Санкт-Петербурга, С.-Петербург, 1998; Научно-производственной конференции «Теория и практика использования БАВ в животноводстве», Киров, 1998; Международной научно-практической конференции «Проблемы патологии, санитарии и бесплодия в животноводстве», посвященной 100-летаю со дня рождения академиков АН Белоруссии Х.С. Горегляда и М.К. Юсковца, Минск, 1998; Всероссийской конференции с Международным участием «Пробиотики и пробиотические продук

ГЛАВА 9. ВЫВОДЫ

1. Разработанные препараты лигавирин и иммуноферон с присущими им противовирусными и иммуномодулирующими свойствами целесообразно выделить в группу ингерферонов и индукторов интерферона.

2. Лигавирин, полученный путем экстракции растительного сырья, подвергнутого предварительной частичной биодеградации и модификации ксилотроф-ными грибами Pleurotus ostreatus, представляет собой комплекс биополимеров (модифицированные, водо-растворимые, фенолпропаноидные полимеры), содержащие пептиды - 12-21%, полисахариды - 3-5%, модифицированный водорастворимый лигнин - 75-85%.

3. Лигавирин в дозе 1000 мг/кг (в 10000 раз превышающую эффективную лечебно-профилактическую) не вызывает гибели белых мышей и крыс, препарат не обладает местным раздражающим, аллергенным и кумулятивными свойствами, не вызывает эмбриотоксическое и тератогенное действие, хромосомных аберраций, генных и геномных мутаций, безвреден для телят и поросят.

4. Ингибитор сыворотки крови животных, образующийся после введения ли-гавирина, отвечает основным требованиям, предъявляемым к интерферону: не разрушается при прогревании (56°С в течение 1 ч), устойчив к действию кислой среды (рН=2) в течение суток и чувствителен к протеолитическому ферменту трипсину. Лигавирин, введений перентерально белым мышам и кроликам в дозе 0,1-0,5 мг/кг, индуцирует синтез «раннего» эндогенного интерферона (6401280 ед/мл) спустя 4-6 ч, титр которого зависит от дозы и схемы применения интерфероногена. Наиболее оптимальной дозой лигавирина для телят и поросят является 0,1 мг/кг, увеличение ее не приводит к повышению уровня интерферона. Наивысший пик продукции а-интерферона после введения индуктора у свиней (347 пкг/мл) и коров (196 пкг/мл) регистрируется через 6 ч.

5. Лигавирин в дозе 100 мкг/мл подавляет репродукцию вируса болезни Ауе-ски (штамм «ВГНКИ») на 5,4 lg ЦПД 50/мл в КК ПЭС. Препарат обладает противовирусной активностью в отношении вируса болезни Ауески (штамм «Арский») при введении его белым мышам за 4 ч до заражения. Коэффициент защиты составляет 55%. Применение лигавирина кроликам с профилактической целью при заражении их вирусом болезни Ауески в дозе 10 ЛД/50 сопровождается увеличением инкубационного периода развития инфекции и средней продолжительности жизни животных.

6. Лигавирин оказывает выраженное иммуномодулирующее действие на ослабленные звенья клеточного и гуморального иммунитета у крупного рогатого скота и свиней, сопровождающееся увеличением количества Е-РОК, ЕАС-РОК, ФАН, ФИ, НСТ-теста, показателей общего комплемента, ЛАСК и БАСК.

7. Применение лигавирина с лечебной целью при диареях телят и поросят различной этиологии обеспечивает их высокую сохранность (соответственно 100 и 80%), сокращает падеж при чуме плотоядных, вирусных энтеритах и ста-филококкозах щенят; а при гипотрофии телят приводит к увеличению их массы тела и сохранности на 17%, нормализует показатели иммунитета, увеличивая содержание «активных» Т-лимфоцигов, Т-хелперов, БАСК, РТМЛ, содержание В-лимфоцитов, Ig G и M, снижая концентрацию «нулевых» малодифференци-рованных лимфоцитов.

8. Иммуноферон, полученный из сыворотки (плазмы) крови животных после предварительной индукции интерфероногеном, представляет собой смесь ИФН-а и ИФН-у, безвреден для лабораторных животных, телят и поросят при многократном применении.

9. Иммуноферон в гомологичной КК ПЭС подавляет репродукцию различных штаммов вируса болезни Ауески, TTC, энтеровирусов свиней на 10-100 ТЦД/50. Препарат обладает бактериостаггическим свойством в отношении различных штаммов сальмонелл, эшерихий, псевдомонад и особенно стафилококков, уменьшая количество КОЕ в 10-100 раз.

10. Иммуноферон обладает выраженным антивирусным действием при введении его кроликам за 24 ч до или одновременно с заражением их вирулентным штаммом вируса болезни Ауески в дозе 2-105 ТЦД 50/мл. Применение иммуно-ферона новорожденным телятам и поросятам на 1 и 3 день жизни повышает их сохранность до 96% и в 2-4 раза увеличивает титры агглютининов у вакцинированных стельных коров, супоросных свиноматок и молодняка к эшерихиоз-ному антигену.

11. Биостим-К представляет собой продукт взаимодействия торфа с водными растворами гидроксида и карбоната натрия, жидкость темно-коричневого цвета. Массовая доля влаги - 95,7%; гуматов натрия в пересчете на сухое вещество — 3%; рН — не более 9. Препарат в дозах 30-60 мг/кг безвреден для белых мышей, максимальная доза (240 мг/кг), которую удалось ввести белым крысам, не вызывала их гибели. Многократное применение биостима-К в течение 3-х мес. в дозе 2,0 мл/кг не оказывает токсического воздействия на организм крыс. Препарат в исследованных дозах безвреден для сельскохозяйственных животных и птицы.

12. Применение биологически активной добавки биостим-К л актирующим коровам в дозе 4,0 мл на кг корма повышает удой молока в стойловый период на 16,6%; в пастбищный - на 17,5%; среднесуточный прирост массы тела молодняка на доращивании на 14,1% и бычков в заключительный период откорма на 21,6%. Применение препарата стельным коровам за 2 месяца до отела способствует получению от них более жизнеспособных телят и в значительной степени профилактирует желудочно-кишечные болезни животных.

13. Назначение биостима-К поросятам-отъемышам в дозе 0,4 мл/кг повышает среднесуточный прирост массы тела на 16,4%; а применение его свиноматкам во 2-ой половине супоросности сопровождается повышением массы тела и жизнеспособности поросят, снижением их заболеваемости и падежа.

14. Введение в рацион цыплятам-бройлерам биостима-К снижает падеж от болезней органов пищеварения на 10%, заболеваемость колибактериозом на 28% и повышает их среднесуточный прирост массы тела на 17,8%. Применение препарата курам-несушкам сопровождается повышением яйценоскости на 29,0%; яичной массы на 19,4%; качества и сортности яиц.

15. Витаминно-минеральные препараты промивит и фармавит безвредны для лабораторных и сельскохозяйственных животных. Применение промивита-К сопровождается увеличением среднесуточного прироста массы тела телягг-молочников на 28,5-30,0%; снижением их заболеваемости и падежа от гипотрофии соответственно на 15 и 7%, повышением среднесуточного удоя у коров на 13,6%.

16. Обогащение биологически активными добавками промивит-С и фарма-вит-С рационов поросят на доращивании увеличивает прирост массы тела соответственно на 19,3 и 22,1%; применение их свиноматкам во 2-ой половине су-поросности повышает количество живых поросят в помете на 14,1 и 22,4%. Фармавит-А эффективен при выращивании цыплят, повышает их сохранность на 19,4% и прирост массы тела в 1,4 раза Применение фармавита-П норкам основного стада увеличивает выход щенков на 1000 самок на 770 голов, улучшает качество шкурок.

17. Комплексное применение биологически активных препаратов в производственных условиях позволяет повысить среднегодовой надой молока коров на 13,3%; жирность его на 0,57%; выход телят на 8,2%; прирост их массы тела 13,7-17,2%; увеличивает количество поросят в помете на 20,9%; массу тела их при рождении на 30%, при откорме на 10,6-12,4%; сохранность - на 10,2% и снижает заболеваемость ремонтных свинок на 19%.

Для животноводства и ветеринарии разработаны и внедрены:

1. Лигавирин ТУ 9337-001-32886413-97, согласованные ВГНКИ ветпрепаратов и ДВ МСХ РФ, утверждены НПФ «Агробиоцентр» и «Наставление по применению препарата Лигавирин в ветеринарии», одобрено Ветфармбиосоветом 24.04.1997 (протокол №2) и утверждено ДВ МСХ РФ 02.06.1997;

2. Иммуноферон ТУ 9337-002-32886413-98, согласованные ВГНКИ ветпрепаратов и ДВ МСХ РФ, утверждены НПФ «Агробиоцентр и «Наставление по применению препарата Иммуноферон в ветеринарии», одобрено Ветфармбиосоветом 17.12.1997, протокол №5 и утверждено ДВ МСХ РФ 15.05.1998; № 0(Ю627-ОП;

3. Биостим-К ТУ 9337-002-52333343-02, согласованные ВГНКИ ветпрепаратов и ДВ МСХ РФ, утверждены НПФ «Биофид» и «Наставление по применению Биостима-К в ветеринарии», одобрено Ветфармбиосоветом 28.09.1999, протокол №4 и утверждено ДВ МСХ РФ 19.03.02; (Ю1371-ОП;

4. Промивит ТУ 9337-001-52333343-01, согласованные ВГНКИ ветпрепаратов и ДВ МСХ РФ, утверждены НПФ «Биофид» и «Наставление по применению промивита в ветеринарии», одобрено Ветфармбиосоветом 24.05.1995, протокол №3 и утверждено ДВ МСХ РФ 25.12.2001; № (Ю1321-ОП;

5. Фармавит ТУ 9355-001-10920471-01, согласованные ВГНКИ ветпрепаратов и ДВ МСХ РФ, утверждены ЗАО «Фармакс» и «Наставление по применению препарата Фармавит для профилактики и лечения гиповитаминозов, нарушений обмена веществ и повышения продуктивности животных и птиц», одобрено Ветфармбиосоветом 15.05.01, протокол №2 и утверждено ДВ МСХП РФ 05.07.01; Регистрационные номера: ПВР-2-2.1/00697; ПВР-2-2.1/00698; ПВР-2-2.1/00699; ПВР-2-2.1/00700; ПВР-2-2.1/701; ПВР-2-2.1/00702; ПВР-2-2.1/00703; ПВР-2-2.1/00704; ПВР-2-2.1/00705; ПВР-2-2.1/00706.

Для определения токсических, иммунологических свойств новых биологически активных препаратов и их практического применения разработаны:

1. «Методические рекомендации по испытанию индукторов интерферона на сельскохозяйственных животных». - ВГНКИ ветпрепаратов. - ВАСХНИЛ. -1986;

2. «Методические рекомендации по определению интерферонсинтезирующей способности лейкоцитов сельскохозяйственных животных». - ВГНКИ ветпрепаратов. - ВАСХНИЛ. -1986;

3. «Методы тестирования естественной неспецифической резистентности животных (Методические рекомендации). — НПФ «Агробиоцентр», Комитет сельского хозяйства Кировской области. -1997;

4. «Определение иммунологического статуса сельскохозяйственных животных (Методические рекомендации). - НПФ «Агробиоцентр», Комитет сельского хозяйства Кировской области. —1997;

5. «Методические рекомендации по проведению научно-хозяйственных опытов по применению комплексных кормовых добавок в кормлении молодняка свиней». - НИИСХ Северо-Востока. - РАСХН. -1997;

6. «Методические рекомендации по профилактике и лечению болезней минеральной и витаминной недостаточности у свиней». - НИИСХ Северо-Востока. -РАСХН.-1997;

7. «Методы тестирования иммунологической резистентности сельскохозяйственных животных». - ВНИВИПФиТ.- РАСХН. - 1999;

8. «Применение новых биологически активных препаратов в ветеринарии и животноводстве» (Рекомендации). - ВНИВИПФиТ. - РАСХН. -1999;

9. «Витаминная недостаточность пушных зверей, ее профилактика и лечение» (Рекомендации). - ВГНКИ ветпрепаратов, ВНИВИПФиТ. - РАСХН. - 2000;

10. «Лечение и профилактика инфекционных болезней собак» (Рекомендации). - ВНИВИПФиТ.- РАСХН - 2001.

Материалы диссертационной работы нашли отражение в следующих учебных пособиях, которые могут быть использованы в учебном процессе при подготовке специалистов широкого биологического профиля, а также ветеринарных и зоотехнических специальностей:

1. «Физиология, биохимия и иммунология млекопитающих (пушных зверей)» (Допущено МСХ РФ в качестве учебного пособия для студентов высших учебных заведений по зооветеринарным специальностям).—Киров. — 2002;

2. «Изучение физиологических показателей крови животных с использованием современных биохимических и иммунобиологических тестов» (Допущено МСХ РФ в качестве учебного пособия для студентов высших учебных заведений по зооветеринарным специальностям). — Киров. — 2003;

3. «Физиологическая потребность клеточных пушных зверей в витаминах и применение витаминных препаратов в звероводстве» (Допущено МСХ РФ в качестве учебного пособия для студентов высших учебных заведений по зооветеринарным специальностям). - Киров. - 2003.