Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Иммунная защита у цыплят при разных способах введения микровита А

На правахрукописи

Клстикова Людмила Владимировна

ИММУННАЯ ЗАЩИТА У ЦЫПЛЯТ ПРИ РАЗНЫХ СПОСОБАХ ВВЕДЕНИЯ МИКТОВИТА А

Специальности: 16.00.02. - патология, онкология и морфология животных 16.00.03. - ветеринарная микробиология, вирусология,

эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

ИВАНОВО-2004

Работа выполнена на кафедре внутренних незаразных болезней, хирургии и акушерства ФГОУ ВПО «Ивановская государственная сельскохозяйственная академия» и птицефабрике «Ивановская».

Научные руководители: заслуженный деятель науки РФ, доктор ветеринарных наук, профессор [Ромуальд Петрович Пушкарев|, доктор ветеринарных наук, профессор Светлана Анатольевна Алексеева

Официальные оппоненты: - Доктор ветеринарных наук, профессор Александр Владимирович Борисов

Кандидат ветеринарных наук, доцент Галина Владимировна Корнева

Ведущая организация: ГНУ Самарская научно-исследовательская ветеринарная станция

Защита состоится «Л?» ЛМ&^Л !2005 г. в 10°° часов на заседании диссертационного совета Д 220.029.01. в ФГОУ ВПО «Ивановская государственная сельскохозяйственная академия». Адрес: 153012 г. Иваново, ул. Советская, д. 45, ФГОУ ВПО «Ивановская ГСХА».

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Ивановская государственная сельскохозяйственная академия».

Автореферат разослан

2004г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук

СВ. Егоров

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. В условиях интенсификации птицеводства на промышленной основе возрастают экстремальные воздействия на птицу, поскольку по мере увеличения продуктивности они становятся все более чувствительными. По сообщению Л.С. Колабской (1989) под влиянием многочисленных факторов окружающей среды и постоянным воздействием лекарственных препаратов у птицы нередко наблюдается нарушение механизмов иммунной защиты. При этом резко повышается чувствительность организма к острым и хроническим заболеваниям, неэффективной становится вакцинация против инфекционных болезней, снижается продуктивность поголовья. Поэтому для сохранения здоровья и повышения продуктивности птицы важно добиваться постоянного снижения негативных влияний отдельных технологических элементов, в том числе вакцинаций, с одной стороны, и поддержания уровня иммунной защиты, с другой стороны (ГА. Грошева и др., 1996; Н.А.Лагуткин, 1999,2003).

Исследованиями А.В. Селиванова (1973), ВД. Соколова (1977), СИ. Плященко, В.Т. Сидорова (1978), И.П. Замоталова, З.В. Воробьева (1985), НА Дидковского, Л.И. Дворецкого (1990), Р.П. Пушкарева, СА Алексеевой (1993) и др. установлена исключительно важная роль местных защитных механизмов слизистых оболочек дыхательных путей в профилактике болезней, передающихся воздушно-капельным путем. Наиболее высококонтагиозной является ньюкаслская болезнь.

Ведущая роль в комплексе противоэпизоотических мероприятий при ньюкаслской болезни принадлежит специфической профилактике, основанной на применении живых и инактивированных вакцин.

Однако вакцинация не всегда приводит к выработке напряженного иммунитета, особенно у молодняка.

В подобных случаях для усиления иммунного ответа при вакцинации применяют биологически активные вещества - витамины (ЯН. Глухов, 1988; СМ Дурдыев, 1993; В.Н. Кокурин, 2000 и др.).

Исследованиями СМ. Young, J.L. Sell (1982), АЛ. Томилова, О.В. Главатских (2001), Н.Ф. Содомова (2003) доказано, что витамин А является антиоксидантом, повышает иммунитет, зрение, улучшает рост костной ткани, предупреждает развитие онкозаболеваний, усиливает действие половых гормонов, положительно влияет на кожу.

Известно также, что проявление того или иного стимулирующего действия в существенной мере зависит от дозы, временных параметров и от целого ряда других условий. Требуется дальнейшее совершенствование контроля за развитием поствакцинального иммунитета, который в настоящее время основан на определении антител в сыворотке крови и не дает информации о состоянии защитных механизмов органов дыхания и пищеварения птицы.

Таким образом, проблема иммунной защиты кур в промышленном

PUC. НАЦИОНАЛЬНАЯ &ИЫИОТЕКА

птицеводстве еще полностью не раскрыта и не решена.

Цель и задачи исследования. Целью работы явилось изучение изменений показателей иммунной защиты организма в целом, а также дыхательной системы и пищеварительного тракта у цыплят при иммунизации против ньюкаслской болезни и под воздействием микровита А при разных способах введения его в организм.

Для достижения означенной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить изменение показателей местной защиты слизистых оболочек дыхательного и пищеварительного аппарата, а также иммунологическое состояние организма цыплят в промышленных условиях при введении микровита А разными способами;

2. Определить корреляцию между изучаемыми показателями;

3. Выявить экономически эффективные групповые методы стимулирования иммунной защиты цыплят в промышленном птицеводстве.

Научная новизна.

Выявлено, что цыплята, содержащиеся на птицефабрике с традиционной технологией, получившие микровит А однократно в виде аэрозоля и с кормом накануне иммунизации против ньюкаслской болезни имеют более высокий уровень иммунной защиты, что выражается в увеличении белка, адсорбционного и фагоцитарного числа в цитограмме слизистых оболочек ротоглотки и трахеи, лизоцима и циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке и секретах, лизосомально-катионных белков в гранулоцитах, сохранности цыплят, среднесуточного прироста живой массы тела.

Впервые установлено, что однократное введение аэрозоля микровита А в дозе 50мг/м3и добавка его к основному рациону в дозе 0,24 г/кг накануне иммунизации повышают антителообразование.

Практическая значимость.

1. На основании комплексных экспериментальных исследований предложены групповые экономически обоснованные пути введения микровита А, - с аэрозолью и кормом, способствующие повышению местной защиты дыхательного и пищеварительного аппарата

2. Результаты исследования позволяют совершенствовать специфическую профилактику путем однократного введения микровита А с аэрозолью или кормом накануне иммунизации на птицеводческих предприятиях.

Апробация работы. Результаты исследований доложены на научно-практических конференциях «Актуальные проблемы науки в сельскохозяйственном

производстве» (Иваново, 1993), «Проблемы и перспективы развития сельскохозяйственной науки и АПК в современных условиях» (Иваново, 2004); на конференции «Актуальные проблемы биологии» в Сибирском государственном медицинском университете (Томск, 2004); международных научно-практических конференциях в Костромской ГСХА «Актуальные проблемы науки в агропромышленном комплексе» (Кострома,2004), во Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте патологии, фармакологии и терапии «Свободные радикалы, антиоксиданты и здоровье животных» (Воронеж, 2004).

Основные положения, выносимые на защиту.

• динамика специфических и неспецифических факторов иммунной защиты у птиц при разных способах введения микровита А;

• динамика местной защиты слизистых оболочек дыхательного и пищеварительного аппарата при разных способах введения микровита А;

- корреляция показателей общих и местных механизмов защиты организма птиц на фоне введения микровита А.

Публикации. По материалам исследований опубликовано шесть работ, отражающих основное содержание работы.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 149 страницах машинописного текста и состоит из введения, 4 глав, выводов, практических предложений. Библиографический список состоит из 295 источников, из них 220 отечественных и 75 иностранных. Работа содержит таблиц и 17 рисунков.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материал и методы исследований

Работа выполнена на кафедре внутренних незаразных болезней, хирургии и акушерства Ивановской государственной сельскохозяйственной академии и на «Ивановской» птицефабрике в период с 1992 по 2004 гг.

Исследования состояли из серии опытов, направленных на изучение защитных функций дыхательных путей и пищеварительного тракта, а также иммунного статуса цыплят под влиянием микровита А при разных способах его введения.

Для изучения иммунной защиты дыхательных путей и пищеварительного тракта у цыплят при различных способах введения микровита А было сформировано 4 группы кросса П - 46, возраст 60 дней по 60 голов каждая (3 группы опытных и 1 контрольная). Птица содержалась в клеточных батареях КБУ-3 в залах объемом 2000 м3. Кормление птицы соответствовало типовому рациону (ВНИТИП, 1988). В основном рационе содержалось 800 МЕ витамина А, 500 мкг витамина Е, 150 МЕ витамина Д, обменной энергии 263,7 ккал, 17,4% сырого протеина в 100 г комбикорма.

Контрольная группа (1 группа) микровит А не получала.

Опытные группы имели микровит™А Супра 500, содержащий витамин А 500000 МЕ/г, следующим образом:

2 группа цыплят - в виде аэрозоля (доза 50 мг/м3, экспозиция 30 минут). Для получения аэрозоля использовали САГ-2 (давление 4 атмосферы);

3 группа цыплят - с кормом в дозе 0,24 г/кг основного рациона;

4 группа цыплят - внутримышечно, в дозе - 0,012 г/голову (микровит А растворяли в 0,5 мл изотонического раствора натрия хлорида).

Изучение влияния профилактической вакцинации кур против ньюкаслской болезни на развитие специфического иммунитета проводили в производственных условиях согласно схеме и плана противоэпизеотических мероприятий в благополучных хозяйствах. В опытах использовали сухую вирус - вакцину против ньюкаслской болезни птиц из штамма Ла-Сота, изготовленную на Покровском заводе биопрепаратов.

Перед вакцинацией птицу выдерживали без корма и воды в течение 8 часов. Вакцинацию проводили аэрозольным методом согласно инструкции.

Микровит А вводился однократно, различными способами за сутки до вакцинации.

Состояние местной защиты оценивали по следующим показателям: • фагоцитарные и адсорбционные свойства слизистых оболочек трахеи, ротоглотки по О.Г. Алексеевой (1986);

- лизоцимную активность трахеального секрета, секрета желудка и двенадцатиперстной кишки по методу Х.Я. Гранд, Л.М. Яворского, Н.Я Блумберга (1973) с использованием культуры Micrococcus lysodeicticus;

- циркулирующие иммунные комплексы в трахеальном секрете, секрете двенадцатиперстной кишки и желудочном секрете по С.Г. Осипову и др. (1986).

Иммунологическое состояние определяли по следующим показателям:

- лизосомально - катионный тест гранулоцитов крови по методу Л.С. Колабской и др. (1983) в модификации СА Алексеевой (1992).

- лизоцимную активность сыворотки крови методом Х.Я. Гранд, Л.М. Яворского, Н.Я. Блумберга (1973) с использованием культуры Micrococcus lysodeicticus;

- общий белок в сыворотке крови с помощью рефрактометра ИРФ-22 и белковые фракции по методу Олла и Маккорда в модификации С.А. Каргаока (1959);

- циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) в сыворотке крови по С.Г. Осипову и др. (1986);

- криоглобулины (КГ) в сыворотке крови спектрофотометрически по Е.Н. Насонову (1986);

- титр гетерогемагглютининов - реакцией микроскопической агглютинации по методу Шиффа (И.Ф. Храбустовский, 1973);

- витамин А в сыворотке крови и печени методом Бессея в модификации А.А. Анисовой (1979).

Иммунологическую эффективность от применения вакцины против ньюкаслской болезни в посвакцинальный период оценивали по данным РТГА, которую ставили по общепринятой методике.

Для изучения защитных свойств органов дыхания и пищеварения было изготовлено 480 мазков-отпечатков со слизистой оболочки ротоглотки и трахеи; исследовано 240 проб крови; по 240 проб секретов трахеи, двенадцатиперстной кишки и желудка.

Материал для исследования получали у цыплят-аналогов до начала эксперимента и через 3; 14 и 21 день после введения микровита А в организм; каждый раз у 15 голов из группы в утренние часы (до кормления).

Экономическую эффективность рассчитывали по «Методике определения экономической эффективности использования в сельском хозяйстве результатов научно-исследовательских и опытно-конструкторских работ, новой техники, изобретений и рационализаторских предложений» (1982).

Полученный цифровой материал подвергали статистической обработке, используя метод Т- Studenta; проводили корреляционный анализ, обоснованный О. Браве. Цифровую обработку данных проводили с помощью electronic calculator SITIZEN FS-20; стандартной вариационной статистики (пакет программ EXCEL Microsoft Office 97; 2001).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Местная защита слизистых оболочек дыхательного и пищеварительного аппарата цыплят под влиянием микровита А при разных способах его введения

Морфологическая и функциональная целостность слизистых оболочек -важнейший элемент первой линии защиты организма от чужеродных агентов. Защитные свойства слизистых оболочек характеризует цитограмма.

Данные изменения циторгаммы ротоглотки у цыплят под воздействием микровита А представлены в таблице 1.

У цыплят контрольной группы количество адсорбирующих и неадсорбирующих микроорганизмы эпителиальных клеток слизистой оболочки ротоглотки на 3 день исследования снижается в 2,6 раза, но поскольку загруженность микробными агентами велика, то адсорбционное число возрастает на 19,6%. На 14 день исследования интенсивность адсорбции увеличивается на 90% (Р<0,01); на 21 день адсорбционное число возвращается к исходному.

Под воздействием вакцины на 3 день увеличивается количество полиморфноядерных лейкоцитов, фагоцитирующих микроорганизмы, в 7,7 раза на фоне изменения содержания эпителиальных клеток. Фагоцитарное число возрастает на 43%. На 14 день количество фагоцитирующих лейкоцитов выше в 4 раза, чем до начала эксперимента, также увеличивается количество разрушенных и нефагоцитирующих лейкоцитов.

На 21 день исследования фагоцитарная активность восстанавливается и составляет 5,2+0,2.

В опытных группах также происходили изменения в цитограмме

ротоглотки птицы. Во 2 группе на 3 день исследования отмечали снижение количества адсорбирующих и неадсорбирующих эпителиальных клеток в 2,5 раза. На 14 день в слизистой оболочке ротоглотки цыплят число неадсорбирующих эпителиальных клеток ниже на 82% за счет усиления адсорбционной активности эпителиальных клеток, которое составило более 20% (Р<0,02). Аэрозоль микровита А увеличила в 8,5 раз число фагоцитирующих лейкоцитов на 3 день исследования. Уровень нефагоцитирующих лейкоцитов снизился на 14 день исследования на 18,2% (Р<0,01). Интенсивность фагоцитоза возросла на 21 день исследования на 94%.

Пероральное применение микровита А увеличило интенсивность фагоцитоза на 3, 14 и 21 день исследования на 90%, 127,8% и 76% соответственно. На 21 день исследования количество разрушенных лейкоцитов сократилось на 4,6% (Р<0,02). Увеличение в 2 раза числа адсорбирующих эпителиальных клеток в слизистой оболочке ротоглотке произошло уже на 3 день исследования. Возрастание активности адсорбции было за счет уменьшения неадсорбирующих клеток, которое составляло 69,9% (Р<0,001).

После внутримышечного введения микровита А на 21 день исследования наблюдали увеличение неадсорбирующих эпителиальных клеток на 7,9% (Р<0,01), снижение на 19,7% (Р<0,05) активности фагоцитоза по сравнению с данными полученными на 3 день эксперимента

Данные изменения цитограммы слизистой оболочки трахеи представлены в таблице 2.

У цыплят контрольной группы на 3 день исследований адсорбционная активность эпителиальных клеток снизилась в 2,7 раза. Очевидно, живой вирус при контакте со слизистой оболочкой трахеи подавляет местные факторы защиты организма. На 14 день исследования количество эпителиальных клеток, адсорбирующих микроорганизмы, возросло в 3,8 раза. Адсорбционное число к 21 дню исследования составило 9,2. На 3 день исследования увеличилась активность фагоцитирующих лейкоцитов в 3,4; 1,9 и 2,5 раза соответственно на 3; 14 и 21 день исследования. Процент разрушенных лейкоцитов снизился соответственно срокам исследования в 2,7; 2,3 и 1,9 раза.

Аэрозоль микровита А на 3 день исследования снизила число эпителиальных клеток, адсорбирующих микроорганизмы в 4,2 раза и неадсорбирующих - в 3,8 раза. Наряду с этим увеличилось в 3,7 раза число фагоцитирующих лейкоцитов. Интенсивность фагоцитоза возросла в 5 раз. К 21 дню исследования активность фагоцитоза возросла в 5,9 раза за счет снижения в 6,7 раза количества разрушенных и в 5,7 раза нефагоцитирующих лейкоцитов. На 14 день в 2,2 раза усилились адсорбционные свойства эпителиальных клеток. Активность адсорбции возросла в 5,9 раза.

Пероральное применение микровита А увеличило интенсивность адсорбции в 3,2 раза на 3 день исследования за счет уменьшения в 3,4 раза неадсорбирующих эпителиальных клеток. На 21 день исследования в 3,2 раза произошло снижение адсорбционной активности эпителиальных клеток. За счет снижения в 5,3 раза количества неадсорбирующих эпителиальных клеток возросла на 56% интенсивность адсорбции. Скорость фагоцитоза возросла в 3,2; 3 и 3,4 раза

соответственно на 3; 14 и 21 день исследования. Уменьшение нефагоцитирующих лейкоцитов в 3,7; 15; 4,5 раза и разрушенных в 1,5; 7,1; 1,8 раза наблюдали в соответствующие сроки исследования.

Внутримышечное введение микровита А привело к увеличению адсорбционной активности лейкоцитов более чем в 2 раза на 14 день исследования, при этом в 2,4 раза (Р<0,001) возросло количество адсорбирующих эпителиальных клеток. На 21 день исследования снизилось количество адсорбирующих эпителиальных клеток и составило 8,8+0,3. Адсорбционная активность увеличилась за счет уменьшения процента неадсорбирующих эпителиальных клеток. Активность фагоцитоза возросла на 21 день исследования 32,7% (Р<0,01).

Таким образом, применение в промышленном птицеводстве микровита А разными способами для стимуляции иммунной защиты цыплят оказало неоднозначное влияние на клеточные элементы защиты слизистых оболочек ротоглотки и трахеи.

Применение микровита А с аэроэолью и кормом значительно повышало активность клеточных элементов защиты слизистых оболочек ротоглотки и трахеи, что выражается в увеличении адсорбционного и фагоцитарного числа.

Фагоцитарная активность лейкоцитов на слизистой оболочке трахеи выше аналогичного показателя на слизистой оболочке ротоглотки до начала эксперимента и в ходе эксперимента в 4,4 раза Миграция лейкоцитов на слизистую трахеи говорит о том, что именно они обеспечивают основную барьерную функцию органов дыхания.

Адсорбционная активность эпителиальных клеток в слизистой ротоглотки выше таковой в слизистой трахеи. Адсорбции микроорганизмов на слизистой оболочке ротоглотки способствует наличие в эпителиальном слое большого количества бокаловидных клеток, большая всасывающая способность слизистых оболочек, их влажность, температура.

Независимо от способа введения препарата отметили, что при снижении интенсивности адсорбции активизируется фагоцитоз.

Адекватное представление о процессах местной защиты дыхательных и пищеварительных путей дает исследование уровня лизоцима в секретах.

В контрольной группе отмечено угнетение активности лизоцима трахеального секрета на 14 день на 14,7% (Р<0,01), на 21 день - показатель достоверно был ниже исходного и соответствовал 0,078 ед/л.

Аэрозоль микровита А стимулирует секрецию лизоцима в 2,2 раза на 3 день исследования. Этот показатель был достоверно выше исходного уровня и на 14 и 21 день исследования.

Применение микровита А с кормом и внутримышечно способствовало увеличению лизоцимной активности трахеального секрета уже на 3 день исследования, и на 21 день показатель превысил исходный уровень на 65,6 и 35,8% (Р<0,001) соответственно.

Таблица 1

Цятограмма слвзвстой оболочкв ротоглоткв цыалят под влиянием мякроввта А при разных свособах его введения, (М+т, п= 15)

Показатели Д о опыта На 3 день На 14 день На 21 день

Группы цыпшгг Групт 1ШП1ПТ Группы цыплят Группа ЦЫЮТГ

1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 г 3 4

Эпителиальные клетки алсорбирующие.% 60.0+ 1,4 59,7+ 0,4 59,7+ 0,2 59,8+ 0,4 23.4+ од 24,0+ 0,5 29,5+ 0.1 22,5+ 0,2 52,5+ 0,5 71,8+ 0,5 58,0+ 0.5 53,0+ 0,5 58,6+ ОД 58,8+ од 63,2+ 0,2 57,2+ 0,1

Эпителиальные клеш неадсорбирующне.% 28,8+ 0,3 29,0+ 0,3 29,5+ 0,Г 29,2+ 0,5 ПД+ 0,4 6.2+ 0,1 14,5+ М 11.4+ 0.1 10,8+ ОД 5Д+ 0,4 9.0+ ОД 11,3+ ОД 29.7+ 0,3 23,5+ ОД 21Д+ 0,3 31,5+ 0,4

Адсорбционное число, ед 11,2+ 0,1 11,3+ 0,1 11,3+ 0,1 11,3+ 0,3 13,4+ 0.2 14,6+ 0.1 14,0+ 0,3 14.2+ 0,1 21,3+ 0,3 39,4+ 0.4 31,6+ ОД 21.6+ ОД 11.4+ од 28,6+ од 18.1+ 0,1 12,1+ од

Лейкоциты разрушенные. % 2.5+ 0.3 2,«+ 0.1 2д± 0,4 2,5+ 03 13,2+ 0,1 7,0+ 0,3 13.7+ ОД 12,*+ ОД 9Д+ 0,3 1Д+ 0.3 2,8+ од 9,3+ ОД 2Д+ 0,4" ЗД+ од 2.1+ ОД 2,0+ 0,3

Лейкоциты фагоцитирующие, 5,0+ 0,5" 5,3+ 0.2" 4,8+ 0,4" 5.1+ од" 38.5+ 0,3 44,»+ ОД 28,5+ ОД 37,2+ ОД 20,0+ од 18.6+ 0,3 23,0+ 0,2 19,7+ 0,2 6,2+ ОД 7,3+ 0,5 11Д+ 0.4 6,5+ 0,1

Лейкошпы нефагоцигнрующие,% 3,7+ 0,4 3,3+ ОД 3,8+ ОД 3,4+ 0.3 13,7+ ОД 18,0+ 0,1 13,8+ од 16,5+ 0,1 7,5+ 0,3 2,7+ ОД 7Д+ 0,4 6,7+ ОД 3,3+ од 7Д+ 0,4 2,3+ 2,8+ од

Фагоцитарное число, «д 5,3+ 0,1 5,4+ 0,1 5,4+ 0,1 5.4+ 0,5 7.6+ ОД 19.2+ ОД 10,3+ од 7,6+ ОД 6.1+ 0,4 18,7+ 0,1 12,3+ од 6,1+ 0,1 5Д± од 10,5+ 0.1 9,5+ 0,1 М± 0,1

Таблица 2

Цитограмма слизистой оболочки трахеи цыплят под влиянием микровнта А при разных способах его введения, (М+т, п= 15)

Показателя До опыт* НяЗденъ На 14 лень На 21 день

Группы цыпяжт Группы пылает Группы шлют Группы цышвгг

1 2 3 4 1 2 3 4 I 2 3 4 1 2 3 4

Эпителиальные клетки адсорбФующне,% 12,2+ 0,4 11,7+ ОД 12,0+ 0.4 12,0+ 0,5 4,5+ 0,3 2,8+ ОД 4,8+ 0,4 2,8+ од 28,5+ 0,3 25,6+ ОД 25,4+ ОД 29,0+ 0,4 9,8+ ОД 1.8+ ОД 3,8+ ОД 8,8+ 0,3

Эпителиальные клетки неадсорбирующйе,^ 0,5 6,3+ 0,5 6,8+ 0,3 6,0+ ОД 1Д± 0,4 2,0+ од 2,0+ 0.1 2,0+ 0,1 28,5+ 0,3 2Д+ 0,3 2Д+ ад 6,0+ 0,3 6,0+ 0,1 1.0+ 0,1 1Д± 0,1 5,7+ 0,4

Адсорбционное число, ед 6,7+ 0.1 6,7+ 0,1 6,6+ 0.1 6.7+ 0,1 9,0+ ОД 23,3+ од 21,4+ ОД 9,7+ 0,2 13,6+ 0,4 39,5+ 0,1 39,5+ 0,1 14,4+ 0.4 9Д+ ОД 16,9+ 0,1 10,3+ од 9,7+ ОД

Лейкоциты розру шейные, % 18.5+ ОД 18,1+ 0,6 16,5+ 0,4 17,4+ од 6,2+ 0,9" 4Д+ 0,1 11,0+ 0.Г 6,8+ ОД 6,3+ 0,7 2Д+ ОД 2.3+ од 3,7+ 0,4 9,7+ 0,3 2,7+ 0,2 9Д+ 0,3 10,5+ 0,3

Лейкоциты фагоцитирующие, •/• 21,4+ 0.5 22,3+ 0,5 22,2+ 0,3 22,3+ 0,4 73,3+ 06 82,5+ 0,3 70,6+ 0,3 74,7+ ОД 40,7+ 0,4 67,2+ 0,5 67,3+ 0,5 57,8+ 0,3 53,3+ 0.3 87,4+ 0,3 76,3+ 0,4 52,3+ 0,5

Лейкоциты нефагоцт-црующие,% 40,2+ ОД 41,6+ 0.3 42,5+ 0,3 42,3+ ОД 14,7+ 0,4 8,5+ 0,4 11,6+ 0,3 13,7+ од 17.»+ 0,3 2,7+ ОД 2,8+ ОД 3.5+ 0,1 21Д+ 0.5 7,3+ 0,1 9,5+ ОД 22,7+ 0.4

ФагоцИ|а|>ние число, ед 5,5+ 0,3 5,5+ ОД 5.6+ ОН 5.5+ 0,1 12,7+ 0,2 27.7+ ОД 17,5+ 0,1 14,6+ 0.1 6,8+ ОД 18,5+ 0,Г 18,5+ 0,1 8,7+ 0,2 7,2+ 0,1 32,4+ ОД 17,6+ од 7.3+ 0,2

Возрастание лизоцимной активности трахеального секрета под влиянием микровита А скорее всего произошло потому, что ретинол, участвуя в окислительно-восстановительных процессах организма, стимулирует функцию серозных клеток бокаловидных желез.

В контрольной группе лизоцимная активность секрета двенадцатиперстной кишки угнетается на 2,8% (Р<0,01) на 21 день исследования. Аэрозоль микровита А стимулирует секрецию лизоцима в секрете двенадцатиперстной кишки на 3 день на 50,7% (Р<0,001). Этот показатель был достоверно выше на 14 и 21 день исследования. Пероральное применение микровита А способствовало возрастанию активности лизоцима на 3, 14 и 21 день исследования соответственно на 38,9; 31,9 и 29,6% (Р<0,001). Внутримышечное введение витаминного препарата вначале исследования способствовало возрастанию активности лизоцима на 3 день на 26% (Р<0,01). Положительная динамика сохранялась до 21 дня исследования.

Активность лизоцима в желудочном секрете у цыплят 1 группы на 3, 14 и 21 день угнетается на 26; 21,9 и 4,2% (Р<0,02) соответственно.

Динамика лизоцимной активности желудочного секрета и секрета двенадцатиперстной кишки представлена в виде диаграммы на рисунке 1.

0,12 0,1 | 0,08 1 0,06 | 0,04

0,02 0

1 2 3 4 5 6 7 8

|Ч группа И2группа РЗгруппа □ 4группа

Рис. 1. Лизоцимная активность секрета двенадцатиперстной кишки

и желудочного секрета под влиянием микровита А при разных способах его введения

1,3,5, 7- лизоцимная активность секрета двенадцатиперстной кишки; 2,4, б, 8 - лизоцимная активность желудочного секрета

Достоверная положительная динамика увеличения активности лизоцима отмечена при введении микровита А с аэрозолью и кормом уже на 3 день исследования. На 21 день лизоцимная активность в этих группах возросла соответственно на 6,4 и 3,2% (Р<0,05).

Внутримышечное введение микровига А не оказало стимулирующего влияния на активность лизоцима желудочного секрета.

Таким образом, аэрозольные обработки микровигом А в большей степени влияют на активность секреторного лизоцима. Это можно объяснить прямым воздействием частиц аэрозоля на слизистые оболочки дыхательных путей и пищеварительного тракта. Данные результаты не противоречат данным, полученным СААлексеевой (1993) и А.Р. Красильниковой (1999) и согласуются с мнением ученых, утверждающих, что органы дыхания, возможно и пищеварения, имеют автономную лизоцим-секреторную систему.

Циркулирующие иммунные комплексы были обнаружены во всех исследуемых биологических жидкостях. Их действие имеет множество проявлений: от нейтрализации антигена до изменения фагоцитарной активности клеток ретикулярной системы. Отмечено, что иммунные комплексы способны модулировать как клеточный, так и гуморальный иммунитет.

Исследования ЦИК в трахеальном секрете показали, что их количество возрастает во всех группах цыплят, начиная с 3 по 21 день исследования, причем при введении микровита А с аэрозолью на 14 день показатель достоверно увеличился на 5,8% и не изменился на 21 день исследования. При введении препарата с кормом и внутримышечно, отмечали достоверное постоянное увеличение ЦИК. Наибольший их уровень был при алиментарном способе введения микровита А на 21 день исследования (0,330+0,003 г/л), что на 9% выше исходного (Р<0,02).

Концентрация ЦИК в секрете двенадцатиперстной кишки незначительно изменяется во всех группах. При введении микровита А с аэрозолью и кормом концентрация ЦИК составила на 21 день исследования 0,017+0,003; 0,018+0,002 г/л соответственно, что превышает исходные показатели на 70 и 64% (Р<0,001).

Микровит А способствовал постепенному увеличению концентрации ЦИК в желудочном секрете. На 21 день исследования уровень ЦИК составил во 2 и 3 группах 0,054+0,001; в 4 группе 0,053+0,001 г/л, что выше исходного показателя на 8 и 8,2% соответственно (Р<0,01).

Отмечено, что уровень ЦИК значительно выше в трахеальном секрете, чем в желудочном секрете и особенно в секрете двенадцатиперстной кишки.

Таким образом, результаты проведенных исследований свидетельствуют о стимулирующем действии микровита А на местную защиту слизистых оболочек дыхательного и пищеварительного аппарата цыплят, степень выраженности которого во многом зависит от способа его введения в организм.

Специфические и неспецифические факторы иммунной защиты под влиянием микровита А при разных способах его введения в организм

Одним из критериев иммунного статуса организма является уровень белка в сыворотке крови. Белки крови, как известно, выполняют множество функций: поддерживают постоянство осмотического давления, уровень рН крови, катионов в крови, принимают участие в образовании иммунитета.

Исследования показали, что в контрольной и опытных группах происходит изменение концентрации белка. На 3 день исследования количество белка достоверно увеличивается во всех группах. Уровень белка в 1 группе на 14 и 21 день снижается на 13,6 и 143% (Р<0,01). Концентрация белка в сыворотке крови под действием аэрозоля микровита А на 14 и 21 день увеличилась на 14,3 и 13% (Р<0,01). При пероральном применении микровита А не происходит значительных изменений концентрации белка. На 21 день исследования при внутримышечном введении микровита А отмечено снижение концентрации белка в сыворотке крови наЗ,2%(Р<0,01).

Таким образом, увеличение концентрации белка в сыворотке крови у цыплят, получавших микровит А с азрозолью, способствует повышению функции всасывания эпителиальной ткани, особенно кишечного тракта

Изучение белков сыворотки крови позволяет выявить некоторые закономерности формирования гуморального иммунитета. Ф. Гауровиц (1965) считает, что гамма-глобулины по своей электрофоретической подвижности и физико-химическим свойствам близки к антителам. Альфа-глобулины не всасываются в кишечнике, а остаются здесь, защищая слизистые оболочки (Н. Грин и соавт., 1993).

Динамика изменения концентрации белковых фракций представлена на рисунке 2.

В контрольной группе под действием вакцины против ньюкаслской болезни в 3,5 раза увеличивается количество альбуминов на 3 день. На 14 день - снижается, на 21 день - возрастает в 2,3 раза (Р<0,001).

Микровит А оказал стимулирующее влияние на содержание альбуминов в сыворотке крови во всех опытных группах. На 3 день количество их достоверно возрастает в 2,8; 3 и 2,8 раза во 2,3 и 4 группах соответственно. Положительная динамика сохраняется в течение всего эксперимента, и на 21 день уровень альбуминов составляет во 2 группе -14,6; в 3 -11,7; в 4 — 11,6 г/л.

Вводимые препараты не оказали существенного влияния на концентрацию альфа-глобулинов. На 21 день исследования количество их убывает в 1,3 и 4 группах. Лишь аэрозоль микровита А стимулировала образование альфа-глобулинов: на 21 день количество их составило 12,0 г/л, что выше исходного на 8% (Р<0,01).

В гамма-глобулиновой фракции сыворотки крови белковый комплекс активирует комплимент. Он является активатором антителообразования.

Уровень бета-глобулинов снижается во всех группах и на 21 день исследования составляет 5,0; 4,0; 4,1 и 4,2 г/л, что ниже исходных показателей на 54,5%; 69,2; 67,7 и 66,7% (Р<0,001) соответственно в 1,2,3 и 4 группах.

Рис.2. Процентное соотношение белковых фракций под влиянием

микровита А при разных способах его введения

Таким образом, стимуляция микровитом А оказала влияние на перераспределение белковых фракций. При снижении уровня альбуминов происходит уменьшение альфа- и бета-глобулинов, но отмечается возрастание гамма-глобулинов.

До начала эксперимента концентрация ЦИК в сыворотке крови составляла 0,30-0,31 г/л. В 1 группе происходит снижение концентрации ЦИК на 14 день исследования на 3,2 % (Р<0,05). Во 2,3 и 4 группах происходит возрастание количества ЦИК. На 21 день исследования соответственно на 6,5; 10,0 и 4,8% (Р<0,02).

Уровень криоглобулинов возрос во всех группах, независимо от способа введения микровита А.

Гранулоциты крови функционируют в качестве барьера слизистых оболочек, обладают прямым бактерицидным действием, основанным на нарушении структуры и функции мембран микробной клетки.

Определение лизосомально-катионного теста в гранулоцитах у цыплят под влиянием вводимых препаратов выявило, что в 1 и 4 группах на 3 и 14 день исследования наблюдалось угнетение показателя на 21,6 и 8,45%; 8,4 и

7% (Р<0,01) соответственно. На 21 день исследования отмечалось его возрастание на10 и 11%(Р<0,01).

Установлено, что во 2 и 3 группах насыщенность гранулоцитов катионными белками увеличивалась постоянно и к 21 дню исследования достигла уровня 2,57+0,01 и 2,47+0,03, что выше исходного показателя на 20,6 и 16,5% (Р<0,001) соответственно. Это свидетельствует об увеличении бактерицидности крови.

Титр гетерогемагтлютининов (естественных антител), показывающий нейтрализующее и опсонизирующее влияние биологических жидкостей организма на микробные агенты, возрос в контрольной группе на 7,1% (Р<0,01). Микровит А оказал стимулирующее влияние на количество нормальных антител во всех группах, начиная с третьего дня, когда увеличение составило 42,8% (Р<0,001).

Повышение лизоцимной активности в сыворотке крови наблюдалось уже на 3 день исследования во всех группах на 14; 52,2; 32,9 и 21,5% (Р<0,01) соответственно.

В ходе эксперимента изучили динамику содержания ретинола в сыворотке крови. Исследования показали, что витамин А позволяет поддерживать на высоком уровне целостность анатомических барьеров, в том числе эпителиальные и слизистые поверхности и их секреты, которые составляют первичную неспецифическую защиту организма.

В 1 группе уровень ретинола возрастал постепенно на 1,7; 5,9 и 33% в соответствующие сроки исследования. Это говорит о том, что вакцинация способствовала стимуляции выработки витамина А и выход его из депо - печени, а вместе с тем активизации защитных сил организма.

В опытных группах микровит А оказал стимулирующее влияние. На 21 день содержание витамина А в сыворотке крови составило 98,0; 96,4 и 88,9 мкг%, что выше исходного на 72,2; 68,8 и 56% (Р<0,001) соответственно.

Скорость проявления признаков гиповитаминоза при недостатке ретинола зависит от его запасов в депо. Содержание витамина А в печени также изменялось под влиянием вводимых препаратов. Данные свидетельствуют об улучшении витаминного обмена: на 21 день исследования содержание витамина А в печени цыплят возросло на 32; 71; 69 и 59% (Р<0,01). Увеличение запасов витамина А в печени у цыплят как опытных, так и контрольной групп говорит о том, что молодняк получал полнорационное кормление, соответствующее физиологическим потребностям растущего организма.

Локальный (местный) иммунитет имеет важное значение в профилактике респираторных или кишечных инфекций у птиц.

Стимуляция микровитом А оказала влияние и на формирование иммунитета к ньюкаслской болезни. Титр антител на 21 день во 2 и 3 группе был выше, чем в контроле на 71 и 66%, в 4 группе - на 31 % (Р<0,01).

Таким образом, можно заключить, что введение микровита А, преимущественно с аэрозолью и кормом активизирует неспецифические и специфические защитные механизмы: возрастает количество витамина А в сыворотке крови и депонирование его в печени, увеличивается

количество лизоцима и ЦИК в секретах, уровень нормальных антител, лизосомально-катионных белков в гранулоцитах крови, уровень общего белка и гамма-глобулинов в сыворотке, адсорбционное и фагоцитарное число в цитограмме ротоглотки и трахеи, а также напряженность иммунитета к ньюкаслской болезни.

Среднесуточный прирост массы тела у цыплят 2, 3 и 4 групп по сравнению с контрольной группой возрос на 0,7; 0,5 и ОД г; сохранность увеличилась на 4,2%, 4,1% и 0,2% соответственно.

Учитывая то, что витамин А в организме влияет на обеспечение нормального роста и развития птицы, дифференцировку эпителиальной и костной ткани, регулирует обмен веществ, необходим для синтеза лизоцима и антител, регулирует окислительные процессы в организме, становится очевидным целесообразность использования микровита А в виде аэрозоля и с кормом в промышленном птицеводстве накануне иммунизации.

Наши данные подтверждаются расчетом экономической эффективности. Экономический эффект от применения микровита А в виде аэрозоля составил 12,33; с кормом - 12,30; внутримышечно -11,46 рубля на голову.

Взаимоотношения некоторых общих и местных механизмов защиты

Интересно отметить, что при введении микровита А с аэрозолью на 3 день исследования у цыплят наблюдали наивысшую лизоцимную активность сыворотки крови, трахеального секрета и секрета двенадцатиперстной кишки, коэффициент корреляции составил г = 0,94. При введении микровита А с кормом отмечалась наивысшая активность лизоцимного секрета в сыворотке крови, трахеальном секрете и желудочном секрете на 21 день исследования, коэффициент корреляции г = 0,98. При внутримышечном введении препарата тесной взаимосвязи не отмечалось.

Вероятнее всего, это происходит потому, что ретинол, участвуя в окислительно-восстановительных процессах организма, стимулирует функцию серозных клеток бронхиальных желез, клеток кишечного эпителия. Так же при недостатке витамина А угнетается выработка секрета органов дыхания (О.И. Маслиева, 1975) и, очевидно, пищеварения.

В наших исследованиях обнаруживается тесная прямая коррелятивная связь между уровнем ЦИК и насыщением гранулоцитов катионными белками при аэрозольном введении микровита А, коэффициент корреляции г = 0,%. Так же отмечается взаимосвязь между уровнями криоглобулинов и лизоцима в сыворотке крови. Увеличение обоих показателей происходит под воздействием микровита А независимо от способа введения, коэффициент корреляции г = 0,91.

ВЫВОДЫ

1. Микровит А обладает адьювантными свойствами при введении его в организм цыплят накануне иммунизации за счет увеличения концентрации витамина А в сыворотке крови. Степень этого влияния зависит от способа применения препарата.

2. Высокодисперсные частицы аэрозоля микровита А попадают в кровоток значительно быстрее, увеличивая концентрацию витамина в крови, активизируют лизоцимную активность сыворотки и секретов трахеи, желудка и двенадцатиперстной кишки, а также продукцию гетерогемагглютининов, фагоцитарную реакцию псевдоэозинофилов и адсорбирующую способность эпителиальных клеток слизистых оболочек трахеи и ротоглотки.

3. Пероральное применение микровита А стимулирует бактерицидную способность гранулоцитов крови и защитные свойства клеток пищеварительного тракта, что выразилось в увеличении количества лизоцима и циркулирующих иммунных комплексов в секретах, фагоцитарной активности псевдоэозинофилов на слизистой ротоглотки.

4. Внутримышечное введение микровита А цыплятам заметного стимулирующего действия не оказало ни на факторы местной защиты дыхательного и пищеварительного аппарата, ни на иммунологическое состояние.

5. При аэрозольном применении микровита А за день до аэрозольной иммунизации живой вирус-вакциной из штамма Ла-Сота, количество общего белка в крови цыплят существенно возрастает уже на третий день, главным образом за счет гамма-глобулинов и альбуминов, и сохраняется длительное время на этом уровне.

6. В качестве адьюванта аэрозоль микровита А имеет преимущества перед пероральным и внутримышечным введением в организм препарата, обеспечивая более высокий уровень антител к вирусу ньюкаслской болезни. При этом необходима меньшая концентрация микровита А (50 мг/м3 против 0,24 г/кг корма и 0,012 г/голову).

7. Обнаружена прямая тесная коррелятивная взаимосвязь между лизоцимной активностью сыворотки крови и этим же показателем в секрете трахеи и двенадцатиперстной кишки уже на 3 день после аэрозольного поступления витаминного препарата (1=0,94) и только через 21 день при пероральном применении его (г=0,98). При внутримышечном введении микровита А такой взаимосвязи не отмечалось.

При поступлении в организм микровита А с аэрозолыо прямая тесная коррелятивная взаимосвязь обнаружена между уровнем циркулирующих иммунных комплексов и насыщением гранулоцитов катионными белками (г=0,96).

Независимо от способа введения препарата заметна прямая коррелятивная взаимосвязь между уровнем криоглобулинов и лизоцима в сыворотке крови (г=0,91).

8. Экономический эффект от применения микровита А составил при аэрозольном введении 12,33 руб., при пероральном -12,30 руб., при внутримышечном -11,46 руб. на каждого цыпленка.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для стимуляции общей и местной иммунной защиты цыплят целесообразно вводить микровит А в виде аэрозоля в дозе 50 мг/м3 (экспозиция 30 минут) или в виде добавки к основному рациону в дозе 0,24 г/кг корма.

За день до аэрозольной и внутримышечной иммунизации целесообразно применять аэрозоль микровита А, при пероральной иммунизации - витаминный препарат с кормом или водой.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Клетикова Л.Б. Влияние микровита А на резистентность слизистых оболочек ротоглотки цыплят при разных способах его введения./Актуальные проблемы науки в сельскохозяйственном производстве. Тезисы докладов зональной научно-практической конференции. - Иваново, 1993. - С.175.

2. Клетикова Л.В. Клеточные факторы защиты дыхательной системы кур./Актуальные проблемы биологии. Сборник научных работ. Том 3. №1. -Томск, 2004.-С.105-106.

3. Клетикова Л.В. Иммунная защита слизистых оболочек пищеварительного тракта цыплят при разных способах введения микровита А/Актуальные проблемы науки в агропромышленном комплексе. Материалы 55-ой научно-практической конференции в трех томах. Том 11. Кострома, 2004. -С.104-105.

4. Клетикова Л.В., Алексеева СА Циркулирующие иммунные комплексы в трахеобронхиальном секрете и сыворотке крови у цыплят под влиянием микровита А при разных способах его введения./ Проблемы и перспективы развития сельскохозяйственной науки и АПК в современных условиях. Материалы научно-практической конференции. Том П.- Иваново, 2004.-С.114-115.

5. Клетикова Л.В. К вопросу о влиянии витамина А на слизистые оболочки ротоглотки цыплят (на примере микровита А)./Материалы научных исследований коллектива Естественно-географического факультета ГОУ ВПО «ШГПУ»: Сборник научных статей. Выпуск 2.- Шуя: Изд-во «Весть» ГОУ ВПО «ШГПУ»,2004.-С.8-9.

6. Алексеева СА, Гаврилова Т.Ю., Клетикова Л.В. Влияние биологически активных веществ на иммунную защиту цыплят и кур-несушек/ Свободные радикалы, антиоксиданты и здоровье животных. Материалы международной научно-практической конференции.- Воронеж. Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии, 2004. - С. 345-350.

—■

.,¿3 0 77,

Подписано к печати 22.11.2004 г. Формат 60x84/16. Бумага ксероксная. Печать ризография. Гарнитура Тайме Усл. печ. листов 1,3. Тираж 100 экз. Заказ № 696.

Издательство «Весть» ГОУ «ШГПУ» 155908, г.Шуя Ивановской области, ул. Кооперативная, 24 Тел/факс (09351) 2-60-04 E-mail: Vest/Licey@rambler.ru www.tpi.ru/~sgpu

Отпечатано в типографии ГОУ ВПО «Шуйский государственный педагогический университет» 155908, г.Шуя Ивановской области, ул. Кооперативная, 24

Актуальность темы. В условиях интенсификации птицеводства на промышленной основе возрастают экстремальные воздействия на птицу, поскольку по мере увеличения продуктивности они становятся все более чувствительными. По сообщению JI.C. Колабской (1989) под влиянием многочисленных факторов окружающей среды и постоянным воздействием лекарственных препаратов у птицы нередко наблюдается нарушение механизмов иммунной защиты. При этом резко повышается чувствительность организма к острым и хроническим заболеваниям, неэффективной становится вакцинация против инфекционных болезней, снижается продуктивность поголовья. Поэтому для сохранения здоровья и повышения продуктивности птицы важно добиваться постоянного снижения негативных влияний отдельных технологических элементов, в том числе вакцинаций, с одной стороны, и поддержания уровня иммунной защиты, с другой стороны (Г.А. Грошеваи др., 1996; Н.А. Лагуткин, 1999, 2003).

Исследованиями А.В. Селиванова (1973), В.Д. Соколова (1977), С.И. Плященко, В.Т. Сидорова (1978), И.П. Замоталова, З.В. Воробьева (1985), Н.А. Дидковского, Л.И. Дворецкого (1990), Р.П. Пушкарева, С.А. Алексеевой (1993) и др. установлена исключительно важная роль местных защитных механизмов слизистых оболочек дыхательных путей в профилактике болезней, передающихся воздушно-капельным путем. Наиболее высококонтагиозной является ньюкаслская болезнь.

Ведущая роль в комплексе противоэпизоотических мероприятий при ньюкаслской болезни принадлежит специфической профилактике, основанной на применении живых и инактивированных вакцин.

Однако вакцинация не всегда приводит к выработке напряженного иммунитета, особенно у молодняка.

В подобных случаях для усиления иммунного ответа при вакцинации применяют биологически активные вещества - витамины (Я.Н. Глухов, 1988; С.М. Дурдыев, 1993; В.Н. Кокурин, 2000 и др.).

Исследованиями С.М. Young, J.L. Sell (1982), А.П. Томилова, О.В. Главатских (2001); Н.Ф. Содомова (2003) доказано, что витамин А является антиоксидантом, повышает иммунитет, зрение, улучшает рост костной ткани, предупреждает развитие онкозаболеваний, усиливает действие половых гормонов, положительно влияет на кожу.

Известно также, что проявление того или иного стимулирующего действия в существенной мере зависит от дозы, временных параметров и от целого ряда других условий. Требуется дальнейшее совершенствование контроля за развитием поствакцинального иммунитета, который, в настоящее время основан на определении антител в сыворотке крови и не дает информации о состоянии защитных механизмов органов дыхания и пищеварения птицы.

Таким образом, проблема иммунной защиты кур в промышленном птицеводстве еще полностью не раскрыта и не решена.

Цель и задачи исследования.

Целью работы явилось изучение изменений показателей иммунной защиты организма в целом, а также дыхательной системы и пищеварительного тракта у цыплят при иммунизации против ньюкаслской болезни и под воздействием микровита А при разных способах введения его в организм.

Для достижения означенной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить изменение показателей местной защиты слизистых оболочек дыхательного и пищеварительного аппарата, а также иммунологическое состояние организма цыплят в промышленных условиях при введении микровита А разными способами;

2. Определить корреляцию между изучаемыми показателями;

3. Выявить экономически эффективные групповые методы стимулирования иммунной защиты цыплят в промышленном птицеводстве.

Научная новизна.

Выявлено, что цыплята, содержащиеся на птицефабрике с традиционной технологией, получившие микровита А однократно в виде аэрозоля и с кормом накануне иммунизации против ньюкаслской болезни имеют более высокий уровень иммунной защиты, что выражается в увеличении белка, адсорбционного и фагоцитарного числа в цитограмме слизистых оболочек ротоглотки и трахеи, лизоцима и циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке и секретах, лизосомально-катионных белков в гранулоцитах, сохранности цыплят, среднесуточного прироста живой массы тела.

Впервые установлено, что однократное введение аэрозоля микровита А в дозе 50 мг/м3 и добавка его к основному рациону в дозе 0,24 г/кг накануне иммунизации повышают антителообразование.

Практическая значимость.

1. На основании комплексных экспериментальных исследований предложены групповые экономически обоснованные пути введения микровита А, - с аэрозолью и кормом, способствующие повышению местной защиты дыхательного и пищеварительного аппарата.

2. Результаты исследования позволяют совершенствовать специфическую профилактику путем однократного введения микровита А с аэрозолью или кормом накануне иммунизации на птицеводческих предприятиях.

Основные положения выносимые на защиту. динамика специфических и неспецифических факторов иммунной защиты у птиц при разных способах введения микровита А; динамика местной защиты слизистых оболочек дыхательного и пищеварительного аппарата при разных способах введения в организм микровита А;

- корреляция показателей общих и местных механизмов защиты организма цыплят на фоне введения микровита А.

Апробация работы.

Результаты исследований доложены на научно-практических конференциях «Актуальные проблемы науки в сельскохозяйственном производстве» (Иваново, 1993), «Проблемы и перспективы развития сельскохозяйственной науки и АПК в современных условиях» (Иваново,2004); на конференции «Актуальные проблемы биологии» в Сибирском государственном медицинском университете (Томск, 2004); международных научно-практических конференциях «Актуальные проблемы науки в агропромышленном комплексе» (Кострома,2004); во Всероссийском научноисследовательском ветеринарном институте патологии, фармакологии и терапии «Свободные радикалы, антиоксиданты и здоровье животных» (Воронеж, 2004).

Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 6 работ, отражающих основное содержание работы.

Объем и структура диссертации. Ф

Диссертация изложена на 149 страницах машинописного текста и состоит из введения, 3 глав, выводов, практических предложений. Библиографический список состоит из 295 источников, из них 220 отечественных и 75 иностранных. Работа содержит 27 таблиц и 17 рисунков.

4. Выводы

1.Микровит А обладает адьювантными свойствами при введении его в организма цыплят накануне иммунизации за счет увеличения концентрации витамина А в сыворотке крови. Степень этого влияния зависит от способа применения препарата.

2.Высокодисперсные частицы аэрозоля микровита А попадая в кровоток значительно быстрее, увеличивая концентрацию витамина А в крови, активизируют лизоцимную активность сыворотки и секретов трахеи, желудка и двенадцатиперстной кишки, а также продукцию гетерогемагглютининов, фагоцитарную реакцию псевдоэозинофилов и адсорбирующую способность эпителиальных клеток слизистых оболочек трахеи и ротоглотки.

3.Пероральное применение микровита А стимулирует бактерицидную способность гранулоцитов крови и защитные свойства клеток пищеварительного тракта, что выразилось в увеличении количества лизоцима и циркулирующих иммунных комплексов в секретах, фагоцитарной активности псевдоэозинофилов на слизистой ротоглотки.

4.Внутримышечное введение микровита А цыплятам заметного стимулирующего действия не оказало ни на факторы местной защиты дыхательного и пищеварительного аппарата, ни на иммунологическое состояние.

5.При аэрозольном применении микровита А за день до аэрозольной иммунизации живой вирус-вакциной из штамма Ла-Сота, количество общего белка в крови цыплят существенно возрастает уже на третий день, главным образом за счет гамма-глобулинов и альбуминов, и сохраняется длительное время на этом уровне.

6.В качестве адьюванта аэрозоль микровита А имеет преимущества перед пероральным и внутримышечным введением в организм препарата, обеспечивая более высокий уровень антител к вирусу ньюкаслской болезни.

При этом необходима меньшая концентрация микровита А (50 мг/м3 против 0,24 г/кг корма и 0,012 г/голову).

7,Обнаружена прямая тесная коррелятивная взаимосвязь между лизоцимной активностью сыворотки крови и этим же показателем в секрете трахеи и двенадцатиперстной кишки уже на 3 день после аэрозольного поступления витаминного препарата (г=0,94) и только через 21 день при пероральном применении его (г=0,98). При внутримышечном введении микровита А такой взаимосвязи не отмечалось.

При поступлении в организм микровита А с аэрозолью прямая тесная коррелятивная взаимосвязь обнаружена между уровнем циркулирующих иммунных комплексов и насыщением гранулоцитов катионными белками (1=0,96).

Независимо от способа введения препарата заметна прямая коррелятивная взаимосвязь между уровнем криоглобулинов и лизоцима в сыворотке крови (г=0,91).

8.Экономический эффект от применения микровита А составил при аэрозольном введении 12,33 руб., при пероральном - 12,30 руб., при внутримышечном - 11,46 руб. на каждого цыпленка.

5. Практические предложения

Для стимуляции общей и местной иммунной защиты цыплят л целесообразно вводить микровит А в виде аэрозоля в дозе 50 мг/м (экспозиция 30 минут), или в виде добавки к основному рациону в дозе 0,24 г/кг корма.

За день до аэрозольной и внутримышечной иммунизации целесообразно применять аэрозоль микровита А, при пероральной иммунизации — витаминный препарат с кормом или водой.