Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Морфофункциональные изменения селезенки и крови при коррекции организма хомяков продуктами пчеловодства в онтогенезе

На правах рукописи

АХМАД УЛЛ И НА Эльмира Тимербулатовна

/г/

МОРФОФУНКЦИОНЛЛЬНЬГС ИЗМЕНЕНИЯ

СЕЛЕЗЕНКИ И КРОВИ ПРИ КОРРЕКЦИИ ОРГАНИЗМА ХОМЯКОВ ПРОДУКТАМИ ПЧЕЛОВОДСТВА В ОНТОГЕНЕЗЕ

16.00.02 — патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Оренбург - 2006

Работа выполнена на кафедрах физического воспитания, анатомии и гистологии, пчеловодства и зоологии ФГОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет»- г. Уфа.

Научный руководитель: заслуженный деятель науки Республики

Башкортостан, доктор биологических наук, профессор Маннапов Альфнр Габдуллович.

Официальные оппоненты: заслуженный деятель науки РФ,

доктор биологических наук, профессор Шевченко Борис Петрович; кандидат биологических наук, доцент фунтиков Виталий Федорович.

Ведущая организация:

Государственное учреждение «Башкирский научно-исследовательский центр по пчеловодству и апитерапии».

Зашита диссертации состоится «15» декабря 2006 г. в 10.00 часов на заседании диссертационного совета Д 220.051.01 в ФГОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет» по адресу: 460795, г. Оренбург, ул. Челюскинцев, д. 18.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет».

Автореферат разослан «10* ноября 2006 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук,

профессор

Р.Ш. ТаЙгузин

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Для накопления вируса при производстве антирабиче-с кой вакцины нз лабораторных животных широко используют хомяков. Однако, в связи с резкой сменой среды обитания и изменением условий существования у лабораторных животных происходит ослабление защитных естественных реакции организма. Последнее служит одной из основных причин замедления роста и развития, появления различных заболеваний, рождения слабого потомства, которое за определенный период не накапливает достаточной живой массы.

С другой стороны у хомяков-самок часто регистрируется каннибализм рожденного потомства и спячка (особенно в период с октября по февраль месяцы). У животных, страдающих каннибализмом, установлена недостаточность макромикроэлементов в организме, приводящая к развитию супрессивных реакций со стороны иммунной системы.

Однако из незрелорождающнхся лабораторных животных только у хомяков не изучены процессы пролиферации клеточных элементов, иммуноморфологических перестроек в структурных компонентах селезенки в различные сроки постнатального онтогенеза. Указанные аспекты являются наиболее актуальными, так как селезенка принимает самое активное участие в обеспечении иммунологической реактивности организма, рециклизме железа при распаде эритроцитов, пролиферации иммунекомпетентных клеток в Т— и В-зависимых зонах органа, определяющих иммунный статус и полноценность развивающихся животных.

Цель работы - изучтъ показатели роста, развития, иммуноморфологических перестроек в структурных компонентах селезенки, процессы пролиферации Т- и В-лимфоцитов и их популяций в крови на фоне коррекции работоспособности организма хомяков при экспериментальной физической нагрузке и без нее биологически активными продуктами пчеловодства, препаратом «Микровитам» и их композиционными формами.

В задачи исследований входило:

1. Изучить динамику изменения массы селезенки, абсолютных показателей среднесуточных приростов живой массы хомяковв постнатальном онтогенезеи на фоне коррекции внесением в рацион цветочной пыльцы, маточного молочка, аминокислот но-минерально-витаминного препарата «Микровитам» и их композиционных форм.

2. Исследовать макро-микроструктуру и иммуноморфологические перестройки в селезенке хомяков в постнатальном онтогенезе и под влиянием БАПП, препарата «Микровитам» и их композиционных форм.

3. Определить сроки морфологической дифферент)ровки паренхимы селезенки хомяков в постнатальном онтогенезе и под влиянием БАПП, препарата «Микровитам» и их композиционных форм.

4. Выявить динамику изменения содержания Т- и В-лимфоцитов и их популяций в крови хомяков в постнатальном онтогенезе и иа фоне коррекции БАПП, препаратом «Микровитам» и их композиционными формами.

5. Определить влияние на работоспособность организма, иммуноморфологиче-скую реактивность селезенки, показатели Т- и В-систем иммунитета хомяков физических нагрузок и установить возможность их коррекции БАПП, препаратом «Микровитам» и их композиционными формами.

6. Разработать нормативы взаимоотношений структурных компонентов селезенки, Т- и В-лимфоцитов и их популяций в крови под влиянием БАПП, препарата «Микровитам» и их композиционных форм.

Научная новизна. Впервые проведены комплексные исследования по выявлению особенностей роста, развития, соотношения процессов пролиферации, дифференцировки, перестроек структурно-функциональных компонентов селезенки, динамики изменения содержания Т- и В-лимфоцитов и их популяций в крови в постнатальном онтогенезе хомяков и при экспериментальной физической нагрузке на организм под влиянием БАПП, препарата «Микровитам» и их композиционных форм.

Теоретическая и практическая значимость работы. Данные о влиянии цветочной пыльцы, маточного молочка, амииокислотно-минерально-витамннной подкормки препаратом «Микровитам» и их композиционными формами на повышение работоспособности хомяков при экспериментальных физических нагрузках, на и мму но морфологические перестройки в Т- и В-зависимых зонах структурных компонентов селезенки, на динамику изменения процессов дифференциации н пролиферации в организме Т- и В-лимфоцитов, на профилактику явлений каннибализма у самок, позволяют рекомендовать их для внедрения в питомниках для лабораторных животных с целью повышения эффективности использования хомяков для получения антирабической вакцины.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Динамика изменения массы селезенки, абсолютных показателей среднесуточных приростов живой массы хомяков в постнатальном онтогенезе и на фоне внесения в рацион БАПП (цветочной пыльцы, маточного молочка), аминокислотно-минерально-витаминного препарата «Микровитам» и их композиционных форм.

2. Макро-микроструктура и иммуноморфологические перестройки в селезенке хомяков в постнатальном онтогенезе и на фоне влияния БАПП, препарата «Микровитам» и их композиционных форм.

3. Показатели Т- и В-систем иммунитета хомяков и их коррекция БАПП, препаратом «Микровитам» и их композиционными формами.

4. Взаимоотношения структурных компонентов селезенки, Т- и В-лимфоцитов и их популяций в крови, определяющих иммунобиологическую реактивность организма в постнатальном онтогенезе хомяков и возможности их коррекции БАПП, препаратом «Микровитам» и их композиционными формами.

5. Влияние экспериментальных физических нагрузок на иммуноморфологическую реактивность селезенки, показатели клеточного и гуморального звена иммунитета и на фоне внесения в рацион БАПП, препарата «Микровитам» и их композиционных форм,

6. Возможности коррекции работоспособности хомяков, профилактика каннибализма и спячки самок БАПП, препаратом «Микровитам» и их композиционными формами.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены на научных конференциях Башкирского ГАУ (1999-2006 гг.), на П-ой, Ш-ей Международных научно-практических конференциях «Интермед- 2001, 2002» (г. Москва, 2001, 2002 г), на Международном конгрессе морфологов (г. Уфа, 2002 г), на Ш-ей Международной научно-практической конференции «Апитерапия сегодня» - «В

Ш тысячелетие с богатством Золотого улья» (г. Саратов,2001 г), на расширенном заседании кафедры пчеловодства и зоологии ФГОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет» (протокол 8 от 4.04.2006 г).

Публикация результатов исследований. Основные положения диссертационной работы опубликованы в ] 0 научных статьях.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 149 страницах компьютерного набора, иллюстрирована 28 таблицами, 4 гистограммами, 22 графиками, 3 фотографиями и 35 микрофотографиями с гистологических препаратов. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения результатов исследований, заключения, выводов и практических предложений. Библиография включает 182 наименования, в т.ч. 30 иностранных авторов.

2.0 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1 Материалы и методы исследований

Работа выполнялась с 1999 по 2006 гг. в условиях кафедр физического воспитания, анатомии и гистологии, пчеловодства и зоологии ФГОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет», лаборатории «Ожогового центра» городской клинической больницы Xsl8, г. Уфы. Материал собран от клинически здоровых хомяков в весенне-летний и осенне-зимний сезоны 1999-2003 гг. (из питомника лабораторных животных филиала ФГУП «Иммунопрепарат» МЗ РФ «Микроген», п. Горный Чишминского района Республики Башкортостан).

В соответствии с целью в первой серии опытов изучали рост, развитие организма, макро-м нкроморфологию селезенки в постнатальном онтогенезе, а также при коррекции биологически активными продуктами пчеловодства, препаратом «Микровитам» и их композиционными формами на 6 группах хомяков, в возрасте 1-270 дней. Количество и возрастные группы, а также варианты стимулирующих подкормок хомяков представлены в таблице Xsl.

1 группа хомяков была контрольной. Их основной рацион (ОР) состоял из кормовой смеси летнего и зимнего периодов, применяемой в питомнике лабораторных животных. Животные 2 группы получали ОР+цветочную пыльцу, 3 группы -ОР+маточное молочко, 4 группы — ОР+аминокислотно-минерально-витаминный препарат «Микровитам», 5 группы - ОР+цветочную пыльцу+«Микровитам», б группы — ОР+маточное молочко+«М и кровитам».

Животных каждой возрастной группы взвешивали. Взятие крови для иммунологических, гематологических и биохимических исследований осуществляли декапита-цией. Затем производили полное вскрытие и взятие органов для макроскопических, гистологических, иммунологических исследований.

Т- и B-лимфоциты выделяли в тесте розеткообразования. За Т- или В-лимфоциты принимали клетки, присоединившие 3 и более сенсибилизированных эритроцитов. Выделение B-лимфоцитов проводили с эритроцитами быка, а Т-лимфоцитов с эритроцитами кролика. Оценку субпопуляций Т-лимфоцитов проводили в реакции розеткообразования с теофиллином (Фримель Г., 1987 г).

При изучении макро морфологи и селезенки применяли методы препарирования, макроскопического исследования их в свежем виде, взвешивания, получения мазко в-отпечатков (с точностью до сотых мг).

1. Возрастные группы, количество хомяков и варианты стимулирующих подкормок

Возраст, группы ;;нем Опытные группы ОР +

№ пл. ОР-коитроль Цветочная пыльиа Матичное молочко «Микровнтам» Цветочная пыльна+ «Мнировнтам» Маточное молочко + яМикровмтам»

I 1 10 10 10 10 10 10

2 5 10 10 10 10 10 10

Э 10 10 10 10 10 10 10

4 30 10 10 10 10 10 10

5 45 10 10 10 10 10 10

6 60 10 10 10 10 10 10

7 90 10 10 10 10 10 10

120 10 10 10 10 10 10

9 150 10 10 10 10 10 10

10 180 10 10 10 10 10 10

11 210 10 10 10 10 10 10

12 240 10 10 10 10 10 10

13 270 10 10 10 10 10 10

Для гистологического исследования кусочки материала и целые органы фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина, жидкости Ценкера и Кар ну а. Обшую структуру органов изучали на срезах, окрашенных гематоксилином и эозином, по Ван-Гизону, Маллори, Железосодержащий пигмент гемосидерин в паренхиме селезенки определяли по Перслу. Для изучения клеточного состава срезы селезенки красили азур II эозином по Романовскому-Гимза, а для более четкого определения клеточных элементов метиловым зелен ым-пирон ином по Браше.

Измерения различных тканевых структур органов проводили с помощью окуляр-микрометра под микроскопом МБСУ-3. Площади красной и белой пульпы, капсулы, трабекул. Т- и В-зависимых зон измеряли с помощью окулярной сетки.

Изучение влияния биологически активных продуктов пчеловодства на показатели работоспособности организма, иммуноморфологические перестройки структурных компонентов селезенки, содержание Т- и В-лимфоцитов в крови проводили на хомяках, подвергая их плаванию по методике Макаровой В.Г. (1986). Животные в возрасте 90 дней, по принципу аналогов, были разделены на 7 групп, по 12 голов в каждой. Животных 1-6 групп подвергли плаванию, в 7 группе плавание хомяков не проводилось.

1 и 7 группы хомяков были контрольными. Они также получали ОР типа кормовой смеси, применяемой в питомнике лабораторных животных. Животные 2-6 групп получалите же стимулирующие подкормки, что и в первой серии.

В соответствии с методикой определяли продолжительность плавания по группам до начала опытов (исходный показатель), а затем после начала применения указанных БАПП на 10,20 дни и на 5 день после прекращения курса. Показателем изменений работоспособности животных служило относительное измерение длительности плавания, вычисленное по формуле Макаровой В.Г,:

Р=(Т эксп. -Т контр.): (Т контр.) х 100%; где Т эксп. - средняя продолжительность плавания экспериментальных животных, Т контр, -средняя продолжительность плавания контрольных животных.

Полученные данные были подвергнуты статистической обработке методами вариационной статистики с проверкой достоверности результатов с помощью критерия Стьюдента и уровня значимости (Р) (Лакин Г.Ф,, 1980), по разработанным программам на ПЭВМ IBM PC.

3.0 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

ЗЛ Влияние биологически активных продуктов пчеловодства, препарата «Микровита м» на рост, развитие хомяков и макроструктуру селезенки в постнатальном онтогенезе

Показатель живой массы новорожденных хомяков-самцов колебался в пределах от 1,79 до 1,83 г. Данное значение у хомяков в онтогенезе имело тенденцию к изменению в возрастном аспекте и по группам. Интенсивный рост хомяков отмечается в первые два месяца жизни. В последующие 3 и 4 месяцы жизни этот процесс заметно затормаживается, а к 5 и б месяцам (к периодам дозревания всех органов и систем организма) убывает. В период половой активности хомяков (7 и 8 месяцы) отмечается вторая волна повышения живой массы животных. К 9 месячному возрасту вновь регистрируется понижение описываемого показателя.

Подобным образом изменяется живая масса хомяков 2-6 опытных групп. Однако показатели живой массы хомяков — самцов опытных групп, во вое сроки постна-тального онтогенеза, превышали данные животных контрольной группы.

Аналогично изменялась в онтогенезе динамика живой массы хомяков-самок.

Результаты исследования динамики изменения массы селезенки хомяков в постнатальном онтогенезе представлены в таблице 2,

2. Динамика изменения массы селезенки хомяков-самцов в постнатальном онтогенезе, мг

Группы Возраст исследованных животных, дней

HP 5 10 30 45 60 90 120 150 180 210 240 270

1 Общий раииок (ОР) М S.3 9,3 20 60 120 123 140 14Í 176 185 200 221 210

±т 3,14 0.1 £ 0,29 Ь,74 1,64 1,32 1.49 1,32 1,85 2.02 1,95 2,31 2,12

2 ОР+цветочная пыльца М V 9.4 21 а 62 132 134" 149' IÍ3" 190-' 210" 233"' 243" 244""

±т 0,11 0,2 0,34 0,89 1,47 1.67 1,54 1,86 2,01 2,11 2,02 2,56 2,47

J ОР+ыаточное молочко М 5,3 9,6 21.3" 63' 137" 139" 152" 155" 193" 212"' 236"' 245" 247ь"

±т 0,09 0,36 0,21 3,66 1,53 1.44 1.56 1.38 1.94 1,98 2,18 2,17 2,35

4 ОР+«Микровитам» М 5,1 9,S 21,3 66" 140 144 157" 159" 199 217 239 249'" 250'"

±т 0,17 0,23 0,89 3,81 1,13 1.36 1,88 1,74 1,77 2,06 1,98 2,21 2,48

5 ОР+цветочная пыльца <-«Микро&1гтам» М 52 21,4 67 145 147 158 161 201 220 241 255" 257"

±т Э,12 5,1« 0,11 »,74| 1,47 1,48 1,93 1,64 2,06 2,13 2,15 2,09 2,75

Ъ ОР+маточное мо кгч-ко+к М и кровитам» М 5,3 9.7 21.5 69" 147 150 160 163" 203 "' 222"' 244 260 262"'

±т 9,13 3,16 0.27 0,93 1.98 1.69 1,85 1,36 1,94 2,03 2,18 2.26 2,3

Примечание: * -Р=0,95 (t£¿2,78), ** - Р=0,99 (1о24,60), *** - P=0,999(to£8,6l)

Масса селезенки новорожденных самцов находилась в пределах от 5,1 до 5,3 мг. К половозрелому возрасту (45 дней) она увеличилась — в 23,07 раза (на 114,8 мг), к активному репродуктивному периоду (120 дней) — в 27,88 раза (на 139,8 мг), к началу угасания репродуктивного периода (240 дней) - в 42,5 раза (на 215,8 мг). При этом максимальное повышение показателя массы селезенки наблюдалось до 45 дневного возраста животных.

Внесение в рани он зверьков на фоне ОР цветочной пыльцы (2 группа), маточного молочка (3 группа), препарата «Мнкровнтам» (4 группа), и, особенно, цветочной пыльцы и маточного молочка в комплексе с «Микровитамом» (5 и б группы) способствовало выраженному увеличению массы селезенки, как хомяков-самцов, так и хомяков-самок.

Результаты, полученные при измерении длины и ширины селезенки хомяков в постнатальном онтогенезе, представлены в таблицах № 3 и 4 .

3. Динамика изменения длины селезенки хомяков-самцов в постнатальном онтогенезе, см

Группы С/П Возраст исследованных животных дней

НР 5 10 30 45 60 90 120 150 180 210 240 270

] Общий рацион (ОР) М 0,6 0,74 1,3 1,9 3,0 3,2 4,0 3,5 3,7 3,4 3,5 З.б 3,4

±ш 0,04 0,08 0,03 0,04 0,08 0,05 0,04 0,08 0,02 0,03 0.04 0,06 0,02

! ОР+цветочна я пылыи М 0,53 0.73 1,27 2,0 3,2 3,3 4,2* 4.1" 3.8 3,5 3,6 3,9* 3,7"

±т 0,03 0,04 0,08 0,05 0,04 0,07 0,05 0,02 0,07 0,08 0,05 0,06 0,08

М 0,6 0,76 1,31 2,2" зЖ 3,5' 4,4" 4,2" 4,0" 3,8" 3,9" 4,0' 4,0"

±т 0,02 0,04 0,08 0,05 0,06 0,06 0,07 0,03 0,06 0,04 0,05 0,08 0,07

4 ОР+« Мнкровнтам» М 0,61 0,76 1,31 2,4" 3,6" 3,9" 4,7"" 4.5"' 4,6"* 4,4*" 4,6'" 4,5"" 4,3*"

±т 0,04 0,05 0,07 0,05 0,08 0,07 0,06 0,06 0,05 0,05 0,07 0,08 0,06

5ОР+цветочная пыльца -*-«Микров;гтам » М 0.57 0.78 1,34 2,45" 3,8'" 4,0'" 4,9'" 4,7"* 4.8"* 4.7"' 4,9"" 4,8"* 4,9""

±т 0,03 0.05 0,07 0,06 0,04 0,07 0,07 0,05 0,05 0,04 0,02 0,05 0,08

Ь ОР+маточное молоч-ко+ «М икровита м » М 0,6 0,76 1,31 2,5*" 3.9"* 4,2"' 5,0*" 4,8'" 5,2*** 4,9""" 5,0"" 5,1"' 5,0*"

0,07 0,06 0,04 0,03 0,06 0,03 0,08 0,04 0.08 0,06 0,04 0.08 0,07

Примечание: * - Р=0,95 (1сй2,78), ** - ЕМ),99(№4,60), *** - Р=0,999 Кгйв.б!)

4. Динамика изменения ширины селезенки у хомяков-самцов в постнатальном онтогенезе, см

Группы С/П Возраст исследованных животных, анен

НР 5 10 30 45 60 90 120 150 180 210 240 270

1 Общий рацион (ОР) М 0,15 0,19 0,23 0,35 0,5 0,8 0,7 0,65 0,7 0,6 0,5 0,6 0,5

*га 0.005 0,01 0,05 0,07 0,09 0,04 0,03 0,07 0,08 0,06 0,08 0,07 0,05

2 ОР + цветочная пыльца М 0,16 0,18 0,24 0,36 0,55 0,87 0,85 0,67 0,76 0,67 0,55 0,65 0,6

0,01 0,04 0,03 0,02 0,07 0.07 0,06 0,06 0,07 0,04 0,04 0,07 0,08

3 ОР + маточное молочко М 0.15 0,2 0,25 0,37 0,6 0,89 0,88* 0,7 0,8 0,87' 0,67 0,69 0,7

±т 0,01 0,02 0,04 0,02 0,08 0,02 0,05 0,02 0,07 0,05 0,07 0,08 0,06

4 ОР + «Мнкровнтам» М 0,17 0,2 0,28 0,4 0,67 0,9 0,9" 0,79 0,9 0,93" 0,79' 0,75 0,8'

±т 0,01 0,06 0,06 0,04 0,06 0,02 0,04 0,04 0,07 0,03 0,06 0,07 0,08

5 ОР + цветочная пил та +» Мнкровнтам» М 0,16 0,18 0,29 0,42 0,69 0,93 0,91" 0,86 0,88 0,97" 0,87" 0,86 0,9"

±т 0,01 0,03 0,02 0,07 0,05 0,05 0,06 0,07 0,08 0,05 0,08 0,07 0,07

6 ОР + маточное молочко + «Микровитом» М 0,15 0,19 0,29 0,43 0,7 0,95' 0,92" 0,9 0,89 0,98* о.ка' 0,81 0.941'

*т 0.005 0,03 0,05 0,04 0,06 0,03 0,04 0.07 0,05 0,07 0,08 0,08 0,04

Примечание: * -РЧ),95 (1^2,78), ** - Р=0,99 ((024,60), *** - Р=0,999 (1гй8,61)

Длина селезенки новорожденных хомяков, колебалась в пределах от 0,53 до 0,61 см. Ее размеры у хомяков 1 контрольной группы увеличились, по сравнению с первоначальным показателем новорожденных зверьков к 5 дню жизни в 1,23 раза (на 0,14 см), к 10 дню-в 2,16 раза (0,7 см), к 30 дню-в 3,16 раза (на 1,3 см), к 45 дню-

в 5,0 раза (на 2,4 см), к 60 дню — в 5,33 раза (на 2,6 см), к 90 дню — в 6,66 раза (на 3,4 см). В этом возрасте дли на селезенки была максимальной, В последующие сроки длина селезенки хомяков незначительно уменьшилась, по сравнению с показателем 90'Го дня опыта. К 120 дню ее размер в длину превышал показатель новорожденных зверьков в 5,83 раза (на 2,9 см), к 150 дню- в 6,16 раза (на 3,1 см), к 180 дню-в 5,66 раза (на 2,8 см), к 210 дню-в 5,83 раза (на 2,9 см), к 240 дню - в 6,0 раза (на 3,0 см), к 270 дню - 5,66 раза (на 2,8 см).

Аналогичная тенденция регистрировалась нами при исследовании линейных размеров с&пезенки хомяков-самок.

Длина и ширина селезенки хомяков 2, 3, 4, 5 и 6 опытных групп имели тенденцию к более значительному увеличению, по сравнению с ее длиной и шириной в контроле.

Максимального размера длина селезенки зверьков опытных групп так же, как и контрольной, достигла к 90 дню жизни. К этому сроку исследования показатель длины селезенки хомяков 2 группы превышал контрольные значения в 1,05 раза (0,2 см), 3 группы - в 1,1 раза (на 0,4 см), 4 группы — в 1,17 раза (0,7 см), 5 группы -в 1,22 раза (на 0,9 см), 6 группы-в 1,25 раза (на 0,1 см).

В последующие сроки жизни зверей длина селезенки, во всех группах, незначительно уменьшилась.

Размер ширины селезенки новорожденных хомяков не превышал 0,15-0,17 см. До 60 дневного возраста зверьков данный показатель повышался. В росте живой массы хомяков и их макроскопических параметров селезенки в постнатальном онтогенезе имеются три закономерных пика: первый - интенсивный — в первые два месяца до наступления половой зрелости; второй - замедленный - в третий и четвертый месяцы, в период становления физической зрелости тела; третий — в седьмой и восьмой месяцы, в период активной репродуктивности.

Следовательно, изученные БАПП, препарат «Микровитам» и их композиционные формы способствуют более благоприятному развитию периферического органа иммунитета - селезенки. При этом стимулируется накопление живой массы, массы селезенки и линейных размеров органа.

4 Влияние биологически активных продуктов пчеловодства и препарата «Микровитам» на микроструктуру селезенки хомяков в постнатальном онтогенезе

4.1 М икр о морфологические изменения в строме селезенкн

■л

Селезенка является важным периферическим органом иммунобиологической защиты организма животного. При вскрытии взрослых хомяков селезенка представляет собой удлиненный, треугольно овальной формы орган, с ярко пурпурным цветом, по консистенции мягкая и рыхлая, по сравнению с другими органами. Поверхность гладкая, не прикреплена жировой и рыхлой соединительной тканью к соседним органам. С поверхности селезенка покрыта серозной оболочкой. На медиальной поверхности органа регистрируется длинная борозда, являющаяся воротами данного органа. При приближении к ним селезеночная артерия делится на несколько ветвей, которые входят в вещество органа отдельно в разных точках вдоль удлиненных ворот. Вены и лимфатические сосуды выходят их селезенки рядом с артериями, которые входят в

нее. Сливаясь, вены образуют селезеночную вену. Приносящих лимфатических сосудов на свободном поверхности селезенки не обнаруживается. Лимфатические сосуды селезенки - выносящие. Как правило, они заключены в соединительнотканный футляр и выходят через ее ворота. На гистопрепаратах селезенки различают два типа пульпы: белую и красную.

Белая пульпа разбросана в виде крошечных образований, состоящих из ретикулярной ткани, образующих лимфатические узелки (лимфоузелкм или фолликулы) в которой сконцентрированы лимфоциты. Красная пульпа заполняет все остальное пространство. Остов ее образован сетью ретикулиновых волокон. В ней также регистрируются синусоидные капилляры.

Капсула органа относительно хорошо развита и состоит из кол лаге новых, эластических волокон. Между ними располагаются фибробласты и небольшое количество гладком ышечных клеток.

Трабекулы, рассеяны по всей поверхности среза селезенки, они проходят от ворот и расходятся в различных направлениях, часто связываются с трабекулами, идущими внутрь от капсулы. Трабекулы рассечены во всех плоскостях, встречаются продольное, поперечное и косое направления.

Состоят они из плотной соединительной ткани, содержащей много эластина. В трабекулах имеется небольшое количество гладко мышечных клеток также как и в капсуле. Трабекулы, идущие от ворот, несут артерии, вены и нервы. Самые большие трабекулы регистрируются вблизи ворот, они содержат самые крупные сосуды. Артерии в них окружены более толстым слоем гладкой мускулатуры, чем вены. Стенка вен тонкая, лежат они также в толстых трабекулах. Артерии, направляющиеся внутрь от ворот по крупным трабекулам, разветвляются на мелкие сосуды, которые выходят из трабекул и впадают в пульпу. Белая пульпа селезенки распределена вдоль артерии вышедших из трабекул и в каждом месте, где образуется лимфатический узелок, артерия разветвляется для снабжения кровью самого лимфатического узла, образуя так называемые лимфоузелковые артерии. Далее она сама делится, образуя сеть капилляров лимфатического узелка, и затем выходит из нее в окружающую красную пульпу.

Установлено, что параллельно с ростом массы селезенки происходит развитие и качественное преобразование, как стромы, так и ее паренхимы.

Строма селезенки хомяков представлена, как у большинства, животных соединительнотканной капсулой и трабекулами, состоящими из нежной соединительной ткани с примесью пучков главкомышечных клеток. Снаружи она прикрыта мезоте-лием. Интенсивный рост толщины капсулы и отходящих в орган трабекул регистрируется до 60 дневного возраста зверьков.

Разв>пие тканевых структур селезенки продолжается в постнатальном онтогенезе. Толщина трабекул в различных участках органа колеблется в широких пределах. При вступлении в толщину органа, на периферии, она не уступает параметру толщины капсулы. По мере углубления в паренхиму органа ее толщина возрастает, по сравнению с капсулой, в 1,6 - 1,9 раза. Гладко мышечные пучки, регистрируемые на гистопрепаратах в поперечных и продольных направлениях, образованы 15-23 мионамн. С возрастом животного строма органа утолщается за счет соединительной и новообразованных пучков гладком ышечной тканей. У самцов показатели толщины капсулы и трабекул больше, чем у самок.

В опытных группах толщина капсулы, во все сроки исследований, незначительно превосходит аналогичный показатель 1 контрольной группы.

Максимальная толщина капсулы селезенки хомяков самцов и самок регистрируется к 180 дневному возрасту хомяков.

4.2 Мнкроморфологические изменения в паренхиме селезенкн

Иоследованне микроструктуры селезенки показало, что у 1 дневных хомячков паренхима органа, состоящая из ретикулярной ткани, не дифференцирована на красную и белую пульпу. Дифференцировка белой пульпы на гистопрепзратах органа регистрируется у хомячков с 10 дневного возраста.

Она происходит в результате уплотнения ретикулярной ткани и образования лимфатических узелков, где осуществляется созревание и антигенная дифферен-цировка лимфоцитов. С 30-дневного возраста в лимфатических узелках селезёнки регистрируется появление светлых, герминативных центров (центры размножения клеток). Количество последних активно возрастает до 90 дневного возраста зверьков. По отношению к светлому центру лимфатических узелков в ее коре выявляются эксцентрично расположенные артерия и вена.

Результаты исследования изменения соотношения белой пульпы селезенки хомяков в постнатальном онтогенезе представлены ка рисунке 1.

Возраст хомяков, в днях Возраст хомяков, е днях

—♦— Основной рацион -л- ОР+цветочная пыльца

—о— ОР+маточное молочко ОР+"Микрсвитам"

—ОР+цветочная пыпьца+"Микровитам" —в— ОР+маточное молочко* "Ми кров итам"

Рис. 1. Изменение соотношения белой пульпы селезенки хомяков у самцов (А) и самок (Б) в постнатальном онтогенезе.

Данные по подсчету изменения количественного состава лимфатических узелков на гистосрезах селезенки хомяков представлены на рисунке 2.

Рис. 2. Селезенка хомяков 270 дневного возраста: А - 2 группы, Б — 3 группы. Максимальное увеличение площади, занимаемой лимфатическими узелками со светлыми центрами (1) на фоне уменьшения площади красной пульпы (2) органа. Гематоксилин и эозином. Увеличение 40 (объектив-20, окуляр-2).

На гистосрезах селезенки самцов и самок новорожденных хомяков с 5 дневного возраста лимфатические узелки не регистрировались,

У 10 дневных хомяков-самцов содержание лимфатических узелков на гистосре-зе селезенки уже отличалось по группам. В контроле они составили лишь 2 шт., а у животных 2,3,4, 5 и б групп, соответственно: 4,5,3,6 и 8 шт.

С 30 дня исследований количество лимфатических узелков в селезенке хомяков резко повысилось. Этот процесс прогрессировал до 240 дневного возраста.

В постнатальном онтогенезе происходит активное увеличение размеров лимфатических узелков, что влияет на увеличение площади белой пульпы селе-

зенки, Размеры лимфатических узелков в селезенке хомяков самцов и самок опытных групп отличались по показателям от контрольной цифры уже с 10 дня их жизни. Значительный скачок этого показателя регистрировался к 30 дневному возрасту животных. Максимального значения площадь лимфатических фолликул в селезенке хомяков-самцов достигала к 150 дневному возрасту.

На 240 день опыта наблюдалось некоторое уменьшение площади, занимаемой лимфатическими фолликулами селезенки. Эта тенденция была характерной как для опытных, так и для контрольной групп и продолжалась до конца исследований (270 дней). Подобным образом отмечалось изменение реактивности лимфатических фолликул в селезенке хомяков-самок. Они лишь незначительно уступали показателям самцов по степени их проявления и выраженности.

4.3 Влияние биологически активных продуктов пчеловодства и препарата «Мнкровитам» на показатели Т- и B-систем иммунитета хомяков в постна тальком онтогенезе

В крови новорожденных хомячков Т-Е-РОК-лимфоциты составили 27,5%. Несколько выше их уровень был в крови животных 2, 3, 5, 6 групп (от 28,3 до 30,2%). В последующие сроки исследования до 90-го дня опыта наблюдалось повышение в крови хомяков содержания Т-Е-РОК-лимфоцитов. Показатель числа Т-клеток в крови зверьков I контрольной группы постоянно увеличивался, по сравнению с первоначальным значением: к 5 дню опыта в 1,14 раза (на 4,1%), к 10 дню - в 1,4 раза (на 11%), к 30 дню в 1,54 раза (на 15%), к 45 дню - в 1,61 раза (на 16,9%), к 60 дню - в 1,69 раза (на 19,2%), к 90 дню - в 1,7 раза (на 19,4%), к 120 дню - в 1,68 раза (на 18,7%), к 150 дню - в 1,66 раза (на 18,3%), к 240 дню - в 1,64 раза (на 17,6%), к 270 дню-в 1,61 раза (на 17,0%).

Подобным образом изменялась динамика содержания Т-Е-РОК-лнмфоцитов в крови хомяков опытных групп. Но этот процесс имел разную степень проявления. Менее выраженным он был в крови животных 4, затем 2 и 3 групп. Значительная активизация Т-Е-РО К-лимфоцитов регистрировалась в крови хомяков 5, и особенно, 6 групп. К 30 дневному возрасту хомяков уровень Т-клеток превышал контрольную цифру по 2 группе - в 1,01 раза (на 0,6%), по 3 группе - в 1,03 раза (на 1,5%), по 4 группе повышения числа Т-клеток не наблюдалось, по 5 группе - в 1,06 раза (на 2,8%), по 6 группе - в 11 раза (на 4,5%).

В последующие сроки исследований (45, 60, 90 и 120 дневные) отмечалось дальнейшее увеличение активности Т-клеток. Максимальный уровень Т-клеток, регистрируемый в крови хомяков к 120 дню нх жизни, превышал показатель животных контрольной группы по 2 группе— в 1,01 раза (на 0,9%), по 3 группе - в 1,04 раза (на 2,3%), по 4 группе - соответствовал контрольному значению, по 5 группе — в 1,07 раза (на 3,5%), по 6 группе - в 1,13 раза (на 6,4%). У 150 и 240 дневных хомяков содержание Т-Е-РОК-лимфоцнтов в крови незначительно, но достоверно понизилось, по сравнению с показателем 120 дневных животных, К концу наших исследований (270 дневные) уровень Т-клеток в кровн хомяков 4 группы соответствовал контрольному значению, а 2, 3, 5, 6 опытных групп — превышал контрольную цифру в 1,04, в 1,05, в 1,25 и 1,08 раза (на 2,2, на 2,5, на 3,4 и 4,0%).

Данные по изучению динамики изменения содержания в крови хомяков в постнатальном онтогенезе Т-хелперов и ТЧупрессоров представлены на рисунке3.

—Основной рацион -л- ОР+цветочная пыльца

—о— ОР+маточное молочко ОР+"Микровитам"

—»— ОР+цветочная пыльца+"Мккроэитам" —е— ОР+маточное мйлочко+"Микровитэм"

Рис, 3. Динамика изменения содержания Т-хелперов (А), Т-сулрессоров (Б) в крови хомяков в постнатальном онтогенезе.

Содержание В-ЕАС-лимфошггов в крови новорожденного молодняка контрольной группы составило 12,6%. Незначительно выше содержание В-клеток было в крови хомячков 4 группы в рацион матерей которых вносили препарат «Мик-ровитам». Они превысили уровень контрольных хомячков в 1,02 раза (на 0,3%). Значительно выше уровень В-ЕАС-лимфоцитов был в крови хомячков 2, 3, 5 и 6 опытных групп.

В процессе опыта содержание В-лимфоцитов в крови хомяков повышалось как в возрастном аспекте, так и в аспекте внесенных в корм композиционных форм. Уже к 5 дневному возрасту животных уровень В-ЕАС-лимфоцитов в крови хомяков 2 группы превысил контрольный показатель в 1,11 раза (на 1,5%), 3 группы - в 1,15 раза (на 2,1%), 4 группы — в 1,03 раза (на 0,5%), 5 группы - в 1,2 раза (на 2,8%), 6 группы - в 1,25 раза (на 3,5%). Содержание В-клеток в крови 30 дневных животных было выше, чем в контроле по 2 группе в 1,13 раза (на 1,9%), по 3 группе — в 1,17 раза (на 2,4%), по 4 группе в 1,04 раза (на 0,6%), по 5 группе — в 1,22 раза (на 3,2%), по 6 группе - в 1,27 раза (на 3,8%).

Процесс повышения количества В-ЕАС-лимфоцитов в крови продолжался до 90 дня исследования. К этому возрасту хомяков уровень В-клеток в крови был выше, чем у контрольных животных по 2,3,4, 5 и 6 группам, соответственно в 1,1 раза (на 1,8%), в 1,13 раза (на 2,2%), в 1,02 раза {на 0,4%), в 1,18 раза (на 3,1%), в 1,21 раза (на 3,6%). К следующему сроку исследования (120 дней) наблюдалось некоторое понижение уровня В-ЕАС-лимфоцитов, по сравнению с показателями пре-

дыдущего срока опыта, и во все последующие периоды жизни хомяков (150, 240, 270 днем) существенных изменении в содержании предшественников антителооб-разующих клеток не отмечалось. Однако при этом их уровень продолжал отличаться по группам, превышая контроль по 2 группе в 1,06 раза (на 1,0%), поЗ группе-в 1,07 раза (на 1,2%), по 4 группе - 1,01 раза (на 0,3%), по 5 группе - в 1,12 раза (на 2,0%), по б группе- 1,13 раза (на 2,2%).

4.4 Влияние физических нагрузок и БАПП в комплексе с препаратом «Микровнтам» на работоспособность хомяков

Работоспособность хомяков оценивали по тесту продолжительности плавания. За 1-3 мин до начала тестирования к корню хвоста животных прикрепляли груз в 7,5% от живой массы. В качестве критерия «отказа» от работы и развития утомления рассматривали время (мин) от начала плавания до неспособности удерживаться на поверхности воды.

Результаты изучения работоспособности по продолжительности плавания хомяков при внутрижелудочном введении биологически активных продуктов пчеловодства и аминокислотно-минерально-витаминного препарата «Микровнтам» представлены на рисунке 4.

в ОР+физ. раствор

□ ОР+цветочная пыльца

Q ОР+маточное молочко

5 день после завершения курса

Продолжительность плавания е % на:

□ ОР+"Микровнтам"

□ О Р+цветочная Лыпьца+"Микрови там"

□ ОР+ маточное молочко+ТИикров итам"

Рис. 4, Влияние биологически активных продуктов пчеловодства и препарата «Микровитам» на продолжительность плавания хомяков.

У хомяков 1 контрольной группы продолжительность плавания колебалась в пределах от 89,6 до 106,1%, Это свидетельствует, о том, что в контрольной серии экспериментов в результате плавательных тренировок имеет место увеличение продолжительности плавания на 5,8%.

Анализ результатов экспериментов по опытным группам показывает, что более активно действуют на работоспособность композиционные формы биологически активных продуктов пчеловодства с препаратом «Микровитам».

При этом максимальные значения работоспособности регистрировали у животных 5 и, особенно, 6 опытных групп. Здесь показатели работоспособности хомяков описываемых групп превысили контрольную цифру на 10 день эксперимента в 1,58 и 1,76 раза, на 20 день -в 1,45 и 1,53 раза.

После прекращения проведения курса приемов биологически активных продуктов пчеловодства, препарата «Микровитам» и их композиционных форм через 5 дней работоспособность хомяков 2, 3, 4, 5 и 6 групп, определяемая по тесту плавания, оставалась выше исходного уровня и показателя зверьков контрольной группы, которые получали с основным рационом физиологический раствор.

Таким образом, внесение в рацион хомяков-самцов 90 дневного возраста композиционной формы: цветочная пыльца+«Микровитам» и, особенно маточное молоч-ко+«Микровитам», способствуют повышению работоспособности их организма.

4.5 Влияние физических нагрузок и БАПП в комплексе с препаратом

«Микровитам» на и мму ном о рфо логические перестройки структурных компонентов селезенки хомяков

Измерения площадей структурных компонентов селезенки хомяков контрольной и опытных групп проводились на 20 день интенсивных физических нагрузок. Анализ полученных цифровых данных показал, что интенсивная физическая нагрузка на фоне только ОР у хомяков I контрольной группы, по сравнению с аналогичными данными 7 контрольной группы, животные которые не подвергались интенсивному плаванию, способствует глубоким деструктивным изменениям, которые проявляются, прежде всего, перестройками в белой и красной пульпе органа. Относительная площадь, занимаемая красной пульпой в описываемой группе, бьша больше на 13,3%, а белой пульпы, наоборот, меньше на 11,3%. При этом в белой пульпе органа происходило не только уменьшение числа, но и площади лимфоузелков без светлых и со светлыми центрами и периваскулярных лимфондных муфт. Уровень показателя площади Т-зоны органа был ниже, по сравнению с контрольной цифрой, в 1,27 раза (на 2,1%), а В-зоны - в 1,88% раза (на 9,2%).

Внесение в рацион животных БАПП и препарата «Микровитам» при выполнении интенсивных физических нагрузок оказало положительное влияние на соотношение структурных компонентов селезенки. Однако уровень их воздействия на структурные перестройки описываемого органа был неодинаковым. Заметное увеличение плошади белой пульпы, по сравнению с вышеописанной 1 контрольной группой, было установлено у животных 2 и 3 опытных групп, при внесении в основной рацион цветочной пыльцы и маточного молочка. Площадь, занимаемая белой пульпой, в селезенке у животных 2 группы составила 25,1%, а 3 группы -26,4%. По уровню они были выше контрольного значения животных 1 группы, соответственно в 1,37 и 1,45 раза (на 6,9 и 8,2%). Однако они не достигали фоновых значений животных, которые не подвергались плаванию, соответственно, на 4,4 и 3,1 %, В структуре лимфатических узелков увеличилось количество лимфоузелков со светлыми центрами. Доля площади лимфоузелков со светлыми центрами уве-

личилась во 2 группе на 0,9% (в 4,0 раза), в 3 группе - на 1,0% (в 4,3 раза). Площадь периваскулярных лимфоидных муфт (Т-зона), в описываемых группах, также увеличилась по 2 группе в 1,07 раза (на 0,6%), по 3 группе - в 1,15 раза (на 1,2%).

Внесение в рацион хомяков препарата «Микровитам» вызывало умеренную перестройку в В-зависимой зоне селезенки. Их значение превысило показатель 1 группы, соответственно, в 1,65 раза (на 0,7%). Площадь красной пульпы в данной группе уменьшилась, по сравнению с аналогичным показателем I группы в 1,07 раза (на 5,2%), а белой пульпы, напротив, увеличилась в 1,34 раза (на 6,2%).

Самые ярко выраженные позитивные изменения в Т- и В-зависимых зонах селезенки регистрировались у хомяков 5 н, особенно, 6 групп, в рацион которых цветочную пыльцу и маточное молочко вносили в комплексе с препаратом «Микровитам».

Площадь периваскулярных лимфоидных муфт в селезенке хомяков описываемых групп была близкой к параметрам физиологических норм и составила соответственно по 9,8%. Она превысила контрольную цифру животных 1 группы в 1,25 раза (на 2,0%). Площадь лимфоузелков со светлыми центрами была максимальной в 6 группе и составила 1,8% Уровень площади белой пульпы органа превысил аналогичный показатель хомяков 1 труппы в 1,58 и 1,61 раза (на 10,6 и 11,2%), а показатель красной пульпы, наоборот, был сниженным - в 1,14 раза (на 9,4%) и 1,15 раза (на 10,1%), что соответствует физиологическим параметрам.

Следовательно, внесение в рацион животных БАПП в комплексе С препаратом «Микровитам» при выполнении интенсивных физических нагрузок оказывает положительное влияние не только на работоспособность, но и способствует сохранению соотношения структурных компонентов селезенки на уровне параметров свойственных физиологическим нормам.

4.6 Влияние физических нагрузок н БАПП в комплексе с препаратом «Микровитам» на показатели Т- и В-систем иммунитета

Результаты исследований влияния физической нагрузки (плавания) на изменения в крови хомяков показателей Т-Е-РОК-лимфоцитов, их популяций В-ЕАС-лимфоцитов представлены на рисунке 5. Измерения проводились на 5 день после завершения физической нагрузки. Физическая нагрузка на фоне обычного рациона (1 группа), оказывала существенное влияние на состояние иммунной защиты организма. Уровень Т-Е-РОК-лимфоиитов был ниже, по сравнению с показателем хомяков контрольной группы, в 1,12-1,2 раза (на 4,5-3,0%). Внесение в рацион хомяков БАПП: цветочной пыльцы и маточного молочка, способствовали выраженному повышению активности Т-Е-РОК-клеток в организме хомяков. Их содержание превысило показатель животных 1 группы в 1,08-1,11 раза (на 3,17-4,5%). Внесение в рацион хомяков препарата «Микровитам» вызывало умеренную акти-. визацию Т-Е-РОК-клеток. Их уровень превысил показатель хомяков I группы в 1,04 раза (на 1,08%).

Значительная активизация клеточного звена иммунитета проявлялась у хомяков 5 и, особенно, 6 групп: в 1,15-1,19 раза (на 6,17-7,8%). Биологически активные продукты пчеловодства и их композиционные формы с «Микровитамом» усиливали в орга-

низме реакцию Т-хелперов. Внесение в рацион животных цветочной пыльцы повышало активность Т-хелперов в 1,05 раза (на 0,9%), маточного молочка в 1,1 раза (на 1,7%), препарата «Микровитам» в 1,03 раза (на 0,5%), цветочной пыльцы в комплексе с «Микровтамом» в 1,3 раза (на 4,97%), маточного молочка в комплексе с «Микрови-тамом» в 1,36 раза (на 6,04%). При этом содержание Т-Е-РОК-лимфоцитов и Т-хелперов в крови хомяков 5 и 6 групп было выше, чем у контрольных животных, не подвергнутых физической нагрузке плаванием.

ИТ-Е-РОК аТ-хеллеры ЕЭТ-супрессоры И В-ЕАС- лимфоциты

Рис. 5. Содержание Т-Е-РОК-лимфоцитов, их популяций и В-ЕАС-лимфоцитов в крови хомяков на 5 день после завершения курса физических нагрузок.

Высокая физическая нагрузка вызывала повышение супрессивных реакций в организме хомяков 1 группы. Здесь Т-супрессоры превысили показатель контрольных животных в 1,22-1,37 раза (на 3,0-4,5%). Биологически активные продукты значительно снижали активность Т-супрессоров в организме хомяков 2 и 3 групп. Заметно уступал им «Микровитам». Полностью супрессивные реакции снимались до уровня физиологических норм в организме хомяков 5 и б групп, которым в раиион вносили композиционные формы из цветочной пыльцы и маточного молочка с «Микровитамом».

Физическая нагрузка заметно затормаживала гуморальное звено иммунитета. Содержание В-ЕАС-лимфоцитов в крови хомяков 1 группы было ниже контрольных цифр в 1,27-1,37 раза (4,5-5,5%). «Микровитам», цветочная пыльца и маточное молочко способствовали повышению в крови животных В-ЕАС-клеток в 1,03 раза (на 0,5%), в 1,14 раза (на 2,03%), в 1,2 раза (на 2,97%). Значительное повышение уровня В-ЕАС-лимфоцитов регистрировалось в крови хомяков 5 и б

групп, в которых цветочную пыльцу и маточное молочко вносили в комплексе с «Микровитамом». Здесь уровень В-ЕАС-лимфоцитов превысил показатель хомяков 1 группы в 1,29 и 1,31 раза (на 4,33 и 4,5%), что соответствовало параметрам физиологических норм.

ВЫВОДЫ

1. Рост живой массы и селезенки хомяков в постнатальном онтогенезе закономерно проходит в три фазы: первая - интенсивная (1 и 2 месяцы до наступления половой зрелости), вторая — замедления процессов роста (с 3 и 4 месяцев жизни), третья - угасания (приходящаяся на 7-8 месяцы). Цветочная пыльцы, маточное молочко и, особенно, их композиционные формы с препаратом «Микровитам» стимулируют накопление живой массы, повышение линейных размеров и массы селезенки. Описанные показатели по всем параметрам выше у самцов, чем у самок.

2. Становление иммунобиологической функции, морфологической перестройкой и дифференциации паренхимы селезенки органа на красную и белую пульпу происходит к 10-дневному возрасту после рождения. Иммунологическая реактивность белой пульпы органа повышается с появлением лимфатических узелков со светлыми (герминативными) центрами к 30-дневному возрасту животных.

3. Композиционные формы цветочной пыльцы с препаратом «Микровитам» (5 группа) и, особенно, маточного молочка с препаратом «Микровитам» (6 группа) способствуют значительным иммуноморфологическим перестройкам в селезенке хомяков самцов и самок. При этом:

а) масса селезенки самцов увеличивается в 49,42 и 49,43 с момента рождения к 270 дню жизни и в 52,98 и 53,13 раза у самок к 270 дню,

б) длина селезенки самцов увеличивается в 8,6 (к 90 дню) и 8,67 (к 150 дню) и в 8,07 и 8,0 раз у самок к 240 дню,

в) ширина селезенки самцов увеличивается в 6,06 и 6,53 к 180 дню и в 7,5 и 7,0 раз у самок к 60 дню,

г) толщина капсулы селезенки самцов увеличивается в 9,27 и 9,3 к 180 дню и в 9,87 и 9,73 раза у самок к 210 дню,

д) площадь белой пульпы органа самцов расширяется за счет образования лимфатических узелков в 9,37 и 9,0 к 270 дню и в 6,26 и 6,1 раза у самок к 270 дню,

е) площадь красной пульпы органа самцов уменьшается в 1,58 и 1,59 к 270 дню и в 1,56 и 1,62 раза у самок к 270 дню.

4. В постнатальном онтогенезе хомяков всех возрастных групп в паренхиме селезенки преобладает красная пульпа, площадь которой активно уменьшается до 120 дневного возраста.

5. В ранние сроки постнатального онтогенеза разрушение эритроцитов и накопление гемосидерина в селезенке хомяков не происходит. Этот процесс заметно регистрируется со 120 дневного возраста, а усиленный их распад наблюдается у 240 дневных животных.

6. Цветочная пыльца и, особенно, маточное молочко в комплексе с препаратом «Микровитам» способствуют активизации в организме хомяков показателей

Т- и В-систем иммунитета:

а) уровень Т-Е-РОК-лимфоцитов в крови хомяков повышается в 1,67 и 1,74 раза к 120 дню,

б) содержание Т-хелперов увеличивается в 1,39 и 1,38 раза к 120 дню,

в) содержание Т-супрессоров снижается в 1,13 (к 150 дню) и в 1,14 (к 270 дню) раза,

г) количество В-ЕАС-лимфоцитов повышается в 1,25 и 1,18 раза к 90 дню.

7. При принудительном плавании (экстремальная физическая нагрузка) внесение в рацион хомяков цветочной пыльцы, маточного молочка, препарата «Мик-ровитам» и их композиционных форм способствует повышению работоспособности самцов и самок по 2 группе на 34,2 и 28,6%, по 3 группе на 50,07 и 35,6%, по 4 группе на 33,4 и 16,3%, по 5 группе на 52,07 и 48,7% и по 6 труппе на 68,7 и 56,7%.

8. Внесение в рацион хомяков при интенсивных физических нагрузках композиционных форм цветочной пыльцы и маточного молочка с препаратом «Мик-ровитам» способствует поддержанию структурных компонентов селезенки на уровне, соответствующей параметрам физиологических норм, при значительной активизации иммунокомпетентных Т- и В-зависимых зон в белой пульпе органа.

9. Биологически активные продукты пчеловодства в комплексе с препаратом «Микровитам» на фоне физических нагрузок способствуют повышению в крови хомяков содержания Т-лимфоцитов в 1,68 и 1,75 раза к 120 дню, Т-хелперов в 139 и 1,38 раза к 120 дню, В-лимфоцитов в 1,25 и 1,18 раза к 90 дню и затормаживают активность Т-супрессоров.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для нормализации обменных процессов в организме хомяков, предупреждения сонливости самок и каннибализма, с целью расширения возможностей для сохранения и увеличения их поголовья, необходимого для получения антирабиче-ской вакцины, целесообразно рекомендовать в питомниках для лабораторных животных, вносить в рацион хомяков композиционные формы цветочной пыльцы или маггочного молочка пчел с препаратом «Микровитам».

2. Цветочную пыльцу включать в рацион из расчета 1 г/гол. Маточное молочко вносить в дозе 0,005 г/гол в виде таблетированной формы апилака. «Микровитам» задавать из расчета 15 мг/гол. Препараты вносить в корм ежедневно 2 раза в день, в течение 20 дней, с повторами через 15 дней.

3. Диссертационный материал рекомендуется использовать в питомниках для лабораторных животных при составлении рационов кормления, для изучения биологии хомяков,а также причтении лекций и проведения лабораторно-практических занятий со студентами биологических, ветеринарных и зооинженерных факультетов в Вузах по дисциплинам «Микробиология и иммунология», «Анатомия и гистология», «Звероводство и лабораторное животноводство», «Кормление и содержание лабораторных животных», при написании монографий, научной и учебно-методической литературы в научно-исследовательских лабораториях соответствующего профиля.

Слисок опубликованных работ по теме диссертации:

1. Маннапов А.Г. Влияние биологически активных продуктов пчеловодства на показатели физической работоспособности / А.Г Маннапов, A.A. Рябов, Э.Т. Махнёва, З.Р. Хал плова, Р.Х. Абдулл и н // «Интермед - 2001»: материалы 11-й Международной научно-практической конференции. - Москва,2001.-Рыбное-С 183-184.

2. Рябов A.A. Влияние цветочной пыльцы на некоторые клинические показатели организма после физической нагрузки / A.A. Рябов, А.Г. Маннапов, Э.Т. Махнёва, ЗР. Халилова, Р.Х. Абдуллин //«Интермед - 2001»: материалы 11-й Международной научно-практической конференции.-Москва, 2001.-Рыбное-С. 185.

3. Рябов A.A. Динамика живой массы, показатели абсолютного и относительного приростов хомяков в постнаггальном онтогенезе / A.A. Рябов, А.Г. Маннапов, P.P. Ахмадиев, Э.Т. Махнёва, З.Р. Халилова, Р.Х. Абдуллин // Современные имму-номорфологические проблемы развития животных при ассоциативных инфекци-онно-инвазионных заболеваниях и использовании для их профилактики биологически активных продуктов пчеловодства.—Москва, 2001.-С 156-158.

4. Халилова З.Р. Влияние биологически активных продуктов пчеловодства на показатели работоспособности организма / З.Р. Халилова, Э.Т. Махнёва, A.A. Рябов, АР. Маннапов, P.P. Ахмадиев,РХ Абдуллин, АД1,Кереселидзе//Современные иммуноморфологические проблемы развития животных при ассоциативных ин-фекционно-инвазионных заболеваниях и использовании для их профилактики биологически активных продуктов пчеловодства. — Москва, 2001.-С. 178-182.

5. Махнёва Э.Т. Влияние физической нагрузки и продуктов пчеловодства на строение лимфоидных органов / Э.Т. Махнёва // Научно-теоретический медицинский журнал «Морфология»: IV конгресс Международной ассоциации морфологов. - Уфа, 2002.-С. 100.

6. Махнёва Э.Т. Влияние продуктов пчеловодства и физических нагрузок на морфологию органов иммунной системы / Э.Т. Махнёва, Н.Г. Энгельс, A.A. Рябов, А.Г. Маннапов // ФК и спорт на рубеже тысячелетия: материалы Международной научно-практической конференции. - Уфа, 2002. - С. 280-281.

7. Ахмадуллина Э.Т. Зоогигиен и ческ и е, биологические особенности содержания, роста и развития хомяков / Э.Т. Ахмадуллина, З.Р. Халилова, A.A. Рябов, Р.Х. Абдуллин // Современные проблемы интенсификации производства в агропромышленном комплексе: ВГНКИ. — Москва, 2005. — С. 34-35.

8. Ахмадуллина Э.Т. Активизация B-клеток хомяков, как источника плазматических клеток в специфической защите организма / Э.Т. Ахмадуллина // Современные проблемы интенсификации производства в агропромышленном комплексе: ВГНКИ. - Москва, 2005. - С. 35-36.

9. Халилова З.Р. Биологические значения разводимых хомяков в медицине и ветеринарии / З.Р. Халилова, Э.Т. Ахмадуллина, А.Ш. Кереселидзе, Р.Х. Абдуллин // Современные проблемы интенсификации производства в агропромышленном производстве: ВГНКИ. - Москва, 2005. - С. 290-292.

Лицензия РБ на издательскую деятельность №0261 от 10 апреля 2002 г. Подписано в печатьЗ( № 200£г. Формат 60x84.

Бумага типографская. Гарнитура Тайме. Усл. печ. л -' ^ -

Усл. гад. л. /„¿^-^ГГ_.Тираж _. Заказ №

Издательство Башкирского государственного аграрного университета. Типография Башкирского государственного аграрного университета. Адрес издательства и типограф ии:450001, г. Уфа, ул. 50 лет Октября, 34.

Актуальность темы. Для накопления вируса при производстве антираби-ческой вакцины из лабораторных животных широко используют хомяков. Однако, в связи с резкой сменой среды обитания и изменением условий существования у лабораторных животных клеточного содержания, по сравнению с их дикими сородичами, происходят значительные перестройки во всех органах и системах организма, приводящие к ослаблению защитных естественных реакций организма. Последнее служит одной из основных причин замедления роста и развития, появления различного рода заболеваний, рождения слабого потомства, которое за определенный период не накапливает достаточной живой массы.

С другой стороны бессистемная метизация, нарушение условий содержания и кормления, иммунодефициты, дисбактериозы различной этиологии приводят к снижению воспроизводительных функций лабораторных животных, рождению слабого потомства, которое за определенный период не накапливает достаточно живой массы. Разведением хомяков в нашей стране начали заниматься с середины 40-х годов. Значительный экономический ущерб лабораторному животноводству наносит каннибализм рожденного потомства и спячка хомяков-самок (особенно в период с октября по февраль месяцы). У животных, страдающих каннибализмом, установлена недостаточность макро-микроэлементов в организме, приводящая к развитию супрессивных реакций со стороны иммунной системы.

Однако из незрелорождающихся лабораторных животных только у хомяков не изучены процессы пролиферации клеточных элементов, иммуноморфоло-гических перестроек в структурных компонентах селезенки в различные сроки постнаталыюго онтогенеза. Указанные аспекты являются наиболее актуальными, так как селезенка принимает самое активное участие в обеспечении иммунологической реактивности организма, рециклизме железа при распаде эритроцитов, пролиферации иммунокомпетентных клеток в Т - и В - зависимых зонах органа, определяющих иммунный статус и полноценность развивающихся животных.

Цель работы - изучить показатели роста, развития, иммунологических перестроек в структурных компонентах селезенки, процессы пролиферации Т- и В-лимфоцитов и их популяций в крови на фоне коррекции работоспособности организма хомяков при экспериментальной физической нагрузке и без нее биологически активными продуктами пчеловодства, препаратом «Микровитам» и их композиционными формами.

Задачи исследований: 1. Изучить динамику изменения массы селезенки, абсолютных показателей среднесуточных приростов живой массы хомяков в по-стпатальпом онтогенезе и на фоне коррекции внесением в рацион цветочной пыльцы, маточного молочка, аминокислотпо-минерально-витамипного препарата «Микровитам» и их композиционных форм.

2. Исследовать макро-микроструктуру и сроки иммуноморфологической перестройки в селезенке хомяков в постнатальном онтогенезе и под влиянием БАПП, в комплексе с препаратом «Микровитам» и их композиционных форм.

3. Определить сроки морфологической дифференцировки паренхимы селезенки хомяков в постнатальном онтогенезе и под влиянием БАПП, препарата «Микровитам» их композиционных форм.

4. Выявить динамику изменения содержания Т- и В-лимфоцитов и их популяций в крови хомяков в постнатальном онтогенезе и на фоне коррекции БАПП, в комплексе с препаратом «Микровитам» и их композиционных форм.

5. Определить влияние на работоспособность организма, иммуноморфологиче-скую реактивность селезенки, показатели Т- и В- систем иммунитета хомяков физических нагрузок и установить возможность их коррекции БАПП, в комплексе с препаратом «Микровитам» и их композиционных форм.

6. Разработать нормативы взаимоотношений структурных компонентов селезенки, Т- и В-лимфоцитов и их популяций в крови под влиянием БАПП, в комплексе с препаратом «Микровитам» и их композиционных форм.

Научная новизна. Впервые проведены комплексные исследования по выявлению особенностей роста, развития, соотношения процессов пролиферации, дифференцировки, перестроек структурно-функциональных компонентов селезеики, динамики изменения содержания Т- и В-лимфоцитов и их популяций в крови в постнатальном онтогенезе хомяков и при экспериментальной физической нагрузке на организм под влиянием БАПП, в комплексе с препаратом «Микровитам» и их композиционных форм.

Теоретическая и практическая значимость работы. Данные о влиянии цветочной пыльцы, маточного молочка, амииокислотно-минерально-витамин-ной подкормки препаратом «Микровитам» и их композиционными формами на повышение работоспособности хомяков при экспериментальных физических нагрузках, на иммуноморфологические перестройки в Т- и В- зависимых зонах структурных компонентов селезенки, на динамику изменения процессов дифференциации и пролиферации в организме Т- и В-лимфоцитов, на профилактику явлений каннибализма у самок, позволяют рекомендовать их для внедрения в питомниках для лабораторных животных с целью повышения эффективности использования хомяков для получения антирабической вакцины.

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:

1. Динамика изменения массы селезенки, абсолютных показателей среднесуточных приростов живой массы хомяков в постнатальном онтогенезе и на фоне внесения врацион БАПП (цветочной пыльцы, маточного молочка), аминокислот-но-минерально-витаминного препарата «Микровитам» и их композиционных форм.

2. Макро-микроструктура и сроки иммуноморфологической перестройки в селезенке хомяков в постнатальном онтогенезе и на фоне влияния БАПП, препарата «Микровитам» и их композиционных форм.

3. Показатели Т- и В- систем иммунитета хомяков и их коррекция БАПП, препаратом «Микровитам» и их композиционными формами.

4. Взаимоотношения структурных компонентов селезенки, Т- и В-лимфоцитов и их популяций в крови, определяющих иммунобиологическую реактивность организма в постнатальном онтогенезе хомяков и возможности их коррекции БАПП, препаратом «Микровитам» и их композиционными формами.

5. Влияние экспериментальных физических нагрузок на иммуноморфологическую реактивность селезенки, показатели клеточного и гуморального звена иммунитета и на фоне внесения в рацион БАПП, препарата «Микровитам» и их композиционных форм.

6. Возможности коррекции работоспособности хомяков, профилактика каннибализма и спячки самок БАПП, препаратом «Микровитам» и их композиционными формами.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены на научных конференциях Башкирского ГАУ (1999-2006 гг.), на П-ой, Ш-ей Международных научно-практических конференциях «Интермед - 2001, 2002» (г. Москва, 2001, 2002 г), на Международном конгрессе морфологов (г. Уфа, 2002 г), на Ш-ей Международной научно-практической конференции «Апитерапия сегодня» - «В III тысячелетие с богатством Золотого улья» (г. Саратов, 2001 г), на расширенном заседании кафедры пчеловодства и зоологии Башкирского ГАУ (протокол 8 от 4.04.2006 г).

Публикация результатов исследований. Основные положения диссертационной работы опубликованы в 9 научных статьях.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 149 страницах компьютерного набора, иллюстрирована 28 таблицами, 4 гистограммами, 22 графиками, 3 фотографиями и 35 микрофотографиями с гистологических препаратов. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения результатов исследований, заключения, выводов и практических предложений. Библиография включает 182 наименования, в т. ч. 30 иностранных авторов.

5.0 ВЫВОДЫ

1. Рост живой массы и селезенки хомяков в постнатальном онтогенезе закономерно проходит в три фазы: первая - интенсивная (1 и 2 месяцы до наступления половой зрелости), вторая - замедления процессов роста (с 3 и 4 месяцев жизни), третья - угасания (приходящаяся на 7-8 месяцы). Цветочная пыльцы, маточное молочко и, особенно, их композиционные формы с препаратом «Микровитам» стимулируют накопление живой массы, повышение линейных размеров и массы селезенки. Описанные показатели по всем параметрам выше у самцов, чему самок.

2. Становление иммунобиологической функции, морфологической перестройкой и дифференциации паренхимы селезенки органа на красную и белую пульпу происходит к 10-дневному возрасту после рождения. Иммунологическая реактивность белой пульпы органа повышается с появлением лимфатических узелков со светлыми (герминативными) центрами к 30-дневному возрасту животных.

3. Композиционные формы цветочной пыльцы с препаратом «Микровитам» (5 группа) и, особенно, маточного молочка с препаратом «Микровитам» (6 группа) способствуют значительным иммуноморфологическим перестройкам в селезенке хомяков самцов и самок. При этом: а) масса селезенки самцов увеличивается в 49,42 и 49,43 с момента рождения к 270 дню жизни и в 52,98 и 53,13 раза у самок к 270 дню, б) длина селезенки самцов увеличивается в 8,6 (к 90 дню) и 8,67 (к 150 дню) и в 8,07 и 8,0 раз у самок к 240 дню, в) ширина селезенки самцов увеличивается в 6,06 и 6,53 к 180 дню и в 7,5 и 7,0 раз у самок к 60 дню, г) толщина капсулы селезенки самцов увеличивается в 9,27 и 9,3 к 180 дню и в 9,87 и 9,73 раза у самок к 210 дню, д) площадь белой пульпы органа самцов расширяется за счет образования лимфатических узелков в 9,37 и 9,0 к 270 дню и вбДб и 6,1 раза у самок к 270 дню, е) площадь красной пульпы органа самцов уменьшается в 1,58 и 1,59 к 270 дню и в 1,56 и 1,62 раза у самок к 270 дню.

4. В постнатальном онтогенезе хомяков всех возрастных групп в паренхиме селезенки преобладает красная пульпа, площадь которой активно уменьшается до 120 дневного возраста.

5. В ранние сроки постнатального онтогенеза разрушение эритроцитов и накопление гемосидерипа в селезенке хомяков не происходит. Этот процесс заметно регистрируется со 120 дневного возраста, а усиленный их распад наблюдается у 240 дневных животных.

6. Цветочная пыльца и, особенно, маточное молочко в комплексе с препаратом «Микровитам» способствуют активизации в организме хомяков показателей Т- и В- систем иммунитета: а) уровень Т-Е-РОК-лимфоцитов в крови хомяков повышается в 1,67 и 1,74 раза к 120 дню, б) содержание Т-хелперов увеличивается в 1,39 и 1,38 раза к 120 дню, в) содержание Т-супрессоров снижается в 1,13 (к 150 дню) и в 1,14 (к270 дшо) раза, г) количество В-ЕАС-лимфоцитов повышается в 1,25 и 1,18 раза к 90 дню.

7. При принудительном плавании (экстремальная физическая нагрузка) внесение в рацион хомяков цветочной пыльцы, маточного молочка, препарата «Микровитам» и их композиционных форм способствует повышению работоспособности самцов и самок по 2 группе на 34,2 и 28,6%, по 3 группе на 50,07 и 35,6%о, по 4 группе на 33,4 и 163%,по 5 группе на 52,07 и 48,7% и по 6 группе на 68,7 и 56,7%).

8. Внесение в рацион хомяков при интенсивных физических нагрузках композиционных форм цветочной пыльцы и маточного молочка с препаратом «Микровитам» способствует поддержанию структурных компонентов селезенки на уровне, соответствующей параметрам физиологических норм, при значительной активизации иммунокомпетентных Т- и В-зависимых зон в белой пульпе органа.

9. Биологически активные продукты пчеловодства в комплексе с препаратом «Микровитам» на фоне физических нагрузок способствуют повышению в крови хомяков содержания Т-лимфоцитов в 1,16 и 1,2 раза (на 6,17 и 7,8%>), Т-хелперов в 1,27 и 1,33 раза (на 4,97 и 6,07%), В-лимфоцитов в 1,3 и 1,31 раза (на 4,33 и 4,5%>) и затормаживают активность Т-супрессоров.

6.0 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для нормализации обменных процессов в организме хомяков, предупреждения сонливости хомяков-самок и каннибализма, с целыо расширения возможностей для сохранения и увеличения их поголовья, необходимого для получения антирабической вакцины, целесообразно рекомендовать в питомниках для лабораторных животных, вносить в рацион хомяков композиционные формы цветочной пыльцы или маточного молочка пчел с препаратом «Микровитам».

2. Цветочную пыльцу включать в рацион из расчета 1 г/гол. Маточное молочко вносить в дозе 0,005 г/гол в виде таблетированной формы апилака. «Микровитам» задавать из расчета 15 мг/гол. Препараты вносить в корм ежедневно 2 раза в день, в течение 20 дней, с повторами через 15 дней.

3. Диссертационный материал рекомендуется использовать в питомниках для лабораторных животных при составлении рационов кормления, для изучения биологии хомяков, а также при чтении лекций и проведения лабораторно-практических занятий со студентами биологических, ветеринарных и зооинже-нерных факультетов в Вузах по дисциплинам «Микробиология и иммунология», «Анатомия и гистология», «Звероводство и лабораторное животноводство», «Кормление и содержание лабораторных животных», при написании монографий, научной и учебно-методической литературы в научно-исследовательских лабораториях соответствующего профиля.

4.0 ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В лабораторной практике медицинских, биологических и ветеринарных учреждений, для проведения многих исследований и в качестве объекта биопробы применяются лабораторные животные. Особое место среди них отводится хомякам. Ценность этих животных значительна в связи с использованием их для получения антирабической вакцины. Однако для хомяков характерны спячка самок-кормилец и каннибализм детенышей, что затрудняет решение вопросов их воспроизводства. Это вызвано нарушением в организме самок-хомяков минерального обмена и отклонениями со стороны иммунной системы.

Однако у хомяков до настоящего времени остаются не изученными вопросы иммунного статуса, процессов пролиферации клеточных элементов и имму-номорфологических перестроек селезенки в разные сроки постнатального онтогенеза.

Актуальность изучения этих вопросов возрастает в связи с участием селезенки в обеспечении иммунологической реактивности организма, рециклизме железа при распаде эритроцитов, пролиферации иммупокомпетентных клеток в Т- и В-зависимых зонах органа, определяющих иммунную реактивность всего организма.

В этой связи задачи, вынесенные на решение и выполненные в данной работе, имеют как научное, так и практическое значение.

В настоящей диссертации впервые исследована динамика изменения приростов живой массы и массы селезенки в постнатальном онтогенезе хомяков (по половому признаку) под влиянием БАПП (цветочной пыльцы, маточного молочка) и аминокислотно-минерально-витаминного препарата «Микровитам» и их композиционных форм. Изучена макро-микроструктура и иммуноморфологиче-ские перестройки в селезенке, определены сроки морфологической дифферен-цировки паренхимы селезенки в разные сроки постнатального онтогенеза и под влиянием БАПП, препарата «Микровитам» и их композиционных форм. Установлена динамика изменения показателей Т- и В-систем иммунитета хомяков в постнатальном онтогенезе и влияние на дифференцировку Т- и В-лимфоцитов и их популяций цветочной пыльцы, маточного молочка, препарата «Микровитам» и их композиционных форм.

Определено влияние на работоспособность организма хомяков, иммупо-морфологическую реактивность селезенки, состояние Т- и В-систем иммунитета физических нагрузок и определены оптимальные возможности их коррекции БАПП, препаратом «Микровитам» и, особенно, их композиционными формами.

Полученные данные позволят, для улучшения воспроизводства хомяков, нормализации обменных процессов в их организме, с целыо предупреждения каннибализма и сонливости самок, расширения возможности получения антира-бической вакцины, рекомендовать в питомниках для лабораторных животных вносить в рацион хомяков композиционные формы из БАПП (цветочной пыльцы, маточного молочка) и аминокислотно-минеральпо-витаминной подкормки «Микровитам».

133