Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Характеристика микобактерий, выделенных от крупного рогатого скота, реагирующего на туберкулин в хозяйствах Западной Сибири и их идентификация

РГ6 од

7 Ч И П

" " iiüj/ iv.,.,0

РСССЕЕСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА ОНСКЕИ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ИНСТИТУТ ВЕТЕР КНАРНОЛ НЕДЛИННЫ

На нравах рукописи

УДК 619:616.98:379. S73. 2Ши:С35. 22/28

КАРИ НОВА ЛХХВША ЙНХА2ЛОВНА

ХАРАКТЕРИСТИКА ННЕОЕАКТЕРИП, ееделеншй ОТ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА, РЕАГИРЭТЯЕГО IIA ТУБЕРКУЛИН В ХОЗЯЙСТВАХ ЗАПАДКОЗ CHHHFH К ЕХ ИДЕНТНФЕШШЯ

16.00.03 - вет?вркнарная микробиология. бярусодогия, эпизоотология, кпкологип н гашунологля

АВТОРЕФЕРАТ та соискание ученой степени капайдата ветвютарязх азоте

т. Омск - 1993 г.

Работа выполнена в лаборатории эпизоотологии и специфической профилактики туберкулеза всероссийского научно-исследовательского

института бруцеллеза и туберкулеза живопшх и в хозяйствах омской

области.

Научный руководитель: Доктор ветеринарных каук. профессор Б. Я. Хайккн

Официальные оппоненты: . Доктор ветеринарках наук, профессор В. Г. Ошейков Кандидат ветеринарных наук Н. й. Шведова

Ведуаая организация - Казанский ордена Ленина ветеринарный институт инеии к. 3, вагаана.

зашта диссертации состоится года

з____час на заседании специализированного совета К. 120. 48. 01

при ог.скои государственной кдстиюте Бэтеринарной медишваь 644CQT, Омск - т. ул. октябрьская. 92.

С диссертацией коаяо ознакомиться а библиотеке Омского roer-, дарственного ш;статута ветеринарной недвтшы.

1993

Автореферат разослан___О.__1993 года.

Учен® секретарь специализированного совета кандидат ветеринарных наук,

доцент Б. н. Барабанов

02ЭАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы. Ггберкглез крупного рогатого скотг является серьезной проблемой во многих стралаг игра, так как наносит большой экономический я социальном ущерб. по данным международного эпизоотического бюро только'24 страны полностью свободны от туберкулеза. Значительных успехов в оздоровлении пргиного рогатого скота достигла и нала ветеринарная наука, за последние 5 лет уровень заболеваемости животных но Российской Федерации снизился в г, 9 раза, а количество неблагополучных пунктов за этот г? период в 1. 5 раза.

В системе мер борьбк с туберкулезом большое значение имеет аллергическая диагностика, но наличие у зявоттпп: севекбилязааии, обусловленной атипичными гажобактериями, существенно осложняет ее (.А.Н.Жаров, 1969. 1936; Г.а.Кшш, 1971, 1965; о.в. Нартиа, 1у71, 1974, 1982; в. е. Дуревскяй с. соавт. ,1978, 1984; л. с. Донченко, 1987, Н. , 1965; ть. ЭсЬИезгег , 1965, 19ТТ;Н. савов, 1974; н.тги-

кашга ,. 1977,1938; и. Димов, 1985; Г. Роггаеаз , 1983 и ер. ь необоснованный убой реагнрусскх па ту£ерку.п>тн хтазотетх, сенсибилизированных атипичдами-кикобактерияш. наносит гозякствак значительный экономический -ягерб в результате недополучения продуктов яи-вотноводства и свихзнкя прироста'поголовья крупного рогатого скота (Г. А. К21Ш, П. А. чулков, 1905).

Своевременность постановки первичного дк--гкоза или выяснения причин сенсибилизации гивоткых к туберкулину во яиогок зависит от качества лабораторных исследований, без проведешш которых .эпизоотическая сптуазня' кохет оставаться кеясвой па сг-отя-сенк: ряда лет, что и бывает в некоторых случаях (Н. П. Оздиексс, 19йб,1.

Актуальность вопросов дя^Фегекдиакки и идентификации выделенных культур ииксзактегнй диктуется необходимостью получения теоретических и экспериментальных данпын о возбудителе туберкулеза и атипичных иккобактериях» ниркуяетзт^пх среди крупного рогатого скота, реагиртенего па туберкулин. Актуальность перечисленных вопросов обусловила дели и задачи прскедепетс; исследовании.

Цель и задачи исследований. Далью работа было изучение биологических свойств культур мккоогктерйй, выделенных от реагкрую-Еего на туберкулин крупного рогатого скота, кэлока и скнвов с молочного оборудовали в хозяйствах окской сблпст:, с различной эпизоотической сктгаянгй по тусяркулезу, » дифферепвкавия и идентификация.

Для лостпгенкя пэлк сели поставлен; следуйте задач!;: 1, выделить и определить вадезу» принаддегэтогть культур гга-кобгктгркя, пзохировашюх из биокатерягяа, колика, скнвов с молочного оборудования в хозяйствах с различной зпягоотическои с~1-

туацией по ттбзрктлезт.

2. Провести анализ культурально-бкохииическнх методов дифференциации к идентификации никобактерий.

3. Выяснить эффективность подкохного, интратестикулярного и внутрикозшого (а нескольких модификациях) методов заражения лабораторных гивотныг с цель» дифференциации микобактерии.

4. Изучить сенсибилизирующие свойства и патогенность атипичных микобактерий, выделенных от крупного рогатого скота, реагировавшего на туберкулин и этих же микобактерии, изолированных с тест-объектов после воздействия на них зх - ного щелочного раствора Формальдегида.

5. Определить видовую устойчивость микобактерии к температурному Фактору , к неоднократному замораживанию и оттаивашго, к воздействию дезинФектантов (5/.-ному раствору хлоранина. з/.-ному щелочному раствору формальдегида).

6.Установить сроки сохранения »«неспособности и возможность размнояения микобактерий разных видов в молоке, воде, опилках.

Т. Изучить ультраструктуру атипичных микобактерии до и посла воздействия на них изониазида.

научная новизна, определен видовой состав микобактерии, циркулирующих з хозяйствах Западной Сибири с различной эпизоотической ситуацией по туберкулезу. Установлено, что атипичные микобактерии широко распространены среди крупного рогатого скота, реагирующего на туберкулин не только в благополучных, но и в длительно неблагополучных по туберкулезу хозяйствах. Установлено одновременное паразитирование у хизотнье возбудителя туберкулеза бычьего вида и атипичных микобактерий. Изучена патогенность к сенсибилизирующие свойства некоторых видов атипичных микобактерий, ваделеаныз от крупного рогатого скота и этак ке микобактерий, изолированных с тест-обьектов после их дезинфекции зх-ным иелочныи раствором Формальдегида на телятах и морских свинках.

Установлено преимущество интратестикулярного метода введения культур микобактерий туберкулеза бычьего вида и атипичных при оценке их вирулентности на морских свинках в сравнении с подкох-нык.

изучены параметры устойчивости к температурному воздействию и дезинфектантам вирулентных и атипичных микобактерий. а такяе сохранение их яизнеспособности в воде, молоке и опилках при разных температурных рединах, при этом установлено размножение отдельных видов атипичных микобактерий в воде, молоке и выявлен Феномен йордообразования у последних.

Изучена ультраструктура атипичных кикобактерш после воздействия на них изониазида.

Практическая и теоретическая значимость работы. Полученкыг-результаты свидетельствуют, что выделение атипичных микобактегкг: от реагирующих на туберкулин хивотных в хозяйствах, неблагополучных по туберкулезу, не иожет бить показателен успешно осуществляемых противотуберкулезных мероприятий, Результаты исследовании позволяют расширить представление об особенностях проявления реакции на туберкулин и роли атипичных микобактерий в зпизоотологи-. ческой процессе, разработать целенаправленные методы профилактики 51 борьбы с туберкулезом и предупредить необоснованный убой sif-вотних, инфицированных атишгапдш михобактериями.

Установлено, что и. avium, К, gcrdone, Н. fortuitum. 11. dlerniioferl размножаются в воде и молоке. ■ Доказано, что многие виды • атипичных нккобахтерий обладая? кордообразлшев способность», поэтому Феномен кордообразоваяия не нохет быть использован при дифференциации микобактерий. внявлешше особенности выделенных культур микобактерий имеют не только практическое, но и теоретическое значение и могут быть использованы в учебном процессе на ветеринарных Факультетах шспих с. -к. учебных заведения, при написании учебпых и справочных руководств по микробиологии туберкулеза и атипичных тссобактеркй. а тагсге в научно-исследовательских лабораториях, заникакскхся изучением шпсобактериозоз. Практические ;предложения включены з методические рекомендации: "Лабораторная аиагаостйка туберкулеза" н "Диагностика и профилактика- иякобактзрнозов в с я е гптади з кх>о в этаж свиноводческих хозяйствах .сзбврл".

Адррбакия Работы. ■ катёркаш хггессртанки доложены на научных конференциях во Ш'ЖГЖ я. ОГЗЯ- (г. Омск. 1955, 19ss, 1990); научно-производственны:: конференциях зниавтж по диагностике бруделле-за и туберкулеза, гггвотных <г. Окск, 1935, 1936); всесоюзном коор-д1гаагаюкЕон совещании по лабораторной диагностике туберкулеза (г. Омск, 1937); объединенном меиуне проблемной.комиссии союзного значения "Фтизиатрия" АНН СССР и республиканской научно-производственной ,конференции "Вопросы борьбы с туберкулезом людей к животных" (Самарканд, 1939).

Публикации. По текэ диссертации опубликовано 10 научных работ, методические рекомендации (Н), получено 3 удостоверения на рационализаторские предлог-: кия.

Объем и структура диссертадии. Диссертация изложена на 220 страницах малшнопнсного текста и состоит из введения , обзора литературы, собственных исследовании, обсуждения, выводов, практических предложений и списка литературы. Диссертация идяюстркрова-на 20 фотографиями и 32 табдшгами. Список литературы включает 344 источника, из них 243 - отечественных я 101 - зарубежных авторов.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Натзриажд к нетоаи исследовании, работа выполнена в 1985- . 1992 гг. в отделе туберкулеза БННКБТ2, на опытной базе института, зональных мясокомбинатах и в хозяйствах западной сиеири с,различной эпизоотической ситуацией по туберкулезу.

Объектами исследований были 1133 пробы диагностического материала. в той числе г« пробы (кусочки.внутренних - органов и лимфатических узлов) от крупного рогатого скота, реагирующего на туберкулин для млекопитающих. Т69 проб от лабораторных гивотньк и телят экспериментально зарахенных возбудителем туберкулеза оычь-его вида (н. bovis) и атипичными микобактерияки. а таюге í¿ü проб молока и проб-сишзоа с молочного оборудования.

Лабораторные исследования проводили согласно "Методическим оказаниям по диагностике туберкулеза животных: (1976), "наставления по диагностике туберкулеза аошотаыз" (1985! и госту 26072-84 'Зивстике и'птиаа сельскохозяйственные".

дифференциацию и идентификацию мккобактериадышх культур проводили в соответствии с метсдичаскиш реконендапшши "Бактери-. ологическая и биохимическая идентификация т&обактери1Х" (Т. Б. Ильина. 1975,1900) я с приказом Минздрава СССР н 5за от a¡ о&. ?з года "Об унификации иш:ро5ьолог:гчес1с11л методов исследовании прц туоер-. кулезе". •

для даФЗореняиапии возбудителя ■тугаркудсза от атипичных кк-косахтерия в маэхая прикеааш методику Л.е.-Скрябиной (1955); изучение кикроскрпаческого роста у разаüx видов мнкоаактерки осуществляли кетодоц Прайсу (1941) с использованием среды Сотоаа.

достоверность культурзльяо-бкохидаческих тестов для дифференциации микобахтериst определяли по методикам- xsuKesara. е. а. (1992, 198S), Kestle е. а. (1967), А. А. Прозорова (1936), т.Б.Иль-иЕоа (19S0). Яри изучелии уиазаишк тестов'использовали 69'штампов референтдях я производственных культур михо бактерий.

срагшитедьвог изучение разних методов ' введения суспензия иссяедуешг культур лаборатории аавотшш для дифференциации ки-кобактерий еровошшн на 99 морских свинках, 27 кроликах и за куриных эибрионах. пркиеняя mstoflhxií Нот (1925), Kite и ratnode (1952), Ii. н, &JSSO с соавт. (1963), Todao-Todda. Fodor-Ferenczi в модификации h.a.Александрова и г.к.Коваль (1970). степень пато-генности изучаемых культур оценивали по срокам гибели, по сниже- ■ ний массы тела, по интенсивности поражения внутренних органов по схеме А. и. Тогуновой (1951) и методике AoKl, Sato (1907), использование числовых показателей (индексов) прй оценке патологоанато-

ккческих изменений позволило применить математическая метод для сроЕеркк достоверности поражения внттреннш: органов.

Для определения выживаемости никобактеркй газкых видов п .жидких объектах, через каждые 3-5 дней производили висенк прой воды, иодока, контакинированпык кикобактериями в копиентрапяи i, t¡ кдк ИЕКРобньЕ тел з j мл на среду Л«вешатей*а-Попсена. за контрольную величину врали'.число колония, выросши на среде после посева проб воды, колока. не подвергаЕгнгся воздействию крененного Фактора, которуз условно принимали за юо х. Объектами исследований служили i 3 кгльтгр игзееткн и эпизоотических ¡ггакнов к. bovis и атипичных кикобактерип.

■ Тернорегистезтность '.никобактерий в Физиологическом ргстворс и колоке, коктаиипироваииыг в кояцентрашга i ■ 5 ¡ítji кикро&нмг тел в 1 ил определяли при температуре 60-90" с к зхспозяаиях от г до 60 минут, повторяемость спита база 6-кратной до яояучгпия г совпадающих. результатов. О ,чи з н с с п с с о б н с с ти гшкобактерка после прогревания слана по • наличие. видимого роста на среде /йзензтэа-на-Иеисеиа.- за контрольную. величину прикипала число колония. выросших после'посева неходки: сгепекзий к про5 молока, не подвергаете«;. воздействию температурного .Фггсгзра. которую усяоеко прн-кхшали за юо х.

зо г-й серии опытов изучали сро—л кзавггекостн к. rovis к атипкчкых кихобактеРий при тегшературэ -iacc е ягркодпческим ©т-таявзЕиек-закорагпвашюм з условиях холоапаьзей камеру

Шсжваекость кгкобгктерпя- эталонных патгяов R. sévis ят. 6, luavlua пт. • • *5?рдан"; и. mtrace ilutaras, s. scrdeac. н. fortuituo, H. sr;c*sKât i s, к. ры s i в опггаках -изучали зря тгявсратуре s и »-гс'с Бактериологическое кселедоэаниг опилок проводили каждый иесяа в течеспе полутора дет. в качестве стандартной шзтатагьЕок среды Для иыдккапии кпкой-актеркя из опилок к их культивирования использовали среды петраиьяни и левеютейна-ленсена.

определяете устойчивости í l иузеяякх и с эпизоотических птаянов нккобзктеряй к дезин«?ектздт?.и осэтгесгатаяя с испоаьзога-■ икек кгтода носителей ншеоьаг.тэриальной вззеск. Опыты повторяли б-кратко дл получения-ае менее з созиадзаних результатов.

изучение патогешои' и. 'сеисябклазкругинг свойств аткшгахкх кпкосактерий. наиболее час'Го• пугеляеЕ«их от крупного рогатого скота' проводили на гт-клинически здорових телятах ч-месячного возраста. не реагирпявпх иг туберкулин для нлекоаят&гх ¡i кая. го средней кассой тела 92 кг. зашотзш: разделили на 6 опытных к огпу контрольную грпию. по 3 головы в каждой, Для интратраяеального заражения телят использовали культура к. fortuita ят. 19. H, sisesmatls ит. 129. !î. pâle i ат. 123 п а. аттт пт. юз, гкраакзкке

на среде Левенштейна-Иенсена, а такасе эти se штаммы микобактерий, изолированные в лабораторных условиях с тест-объектов после их дезинфекции 3 у.-mm щелочным раствором Формальдегида, в дозе 2 иг на кг масса тела животного с предварительным введением в трахее i нл 5 у.-ного раствора новокаина. Телятам 9-й группы (контрольной! вводили стерильный Физиологический раствор в объеме 10 мл. динамику аллергической реактивности у животных проверяли симультанной пробой через кагдые 30-45 дней в течение 226 дней (срок наблюдения). Павших и убитых животных подвергали патологоанатомическому исследованию, .отобранный на вскрытий материал исследовали бактериологическим и гистологическим методами.

Суй никро с ко пиче с кую организацию атипичных, микобактерии ,после воздействия на них изониазида изучали по методике кугег, Kelienberger (1958), совместно с научными сотрудниками ВЩШБТЗ Б. И. Коганом и Л. В. Гехес. Объектами исследований слухили: К. intra-, celiularae. и. xenopi. М. fortultuzn, к. smegm3ti3 и И. Phiei. s качестве контроля использовали рост культур на среде без добавления изониазида. Оценку и учет выросших культур проводили по 4-балльной системе (по Г. н. Перщшу).

РЕЗУЛЬТАТЫ ХССЛЕДОВАКНН

Выделение иккобактеркй от крупного рогатого скота,., . реагирующего на туберкулин, колока. смывов с молочного, оборудования в хозяйствах западной Сибири с различной эдизоотическои ситуацией по туберкулезу. При бактериологическом.исследовании секционного материала от Zfi животных. 120 проб молока, и скывов с молочного оборудования получено тз (21,4 '/■) культур микобактерий, в хозяйствах эпизоотически неблагополучных по туберкулезу выделено 5'. (22,1 X) культур микобактерий. в тон числе 43 (23, 3 у.) из биоматериала , из hex 9 ( 5,6 г.) штг.чмов были.отнесены к н. bovis и зу (23,7 у.) культур ко II. Ill и IV группам по классификации рань-она. из молока, смывов изолировано б (Т, 5 ¡с) культур атйпичкцх микобактерии. в благополучных хозяйствах получено 24 (го, о > культур атипичных микобактерий, в той числе 19 (23,7 у.) из биоматериала и 5 (12, 5 '/.) культур из молока и снывов с молочного оборудования.

Видовой состав 54 (69.2 х) культур, выделенных в неблагополучных по туберкулезу хозяйствах представлен: М. bovis -9 (16, ех>; К. sordone - 2 (3,7 у.) культур; ¡1 avium - б <u,i у.); к. terrae - 1 (1,9 культур; м. gastri - 2 (3,7 z); .н. fortuitutn - 5 (9,3 г> культур; Я smegmatis - 4 (7,4 у.); н. phiei - ц (7,4 у.) культур; п. mamtioieri. -г (3,7 v.);: и. vaccae -3 (5,3 v.) культур; п. ± lav es cans

- з (5,5 v.). Видовой состав 24 (30, б г.) культур, изолированны! г благополучных хозяйствах представлен: н. avium-- ч ап,ч к. terrae -2 (8,3 X) культур; ü. gordone - 1 (ч,г z); к. fortuitms -г (8,3 и» культур! Ii. smegaatis - з с 12, 5 :<>; к. phiei -з иг, 5 у.г, К. diernhoferl - г (8,3 ю культур; И. vaccae - г (3,3 х); к. fia-vescens - г (в, 3 х> культур. Видовая принадлежность определена г 62 (79.5 .х) культур кикобактеркй, остальные ie (20,5 v.) - отнесены к I V группе по классификации Раньона, Анализ количественного т: качественного состава атипичных нюсобактерий, выделенных от животных, из молока, смывов с молочного оборудования в хозяйства!; различной эпизоотической ситуацией по туберкулезу указывает на ее. идентичность.

Культуральяо-морфологические, тинкторизльнне и биохимические свойства выделенных культур микобактерий. Результаты изучения .кудьтгральио-норфологических, и биохимических свойств никобактерий представлены в табл. 1 и г.

Наблюдения за развитием микобактерии на стеклах в среде со-тона" показали морфологическую разницу в характере и скорости, роста микроколонкй И. bovis и "атипичных мккобактерки, К..bovis к 7-му дно лорнировали толстые, короткие жгуты, состоящие из руби-ново-краскых палочек. . расположенных параллельно оси жгута, к 10-му дк» кикроколожпе увеличивались и соединялись, образуя скопления ячеистого строения. Микобактерии комплекса aviiia-intraceUularae, п. sordene а эти же сроки ооразовызали хорошо выраженные нтерсколоиии. напоминавшие кккроколокии к. bovis, но отличающиеся от них менее компактным расположением клеток и кх морфологией, Если сроки появления микророста идентичны г всех видов аыстрораступих микобактерий, то его характер был различным. И, fortulttiE, п. diernhoferi через 48-72 часа Формировали никроко-довии в вида рыхлых ггггов состоящих из кислотоустойчивых и не-кислотогстойчиекх палочек, располокекных параллельно оси ггута и под углом друг к другу. н. stnseniatls, к. рые1, н. vaccae росли на стеклах в виде скоплений клеток различной морфологии, неравномерно окрашенных по Шиго-Нильсенг.

диФФереяакадкя микобактерий на питательных средах. Полученные результаты свидетельствует, что салшшлат и параамкносалици-лат натрия (ПАСЕ i, добавленные в среду /¡евенитеяна-яенсена в О, 05- 0,1 '¿-нор. к 0, 2. ^-ной концентрациях не всегда подавляли рост Н. bovis. Так, из 11 культур и. bovis полная задержка роста отмечена только у 7 птакмов, у 4 наблюдался рост единичные колоний (2-3) на 4-7 дней позднее, чем в контроле. Культуры атипичных никобактерий росли на среде с добавлением этих препаратов, хлорид натрия в 5 У.-аоП концентрации полностью ингабировал рост всех

- 10 - ■

штаммов Н. bovis и всех медленнорастущих атипичных микобактерий. Еыстрорастгоие никовактерии» за исключением Н. dlernfcoferi на среде с хлоридом натрия давали интенсивный рост, не отличаюштся от роста в контроле. При изучении теста деградации салшшлата и па-рааминосалинилата натрия установили, что б штаммов м. fortuitum на 3-11-й день расщепляли салицилат с изменением авета среды в темно-серый и один штамм на 13-й день окрашивал среду в серый цвет. Разрушение ПАСХа. сопровождающееся почернением среды на iü-и день вызывали 5 культур М. fortuitum из Т, 2 меняли цвет среды только на 1б-й день. .

Таблипа 1

^ультуральные свойства мигсобактерия. выделенных из секционного материала, молока, смывов с молочного оборудования

Наименование Никобактерии туберкулеза Атипичные

медленнорастущие быстрорастущие

c5cotoxp нефотохр crotosp нефотохр

Кол-во культур 9 3 15 22 29

Скорость роста, дв. 1Й-2Т а-16 8-1Ö 3-5 3-5

Отношение к свету, иет оран- кет хеято-. нет

пигмент пигмента. жевый пигмента о ран к. пигмента

Рост при темпера-

туре. С: 22 - + + (15) + +

37 + + »(15) 4 + -4-

45 - - X f-ilOi -

-( 5)

52 - - - - -

Рост на среде Ле-

венштейна-иенсена

с С. 05 и о, 1 г. са- - + + - +

линилатом натрия

0,2 ПАСЕ - + + + +

5х хлоридом натрия - - - + 13

примечание: 1 - цифрами в скобках обозначено число итадков мкко-бактерий. растущих при данной-температуре; 2 - большинство втаккой не рдртут при данной тенпературе; 3 - большинство птгммоЕ расту! на среде Левенштейна-Иенсена с 5 х-нын хлоридом натрия.

Таблица г

Вкогккическяэ свойства :«п;о5з;сгвр:г;г, вадглеипкз из секционного материала, молока, скшзов с молочного оборудования

Вид число нкаяи Редук- Амиднап Гидро- АРКЯ- Тер- Разру)

нккобактерш'! штам- новая дия РЯД лиз СУДЬ- мос- ¡пение|

мов проба нитра- ТЕ5Ш- Фат. таб. HACK J

тов 80 актив ката до ка|

яоеть лазы тегся

н. bovis 9 - - 3 - + - -

й. avi\M 10 - - 5.5 - - -

Н. sastri 2 - - 3.5 + - -

К. terrae ■з •J - - + ♦ + -

И. Ii or don e 3 - - + -

Я. fortmtum т - 1,3.8 ♦4-(3)» *

Н. scesnatls т - 1.2, 3,4. 3,6,9 ♦ ♦ i

Н. Phi ei 7 - 3, 5. б + * 1

s. vaccae 5 - + (2) 1, г. 3.4 4 г •f. -

-(2) 5,6. S,

К. diernkofe- л - <■(15 1.3, 5,5 - - - -

п

п. f lavescer.s 5 - <- -3, э * * -

Примечание: аншшнл код: t - аиотаки-, 2 - зеязамиж» 3 - мочевина. 4 - кзоникотияашш. 5 - яикотяванид. о - пиразкванкд. т - са-лиаиланид. 8 - аляактонн. 9 - сукпкнамкд. ю - калонамнд » - <г □тгкна И. fortuitun гидролнзовалп Тзнн-ао, з штампа - яет.

Использование сред Пстраньяни и лэпенштагна-Ееясена с 2 красителями (нейтралъро? к наяахг.товал зелены и& даат вогт?,-еости дифференцировать к. bovis от атищггаьп: кйдленкораст5«гп2 ки-кобактерий. Результата показали, что цвет сред изменялся кри посеве на нш: шшобактериз II и ш групп по глгсси^ккадггн Рааь-опа, в- 27.2? случаев срэдм окрашивались в Фколетоггкй квет при аосевб на hks и. bovis, что противоречит яктератургтм дгншзг.

ДиФФерегогиадия ншгобзктаркщ нря разные методам зарадоння лаборатории:; жзотльп. Установлено, что у морские свинок, зарзхэз-!шз К. bovis (et. г» 14. 92, 945 в твст55ку£ы. гибель зивстнк2 наступала на 7-12 дней равьаэ» чек при зяраяенна сод кожу, продолжительность хизнк составляла 2§,4iQ.? яаеа. индекс поражеа-ности но Тоггнозой бый равен 28,9*0» 6, при заражения под кояу -35, Iii, г дней и 23. iii, 3 cootestctb0kho.

При сравнительном изучении интратестакулярного и подкокногс методов установлено, что через 30 дней у свинок, зарахениых подкожно И, avium, К. fortultura, Н. ph.iei, к. smesiaatis числовое значение селезеночного индекса по AoKl варьировало от О,15 to,Ol до 0,2510,01, у морских свинок, зарагенк!» кнтратестикулкрно от 0,15J0.01 до 0,36Ю,02. самый высокий показатель отмечался в группе животных, которым вводили к. avim, самый низкий в группе свинок, инФицироваши К. smeenatis. Через 90- дней числовые показатели ей приблихаяись к корме - о, loto.oi (как при интратеетику-лярном, так и прй подковном введет:;: микобактерий). При подкохном и интратестикулярнок заражении свинок К. bovis у них отмечалось сшшгнив кассы тела в среднем па 22 к - ниже уровня зарегистрированного перед заражением. При введении ишо-погн атипичных икко-бгктериа код ко&у и в те спитая масса, их тела не снихалась в течение 90 дней. Кроме того, посевы биологического материала от морских свинок, зарахешшх иктратестикулярно атшзичкшш ?:икобак-терийии являлись иолозаггелыгаки в 50 случаев, при еодкокном лишь в 20 у..

У лабораторных яиватных при строго енутрикохнои введении И. bovis (KT. 5, 14. 92. 94, 99. 100) на 5-б-й день ПОЯВЛЯЛИСЬ воспалительные инфильтраты, которые через.2 Недели изъязвлялись.и к го-ку дню коаные дефекты заполнялись каэеозными кассами. Гибель корских евгшок от генерализованного туберкулеза наступала через 51.3И,0 дней с щшексом порахенности (ко AoKl) з.зю.г, при контрольной показателе о, 13Ю, Ol; .у кроликов, зараженных:в когу уха через 66,0i3,0 даей, у заракапшгх в коху лапок через ioi.ot 2, 8 ¡meß. Установлено, что • внутрккояное заражение лабораторных ейеотннх К. bovis во всех случаях вызывало у них кестнУю реакцию с некрозами и язваки, без дальнейшего их заживления.

Внутрикоякое введение морским свинкам и кроликам атипичных микобактерий, обусловливало у них в зависимости от вида разную степень проявления-коякых дефектов (без некроза) с последующим заживление» в сроки от 12 до 35 дней.

Вивовая устойчивость ккк.обактерий к Физическим и химическим Факторам. Гибель н. bovis в молоке и физиологическом растворе происходила при 60* через 40 иинух. при 70'с через, го минут, что подтверждалось отсутствием их роста на среде леванштейна-йенсена и отрицательной-еиопробой.

в Физиологическом растворе наибольшей устойчивость» обладали иикозактерии комплекса avium-lntrace!lularae п сапрофит в-5, в молоке - Н, fortuitua, которые оставались асизнеспособкыми при 60е в течение 60 кинут, при 70° - 25 и 30 минут, при а5° ь течение 5 и 15 кинут, при 90° с - а шшут соответственно. кроне того,

H. dlernhofen и м. lr.tracellularae. не растэтяиэ на среде левекп-тейна-Иенсена после термической обработки молока при 85 в течение Ю-15 минут и при 90°С - 2 кинут, к 7-1'Инг дшэ форнировзли на стеклах внраженные кикроколонии.

Повывенной устойчивость» к температуре -13 С"с периодическим замораживанием и оттаиванием' из атипичных мккобактерия обогнали виды: К. avium. S. fortaitun. которые- оставались кизнесяособкдш после 30-31-кратного закоражвакия-оттаивании в течение 104-125 дней. к. bovis сохраняли жизнеспособность в течение 33 диег. выдерживая Ю-кратное оттаивакие-заиораяивание, затеи через 41 день наступала их гибель.

установлено, что 5 к-ння раствор хлорамина полностью обеззараживал бязевые к деревянные тест-объекта. инФтироваяные п. bovis, . М. sastn, и. smeematis. Наибольшую устойчивость к дезикфек-тзнту проявляли м. fortuitmn, которые давали рост на средах в 16, 5-26, 3v. случаев. На 2-ом месте по резистентности бмлк Ii, avium, я. intracel lularae (а. з-il.t у.), н. ptiiei, в-3. Н. diernhofan, н. sordone устойчива к раствору хлоргикна примерно в равной степени (5, 0-11, 12!.

Белочной раствор Форкадьаегвда в зх-коа кондаятрапкк зюзвая юо к-нур гибель.клеток Н. bovis. к. eastri. н. cordons. Покгаэкпса резисткгагость». в данаокг деэпнфектанту обладали О. ат/Пхп. a. intracel lularae. их рост отмечал:: g t9,4-2s,o х случае» при посеге бязевых, и дереззйнюс тэст-обьектов, Устойчивость и. fortuituo. екяа тахссе достаточно высокой к в цропеатнои выражения составляла 16,6-23,3 X. И. pblei, Е-5, н. dlerahoferi, М. snegnatis проявляли меньшую устойчивость в сравнении с к. fortiutun.

Выживаемость- микобактериа-разных- видов в boss, молоке, опилках. при температуре зт* с н. bovis ' терядн жизнеспособность (способность.!: росту яа среде) в воде через зо-зо дней, в иолоке - 27-30 дней; при 22"С з воде через 21-27, о молоке - 24 дня. Культуры, атипичных никоеактершТ оставались жизкесцособпыни и воде в течение 42-82 , в молоке 12~зз в зависимости от их вида, при этом поваленной жизнеспособностью обладала "ц. iortuitum. Кетояон нюерокудьтивировадага установлено размножение п. cordon«. К. iortuitua» К. diernhofari в воде; tu fortuities. П. ülerühoteri, И. avium а иологсг.

При изучении вижиэзекостк кикобактеркй в ошгаках определили, что к. bovis сохраняли жизнеспособность и вирулентность при з* н стерильных опилках б месяцев, в несторкльныз - Ю; при la-ao'c соответственно S и 9 месяцев. Продолжительность выживания Н. aviun, К. intracel lularae при 5'достигала з стерильных опилках 9 месяцев, в нестерильных - 13 месяцев; при 13-20* С - S и 12 меся-

сев соответственно. Быстрорастущие кикобактерик оставались аиз-неспособными при 5 и ie-2Cf с в стерильных опилках - ю месяцев, в нестерильных - 13. Культуры микобактерий, изолированные из опилок отличались от исходных по культуральногморфологическим и биохимическим свойствам.

Изучение сенсибилизирующих к патогенных свойств атипичных микобактерий на телятах. Установлено, что микобактерии, выделенные от крупного рогатого скота, реагирующего на туберкулин и изолированные с тест-обьектов после их обработки 3 >:-ным селочным раствором Формальдегида при иятратрахеалькон заражении вызывали у телят аллергические реакции на щщ-туберкулин и КАН. различные по продолжительности и интенсивности. Б течение эксперимента (срок наблюдения 226 дней) внутрикбхыые реакции отмечали у 9 (39, i ?■) животных, из них у 7 (30,4 у.) реакции появлялись на оба аллергена к у г (В. 1 7.) телят только на КАК. Еояее интенсивно и продолжительно реагкрозали на туберкулин теллта. зараженные ,н. avium, из 6. животных на оба аллергена реагировали 4 теленка в течение 26-151 дне, у одного кз. них реакция на КАК продолхалась 196 - дней. .' в группе телят» инфицированных К. Piiiei аллергические: реакции на ппд-туберкулин к кан наблюдали у 3 животных в течение ге-ю& дней, далее через i5l день у цкх регистрировали реакции только на КАН. Ез б телят, зараженных К. fortuitum у i внутрикохные реакции продолжались на ппд-тубаркулин 28 дней к на как - 02 дня.

При ветержарно-саиитарной экспертизе туе * телят, "уоетык б конце опыта, видимых изменений, харшстерных для туберкулеза, не обнаружили, клеточных реакций, характерных для туберкулеза, ке отмечали нк в окном случае.

Влияние изониазида на рост и ультраструктуру атипичных мико- . бактерий. Установлено, что изокиазид в концентрациях: 0,1, 1,о , 5,о ккг/ил не вызывал задерхкк роста атипичных кикобактерик к не изменял характера кг роста. При концентрации препарата в среде ю ккг/мл отмечали задержку роста колоний п. intracellularае, К. xenopi к снижение интенсивности их роста.

При электронномикроскопическок исследовании выявлены морфологические отличия между отдельными видами атепюазгх микобактерий, которые выражались в неодинаковых Форкех, размерах клеток, толщине клеточных стенок и ее слоев, в особенностях строения нук-леоида. например, у н. smeematis, в отличие от К. fortuitum, Фибриллы дик выявлялись в виде вятянутого очень плотного тяжа е центральной части осмиофобной зоны, а г.. fortuitua имели на концевых участках булавовидные расширения! Установлено, что кзониазид в концентрациях: о, 1, 1,0, 5,0 ккг/кл не вяшш на ультраструктуру атипичных микобактерий, £ более высокой - 1С ккг/кл. вызывал кез-

начительные изменения в клеточкой стенхе я ндтоплазне. s которой появлялись многочисленные вакуоля.

в H в о д U

1. Атипичные-микобактерни широко распространены среди крупного рогатого скота, реагирующего на туберкулин не только в благополучный, но и в длительно неблагополучных по туберкулезу хозяйствах Западной Сибири.

2. При бактериологическом исследовании биоматериала от крупного рогатого скота, молока, смывов с молочного оборудования з неблагополучных хозяйствах выделено 54 (22. 1 у.) культур, из них 9 (3.7 у.) отнесены к И, bovis и 43 (13.4 X) к атипичным михобактери-яи. s. благополучных - изолировано гч (20 '■'■) культур атипичных ни-ко бактерий. Видовой состав последних з хозяйствах с различной эпизоотической ситуацией по туберкулезу идентичен и представлен: й. sorftoner H. avium,. H. terrae, H. sastn, 11. iortuifm, и. 3aesnati3, И. dlernhoferi, H. flavescens, й. vaccae, H. Pïtlel.

3. Для диФФеренпкаяяи возбудителей туберкулеза от атипичных иикобгктерий целесообразно нсподьзогать: бактериоскопию. скорость роста при разных температурах.ретинах, апгмектообразовакие. тесты с 5 7,-нш хлоридом натрия, лиаиднсвь-я. редукятаэ нитратов.

4. ИитРа?естикУЛЯР1шя метод заражения морских свинок позволяет' ускорить диагностику туберкулеза крупного рогатого скота на 7-12 дней в-Сравнапий-с,-подкогяын и способствует Еияплениг» у атипичных микобактериа . (Н. avium, H. fortuitum. Я. Phlei) потенциальной латогенности.

5. Внутрикожное введение И. bovis норскки снинкам и кроликам сопровождается появлением увеличивавшихся в разнераи инфильтратов. - в дальнейшем' изъязвлякяйкся с образованием казеозяых касс и незажшаюиих до гибели животных. -Введение атипичных кикобактерия II. III. IV групп (по Радьону) приводит к-.$оркироваккв когных дефектов," подвергашихся заживлений в течение 12-35 дней в зависимости от HS вида.

6. Кпковактерии комплекса aviuin-lntrace 1 lularae. н. fortul-tua. й. diernhoferi. И. ?Ые1 обладают повышенной резистентностью к 60, 70, 85, 90° с. сохраняя жизнеспособность в Физиологическом растворе и молоке в течение 30, 25-30. 5-15 и 2 минут соответственно. н. bovis погибают при so''с через 40 минут, при 70° с через го. минут. x периодическому оттаиканкю-занорактан:!» при -13" С повышенную устойчивость проявляют и. avrua, я. fortnitnia, которые остаются зпганеспособтгин з течение 104-125 дней после 30-31-кратного воздействия отггивашигзанорагнзанмя.

7. и. fortultuia, Н. avlm . н. lntracellularae обладают повышенной резистентностью к 5 у.-ному раствору хлорамина и. к з у.-ному иелочноку раствору Формальдегида, промежуточное положение занимают К. Pliiei. и. В-5. М. diernlioferi. Низкую устойчивость имеют И, smesmatls, it gorüone. М. bovis, й. sastrl чувствительны к данным дезинФектантам.

8. В воде II. bovis теряют кизиеспособность (рост на среде) при гг° в течение 21-27 дней, при 37" С - 30-36 дней; в молоке - 24 si Е7-30 'дней соответственно. Атипичные никобактерии Ешагвают в воде к нолоке в течение 15-82 дней в зависимости от вида, К, fortiiitum, Н. gordone, П. disrnhoferl -размножаются в воде, сохраняя способность к росту в течение 76-82, 60-63 и 51-54 дней соответственно. В молоке размиохаютса К. fortultuia, И. diernlioferi, iL avluas. сохраняя кизнеспособкость в течение 33, 30-33 и 15-18 дней.

В опилках Н. bovis остаются глзнеспособньми и вирулентными при 5е в стерпльних опилках - б нес, в нестерильных - 10 иес, при 18-20'С соответственно б и 9 месяцев. . н. avium. И. intracel lularae при 5°в стерильных опилках -"9 нес. в нестерильных - 13, при 1820" С - а и 12 месяцев,- Быстрорастущие Н,.fortultuia. н. Smesmatls, п. phi ei сохраняют- жизнеспособность при 5' и га -го' с в стерильных онилках - 10 нес, в нестерильных - 13.

¡с. Атипичные' "иякобактерид при кнтратрахеальном .заражении визитают у телят аллергические реакпки, '- с о храиягжи е с я при введении и. fortuituin - 82. дня, к. phlel - 151, к..-'avium - .196 дней, наиболее шраявш внутрщгогкне ргакгага на .sah. Патогенность у данных культур не -выявлена. ■ Идентичными свойствами обладают культуры зтих.яе видов, .изолированные с тест-обьектов, подвергавшихся'воздействию 3 ::-ного цепочного раствора Формальдегида.

11. Атипичные никобакхемш имеют различия в размерах, Форме, строении нуклеоида и актоплазмы, тодавше клеточных стенок и от-дслыагх ее слоев. Концентрация изониазида (10 нкг/мл) вызывает незначительные изменения, в ультраструктуре- атипичных микобакте-

РИЙ.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕД/ЮШШЯ

1. Аля диОФеренпиадии выделенных. культур -микобактерий целесообразно применять следующие тесты: бактериоскопию, рост при разных температурах, нигментообразование, ниадиковый, редгккшо нитратов и тест с хлоридом натрия.

2. Для определения вирулентности иикобактерий рекомендуется использовать ннтратестикулярный метод заражения морских свинок.

3. Дифференциали» выделенных культур ¡hiko бактерий на лабораторный зявотных ввутршсогиин кетодои целесообразно проводить ка морских свинках, так как сроки проявления внутрнкокнкх реакпия ? них значительно короче, чем у кроликов. При отсутствии свнкск. кроликов необходимо заражать в коху удноя раковин.

П. Для изучения размножения микобактерия в жидких объектах (молоке, воде), а такзе выявления слабожзнеспособных кнг.обакте-рий. поавергаваихся воздействие неблагоприятный Факторов, следует применять метод мякрскудьтивированяя.

5. При испытании дезипфшшруглшх свойств туберкулодидов в качестве тест культур помимо кислотоустойчивого сапрофита в-5 необходимо использовать К- avium и И. fortaituc.

6. Для контроля качества дезинфекции целесообразно применять 2 среды: Петраыьяии и Лезенштейка-Яеисена.

Т. Феномен ксрдообразования пэ мохет быть использован зля дифференциации культур иикобактерий, так как некоторые виды ати-шгасгх микобактеркйобяадаат кордообразукгхэй способности».

Результата исследования рассмотрены и одобрены ученый советом ВШШВТХ (протоколы к 23 от 26.03.87, К 5 от 29.03.90); комиссией отраслевого научного комплекса но ветеринарии ВАСХПйЛ (протоколы Н 2 от 22.09.37, 'Л 5 от 17.07.90); НТС омского АПК (протокол Я 21 от 22.04.37! и включены в рекомендации: "Лабораторная диагностика туберкулеза", "Диагностика а профилактика ми-кобактериозоз в спепиализиуоваиних с-чнозодческкх хозяйствах Сибири".

Список опубликованных работ

1. Колычев н. К., Каримова Л. п. Внзкваеяость иикобактерий в опилках при различных тенпературнкг pe-tiaisx. - в кк. : диагностика. патогенез и лечение шФекспоаныз к инвазионных заболеваний сельскохозяйственных животтшх.- - Снеге. 19S4. - С. 36-33,

2., Кариноза Л. К. Использование питательный сред с добавлением различных препаратов для диФФеренциасии нихэбактерия //Имнуео-логия, диагностика и лечепир ияФекдиовяых болезней сельскохозяйственных животных: С5. науч. тр. /васхниа скб. отд-ние. - Новосибирск, 1933. - С. 27-38.

3. Каримова Л. Н., Хайкин Е. я. Вида кпкэаахтзрий. вцделеинкх от крупного рогатого скота в разных эпизоотических ситуациях по туберкулезу //Совершенствование систем и методов з борьбе с бруцеллезом к туберкулезом животных /ВАСХКйЛ. Сиб, стд-аие. - Новосибирск; 1987. - С. 92-98.

4. Карииоза Л. К. Вняивзеиость отдельная зкдоз иикобактерия з

опилках при разных температурных режимах //Нетоды Диагностики и профилактики бруцеллеза и туберкулеза животных: Сб, науч. тр. /ВАСХНИЛ. ВНИИБТХ. - ОМСК, 1988. - С. 122-126.

5. Лабораторная диагностика туберкулеза: Рекомендации /Разраб. Б.Я. хайкин, Н.Н.Колычев, н. С.Боганед, л. н. Каримова, ВАСХНИЛ, ВНИИБТХ. - Омск, 1988. - 64 с.

6. Каримова Л. К. Влияние температурных Факторов на жизнеспособность микобактерий //Туберкулез сельскохозяйственных животных: Сб. науч. тр. /ВАСХНИЛ. ВНИИБТХ. - ОМСК. 1989. - С. 79-90.

7. Каримова Л. Н., Коган Б. И. Лекствие изониазида на рост и ультраструктуру клеток атипичных микобактерий //Туберкулез сельскохозяйственных животных; Сб. науч. тр. /НАСХНИЛ. ВНЕИБТХ -Омск, 1969. - С. 58-71.

е. Еарикова Л К., Неркулова С. С. Терморезистентность возбудителя туберкулеза и атипичных микобактерий в молоке //Разработка средств и методов борьбы с туберкулезом животных: Сб. науч. тр. /ВАСХНИЛ. ВНИИБТХ. - ОМСК. 1990.. - С. 68-102.

9. Каримова Л. Н.. Неркулова С. С. Сохранение жизнеспособности возбудителя туберкулеза крупного рогатого, скота и атипичных микобактерий в молоке //Разработка средств и методов борьбы с туберкулезом животных: Сб. науч. ТР. /ВАСХНИЛ. ВНИИБТХ, - омск, 1990. -С. 102-110.

1С. Диагностика и профилактика микобактериозов, в специализированных свиноводческих хозяйствах Сиэири: Рекомендации /Разраб. в. е. Околелов. а. н. Кадочкин, л. к. Каримова, е. С. картынова, т. а. па-кусина. ВАСХНИЛ. ВНИИБТХ. - омск. 1990. - 24 с.

и. Каримова л. К. устойчивость микобактерий разных видов к 3 к-ному щелочному раствору Формальдегида //Система мер борьбы с туберкулезом сельскохозяйственных животных: Сб. науч. тр. /ВАСХНИЛ. ВНИИБТХ. - Новосибирск. 1991. - С. 106-118.

12. неркулова с. с., Каримова Л. К., Айганов А. Р., нурзахкето-ва 3. С. Лабораторные исследования прижизненного и послеусонного материала, полученного от-крупного рогатого скота //современные нетоды борьбы с бруцеллезом и туберкулезом животных. - но-восибрск. 1992. - С. 57-63.

/СсуЬб/и.С^^

ЗаказМеэ Тираж ЮО