Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Микобактериозы крупного рогатого скота в природных условиях Вологодской области

На правах рукописи

Воеводина Юлия Александровна

МИКОБАКТЕРИОЗЫ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В ПРИРОДНЫХ УСЛОВИЯХ ВОЛОГОДСКОЙ ОБЛАСТИ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Вологда-2008

003452038

Работа выполнена в лаборатории ветеринарной санитарии и хронических инфекций ГУ «Вологодская научно-исследовательская ветеринарная станция», в хозяйствах Вологодской области и в лаборатории микобактериозов ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я. Р. Коваленко Российской академии сельскохозяйственных наук»

Научный руководитель:

доктор ветеринарных наук, профессор, заслуженный

деятель науки Российской Федерации Овдиенко Николай Павлович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Валихов Алексей Федорович (МГУПБ), доктор ветеринарных наук, профессор Лучко Михаил Александрович (ВИЭВ)

Ведущая организация - ФГУ «Всероссийский государственный центр

качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов»

_ ct>

Защита состоится « '»¿l¿C¿¡tb)uP 2008 часов

на заседании диссертационного совета Д 212.149.03 по защите диссертации на соискание ученой степени доктора наук при ФАО ГОУ ВПО «Московский государственный университет прикладной биотехнологии» по адресу: 109316, г. Москва, ул. Талалихина, д. 33, телефон/факс (495) 677-07-78.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФАО ГОУ ВПО МГУПБ.

Автореферат разослан « С* » 2008 г.

Ученый секретарь диссертационного совета < I И. Г. Серёгин

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Проблема микобактериальных инфекций является одной из наиболее сложных в инфекционной патологии крупного рогатого скота.

Интерес к проблеме дифференциации туберкулеза от других микобактериозов возник ещё в 30-х годах прошлого века, когда появились первые сведения о неклассифицируемых микобактериях патогенных для человека. В начале 50-х годов установили, что заболевания людей, вызванные нетуберкулезными микобакгериями, клинически и патоморфологически сходны с туберкулезом (Зыков М. П. и др., 1978; Ильина Т. Б., 1980, 1987; Отген Т. Ф., Васильев А. В. и др., 2005).

Если в медицинской практике уже установлено, что от 10 до 24 видов нетуберкулезных микобактерий являются потенциальными возбудителями заболевания (Макаревич Н. М., 1973; Clegg Н. W., Foster М. J., 1983; , Макаревич Н. М., Рудой Н. М., Лотоцкая Р. А., 1986; Portaels F. 1988; Оттен Т. Ф., Васильев А. В., 2005), доказано многообразие клинико-анатомического проявления микобактериозов (Шуцкая Е. И., 1965; Каграманов А. И., 1971; Devulder В., 1972; Лотоцкая Р. А., 1986; Отген Т. Ф., Васильев А. В., 2005), то в ветеринарии вопросы патогенности и эпизоотологической значимости нетуберкулезных микобактерий, в частности, все еще остаются недостаточно изученными и наиболее дискутабельными.

Возрастающая роль нетуберкулезных микобактерий и различных видов микобактериозов, нередко смешиваемых с туберкулезной инфекцией, создает трудности при диагностике и требует изучения многих вопросов эпизоотологии микобактериозов.

В то время, как одни авторы признают за нетуберкулезными микобактериями только сенсибилизирующую способность, то другие

указывают на их определенную патогенность - способность приживаться в организме, вызывать изменения, специфичность которых невозможно определить при патоморфологическом исследовании (Karlson A. G., 1971; Рабухин Е. А., 1972; Козлов Н. Н., 1980; Овдиенко Н. П., с соавт. 2004; Толстенно Н. Г., 2006; Колоскова Э. Л., Якушева О. В., 2006).

Всё больше внимания уделяется фактам выделения нетуберкулезных микобакгерий из молока животных, реагирующих на туберкулин для млекопитающих (КарташоваМ. В., 1968; Chapmen, 1970; Каримова Л. М., 1990).

Исходя из вышеизложенного, представляется необходимым проследить степень распространения нетуберкулезных микобакгерий в окружающей среде и стадах крупного рогатого скота, изучить региональные особенности их распространенности в конкретных природных условиях и пути заражения животных, уточнить эпизоотологическую значимость нетуберкулезных микобактерий в инфекционной патологии крупного рогатого скота. Одновременно должна найти решение проблема особенностей проявления инфекционного процесса при микобактериозах, что позволит разработать систему постоянного контроля эпизоотической ситуации.

Работа в этих направлениях позволит определить истинное значение микобактериозов в инфекционной патологии крупного рогатого скота (в данном случае в Вологодской области) и своевременно выявлять пока еще вполне возможного случая заноса туберкулеза.

Цель исследований. Изучение региональных особенностей проявления эпизоотологии микобактериозов крупного рогатого скота, вызываемых нетуберкулезными микобактериями.

Основные задачи исследований:

- изучить распространенность микобактериозов крупного рогатого скота в хозяйствах Вологодской области и её зависимость от различия природных условий;

- изучить проявления аллергической реактивности у крупного рогатого скота, инфицированного нетуберкулезными микобактериями на микобактериальные аллергены;

-изучить возрастную динамику реактивности крупного рогатого

скота;

- изучить сезонную динамику инфицированности крупного рогатого скота нетуберкулёзными микобактериями;

сравнить частоту выделения микобактерий из объектов окружающей среды и из биоматериала от крупного рогатого скота;

- изучить патологоанатомические проявления инфицированности крупного рогатого скота нетуберкулезными микобактериями;

- разработать систему контроля изменения эпизоотического статуса по микобактериозам крупного рогатого скота с учетом дифференциации от туберкулеза.

Научная новизна. Установлено, что в условиях Вологодской области причиной длительного проявления высокой аллергической реактивности на ППД-туберкулин для млекопитающих являются микобактериозы, обусловленные инфицированием крупного рогатого скота нетуберкулезными микобактериями.

Подтверждена идентичность нетуберкулезных микобактерий, выделенных из объектов внешней среды и из биологического материала от крупного рогатого скота.

Установлено, что инфицирование крупного рогатого скота вирусом лейкоза, а также поражённость животных диктиокаулёзом и фасциолезом не являются причиной возникновения псевдоаллергических реакций на туберкулин.

Выявлена зависимость проявления микобактериозов крупного рогатого скота от типов почв. Чаще микобактериозы регистрировали у животных, содержащихся на заболоченных почвах.

Показано, что микобактериозы чаще проявляются у коров (до 27,5 %), чем у телят 1,5-2 месячного возраста (7,14 %) и молодняка 812 месячного возраста (6,1 %). Среди ремонтного молодняка микобактериозы не выявлялись.

При диагностических исследованиях установлена равноценность ППД-туберкулина для млекопитающих, изготовленного Курской биофабрикой по мембранной технологии, ППД-туберкулину для млекопитающих, изготовленному по обычной технологии и туберкулину РРО Ьоу 5000 производства «ГО - Ье1уз1ас1» (Нидерланды).

Подтверждено преимущество симультанной пробы с ППД-туберкулином для млекопитающих и комплексного аллергена из атипичных микобактерий перед симультанной пробой с ППД-туберкулином для млекопитающих и птиц.

Установлено, что при инфицировании крупного рогатого скота нетуберкулезными микобактериями в заглоточных, мезентериальных реже бронхиальных лимфатических узлах развиваются ограниченные патологические изменения характеризующиеся гиперемией, кровоизлияниями, гиперплазией тканей.

Усовершенствована система контроля изменения эпизоотического статуса по микобактериозам крупного рогатого скота с учетом дифференциации от туберкулеза, позволяющая определить эпизоотический статус поголовья скота и предотвратить возможность заноса туберкулеза и его распространения.

Практическая ценность работы. Результаты исследований включены в «Методические рекомендации по диагностике микобактериальных инфекций у животных», утвержденные директором ВИЭВ, академиком Россельхозакадемии М. И. Гулюкиным 22 марта 2007 года и в планы профилактическо-диагностическцх мероприятий по профилактике туберкулеза в Вологодской области на 2006 гг. и учтены при

выяснении эпизоотической ситуации по туберкулёзу в 9 хозяйствах области.

Личный вклад соискателя заключается в организации и проведении эпизоотологического обследования 9 животноводческих хозяйств в двух районах области, в том числе аллергическом исследовании 10209 голов крупного рогатого скота; патологоанатомическом исследовании 21 головы реагирующих на туберкулин животных, убитых с диагностической целью; бактериологическом исследовании 53 проб биоматериала и объектов внешней среды, идентификации 15 культур микобактерий (с проведением биохимических тестов и биологических исследований); сборе статистической информации, анализе и обобщении результатов собственных исследований и исследований, проведенных сотрудниками Вологодской НИВС в предыдущие годы.

Наша работа является логическим продолжением исследований по проблеме туберкулеза и неспецифического реагирования крупного рогатого скота на ППД-туберкулин для млекопитающих, ранее проводимых в области профессором Кузиным А. И. и Сёминой Л. К.

Апробация работы. Материалы работы доложены на научно-практической конференции «Проблемы научного обеспечения отрасли ветеринарной медицины в Северо - Западном регионе РФ», при участии Северо-Западного методического центра - Санкт-Петербург (Вологда, 2004 год), в Департаменте сельского хозяйства Вологодской области (2003 -2005 гг.), научно-производственной конференции «Актуальные проблемы ветеринарной патологии и морфологии животных» - Воронеж (2006), на заседаниях ученого совета Вологодской НИВС (2006), научно-практической конференции посвященной 75-летию Вологодской НИВС (2007).

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

- результаты исследований по распространенности микобактериозов крупного рогатого скота;

- влияние некоторых факторов (почвенно-климатические, возрастные, сезонные) на распространенность микобактериозов;

- влияние различных дозировок аллергенов (ППД-туберкулина для млекопитающих, птиц и KAM) на проявление аллергических реакций у инфицированного нетуберкулезными микобактериями крупного рогатого скота;

- результаты исследований по идентификации микобактерий выделенных из биологического материала и объектов окружающей среды;

-результаты патологоанатомических исследований инфицированного нетуберкулезными микобактериями крупного рогатого скота;

- результаты исследований по влиянию инфицированности крупного рогатого скота BJIKPC на проявление аллергической реактивности на ППД-туберкулин для млекопитающих;

- усовершенствованная система контроля изменения эпизоотического статуса по микобактериозам крупного рогатого скота с учетом дифференциации от туберкулеза.

Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 6 статей.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 216 страницах компьютерного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы, практические предложения, список использованной литературы, приложения.

Работа иллюстрирована 3 картограммами, 1 картой, 8 диаграммами, 25 таблицами, 2 схемами. Список литературы включает 387 источников, из них 68 иностранных.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы н методы

Работа по теме выполнена в лаборатории ветеринарной санитарии и хронических инфекций ГУ Вологодская научно-исследовательская ветеринарная станция, в хозяйствах Вологодской области, в лаборатории микобактериозов ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я. Р. Коваленко Российской академии сельскохозяйственных наук в рамках Российской научно-технической программы фундаментальных и прикладных исследований по заданию 02.01.01 и договоров с Департаментом сельского хозяйства Вологодской области «Усовершенствовать мероприятия по предотвращению появления и распространения лейкоза и туберкулёза крупного рогатого скота, терапии и профилактики болезней сельскохозяйственных животных» на 2003-2005 гг.

Динамику проявления эпизоотического процесса туберкулеза оценивали по абсолютным и относительным (интенсивность, экстенсивность, продолжительность) показателям его проявления. В частности, были проанализированы изменения годовых показателей выявления и оздоровления неблагополучных пунктов; данные о численности первично и повторно исследованных и реагирующих на туберкулин животных в течение года; число реагирующих на туберкулин в расчете на 10000 голов скота; о количестве скота сданного на мясокомбинаты для убоя, наличии у него патологоанатомических изменений, характерных для туберкулеза; процент животных с патогномоническими признаками болезни; результаты лабораторных исследований биологического материала.

Распространенность микобактериозов изучали по данным ветеринарной отчетности Департамента сельского хозяйства Вологодской

области, районных управлений ветеринарии, мясоперерабатывающих предприятий области и на основании материалов собственных аллергических, патологоанатомических и лабораторных исследований.

Анализ собранной информации проводили с применением методов эпизоотологического обследования, описанных в «Методических указаниях по эпизоотологическому исследованию» (Бакулов И. А. и соавт., 1982), и в «Методах эпизоотологического исследования и теория эпизоотического процесса» (Джупина С. И., 1991).

При проведении исследований по уточнению возможного влияния на чувствительность к туберкулину инфицированности крупного рогатого скота вирусом лейкоза учитывали комплекс показателей характеризующих уровень гематологической позитивности, ВУЬ-инфицированности крупного рогатого скота, частоту выявления свойственных лейкозу патологоанатомических изменений при послеубойной экспертизе. Полученные результаты сопоставляли с показателями аллергической реактивности на введение ППД-туберкулина для млекопитающих. Оценку ситуации по энзоотическому лейкозу проводили в соответствии с «Методическими рекомендациями по эпизоотологическому обследованию при лейкозе крупного рогатого скота», утвержденных РАСХН 16.06.2000.

Аллергические исследования проводили с участием представителей районных ветеринарных служб и специалистов хозяйств. Работа проводилась в соответствии с Санитарными правилами СП 3.1.093-96 и Ветеринарными правилами ВП 13.3.1325-96, п. 10 «Туберкулез», утвержденными Госкомсанэпиднадзором и Минсельхозпродом России (1996), а также «Наставлением по диагностике туберкулеза животных» (утверждено Департаментом ветеринарии МСХ Российской Федерации 18.11.2002 г.).

При определении интенсивности проявления иммунологических реакций на различные дозы микобактериальных аллергенов (ППД-

туберкулина для млекопитающих, ППД-туберкулина для птиц и комплексного аллергена из атипичных микобактерий), тестируемые препараты вводили внутрикожно, в область средней трети шеи с разных сторон, как в политесте (каждому животному опытную и контрольную дозы), так и в монотесте (каждому животному аллерген в одной дозировке). Оценку результатов проводили по количественным и качественным показателям, индивидуально и в целом по группе.

Для лабораторных исследований был отобран биологический материал (лимфатические узлы) от 21 головы убитого крупного рогатого скота. От 20 реагирующих на туберкулин коров исследовали пробы молока. Также бактериологически исследовали пробы сена, силоса, подстилочного материала (опилки) из 6 хозяйств. Пробы отбирали в соответствии с «Методическими рекомендациями по проведению лабораторных исследований при туберкулезе животных», (М., 1992). Отобранный материал обрабатывали методом Гона в модификации А. П. Аликаевой. Материал использовали для микроскопии, посевов на питательные среды (Фаст-ЗЛ) и биологического исследования на лабораторных животных (морских свинках, кроликах).

Опытных животных содержали в соответствии с «Ветеринарно-санитарными правилами содержания опытных (лабораторных) животных в вивариях научно-исследовательских институтов, станций, лабораторий, учебных заведений, а также в питомниках», утвержденных Главным управлением ветеринарии МСХ СССР в 1964 году.

Эвтаназию морских свинок проводили путем декапитации с помощью гильотины, кроликов - путём воздушной эмболии, согласно «Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных» (1978).

Идентификацию выделенных культур проводили соответственно ГОСТ 26072-84 «Методы лабораторной диагностики туберкулеза» и

ГОСТ 27318-87 - «Методы идентификации атипичных микобактерий». Культурально-морфологические и биохимические свойства микобактерий изучали в соответствии с методическими рекомендациями «Бактериологическая и биохимическая идентификация микобактерий» (Оттен Т. Ф., 1994), с приказом Минздрава СССР № 558 от 08.06.78 года «Об унификации микробиологических методов исследований при туберкулезе» и приказом Минздрава РФ № 109 от 21 марта 2003 года «О совершенствовании противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации». В работе также использованы методические рекомендации «Новые методы исследования возбудителей антропозоонозов. Туберкулез» (Москва, 2003).

Исследования по идентификации выделенных культур нетуберкулезных микобактерий проводили совместно с кандидатом ветеринарных наук Толстенко Н. Г. (ВИЭВ).

Полученные данные обрабатывали методом вариационной статистики, с использованием методического руководства «Биометрическая обработка лабораторных, клинических и эпизоотологических данных» (Маринин Е. А., 1980), а также при помощи программы «81а1{*гайс5», включающих определение средней арифметической (М), ошибки (ш), достоверности разности средних показателей (Р) с помощью критерия Стьюдента, связь между факторами определяли методом корреляционного анализа.

2.2. Результаты исследований

2.2.1. Ретроспективный анализ эпизоотического процесса туберкулеза крупного рогатого скота и мероприятий по оздоровлению неблагополучных хозяйств Вологодской области

Туберкулез на территории области имел широкое распространение. Всего с 1951 по 1983 год от туберкулеза было оздоровлено 646

неблагополучных пунктов и выявлено 16618 заболевших животных. В разрезе административных районов заболевание было распространено неравномерно и противоэпизоотические мероприятия проводили с учетом напряженности эпизоотической ситуации. В среднем заболеваемость составила 89,56 голов на 100 тыс. исследованных животных. По годам этот показатель варьировал от 0 до 344,4 голов. Увеличение коэффициента очаговости до 81,5 - 104,5 на завершающих этапах оздоровления (в 1976 -1981 гг.) указывает на локализацию инфекции в стационарно неблагополучных очагах, сопровождающуюся периодическими (в среднем через 4 ±1,1 года) неоднократными вспышками заболеваемости. Выявленная периодичность коррелировала с повторным выделением большого количества реагирующих на туберкулин животных в ранее оздоровленных хозяйствах.

Кузин А. И. (1978) установил, что основным фактором длительного поддержания неблагополучия по туберкулёзу была персистирующая туберкулезная инфекция. Он впервые описал латентную туберкулезную инфекцию, изучил закономерности её проявления, роль в эпизоотологии болезни. Это позволило локализовать все источники и факторы передачи возбудителя. На основании результатов исследований, проведенных им в сотрудничестве с Сёминой Л. К., выполненных в благополучных и неблагополучных по туберкулезу и паратуберкулезному энтериту хозяйствах, была разработана схема дифференциации аллергических реакций на туберкулин для млекопитающих, которая включала в себя комплекс методов: эпизоотологических, аллергических,

патоморфологических, микробиологических.

Ежегодно в области от 1,7 до 6,1 % первоначально реагирующих на туберкулин животных по результатам симультанной пробы подвергается диагностическому убою. Случаев выявления характерных для туберкулеза

патологоанатомических изменений и положительных результатов лабораторных исследований не зарегистрировано.

Таким образом, внедрение научно-обоснованных оздоровительных мероприятий, разработанных с учётом различий в напряженности эпизоотического процесса, рациональной схемы дифференциальной диагностики болезни позволяет поддерживать благополучие области по туберкулезу на протяжении более 20 лет.

2.2.2. Распространенность микобактериозов крупного рогатого скота в хозяйствах Вологодской области

При изучении динамики выявления реагирующих на ППД-туберкулин для млекопитающих животных установлено, что с 1970 года до 1984 число животных с неспецифическими реакциями на туберкулин увеличилось в 46 раз. Максимальный уровень инфицированности крупного рогатого скота нетуберкулезным микобактериями зафиксирован в 1999 году — 71 случай на 10000 голов, и в настоящее время остается стабильно высоким - 55 голов на 10000 исследованных.

При аллергических исследованиях, проведенных нами в 9 хозяйствах двух районов области, частота неспецифического реагирования на ППД-туберкулин для млекопитающих составила, в среднем 10,4 %, с колебаниями по хозяйствам от 2 % до 27,5 %. В тоже время в обследованных стадах на KAM специфически реагировало до 44 % исследованного поголовья, а на ППД-туберкулин для птиц - до 20 % животных.

Анализ данных официальной статистики о результатах диагностических исследований на туберкулёз за 1989 - 2005 гг. выявил стационарность и территориальную неравномерность в уровне параспецифической реактивности на туберкулин для млекопитающих.

Ежегодное выделение реагирующих на туберкулин животных отмечено в 73 % административных районов области, но частота инфицирования крупного рогатого скота нетуберкулезными микобактериями была различной. Это позволило классифицировать районы на три категории: с высоким 92 - 136 случаев на 10000 исследованных животных (первая), средним от 30 до 60 случаев (вторая) и низким от 2 до 27 случаев (третья) уровнем распространенности микобактериозов в стадах крупного рогатого скота. В результате было установлено, что проявление микобактериозов в настоящее время не зависти от напряженности эпизоотической ситуации по туберкулёзу в прошлом. Инфицирование нетуберкулёзными микобактериями регистрируется как в ранее неблагополучных по туберкулёзу районах, так и на длительно благополучных территориях.

2.2.3. Анализ факторов, влияющих на уровень распространения микобактериозов

Установлено, что почвенно-климатические особенности территорий являются важными фактором, определяющими возникновение и уровень распространения микобактериозов.

Районы первой категории приурочены к низменным территориям, речным поймам, с гидроморфными, кислыми, тяжелыми по механическому составу (глинистые, тяжелосуглинистые), а также болотистыми (торфяные, торфяно-глеевые, подзолисто-болотные) почвами. Заболоченность почв в регионах достигает 40 %; 3 % территории занимают аллювиальные почвы заливных лугов. В тоже время это центральные и южные районы области (ареалы традиционного земледелия) в них сконцентрировано 40 % поголовья скота, удельный вес крупного рогатого скота в животноводстве 75 %. Ранее в наших исследованиях (2004), проведенных в одном из районов данной категории,

было отмечено, что у 30 % коров и 100 % телят, рожденных от этих коров, регистрируются иммуннодефицитные состояния.

Районы второй категории расположены на равнинных территориях (суходолы) с сочетанием различных типов почв: чаще полугидроморфные суглинистые, дерновые, на отдельных участках встречаются как болотные (торфяные), так и песчаные.

Районы третьей категории расположены на возвышенных участках, почвы автоморфные хорошо дренируемые (песчаные, супесчаные), дерновые и дерново-карбонатные, подзолистые. Эти районы расположены в северной и восточной зоне области, характерная черта которых - низкая освоенность земель, лесистость достигает 70 %.

В районах первой категории видовой спектр микобактерий был наиболее разнообразен и включал в себя по 3 - 4 вида микобактерий, а также недифференцируемые микобактерии III - IV групп по Раньону.

На влияние почвенного фактора на распространенность микобактериозов указывает и сезонность в проявлении реактивности на микобактериальные аллергены. Анализ данных ветеринарной отчетности о результатах аллергических исследований на туберкулёз за 1990 - 2005 гг. и результатов собственных исследований показал, что максимальный уровень инфицирования крупного рогатого скота нетуберкулёзными микобактериями отмечается после пастбищного периода (59 случаев на 10000 голов), повторный подъём инфицированности регистрируется весной, но практически никогда не достигает уровня осенних показателей - 46 случаев на 10000 исследованных животных (диаграмма 1).

Результаты наших исследований подтверждают эту закономерность. При весеннем исследовании выявлялось, в среднем, 5,7 %, а в осенние месяцы 9,06 % реагирующих на ППД-туберкулин для млекопитающих животных. Межсезонная разность в интенсивности проявления реакций статистически достоверна (Р>0,99) и составила, в среднем, на туберкулин

для млекопитающих - 1,7 мм, на KAM - 2,53 мм. Симультанная проба, соответственно, также обладала большей дифференцирующей способностью осенью - в начале стойлового периода.

Диаграмма 1

Сезонность выявления реагирующих на туберкулин животных

годы

□ выявлено реагирующих животных в весенний период

□ выявлено реагирующих животных в осенний период

Сопоставив изменения, произошедшие в структуре стада за 1978 -2004 гг., и изменения в уровне реактивности на туберкулин для млекопитающих, выявили прямую корреляционную связь (г = 0,82; Р > 0,99) между процентом коров в общем поголовье стада и частотой регистрации микобактериозов.

Исследованиями симультанной пробой разновозрастных групп крупного рогатого скота установлено, что микобактериозы чаще проявляются у коров (до 27,5 %). В хозяйствах, где зафиксировано инфицирование нетуберкулёзными микобактериями коров, 7,14 % телят 1 - 1,5 месячного возраста и 6,1 % молодняка 8-12 месяцев реагировали на

комплексный аллерген из атипичных микобактерий. Ремонтные телки (16 - 18 месяцев) на KAM и ППД-туберкулин для млекопитающих не реагировали. Очевидно, ремонтный молодняк инфицируется нетуберкулёзными микобактериями при вводе в основное стадо, что обеспечивает непрерывность эпизоотического процесса. Таким образом, опытные данные подтверждают и объясняют результат, полученный при анализе статистических данных.

2.2.4. Значимость различных дозировок микобактериальиых аллергенов в дифференциальной диагностике микобактериозов

Всего с использованием различных серий и доз ППД-туберкулина для млекопитающих, для птиц и KAM в опытных группах было исследовано 9000 голов крупного рогатого скота в 8 хозяйствах области.

Применение в симультанной пробе с ППД-туберкулином для млекопитающих комплексного аллергена из атипичных микобактерий, позволило исключить специфичность реакций на туберкулин для млекопитающих у 71,1 % реагирующих животных, у 16,2 % получен неопределенный результат, положительный на туберкулин - у 12,7 %.

В тоже время, симультанная проба с ППД-туберкулином для млекопитающих и ППД-туберкулином для птиц позволила подтвердить неспецифичность реакций на ППД-туберкулин для млекопитающих только у 19,7% животных, сенсибилизированных нетуберкулёзными микобактериями, неопределенный результат получен в 46,5 % случаев, а у 33,7 % животных реакции были достоверно более выражены на ППД-туберкулин для млекопитающих.

Только в одном случае ППД-туберкулин для птиц в симультанной пробе обладал большей дифференцирующей способностью относительно KAM. В данном хозяйстве был выделен всего один вид микобактерий -М. avium-intracellularae, в остальных хозяйствах микобактериальный фон

включал в себя представителей II (M.xenopi), III (М. avium intracellularae) и IV (М. fortuitum) групп по классификации Раньона. То есть, в случае инфицирования крупного рогатого скота нетуберкулёзными микобактериями симультанная проба с KAM обладает большей дифференцирующей способностью.

Прн изменении диагностической дозы KAM с 1350 ЕД до 675 ЕД и ППД-туберкулина для птиц с 5000 ТЕ до 2500 ТЕ количество реагирующих животных сохранялось на одном уровне. Установлено снижение средней величины утолщения кожной складки на KAM с 6,9 + 0,96 мм до 5,0 + 0,9 мм (Р > 0,999), на туберкулин для птиц с 3,75 + 0,48 до 2,8 + 0,3 мм (Р > 0,95). Снижение диагностической дозы приводило к утрате дифференцирующей способности данных аллергенов в симультанной пробе.

С момента открытия туберкулина всё время совершенствуются технология его изготовления и методы применения. Курской биофабрикой осваивается технология изготовления туберкулина с использованием метода мембранного фракционирования.

При апробации опытной серий ППД-туберкулина для млекопитающих (19а - изготовленный Курской биофабрикой с применением методов мембранного фракционирования), относительно серий, изготовленных Курской биофабрикой по обычной технологии, и туберкулина PPD bovine 5000 (производство «ID - Lelystad», Нидерланды) установлено отсутствие статистически значимых различий в количестве реагирующих животных и интенсивности проявления реакций. ППД-туберкулин серии 19а в дозах 10000 ТЕ (или 2000 ME) и 5000 ТЕ (или 1000 ME) равнозначен по своей активности туберкулину PPD bovine 5000 в дозах 5000 ME (или 25000 ТЕ) и 2000 ME (или 10000 ТЕ) соответственно.

При использовании ППД-туберкулина для млекопитающих в дозах 10000 ТЕ и 5000 ТЕ установлено, что понижение дозы приводит к

достоверному снижению интенсивности проявления аллергических реакций (Р > 0,99) с 4,9 + 0,6 мм до 3,7 + 0,5 мм (диаграмма 2).

Применение ППД-туберкулина в дозе 5000 ТЕ / 0,2 мл привело к снижению количества реагирующих животных в 2 раза, по сравнению с контролем, а в отдельных случаях реагирующие животные не выявлялись.

Диаграмма 2

Проявление реактивности крупного рогатого скота на ППД-туберкулин для млекопитающих в различной дозировке

интенсивность реакций, мм

[] доза 5000 ТЕ / 0,2 мл [] доза 10000 ТЕ / 0,2 мл

В хозяйствах, где было установлено инфицирование крупного рогатого скота нетуберкулезными микобактериями (культуры выделены с объектов окружающей среды, биоматериала от реагирующих животных) при введении ППД-туберкулина в дозе 5000 ТЕ / 0,2 мл количество реагирующих снижалось в 1,39 раза.

Изучение динамики проявления параспецифической реактивности показало, что в стаде одномоментно и постоянно .выявляется большое количество первично реагирующих животных.

2.2.5. Результаты патологоанатомического исследования крупного рогатого скота, инфицированного нетуберкулёзными микобактериями

По результатам проведенных нами аллергических исследований для диагностического убоя были отобраны животные как с впервые установленными, так и с повторяющимися реакциями на туберкулин для млекопитающих, всего 21 голова крупного рогатого скота.

Из 14 животных, с впервые установленными реакциями на туберкулин, только у 4 (28,57 %) выявляли изменения в мезентериальных, заглоточных, реже бронхиальных и средостенных лимфатических узлах, характеризующиеся гиперемией, точечными кровоизлияниями, разрастаниями соединительной ткани. В тоже время, аналогичные изменения выявлены у всех семи животных с повторными реакциями. Из числа культур, выделенных из лимфатических узлов, 75 % были изолированы от животных с длительно сохраняющимися реакциями на туберкулин для млекопитающих. Таким образом, при микобактериозах крупного рогатого скота выраженные патологоанатомические изменения не развиваются, они ограничены регионарными лимфатическими узлами.

Обращая внимание на то, что у 14,3 % животных установлена различная степень поражения фасциолёзом, а у 19 % отмечены пневмонии и учитывая противоречивость литературных данных о возможности возникновения так называемых «псевдоаллергических» реакций, нами были проведены исследования в этом направлении.

По данным ветеринарно-санитарной экспертизы на мясоперерабатывающих предприятиях области и рынках за 2002 - 2005 гг. при послеубойном осмотре туш и внутренних органов у 40,2 % не реагирующих на туберкулин животных отмечены различные заболевания неинфекционной этиологии.

Пораженность скота финнозом и диктиокаулёзом была минимальной, 0,02 и 0,14 % соответственно, и не могла влиять на уровень

аллергической реактивности на туберкулин. Кроме того, с 2002 по 2005 гг. уровень инвазированости фасциолезом значительно снизился с 20,2 до 6,4 %, а количество реагирующих на туберкулин животных было стабильно - 0,55 - 0,60 %.

Из 53 животных, при послеубойной экспертизе у которых был диагностирован лейкоз, ни одно не реагировало на туберкулин, а из 85 голов, убитых по результатам аллергических исследований, различные формы лейкоза установлены у 6 голов (7,06 %). Анализ результатов серологических, гематологических и гистологических исследований на лейкоз за 1989 - 2005 гг. в целом по области и за 2000 - 2004 гг. по 11 хозяйствам показал, что инфицирование крупного рогатого скота ВЛКРС не приводит к появлению псевдоаллергических реакций на ППД-туберкулин для млекопитающих. В то же время, выявлена средняя обратная корреляционная связь (г = - 0,659; Р > 0,99) между количеством гематологически больного лейкозом скота и уровнем реактивности на туберкулин для млекопитающих. То есть, инфицированный микобактериями скот, в случае развития у него гемобластозов, может не реагировать на туберкулин.

Опытным путём доказано, что несоблюдение установленных интервалов между диагностическими исследованиями может привести к возникновению необоснованного мнения о влияния инфицированности скота ВЛКРС на появление реакций на туберкулин для млекопитающих.

У серонегативных животных в течение 14 дней после туберкулинизации отмечено достоверное нарастание титра антител в крови на 2,85 МЕ (Р > 0,99), что повлекло за собой появление ложноположительных реакций в РИД у 10,7 % исследованных животных. Титры антител вернулись к исходному значению через 30 дней. Исследование в ПЦР сывороток крови от серонегативных животных с

максимальным нарастанием титра антител в ИФА показало отсутствие в пробах ВЛКРС.

Результаты проведённых исследований исключает возможность возникновения псевдоаллергических реакций на ППД-туберкулин для млекопитающих.

2.2.6. Результаты индикации и идентификации культур нетуберкулёзных микобактерий, выделенных из биоматериала к объектов окружающей среды

При бактериологическом исследовании биологического материала (лимфатические узлы, молоко) от крупного рогатого скота, реагирующего на туберкулин для млекопитающих, а также проб сена, силоса и подстилочного материала (опилки) нами было выделено 15 культур нетуберкулезных микобактерий, то есть частота их выделения составила 28,3 % от общего числа проб. Показатель выделяемое™ существенно колебался по видам материала: из асептически отобранного молока - 20 %, из лимфатических узлов, реагирующего на микобактериальные аллергены крупного рогатого скота, 19 %, из проб подстилочного материала (опилки) - 66 %. Из числа изолированных культур 8 (53,3 %) были выделены из биологического материала: по 4 (26,6 %) - из молока и лимфатических узлов.

Видовой состав микобактерий, выделенных в хозяйствах области

№ Хозяйство Материал Вид микобактерий

1 Чучково опилки М avium- mtracellularae

2 молоко М avium- mtracellularae, М xenopi

3 лимфоузлы М. xenopi

4 Марковское опилки М. avium- mtracellularae

5 молоко M avium- mtracellularae, M fortuitum

6 Спасское силос III - IV гр по Раньону

7 лимфоузлы

8 Биряково лимфоузлы M avium- mtracellularae

9 Союз опилки M xenopi

10 Двинида опилки M. avium- mtracellularae

Все выделенные культуры отнесены ко II, III и IV группам по классификации Раньона. По культурально-морфологическим свойствам, а также ряду биохимических тестов и биологической пробы, видовая принадлежность определена у 11 культур.

Как видно из представленной таблицы, наибольшую часть среди идентифицированных культур составили М. avium-intracellularae (63,6 %). Эти культуры изолировали из лимфатических узлов, молока и подстилочного материала (опилки); 27 % выделенных культур отнесены к М. xenopi, они были выделены из различных видов материала (молоко, лимфатические узлы, подстилочный материал). Преобладание этих культур указывает на их ведущую роль в возникновении микобактериозов крупного рогатого скота.

2.2.7. Усовершенствованная система контроля за проявлением микобактериозов и предотвращения распространения туберкулеза

С учётом того, что область на протяжении 20 лет остается благополучной по туберкулёзу крупного рогатого скота, возникла необходимость провести корректировку принятой системы диагностических исследований на туберкулёз. Основной задачей при этом становится максимально ранняя и точная постановка дифференциального диагноза на микобактериоз.

В процессе разработки дополнений руководствовались действующими нормативными документами, результатами работы сотрудников НИВС и собственных исследований (аллергических, патологоанатомических, микробиологических). Учитывали

диагностические, эпизоотологические и организационно-хозяйственные факторы.

В настоящее время, вспышка туберкулеза в области возможна только вследствие заноса возбудителя М. bovis извне. Следовательно, важным

профилактическим мероприятие является контроль за ввозом на территорию области сельскохозяйственных грузов, соблюдение правил перемещения скота. Это касается как общественного, так и частного поголовья. В последнем случае необходим особый контроль эпидемической ситуации по туберкулёзу среди людей, так как они могут стать переносчиками возбудителя с личных подворий на поголовье ферм и комплексов. Результаты наших исследований согласуются с данными других авторов о том, что внутрикожная туберкулиновая проба становится ориентировочным тестом для проведения дальнейших исследований.

В хозяйствах, где ранее выделяли реагирующих на туберкулин животных, исследования проводят с применением симультанной аллергической пробы, в том числе исследуют молодняк с 1 - 1,5 месячного возраста. При выборе микобактериальных аллергенов для симультанной пробы (KAM или ППД-туберкулин для птиц) необходимо учитывать видовой спектр циркулирующих в хозяйствах микобакгерий.

Использование сниженных доз туберкулина для млекопитающих (5000 ТЕ/0,2 мл), учет длительности сохранения реактивности на микобактериальные аллергены при отборе животных для диагностического убоя, позволяет повысить процент выделяемости микобактерий.

Выявленные особенности течения эпизоотического процесса, динамики проявления аллергических реакций по стаду позволят уже при анализе статистических данных сузить выбор дальнейших методов и путей проведения диагностических исследований и, соответственно, ускорить постановку дифференциального диагноза.

Схема дифференциальной диагностики микобакмериоэов и туберкулёза крупного рогатого скота

ЛЙ 1 lokaitiiciii Характерно для туберкуле'за Характерно для мпкобамериоза

! Киишчсское проявление I \ берку лез протекает. как ирпвило. латентно. Характерная клиническая картина (не ionienne. кантон» истечения из носа, диарея увеличение подчелюстных и падвымяшшк лимфатических узлов) па поздних стадиях i спералтации промесса Клиническое проявление ботезпн отсу 1етв\ет

•> Проявление и динамика aj.icpi имсскнч реакции у жкшимых н по стал} в цс юм At терт нческое соеюянис у животных .итителытое внутри кожные реакции на 1II 1Д*ту боркулин для млекопитающих выраженные. нроятияются постоянно, животные реагируют на офтальмопробу. При енн/ьенин цяы г\бсрк\лит ^йаншсчыкки. сохраняекя Аллергическое состояние кратковременное атлсршческие реакции слабовыра/кенные. непостоянные Животные реагируют то н.ко или ишепсивпес. на KAM иди 1ШД-ixбсрк\;шн для шил. чем па П11Д-туберкулни для млекопитающих Чувствнтетьность сшт/каетея па уменьшенную до.зу 1111Д-т\берк\лина «ля м текшипаюшич

3 Ллютогоаиаточнчсские* изменения Характерные патологоанатомичеемте изменения в лимфатических > wax и органах Характерные для туберк\т2за на то loroauai омические изменения отсутствуют В сдиинчиих случаях выявляют бугорки в мезентеральных. иногда в зат лот очных лимфатических \ зллх

4 Источник заражения Ьотытое * квот мое инфицированный человек 11очва

^ Факторы передачи Инфицированные объект внешней среды (почва, вода мо юко. обрат. но ici и тка. навоз предметы чхода) Подстилка (торф, влажные опилки), корма мотоко

0 Проявление эпизоотического процесса ')ниюот нческиП процесс начинается с единичных больных животных, в дальнейшей нарастает При проведении систематических исследовании ко.жчеензо реагнр\ ютих животных снижается U стаде отмечается одновременное выявление значительною количества реагирующих живошыч Выявление реатруюишх к стаде не прекращаемся

7 Лабораторные исследования

бакк'риоскопическое И мазках из пораженных органов (легкие, лимфатические узлы) выявляют красные палочки риска юженпые но ОЛШОЧКС Н'Ш ТрХШЫМИ В мазках щ бномлериола (точько лимфатические у ыы) выяв 1яjoi единичные краспис и синие (некиспошчетончивые) палочки

К\.1ЬТ> ратьное Роем ку ibrvp ныявдяегся через 30 45 дней Ко кшии к> 1ьтлр шероховатые (R-форма) nut ыадкие (S-форча). шзста слоновой кости В мазках из ку и»ту р обнарчж'ивакжя кие кл оуооичноме па точки Poci ку ibiyp выявляю 1 через 5-10 дней Колонии еш«истые или гладкие цвет от кремового до красного В мазках из кутыур выявляю 1 красные и синие палочки

биологическое 1 ибсль кротикои и морских свинок » течение 3 месяцев отрицательная

Mo 1СК\ ГЯРИ0«1С11СМ!ЧССК0С (ИЦР) 11о южигсльиыП рсз\ чьтагс прпимерами M bos is Отрицательный резу ibiarc прлйчерамц М bovis

3. Выводы

1. Ретроспективный анализ динамики проявления эпизоотического процесса туберкулеза крупного рогатого скота в Вологодской области за 1951 - 1984 гг. подтвердил факт широкого распространения болезни в начале периода, а в последующем - редких повторных вспышек, обусловленных латентным микробизмом у ремонтного молодняка. Научно обоснованные мероприятия, направленные на предотвращение таких вспышек, позволили добиться полного оздоровления области и сохранения благополучия по заболеванию на протяжении более 20 лет.

2. Микобактериозы выявляются в хозяйствах всех административных районов области. Степень их распространения в стадах варьирует от 0,08 до 2,7 % и не всегда коррелирует с напряженностью эпизоотической ситуации по туберкулезу в прошлом.

3. Основными возбудителями микобактериозов крупного рогатого скота в хозяйствах Вологодской области являются микобактерии комплекса М. avium — intracellularae и М. xenopi.

4. Установлена зависимость распространенности микобактериозов от типов почв, преобладающих в конкретных районах области, чаще микобактериозы выявляют у животных, содержащихся на заболоченных почвах.

5. Частота выделения культур нетуберкулезных микобактерии составила: из асептически отобранного молока - 20 %, из биологического материала от реагирующих на микобактериальные аллергены животных -19 %, из проб объектов внешней среды - 66,6 %. Подтверждена идентичность нетуберкулезных микобактерий, выделенных из проб объектов внешней среды и из биологического материала от крупного рогатого скота.

6. Заражение крупного рогатого скота возбудителями микобактериозов, по-видимому, происходит при приёме корма, с питьевой водой, при использовании подстилки, загрязненных частичками почвы. Инфицированные животные выделяют микобактерии с молоком.

7. Инфекционный процесс при микобактериозах крупного рогатого скота характеризуется иммунологической перестройкой, выявляемой микобактериальными аллергенами, а в единичных случаях -обнаружением туберкулезоподобных изменений в лимфатических узлах. Аллергические реакции на комплексный аллерген из атипичных микобактерий и ППД-туберкулин для птиц являются специфическими при микобактериозах крупного рогатого скота.

8. Отечественный ППД-туберкулин для млекопитающих серии 19а, изготовленный Курской биофабрикой по мембранной технологии равноценен ППД-туберкулину для млекопитающих изготовленному по обычной технологии и PPD-bov 5000 производства «ID - Lelystad» (Нидерланды).

9. В условиях Вологодской области при микобактериозах крупного рогатого скота симультанная проба с ППД-туберкулином для млекопитающих и KAM обладает большей дифференцирующей способностью, чем симультанная проба с ППД-туберкулином для млекопитающих и птиц.

10. Усовершенствована система контроля изменения эпизоотического статуса по микобактериозам крупного рогатого скота с учетом дифференциации от туберкулеза позволяет предотвратить появление и распространение туберкулеза.

4. Практические предложения

Для выявления микобактериозов и контроля -поголовья крупного рогатого скота по микобактериозам профилактические исследования в

хозяйствах проводить симультанной аллергической пробой с ППД-туберкулином для млекопитающих и KAM, в том числе молодняка с 1,5 — 2 месячного возраста. Для выяснения этиологической роли микобактерий проводить бактериологическое исследование биологического материала от убиваемых животных, включая раздельное исследование легочных и мезентериальных (особенно илеоцеокального соединения) лимфатических узлов.

Используемые в качестве подстилочного материала опилки сохранять сухих местах.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Воеводина Ю. А. Эпизоотический мониторинг хозяйств Вологодской области по туберкулёзу / Ю. А. Воеводина, Л. К. Семина // Материалы всероссийской научно-практической конференции Сельскохозяйственная наука республики Мордовия: достижения, направления развития (г. Саранск, 6-8 июля 2005 г.), Российская академия сельскохозяйственных наук, правительство РМ, МНИИСХ. -Саранск, 2005. - Т. 2. - С. 341

2. Воеводина Ю. А. К вопросу о неспецифических реакциях на туберкулин в хозяйствах Вологодской области / Ю. А. Воеводина // Материалы научно-производственной конференции «Актуальные проблемы ветеринарной патологии и морфологии животных», посвященной 100-летию со дня рождения А. А. Авророва (г. Воронеж, 22 - 23 июня 2006 г.). - Воронеж: Научная книга, 2006. - С. 263

3. Воеводина Ю. А. Результаты испытаний различных серий и доз туберкулинов / Ю. А. Воеводина // Материалы международной научно-практической конференции актуальные проблемы инфекционной патологии и иммунологии животных, посвященной 100-летию со дня рождения Я. Р. Коваленко. - М.: «Изографъ», 2006. - С. 185

4. Воеводина Ю. А. Ретроспективный анализ борьбы с лейкозом крупного рогатого скота в хозяйствах Вологодской области / Ю. А. Воеводина, А. П. Горбунов, А. П. Кузнецов, С. В. Тимошина // Материалы научно-практической конференции посвященной 35-летию Прикаспийского зонального научно-исследовательского ветеринарного института. - Махачкала, 2003. - С. 65

5. Воеводина Ю. А. Последствия антропогенного загрязнения для скота и их профилактика / В. Иванов, М. Лебедева, В. Каменчук, Ю. Воеводина // Молочное и мясное скотоводство. - 2004. - № 1. -С. 27-30

6. Воеводина Ю. А. Последствия антропогенного загрязнения для скота и их профилактика / В. Иванов, М. Лебедева, В. Каменчук, Ю. Воеводина // Молочное и мясное скотоводство. - 2004. - № 2. - С. 4 - 6

Заказ № 104 -К. Тираж 100 экз Подписано в печать 29 09 2008 г ИЦ ВГМХА 160555, г Вологда, с Молочное, ул, Емельянова, 1

Актуальность темы. Проблема микобактериальных инфекций является одной из наиболее сложных в инфекционной патологии крупного рогатого скота.

Проведение- оздоровительных и профилактических мероприятий привело к значительному снижению заболеваемости крупного рогатого скота туберкулёзом. В оздоровленных и благополучных по туберкулёзу хозяйствах, при проведении профилактических исследований крупного рогатого скота на туберкулез, всё чаще выявляют животных, реагирующих на туберкулин для млекопитающих, при исследовании биоматериала от которых выделяют нетуберкулёзные микобактерии.

В медицинской практике аналогичные микобактерии выделяют от больных людей. Такие случаи большинство исследователей (Timpe А., Ranyon Е. Н., 1954; Каграманов А. И., 1971; Devulder В. et al., 1972; Макаревич Н. М., с соавт., 1986; Оттен Т. Ф., Васильев А. В., 2005) квалифицируют как микобактериозы людей и животных.

Интерес к проблеме дифференциации туберкулёза от других микобактериозов возник ещё в 30-х годах прошлого века, когда появились первые сведения о неклассифицируемых микобактериях, патогенных для человека. В начале 50-х годов установили, что заболевания людей, вызванные нетуберкулёзными микобактериями, клинически и патоморфологически сходны с туберкулезом (Мартма О. В., 1982; Майорова А. А., 2004).

В 1954 году Timple А. и Ranyon Е. Н. опубликовали материалы о важной этиологической роли нетуберкулезных микобактерий в заболеваниях не только человека, но и животных.

В начале 80-х годов XX столетия микобактериозы склонны считать новой патологией, «болезнью будущего», распространяющейся независимо от мероприятий, направленных на борьбу с туберкулезом (Jenkins Р. А.,

1988; Ильина Т. Б., 1967; Зыков М. П., Ильина Т., Б., 1978; Оттен Т. Ф., Васильев А. В., 2005). Так, в Австралии в течение 10 лет (1985 - 94 гг.) заболеваемость людей микобактериозами возросла с 0,7 до 3,8 случаев на 100000 жителей и превысила заболеваемость туберкулезом (Kasik J. Е., Mouick М., Schwars В., 1980). По данным Ильиной Т. Б. заболеваемость микобактериозом в России с 1971 по 1980 гг. возросла в 5 раз по сравнению с предыдущим десятилетием (Оттен Т. Ф., 1990).

Если в медицинской практике уже установлено, что от 10 до 24 видов нетуберкулезных микобактерий являются потенциальными возбудителями микобактериозов (Макаревич Н. М., 1973; Clegg Н. W., Foster М. J., 1983; , Макаревич Н. М., Рудой Н. М., Лотоцкая Р. А., 1986; Portaels F. 1988; Оттен Т. Ф., Васильев А. В., 2005), доказано многообразие клинико-анатомического проявления микобактериозов (Шуцкая Е. И., 1965; Каграманов А. И., 1971; Devulder В., 1972; Лотоцкая Р. А., с соавт., 1986; Отген Т. Ф., Васильев А. В., 2005), то в ветеринарии вопросы патогенности и эпизоотологической значимости нетуберкулезных микобактерий, в частности, всё ещё остаются недостаточно изученными и наиболее дискутабельными.

В то время, как одни авторы признают за нетуберкулезными микобакгериями только сенсибилизирующую способность, то другие указывают на их определенную патогенность — способность приживаться в организме, вызывать изменения, специфичность которых невозможно определить при патоморфологическом исследовании (Karlson A. G., 1971; Рабухин Е. А., 1972; Козлов Н. Н., 1980; Овдиенко Н. П., с соавт. 2004; Толстенко Н. Г., 2006; Колоскова Э. Л., Якушева О. В., 2006).

С учетом напряженности эпизоотической ситуации по туберкулезу крупного рогатого скота и масштабности проведения профилактических и оздоровительных мероприятий (Наиманов А. X., 2002, 2004; Солодова В. И., 2004), а также обострения ситуации по туберкулезу среди людей (Жданов В. М., 1984; Капков Л. П., 2000; Покровский В. И., Онищенко Г. Г., 2003), проблема неспецифического реагирования животных на туберкулин для млекопитающих приобретает особое значение.

Всё больше внимания уделяется фактам выделения нетуберкулезных микобактерий из молока животных, реагирующих на туберкулин для млекопитающих (Карташова М. В., 1968; Chapmen J. S., 1970; Каримова JI. М., Меркулова С. С., 1990). В частности, это относится к М. avium. Соответственно, предполагается возможность горизонтальной передачи этих микобактерий (Юдин Г. А., 1978; Тузова Р. В., 1983; Овдиенко Н. П., 1990; Свиридов В. Д., 1995). В настоящее время именно этот вид считается наиболее частым возбудителем микобактериозов у людей (Reich J. М., Johnson P. Е., 1991; Kirk О., Gatell J. M., Mocroft A. et al., 2000).

Исходя из вышеизложенного, представляется необходимым проследить степень распространения нетуберкулезных микобактерий в окружающей среде и стадах крупного рогатого скота, уточнить эпизоотологическую значимость нетуберкулезных микобактерий в инфекционной патологии крупного рогатого скота, изучить региональные особенности их распространения в конкретных природных условиях и пути заражения животных. Одновременно должна найти решение проблема особенностей проявления инфекционного процесса при микобактериозах, что позволит усовершенствовать методы дифференциации туберкулёза от других микобактериозов, разработать систему постоянного контроля эпизоотической ситуации.

Работа в этих направлениях позволит определить истинное значение микобактериозов в инфекционной патологии крупного рогатого скота конкретного региона (в данном случае в Вологодской области) и своевременно выявлять пока еще вполне возможные случаи заноса туберкулеза.

Цель исследований. Изучение региональных особенностей проявления эпизоотологии микобактериозов крупного рогатого скота, вызываемых нетуберкулезными микобактериями.

Основные задачи исследований:

- изучить распространенность микобактериозов крупного рогатого скота в хозяйствах Вологодской области и её зависимость от различия природных условий.

- изучить проявления аллергической реактивности у крупного рогатого скота, инфицированного нетуберкулезными микобактериями, на микобактериальные аллергены.

- изучить возрастную динамику реактивности крупного рогатого скота.

- изучить сезонную динамику инфицированности.

- сравнить частоту выделения микобактерий из объектов окружающей среды и из биоматериала от крупного рогатого скота.

- изучить патологоанатомические проявления инфицированности крупного рогатого скота нетуберкулезными микобактериями.

- разработать систему контроля изменения эпизоотического статуса по микобактериозам крупного рогатого скота с учетом дифференциации от туберкулеза.

Научная новизна. В результате проведенных исследований установлено, что в условиях Вологодской области причиной длительного проявления высокой аллергической реактивности на ППД-туберкулин для млекопитающих являются микобактериозы, обусловленные инфицированием крупного рогатого скота нетуберкулезными микобактериями.

Подтверждена идентичность нетуберкулезных микобактерий, выделенных из объектов внешней среды и из биологического материала от крупного рогатого скота.

Установлено, что инфицирование крупного рогатого скота вирусом лейкоза, а также поражённость животных диктиокаулёзом и фасциолезом не являются причиной возникновения псевдоаллергических реакций на туберкулин для млекопитающих.

Выявлена зависимость проявления микобактериозов крупного рогатого скота от типов почв. Микобактериозы чаще регистрируются у животных, содержащихся на заболоченных почвах.

Показано, что микобактериозы чаще проявляются у коров (до 27,5 %), чем у телят 1,5-2 месячного возраста (7,14 %) и молодняка 8-12 месячного возраста (6,1 %). Среди ремонтного молодняка микобактериозы не выявлялись.

Установлена равноценность ППД-туберкулина, изготовленного Курской биофабрикой по мембранной технологии, 1Л J Д-ту беркулину для млекопитающих, изготовленному по обычной технологии, и PPD bov 5000 производства «ID - Lelystad» (Нидерланды) при диагностических исследованиях.

Подтверждено преимущество симультанной пробы с ППД-туберкулином для млекопитающих и комплексного аллергена из атипичных микобактерий перед симультанной пробой с ППД-туберкулинами для млекопитающих и для птиц.

Установлено, что при инфицировании крупного рогатого скота нетуберкулезными микобактериями в заглоточных, мезентеральных, реже бронхиальных, лимфатических узлах развиваются патологические изменения, характеризующиеся гиперемией, кровоизлияниями, гиперплазией тканей.

Усовершенствована система контроля изменения эпизоотического состояния по микобактериозам крупного рогатого скота с учетом дифференциации от туберкулеза, позволяющая определить эпизоотический статус стад и предотвратить возможность заноса туберкулеза и его распространения.

Практическая ценность работы. Результаты исследований включены в «Методические рекомендации по диагностике микобактериальных инфекций у животных», утвержденные директором ВИЭВ, академиком Россельхозакадемии М. И. Гулюкиным 22 марта 2007 года и в планы профилактическо-диагностических мероприятий по профилактике туберкулеза в Вологодской области на 2006 г., и учтены при выяснении эпизоотической ситуации по туберкулёзу в 9 хозяйствах области.

Личный вклад соискателя заключается в организации и проведении эпизоотологического обследования 9 животноводческих хозяйств в двух районах области. В том числе, аллергическом исследовании 10209 голов крупного рогатого скота, патологоанатомическом исследовании 21 головы реагирующих на туберкулин животных, убитых с диагностической целью, бактериологическом исследовании 53 проб биоматериала и проб материала из объектов внешней среды, идентификации 15 культур микобактерий (с проведением биохимических тестов и биологических исследований), сборе статистической информации, анализе и обобщении результатов собственных исследований и исследований, проведенных сотрудниками Вологодской НИВС в предыдущие годы.

Наша работа является логическим продолжением исследований по проблеме туберкулеза и неспецифического реагирования крупного рогатого скота на ППД-туберкулин для млекопитающих, ранее проводимых области Кузиным А. И. и Сёминой Л. К.

Апробация работы. Результаты исследований доложены на научно-практической конференции «Проблемы научного обеспечения отрасли ветеринарной медицины в Северо - Западном регионе РФ», при участии Северо-Западного методического центра (Санкт-Петербург, Вологда, 2004 год), в Департаменте сельского хозяйства Вологодской области (2003 - 2005 гг.), на заседаниях ученого совета Вологодской НИВС (2006, 2008), научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной патологии и морфологии животных» (Воронеж, 2006 г.), научно-практической конференции посвященной 75-летию Вологодской НИВС (2007).

Основные положения диссертации, выносимые на защиту: - результаты исследований по распространенности микобактериозов крупного рогатого скота;

- влияние некоторых факторов (почвенно-климатических, возрастных, сезонных) на распространенность микобактериозов;

- влияние различных дозировок микобакгериальных аллергенов (ППД-туберкулина для млекопитающих, для птиц и КАМ) на проявление аллергических реакций у инфицированного нетуберкулезными микобактериями крупного рогатого скота; результаты исследований по идентификации микобактерий, выделенных из биологического материала и из объектов окружающей среды;

- результаты патологоанатомических исследований инфицированного нетуберкулезными микобактериями крупного рогатого скота;

- результаты исследований по влиянию инфицированное™ крупного рогатого скота ВЛКРС на проявление аллергической реактивности на ППД-туберкулин для млекопитающих;

- усовершенствованная система контроля изменения эпизоотического статуса по микобактериозам крупного рогатого скота с учетом дифференциации от туберкулеза.

Публикация результатов исследований. По материалам исследований опубликовано 6 статей.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 215 страницах компьютерного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы, практические предложения, список использованной литературы, приложения.

4. Выводы

1. Ретроспективный анализ динамики проявления эпизоотического процесса туберкулеза крупного рогатого скота в Вологодской области за 1951 - 1984 гг. подтвердил факт широкого распространения болезни в начале периода, а в последующем — редких повторных вспышек, обусловленных латентным микробизмом у ремонтного молодняка. Научно обоснованные мероприятия, направленные на предотвращение таких вспышек, позволили добиться полного оздоровления области и сохранения благополучия по заболеванию на протязкении более 20 лет.

2. Микобактериозы выявляются в хозяйствах всех административных районов области. Степень их распространения в стадах варьирует от 0,08 % до 2,7 % и не всегда коррелирует с напрязкенностью эпизоотической ситуации по туберкулезу в прошлом.

3. Основными возбудителями микобактериозов крупного рогатого скота в хозяйствах Вологодской области являются микобактерии комплекса avium - intracellularae и М. xenopi.

4. Установлена зависимость распространенности микобактериозов от типов почв, преобладающих в конкретных районах области. Чаще микобактериозы выявляли у зкивотных;содерзкащихся на болотистых почвах.

5. Частота выделения культур нетуберкулезных микобактерий составила: из асептически отобранного молока — 20 %, из биологического материала от реагирующих на микобактериальные аллергены зкивотных - 19 %, из проб объектов внешней среды - 66,6 %. Подтверзкдена идентичность нетуберкулезных микобактерий, выделенных из проб объектов внешней среды и из биологического материала от крупного рогатого скота.

6. Заражение крупного рогатого скота возбудителями микобактериозов, по-видимому, происходит при приёме корма, с питьевой водой, при использовании подстилки, загрязненных частичками почвы. Инфицированные животные выделяют микобактерии с молоком.

7. Инфекционный процесс при микобактериозах крупного рогатого скота характеризуется иммунологической перестройкой, выявляемой микобактериальными аллергенами, а в единичных случаях - обнаружением туберкулезоподобных изменений в лимфатических узлах. Аллергические реакции на комплексный аллерген из атипичных микобактерий и ППД-туберкулин для птиц являются специфическими при микобактериозах крупного рогатого скота.

8. Отечественный ППД-туберкулин для млекопитающих серии 19а, изготовленный Курской биофабрикой по мембранной технологии, равноценен ППД-туберкулину для млекопитающих, изготовленному по обычной технологии, и PPD-bov 5000 производства «ГО — Lelystad» (Нидерланды).

9. В условиях Вологодской области при микобактериозах крупного рогатого скота симультанная проба с ППД-туберкулином для млекопитающих и КАМ обладает большей дифференцирующей способностью, чем симультанная проба с ППД-туберкулинами для млекопитающих и птиц.

10. Усовершенствована система контроля изменения эпизоотического статуса по микобактериозам крупного рогатого скота с учетом дифференциации от туберкулеза, которая позволяет предотвратить появление и распространение туберкулеза.

5. Практические предложения

Для выявления микобактериозов и контроля поголовья крупного рогатого скота по микобактериозам профилактические исследования в нетуберкулезных микобактерий, выделенных из проб объектов внешней среды и из биологического материала от крупного рогатого скота.

6. Заражение крупного рогатого скота возбудителями микобактериозов, по-видимому, происходит при приёме корма, с питьевой водой, при использовании подстилки,0 загрязненных частичками почвы. Инфицированные животные выделяют микобактерии с молоком.

7. Инфекционный процесс при микобактериозах крупного рогатого скота характеризуется иммунологической перестройкой, выявляемой м и ко б актер и ал ьны м и аллергенами, а в единичных случаях - обнаружением туберкулезоподобных изменений в лимфатических узлах. Аллергические реакции на комплексный аллерген из атипичных микобактерий и ППД-туберкулин для птиц являются специфическими при микобактериозах крупного рогатого скота.

8. Отечественный ППД-туберкулин для млекопитающих серии 19а, изготовленный Курской биофабрикой по мембранной технологии равноценен 1 ill Д-ту беркулину для млекопитающих изготовленному по обычной технологии и PPD-bov 5000 производства «ГО - Lelystad» (Нидерланды).

9. В условиях Вологодской области при микобактериозах крупного рогатого скота симультанная проба с ППД-туберкулином для млекопитающих и КАМ обладает большей дифференцирующей способностью, чем симультанная проба с ППД-туберкулином для млекопитающих и птиц.

10. Усовершенствована система контроля изменения эпизоотического статуса по микобактериозам крупного рогатого скота с учетом дифференциации от туберкулеза, позволяет предотвратить появление и распространение туберкулеза.

5. Практические предложения

Для выявления микобактериозов и контроля поголовья крупного рогатого скота по микобактериозам профилактические исследования в хозяйствах проводить симультанной аллергической пробой с ППД-туберкулином для млекопитающих и КАМ, в том числе молодняка с 1,5-2 месячного возраста. Для выяснения этиологической роли микобактерий проводить бактериологическое исследование биологического материала от убиваемых животных, включая раздельное исследование легочных и мезентериальных (особенно илеоцекального соединения) лимфатических узлов.

Используемые в качестве подстилочного материала опилки сохранять сухих местах.