Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Гуморальные и клеточные факторы защиты у животных, иммунизированных вакциной "триховак", и усовершенствование методов её контроля

УЗБЕКСКИЙ НЛУЧНО-ПРОИЗНОДСТИЕННЫЙ ЦЕНТ!» СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА ПРИ КАБИНЕТЕ МИНИСТРОМ РЕСПУБЛИКИ УЗБЕКИСТАН

Узбекский ордена Трудоного Красною Знамени научно-иеелсдонателы- ,и б Г Г!, иис]1Т\у1 пегершглрии имени академика К. И. Скрябина

ГУМОРАЛЬНЫЕ И КЛЕТОЧНЫЕ ФАКТОРЫ ЗАЩИТЫ У ЖИВОТНЫХ, ИММУНИЗИРОВАННЫХ ВАКЦИНОЙ "ТРИХОВАК", И УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДОВ ЕЕ К^ЧТРОЛЯ

16. 0(1. 03. - Ветеринарная микробиология, нирусология, эпизоотология, микология и иммунология

На ираиах рукописи

УДК 619 : 616. 576. 8. 002. 8. 636. 3

САНДАЛИКВ ЛШПЦОЛ ИСМОИЛОВИЧ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

АВТОРЕФЕРАТ

Самарканд - 1997

Работа ваполнона в лабораторлл .чафодры ¿'лкроблолог;ш, клдш&и д эшюоогологп: Са;.:ар:;а1Ща1;ого оельсхохоалПотванлого пиагптуиа шз'ш 0. лодаавва и в лаборатории шшолопш и антибиотиков виза.

Научнца руководителя: Доктор иоторлпарних наук, профоооор

ц.длмв.шюв.

Доктор бцологичооких наук Н.Ц.ГОЯОаЛМ

Официальные ошштити: Доктор вотвранарных паук,

И.'й.'МлАХ (Ь

Кандидат воторцнарних иаук М.В.ШУС0В

Ведущая оргаялзацпл: Саиаркшщакдй-ГооударогвашшЯ иодн-шшоклЯ институт ш.Ф.Ход-^аею

Завдха ооотоитоя ¿ 3 .лх^Я Г337 г, з чаоов

на ваовдаидл Спош'длпзпровшшого оовота К □¿0.37.01. по ваишта дяоовртацпй на оопокшшв ученой ствпони кандидата наук прп Увбакоком иаучтмшслодовательокоы шютагугв вагордиархш (701463, Саыаркаодокал область, поа. Та1ушк, УзШ1Б).

/

С дпоовруацаей ишю озиаккатьол в библиотеке шютлтута.

Авмрвфврат рааоолаа ^ ^^лЯ/Я ^ 19э7 г<

Ученый овкротарь ' Специализированного оовета, ^

доктор биологических паук - ' БУДХАНОВ Р.У.

ЛВЕДВНИН

Актуальность темы. Дерштомикозы, ¡и.; в л повсеместное раснрост-шню, наносят существенный экономический ущерб яииотнободсгау. тс толще а время достигнуты значительные успо;а) з области изучз-I этиопатогенеза, разработки мер специфической профилактики 1: свлдация дерштомикозов, в частности ооздание и внедрение в прайсу универсальной вакцины против трихофитии крупного рогатого с,чп-- ДТФ-130 (А.Х.Саркиоов я др., 1272), вакцшш против трихофитии шдеД - СИ-1 (А.Х.Сарнисов, С.В.Петрович;•К77), трихофитии пуа-: зверей -_Цвнтовак (Л.Л.Няк^оров^др., 1985), тряхофитаи овец 'раховио ( Н.П.ГолоЕина.К.А.Саркисои.И.П.Пармеяов,1908)7 трп-штш варЬлядов - Кшелвак. Также ведутся работы по. разработке я дренаю з производство ассоциированной вакцшш против трихофитии пного рогатого скота, мелкого рогатого скота и северных оленза риховак Ш.П.Головин;! и др., КШ).

Однако) имеющиеся в литература сведения по изучению клеточных ^моральных факторов иммунитета получены, в основном, при наблюли трихофитии крупного рогатого скота и лабораторных животных, данной этапе исследований некоторые вопросы этиологии, морфолсь. и патоганности возбудителей деркатомикозов, особенно вопросы' урологической згаа'.'.оовязи между различными вида;«« тряхофишюв, аюко возможности развития перекрестного иммунитета, недостаток изучени. Поэтому изучению этих вопросов.и была посвящена данная ота. ■

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилось заршенстзопаиие методов контроля ассоциированной вакцины "Гри-ак" а в задачи исследований входило:

- выделение возбудителей инфекции из патологического глагериа-азятого от спонтанно больных трихофитией овец и коз';

- отбор наиболее патогенных штаммов из числа выделенных куль-с целью использования их для контроля иммуногеиности ассоции-шной вакцины "Триховак";

- изучение динамики интенсивности иммунного ответа у лабора-шх кнзотных с помощью плазкаклеточной реакции;

- изучение клеточного и гуморального иммунитета у оьец я коз ило'цью реакции розеткообразоваиая с Т- и В-димфогштаий д латеко-

Научная новизна. Видельны и изучены овойства высокопатоген них эпизоотических штаммов трихофитонов овоц п коз. Впервые соз дана "Шкала определения степени патогенностя я ишуноганности т хофитоноз (в баллах) по клиническим признакам трихофитии у лаб раторных животных." Впервые отобраны высокопатогенныв штаммы три фитоноэ овец 0» 12) и коз (й 494) для контроля ассоциированной вакцина Тряховак".

Впервые для изучения напряженности постнакцинального иммун тэта при трихофитии овец и коз прпмено!} метод сценки функции оп цифических клеток среди, популяций Т- и В-лимфоцитов и реакции текс-агглютинации.

Установлено, что штаммы разных вадов трихофитонов могут об Дать видовой специфичностью, что немаловаяно при изготовлении в цин и их оценки.

Практическая ценность. Результаты проведенных исследований использованы для разработки:

- Инструкция по профилактике я мерам борьбы против трихофя1 сельскохозяйственных животных (^твервдена ГУН Республики Узбеки тан 5 мая. 1996' г.);

- Наставления по применению вакцины "Тряховак" (ВИЭВ) для 1 филактяка и тарами трихофиип крупного и колкого рогатого скот: северных олеква (утверздено Ученым Советом ВИЭВ 15 августа 1993

Апробация работы. Материалы диссертации долонзны на:

- заседаниях сотрудников кафодры кикробиологни, кляники и : зоотологии инфекционных болезней сельскохозяйственных животных СамСХИ в 1992, 1993, 1994,1995 и 19'АЗ гг.;

- конференциях молодых учаных л специалистов Са\гОлИ в 1993-19?о гг. .

- заседании сотрудников7збпо.,;о:.'.би;;ата, 1=37 г.;

- заседании специализированного .методического 'совета Узг«155 1997 г.

Публикация результатов аоследоваила. По матерка л?.'.', дисс'врет , дни опубликовано 7 научных статей.

Объем я структура диссег/гациг.. ^соортацпл пгдозена на 125 страницах каапкопг.енгго текста и: вкл;:чает входа-шо, обзор литер: ри, собственные исследования, и^^зппг рогультатоз ;:ссл:;;о?;гн1 вывода, праятпчвегно предлогенлл, список /тл^.г.гууи л арглвхсп?» Работа содержит 22 таблг"; и 7 ■>■ y:\~yc:'

ат 232 источника, в том числе 103 иностранных авторов.

Основные положения. которое винос.чтся на защиту:

- кате риалы изучения культу рально-.\:орфологяче ских свойств тра-хофитонов, виделенних от овец и коз;

- результаты изучена патогенности тркхофптонов на морских овинках, кроликах и белых ;.щшах; -

- результаты изучоння показателей клеточного я гуморального ямяунитвта при илмунизацил озвц л коз вакцквагда "Триховкс" к -''Три-ховак".

2. МАТЕРИАЛЫ И ШТОДЛ ИЗ СЛЕДОВАНИИ

Работа выполнена в Ш2-Ш4 гг. по заданию Государственной тештЕКИ 192.0000.196.4,01.05,.в лаборатории кафедры "пкроблологпи, клиника и эплзоотологии ишТекщюших болезней сольскохозянственнцх; аивотнцх Самаркандского С Л!, в лабораторий микологии и антибиотиков ыш.

Проведены микологические исследования патологического :даторз-ала от больных трихофитией овец и коз, изучение видового состава возбудителя с последующи отбором'вцсокопатогеннох штамлов.

Патологический материал отойран от 193 больных трихофктава жи-вотянх, имевших выражение клинические признаки. .{альнойшео микологическое исследование включало микроскопию, выделение чистой культуры, определенна иада грябоз и кх патогенкости. Для ьыделенал чистой культури возбудителя из калдого образца патологического матера-ала проводили посев в 12 пробирках на сусло-агаре, среде Сабуро а ШГА. 3 каядую пробирку со .средой покеа; ля по 3-5 частичек волос и чешуек на расстояние 1,0-1,5 с;л, Посевы инкубировали в термостате при ¿7-28°С в течение 45-50 .дней, просматривал их каждые 2-3 дня.У выросших культур изучали культуралыша я морфологические свойства.

-им изучения патогенности видалонных от больных трихофитией овец и коз культур, исследования проводили на лабораторных животных. Для огого а экспериментах било использовано 33 морские свинки и 33 кролика. При этом были отобрана для изучения четыре штамма, трихофи-токо'-м выделенных ст озац, и 7 шталмоз от коз, больных трихофитией. Отооранными штадааия трихофитонов проводили заражение аналогичного количества кивотнцх в доза по 10-12 илн. микроконя,ций в I мл. Учет результатов заражения проводили через какдыэ 3-й дней до исчезновения кллппчесяпх признаков болезни, диагноз ставили на основания клинического рсгдотиа, шжроакошш патологического материала а .выдалакля

ретрокультуры.

Изучение динамики развития интенсивности шлиунного ответа у белых мнаай, при иммунизации моно- в ассоциированными антигенами, приготовленными из культур Trichophyton verrucosun var.autotro-phycuü (овец) и Trichophyton verrucosua (коз), проводили с помощью плазмоклеточной реакции.

Первую и вторую группа белых мышей иммунизировали кокоантиге-Качи ИЗ культур штаг.иа У» 12 Trichophyton verrucosua var.EUtotro-phycun |< Ji 494 Trichophyton verrucosum. D третьей ПОДОПЫТНОЙ Группа 20 мышей были иммунизированы вакциной "Триховак". Ка 3,7,10,15 я 3Ü послэ иммунизации дни мышей убивали и из регионарных лимфатических узлов изготавливали ыазки-отпочатки.

ил т ом о р'Со л о гпч е с кие исследования проводили путей подсчетов бластоз, кдазмобластов, незрелых и зралыя плазматических клеток в 50 иммерсионных полях зрения.

Определение устойчивости овец, иммунизированных вакциной "Три-хоаио", к возбудителям трихофитии,• выделенным от овец и коз, проводили ка 12 кивоткых, которых разделили на 4 группы, аивотные I и 3 группы бала дважды иммунизированы вакциной "Триховио", 2 и 4 группы не иммунизировались и служили контроле«. В дальнейшем, через 14 дней поело второй иммунизации, животные I и 2 групп были заражены патогенны« итаьшом ,'г 12 (о), выделенный от больной трихофитией овцы. Низотныа 3 и 4 групп'были заражены патогенным шташом Л 494 (к), выделенным от спонтанно больной трихофитией козы*

Изучение кшуногоняоети вакцин "Трлховис" и "Триховак" проводили ка 18 козлятах, разделенных ка 6 групп, ¿ивотных 1-й группу двагош иммунизировали вакциной "Триховис". квотных 2-ой группы двакдк каупизирваали вакциной "Триховак". давотнах 3-ей группы на иммунизировали. Через 14 дней после иммунизации козлят всех трех .подопытных групп заражали вт&чмом Я 12 (о).

Коз 4-ой группы дваады иммунизировали вакциной "Трихозис".Животных 5-ой группы дважды иммунизировали вакциной "Триховак". Коз 6-ой гру.лц не иммунизировали. ¿азотных 4,5 6 групп задали штаммом ,'s 494 (к).

I козлят ¿sex групп на 7,14,21 а 28.дни после иммунизация и .на.7,14,21,¿8 л 35 дни поело заражения брали кровь и исследовали в реакции роэеткообразовакия с Т-, и ¡^лшфодлтааа (по методам

■ К. .Joadall с.а. . 1972 ч If - F - Men'das е. ъ. , '473) И В рОвКЦИИ т-

•гоас-&грлютина!51И (по Ю.М.Федорову, 1992).

математическую обработку результатов исследований проводила по методу Г.Ф.Лакина (1968),

3. РЕЗУЛЬТАТУ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Результаты изучения культурально-цорфологичаских свойств возбудителей трихофитии овец

Для изятия патологического ¡/.атериала било отобрано 137 больных трихофитией овец, у которых в различных областях тела отмечали обширные поражения вслоо по типу зкто- и звдотрикс, множествен-пне, округлые, сильно варьирующие в размерах (1,5-5,0 ит) артро-споры.

При посева на ¿ЯГА, сусло-агар и ореде Сабуро от 137 образцов патологического материала было выделано 79 культур возбудителей болезни. При этом было отмечено, что по культуральным свойства'.? трихофитоны мокло подразделить на четыре группы:

- в парную группу 'штаммов вошли 32 культуры, которые на срадз Сабуро вырастали в виде колких точечных колонка по всему скосу среды. На срадо сусло-дгар культуры образовала белый пушистый покров всего скоса среды, размер отдельных колоний варьировал от 2 до 8 мм. Наиболее характерный рост колоний для этой группа отмечали у вяаи-т & 9;

- во вторую группу вошли 22 кулы'ры, которые образовывали мелкие, точечные колонии размером 0,5-1,0 ш по всему скосу среды' на ерздв Сабуро. Па среда сусло-агар культуры образовывали белый, пушистый, ровный покров по, всему скосу среды, размер колоний достигал 3-10 мм. Наиболее характерные представителем этой группы являлся иташ & 10;

- а третью 'группу вошло 16•культур, которые образовывали ко всему скосу ерздц колон ид ■размере:,! 1-3 ш на среда Сабуро; белые, пудовтие. колония, разорю 5-12 км. по всаму скову ерздц сусло-агар. Наиболее характерный рост наблюдался у штамма'Л IX; -

- в чвтгвртуо -рушу вошло 9 культур, которые на срадз Сабуро вырастали в виде кохистых, нвлтонатого цвета, колоний по всаму скосу среди. На о[,«ш сусло-агар ошечаля слабый рост колоний озрова-тогп ргг-у.стом 2-5 т. Наиболее характерный рост колония для ~;?г,;т г. г, о:ч у ата-жа #

ß.

Основываясь на полученных результатах, для проведения дальнейших исследований были отобраны следующие культуры: S 9,IU,II, 12 (о).

Полученные результаты исследований патологического материал и культурально-морфологичвеких свойств возбудителей, выделенных больных трихофитией овец, дают основание считать, что возбудител трихофитии овец являотоя Trichophyton verrucoeua var.autotrophic

3.2. Результаты изучоиия культурально-,'/.отологических свойств возбудителей трихофитии коз

При исследовании 61 образца патологического материала, кэш го от больных трихофитией коз, было выделено 43 культуры трахоф тонов.

При микроскопическом исследовании патологического материал! .наблюдали располокенныв на поверхности и вокруг волоса артросао] в чехлах, достигающие размеров 2,5-7 мкм, ч*о является ввдовым признаком Trichophyton vorrucosita.

Вторичные культуры на среде сусло-агар образовывал« три тш колоний:(Табл.I)

- белые, рыхлые, просвечивающиеся, с ровными паутинистыми краями, колонии размером 2-2,5 см (17 культур};

- белые, плотные, шерстистые, с ровными паутинистыми краям, колонии размером 1,8-2,5 см (15 культур);

- белые, погруженные, с паутинистыми краями, колонии разме; 2-2,5 см (II культур).

Наиболее характерные представители этих колоний.(атаман Ун < 491,492,493,494) и два втамма ЫШ (штаммы » 145 и 147) была от браны для проведения дальнейших исследований.

Культурально-морфологдческпе свойства атаммоэ, выделенных овец и коз, имели различия. Так, например, артроспора тряхофлто выделенных от озец, имели раа\:еры 1,5-5 а артроспора трахо тоноз коз 2,5-?,U ; расположение артросиор у возбудителей т? хофптии овец мозаичное, а у возбудителей трихофитии хоз - цепоч ми вокруг и внутри волоса; длительное хранение и пересевы отрки тельно влияли на сохранность артроопор у тр:;коф:";;.и;о5, ииделокн от коз, тогда как у трвхофатоноз, Х'кде ленку х от овец, откечадк хранение артроспор во вТорз'жых кзолятах и т.д.

Таблица I.

Сравнительная характеристика культурально-корфологичоскнх свойств трихофптонов, кэде-Л8ЯИЫХ от больных овец и коз

Показатели : О а ц и ; К о з и

'азмзр трихофитонов 1,5-5 шел ~,5-7 :.";сл

Расположение артроспоо ¡Лозаичяоо цаиочкшли вокруг и внут-

ри волос

'ост вторичных культуо Оор&зовиглли белив, Образ овивали белые, пушио и сусло-агаса *иуаистце,сеповптыв, тиа.рихлио колонии с па-

ко:дисгыа колонии уткнастдоя краями.

)окрзняе.лость артоо- Артроспоры во -втоалч- длительное хранение и гнои ьи втоойчних' них культу их сохра- пересевы от тщательно культурах ' нялнсь длительное влиякт на сохранность

в;м:>:я * артроопор

Лолученние результаты исследований иатологнчоского материала з культуральнот-1лор;-олоп5чоских свойств возбудителя дер'лач'омикоэов (оз дают основан;:»! считать, что возбудителем трихофитии коз являлся гриб ТгХсЬорпусоп./оггисосит. .

3..], Изучение патоп.'.пностп культур, выделенных из аатоло.'йчеакого иат¿риала, взятого от больных тр]!Хоф::т:;еИ овац и коз

л процессе изучения пагогоиности культур, выделанных из патологического гдуегшдя, .взятого от больчых овец и коз, методом экспериментального з'фгг&мш йоракдх свинок а кроликов была создана •Шкала определен::;! степени патогзниости и кдлуногенности трихофа-гонов (в йаллах) да ::л:шдчес::ш признака« экспериментальной трихо-}«ге1И! .у л.йир.чсорыгх .-¿^¡отних".

|1.ч?о1'«ннос".,ь дор.-- ли^гсоа ¡¡зляотсл одна-.? йз признаков, харак-мрпяуддп:: иоьбудкъмля. доотоку ми в своих исследованиях уделя-па болшое вилман^е изучению эдтрзанпоста культур, выделенных из .пгологхгюевого клгч!рпалл, взятого ос больных трихофитией овец и коз.

ирг, ассдодов.:.:!2;ш шш'хтиаосчгя 4-х штаммов трахофитонов, зкде-лешшх от овоц, 7 даг-ммов - от коз, на аналогичном количестве ла-й0|)ау0; п:;х ааышшх (33 .¿орсках снимках а 33 кроликах, т.е. по 3 вц:21Ш>;!Х на этегзг) -било установлено яслвлание клянкческйх ■

признаков на 5-8 дна посла заражения: незначительная припухлость и покраснение kosh на местах нанесения культуры. На 10-12 сутки появлялись серовато-красные пузырьки с беловато-сероватыми чешуйками. У некоторых животных отмечали образование асбестовидных, плотных, иногда кровавых, корочек, которые с трудом отделялись от

ПОВврХНОСТИ KCH.il.

Кролики, как и морские свинки, оказались более восприимчивыми к зарааению в молодом воэ£>аоте (1,5-2 месяца). Однако, у кроликов, по сравнению о морскими овиаками, клинические симптомы протекали более сгланекно.

Результаты изучения патогенности методом заражения морских свинок и кроликов штаммами трихофитоиов, выделенных от овец и коз, показала, что все 4 штамма, выделенные от овец, и 5 пз 7 ат&ммов, выделенных от коз, оказались сильно патогенными.

Штаммы И 12 (о) х й 424 (к) по "Шкале определения степени патогенности и иииуногзкностя трихофитонов (в баллах) по клиническим признакам экспериментальной трихофития у лабораторных животных", показавшие наивысшие баллы, отобраны как наиболее патогенные для проведения дальнейших исследований. •

3.4. Изучение динамики развития иммунного ответа у белых мышей о помощью плазмоклеточной реакции

1 5а последние годы в ветеринарной науке проведены исследования . по изучению иммуноморфологичеоких реакций в лимфатических узлах животных, иммунизированных живыми и убитыми бактериальными вакцинами, (а обоснована роль плазмоклеточной реакции. Однако, до настоящего времени не кмеетоя данных по проведению фундаментальных исследований по изысканию в организме кавоткых реакции на зведеназ грибкового антигена.

г Поэтому задачей наших исследований было изучение динамики и Интенсивности иммунного ответа в сравнительном аспекте, путем иммунизации белых мышей моно- и ассоцпрованщш; антигенами, приготовленными из грибных культур. Ыышей 1-й и 2-й групп (по 20 иыав2 б каждой группе)'иммунизировали ыоноанткгенами из культур Trichophyton verrucosus ver.eutotrophycuii ктамма У» 12 (о) X Trichophyton verrucosus штамма й 494 (к).

Мыши 3-ей группы были икуиизлрованы аоссислро2зш:0а вак.доой :"1риховак".

Результаты изучения динамики развития иммунного отнета у.белых мышей представлены в табл. 2.

Таблица 2.

Результаты изучения динамики развития-иг/лунного ответа у белых мытой, п-шункаироваших антигенами, приготовленными из культур Trichophyton vc-r-ruooaun var.aurotropiiycua (о), Trichophyton vor-rucoaua (к) и вакциной "Триховак", посредством плаздюклеточной реакции

rvun -Кпр^ [Количество клеток после иикунизации и дни наблю;;

.МуНЦЭа_.----_-----__----;-----,-----

пы : ки :ции ¡.'+м: з д. : ? д. : ю д. : к д. : зо д.

. _ * гт • "Г . » * W * * "ж»

J Г 6+0,53 46+2,62 S7jhl,?Ü 62+J,62 46+2,32 , 31+1,30 П 5?0,4B 36+1,85 46+2,45 Эо+8,81 106+6,44 ' 84+6,12

U Г 6+0,53 ¿8+2,62 71+3,80 59+3,10 47+3,80 30+1,23 П 5+0,48' 49+2,11 8344,20 , 90+7,20 II2js,9I 94^3,74

ш Г 5+0,48 151+8,31 134+7,15 92+8,16 78+6,63 72+4 ,-64-П 6+0,53 607;i,60 92+5,40 I2i;i0,92 147+11,10 Ш+8,91

Как видно из таблицы, у всех белых мшлей до иммунизации колй-шотво гемощ:тобластов.колебалось в пределах 5-6 клеток, 5-5 плаз-ютических клеток в 50 шлерсионных полях зрэапя, После иммуниза-№и у всех кивотных наблюдали изменение показателей плазмоклеточной >еакцяи в сторону большего увеличения "екоцитоблаотов (у мышей 1-й •руипы 48, 2 - 58 и 3 - 151).

' лак-видно из приведенных данных, наиболее ярко выраженный т-:уиныЯ ответ наблюдали у животных, иммунизированных вакциной "Три-:озак". Количество плазматических клеток также изменилось в сторону величания, но не в столь широком диапазоне (1-я группа 36, 2 ~ 49, - 60). '

Ыакаимальноз увеличение количества гемоцктоблаотов отмечали а 7-й день после иммунизации (у мышей 1-й группы 67, 2-й - 71 и - 134). Однако, у мышой 3-Й группы на 7-й день после иммунизации оличество гемоцитобластов,. по сравнению о показателями, подученный на Л- .1 день после тшунизацин (151), яда г в сторону уменьшения -то .можно объяснить сдвигом плазмоклеточной роакции в сторону узе-г»«*?няя келглестпа плазматических клеток (I группа 48, 2-83, 3-92),

Сдвиг плазмоЗластической реакции в плазмоцвтарную очень хорошо прослеживается при анализе показателей реакции исследования крови мышей на 10—Л день аоеле иммунизации, когда количество гемоцито-бластоз в 1-й группа доходит до 62, во второй - 59 и в третьей - 92. Зато количество плазмоцитов достигает в первой группе 118, второй -90 и третьей - 121.

На 30-й донь после иммунизации у животных всех групп отмечали некоторое 'синаенио количества как незрелых гемоцитобласгов (I - 31, 2 - 36, 3 - 72), так и зрелых плазмоцитов (I - 84, 2 - 94, 3 - III), хотя ни у одного животного не отмечалось енгахзние количества клеток до исходного состояния.

Таким образом, у белых мысей, иммунизированных антигенами различных культур трихофитонов, отмечали увеличение количества плазматических клеток, что является доказательством иммунной перестройки организма. Наиболее ярко выраженный иммунный ответ наблюдали у мышей иммунизированных ассоциированной вакциной "Трихозак".

3.5. Результаты изучения иммукогенкости вакцины "Триховио" методом заражения овец отобранными штаммами возбудителей трихофитии овец и коз

¡у результате изучения патогенности штаммов й 0,10,11,12,490, 491,492,4из,494 у лабораторных кивотных били отобраны штаммы J5 12 (0) и й 494 (к), выделенные от больной овца и козы соответственно. Поскольку мы имеем дело о возбудителем, эызизаюдва тряхофитаю саль-скохозяйстБгшшх животных, то оценку патогенности и вирулентности , его решили проводить на гомологичном макрорргаяизме.

возбудитель трихофитии овец Trichopliytoü.Verrucosuni var.auto-trfcpbyoua штамм и 12 (о) при заражении гомологичных хивоткых вызывает типичную клинику трихофитии. У животных, двазды ишунизирован-\ных вакциной "Триховис" и зараженных штаммом й 12 (о), наблэдалп легкое течение болезни.

• Возбудитель трихофитии коз Trichophyton verrucosus атамм js 494 (к), при заражении неиммунизированггах овец, вызывает появление клк-, нических признаков болезни в более стёртой форме, чем овечий стамм

у животных контрольной группы. У овец, икмузизировакикх вакзгной .-"Триховис" п-зарааенных втакгдом II 494 (к), каблздал:?-более легкое' параболвЕанЕе и быстрое ваздоро^лзнче.

3.6. Результаты изучения, имыуногенносгя вакшши "Трахозяо" я "Триховак" методом заражения коз отобрашши патогенными штаммами возбудителей трихофитии коз

Полученные результат^ изучения якмуногенкоати вакцин "Трихо-то" и "Триховак" свидетельствуют о том, что:

- у аявотних контрольной группы козяй.штама Я 49-1, (к) выэыза-т 1т тяжелое протекание болезн^, а оаечкй стаИ 12 (о) у лоз - бо-1ее стертое протекание болезни; '

- двукратная ямкуикзацяя ччакадшой "Траховяо" у ярз -не .предо-сраняет ях от заменил гомологичным (.козьим) штаккоа' и' заболевает, тогда как заражение штаммом И 12 (о) у животных этой груши зызывавт более сглаженное точеаае болезни;

- двукратная иммунизаху!я вакциной 'Тряховак" лродохрпллбт коз зт заболевания трихофитией, а пра проверке пияуиогакиооти вш«шз Тряховак", путем.заражения овечья» атаммеа а 1« (о), наблхдаяп гагкое протекание болезни и быстрое выздоровления' хявотных.

3.7. Изучение гуморального л клеточного иммунитета у овец,

иммунизированных вакциной"Тряхивяс" я зараженных гтаммамя, выделенными от овзц я коз

Результаты изучения клеточного.иммунитета у овец, посредством аодсчета Т- и В-лм[посйтов в реакция розеткообраэозашш, показша-от, что после иммунизации и Баракеная в крови овец происходят увеличение количества Т- я З-лдмфосвтов, что обусловлено шмулологл-. ческой перестройкой оргаидзма клеточного тила в организма яявотких. (до .иммунизации абсолотноа количество Т- и В-лимфоцитов составляло 599-751 и 253,3-253,5 э I мкл, после заракеняя эти показателя составили 2404,6. я 1033,4 в I. ыкл Крови с00т39тст39нн1\1, , -

При изучении гуморального иммунитета, с помощь» реакции латан э-агглвтинация, после введения антигена оецы всех групп рэагяроэдяя выработкой антител, в ранние сроки исследования преимущественно. 1в н в более поздаие сроки - 1в о. Так, осла максимальный тятр .иммуноглобулинов М и О на 7-ой день поело заражения был .равен 42$,5 я ¿53,3, то на 21-й день после заракения он составил 426,6 я 273У>6. .

У ярзвотах и зараженных овец, по сравнению о неприветная ,'й'. нв-йара;;еняы:.!с оеизмл, наблюдали более высокие показателя количества Т- и 1>-;'.;ц.:г?оцлт.ов я титра иммуноглобулинов. 1

а,а. Пзучваив клеточного в гуморального выхукатста у коз, илгун^зпрозаяних вакшиша "Трнховис" г.у'Трлхозак" и 5агса:ошшх атакой тркхсфцтонов, выделенной от Сольных о^ец-и коз .

1 ^syneuae клеточного иммунитета .у коз путей подсчета Т~ и 3-дш-(]ísm:í!vüb ь реакция. риззткообразовакяя (i'-POK, ЕАС-?0хС). До яамунизапал стиосйтыим и абсолютное количество Т-' п В-лг^фоцатов в группах колебалось в пределах 27,6-30$ и 14,3$ и 657,9-844,3 и 289,0314,6 в i ¡.:кл coo73¡ivava<):wo. * ^

i" И поле иммунизации вакцаивид "Триховас" и "Триховак" наблюдали поетеиеня&е лоььиеиио как относительного, так к абсолютного кода-частга Т-'п Е-лимфоцитов во всех опытных группах, t

Лосле зарлненкя шауиная система всех кизогних отвечала увели-нз«айи числа Т- & Зи-лиифоцатов.

Cawiío высокаа показатели относительного л абсолютного количества Т-к латок отвечали на 21-й день посла заражения» в 1-й группе'-51,0,3 и 227?,7¡ во 2-ой - Ь3,3$" и 2259,-4; 3 - 48,0$ и 1539.4$ 4 -■53,6$ и 2203,0; 5 - 54,335 и 2305,1; 6 -'46,6$ я 1660,6 в I икл оо-ствбтсиззнао. *,,

Характерно, что мшюнцяя к увеличению количества В-клеток в га^ошфкуляции наблюдалась из протяжение всего срока наблюдения а .'¿аксййальков содераашм их во всех группах откечалось на ¿o-й день после аараяеияя, Соиве- выоокяе • показатели Ь-дшфоцягов, среди ки-моткых всех групп на этот, срок, отвечали у коз 5-ой группа, иммунизированная ассоциированной вакциной "Триховак" и зараженных шташом # 494 (к), чте составило 26,6$ и 1050,5 в I ккд,

У'коз контрольных групп пооле'а'арааения.хоть и наблюдалось увеличение количества Т- и Б-яшфоштов, но оно значительно уступало по показателям кавотнш из опытнах-групп.

В заключение следует отметить следующее: ,

- у коа, иммунизированных вакцинами "Тряхозие" и "Триховак" и зараженных штаммами $ 12. (о) и 8 4У4 (к), происходит иммунная перо-стройка организма, что проявляется в увеличение численности шмуно-Компстеятяих клеток;

- самые высокие показателя Т- в В-лимфоцитов о^очаотся У жй-ботяых 2-ой и 5-ой 'групп, дэвдда п&унлзиродшшмх арооцпироваицо;г 'пакщшой "Трйховак", 4¿'o. с:н>детэльстп.ует о более выем*«;. нжувоге:;-

поста данной вакцкиы; \ •

- у коз, иу.муш1зн?й»анннх я впослодстяка ааражашшх агшгом I* 494 (л), наблюдались болов высокие показателя количества ц.итов,.по сравнению с таковыаа у якзотиых, привитых к яаоакзшшх зташш И 12 (о), что объясняется болоз вкра^енш.! гсегуинам отпетом организма на гомологичный козий йта/л.

Изучение гумодальнего гаиунигата у коз путей рвад&Ш »¡атаке--агтлэтинащш. J аавотнах зео'х групп до кикунизау;:;'. титр irwynorjw-булинов а и Ig G колебалсл г'пределах 2í,3-¿S,6 и 42,С.

Уже на 7-й день поело юкункзецгм ч г.рганазив пр»штих зягит-пых наблюдается резкое повыЕОнкв титра кумуноглобулкиов й, что отставило 42,6.

В дальявйаеи паблядзлось по'стецониов увеличение' титра Ig М и is G у всех привитых жязотиих. »,

После эаразевая як^ункая оисгзиа аивотиых всех групп отвечала• повышенпси титра иммуноглобулинов как Ig и» тая а 1(5 о.

Какгл'лалькав титры Ig Ц во всех группах наблюдались на 14-2 дань после заражения. причем самые высокие пока-ar i ли титра чалп у коз, дваздв жалунаэировлнцах асоошшрогакпой вакзкчоЗ "Трл-ховак" - 653,3. >

¿.¡аксиальные титры иммуноглобулинов 3 во всех группах отмечала на 21-3 день поола заражения я особэнно у животных аято;: гр/г.пы, где достигли предала 3413,3.

.Некоторое енкзеизо титра во scé^ группах отмечалось з ассла- •. дувхие дни. Тая, на 35-й дань посла заражения (срок каЗлхдеыия) титр иммуноглобулинов как le и , так и Ig О, оказался сомы.-.' енсо-кш'у коз пятой груши, что составило 341,6 я 1705,6.

Полученные данные позволяют сделать еяедувдав закяячвмаз! /

- в организма коз, при двукратной икмунизапш гакцннамн "Хсд-г хозло" и "Триховак" с лослздуэдим заражением этей I¿ (о)'я . ¡i 494 (к), происходят увеличение кшуноглобулштв обоих классов Шив), что свидетельствует об икму п о л огаче ci¡ ой перестройке о|гга-низиа гуморального типа;

- у кивоткых, зараженных шташоа & 434 (а), татр

лвноз У и G был выше, по сравнения с титроьт у коз, гаракекпы:: агш:-|.:ом 12 (о), что обусловлено более йыракенкш илгаукячм ответе:! организма на ■ го-!о логичны i! козий вташ; ! . • ,

- ' г^озкзе поипэптзла татра кмауноглобуявгов обокх кезс-

оов скучали у крз, аамуниэироваиш^ ассоциированной вакциной "Тряховак", что сведете Ласт.'.'ует о более высокой^ иммукогенности »той вакцину. ^ .

ВЫВОДЫ \

1. Ьыделзни от овец коз культуры трихофито^ов. Определены

возбудители у ОБОД - Тг1сЬот/1!у1оп уехтисозиш уаг.ьи^горЬусив, • У КОЗ - Тг1сЬорЬуЮп уоггисоваха. 1

2. Ь опытах установлено, что наиболее патогенен стажсами дграхефатонов являются дли овец - с» » 12 (о)

уэггисоашг чс.гах'лыхрръусия, для коз - втшзл 4Э4 (к) ТПсЬо-р'пугса уаггиссвигг. ;

3. Доказано, что » первые дни у шше*, а-лиунязированних различите га-:тигакшлй из трихофитоноа, ответная решай» носит гемо-ютобластический характер и ииоследствие- переходит в адазката^.ес-куа.

4. Наиболее ярко зирезшшй юагушшк от лет набладаЯи у янява, иммунизированных аоомшровцниой вакциной "Трпховак", у которых количество плазматических ¡¡лоток на црогл-ьение всего ы;:.гга почти

в 2 раза провисало показателя, получение у мциеп, нммунпопроъан-ных моноаитягеаами.

5.. В опытах по контролю иьилуногенности. шкцпны "Триховис" установлено, что данная вакцина, при дьукоаткоп акхуиизаили, фондирует устойчивый дакуивтвг у овец НО,'»), тогда как у коз не пус-до-храняет от заражения гомологичным ».козьим) ¡Уга;.:мо::;» .

б. лшенено, что у ¡кий/тных,. гллмуиизиро-'ашшх з:а1аип'т.мя "Три-ховио" и "Трикова;;" и зараженных штаммами й (о) ;*. £ чУ4 (к), происходит ишунная перестройка ородгиззд, что проявляется в увеличении численности ^'.хуиокомштентких кл;;ток.

?, доказано, что асоо:хироьаиная "'Гргхои,лим ойдадпа-;

более йыооиой юшуи&гедностьа и:; 20-25^ (йм&ю), кдц.иа "Триховис".

в. 1йтагаш 3 & <.о) г'гАсгогД.усоь ч«-.-. V. ■.и.осг^пи.,

и 41)4 (',:) тлоьо^ауи'п •ыс.'иеойчс явлша'зд йатт'» .г.^ми г. ми.у;

служить дяг контроля Ллучоиниос;:; ьикциш "^».'.х^::;".

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПИДДОШИЯ

Учитывая положительное результата эксперяменталышх исследований, предлагаем изготовление вакцины "Триховак" для более широкого испытания ве в производственных условиях.

Результаты проведенных\иооледоБанай включены а оледушиа иор-мативно-технпчоские документы:

1. "Наставление по приманили» пшют "Триховак" (1Ш6) длч профилактики л терапий трихо^тии крупнот а мелкого рогатого окота я северных оленей", утварздено Ученым Советом ВЯ53 ¡5 августа ШЗ г. . \

2. ''Инструкция о мероприятиях по профилактика я мерах борьбы против трихофитии сельскохозяйственных животных", утверждена ГУВ ыСХ Республики Узбекистан 3 мая г.

СШСОК РАБОТ, ОПШИКОВАШУХ ПО ТШ.Щ ДШСЕЕТАЩИ !

1. Парывиов И.П., СаВдаднев Д. И. 1^уЯлар темя ратин касаллигн-нинг куэгатувчнсинм в& кул ту рал хусусиятлармнн ани^лаз // Прсфес-сор-укнтувчилар ва аспирантларнинг 51- нхмнй дасобот кон|оренцияси маъруэалар мазыуни. - Саыарвднд , 1593. - 696.

2. Сайдалиев Д. И., Парюков Н.П. 1&текс - агглотннацая ре ахинеи билан экспресс усуада икмуноглобулмнларни шинная ва гфйлар «ш-цунологии сгятусинн бадолая // Профессор- укитувчндар вз асяирзлг-лартинг 51- илмий жрепбот конференцией маърузаяар мдзмунн. - Самарканд. - 1993. - 70 б.

3. Сайдалкеа Д.И., Парменов Ы.П., фжайра имиунигетини удсн; оргонизмзда ургании.- / Нзучй^в трудк Московской недемршекой акадс-мич !'.''. СГ.;рное,1. -К., 1994 - ГК С.

4. Сч?далиев Д.И., Парманов И.П., Давлятов З.С, Сц енч^онлар организччда иммунологии жавобни нятенсиплигини ва динаиикасики плазмптнк хужайра реакцией ердамида урганиз// ш ояин ва аспнргтт-;;арн«нг 1395 Рил нлмиЯ конфоренципси мате риал ларн. - Самарканд, 1955, - НБ б.

5. СаЯдг^яс» Д.И,, Пародов Н.П. ¡^ёнлдр ихсяориментл грихо-

фияияси //Фиалок хувдлик иаяаб чикАришлда самара&оряикии оазирив га ислоз^стларни чуцуряыятирки Вудларц, - Сшлар^ай. 1996. -127121? 6. \

, 6. Сайдаляее ,Д.И. Удоцг.ар оргиниомида гуиорьлигцмунитетни латекс- агглютинация реокциясн овдашда урранаш.//^з оли;д па иута-хаеясларнянг идмиЯ ыацолалгф тушнши, I каад.- Саиарнадд. 1907 1».«я 150 - 153 б. ' (

7. Сайдьдиев Д.И., Парманов И.О. .Абиркуяов А.Й.; Jtyaaflpa вицу-нитоодт "Трлхэ^ис** на "Трихооак" вакцииалари бидф икки марта .аияьнган Ш1 цуЯ ва эчлилардан акратилган трнхсфтон ютаммлара Си-ягш soj-apsüí.miiis.iraíi уяонзар ортшшиида ургшя5ш.//£а оляи »а иут: х&еяс ¿&рммг нами Я иансшишр туялаая. 1 иод.- Сяиърцыщ,М97 И4.-1 IM - 167 6. i

"Трихоаак еакцинаск Силам зидангаи зоаПвонларда гукорал на хужайра химоя сииллари ва yiu: назора? кдлкв усулларя-кн такоаилль&1нриши иаазусидогн диссергацкшашг .ццсцача иазмуни.

f\V»' ва »икияардам л&рателган ?р1хофитон штоадларшшг културал гусусиимарани ургалиыда улар уртаседа фар^ мавжудлиги ашщланди. йагальл, цуЯлардан ожратилгаи аргроспоралараи улча«и 1,5-5 мкы буаса, ачкилар трихфтоилар« аргроспоролара 2,5-7 щщ га тент б.влди. I^íump трдхо-^икмийршшиг артроспоральри тартнбсиэ койлаа-rm tíjaca, о-да^ар к^згатувчисикинг артроспоравари сои толаси-иушг аг'рсфвди ва ичида оишшр куртшаида хойлаагиш$ги куэатилда. Узоц муддатга «up¡&s во куиириб уткаэикяар эчнмлар трихофятонла-ршьшг еачльнлгига сдлбий тсгсар курсатгая булса, цуйлар *оня&1« ортроскоролари якинлаа!чя рстровултурада сшдмшиб цолдн.

Лаборатория -.fñttíí'SHJiap'í! Сдеигиа чуччаларн ва куёнлар)да j^yfl '»¡а ачсрлтидган втоммларшяг пагогенлик хусусиятларини

ypreiiít&fi'« ;г>«лардш1 ¿üxp&i-ivirmi аташяарнняг тургаласи хан» эчки-fit{> ьчьнящиж сг»чг.*адан бсятаси ащ>я патоге/ыик хусуснкгнни i:j<¡-'и:?мн. Вкдавир 12 (о) ев 491. (к) "Лаборатория хайвонларини sKciici;!>,:•,/. ívtvJi гунл<4тю!<ячтш' ¡опиши бслгиларига караб грихо-

м1т;.генлмк дародсшш (б&лларда) аникловчя икала" с;;.- 41 курс&гганлиги уч;ун кейинги текстриа-•таГ рун'?*":-*-'- ••.-f.ííW«!.

Уяс-цли^ ' Ы1 гумо|»л ингунлтогци ургшглв-

; 'VU"\/1. -.-¡.ид;«;

- "Триховис" Da "Тсиховак" вакциналаря билан аммнгаи на 12 (о), 4У4 <к) оташдлдри Аилан зарарлантирилган уломар орга-ннзмила иммунологии хЦта курилиа юз Серий, &/ нарса икнунокомле-тент хужд^раларки сошти ооииила куре«мади.

- Т пп ti лим^гпиглархамгл Mm О сикфдаги иииуноглобулми-лаони виг юкош курсаткичлари "Трихояан" 'влкцинаси билан ккки марта омланган гурухлярлЦкулнтияиви в у вакцина ииыуногеилигнкимг

вкорялигидян гупоутк tfcpn.w.

HUHCRAL AND CELL УАСТОНЗ OP DISFSHOB IH AiniULS, 1Ш.Ш12ИР BI "THJCHOVAC" VACCINK, AND IKS XIQBCTaUSNT CP 1X3 CONTHOL IfiiTHODS

The etudy of cultural and aoivhologic qualities оi strain«, emanated froa steep and goats, showed that frhsy have dlffarencu.s. So, for exaaple, artrosporeo, enotaated froa sheep, iiava 1,5-!? ^^ in size, and artrosporea of goats' trichophytons ore 2,p-7»0 ¿rto in з!ге. Artrospore's err&njes-rnt of s'acop trichophyton agents ia mosaic, and in goats« trichophyton egent the artrosporeo 'situutod by chainв in and around the hair. Thi long storage and resosing negatively influenced on artrosporea' ¡safety ia trichophytonsjas.-'if oated frca goat, while in trichophytons, eoanated frca sheep, we marked the safety of artrospcres in tha second isolation.

The results of pathogenic stadoso fcj aeana of infecting the guinea-pi ijo and rabbits by trichophyton strains, 'isolated frca cheep e,ad goats, bhov;ed, that all « otraina, lefcleted frca shoejH end 5 I'ros 7 strains, isolated' froa goata, '.теге strongly pathos«-' nic. Strains 12 (iih) and (g), showed the gighast иогк on tta' "Scale of doter~.'-nstioa the pftthogenic ana inpunofrsnic cUsjre.e'. of trichophytons" by cliaic 3igtia of expariseistal fcrichophytiua, wore chcson the mor-з pathogenic for tha further ia'/esr.igafcions. •

2urin&- the study of cell and fcuaortil iaaaaity in gcata vre . I'tuted, tbat; ■--■:'■

- tho highest tarko of i- and B-lysphocytea ana: tifcrs* of • Ibbunoslobullns К and G ware seen in or.inals froa tha 2nd and 5tb. group«, tvice Inuunised by associated "Trichovac" vaccine, mhicb testified about the higher iaauncgenepity 6f thia vaccinaj

- i'.j ,joat3 the i^une reorganisation of orgauiara took placo, it is oae-л frca the aaaber- increase of iiaaiunocoapetent cells,. ;;