Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Роль клеточного иммунитета в поствакцинальном противоящурном иммунном процессе

Министерство сельского хозяйства и продовольствия Российской Федерации

ВСЕРОССИЙСКИЙ. НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЗАЩИТЫ ЖИВОТНЫХ

На правах рукописи УДК 519,578. 835. 2: 616-097. 3.

ДАВЫДОВ Игорь Владимирович

Р Г Б ОД

РОЛЬ КЛЕТОЧНОГО ИММУНИТЕТА В ПОСТВАШЦИАЛЬНОМ ЕРОТИВОЯЩУРНОМ ИММУННОМ ПРОЦЕССЕ

16. 00. 03. , - "Ветеринарная микробиология, Еирусология, эпизоотология, микология и иммунология."

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

г. Владимир,1395г.

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте защиты животных ЫСХиП РФ.

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ - кандидат ветеринарных

наук, старший научный сотрудник ТОЛОКНОВ А. С.

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

' - ШШЕНКО Владимир Александрович, доктор ветеринарных наук, профессореВНИИЗЖ, АШиП РФ г. Владимир);

- ШУБИНА Надежда Георгиевна, кандидат биологических наук (ВНИИВВиМ, г. Покров, Владимирской области.)

ВЕДУЩЕЕ УЧРЕЖДЕНИЕ:

Всероссийский институт экспериментальной ветеринарии им. Я. Р. Коваленко.

Защита диссертации состоится " " / / 1995г.

на заседании диссертационного совета К 120.60.01. при Всероссийском научно-исследовательском институте защиты 'животных по адресу: 600900 , г. Владимир, п/о Юрьевец, ВНИИЗЖ.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан " е¿^"¡У^у ^ 1335г.

Ученый секретарь диссертационного совета Узюмов В. Л.

- о -

I. Общая характеристика работы Актуальность теми При яшуре главным фактором защиты организма является преимущественно специфический гуморальный иммунный ответ и основная роль* здесь принадлежит вируснейтралшзущкм антителам.

Гуморальные реакции имеют под собой клеточную основу. Антитела - это конечный результат иммунологического процесса, а короткозшвущие плазматические.клетки, синтезирующие антитела - лишь один из конечных этапов многоходовой клеточной дйфференцировки.

Клеточные факторы при яшуре обеспечиваете: борьбу с инфекцией на начальной стадии. Фагоцитарная реакция принимает участие в уничтожении инфицированных клеток. Индукция IgG, обусловленная воздействием анигена вируса ящура , является Т-клеточнозависимой.

Необходимость изучения клеточного иммунитета при яшуре продиктована тем, что зта проблема недостаточно раскрыта.

Не отработаны тесты по количественной и качественной оценке in vivo ;i in vitro противояюурного клеточного иммунного ответа. Мало известка и 'с зависимости индукции клеточного иммунитета от дезы иммукогена - антигена вируса яшура. о динамике Т-клегочного иммунного ответа, о сравнительной оценке противояцуркых вакцин при помощи реакций клеточного иммунитета и тд.

Боль цитотоксических клеток в противовирусном иммунитете установить in vivo возможно при помощи передачи состояния еенсибшшзированности от одного организма другому благодаря иммунологическя активным лимфоцитам.

Реакция ГЗТ, связанная с Т-еистемой, опосредует иммунитет при большинстве вирусных инфекций и свидетельствует о наличии клеточного иммунитета.

РБТЛ является первичной реакцией лимфоидной ткани и одним из начальных этапов иммунного ответа, что позволяет оценить готовность лимфоцитов к иммунному ответу при инфекции. его наиболее точный количественный тест оценки

- 3 -

клеточноопосредственного иммунного ответа.

Необходимость изучения условий, обеспечивающих раннюю защиту животных, делает актуальным исследование клеточного звена иммунитета.

Исследование клеточного иммунитета может способствовать усовершенствованию методов отбора подходящих вакцин, развитию эффективной вакцины против этой болезни.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы являлось --изучение in vivo и in vitro динамики поствакцинального клеточного иммунитета на антиген вируса яшура.

Для 'достижения этой цели были поставлены следующие задачи :

1. Изучить in vivo и in vitro развитие поствакцинального клеточноопосредованного иммунного ответа на введение антигена яшура А22 на лабораторных и естественно-восприимчивых животных.

2. Разработать научно-методическую документацию для оценки в ранние сроки клеточного иммунного ответа ка антиген вируса яшура.

3. Изучить влияние дозы антигена вируса яшура А22 на наступление раннего иммунного ответа у свиней.

• 4. Сравнительно оценить иммунный ответ животных на введение противояшурных вакцин при помощи реакций клеточного иммунитета.

Научная новизна. В результате проведенных исследований показано активное участие Т-клеточного звена в поствакцинальном противоящурном иммунитете.

Показана динамика Т-клеточного иммунного ответа после противояшурной вакцинации.

Разработана научно-методическая документация для оценки противояшурного клеточного иммунитета.

Установлено, что индукция раннего клеточного иммунного ответа на антиген вируса яшура А22 зависит от дозы иммуногена.

Сравнительно оценен Т-клеточный иммунный ответ на введение различных противояшурных вакцин.

Пршстическая значимость. В ранние сроки после иммунизации предлагается проводить оценку клеточного авена иммунного процесса, что даст возможность прогнозировать развитие иммунитета.

На основании проведенных исследований нами раэрабо-танны и утвередены директором ВНИИЗЖ 8.12. 93г. , методики оценки протизояшурного клеточного иммунного ответа .

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:

-результаты экспериментов по изучению пассивной передачи факторов противоящурного клеточного иммунитета.

-резлультаты экспериментов по исследованию развития ГЗТ после противояшурной иммунизации.

-результаты исследования специфической пролиферации лимфсцитсз лабораторных и с/х животных на антиген вируса яшура А22.

-результаты изучения влияния дозы пммуногена - антигена вируса яшура А22 на клеточный иммунный отзет у сви-

-результаты исследований клеточного иммунитета у свиней, индуцированного протиЕсяшуркымп вакцинами.

Апробация работы. Основные материалы диссертации до-лсданы на:

-международной кокф. "К новой стратегии борьбы с ящуром" (г. Владимир, 1991г.)

-заседаниях методической комиссии и Ученого совета ВНИИЗЖ 1993г.

-всероссийской научно-практ. кокф. (г. Владимир,1995г.)

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 4 научных работы.

Объем и структура работы Диссертация изложена на 125 страница:-: машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и практических предло;«эний, пллюст-- "Методика определения клеточного псстнакцнкального

противояшурного иммунитета в реакции гиперчувствительности замедленного типа",

- "Методика оценки специфической пролиферации лимфоцитов селезенки мышей и лимфоцитов периферической крови свиней на антиген вируса ящура".

Утверждены директором ВНШЗЖ от 8.12.93г.

Работа иллюстрирована 7 таблицами и 11 рисунками.

Список использованной литературы'включает 119 наименований, из них: 43 источника на русском языке и 75 работ зарубежных авторов. Б приложении представлены методики, акты комиссионных опытов.

2. Собственные исследования.

2.1. Материалы и методы.

Вирусы. В опытах использовали вирус ящура А22 N 550 индикаторный, адаптированный к мышам, вирус яшура типа С-Пол., адаптированный к мышам; расплодку штаммов получали на мышатах-сосунах.

Антигены. Применяли очищенный, концентрированный, инактивированный антиген вируса ящура А22, содержащий 146S компонента 200 мкг/мл; очищенный, концентрированный, инактивированный антиген вируса яшура типа С, содержащий 146S компонента 200 мкг/мл.

Вакцины. Использовали универсальную вакцину против вируса яшура А22 серии 83; универсальную вакцину против вируса яшура А22 серии 85; универсальную бивалентную вакцину против вируса яшура А22 и 0194 серии 282; эмульсионную вакцину против вируса япура А22 серии 158; эмульсионную вакцину против вируса яшура А22 серии 174; эмульсионную бивалентную Еакцину против вируса яшура А22 11 0194 серии 230.

Вакцины изготовлены заводом "Юрьевецветбиопрепарат", г. Владимир.

Подопытные животные. Для проведения адоптивного переноса и реакции бласт-трансформации лимфоцитов использо-

- б -

зали сингенных мышей линии BALB/c массой 15-16Г и 17-18г.

Для постановки ГЗТ использовали нелинейных мышей массой 17-18г.

Реакцию нейтрализации ставили на мышатах-сосунах 5-7 дневного возраста.

Подсвинки массой 20-25кг использовались при проведении реакции бласт-трансформации лимфоцитов. Растворы и питательные среды:

-1/15 и 1/50 U фосфатно-буферный раствор, рН 7,4-7,6 ,сциктилляционная жидкость ,митоген ФГА (Wellcome, Великобритания)- ,ЗСН]-тимидин - Сб ,0,2%-ный раствор трипанавого синего, питательная среда 199, питательная среда RPM1 1540, полная ростовая среда(ПРС):

1 1 i Конечная концентр. |

¡Питательная среда RPUI 1640,содер-|

|найдя бикарбонат натрия и НЕРЕЗ, а|

| такие: | -о •• |

| -2 меркаптоэтанол, ! 10 М I

I -пэнншлин | 100 Ед/мд |

I -стрептомицин ! 100 Ед/мл I

I -икакгизированную сыворотку |

I плода коровы j B-10J 1

( -L-глутаыин | i i 2X10 М | !

Титрование вируса.

'Титрование вируса проводили на взрослых мышах по общепринятой методике.

Реакция нейтрализации.

Реакции нейтрализации проводили на мышатах-сосунах 5-7 дневного зоэраста, используя двухкратное разведение сыворотки и постоянную (1000 LD 50/ 0,1мл) дозу гомологичного зируса ящура, адаптированного к мышатам-сосунам.

Игрение пассивной передачи факторов противоящурного

- у -

клеточного иммунитета.

Пассивную передачу факторов посгвакцинального клеточного иммунитета осуществляли по методике разработанной наш и утвержденной директором ВНИИЭЖ от 8.12.1993 г.

Гиперчувствительность замедленного типа.

Развитие ГЗТ при противоящурной иммунизации исследовали при помощи, разработанной нами методики. Утверждена директором ВНШЗЖ от 8.12.1993 г.

.Специфический проферативный ответ ' лимфоцитов.

Применяли методику специфической пролиферации лимфоцитов селезенки мышей и лимфоцитов периферической крови евшей на антиген вируса ящура. Утверждена директором ВНИИЗЖ от 8.12.1993г. '

Определяли лейкоформулу, ставили реакцию Е-РОК, ЕАС-РОК по общепринятым методикам.

Статистическая обработка.

При обработке полученных результатов использовали метод вариационно-статистического анализа с критерием достоверности по Стъюденту.

2.2. Результат исследований. 2.2.1. Исследование пассивной передачи факторов противая-щурного клеточного иммунитета.

Спленоциты мышей линии ВАЬВ/С выделяли через 2,4,6 и 7 дней после иммунизации противоящурными вакцинами и внутривенно вводили неиммунным реципиентам. Одновременно проводили заражение.

В результате проведении:«: исследований нами установлено, что образование иммунитета у нового хозяина путем адоптивного переноса лимфоцитов в количестве 1x1$, езя-тых на 2-7 день после иммунизация хозяина-донора противоящурными универсальными вакцинами, приводит к защите организма реципиента после введения (ЮОЬСбО) гомологичного вирулентного возбудителя. В тогке время, при применении обычной противоящурной вакцины, при одинаковых условиях, эффекта защиты реципиента не наблюдалось

(табл.1). Полученные результаты свидетельствуют о том, что для ранней индукции лимфощ1Тов-зффеь:1г0роз необходимо проводить иммунизацию универсальной прс-тиЕОншурной вакциной, при атом защитный эффект, обусловленный донорскими спленоцптами, формально наблюдается со второго дня после иммунизации и максимальную активность клетки-эффекторы проявляют к 6-7 дню.

Установлено, что лимфоциты, адоптивно перенесенные только от сингенных иммунных доноров, защищают реципиентов от ящура, что позволяет судить о том, что лимфоциты распознают антиген вируса яшуса одновременно с продуктом МНС.

Табл. 1 Нинамика клеточного иммунного ответа лимфоцитов-эффекторов мышей на антиген вируса ящура А22 írv vivo. Сравнительное изучение влияния различны:-: противоя-цуркых вакцин на цкдукшш неточного ¡шыунитета. ■

( : Ере мя ; .1 Г.П, Í .'i ¿UÜ|

;про2еде-; Г' ' Í . 3 i * s

;' НПЯ ЭДС- ; ; Í по отноше- i

; 5 А К Ц Г! Н А •ПТП2Н0Г0| j ^"C'VC í НИЮ К Н5ИМ-|

'перекосаj ! --.sypal У-УННКМ ЛНМ- |

¡ ¡(дни псс| ¡ ! социтам. j

i ¡ле взк- 1 ■ ъо i С ! i

1 ¡цпнацин)! i < ¡ i ! i

1 1 1 : 1 I О ! i - 1 р i i ! 4 í 5 i }

i 1 Универсальная ! 2 ! 3 ; | ! о I >0,05 |

¡эмульсионная вак- ! 4 i 20 í o ¡ <0,05 !

]шша протлЕ ящура | 6 ¡ 50 1 o 1 <0,05 !

! А22 серии '55 • i í i ! i i

1 1 1 1 1 1 1 2 1 1 з 1 1 1 4 1 i 1 5 | ] 1

1 1 |Универсальная | 2 1 1 о 1 о 1 1 1 1

|эмульсионная вак-1 4 1 17 1 о | <0,05 I

|цина против ящура| 6 | 40 1 о | <0,05 |

|А22 серии 83. | 1 1 7 1 57 1 а | <0,05-0,011 ! 1

1 1 ¡Универс. бив. вакц. | 2 1 1 о 1' о 1 1 1 1

¡против ящура ¿22 | 4 | 12 1 о | <0,05 |

|и 0194 серии 282. | 1 I 6 . | 37 1 1 0 | <0,05-0,011 1 1

) 1 |Эмульсионная вак-| 2 I 1 о 1 о 1 1 1 1

|цина против яшура| 4 1 о 1 о 1 1

|А22 серии 174 | 6 1 о 1 1 о 1 1 ( 1

|Эмульсионная вак-| 1 1 1 о 1 о I , 1 i

[щша против ящура | 9 i о 1 о 1 i

|А22 серии 153 | 4 1 о ■ 1 о ! I

1 1 6 1 о 1 о ! !

1 1 Г| ( 1 о 1 ! о I I

|Эмульсионная биаа| 1 1 о ' 1 о 1 1 1 1

|лентная вакцина | 4 1 о 1 о i i

против ашура А22 ( 6 1 о i о i ;

|и 0194 серии 290 1 г 1 1 -J ...... 1 !

2.2.2. Исследование развития ГЗТ при противоящурнай иммунизации на модели лабораторные животных.

Результаты развития ГЗТ представлены в табл. 2. Ножная реакция замедленного типа проявлялась через 24 ч. после введения подкожно сенсибилизированным ливоткым гомологичного антигена а дозе 1 мкг.

Табл. 2 Раззитие ГЗТ после иммунизации мышей универсальной вакциной против вируса яшура А22 серии 83.

1, 1 - 1 1 т " ■ - ■ - т ц

¡Дни пос- N п/п 1 1 . 1 II

||ле вак- живот-| Опыт | Контроль 1 Показатель ||

Ццинации II п НЫХ 1 1 1 (вес в мг) |(вес а мг) | I 1 (2) 1 а я

II II 1 || 1 2 I 1 3 1 1 1 4 | | | II 5 1 и

а II 1 1 119 1 1 | 117 | II ii

» 2 I 101 | 100 | II

ii 3 1 124 | 122 | II

I 4 114 1 ■ 115 | ii

ii 2 5 i 119 | 118 | 0,8* К

ii б 1 135 I 125 | - ii

и 3 1 162 ! 166 | ii

:1 3 | 103 I 111 | ii

!1 1 1 123 ( 1 1 126 | II

ч 1 109 | 110 | -1

ii 4 3 • i 110 ! Ю5 | 2,3^* ||

!1 4 i 107 1 ЮЗ | II

ii 5 1 1 92 1 90 | II

¡1 ii ¡1 1 123, 2 | 118,7| II

¡1 2 124, { 1 . 121,3| II

II 3 122, 1 I 115,0| ii

I б 4 111, 5 I 109,0| 5,3** ||

и 5 . 100. 1 36,0| II

II о i 131 I 129 | ii 11

з 7 | 143 1 "126 | II

II я 3 1 155 1 129 | ! г 1 1

II" — - II 1 1 1 2 1 ■ - г 1 3 | 1 4 I I 11 5 1

1 1 1 164 | 1 164 | II II

1 2 | 148 | 143 1 11

1 з I 140 | 137 | 1

! 4 1 195 I . 191 | 1

II 21 1 5 ! 185 | 162 | 4,7** ||

1 6 1 160 | 158 | II

1 7 1 160 ! 161 | ¡1

1 з I 143 • | 145 1 1

1 9 ! 135 | 129 | II

| 10 1 1 143 | 1 1 Г ! * 129 | 1 ( II II ¡|

* р>0,05 **р<0,0-5

У всех вакцинированных ¡¡шзагкых проявлялась ГЗТ. ГЗТ индуцировалась с 4-го дня после вакцинации при рестиму-ляции тем аэ ■антигеном. Показатель ГЗТ (д) на 4-ый день после вакцинации равнялся 2,3, на 5-ой - 5,3 и на 21-ый день - 4,7. Установлено, что с 4-го по 21-й дни исследований результаты соответствующих средних значений (2) были статистически достоверны при р< 0,05). При

этом фактически пик интенсивности реакции приходился на б-й день после вакцинации, хотя взаимное сопоставление оценок по дням (при р<0,05) не продемонстрировало существенны:": различий.

Гистологические исследования показали периваскулярные и интерстициальные инфильтраты, состоящие из лимфоцитов, моноцитов и макрофагов, типичные для ГЗТ.

2.2. 3 Пролифэративный ответ интактньи лимфоцитов мышей на антиген вируса ящура А22.

3 результате проведанных исследований нами установле-

но, что оптимальный пролиферативный ответ клеток был вызван очищенным антигеном вируса яшура А22 в концентрации от 0,01 до Imkt/мл. Концентрации, превышающие установленные оптимальные пределы, оказывали ингибирущее действие. Более низкие концентрации антигена были не достаточны для того, чтобы вызвать пролиферативный ответ лимфоцитов.

Интактные лимфоциты отвечают пролиферацией на антиген вируса ящура достоверно (р<0,05) к седьмому'дню культивирования in vitro (рис.1).

Концентрация антигена Рис. 1 Кривая "доза-ответ" иктактных лимфоцитов мышей на антиген вируса ящгра А22. Концентрацш клеток в лунке 5x10"^ Время культивирования -7 суток. *р > 0,05 **р < 0,05.

2.2.4 Специфический пролиферахивный ответ лимфоцитов кершей на антиген вируса ящура А22.

Исследования показали, что лимфоциты зыделенные из иммунных мышей через 7 дней после вакцинации животных, способны специфически отвечать in vitro на очищенный антиген вируса яшура А22 в течение 3-х суток культивирова-ния(рис. 2).

I

** 3-|

1 1 I

I 1

I

Индекс | стимуляции| I

1-!-.-!-!---

0,001 0.01 0,1 1 ЮКонцентр. антигена

Рис.2 Пролиферативный атзет иммунных лимфоцитов мышей на антиген вируса яшура А22. **р < 0,05.

Степень пролиферативного ответа зависима от концентрации антигена. Оптимальная концентрация антигена вируса яшура А22 находилась в пределах от 0,01 до 1 мкг/'мл, что подтвередает проведенные нами исследования на штатных лимфоцитах.

2.2. 5 Влияние дозы иммуногена-антагена вируса ящура А22 на клеточный иммунный ответ у свиней.

Исследования проводили на подсвинках, которым вводили

противояшурные эмульсионные препараты с различным содержанием антигена в дозе (1,25,50 и 100 мкг.).

Клеточный иммунитет определяли через 2,4,6,10 и 21 день после иммунизации.

Получены (фактические результаты (Рис.4), свидетельствующие о том, что только лимфоциты животных, вакцинированных дозой 25 мкг(2гр.) антигена,отвечали на антиген in vitro уже на 4-й день после вакцинации. Лимфоциты животных, вакцинированных дозами 1,50,100 мкг (1,3 и 4 гр.) антигена, отвечали пролиферацией с 6-го деня после вакцинации. Степень иммунного ответа лимфоцитов на 6-й и последующие (10 и .21) дни после вакцинации была выше у второй группы, по сравнению с другими. По уровню убывания величины пролиферативного ответа лимфоцитов,за группой 2-й шла 3-я, 4-я и 1-я. Результаты по 2-й группе значительно (р <0,05) отличались от 1-й и 4-й группы на 21день после вакцинации. Статистически значимых различий между результатами по 2-й и 3-й группе на 21 день после' вакцинации не было.

2 4 6 10 21

Дни после вакцинации Рис.4 Динамика пролиферативного ответа иммунных лим-фоцитоз подсвинков на антиген вируса яшура А22. х - 1 мкг,* - 25 мкг,+ - 50 мкг,о - 100 мкг.

В ходе изучения влияния дозы иммуногена - антигена вируса яшура А22 - на клеточный иммунный ответ у свиней также использовали метод спонтанного образования розеток с эритроцитами барана (Е-РОК), метод ЕАС-РОК, определяли лейкоцитарную формулу. Как дополнение, использовали РН для определения тигра вируснейтрализующих антител. Комплекс методов позволил выявить повышение функциональной активности и количественных показателей Т-и В-систем у привитых в первые шесть дней после иммунизации, свидетельствующих об иммунологической активности исследованных препаратов.

2. 2.6 Клеточный иммунитет у свиней, индуцированный про-тивоящурнши вакцинами.

Из рис.5 следует,что после иммунизации подсвинкоз универсальной бивалентной вакциной против яшура А22 и 0194 серии 282 специфическая пролиферация лимфоцитов отмечалась, начиная с 4-го дня. Индекс стимуляции на 4, 6, 10 и 21 день соответственно составлял:

имп/мин в культуре с антигеном в. я. А22

1 • Я. 9 О. О Q. Ъ ЯС---------------------------------------

< и; -»■-'> >-» «А 1

имп/мин з культуре без антигена имп/мин в культуре с антигеном в.я. А22

1,4;1,9;2,1;2,0(--------------------------------------)

имп/мин в культуре с антигеном в. я. С Пролиферативный ответ лимфоцитов подсвинкоз, вакцинированных эмульсионной бивалентной вакциной против яшура А£2 и 0194 серии 290, отмечался с б-го дня. Индекс стимуляции на 8,10,21 день соответственно составлял:

имп/мин в культуре с антигеном в. я. А22

1,5;1,4;1,4(------------------------------------------1

имп/мин з культуре без антигена имп/мин в культуре с антигеном в. я. А22

1,3;1,6;1,4(-----------------------------------------)

имп/мин в культуре с антигеном в. я. С

2 4 5 а 10 21 2 4 6 8 10

Дни после вакцинации Дни после вакцинации

Рис. 11

Пролиферативный ответ лим- Пралиферативный ответ

фоцитов на антиген 3. Я. А22 лимфоцитов на антиген В. Я.

периферической крови падсвин- А22 периферической крови

коз, иммукизированных уни- подсвинков, иммукизирован-

зерсальной бивалентной вак- ных эмульсионной бивалент-

циной против яшура А22 и 0194 ной вакциной против яшура

серии 232. А22 и 0194 серии 290. имп/мин в культуре с антигеном в. я. А22

имп/мин в культуре без антигена имп/мзш в культуре с антигеном в. л. А22

импЛзга в культуре с антигеном з. я. типа С Прслифератизный о-ГЕет лимфоцитов, культавираванных с антигеном вируса яшура типа 0, существенно не отличался

от пролиферации лимфоцитов, культивированных без антигена.

Из результатов эксперимента видно, что клеточноо-посредованный противоящурный иммуннный ответ наступает раньше и функциональная активность лимфоцитов выше у животных, иммунизированных универсальной противоящурной вакциной.

Выводы.

1. Клеточное звено иммунитета является неотъемлемой частью иммунного ответа на-антиген вируса яшура у лабораторных и естественновосприимчивых животных в ранний период после вакцинации.

2. Установлено, что цитотоксические лимфоциты, полученные от животных, иммунизированных универсальной противоящурной вакциной, способны in vivo уничтожать пораженные вирусом яшура клетки и препятствовать гибели животных.

3. Гиперчувствптельность замедленного типа развивается у лабораторных животных после противоящурной иммунизации при рестимуляции гомологичным антигеном.

4. Выявлена специфическая пролиферация лимфоцитов на антиген вируса яшура А22. Пролиферативная активность зависит от концентрации антигена.

5. Клеточный иммунный ответ наступает раньше и функци-онадькая активность лимфоцитов выше у животных, привиты:-: универсальной противоящурной вакциной.

Практические предложения.

В ранние сроки после иммунизации предлагается оценивать клеточное звено противоящурного иммунного процесса, что дает возможность прогнозировать развитие иммунитета.

2. Рекомендуется " Методика определения клеточного поствакцинального противоящурного иммунитета в реакции пшерчуствигельности замедленного типа. " Утвержд. дир.

ЕНЖЗЖ от 8.12.93г.

3. Предлагается"Методика оценки специфической пролиферации лимфоцитов селезенки мышей и лимфоцитов перифери-ческой-крови свиней на антиген•вируса яиура. "Утвержд. дир. ВНИИЗЖ от 8.12.93г.

.4. Рекомендуется "Методика пассивной передачи поствак-цинаяьного противоящурного клеточного иммунитета." Утвержд. дир. ВНИИЗЖ от 8.12.93г.

Список научных робот, опубликованных по материалам диссертации

1. Толокнов А. С*, Давыдов И. В., Кожаева Г. И., Михали-шин В. а Изучение иммунных реакций у мышей,, привитых противоащурной вакциной нового поколения. К новой стратегии борьбы с яшуром.- Мэвдунар. конф., г. Владимир, 1995.

2. Толокнов А.. С., Давыдов И. В. Изучение пассивной передачи протквояшурного клеточного иммунитета. Вирусные болезни с/х животных: Тезиы доклздоз всероссийской научно-практической конференции, г, Владимир, 1995.

3. Толокнов А. С. , Давыдов И. В.' Оценка клеточного иммунитета з реакции ГЗТ. Вирусные болезни с/х животных: Тезисы докладов Всероссийской научно-практической конференции, г. Вдадйшр, 1995.

4. Толокноз А. С., Давыдов И. Б. Оценка специфической пролиферации лимфоцитов периферической крови свиней на антиген зируса ящура. Вирусные болезни с/х животных: Тезисы докладов Всероссийской научно-практической конференции,^ Владимир, 1995.

« л..-' -V ■

отпечатано на полиграфической базе отдела патентных исследований и научной информации ВНИКЗЖ тираж 75 экз.