Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Изыскания стимуляторов для повышения иммуногенности противобруцеллезных вакцин

РОССИЙСКАЯ АК.АДЕЛ1ИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК СИБИРСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ Институт ветеринарной медицины Омского Государственного Аграрного Университета

На правах рукописи РГБ ОД УДК «19:612.07.616.98:579.841.936 + 615.371

1 3 "»Я ИВАНОВА

Ольга Николаевна

ИЗЫСКАНИЕ СТИМУЛЯТОРОВ для ПОВЫШЕНИЯ ИЛШУНОГЕННОСТИ ПРОТИВОБРУЦЕЛЛЕЗНЫХ ВАКЦИН

18.00.03. — ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология, иммунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

ОМСК 1996

работа выполнена в лаборатории специфической профилактики бруг.еллоза крупного рогатого окота Всероссийского научно-исследовательского института бруцеллёза и туберкулёза животных.

Научный руководитель - кандидат ветеринарных наук

А.П.Красиков

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук,

профессор В.М.Чекишев

доктор ветеринарных наук, доцент И.Г.Трофимов

Ведущее учреждение: Казанский ветеринарный институт

Защита состоится " " .г 1996 г. в /О ч.

на заседании диссертационного совета К. 120.46.01 при Институте ветеринарной медицины Омского аграрного университета по адресу: 6Ш)07, г.Оиск-7, ул.Октябрьская, 92

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института ветеринарной медицины Омского аграрного университета.

Автореферат разослан " // " & /./.■¿■¿у- 1996 г.

Учёный секретарь диссертационного совета, кандидат ветеринарных наук

Б.М.Барабанов

I. ОВЦАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБО'Ш

Актуальность проблемы. Многолетний практический опыт показал, что борьба с бруцеллёзом в хозяйствах нашей страны баз активной специфической профилактики малоэффективна. На сегодняшний день на вооружении науки имеется значительное количество вакцин, но до сих пор нет вполне удовлетворительного метода вакцинации прошв бруцеллеза. К бруцеллёзу сложно создать стойкий иммунитет. Существующие вакцины формируют иммунную защиту, но она на столь прочна, и большая доза возбудителя может вызвать заражение. "Нестерильный" характер иммунитета требует постоянной ревакцинации, чтобы поддержать иммунитет на ■ протяжении всей эксплуатации животных.

Для создания напряжённого перманентного иммунитета при бруцеллезе крупного рогатого скота разработаны схемы примене-. ния вакцин из штаммов В.оЛор-Ш 19 и 62, а также укороченные сроки ревакцинации коров и уменьшенные дозы вакцин. G этой же целью, а также для снятия проблемы поствакцинальной диагностики ведутся поиски способов введения вакцин - внутрикожного, конъвнктавального и других.

Бместе с тем, многократные ревакцинации животных приводят к иммунодепрессиЕним состояниям, вызывают нежелательную сенсибилизацию организма и сказываются на аллергизации людей, употребляющих в пищу продукты животноводства.

В настоящее время появилось немало сообщений об испытании различных факторов, активно стимулирующих иммунобиологические реакции организма (Алфёрова Е.М. с соавт. ,1982; Петров Р.Б. с соавт., 1982; Хаитов P.M. с соавт. ,1962 и др.).

Некоторые исследователи изучают возможность применения на иммукостимуляторной основе инактивированных (Драновская Б. А. с соавт., 1962; Игнатов П.Е. с соавт., 1983; Красиков А.П. с соавт., 1989; Бронников B.C. с соавт., 1991) и живых (Переходо-ва С.К. с соавт., 1988; Красиков A.ib с соавт. ,1989-1992; ¿¿fc-hrff IМ., Confer 1990) противобруцеллёзных вакцин.

Иммуностимуляторы необходимы для инагглютиноганных, инактивированных и химических вакцин, формирующих иммунитет недостаточной напряженности. Особенно актуально применение этих вакцин на неиммунном поголовье, чтобы предупредить массовне

ч -

аборты при иммунизации вакциной из штамма 82.

Достижения иммунофармакологии последних лет позволяют по-новому подойти к проблеме неспецифической иммуностимуля-ции. Вияснилось, что наряду о активацией мононуклеарной фагоцитирующей системы, с которой в большинстве случаев связано повышение неспецифической антиинфекционной резистентности организма, различные стимуляторы в неодинаковой степени влияют на разные компоненты и этапы иммунного ответа (макрофаги, В-, Т-клетки и их субпопуляции, естественные киллеры, процессы . миграции и кооперации и др.), что создаёт принципиальную возможность дифференцированного их применения, ориентированного на конкретнче клетки-мишени (Лазарева Д.Н., Алёхин Е.К.,1985).

Стимуляция макрофагов и Т-клеток особенно важна для повышения резистентности к инфекциям, возбудители которых способны к внутриклеточному паразита ровашю. Б их число входит и бруцеллёз. Создание высокой специфической защиты животных к бруцеллёзу является одной из важных проблем в ветеринарии.

Цель работы. Изыскать стимуляторы для повышения иммуио-генности противобруцеллёзных вакцин.

Задачи исследования:

1. Изыскать, изучить иммуностимуляторы и отобрать наиболее аффективные при бруцеллёзе.

2. Апробировать стимуляторы на лабораторных животных.

3. Испытать препараты на крупном рогатом скоте.

Установить возможность использования в производственных условиях, для изучения иммунитета, вместо заражающего агента вакцины из штамма 82.

Научная новизна. Впервые испытан при бруцеллёзе новый синтетический полимер ковйдон, который повышает устойчивость организме к заражению. Изучен механизм действия иммуностимулятора при сочетанном введении его с вакциной. Установлена взаимосвязь клеточного и гуморального иммунитета. На морских свинках и крупном рогатом скоте показана возможность использования вакцины из штамма 82 для "заражения" животных при изучении иммунитета в производственных условиях.

Практическая значимость. Разработан новый способ иммунопрофилактики, при котором происходит усиление клеточных факторов защиты без увеличения сроков сохранения в организме гу-

моральных антител, что не осложняет поствакцинальную диагностику бруцеллёза. Высокий уровень иммунитета позволит увеличить интервалы между ревакцинациями, применить малые дозы Еакцин. Стимуляторы могут оказаться весьма ценными для экстренной индукции неспецифической резистентности в эпизоотически опасной ситуации. Всё это может ускорить сроки оздоровления хозяйств от инфекции, снизить заболеваемость бруцеллёзом среди людей, откроются перспективы применения инактивирован-нах. химических и инагглютиногенных вакцин на иммуностимуля-ториой основе.

Апробация работы. Материалы исследований доложены на координационном совещании по проблеме бруцеллёза и туберкулёза (Новосибирск, 1992 г.); координационном совещании по бруцеллёзу и туберкулёзу животных (Омск,1994 г.); на учёном совете ВНИИБТ1 (199'+ г.).

Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 6 научных работ.

Объём и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 14В страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, результатов, обсувдения, заключения, выводов, практических предложений, библиографии и приложения. Работа содержит 14 таблиц, 3 рисунка и I фотографию. Список цитируемой литература содержит библиографические сведения о 191 отечественной и 55 иностранных публикациях.

'2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы

Работа выполнена в лаборатории специфической профилактики бруцеллёза ЬНЯИЁТ! в 1992-1994 годах.

Проведено 3 опыта на морских свинках (75 голов), опыт на телятах 3-5 месячного возраста (15 голов) в условиях экспериментальной базы ВНЙЙБ11, производственный опит в колхозе им.Кирова Качирского района Павлодарской области на откормочных быках 14-15 месячного возраста (40 голов) и производственные испытания в 2-х хозяйствах Октябрьского района Челя-

- б -

бинской облает;:.

Для иммунизации применяли живые противобруцеллёзние вакцины из штаммов 16/'ч, 19 и 62 В.а&огЪМ, Двухсуточные культуры штаммов перед введением исследовали иа количество живых клеток и степень диссоциация.

В сочетании о вакцинами вводили различные иммуностимуляторы: нилверм, левамизол, поливинилпирролидон (11ВП) и ковидон.

Для заражения применяли вирулентный штамм 54 Ъ.а^огчм, а также, в качестве заражающего, вакцинный штамм 62 В ЬШ>.

Гуморальные факторы иммунитета изучали в реакции агглютинации (РА), реакции связывания комплемента (РСК), реакции непрямой гомагглютинации (РИГА-В. и РНГА-З), реакции непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ-Й. и РНйФ-5), а клеточные в опсоно-фагоцитарной реакции (0$Р), реакции иммунофлюоресценции (РИФ), цитотоксическом теста (ЦТТ) и в реакции торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ).

Эффективность иммуностимуляторов определяли по устойчивости обработанных животных к заражению после сочетанного введения с вакциной, в сравнении с показателями иммунитета у животных, вакцинированных без стимулятора и плацебо-группой, которая служила контролем вакцины и испытуемого препарата.

Бактериологическое исследование материала от животных посче убоя проводили путам посева на пробирки с МППА, эритрит агаром и МП11Б. Выделенные культуры оценивали по характеру и скорости роста в аэробных условиях, изучали их антигенную структуру по способности агглютинироваться 5- й Е-сыво-ротками и трипафлавином, а также но окраске колоний методом Уайт-Вилсона.

Общий объём исследований представлен в таблице I.

Цифровые данные обрабатывали методом математической статистики с использованием таблицы Стьюдента.

2.2. Изыскание иммуностимуляторов, эффективных при бруцеллезе

Иеспецифическая иммуностимуляция с помощью определённых

Таблица I

Ос-щий объем выполненных исследований

Проведено исследований Количество

Серологических, всего 5618

в т.ч. сывороток крупного рогатого скота 4803

морских свинок 815

Бактериологических, всего 130

в т.ч. патматериал от крупного рогатого скота 55

морских свинок 75

средств вовсе не означает, что препарата одинаково эффективны при заболеваниях, вызванных разными возбудителями. Учитывая, что при бруцеллёзе формирование иммунитета опосредованно преимущественно на уровне Т-клеток и макрофагов, выбор препаратов определялся их способностью активировать именно эти звенья иммунной системы. Для чего были выбраны: нилверм, левамизол, ШП и ковидон.

2.3. Изучение действия стимуляторов на иммунитет у морских свинок, создаваемый вакциной из штамма 16/4

Известно, что любой материал, облагавший стимулирующей активностью, в' определённых условиях может служить и иммуио-депрессантом. Поэтому, а также в связи с тем, что препарат-ковидон с протавобруцеллезными вакцинами ранее не испнтцвал-ся, первым шагом к его применении в качестве иммуностимулятора било определение оптимальной стимулирувдей дозы, обладающей иммуностимулирующими свойствами. Полученные на морских свинках данные позволили выбрать дозу 3 мг/кг массы животного, как наиболее эффективную при сочетанием введении препарата с вакциной из штамма 19.

Для опыта по изучению действия стимуляторов на иммунитет, создаваемый вакциной'из штамма 16/4, было отобрано 30 морских свинок массой 300-350 г., разделённых на б групп по 5 голов в каждой.

Опытные группы вакцинировали 2-суточной культурой штамма 16 А в дозе 5 млрд.м.к. в сочетании с препаратами: нилвермом (5 мг/кг массы), ПБП-11700 (75 мг/кг),^ ковидоном (3 мг/кг). Одной группе инокулировали только штамм 16 А, две контрольные группы антигонной стимуляции не подвергались (контроль вакцины и ковидона).

Через 60 дней после вакцинации, свинок заразили вирулентной культурой штамма 5Ji в дозе 100 м.к.

Сыворотку крови исследовали в РНГА-R, РНГА-S и РСК на 7, 14, 21, 28 и 60-й дни после иммунизации, а также на 7-й и 26-й дни после заражения с последующим бактериологическим контролем.

При этом установлено, что стимуляторы вызывают кратковременную активизацию гуморальных факторов. К 60 дню антитела исчезают.

После инокуляции вирулентного штамма иммунологические реакции выражены уже на '7-й день в группах, получивших вакцину, при этом они проходили по типу вторичного иммунного ответа. Б контрольных группах реакции отмечены только на 14-й день.

Посевы для бактериологического исследования делали из 10 объектов от каждого животного. Просмотр вели в течение месяца. Культуры выделены во всех группах (таСл. 2).

Таблица 2

Степень защиты морских свинок после заражения

Группа Кол-во Заразилось Выделено ИИ % иммун-

голов всего генер. культур ных

I. Шт.. 16 А 3 2 0 9 30,0 33

2. шт. 16 А +нил верм 5 5 1 26 '32,0 ' 0

З.шт. IóA+ИВИ Ч 2 0 6 15.0 50

4.1лТ.1бА+КОВИДОН Ч I 0 3 7.5 75

5.Ковидон ч Ч 3 30 78,0 0

6.Контроль ь Ь 5 ■ чь 90,0 0

Вакцина создала иммунитет у "i'5% животных, тогда как в 2-х контрольных (не вакцинированных) и в группе, иммунизиро-ьанных с нилвермом, иммунных животных нет, но имеются отличия в обсеменэнности органов бруцеллами (она ниже во 2-й группе в 1,7 раза и в 5-й а 1,1 раза чем в 6-й группе). Наибольший процент иммунных животных - 75 - в группе, где с вакциной применялся ковидон. Устойчивыми оказались и 50% морских свинок из группы, привитых с ПБП.

Полученные данные свидетельствуют о том, что испытанные препараты достаточно аффективны, за исключением нилверма. который в данном опыте не повысил иммуногенность вакцины.

2.4. Определение иммуностимулирующей активности ковидона при экспериментальном бруцеллёзе крупного рогатого скота

Как препарат, показавший наибольшую эффективность при сочетанном введении с инагглютиногенной вакциной на лабораторных животных, ковидон был выбран для испытания в эксперименте на крупном рогатом скоте.

Из телят 3-5-мееячного возраста, которые содержались в изоляторе экспериментальной базы ВНИИБИ по принципу аналогов сформировали 4 группы. Животных иммунизировали вакциной из штамма 62 в дозе 100 млрд.м.к.

Схема опыта: I группа (4 головы) - вакцина, 2 группа (4 головы) - вакцина с ковидоном, 3-м головам 3-й группы инъецировали только ковидон, 4 головы 4-й группы - интактные.

Динамику иммунного ответа изучали на 7, 14, 21, 28, 60, 150 и 180-й дни по РА, РСК, РИГА-В, РНГА-5. РНИФ-R и РНИФ-5.

Заражали телят через 6 месяцев после введения препаратов штаммом 54. Учитывая высокую резистентность молодняка крупного рогатого.скота к заражению, вводили высокую инфицирующую дозу - 250 млн.м.к. (200 млн.м.к. подкожно и 50 млн. м.к. конъюнктивально).

Сыворотку крови исследовали еженедельно. Через 40 дней после заражения животных убили и провели бактериологическое исследование патматериала. Результаты бактериологического исследования представлены в таблице 3.

Таблица 3

Показатели иммунитета у телят

Группа Кол-во Заразилось Выделено Ш % иммунных

голов голов культур животных

1.ШТ.82 4 2 5 5,65 50

2.ЩТ.82+К0ВИД0Н 4 I 4 4,00 75

3.Ковидон 3 3 14 15,30 0

4. Контроль 4 4 30 33,60 0

Посевы делали из 20 объектов от каждого животного. Культуры бруцелл выделены во всех группах. Вакцина создала иммунитет у 50$ животных, а в группе, иммунизированных с ковидо-ном, противостояли заражению 1Ъ% животных. Контрольные телята и получившие ковидон без вакцины заразились все, но в стимулированной группе обсеменённость органов бруцаллами была в 2,2 раза ниже (ковидон вводили и после заражения: трижды с недельным интервалом).

Было установлено, что повышение напряжённости иммунитета сопровождалось кратковременным, не осложняющим диагностику, увеличением' уровня гуморальных антител.

На 7-и день после вакцинации в сыворотке крови регистрировались агглютинины. Причём, у вакцинированных с ковидо-ном, их титр в 2, 5 раза превышал уровень в группе, иммунизированных без стимулятора (500 и 200 МБ). Через месяц антитела в диагностических титрах в обеих группах не. обнаруживались.

'.Комгшементсвязываощие антитела появились к 21-му дно у 50$ животных (титр во 2-й группе был в 1,5 раза выше чем в 1-й: 15 и 10), а к б0--му дню отсутствовали.

Гемагглютинины в высоких титрах отмечены уже на 7~й день исследования, однако в 1-й группе титр Я-антител в 1,8 раза ниже чем во 2-й: (1000. и 1800), а 5-антител в 2 раза виде (900 и 450). Наивысший уровень гемагглютмнинов отмечался на 14-И день: I группа - 3200 и 2 группа - 2400;

РНИФ с Л-антигеном была положительной у всех животных, начиная с 7-го дня исследования, а с 5-аитигсном у 25* телят. При этом флюоресцирующие антитела обнаруживались, в течение

всего периода исследования. Существенных различий в татрах по 1-ой и 2-ой группам не отмечено.

Клеточные факторы иммунитета изучали с помощью 0$Р и РВД (А-клетки), РИФ СВ-клеткк), ЦТТ (Т-клетки). Рез^тата исследования представлены в таблице 4.

Таблица 4

Показатели клеточных факторов иммунитета у крупного рогатого скота (М £ м)

Клетки

Группа Перед заражением После заражения Р

I 2 3 4 5

1.ШТ.82 64,05 ± 2,05 73,75 0,25 0,003

3,92 ± 0,18 4.86 + 0,14 0,005

Т- 2.ШТ.82+КОВИДОН 66,07 ± 2,03 75,80 0,80 0,004

лимфо- 3,80 ± 0,20 5,26 + 0,34 0,010

циты З.Ковидон 62,25 ± 1,45 70,88 + 1,20 0,010

3,56 ± 0,44' 4,56 + 0,48 0,210

Контроль 65,60 ± 0, 50 68,66 + 0.44 0,010

3,72 £ 0,24 4,26 + 0,42 0,270

1.ШТ.82 21,60 ± 1,20 29,50 4; 0,60 0,001

1,90 ± 0, 50 3,00 + 0,20 0,090

В- 2.Шт.62+ковидон 19, 50 ± 2,50 32,60 + 0,40 0,002

лимфо- 1,70 1 0, 30 3,80 + 0,20 0,001

циты З.Ковидон 21,20 ± 1,40 26,70 + 0, 50 0,022

2,10 £ 0,20 2,80 + 0,10 ,0,030

4.Контроль • 18,90 ± 2,10 24,01 ± 0,80 О.СЙО

1,60 ± 0,20 2,90 + оло 0,001

1.ШТ.82 6,00 ± 1,26 19.00 + 2,82 0,005

0,94 ± 0,03 0,81 + 0,12 < 0,310

А- 2.ШТ.82+КОВИДОН 4, СО ± 0,69 21,00 + М9 0,008

(РТМЛ) 0,96 £ 0,12 0,79 0,03 0,210

П1МЛ З.Ковидон 5,00 ± 0,78 12,00 + 0,49 ¡3,001

ЙМЛ 0,95 ± 0,43 0,86 4- 0,15 0,580

4. Контроль 4,00 ± 1,27 18,00 + 4Д9 0,022

0,96 ± 0,04 0,82 + 0,12 0,310

Продолжение таблицы 4

X 2 3 4 5

I.iiiT.62 ék¡¡ 64,0 + 14,40 32.0 + 3,08 0,070

ФП 24,5 + 5, Об 8,5 + L20 0,020

$ч 14,3 + 0,52 3,3 + 0,42 0,001

§и 22,4 + 0,67 9,5 + 0,09 0,001

2.ШТ.62+К0ВИД0Н 72,0 + 5,26 52,0 + 4,30 0,030

Фаго- ФИ 32,5 + 3,21 13,0 + 1,02 0,001

цитар- • и 13,9 0,16 7,0 + 0,21 0,014

HU6 ФИ 19,2 + 0.37 8,0 + 0,26 0,001

З.Коьидон ik% 56,0 + 4,80 24,0 + 2,61 0,100

(04Р) ФП 8,3 + 1,21 6,5 + 1,13 0,920

ФЧ 3,2 + 0,27 3,4 + 0,01 0,460

Фй 5,6 + 0,43 14,1 + 0,62 0,001

4. Контроль ФА> ¿2,0 + 11,60 32,0 + 2,90 0,140

ФП 6,6 + 0,17 II. 5 + 0, У8 0,020

ФЧ 4,1 + 1,00 6,0 1,30 0,210

ФИ 72,0 + 1,27 11,5 + I, 31 0,001

Примечание: числитель - относительное содержание Т- и

В-клеток (%) знаменатель - абсолютное содержание Т- и

Б-клеток (Г/л) ФА - фагоцитарная активность ФП - фагоцитарный показатель ФЧ - фагоцитарное число ■ - фагоцитарный индекс

основании результатов исследования нами установлено, чтэ в механизме Чрвцшения напряжённости противобруцеллёзно-го иммунитета учаспуют А-, В- и Т-клетки. При этом, уровень Т- и В-клаток noca р. заряжения увеличивается во всех группах, но иаиболва »мрачен в группе, привитых с ковидояом.

. ВаюДОИ роль в кооперации Т- и В-клеток играют А-клетки, которые Вырабатывают медиаторы, улавливаемые в РТМЛ. Причём наибоЛьш&й функциональная активность лейкоцитов отмечается

опять же в группе, привитых с иммуностимулятором.

После вторичного контакта с бруцелл ами реакции фагоцитоза, по сравнению с первичным контактом, снижаются.

Таким образом, препарат ковидон стимулирует T-, b я А-клетки иммунитета, в результате чего усиливается элиминация вирулентных бруцелл из организма животных, при этом обсеме-нённость органов и тканей бруцеллами уменьшается в 2 раза по сравнению с контрольной группой.

Введение ковидона с вакциной усиливает активацию иммуно-компетентных клеток, что повышает напряжённость иммунитета, создаваемого вакциной из штамма 82 на 25%.

2.5. Опыт на морских свинках по изучению возможности использования вакцинного штамма 82 в качестве заражающего агента

При проведении опытов в условиях производства'для определения иммунитета нельзя использовать вирулентные штаммы бруцелл, повтому первым этапом исследования было изучение возможности применения вакцинного штамма 82 вместо вирулентного для изучения напряжённости иммунитета, созданного вакциной из штамма 19 у морских свинок.

Опыт провели на 20 морских свинках. Животным 1-й и 2-й групп инокулировали вакцину из штамма 19 в доЗе I млрд.м.к. подкожно, свинок 3-й и 4-й групп (контроль) не вакцинировали.

Через 2 месяца животных 1-й и 3-й групп заразили виру--лентным штаммом 54 (ICO м.к. подкожно), 2-Я и 4-Й группам ввели подкожно по 3 млрд.м.к. вакцинного штамма 82.

По данным серологических исследований существенных различий по высоте титров и количеству реагирующих животных не выявлено.

Напряжённость иммунитета изучили через 30 дней после инокуляции штаммов 54 и 82 по степени их элиминации. Согласно результатам бактериологического исследования Натматерйала установлено, что степень иммунной защиты в 1-й и 2-й Группах была одинаковой и составила 60% при индексе йнфицйрованности (ИИ) существенно не различающемся (соответственно 12 й 16); в 3-й и 4-й группах иммунных животных не было, но обсеменен-

_ -

ность органов бруцеллами в 4-Й группе несколько выше чем в 3-й (табл. 5).

Таблица 5

Показатели напряжённости иммунитета у морских свинок после инокуляции вирулентной культуры штамма 54 и вакцины из штамма 82

Группа Кол-во Заражающий Заразилось Выделено ИИ % иммун-голов штамм всего геиер.культур них

голов жив-ных

1.ШТ.19 Ь 54 2 2 8 16 60 .

2.шт.19 5. 82 2 0 б 12 60

3.<3?из.р-р 5 54 5 5 20 40 0

4Л'из.р~р '5 82 5 4 15 ■ 30 0

Таким образом, в опыте на морских свинках не установлено существенных различий в результатах при использовании в качестве заражающего агента вместо вирулентного штамма 54 вакцинного штамма 82.

2.6. Влияние стимуляторов на-имму ног енн ость противобруцеллёзнои вакцины из штамма 19

Контролируемый опыт проводился в колхозе им.Кирова Ка-чирского района Павлодарской области.

Из числа закупленных у населения быков для откорма в возрасте 1?1-15 месяцев сформировали 3 опытных п I контрольную группы, животных по 10 голов в каждой. Ранее оыки против бруцеллёза не прививались.

Животных иммунизировали вакциной из штамма 19 в дозе 80 млрд.м.к. согласно схемы опыта со стимуляторами в иммуномо-дулирующих дозах, определённых в экспериментах, и без них. Схема опыта:

1-я группа - иммунизировали только вакциной

2-я группа - штамм 19 с левамизолом

3-я группа - штамм 19 с ковидоном

4-я группа - интактные животные (контроль)

Серологические исследования проводили на 15, 30 и 60-н дни после вакцинации о помощью РА, РСК, РИГА и ОФР.

Через 60 дней после прививки вакциной из штамма ГУ, используя полученные данные на морских свинках, животным ввели вакцину из штамма 62 в дозе 200 млрд.м.к. (в качестве заражающего агента).

Напряжённость иммунитета изучили, через 30 дней носче инокуляции штамма 82 по степени его элиминации согласно результатам бактериологических исследований патматериала, взятого после убоя быков на Павлодарском мясокомбинате.

После вакцинации штаммом 19 наиболее выражены гуморальные факторы иммунитета на 15-й день. Титр антител в 1-й группе 240 НЕ (РА), 200 (РИГА); во 2-й группе чЬО МБ (РА), 400 (РИГА) й в 3-й группе 520 МЕ (РА), 480 (РНГА).

На ЗОй день титр агглютининов снизился в 1-й группе до 80 МЕ, гемагглитининов до 180, во 2-й группе стал 160 МЕ и 380, а в 3-й группе составил 180 МЕ и 400.

На 60-й день количественные показатели серологических реакций снизились в РА до 55 НЕ (I группа), 50 МБ (2-я и 3-я группы) и в РНГА соответственно до 120, 125 й 212,5.

Вместе с тем, реакция фагоцитоза выражена в более поздние сроки - 30-60-Й дни после вакцинации.

'Гак/на 30-й день ФЧ, являющееся одним из основных показателей напряжённости иммунитета, в 2-3, а $11 в 1,3-1,6 раза соответственно выше в группах, иммунизированных по схемам: штамм 19 + левамизол и штамм 19 + ковйдон, по сравнению с группой животных, привитых только ракциной. Существенных различий в показаниях $А не отмечено.

Через 60 дней после вакцинации ФЧ в 1,7-2,5; ФП в 1,251,8 раза, а ФА на 15-20$ были выше соответственно в тех же группах.

На 15-й день после введения вакцины из штамма 82 для проверки степени напряжённости иммунитета, в группе, привитых вакциной из штамма 19, реагировало от 90 до 100$ живот- " них, в интактяой от 40 до 80$. Б опытных группах* привитых с иммуностимуляторами, реагировали все животные. Уровень антител в РА и РНГА у них значительно выше чем в 1-й и 4-й груп-

пах. У ачвотнцх вакцинированных с леьамизолом и ковидоном, титр агглютининов составил 380 и 400 ME соответственно, а гемаггл|)ТИН"Н01з 640 в обеих группах, против 140 и 200 ME Сагглвталинн) и 200 (гемагглютинины) в 1-й и 4-й группах.

На 30-й день показатели серологических реакций во всех группах снизились и были примерно на одном уровне.

Между гу1.оральным и клеточным иммунитетом выявлена обратно пропорциональная зависимость. Так, после кратковременного увеличения синтеза антител наблюдается их спад и на отом фоне усиливаете» фагоцитоз.

Показатели ¿A прямо пропорциональны уровню напряженности иммунитета. Если #А в группе 6ukob¿ вакцинированных с ко-видоном, составила 100¡£, в группе, иммунизированных с яева-мизолом, 90 и 60$ в группе, где стимулятор не применяли, то степень напряжённости иммунитета соответственно была 100, 90 и 10% (табя. 6).

Таблица 6

Изучение иммунитета у быков, привитых вакциной из атамма 19 по разным схемам с использованием в качестве заражающего агента живой вакцины из штамма 82

Группа Кол-во Выделены культуры ИИ % иммунных

■ голов штамма В2 животных

тягтшгав—ис'е'М"

I.uiT.19 IQ 3 9 5,6 70

2.щт.19+яевамизол 10 I 3 1,9 90-

Э.шт.19+ковидон 10 0 0 ■ 0 100

4.Контроль 10 10 30 19,0 0

2.7. Производственные испытания ковидона

ираиаеодственные. испытания препарата ковидон были проведены р 2-х хозяйствах Октябрьского района Челябинской области.

- А.О. "Маякское'.и "Новосельское" неблагополучны пг бруцеллёзу с 1985 года. Б хозяйствах для спецпрофилактики применяется вакцина из штамма 82 по схеме 82+82+82 с ревакцина-

цией коров через каждые 2 года.

В 1993 году в АО "Маякское" выделялось >\,1% больных бруцеллёзом животных, Ь АО "Новосельское" - 6.8Í.

Согласно разработанному плану ветеринарных мероир :.¡ по борьбе с бруцеллёзом, предусматривалось в качестве производственного испытания применить, наряду с вакциной из штамма 62, на тёлках случного возраста и иммуностимулятор ко'чдон.

Перед реализацией плана разработанных мор чриятий установлены фоновые показатели по серологии. Положительно реагирующие были сданы на убой, а тёлки с отрицательными реакциями привиты штаммом 82 с ковядоном в 2-х стадах ("Шипкино' и "Горелое") и для контроля на отделении "Сысоево" гурт вакцинирован без стимулятора.

Подводя итог проведённым наблюдениям, можно сделать вывод, что в стадах, где вакцину применяли с коыданон, процент позитивно реагирующих животных был ниже в сравнении с контролем.

Так, через б месяцев после инокуляции вакцинного итамма на отделении "Сысоево" положительными были реакций у животных, a в том же хозяйстве на отделении "шипкино" число реагирующих было в 3,8 раза меньше.

Ь последующие сроки исследования реагирующих среди животных, привитых с иммуностимулятором но зарегистрировано, тогда как в контрольном стаде сохранились позитивные реакции и после отела (0,6%).

Ь АО "Ноьосельскоё" во все сроки серологического исследования реагирующих на бруцеллёз животных по РА и ГСК не зафиксировано.

Следовательно, ковидон оказался эффективным при сочетан-ном введении его с противобруцеллёзной вакциной из штамма 82.

Э. В Ы Б О Д U

1. Ковидон и ПЫ1 повышают напряжённость иммунитета, созданного вакциной из инагглвтиногенного штамма 1б/'< В.оиfofituí, . у морских свинок на и 17$ соответственно.

2. Ь экспериментальных условиях на крупном рогатом скоте ковидон.повышает иммуногенность вакцины Из штамма 82 В.аёоНсц. на 2Ь>.

- 1(5

'}. Стимуляторы (ковидон, левами зол, ПЬП) не оказывают существенного влияния на сроки угасания'поствакцинальных антител, тем самым не ослоиняют диагностику бруцеллёза.

Б механизме повышения .напряжённости иммунитета, при сочетанном введении крупному рогатому скоту с противобруцел-лёзной вакциной из штамма 62 испытуемого иымуномодулятора ко-видона, активную роль играют А-, Е- и Т-клетки.

5. Ковидон, вводимый ь организм телят без вакцины, уменьшает обсемененность органов и тканей бруцеллами в 2 раза в сравнении с контрольной группой.

6. Б производственном опыте на крупном рогатом скоте ле-вамйзол повышает иммуногенность вакцины из штамма 19 на 20!, ковидон на 30$. Усиление противобруцеллззной защиты осуществляется за счёт активации гуморальных и клеточных факторов иммунитета. Между, ними установлена обратно пропорциональная зависимость. При отом, степень напряжённости иммунитета прямо пропорциональна фагоцитарной активности лейкоцитов.

7. Дяя изучения иммунитета в условиях производства у животных, иммунизированных агглютиногенным штаммом бруцелл, можно использовать в качестве заражающего агента вакцину из штамма 82.

0. Эффективность препарата ковидон подтверждена при сочетанном введении с вакциной из штамма 82 на крупном рогатом скоте в производственных условиях.

Л. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРКДДОШШ

1. Методические рекомендации и наставление по применению нйлверма, левамизола и ковидона для повышения иммуногенности противобруцеллёзных вакцин одобрены Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода Российской Федерации (II.05.95 г., Ы3-б/243) для ограниченного производственного испытания.

2. В производственных условиях на быках разработан метод оценки иммунитета к бруцеллёзу и эффективности иммуномодуля-торов с применением, в качестве заражающего агента, вакцины из штамма В2 В.О&оНиь .

5. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ МСС ЧРТАЦИИ

1. Иванова О.И. Применение вакцины из штамма 82 В.-Ър-Н16 в. качестве заражающего агента для изучения противибру-целлэзного иммунитета// Методология мероприятий по профилактике и ликвидации болезней с.-х. животных: Сб.науч.тр./ РАСХН. Сиб. отд-ние, Новосибирск, 1995.- С.91-93.

2. Иванова О.Н. Изучение иммуностимулирующей активности ковидона при экспериментальном бруцеллёзе крупного рогатого скота// Там же.- С.93-97.

3. Красиков А.П., Иванова О.Н., Коркина О.И. Роль Т-,

В- и А-клеток в механизме повышения напряжённости противобру-целлёзного-иммунитета// Там не.- С.97-102.

4. Красиков А.П., Иванога О.Н. Влиягие стимуляторов на иммуногенность противобруцеллёзной вакцины из штамма 19 В.я&Л-Ш П Там .»е.- С.84-90.

5. Иванова О.Н. Препараты для повышения иммуногенности противобруцеллёзных вакцин: Тезиса докладов науЧно-практической конференции "Основные научные исследования по проблеме туберкулёза и бруцеллёза с.-х. животных, профилактика и организация мероприятий по ликвидации болезней в регионе Сибири", Новосибирск, 12-13 июля 1995 г./РАСХН. Сиб. отд-ние. ИЭВС и ДВ.- Новосибирск, 1995.- С.107.

6. Красиков А.П., Иванова О.Н., Ахметова Г. А. Новые способы борьбы с бруцеллёзом крупного рогатого скота// Морфологические, биохимические и клинические исследования домашних' животных и пушных зверей в норме и при патологии: Сб.науч.тр. ОмГАУ.- Омск, 1995.- С. 52- 56.

/

Сдано•в печать 02.04.96. Формат 60x84 1/16. Бум. тип.# 3. Печать офсетная. Уч.-изд.л. 1,00. Тираж 70. Заказ 120.

Типография ОмГАУ, Омок-8, Сибаковская, 4