Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Гематотоксические эффекты некоторых лекарственных средств и пестицидов

На правах рукописи

БАРДИНА ЕКАТЕРИНА ГЕННАДЬЕВНА

ГЕМАТОТОКСИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ НЕКОТОРЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ И ПЕСТИЦИДОВ

16.00.04 - Ветеринарная фармакология с токсикологией

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

0 о МАР 2008

Троицк - 2008

Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Омский государственный аграрный университет»

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор

Герунова Людмила Карповна

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Рабинович Моисей Исаакович

кандидат ветеринарных наук, доцент Белов Андрей Евгеньевич

Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Оренбургский

государственный аграрный университет»

Защита диссертации состоится « ¿¿^лА^г— 2008 г. в «/¿У» часов на заседании диссертационного совета Д 220.066.01 в ФГОУ ВПО «Уральская государственная академия ветеринарной медицины», адрес: 457100, г. Троицк, Челябинская область, Ул. Гагарина — 13, тел. 2-27-16.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Уральская государственная академия ветеринарной медицины»

Автореферат разослан «/У» Л^<?2008 г.

7

Ученый секретарь диссертационного совета

Лыкасова И.А.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Если раньше одной из глобальных опасностей для человечества были инфекционные заболевания, то теперь все более и более опасными становятся результаты деятельности человека, в частности, загрязнение среды химическими продуктами В настоящее время синтезировано огромное количество различных соединений Все более актуальной становится проблема сдерживания химической агрессии (И Е Ковалев, О Ю Полевая, 1985), в том числе прессинга пестицидов и лекарственных средств (Ю С Каган, Н В Кок-шарева, ЛМ Овсянникова и др , 1980, М Г Кокаровцева, Г Н Бахишев, НВ Кок-шарева, 1983, Ю С Каган, 1984, И Г Серегин, В Е Никитченко, 2003, Н Л Андреева, Т В Новосадюк, 2006, В А Антипов, 2006)

Современное состояние контроля побочного действия лекарственных средств и пестицидов не дает возможности объективно оценить значимость проблемы лекарственных и пестицидных токсикозов и вызываемых ими постинтоксикационных осложнений Между тем возрастающая степень риска гематотоксических эффектов, обусловленных экологическими факторами, выдвигает на первый план задачу исследования гематотропного действия лекарственных средств и пестицидов, что, несомненно, имеет принципиальное значение в дифференциальной диагностике лим-фопролиферативных заболеваний животных и является актуальной проблемой ветеринарной фармакологии и токсикологии

Цель работы — оценить степень риска и характер гематотоксических эффектов лекарственных средств и пестицидов с различными механизмами действия в экспериментальных и производственных условиях

Задачи исследований:

1 Установить общие закономерности морфофункциональных изменений в клетках крови лабораторных животных при действии лекарственных средств различных фармакологических групп

2 Оценить степень риска гематотоксических эффектов лекарственных средств и пестицидов при превышении индивидуальной толерантности у продуктивных животных

3 Обосновать корригирующее действие энтеросорбентов при развитии гематотоксических эффектов лекарственной терапии

4 Оценить информативность корреляционного и однофакторного дисперсионного анализов в диагностике гематотоксических эффектов

Научная новизна. В данной работе проведено комплексное исследование показателей крови крупного рогатого скота и лабораторных животных под действием повышенных доз лекарственных средств и пестицидов морфологическими, цитохимическими и биохимическими методами с анализом экспериментальных данных с помощью многомерной математической статистики

Установлено преобладание однотипных изменений в клетках крови при действии препаратов различных фармакодинамических групп с дозозависимыми различиями по степени выраженности Доказано нарушение корреляционных связей между морфологическими и биохимическими показателями крови при развитии гематотоксических эффектов

Теоретическая и практическая значимость работы. Определены морфологические, цитохимические и биохимические показатели крови крупного рогатого скота и лабораторных животных при однократной передозировке и длительном применении некоторых лекарственных средств и пестицидов, что может быть использовано в диагностике гематотоксических эффектов в производственных условиях Обоснованы корригирующие эффекты энтеросорбентов и информативность метода однофакторного дисперсионного анализа при исследовании действия лекарственных средств на систему крови животных Установленные корреляционные связи между морфологическими и биохимическими показателями крови животных способствуют совершенствованию диагностики и патогенетической терапии отравлений

Материалы диссертационной работы и разработанные методические рекомендации «Методы статистической оценки гематотоксических эффектов лекарственных средств» (Омск, 2007) используются в учебном процессе кафедры внутренних незаразных болезней, фармакологии и токсикологии института ветеринарной медицины ОмГАУ и кафедры математического анализа Омского государственного педагогического университета

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1 Лекарственные средства и пестициды разных химических групп вызывают морфологические, цитохимические и биохимические изменения в системе крови животных, глубина и степень выраженности которых определяются дозой и кратностью применения препаратов Характер гематотоксических эффектов отражает ограниченность типологических реакций организма в ответ на действие потенциальных токсикантов

2 Клетками-эффекторами для гематотоксических агентов являются ней-трофильные гранулоциты и лимфоциты, характер и сила корреляционных связей которых с биохимическими показателями плазмы крови изменяются при интоксикации

3 Энтеросорбенты нивелируют гематотоксические эффекты лекарственных средств и пестицидов, нормализуя качественный состав и количественное соотношение клеток крови

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на XV Международной научно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии», посвященной 300-летию Санкт-Петербурга (Санкт-Петербург, 2003), II Международной межвузовской научно-практической конференции аспирантов и соискателей «Предпосылки и эксперимент в науке» (Санкт-Петербург, 2004), IV межрегиональной научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения Заслуженного ветеринарного врача РФ И В Окунцова СО РАСХН ВНИИБТЖ «Актуальные проблемы ветеринарной медицины» (Омск, 2005), Международной научно-практической конференции, посвященной 60-летию ГНУ Краснодарского НИВИ «Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях» (Краснодар, 2006), Всероссийской научно-практической конференции «Современные проблемы развития и методики преподавания естественных и точных наук» (Уссурийск, 2006), научно-практической конференции фармакологов Российской Федерации «Фармакологические и экотоксикологические аспекты ветеринарной медицины» (Троицк, 2007)

Публикация результатов исследований. Основные результаты диссертации отражены в девяти публикациях автора, из которых одна - в журнале, рекомендованном ВАК РФ, 3 публикации - в материалах международных конференций, две — в материалах всероссийских конференций, одна - в материалах межрегиональной научно-практической конференции и одна в вестнике Омского государственного университета Кроме того, некоторые результаты исследования нашли отражение в методических рекомендациях «Методы статистической оценки гематотоксических эффектов лекарственных средств»

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 159 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических рекомендаций, списка использованной литературы и приложений Список использованной литературы включает 181 источник, из них 30 источников - иностранных авторов Работа иллюстрирована 18 таблицами и 17 рисунками

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материал и методы исследования

Тема диссертации является разделом плановой научно-исследовательской работы кафедры внутренних незаразных болезней, фармакологии и токсикологии института ветеринарной медицины Омского государственного аграрного университета «Фармакотоксикологическая оценка новых лекарственных средств и пестицидов», имеющей номер государственной регистрации № 01 2 00103080

Экспериментальная работа выполнена в лаборатории кафедры внутренних незаразных болезней, фармакологии и токсикологии ИВМ ОмГАУ Отдельные исследования проведены в лаборатории резистентности животных ИВМ ОмГАУ и Омской районной ветеринарной лаборатории в период с июля 2002 года по октябрь 2006 года Некоторые серии опытов проведены в учхозе № 1 ИВМ ОмГАУ, СПК «Южное» Павлоградского района и СПК «Пушкинский» Омского района Омской области в период с апреля 2004 года по октябрь 2006 года

Исследования проведены на 15 морских свинках, 64 лабораторных беспородных крысах, 16 телятах в возрасте 1 недели, 50 коровах черно-пестрой и красной степной пород в возрасте 3 лет Крыс и морских свинок содержали в специальном помещении кафедры, их кормление осуществляли согласно нормам рациона для лабораторных животных (ГЕ Батрак, A M Кудрин, 1979) Коровы получали стандартный рацион в условиях хозяйства

За лабораторными животными вели систематическое наблюдение, за две недели до начала каждого опыта проводили клиническое обследование по общепринятой методике В опытах использовали только клинически здоровых животных Исследования на лабораторных животных проводили в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу Министерства здравоохранения СССР от 12 08 1977 г № 755) Изучение гематотоксических эффектов проводили в серии открытых сравнительных проспективных контролируемых исследований (рис 1,2)

Рисунок 1 - Исследования, проведенные в лабораторных условиях

Рисунок 2 - Исследования, проведенные в производственных условиях

Гематологические исследования включали подсчет форменных элементов крови с помощью микроскопирования (тринокулярный светооптический микроскоп «MICROS» серии МС 200 с TV-камерой, увеличение 10x100) в камере Горяе-ва и выведение лейкограммы Мазки окрашивали по методу Романовского

Выявление активности миелопероксидазы в лейкоцитах проводили с помощью метода Грэхема-Кнолля Определение содержания липидов в цитоплазме нейтрофилов осуществляли по методу Гольдмана Активность миелопероксидазы и содержание липидов определяли по балльной системе Для оценки цитохимических реакций в клетках крови выводили средний цитохимический коэффициент по методу Astaldi, Verga (1957)

Биохимические исследования плазмы крови проводили в лаборатории резистентности молодняка крупного рогатого скота ИВМ ОмГАУ с помощью наборов реактивов производства фирмы Hospitex Diagnostics (Италия) на биохимическом анализаторе - автомате АБ-02

Полученный при морфологических, цитохимических и биохимических исследованиях цифровой материал обработан статистическими методами

— вариационной статистики с вычислением средней арифметической, среднего квадратического отклонения, показателей статистической достоверности,

— проведен корреляционный анализ показателей с определением коэффициента корреляции с последующей проверкой гипотезы о значимости выборочного коэффициента линейной корреляции (В П Омельченко, Э В Курбатова, 2003),

— однофакторный дисперсионный анализ использовали для определения степени влияния алюминия гидроксида и энтеросорбентов на морфологические показатели крови крыс (Л M Ниворожкина, 3 А Морозова, 2005) Предварительно была проведена графическая проверка гипотезы о нормальном распределении генеральной совокупности морфологических показателей крови (В Е Гмурман, 2003)

Статистическую обработку данных проводили на компьютере с использованием табличного процессора Microsoft Excel

2.2. Изменение картины крови у лабораторных животных при введении токсических доз лекарственных средств с различными механизмами действия

Цель — изучить особенности влияния повышенных доз хлорамфеникола, алюминия гидроксида и энрофлоксацина на морфологические и цитохимические показатели крови морских свинок и крыс (рис 1)

При анализе лейкограмм морских свинок установлено, что в лейкограмме морских свинок, получавших алюминия гидроксид, за опытный период повысилось содержание палочкоядерных форм нейтрофилов на 43% и сегментированных — более чем в 2 раза На этом фоне у них снизилось относительное содержание лимфоцитов (на 26% по сравнению с фоновыми показателями) Содержание эозинофилов у животных при введении алюминия гидроксида повысилось на 73%, по сравнению с фоновыми показателями У животных, полу-

чавших хлорамфеникол, отмечалось увеличение содержания сегментоядерных нейтрофилов на фоне снижения палочкоядерных нейтрофилов

Содержание липидов в цитоплазме нейтрофильных гранулоцитов снижалось на протяжении опыта во всех группах животных Наиболее отчетливо данная тенденция проявлялась в группе животных, получавших повышенную дозу хлорамфеникола (на 48%) Активность миелопероксидазы в цитоплазме нейтрофилов у морских свинок контрольной и опытных групп имела тенденцию к повышению, что было наиболее выражено у животных, получавших алюминия гидроксид и хлорамфеникол

В мазках крови животных опытных групп отмечалось изменение структуры ядер лимфоцитов, а также появление нейтрофильных гранулоцитов с признаками токсических изменений в цитоплазме (пенистость, повышенная базо-филия)

Изменения лейкограммы у крыс, возникающие под действием повышенной дозы энрофлоксацина, являются достаточно стойкими, так как восстановление клеточного состава крови за период эксперимента не произошло

При анализе экспериментальных данных в опытной группе выявилось достоверное уменьшение количества клеток гранулоцитарного ряда эозинофилов, палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов Через сутки у животных, получивших энрофлоксацин в дозе 25 мг/кг, отмечалось появление юных форм нейтрофилов, а также увеличилось количество нейтрофилов, находящихся на разных стадиях апоптоза

При анализе лейкограмм установлено, что доля больших лимфоцитов увеличилась через неделю в опытной группе на 7% по сравнению с фоновыми показателями (Р<0,05), в контрольной группе подобной тенденции не наблюдалось Количество малых лимфоцитов за время эксперимента в опытной группе увеличилось более чем в 2 раза, по сравнению с фоновыми показателями

Общее количество лейкоцитов в группе животных, получавших энрофлоксацин, достоверно снизилось через сутки после введения препарата

При цитохимическом исследовании отмечали достоверное увеличение активности пероксидазы в нейтрофилах - через сутки и липидов — через неделю, что является признаком активации в клетках процессов метаболизма

Содержание ферментов АлАТ и АсАТ в плазме крови контрольных и опытных животных не имели отличий через сутки после введения препарата Через неделю показатели активности ферментов в плазме крови опытных животных значительно превышали показатели в контрольной группе, что свидетельствует об умеренном нарушении функции печени у крыс при передозировке энрофлоксацина

Показатели содержания глобулинов в плазме крови у опытных животных повышаются через неделю после введения препарата, а содержание железа в плазме крови у животных опытной группы достоверно снижается

2.3. Сорбционная коррекция гематотоксических эффектов алюминия гидроксида

Цель данной серии экспериментов - поиск оптимальных путей снижения уровня интоксикации организма и коррекция гематотоксических эффектов лекарственных препаратов со статистической обработкой экспериментальных данных методом однофакторного дисперсионного анализа

При анализе лейкограмм крыс, получавших алюминия гидроксид, было выявлено повышение количества палочкоядерных нейтрофилов, эозинофилов, снижение содержания сегментированных форм нейтрофилов и больших лимфоцитов При этом в мазках крови животных встречались патологические формы лимфоцитов, широкоплазменные лимфоциты, ридеровские формы, тени Гумпрехта, в большинстве эозинофилов выявлялось нарушение цитоплазмати-ческого гранулярного аппарата

При проведении на фоне хронической алюминиевой интоксикации энтеро-сорбции с применением полисорба, показатели гемограммы не имели достоверных отличий от животных контрольной группы Отсутствие патологических клеток и повышение количества крупных форм лимфоцитов в мазках крыс, получавших алюминия гидроксид с зоокарбом, является хорошим прогностическим признаком

Средний цитохимический коэффициент (СЦК) миелопероксидазы в группе животных, получавших сорбенты с алюминия гидроксидом, имел тенденцию к снижению в сравнении с контролем (в группе с полисорбом - на 8% и на 13% — в группе с зоокарбом)

Во всех группах, где животные получали алюминия гидроксид, отмечалось увеличение количества липидов в цитоплазме нейтрофилов В меньшей степени данная закономерность прослеживается у животных, получавших зоокарб вместе с алюминия гидроксидом

Статистическая обработка экспериментальных данных осуществлялась методом однофакторного дисперсионного анализа

Проведение однофакторного дисперсионного анализа включало следующие этапы

1) определение вида математической модели,

2) обоснование использования метода однофакторного дисперсионного анализа,

3) определение наличия и степени влияния препарата на гематологические показатели

При проведении однофакторного дисперсионного анализа мы определяли коэффициент детерминации

ц2 = Ор/ Ог,

где Ир—факторная дисперсия,

Иу -общая дисперсия

Данный коэффициент показывает, в какой мере вариация результирующего признака обусловлена влиянием факторного признака

Однофакторный дисперсионный анализ экспериментальных данных показал, что полисорб при совместном применении с алюминия гидроксидом оказывает существенное влияние на количество палочкоядерных нейтрофилов (^=8, Б,=7,71, г|2=0,82, то есть на 82% вариация результирующего признака (уменьшение количества данных клеток) обусловлена влиянием факторного признака, где - расчетное значение, Б, - табличное значение) Гидроксид алюминия уменьшает количество больших лимфоцитов (^=8, Р,=7,71, т]г=0,6)

Данные однофакторного дисперсионного анализа подтверждают, что энте-росорбция нивелирует гематотоксические эффекты

2.4. Гематотоксические эффекты лекарственных средств и пестицидов при их использовании в производственных условиях

Исследование влияния фуразолидона на гематологические показатели проводили в учхозе №1 ОмГАУ, где произошло случайное отравление 8 телят недельного возраста Через 20 часов у них отмечали следующие признаки отравления отказ от корма, мышечная дрожь, повышение температуры тела и возбудимости животных

Для снижения интоксикации после взятия крови была проведена детокси-кационная терапия с использованием полисорба-ВП в дозе 0,05 г/кг

При анализе лейкограммы телят (табл 1) отмечали следующие изменения резкое снижение содержания эозинофилов, палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов у телят опытной группы На этом фоне относительное содержание лимфоцитов достигало 95%

Таблица 1 - Лейкограмма телят при отравлении фуразолидоном, М±т, п=8

Через 20 часов после Через 14 суток после

Показатели крови отравления отравления

контроль- опытная контроль- опытная

ная группа группа ная группа группа

Лейкоциты, х109/л 7,0±1,3 5,4±1,9 6,7±2,5 5,1±1,0

Базофилы, % 0,3±0,3 0 0,3±0,3 0

Эозинофилы, % 1,0±0,6 1,0±0,6 2,0±0,6 д**

Палочкоядерные нейтрофилы, % 20,0±4,6 9,7±3,8 18,7±5,2 6,0±2,1*

Сегментоядерные нейтрофилы, % 3,0±0,6 о** 2±0,6 0**

Лимфоциты большие, % 16,0±0,6 21,0±2,9 11,3±0,9 9,0±0,0*

Лимфоциты средние, % 52,7±2,6 66,7±6,4* 56,7±3,8 73,0±2,1**

Лимфоциты малые, % 6,7±1,5 1,3±0,7** 8,3±1,5 11,3±0,3*

Моноциты, % 0,3±0,3 0,3±0,3 0,7±0,3 0,7±0,3

Разрушенные клетки, % 3,0±0,6 10,0±1,2** 7,0±1,2 6,0±1,2

Примечание * - р<0,05, ** - р<0,01

Общее количество белка, альбуминов и глобулинов в плазме крови телят, получивших токсическую дозу фуразолидона, было ниже, чем у телят контрольной группы

Содержание АлАТ и АсАТ в сыворотке крови животных опытной группы через 20 часов после отравления в 2 раза больше, чем у животных контрольной группы

На протяжении опытного периода наблюдалась тенденция к снижению содержания кальция в плазме крови телят опытной группы Отмечено, что неорганического фосфора при этом было на 25% больше, чем у телят в контрольной группе Содержание железа в крови животных опытной группы было также выше, чем у животных контрольной группы на 70% через 20 часов после отравления и на 18% - через 14 суток

При цитохимическом исследовании через 20 часов после отравления СЦК миелопероксидазы и липидов в нейтрофилах у животных опытной группы выше, чем у животных контрольной группы, на 15% и 18%, соответственно

С течением времени данные показатели имели тенденцию к увеличению в обеих группах животных, но при повторном исследовании через 14 суток у животных контрольной группы цитохимические показатели были выше, чем у животных, получивших фуразолидон

Для определения гематотоксического действия бутокса было сформировано две группы по 5 животных (коров в возрасте 3 лет) Животные подвергались четырехкратной наружной обработке бутоксом в концентрации 1 1000 один раз в 10 дней Забор крови на исследование проводили 4 раза с периодичностью в 10 дней через день после обработки бутоксом, а пятый раз - через месяц после последней обработки бутоксом

При исследовании плазмы крови установлено увеличение активности хо-линэстеразы, щелочной и кислой фосфатаз

Содержание билирубина при этом не только не увеличено, но к концу первых суток наблюдается даже снижение (на 36,8%, Р<0,01) Стабильность бел-ковообразовательной функции является свидетельством сохранности клеток печени у коров, обработанных бутоксом Уровень белков в опытной группе животных в течение эксперимента имеет тенденцию к повышению Показатели глобулина в группе животных, подвергнутых обработке бутоксом, имеют устойчивую тенденцию к повышению в течение всего опытного периода

В период обработки животных в плазме крови снижается концентрация холестерина, что свидетельствует об умеренном нарушении функции клеток печени

В обезвреживании поступающих в организм чужеродных веществ участвуют и клетки почек Концентрация креатинина в крови коров опытной группы в период исследования была выше по сравнению с животными контрольной группы

Отмечается достоверное отличие в содержании кальция на 20 сутки, а содержание неорганического фосфора в плазме крови коров достоверно снижено после первой обработки бутоксом Уровень железа в этот период повышается Содержание магния достоверно повышено в опытной группе к 60-м суткам исследования (на 18%, Р<0,01)

На протяжении опытного периода в группе животных, подвергавшихся обработке бутоксом, отмечалось снижение содержания лейкоцитов При анализе лейкограмм животных контрольной и опытной групп отмечали значительные отличия в содержании нейтрофильных гранулоцитов

Таблица 2 - Динамика биохимических показателей плазмы крови коров при многократной обработке бутоксом, М ± т, п=5

Показатели в группах Кратность обработок животных бутоксом Через 30 суток после 4-й обработки

1 2 3 4

Холинэстера-за, МЕ/л к 305,5±8,5 304,4±23,4 349,3±10,7 344,5±17,0 343,8±15,9

0 3613*19,7** 310,6±13,6 372,1±18,7 418,5±34,9 379,5±15,3

Щелочная фосфатаза,МБ'л к 34,6±2,3 29,5±2,3 38,7±0,6 39,6±1,6 45,2±0,9

о 68,9±20,7 56,9±14,5* 64,9±13,5* 63,3±7,9 83,2±10,5*

Кислая фос-фатаза, МЕ/л к 0,43±0,2 0,6±0,1 0,7±0,2 0,4±0,9 2,3±0,1

О 1,5±0,5* 1,2±0,2* 1,5±0,5* 0,5±0,1** 2,4±0,2

Билирубин, мкмоль/л к 5,7±0,2 6,4±3,1 3,2±0,5 3,9±0,9 8,9±0,6

О 3,6±0,7** 4,9±1,3 4,0±0,9 4,1±1,2 9,3±0,4

Общий белок, г/л к 90,3±4,5 88,1±4,4 89,6±4,3 91,6±3,6 87,0±3,7

О 95,1±2,5 92,6±1,9 89,9±1,4 98,1±1,5 91,0±2,9

Альбумины, г/л к 45,1±1,2 48,4±1,6 51,7±0,6 48,4±2,2 39,4±1,3

О 49,3±1,5 49,5±1,5 49,6±3,2 47,3±1,1 42,3±0,8*

Глобулины, г/л к 45,2±5,5 39,7±5,7 37,9±4,8 43,2±5,1 47,6±4,9

О 45,7±2,2 43,1±3,1 40,3±3,7 50,8±1,3 48 8±2,3

Холестерин, моль/л к 2,2±0,1 3,6±0,6 3,2±0,1 4,8±0,9 4,9±0,4

О 2,1±0,1 1,8±0,1 2,8±0,2 3,8±03 4,9±0,1

Холестерин ЛПВП, моль/л к 1,5±0,08 1,8±0,2 1,9±0,2 2,5±0,3 2,1±0,2

О 1,5±0,1 1,6±0,1 1,7±0,2 2,3±0,2 2,2±0,1

Примечание *-р<0,05, **-р<0,01,

к - контроль, о - опыт

Уже после первой обработки в мазках крови обработанных коров было выявлено повышение почти в три раза содержания юных нейтрофилов, на 60% -палочкоядерных форм и на 96% - сегментоядерных форм нейтрофилов Подобная тенденция была отмечена и после второй обработки животных Проведение четвертой обработки коров бутоксом вызвало резкое увеличение содержания нейтрофильных гранулоцитов в крови обработанных животных преимущественно за счет юных и палочкоядерных форм нейтрофилов Содержание больших лимфоцитов в крови коров после первой обработки бутоксом достоверно снизилось, что является признаком угнетения иммунного ответа Количество эозинофилов в группе коров, подвергнутых обработкам бутоксом, имело на протяжении опытного периода тенденцию к увеличению Количество разрушенных клеток в мазках крови опытных животных после первой и второй обработок было выше, чем у контрольных животных, при последующих обработках их содержание имело тенденцию к снижению

СЦК миелопероксидазы в крови животных после первых двух обработок бутоксом снижен, в дальнейшем отмечается его повышение, что указывает на развитие химического стресса

2.5. Применение корреляционного анализа при исследовании гематотоксических эффектов бутокса

Цель данного исследования — установление различий в динамике регуля-торных процессов у коров с субклинической пестицидной интоксикацией и коров контрольной группы с помощью корреляционного анализа, а также определение сопряженности структуры и выраженности корреляционных связей между рядом биохимических и морфологических параметров

При многократной обработке животных бутоксом корреляционный анализ позволяет выявить изменение баланса между биохимическими и морфологическими показателями крови (табл 3)

В опытной группе животных появляется тесная взаимосвязь количества лейкоцитов и общего белка (г = 0,92 против г = 0,45 в контроле)

В контрольной группе животных отсутствовало тесное взаимодействие между биохимическими показателями и содержанием моноцитов в лейкограмме

В группе животных, которых обрабатывали бутоксом, отмечается появление тесной корреляционной связи меясду содержанием в крови моноцитов и билирубина (г = -0,84), моноцитов и альбумина (г = 0,9), моноцитов и АлАТ (г = 0,89) и моноцитов и АсАТ (г = 0,92), что свидетельствует об активизации участия моноцитов в реализации функций печени

Содержание общего белка в опытной группе было тесно связано с содержанием юных нейтрофильных гранулоцитов (г = 0,88)

В опытной группе с количеством альбуминов в плазме крови имело тесную связь содержание малых лимфоцитов (г = -0,95) Содержание глобулинов было тесно связано и с количеством юных нейтрофилов (г = 0,84), и с количеством больших лимфоцитов в опытной группе (г = -0,92)

Наличие тесной связи между содержанием нейтрофильных гранулоцитов и лимфоцитов в лейкограмме и содержанием общего белка и глобулинов в плазме крови коров свидетельствует о включении иммуно-воспалительного звена в патогенез интоксикации бутоксом

Содержание кислой фосфатазы в контрольной группе животных тесно связано с содержанием юных (г = 0,89) и палочкоядерных нейтрофилов (г = 0,92), средних (г = -0,82) и малых лимфоцитов (г = 0,82) У животных, обработанных бутоксом, данные корреляционные зависимости слабо выражены При этом у опытных животных возрастают корреляционные связи щелочной фосфатазы и моноцитов (г = -0,95 против г = -0,37 в контроле), а также холинэстеразы и юных нейтрофилов (г = 0,77 против г = 0,02 в контроле)

Содержание холестерина и холестерина ЛПВП в плазме крови имеет тесную обратную связь с содержанием разрушенных клеток в мазках крови животных и опытной, и контрольной групп, что указывает на мембраностабилизирующую функцию холестерина

Таблица 3 — Данные корреляционного анализа

Биохимические показатели в группах Морфологические показатели

эозинофилы нейтрофилы лимфоциты 2-ядерные лимфоциты разрушенные моноциты лейкоциты

юные палочкоя-дерные сегментояде рные большие средние малые

Билирубин к -0,12 0,92* 0,71 0,59 -0,76 -035 033 0,75 -033 -0Д5 -0,56

о -0,07 -0,13 -0,13 -0,67 -030 -0,40 0,80* -0,41 -0,45 -от* -0,63

Общий белок к 0,25 -0,7 -0,6 0,92* 0,45 034 -034 -0,29 036 036 0,45

0 -0,44 0,88* 0,75 0,63 -0,67 -036 -0,07 0,85* 0,16 0,09 0,92*

Альбумин к -0,03 -0^7* -0,75 037 0,77 0,53 -ОДЗ -0,95* 0,40 035 0,47

О 0,02 -ОД) 0,01 0,60 0,54 0,72 -095* 0,16 0,58 0,90* 031

Глобулин к 0,15 0,82* 0,60 -0,02 -0,71 -0,47 0,47 0,99* -030 -0,25 -035

0 -035 0,84* 0,58 0,03 -0,92* -032* 0,65 0,55 -031 -0,62 0,48

Холестерин к 0,89* 0Д8 0,81* 0,06 -0,81* -0,69 0,57 0,19 -053* 0,42 •091*

О 0,29 0,40 -0,002 -0,69 -0,46 -0,89* 0,92* 0,05 -0Д2* -0,78 -0,09

Холестерин ЛПВП к 0,99* -0,11 0,51 0,44 -0,52 -0,55 0,44 -0,05 -0,78 0,56 -0,67

О 0,15 0,69 0,40 -0,54 -0,50 -089* 0,71 0,49 -ОДЗ* -0,53 0,21

АсАТ к -0,09 -ОД) -0,21 0,11 -0,17 0,67 -0,75 -0,22 032 0,67 -031

О -0,001 0,03 0,18 0,64 0,41 0,56 -0,9* 038 0,49 0,92* 0,51

АлАТ к -0,М -0,80 -0,72 0,54 039 0,86* -092* -0,67 0,57 0,74 0,17

О 0,46 -0,06 0,12 -0,1 0,74 036 -0,7 036 -0,19 0,89* 0,16

Холинэ-стераза к 0,66 0,02 0,49 0,02 -0,16 -0,82* 0,80* -0,06 -0,78 -0,11 0Д6

О 0,46 0,77 0,10 -0,22 -0,46 -091* 0,57 0,48 -0,66 -озз 0,58

Щелочная фос-фатаза к 0,52 0,53 0,75 -0,14 -0,48 -097* 0,97* 0,51 -ОД)* -037 -035

0 0,16 -0,01 -0,44 -0,46 -0,46 -0,63 0,94* -0,48 -037 -095* -034

Кислая фосфатаза к 0,16 0,89* 0,92* -0,69 -0,70 -082* 0,82* 0,62 -0,74 -0,45 -0,58

О 0,11 -0,59 -0,69 -0,47 0,002 -0,05 0,59 -0,89* -0,08 -0,08 -Д79

Примечание * — р<0,05, к — контроль, о - опыт

Корреляционный анализ позволил нам установить различия в динамике ре-гуляторных процессов у коров с субклинической пестицидной интоксикацией и коров контрольной группы, а также определить сопряженность структуры и выраженность корреляционных связей между рядом биохимических и морфологических параметров, что существенно сокращает диапазон и повышает информативность диагностических исследований

2.6. Корригирующие эффекты полисорба ВП и зоокарба при хроническом отравлении крупного рогатого скота пестицидами

В экспериментах изучали возможность коррекции изменений гематологических показателей при хронических пестицидных интоксикациях у коров (диагноз был поставлен с учетом токсикологической ситуации и данных хроматографиче-ского исследования сыворотки крови) Для проведения энтеросорбции мы применяли полисорб ВП и зоокарб

Проведение животным энтеросорбционной терапии на фоне хронического пестицидного токсикоза способствовало стабилизации гематологических показателей у животных Об этом свидетельствовало умеренное повышение содержания больших лимфоцитов и снижение содержания малых форм лимфоцитов, увеличение количества эритроцитов

У животных, получавших полисорб ВП, в крови мы отмечали уменьшение содержания клеток Гумпрехта

При биохимическом исследовании плазмы крови коров после проведения энтеросорбции выявлено повышение количества общего белка по сравнению с фоновыми показателями

Содержание общего кальция и неорганического фосфора у животных, получавших полисорб на фоне хронической интоксикации, несколько ниже данных показателей в контрольной группе, что может быть связано с уменьшением всасывания данных макроэлементов в кишечнике и объясняется неселективностью сорбента

В плазме крови коров с субклинической пестицидной интоксикацией при энтеросорбции выявлено также повышение уровня каротина и щелочного резерва, что свидетельствует о стабилизации обменных процессов в организме животных

ВЫВОДЫ

1 При использовании токсических доз лекарственных средств и пестицидов разных групп отмечаются однотипные качественные изменения клеток крови широкоплазменные лимфоциты с аномальными ядрами, ридеровские формы, тени Гумпрехта, нейтрофильные гранулоциты с пенистой цитоплазмой, повышенной ба-зофилией, рыхлыми атипичными ядрами, выростами и увеличением объема цитоплазмы, а также эозинофилы с атипичными крупными гранулами в цитоплазме, что необходимо учитывать при дифференциальной диагностике лейкемоидных реакций токсического генеза и лимфопролиферативных нарушений

2 При превышении индивидуальной толерантности животных к действию про-тивомикробных средств (хлорамфеникола, фуразолидона, энрофлоксацина) происходит снижение относительного содержания клеток нейтрофильного рада с разнонаправленным сдвигом ядра в зависимости от групповой принадлежности и потенциальной токсичности препарата При этом в большинстве случаев отмечается эозино-пения, а при отравлении фуразолидоном относительный лимфоцитоз у крупного рогатого скота достигает 95% с увеличением частоты встречаемости клеток Гумпрехта

3 Изменение активности миелопероксидазы при лекарственных и пестицидных токсикозах в полной мере отражает смену фаз общего адаптационного синдрома при стрессе сначала повышается, затем стабилизируется и при продолжающемся воздействии снижается Уровень содержания липидов в клетках крови варьирует при инток-

сикации крыс алюминия гидроксидом возрастает до 2,54±0,04 уел ед против 2,24±0,13 уел ед в контроле, при многократной обработке крупного рогатого скота бутоксом снижается до 2,79±0,06 уел ед против 2,90±0,06 уел ед в контроле

4 Диагностической информативностью при хронической интоксикации бутоксом обладают холинэстераза, щелочная и кислая фосфатазы, уровень которых повышается у крупного рогатого скота после каждой обработки и остается повышенным через 30 суток после четвертой обработки При этом исчезает выраженная у интактных животных корреляционная зависимость кислой фосфатазы от нейтро-филов и лимфоцитов, но возрастает корреляционная связь щелочной фосфатазы и моноцитов (г0ПЬгг= -0,95 против ггантр = -0,37), а также холинэстеразы и юных ней-трофилов (гопьгг= 0,77 против гК01Пр= 0,02)

5 Передозировка лекарственных средств и пестицидов в большинстве случаев вызывает снижение содержания лейкоцитов в крови с усилением корреляции с общим белком (г0ПЬгг= 0,92, гК01Гтр = 0,45) и нарушением корреляционной связи с холестерином (гопьгг= -0,09, гТО1Гтр=-0,91)

6 Энтеросорбция с применением полисорба ВП и зоокарба уменьшает степень выраженности гематотоксических эффектов, что проявляется нормализацией лейкограммы, восстановлением активности миелопероксидазы и уровня липидов в клетках крови Однофакторный дисперсионный анализ подтверждает установленную закономерность и может быть использован для обоснования диагноза и прогноза

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1 При проведении гематологических исследований с диагностической целью необходимо учитывать изменения, возникающие в системе крови под действием потенциальных токсикантов, в том числе лекарственных средств

2 С целью профилактики гематотоксических эффектов при фармакотерапии следует строго соблюдать дозовые режимы и схемы применения лекарственных средств При использовании пестицидов не допускать нарушения установленных регламентов их применения

3 При возникновении гематотоксических эффектов показана детоксикацион-ная терапия с применением курсовой энтеросорбции

4 В помощь ветеринарным специалистам, проводящим исследования по лекарственной токсикологии с использованием вероятностных и статистических методов, разработаны и изданы методические рекомендации «Методы статистической оценки гематотоксических эффектов лекарственных средств» (г Омск, 2007)

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Герунова, Л К Картина крови у крупного рогатого скота при использовании полисорба ВП / Л К Герунова, Р Р Даминов, Е Г Сечкина // Материалы ХУ-й Международной научно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии», посвященной 300-летию Санкт-Петербурга — Санкт-Петербург, 2003 -С 63-64

2 Сечкина, Е Г Морфологические и цитохимические показатели крови у морских свинок при введении левомицетина сукцината и альмагеля / Е Г Сечкина // Материалы П международной межвузовской научно-практической конференции

аспирантов и соискателей «Предпосылки и эксперимент в науке» - Санкт-Петербург, 2004 -С 37-38

3 Сечкина, Е Г Картина крови у телят при случайном отравлении фуразоли-доном / Е Г Сечкина // Актуальные проблемы ветеринарной медицины Материалы 4-й межрегиональной научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения заслуженного ветеринарного врача РФ Ильи Владимировича Окунцова/СОРАСХН ВНИИБТЖ -Омск,2005 -С 212-213

4 Бардина, Е.Г. Исследование влияния гидроксида алюминия и энте-росорбентов на морфологические и цитохимические показатели крови у крыс методом однофакторного дисперсионного анализа / Е.Г. Бардина // Вестник Красноярского государственного аграрного университета. Выпуск 12. Красноярск, 2006. - С. 176-180.

5 Бардина, Е Г Исследование действия энрофлона на морфологические и цитохимические показатели крови у крыс / Е Г Бардина // Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 60-летию ГНУ Краснодарского НИВИ -Краснодар,2006 -С 33-34

6 Бардина, Е Г Использование методов многомерной статистики в исследовании гематотоксических процессов / Е Г Бардина, Е Г Сечкин // Современные проблемы развития и методики преподавания естественных и точных наук Сборник материалов Всероссийская научно-практическая конференция 23-24 ноября 2006 года - Уссурийск-Издательство УГЛИ, 2006 - С 114-118

7 Бардина, Е Г Исследование гематологических эффектов токсической дозы энрофлона морфологическими и цитохимическими методами / Е Г Бардина // Вестник Омского университета № 4(42) Омск Изд-во Омского государственного университета им Ф М Достоевского, 2006 — С 40-42

8 Методы статистической оценки гематотоксических эффектов лекарственных средств Методические рекомендации (Под редакцией д в н проф Л Г Геруновой и д м н проф Ю В Редькина) / Составители Е Г Бардина, Г И Сечкин // Омск Изд-во Омского государственного педагогического университета, 2007 -20 с

9 Бардина, Е Г Морфологические и цитохимические показатели крови крупного рогатого скота при многократной обработке бутоксом / Е Г Бардина // Фармакологические и экотоксикологические аспекты ветеринарной медицины Материалы научно-практической конференции фармакологов Российской Федерации Сб науч Тр -Троицк УГАВМ,2007 - С 22-25

На правах

БАРДИНА ЕКАТЕРИНА ГЕННАДЬЕВНА

ГЕМАТОТОКСИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ НЕКОТОРЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ И ПЕСТИЦИДОВ

16.00.04 - ветеринарная фармакология с токсикологией

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Троицк-2008

Сдано в набор 15.02.08. Подписано в печать 16.02.08 Формат 60x84 1/16. Печать оперативная. Бумага офсетная. Гарнитура Times New Roman. Объем 1 ус.п.л. Заказ №123 Тираж 100 экз.

Типография Уральской государственной академии ветеринарной медицины адрес типографии: 457100, г. Троицк, Челябинской обл., ул. Гагарина, 13 (лицензия Л.Р. № 021252 от 31.10.1997 г.)

Актуальность темы. Если раньше одной из глобальных опасностей для человечества были инфекционные заболевания, то теперь все более и более опасными становятся результаты деятельности человека — загрязнение среды химическими продуктами. В настоящее время синтезировано огромное количество различных соединений. Все более актуальной становится проблема сдерживания химической агрессии (И.Е. Ковалев, О.Ю. Полевая, 1985).

С расширением фармацевтического рынка и повышением активности лекарственных средств на первый план выступает проблема риска побочных эффектов (Н.Л. Андреева, Т.В. Новосадюк, 2006).

Ветеринарные препараты потенциально значительно опаснее медицинских, так как они, как правило, менее очищены и чаще используются в промышленном животноводстве для групповой фармакопрофи-лактики и терапии (В.А. Антипов, 2006).

Дальнейшее развитие животноводства вызывает необходимость всемерного повышения интенсификации и широкой химизации растениеводства с использованием органических и минеральных удобрений, регуляторов роста растений, химических средств защиты растений и животных от различных паразитов и возбудителей болезней. С этой целью в нашей стране сельскому хозяйству ежегодно поставляются десятки млн. тонн минеральных удобрений, сотни тыс. тонн химических средств защиты растений и животных, кормовых добавок и консервантов. Многие из этих веществ являются потенциально опасными для сельскохозяйственных животных, они при бесконтрольном применении могут накапливаться в воде и растениях и через них трансформироваться в организм животного и в животноводческую продукцию, вызывать признаки отравления (И.Г. Серегин, В.Е. Никитченко, 2003).

Механизм токсического действия многих химических групп пестицидов в большей или меньшей степени изучен, на основании чего базируется современная регламентация их в объектах окружающей среды, разрабатываются профилактические мероприятия по предупреждению негативного влияния на организм человека и животных, проводится поиск антидотной терапии (Ю.С. Каган, Н.В. Кокшарева, JI.M. Овсянникова и др., 1980; М.Г. Кокаровцева, Г.Н. Бахишев, Н.В. Кокшарева, 1983; Ю.С. Каган, 1984). Однако влияние пестицидов на систему крови недостаточно изучено.

Современное состояние контроля побочного действия лекарственных средств и пестицидов не дает возможности объективно оценить значимость проблемы лекарственных и пестицидных токсикозов и вызываемых ими постинтоксикационных осложнений, в том числе опасности гематотоксических эффектов (Е.Ю. Востриков, 2005).

Исследования прошлых лет доказали, что одной из наиболее чувствительных гомеостатических систем к действию различных неблагоприятных факторов является система крови (В.В. Новицкий, Н.В. Рязанцева, О.Б. Жукова, 2006).

Сравнительная легкость поражения крови медикаментами определяется высокой дифференцированностью кроветворной ткани и клеток крови и активным участием их в обменных процессах организма. Среди всех видов медикаментозных осложнений поражения крови имеют наиболее тяжелое течение и неблагоприятный исход (Е.И. Змушко, Е.С. Белозеров, 2001).

Необходимость изучения состояния системы крови диктуется, прежде всего, ее важностью для поддержания постоянства внутренней среды организма и риском возникновения разнообразных патологических состояний при нарушении функционирования системы крови. Особенно необходимо отметить актуальность дифференциальной диагностики лекарственных поражений крови и заболеваний, протекающих с лимфопролиферативным и аутоиммуным синдромами.

Наиболее распространенным заболеванием животных, протекающим с изменениями в системе крови, является лейкоз крупного рогатого скота (П.Н. Смирнов, В.В. Храмцов, В.В. Смирнова, 2000; В.А. Крикун, 2002; М.И. Гулюкин, В.В. Храмцов, A.C. Донченко и др., 2002; Н.И. Петров, 2003; П.Н. Смирнов, В.А. Белявская, Е.В. Дробот, 2005). Учитывая это, необходимо отметить важность дифференциальной диагностики лейкемоидных реакций, возникающих при действии на организм животных потенциальных токсикантов, и лимфопролиферативных заболеваний крупного рогатого скота.

Возрастающая степень риска гематотоксических эффектов, обусловленных экологическим прессингом, выдвигает на первый план задачу исследования гематотропного действия лекарственных средств и пестицидов, что, несомненно, является актуальной проблемой ветеринарной фармакологии и токсикологии.

Цель исследования — оценить степень риска и характер гематотоксических эффектов лекарственных средств и пестицидов с различными механизмами действия в экспериментальных и производственных условиях.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

1. Установить общие закономерности морфофункциональных изменений в клетках крови лабораторных животных при действии лекарственных средств различных фармакологических групп.

2. Оценить степень риска гематотоксических эффектов лекарственных средств и пестицидов при превышении индивидуальной толерантности у продуктивных животных.

3. Обосновать корригирующее действие энтеросорбентов при развитии гематотоксических эффектов лекарственной терапии.

4. Оценить информативность корреляционного и' однофакторного дисперсионного анализов в диагностике гематотоксических эффектов.

Научная новизна. В данной работе проведено комплексное исследование показателей крови крупного рогатого скота и лабораторных животных под действием повышенных доз лекарственных средств и пестицидов морфологическими, цитохимическими и биохимическими методами с анализом экспериментальных данных с помощью многомерной математической статистики.

Установлено преобладание однотипных изменений в клетках крови при действии препаратов различных фармакодинамических групп с дозоза-висимыми различиями по степени выраженности. Доказано нарушение корреляционных связей между морфологическими и биохимическими показателями крови при развитии гематотоксических эффектов.

Теоретическая и практическая значимость работы. Определены морфологические, цитохимические и биохимические показатели крови крупного рогатого скота и лабораторных животных при однократной передозировке и длительном применении некоторых лекарственных средств и пестицидов, что может быть использовано в диагностике гематотоксических эффектов в производственных условиях. Обоснованы корригирующие эффекты энтеросорбентов и информативность метода однофакторного дисперсионного анализа при исследовании действия лекарственных средств на систему крови животных. Установленные корреляционные связи между морфологическими и биохимическими показателями крови животных способствуют совершенствованию диагностики и патогенетической терапии отравлений.

Разработаны методические рекомендации «Методы статистической оценки гематотоксических эффектов лекарственных средств» (Омск, 2007), которые используются в учебном процессе кафедры внутренних незаразных болезней, фармакологии и токсикологии института ветеринарной медицины ОмГАУ и кафедры математического анализа

Омского государственного педагогического университета.

На защиту выносятся следующие положения:

1. Лекарственные средства и пестициды разных химических групп вызывают морфологические, цитохимические и биохимические изменения в системе крови животных, глубина и степень выраженности которых определяются дозой и кратностью применения препаратов. Характер гематотоксических эффектов отражает ограниченность типологических реакций организма в ответ на действие потенциальных токсикантов.

2. Клетками-эффекторами для гематотоксических агентов являются нейтрофильные гранулоциты и лимфоциты, характер и сила корреляционных связей которых с биохимическими показателями плазмы крови изменяются при интоксикации.

3. Энтеросорбенты нивелируют гематотоксические эффекты лекарственных средств и пестицидов, нормализуя качественный состав и количественное соотношение клеток крови.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

6. ВЫВОДЫ

1. При использовании токсических доз лекарственных средств и пестицидов разных групп отмечаются однотипные качественные изменения. клеток крови: широкоплазменные лимфоциты с аномальными ядрами, ридеровские формы, тени Гумпрехта, нейтрофильные грану-лоциты с пенистой цитоплазмой, повышенной базофилией, рыхлыми атипичными ядрами, выростами и увеличением объема цитоплазмы, а также эозинофилы с атипичными крупными гранулами в цитоплазме, что необходимо учитывать при дифференциальной диагностике лейкемоидных реакций токсического5 генеза и- лимфопролифератив-ных нарушений;

2. При превышении индивидуальной толерантности животных к дейст-.: вию противомикробных средств (хлорамфеникола, фуразолидона, энрофлоксацина) происходит снижение относительного содержания клеток нейтрофильного ряда с разнонаправленным сдвигом ядра в зависимости' от групповой принадлежности и потенциальной токсичности препарата. При этом в большинстве случаев отмечается эози-нопения, а при отравлении фуразолидоном относительный лимфоци-тоз у крупного рогатого скота достигает 95% с увеличением частоты встречаемости клеток Гумпрехта.

3. Изменение активности миелопероксидазы при лекарственных и пес-тицидных токсикозах в полной мере отражает смену фаз общего; адаптационного синдрома при стрессе: сначала повышается, затем стабилизируется и при продолжающемся воздействии снижается. Уровень содержания липидов в клетках крови варьирует: при интоксикации крыс алюминия гидроксидом возрастает до 2,54±0,04 усл.ед. против 2,24±0,13 усл.ед. в контроле, при многократной обработке крупного рогатого скота бутоксом снижается до 2,79±0,06 усл.ед. против 2,90±0,06 усл.ед. в контроле.

4. Диагностической информативностью при хронической интоксикации бутоксом обладают холинэстераза, щелочная и кислая фосфатазы, уровень которых повышается у крупного рогатого скота после каждой обработки и остается повышенным через 30 суток после четвертой обработки. При этом исчезает выраженная у интактных животных корреляционная зависимость кислой фосфатазы от нейтрофилов и лимфоцитов, но возрастает корреляционная связь щелочной фосфатазы и моноцитов (гопьгг= -0,95 против гконтр = -0,37), а также холинэсте-разы и юных нейтрофилов (гопыг= 0,77 против гкошр= 0,02).

5. Передозировка лекарственных средств и пестицидов вызывает в большинстве случаев снижение содержания лейкоцитов в крови с усилением корреляции с общим белком (г0пыг= 0,92; гкошр=0,45) и нарушением корреляционной связи с холестерином (г0ПЬГГ= -0,09;

Гконгр. 0,91).

6. Энтеросорбция с применением полисорба ВП и зоокарба уменьшает степень выраженности гематотоксических эффектов, что проявляется нормализацией лейкограммы, восстановлением активности миелоперок-сидазы и уровня липидов в клетках крови. Однофакторный дисперсионный анализ подтверждает установленную закономерность и может быть использован для обоснования диагноза и прогноза.

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При проведении гематологических исследований с диагностической целью необходимо учитывать изменения, возникающие в системе крови под действием потенциальных токсикантов, в том числе лекарственных средств.

2. С целью профилактики гематотоксических эффектов при фармакотерапии следует строго соблюдать дозовые режимы и схемы применения лекарственных средств. При использовании пестицидов не допускать нарушения установленных регламентов их применения.

3. При возникновении гематотоксических эффектов показана детокси-кационная терапия с применением курсовой энтеросорбции.

4. В помощь ветеринарным специалистам, проводящим исследования по лекарственной токсикологии с использованием вероятностных и статистических методов, разработаны и изданы методические рекомендации «Методы статистической оценки гематотоксических эффектов лекарственных средств» (г. Омск, 2007).