Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Фармако-токсикологическая и терапевтическая оценка новых лекарственных форм анандина

На правах рукописи

□03064405

Черкай Злата Николаевна

ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ И ТЕРАПЕВТИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА НОВЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ АНАНДИНА

16.00 04 - Ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Санкт-Петербург - 2007

0 2 АВ Г 2007

003064405

Работа выполнена на кафедре фармакологии и токсикологи в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины» (ФГОУ ВПО «СПбГАВМ»)

Научный консультант - заслуженный деятель науки РФ

доктор ветеринарных наук, профессор Соколов Владимир Дмитриевич

Официальные оппоненты: доктор биологических наук

Андросов Николай Сергеевич; доктор ветеринарных наук, профессор Уразаев Дмитрий Николаевич; доктор биологических наук, профессор Великанов Валерий Иванович

Ведущая организация - ФГУ «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ «ВГНКИ»)

Защита состоится «11» октября 2007 года в «13 00» часов на заседании диссертационного совета Д.220.059.03 при ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины» по адресу: 196084, Санкт-Петербург, ул. Черниговская, 5; тел./факс (812) 388-36-31,388-10-55 Email: mail@spbgavm.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины».

Автореферат разослан «_»_2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

О.В.Узюмова

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Лекарственные средства являются важной составной частью практической и теоретической ветеринарной медицины. За последние десятилетия существенно расширились возможности фармакотерапии Это связано, прежде всего, с бурным развитием химико-фармацевтической промышленности и введением в терапевтическую практику новых лекарственных веществ Кроме того, достижения фундаментальных медико-биологических дисциплин позволяют на молекулярном уровне выявлять новые важные аспекты патогенеза распространенных заболеваний и определять характер воздействия лекарственных препаратов, что существенно влияет на развитие ветеринарной фармакологии (Соколов В Д. и др., 1989 - 2005, Шахтместер И.Я., Тенцова И.Я., Ажгихин И.С ,2000, Бацанов Н П., Булгаков Р.И., Алиев A.A., 2001; Карпенко Л.Ю , Вахта А А ; 2005, Калинин Н.М , Федорова H.A., 2005)

Обеспечить потребности ветеринарных врачей, лечебных учреждений и владельцев животных в лекарственных средствах сегодня невозможно без развития и поддержки отечественной фармации (Бацанов Н.П , Булгаков Р.И , Алиев А А., 2001)

Учитывая вышесказанное, особый научный и практический интерес представляет создание политропных фармацевтических препаратов Перспективность тенденции синтеза таких лекарственных средств определяет их фармакологическая способность одновременно оказывать этиотропное, патогенетическое, симптоматическое и реабилитационное действие. Кроме того, согласно практическому опыту, такие лекарства более эффективны, менее токсичны, технологичнее в применении и практичнее с экономической точки зрения, по сравнению с использованием разрозненных препаратов (Соколов В .Д., 1997, Цепков А С, Девяткина И А , Данилевская Н.В., 2001; Смирнов П Н. и др., 2005; Мила-ев В Б , Шабалина Е В., Милаева О Н., 2006)

В мировой литературе, имеются многочисленные подтверждения, целесообразности использования индукторов эндогенного интерферона при вирусных и бактериальных инфекциях, а также в качестве противоопухолевых и иммуномодулирующих лекарственных средств (Ершов Ф И, 1996; Романцов М.Г., 1998, Фрейдлин И.С., 1998, Анников В В , Хапрова Т.С., 2006; Топурия Л Ю , 2006; Stites D P., Terr F.I, 1991; Bikova J., Keisha A, Barene 1,2003).

Связано это с тем, что с иммунобиологической точки зрения, ин-терфероны рассматриваются, прежде всего, как иммуномодуляторы, влияющие на процессы дифференцировки и функциональную активность эффекторных клеток иммунной системы (Т-лимфоцитов, макрофагов/моноцитов) Под действием интерферона повышается эффективность иммунного распознавания антигена и усиливается фагоцитарная и цитолитическая функции, направленные на элиминацию возбудителя и/или антигенно измененных клеток (Карпенко Л.Ю.,1997; Фрейдлин И С, 1998, Кузнецова Е С , 2002, Лямжапова Т.П., 2005, Сав-кеН Я М, ОавкеИ С1,1988; АгЬап Ь в, 2003)

Одним из перспективных индукторов эндогенных цитокинов является анандин (1,2-5,6 -ди-о-изопропилиден - а-В-глюкофураноза - 3-0 -- диметиламинопропил) - 10 - метиленкарбоксилат - 9-акридон) для инъекций, который обладает высокой биологической активностью, низкой токсичностью и отсутствием аллергенного, мутагенного и эмбрио-токсического действия на организм животных, хорошо сочетается с традиционными терапевтическими средствами. Перечисленные свойства анандина позволили предположить терапевтическую перспективность его включения с другими фармакологическими веществами (антибиотиками, пиретроидами и др.) в состав лекарственных форм для наружного применения (Коновалова В Н., Гринявичус, Дуденас Р 3 , 1979; Травкин О.В , Шведов О Г., Яковлева Е В.,1995, Гринберг Г.И , Этингова Н И., Андреева Н.Р , 1995, Ершов Ф И., 1999)

Наиболее известны в настоящее время и применяются в ветеринарной практике «Циклоферон» и «Анандин» (Мухина З.Н, Травкин О В., 1997, Черкай 3 Н , 2005-2006)

Поскольку среди многообразия болезней собак и кошек патологии кожи, ушей и глаз занимают особое место, а препараты, используемые для лечения, нередко рекрутируются из гуманной медицины, то разработка и внедрение новых эффективных ветеринарных препаратов для наружного применения является весьма актуальной.

В виду того, что болезни, как правило, возникают в условиях микробных ассоциаций на фоне сниженной резистентности организма, конструирование политропных лекарственных форм с включением в их структуру иммуномодулирующего компонента, представляет научный и практический интерес.

Цель работы. Разработать теоретическое, экспериментальное и клиническое обоснование перспективности создания лекарственных

форм для наружного применения с анандином и внедрить их в ветеринарную практику в качестве терапевтических средств и препаратов выбора для ветеринарных специалистов.

Задачи исследования

1. Разработать и обосновать рецептуру капель глазных-интраназальных с анандином.

2. Изучить безвредность анандиновых глазных-интраназальных капель на лабораторных животных.

3. Разработать нормативно-техническую документацию для капель глазных-интраназальных «Анандин» и определить условия контроля качества препарата в соответствии с требованиями, предъявляемыми к глазным каплям

4 Провести клинические испытания глазных-интраназальных капель «Анандин» и определить их терапевтическую активность при конъюнктивитах и инфекционном ринотрахеите кошек.

5 Разработать и обосновать лекарственную формулу ушных капель с анандином, обладающих противовоспалительным, антимикробным и регенерирующим действием (ушные капли «Анандин»)

6. Разработать и обосновать рецептуру ушных капель с анандином, обладающих противовоспалительным, антимикробным, регенерирующим и акарицидным действием (ушные капли «Анандин-плюс»).

7. Изучить безвредность и терапевтическую активность ушных капель «Анандин» и «Анандин-плюс» для лабораторных и мелких домашних животных (собак и кошек)

8 Установить методы контроля качества ушных капель с анандином Разработать нормативно-техническую документацию на ушные капли «Анандин» и «Анандин-плюс»

9 Изучить антимикотические свойства «Анандина для инъекций» in vivo в эксперименте

10. Разработать и обосновать рецептуру мази с анандином

11. Провести биотестирование мази «Анандин» и определить ее безвредность на лабораторных животных.

12. Установить терапевтическую активность мази «Анандин» при дерматитах у собак

13. Разработать нормативно-техническую документацию и методы контроля качества лекарственной формы «Анандин-мазь».

14 В сравнительном аспекте изучить терапевтические возможности и конкурентоспособность новых лекарственных форм «Анан-дина»

Научная новизна. Впервые разработаны и предложены фармацевтической промышленности рецепты следующих лекарственных форм с анандином капли глазные-интраназальные «Анандин», 2%-ная мазь «Анандин»; капли ушные «Анандин»; капли ушные «Анандин-плюс»

Дано теоретическое и практическое обоснование их лекарственных формул В сравнительном аспекте детально изучены фармако-токсикологические свойства новых лекарственных форм анандина.

Установлена безвредность капель глазных-интраназальных «Анандин» на лабораторных животных и соответствие их качества жестким требованиям, предъявляемым Государственной фармакопеей XI к глазным лекарственным формам Разработаны чувствительные и воспроизводимые методики количественного определения лекарственного вещества (анандина) в глазных каплях, позволяющие осуществить контроль их качества. На основании клинических исследований показана терапевтическая эффективность капель глазных-интраназальных «Анандин» при конъюнктивитах и инфекционном ринотрахеите кошек.

Впервые изучены антимикотические свойства анандина in vivo Выяснены фармако-токсикологические свойства 2%-ной мази «Анандин». На основании разностороннего биотестирования установлена терапевтическая активность 2%-ной мази «Анандин» при питироспорозе и поверхностном кандидозе у собак.

Впервые разработаны рецепты отечественных ушных капель по-литропного действия «Анандин» и «Анандин-плюс»

Изучены: безвредность для животных, противовоспалительная и антимикробная активность ушных капель «Анандин». Отработаны схемы применения препарата при отитах у собак

Исследована акарицидная активность ушных капель «Анандин-плюс» Доказана их терапевтическая активность и разработана оптимальная схема применения при отодектозе у кошек и собак, в том числе осложненном отитом. Предложена воспроизводимая методика количественного определения анандина в составе ушных капель, позволяющая контролировать их качество.

Теоретически обоснована и экспериментально доказана стратегия создания сложных лекарственных форм для наружного применения с целью достижения многопланового терапевтического действия (анти-

микробного, противовирусного, противогрибкового, противовоспалительного, регенерирующего и т д)

Приоритет проведенных исследований подтвержден техническими условиями, регистрационными удостоверениями и сертификатами соответствия на каждый вид лекарственной формы анандина, а также патентом «Способ лечения отодектоза кошек».

Практическая значимость работы. Для применения в ветери-нарно-медицинской практике при работе с мелкими домашними животными предложены новые конкурентоспособные лекарственные формы капли глазные-интраназальные «Анандин», 2%-ная мазь «Анандин», ушные капли «Анандин» и ушные капли «Анандин-плюс», имеющие ряд преимуществ Разработаны эффективные схемы применения новых лекарственных препаратов для собак и кошек в терапевтических целях Обоснована новая оригинальная концепция включения в рецептуру лекарственных форм для наружного применения веществ обладающих иммуномодулирующей и интерфероногенной активностью

На основании данных, полученных в ходе экспериментальных исследований, научно обоснованы рациональные составы и технология глазных-интраназальных капель «Анандин», ушных капель «Анандин» и «Анандин-плюс», 2%-ная мазь «Анандин».

Многолетние научно-практические испытания лекарственных форм с анандином завершены созданием и утверждением четырех видов технических условий

ТУ 9337-003-46913214-00 Капли глазные-интраназальные «Анандин», ТУ 9337-002-46913214-00 Мазь "Анандин"», ТУ 9337-004-46913214-00 Капли ушные "Анандин"», ТУ 9337-005-46913214-00 Капли ушные "Анандин-плюс"»

На все лекарственные формы в Департаменте Ветеринарии Министерства сельского хозяйства Российской Федерации нами получены Регистрационные удостоверения: РУ № Р078-2-2 0-0942 на препарат капли глазные-интраназальные "Анандин"; РУ № Р078-2-2.0-0940 на препарат капли ушные "Анандин"; РУ № Р078-2-2 0-0941 на препарат капли ушные "Анандин-плюс", РУ № Р078-2-2 0-0943 на препарат мазь "Анандин".

Обобщенные данные наиболее ценных научно-практических результатов представлены в монографии «Новые лекарственные формы индуктора эндогенного интерферона - анандина. Опыт применения в ветеринарной медицине» (2006) и внедрены в ветеринарных клиниках Северо-Западного и Центрального региона Российской Федерации

(Санкт-Петербурге, Мурманске, Калининграде, Ярославле и Смоленске) с лечебной целью для собак и кошек

Результатом фармако-токсикологических и клинических исследований стало получение сертификата соответствия № РОСС 1Ш ПР15.В 12549, № 0001.11ПР15 на серийный выпуск продукции «Вет-препараты на основе Анандина» согласно приложению № 1142784. 10%-ный раствор «Анандина для инъекций», капли глазные-интраназальные "Анандин", мазь "Анандин", капли ушные для собак и кошек " Анандин" и "Анандин-плюс".

На основе объективных научно-практических данных разработаны и утверждены Временные наставления по применению «Ветеринарных препаратов на основе анандина» (1998), которые заменены в настоящее время Инструкциями по применению на следующие лекарственные формы: капли глазные-интраназальные «Анандин», мазь «Анандин»; капли ушные «Анандин» и «Анандин-плюс», утвержденные Россель-хознадзором России (2006)

В 2003 году нами получен Аттестат ФГУ «Всероссийский государственный научно-исследовательский институт контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов», удостоверяющий соответствие требованиям, предъявляемым к производству ветеринарных препаратов, и наличие условий для выпуска капель глазных-интраназальных «Анандин», 2%-ной мази «Анандин», ушных капель «Анандин» и «Анандин-плюс»

Репрезентативная информация о научно-исследовательской работе используется в учебном процессе ветеринарных факультетов высших учебных заведений Минсельхоза России.

На защиту выносятся следующие положения и результаты

1 Результаты теоретических и экспериментальных исследований по разработке рецептуры и технологии новых лекарственных форм анандина (3 вида капель и мазь)

2. Результаты фармако-токсикологического анализа их безвредности

3. Результаты клинических испытаний по изучению терапевтической активности глазных-интраназальных капель «Анандин» при конъюнктивитах и инфекционном ринотрахеите кошек.

4. Результаты клинических испытаний по изучению терапевтической эффективности ушных капель «Анандин» при отитах у собак

5. Результаты клинических испытаний по изучению терапевтической активности ушных капель «Анандин плюс» при отодектозе кошек и собак

6 Результаты изучения антимикотической активности «Анандина для инъекций»

7. Результаты клинических испытаний мази «Анандин» при пи-тироспорозе и поверхностном кандидозе у собак

Апробация результатов диссертации. Основные положения диссертационной работы доложены и одобрены на ежегодных заседаниях Ученого совета ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская Государственная академия ветеринарной медицины» (ФГОУ ВПО «СПбГАВМ»), научных конференциях профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников, молодых ученых и аспирантов ФГОУ ВПО «СПбГАВМ» (1995-2003), Международных межвузовских научно-практических конференциях «Новые фармакологические средства в ветеринарии» (Санкт-Петербург, 1998-2004, 2007 гг.), конференции Ассоциации практикующих ветеринарных врачей «Актуальные проблемы ветеринарной медицины мелких домашних животных» (Санкт-Петербург, 1999), Международных симпозиумах «Современные проблемы ветеринарной диетологии и нутрициологии» (2001-2005 гг.), Международных научно-практических конгрессах «Ветеринария Зоотехния» (2001-2006 гт.) Ряд выступлений отмечены Почетными дипломами.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 40 научных работ, из них 10 статей в рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК России, 10 - в материалах международных и российских конференций, 3 учебных пособия, в том числе «Новые лекарственные формы индуктора эндогенного интерферона - анандина Опыт применения в ветеринарии» (Гриф Минсельхоза России, 2006)

Объем и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 308 страницах компьютерного текста и включают введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, заключение, выводы, практические предложения, список использованной литературы (460 источников, из которых 328 отечественных и 132 иностранных). Работа содержит 36 таблиц, 19 схем, 4 цветных фотографии и 40 приложений.

ПРОГРАММА НАУЧНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1 Материал, объекты и методы исследований

Работа выполнена в течение 1998 - 2007 годов на базе кафедры фармакологии и токсикологии ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины», лаборатории научно-исследовательского общества «Медитэр», а также в государственных ветеринарных станциях по борьбе с болезнями мелких домашних животных и частных ветеринарных клиниках Санкт-Петербурга, Мурманска, Калининграда, Смоленска и Ярославля

Опыты были поставлены на 120 белых мышах, 20 белых крысах, 60 морских свинках, 95 кроликах-альбиносах, 335 кошках и 620 собаках различных пород

Объектом исследований стало сложное низкомолекулярное химическое соединение —1,2.5,6-ди-о-изопропилиден-а-В-глюкофураноза-3-0-(1Ч,]Ч-диметиламинопрогтал)-10-метиленкарбо-ксилат-9-акридон, именуемое далее как «Анандин®», включенное в состав лекарственных прописей четырех новых лекарственных форм глазных-интраназальных капель «Анандин», двух видов капель для ушей «Анандин» и «Анандин плюс» и 2%-ной мази «Анандин»

Все исследования по безвредности новых лекарственных форм анандина проводили по общепринятым в фармакологии и токсикологии методам, в соответствии с Государственной Фармакопеей Российской Федерации (1990)

Дифференциальная диагностика дерматитов осуществлялась по методу, описанному РМ. Васильевым (1995) На границе здорового и пораженного участков кожи у собак делали соскоб и готовили три препарата Первый - нативный, содержащий соскобленный эпидермис Его помещали на предметное стекло с 2 каплями 10%-ного раствора едкого калия и проводили микроскопию при малом (8x7) и среднем (40x7) увеличении. Это позволяло исключить паразитарные болезни кожи и сделать предварительное заключение о наличие в эпидермальных клетках и волосяных луковицах микроорганизмов и микромицетов

Кроме того, при появлении на месте соскоба тканевой жидкости и крови, готовили второй и третий препараты - мазки-отпечатки Оба препарата окрашивали по методу Филипсона и подвергали микроскопии при большом (90x7) увеличении Второй препарат служил для идентификации микрофлоры в пораженном очаге На основании третьего препарата выводили цитограмму, для выведения которой подсчитывали 200 клеток.

В ходе эксперимента определяли содержание лизосомально-катионных белков в нейтрофильных гранулоцитах капиллярной крови области поражения по методу М.Г Шубича (1974) и миелопероксидазы - по методу Грейма-Кнолля (1963); проводили количественное определение аутомикрофлоры кожи по H.H. Клемпарской и ГА. Шальновой (1966) и pH кожи - по Г.П. Лепневу в модификации М.Я. Левина (1993)

Кровь для исследования брали до кормления из лучевой вены в две пробирки, в одной ее стабилизировали, а другая служила для получения сыворотки В крови определяли число эритроцитов и лейкоцитов на СФЭКе, количество гемоглобина - на ФЭКе по Г.В. Дервизу и А И. Воробьевой (1959), скорость оседания эритроцитов по Панченкову, мазки крови для выведения лейкограммы окрашивали по методу Филипсо-на, содержание лизосомально-катионных белков в нейтрофилах и содержание миелопероксидазы определяли методами описанными выше, фагоцитарную активность нейтрофилов - по В.В Никольскому (1974), общий белок - рефрактометрическим способом, содержание иммуноглобулинов определяли методом дискретного осаждения по Ж Бадину и Ф. Роусселету в модификации М.А. Костыны (1983). Идентификацию Ти B-лимфоцитов в одном препарате проводили методом Е-РОК и ЗС-РОК (1985).

Статистическую обработку полученных данных проводили согласно методике Г С Григоряна с соавт. (1988)

Безвредность новых лекарственных форм анандина изучали согласно методам, представленным в руководстве М А Беленького (1963)

Моделирование грибковых инфекций и изучение противогрибковой эффективности 10%-ного раствора «Анандина для инъекций» и 2%-ной мази «Анандин» осуществляли согласно методикам, описанным Т.М Кокушиной, А П Кашкиным и О Н.Экземпляровым (1983).

Среднюю продолжительность жизни белых мышей с экспериментальной моделью генерализованного кандидоза рассчитывали по методу Пригге, рекомендуемому Г.Н. Першиным (1959), для вычисления средней гармонической. Гармоническая средняя продолжительность жизни подопытных животных в этом случае получается следующим образом: сумма обратных величин продолжительности жизни погибших животных делится на общее количество животных в группе. От полученного частного берется обратная величина, которая и является гармонической средней продолжительности жизни отдельного животного данной группы.

Широкие клинические испытания проводили в пяти городах Российской Федерации на двух видах мелких домашних животных, кошках

и собаках. Терапевтическую активность глазных-интраназальных капель «Анандин» изучали при остром конъюнктивите и инфекционном ринот-рахеите кошек, в сравнительном аспекте, одним животным назначая только глазные-интраназальные капли, другим в сочетании с 10%-ным раствором «Анандина для инъекций» Лечебную эффективность ушных капель «Анандин» при острых наружных отитах у собак изучали в сравнении с препаратами-аналогами, используемыми в медицинской и ветеринарной врачебной практике Сравнительную терапевтическую активность ушных капель «Анандин плюс» изучали при отодектозе и отодек-тозе, осложненном отитом, у кошек и собак Антимикотическую активность 2%-ной мази «Анандин» изучали при питироспорозе и поверхностном кандидозе кожи у собак Диагнозы при проведении широких клинических испытаний в каждом случае ставили комплексно с учетом клинической картины, лабораторного подтверждения и эпизоотической ситуации.

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 2.2.1. Обоснование лекарственной формулы глазных-интраназальных капель «Анандин»

Частые респираторные инфекции служат индикатором иммуноде-фицитных состояний и связанных с ними осложнений, например, рецидивирующий, хронический ринит. Актуальность создания эффективных противовирусных глазных и интраназальных лекарственных форм очевидна.

В этой связи было предложено в качестве базисного лекарственного вещества использовать анандин в виде 10%-ного стерильного раствора по ТУ 080-64-19-50 в количестве 20% от общего объема раствора В качестве растворителя, для обеспечения изотоничности и стерильности, использовали воду для инъекций (ГФ X, ст 74) Для пролонгирования действия и замедления всасывания, а также чтобы придать вязкость раствору в состав лекарственной формы вводили глицерин (ГОСТ 625975) в количестве 5% от общего объема. Воду для инъекций вводили в состав препарата в количестве необходимом для получения 100% объема лекарственного средства

Высокая противовирусная активность анандина в отношении ДНК- и РНК-геномных вирусов, способность индуцировать синтез интерферона в больном организме ГНР-а, активирующего естественные киллеры, ингибирующего репродукцию вирусов и пролиферацию клеток и ШБ-у, проявляющего иммунорегуляторные и антипролифератив-

ные свойства, а также усиливающего эффекторные функции макрофагов, их антимикробную активность; стимулирующего выработку тумор-некротизирующего фактора-альфа, низкая токсичность и отсутствие аллергенных свойств явились основополагающими факторами создания новой лекарственной формы на его основе.

Схема 1

Рецепт глазных-интраназальных капель «Анандин»

Rp • Sol. Anandini 10% pro mjectionibus - 20 ml Glycenni sterilisatae - 5 ml

Aquae pro mjectionibus ad 100 ml M.f.solutio stenlisata D S Капли глазные-интраназальные

Разработанный препарат обладает стерильностью, удовлетворяя первое и основное требование, предъявляемое к глазным каплям. В связи с тем, что концентрация лекарственных веществ в глазных каплях не превышает 3% препарат отвечает требованию - изотоничности, так как это означает, что осмотическое давление полученного раствора приближается к осмотическому давлению слезной жидкости. Из чего следует, что болевой эффект при инсталляции его в глаза будет нивелирован Использование глицерина в составе лекарственной формы обеспечивает ее вязкость, способствует пролонгированию терапевтического действия на месте приложения и стабильности препарата, что удовлетворяет третьему требованию. Отсутствие механических примесей заведомо обеспечило агрегатное состояние составляющих прописи, а также обязательное фильтрование в конце технологического цикла приготовления лекарственной формы

Соответствие рецепта глазных-интраназальных капель «Анандин» основным положениям Государственной Фармакопеи X (ст.319) позволило нам продолжить исследования, следующим этапом которых стало изучение безвредности и терапевтической активности нового препарата.

2.2.2. Изучение местного раздражающего действия глазных-интраназальных капель «Анандин»

При изучении местного действия на конъюнктиву испытуемые капли инсталлировали однократно кроликам-альбиносам, с массой тела 2,0-2,5 кг и многократно (4 раза в день в течение недели) кошкам раз-

личных пород, с массой тела 2,5-5,5 кг Контрольным животным инсталлировали по две капли изотонического раствора натрия хлорида для инъекций

Установили, что капли глазные-интраназальные «Анандин» не обладают местным раздражающим действием на слизистую оболочку глаз кроликов и кошек. Признаки воспаления, отек, гиперемия, слезотечение, ожег и болевая реакция отсутствовали, состояние век было удовлетворительным.

2.2.3. Изучение аллергенных свойств глазных-интраназальных капель «Анандип»

В опыте задействовали 10 кроликов-альбиносов, с массой тела 2,0-2,5 кг. Пять кроликов сенсибилизировали, пять - являлись контрольными. Для сенсибилизации использовали дозу, составляющую одну каплю тестируемого препарата. Препарат в указанной дозе инсталлировали в конъюнктивальный мешок каждого глаза кроликам из опытной группы, ежедневно в течение трех суток. Затем делали перерыв и на 8-й день вводили еще один раз в той же дозе. Спустя 14 дней с момента первой инсталляции препарата, его в той же дозе вносили в конъюнктивальный мешок обоих глаз как опытных, так и контрольных животных Наблюдение вели в течение первого часа с момента введения разрешающей дозы В результате опыта установили что новый препарат не вызывает воспаления в глазу, слезотечения и анафилактического шока у лабораторных животных. Следовательно, глазные-интраназальные капли «Анандин» не обладают аллергенными свойствами.

2.2.4. Клинические испытания глазных-интраназальных капель «Анандин» при остром конъюнктивите кошек

В клинических исследованиях были задействованы 60 кошек различных пород в возрасте от 2,5 до 5 лет, с массой тела от 2 до 5,5 кг с диагнозом острый конъюнктивит Условно было сформировано 2 группы по 30 животных в каждой. Животным из 1-ой опытной группы в терапевтических целях назначали капли глазные-интраназальные «Анандин», а кошкам из 2-ой опытной группы - тетрациклиновую глазную мазь. Оба препарата назначали курсом- 4 раза в день, в течение 10 дней

Об эффективность лечебного действия препаратов судили по срокам купирования патологического процесса, скорости исчезновения не-

благоприятных клинических признаков, стабильности изменения симптомокомплекса под действием лекарств, отсутствию рецидивов болезни

В результате проведенного терапевтического курса в 1-ой опытной группе, где применяли новые глазные-интраназальные капли «Анандин» выздоровели 24 кошки (80%), для 6-ти кошек с конъюнктивитом, вызванным хламидиями понадобилось дополнительное назначение этиотропного препарата. Во 2-ой опытной группе, где применяли тетрациклиновую глазную мазь, констатировали выздоровление всех кошек.

Таким образом, было показано, что в случае острого конъюнктивита, обусловленного разнообразными возбудителями, назначение только капель глазных-интраназальных «Анандин» может быть не достаточным для выздоровления 100% кошек

2.2.5. Терапевтическая активность глазных-интраназальных капель «Анандин» при инфекционном ринотрахеите

Клинические испытания проводили на 75 кошках различных пород в возрасте от 1 до 3 лет, с массой тела от 2 до 6 кг, больных инфекционным ринотрахеитом Поскольку животных подбирали для опыта по принципу аналогов, то у всех пациентов отмечали хорошо выраженный острый ринит и конъюнктивит. Диагноз на общее заболевание ставили комплексно с учетом анамнеза, клинических признаков, эпизоотической ситуации и данных лабораторного исследования Было сформировано 3 группы по 25 особей в каждой. Кошкам из 1-ой опытной группы назначали- капли глазные-интраназальные «Анандин» 3 капли/глаз, 3-4 раза в день в течение 10 дней; ампициллин или окситетрациклин в терапевтических дозах в течение 5 дней, для контроля развития возможных осложнений, обусловленных секундарной бактериальной микрофлорой, а также витамины А, С и группы В курсом в терапевтических дозах. Животным из 2-ой опытной группы назначали аналогично, капли глазные-интраназальные «Анандин», но в течение недели, а также «Анандин для инъекций» из расчета 10 мг/кг массы тела подкожно или внутримышечно 1 раз в сутки, 3 дня подряд и витамины А, С и группы В курсом. Пациентам из 3-ей опытной группы назначали традиционное лечение, заключающееся в применении антибиотиков широкого спектра действия, с целью предупреждения развития вторичной бактериальной инфекции. А именно, парэнтерально назначали ампициллин или окситетрациклин в терапевтических дозах в течение недели, тетрациклиновую глазную

мазь 3-4 раза в день и витамины, указанные выше, в лечебных дозах курсом.

На протяжении всего курса лечения осуществляли ежедневный мониторинг за состоянием здоровья пациентов, а на десятый день анализировали сравнительную эффективность лечения во всех группах.

Анализируя полученные результаты терапии в динамике необходимо подчеркнуть следующие моменты Несмотря на то, что одинаково успешным было лечение животных в 1-ой и 2-ой опытных группах, скорость купирования неблагоприятных клинических признаков была быстрее, и выздоровление пациентов наступало раньше во 2-ой опытной группе. По нашему мнению, это было обусловлено, во-первых, местным применением препарата при вирусном конъюнктивите, во-вторых, за счет системного действия как противовирусного, так и иммуномодули-рующего «Анандина для инъекций» и, в-третьих, за счет ограничения стрессового воздействия манипуляции инъецирования, благодаря короткому - 3-х-дневному курсу применения анандина. В итоге был получен быстрый и стойкий терапевтический эффект.

По результатам лечения животных из 3-ей опытной группы, следует отметить, что отсутствие этиотропного компонента терапии, безусловно, затягивает процесс выздоровления. В нашем случае, терапевтический курс (10 дней) оказался недостаточным для выздоровления семи пациентов из двадцати пяти Таким образом, терапия кошек, страдающих герпесвирусной инфекцией, с включением препаратов анандина является эффективной и сокращает сроки выздоровления животных в среднем на 4 дня

2.2.6. Обоснование рецепта ушных капель «Анандин»

Наружный отит - часто встречающийся диагноз у собак В связи с этим, разработка и внедрение новых препаратов для лечения животных с отитами всегда будет актуальной, что обусловлено существованием многообразия возбудителей, разнообразием их сочетаний в процессе течения болезни, индивидуальными особенностями организма пациентов и скоростью их привыкания к тем или иным препаратам.

Примерно двадцать лет назад для лечения мелких домашних животных, страдающих отитами, специалисты использовали медицинские препараты, или антибиотикотерапию. В настоящее время появились и ветеринарные препараты Однако по объективным причинам вопрос создания новых лекарственных форм в этой области остается открытым

В связи с этим нами был разработан рецепт новой лекарственной формы анандина - ушных капель.

Схема 2

Рецепт ушных капель «Анандин»

Rp.- Sol Anandmi 10% pro mjectionibus -1ml

Olei Ricmi - 0,2 ml

Sol Gramycidim С spintuosae 2% - 0,0125 ml Spmtus isopropihci 9,8% - 3,75 ml

Aquae destillatae ad 5 ml

M D S Капли ушные

Согласно рецепту в состав новой лекарственной формы для наружного применения - ушных капель «Анандин» были включены следующие компоненты. Стерильный 10%-ный раствор анандина для обеспечения мобилизации местных защитных и противовоспалительных реакций, за счет: стимуляции выработки эндогенного интерферона, способного осуществлять антибактериальное, противовирусное и противогрибковое действие, повышения функциональной активности Т-лимфоцитов и макрофагов, обеспечивающих нейтрализацию патологических агентов; выброса интерлейкинов, оказывающих противовоспалительное действие. Масло как заживляющее и очищающее средство. Антибиотик Грамицидин С, используемый в форме 2%-ного спиртового раствора, - незаменимый антимикробный компонент широкого спектра действия, в отношении стафилококков, стрептококков, синегнойной палочки, протея. Изопропиловый спирт и дистиллированная вода, выполняя функцию растворителя, объединяют все перечисленные лекарственные вещества в единую лекарственную форму - ушные капли.

2.2.7. Изучение безвредности ушных капель «Анандин»

Установлено, что анандин относится к группе низкотоксичных препаратов и при парэнтеральном применении выводится из организма в неизмененном виде в течение 16-20 часов через почки. Что же касается других лекарственных веществ, входящих в состав капель, то они очень давно применяются в ветеринарии и медицине в составе препаратов для наружного применения и, в качестве ингредиентов ушных капель «Анандин» они содержатся в такой малой дозе, что говорить о резор-бтивном токсическом действии их не приходится. При этом с точки зре-

ния безвредности наибольший интерес представляло - обладают ли ушные капли «Анандин» местным раздражающим действием и аллергенным свойствами, то есть, не будет ли их применение оказывать дополнительное негативное действие на животное, страдающее отитом Поэтому мы изучили характер местного действия и аллергенные свойства новой лекарственной формы - ушных капель «Анандин» на кожу наружного слухового прохода здоровых домашних животных собак и кошек.

2.2.7.1. Изучение местного раздражающего действия и аллергенных свойств препарата в опытах на собаках

Местное раздражающее действие ушных капель «Анандин» изучали на собаках различных пород и возрастных групп В 1-ю опытную группу объединяли 10 щенков в возрасте 2 месяцев, которым инсталлировали испытуемый препарат по 2 капли в наружный слуховой проход правого уха, в левое ухо препарат не вносили, оно служило контролем. Процедуру осуществляли трехкратно в первый, третий и пятый дни, чтобы удостовериться в объективности результата. Во 2-ю опытную группу объединяли 10 собак в возрасте от 2 до 5 лет разных пород, которым в наружный слуховой проход правого уха инсталлировали ушные капли «Анандин» из расчета 2-3 капли 2 раза в день в течение 5 дней, в левое ухо препаратов не вносили - оно служило контролем

В результате установили- новая лекарственная форма не вызывает гиперемии, отека, шелушения, зуда и ожога на месте приложения у животных, то есть ушные капли не обладают местным раздражающим действием.

Аллергенные свойства новой лекарственной формы анандина изучали на 20 собаках в возрасте от 1 до 2,5 лет, клинически здоровых, принадлежащих к следующим породам французский бульдог, ста-фордширский терьер, немецкая овчарка, пекинес, ротвейлер. Собаки каждой породы принадлежали к одному помету, содержались в аналогичных условиях и получали примерно одинаковое питание Условно было сформировано 2 группы- опытная и контрольная, по 10 собак в каждой, из них по две собаки каждой породы представляли ту и другую группы. Собакам малых пород из опытной группы препарат вносили в каждое ухо по 3 капли, собакам крупных пород — по 5 капель по схеме: 1 раз в день, в течение 3-х дней подряд, затем еще один раз вносили препарат на 8-й день. На 14-й день с момента первичного применения ушных капель «Анандин» препарат инсталлировали, в указанной дозе

животным обеих групп. Наблюдение вели в течение первого часа с момента последнего применения лекарственного средства и спустя 1 сутки.

В результате установили: ушные капли «Анандин» не обладают аллергенными свойствами, поскольку на месте приложения препарата не наблюдали характерных для аллергии признаков (гиперемия, отек, сыпь, зуд).

2.2.7.2. Подтверждение безвредности нового препарата в опытах на кошках

Эксперимент по изучению возможного местного раздражающего действия ушных капель «Анандин» проводили на кошках различных пород, двух возрастных групп. В 1-ю опытную группу объединяли 10 котят в возрасте 3 месяцев, которым вносили изучаемый препарат в дозе

1 капля в наружный слуховой проход правого уха, в левое ухо служило контролем Процедуру осуществляли трехкратно в первый, третий и пятый дни. Во 2-ю опытную группу объединяли 10 кошек в возрасте от

2 до 3,5 лет разных пород, которым в наружный слуховой проход правого уха вносили ушные капли «Анандин» из расчета 2 капли 2 раза в день в течение 5 дней, а левое ухо служило контролем

В результате применения ушных капель «Анандин» котятам и кошкам разных пород не было установлено у препарата наличия местного раздражающего действия. Это выражалось в отсутствии клинических признаков, гиперемии, отека, шелушения кожи, зуда и следов ожога Кроме того, состояние кожи, как правого, так и левого уха экспериментальных животных не имело визуальных отличий по перечисленным параметрам

Аллергенные свойства ушных капель «Анандин» изучали на 20 кошках в возрасте от 2,5 до 5 лет, клинически здоровых, принадлежащих к следующим породам, сиамской, сибирской, персидской и беспородных животных. Было сформировано 2 группы: опытная и контрольная, по 10 кошек в каждой, из них по две кошки каждой породы и четыре беспородных представляли ту и другую группы. Всем кошкам из опытной группы препарат вносили в каждое ухо по 2 капли по схеме. 1 раз в день, в течение 3-х дней подряд, затем еще один раз вносили препарат на 8-й день. На 14-й день с момента первичного применения ушных капель «Анандин» препарат инсталлировали, в указанной дозе животным из обеих групп. Наблюдение вели в течение первого часа с мо-

мента последнего применения лекарственного средства и спустя 1 сутки

В результате установили ушные капли «Анандин» не обладают аллергенными свойствами, поскольку при применении их кошкам констатировали отсутствие характерных для аллергии признаков как через 1 час с момента последнего применения лекарственного средства, так и спустя 1 сутки.

2.2.8. Определение антимикробных свойств ушных капель «Анандин» in vivo

В виду того, что возбудителями воспаления наружного слухового прохода у собак наиболее часто являются стафилококки, а- и ß-гемолитические стрептококки и протей мы применили новую лекарственную форму - ушные капли «Анандин» при инфекциях наружного уха с учетом профилирующего патологического действия одного из трех перечисленных возбудителей (на основании бактериологического исследования). Сформировали 6 опытных групп по 10 собак в каждой Животные относились к разным породам, возраст их колебался от 2,5 до 6 лет, масса тела - от 7 кг до 35 кг. Для лечения животных из трех опытных групп использовали ушные капли «Анандин», а для собак из трех контрольных групп - специально подтированные антибиотики для каждого животного индивидуально, в зависимости от чувствительности основного возбудителя спровоцировавшего болезнь.

Животным из трех опытных групп назначали курсом ушные капли «Анандин» по схеме 3-4 капли в каждое ухо два раза в день в течение двух недель (в особо трудных случаях предполагалось продление курса терапии еще на одну неделю) Каждой собаке из 4-й контрольной группы назначали на основании индивидуальной антибиотикограммы тот бактерицидный препарат, который показывал наилучший результат in vitro в отношении Staphylococcus mtermedius Каждому животному из 5-й контрольной группы назначали на основании индивидуальной антибиотикограммы тот бактерицидный препарат, который показывал наилучший результат m vitro в отношении Streptococcus spp. И, наконец, каждому пациенту из 6-й контрольной группы назначали на основании индивидуальной антибиотикограммы тот бактерицидный препарат, который показывал наилучший результат in vitro в отношении Proteus vulgaris Среди препаратов можно назвать: амоксиклав, цефалексин, цефо-таксим, цефазолин энрофлоксацин, линкомицин, клоксациллин, неоми-цин, гентамицин и некоторые другие. Антибиотики назначали по пока-

заниям, соблюдая дозирование и кратность применения для каждого препарата в отдельности на основании инструкции по применению, сроком от 2 до 3-х недель. Перед первичным применением лекарственных средств каждому животному проводили предварительную санацию наружного слухового прохода, которая заключалась в удаление шерсти из слухового прохода и промывании его теплым стерильным изотоническим раствором натрия хлорида или официнальным раствором хлоргек-сидина. При осуществлении повторных лечебных манипуляций, по обстоятельствам производили освобождение наружного слухового прохода или сухим стерильным ватным тампоном, или смоченным обозначенными препаратами Об эффективности проводимого лечения судили по срокам купирования патологических симптомов и скорости выздоровления больных собак.

Таблица 1

Сравнительный анализ эффективности ушных капель «Анандин» при лечении собак с диагнозом наружный отит

Группа Количество больных животных Количество здоровых животных, к

7 дню 14 дню 21 дню

1-я опытная 10 2 8 -

2-я опытная 10 1 9 •

3-я опытная 10 0 10 -

4-я контрольная 10 2 6 2

5-я контрольная 10 2 5 3

6-я контрольная 10 0 7 3

Полученные результаты свидетельствуют о том, что антимикробная терапия была подобрана граммотно на основании учета чувствительности микробов к препаратам, однако этого оказалось недостаточно для восстановления положительного status quo в течение 2 недель. В то же время, обеспеченное ушными каплями «Анандин» иммуномоду-лирующее, противовоспалительное и регенерирующее действие сыграло положительную роль в достижении более быстрого терапевтического эффекта и позволило справиться с болезнью всем животным в течение двух недель. Повторное бактериологическое исследование ушного секрета подтвердило эффективность всех используемых в эксперименте

препаратов. Однако, новая лекарственная форма - ушные капли «Анан-дин» не только обладает эффективным противомикробным действием по отношению к таким возбудителям как Staphylococcus mtermedius, Streptococcus spp и Proteus vulgaris, но и сокращает сроки выздоровления животных в среднем на 1 неделю.

2.2.9.Клинические испытания ушных капель «Анандин»

Широкие клинические испытания ушных капель «Анандин» проводили в сравнении с препаратами-аналогами в нескольких городах РФ на собаках различных пород и возраста с диагнозом острый наружный отит. В качестве комплексных препаратов-аналогов для сравнительной оценки терапевтической активности нового препарата использовали следующие официнальные ушные капли: «Софрадекс®» (содержащий в своем составе неомицин, грамицидин, дексаметазон), «Аури-кан®» (метасульфобензоат натрия, гексамедина изотионат, тетракаи-на гидрохлорид, линдан) и «Отоферонол®» (циклоферон, изопропило-вый спирт, полиэтиленоксид)

В эксперименте задействовали 400 собак, которых условно подразделили на 4 опытные группы Всем животным лекарственные препараты назначали 2 раза в день в течение 10 дней, в дозе для собак малых пород - 3 капли, для средних и крупных пород - 4-5 капель в каждое ухо, для «Аурикана»- 5-10 капель Пациентам из 1-ой опытной группы закапывали ушные капли «Анандин», из 2-ой опытной группы - «Софрадекс», из 3-ей опытной группы - «Аурикан», из 4-ой опытной группы - «Отоферонол». На протяжении всего эксперимента вели наблюдение за изменениями клинической картины болезни, отмечали сроки купирования патологического процесса

Полученные данные наглядно иллюстрируют, что при первичном остром наружном отите лекарственные средства дают положительный терапевтический эффект более чем в 60% случаев, особенно если в их состав входят антибиотики или антисептики широкого спектра действия, а также глюкокортикоиды и местные анестетики («Софрадекс» и «Аурикан»). Однако следует особенно подчеркнуть, хороший терапевтический результат, полученный в 1-й опытной группе, где применяли новый лекарственный препарат - ушные капли «Анандин» В его составе не было ни глюкокортикоидов, ни местных анестетиков, но количество исцелившихся животных составило 92% Высокий противовоспалительный эффект от применения новых ушных капель был обусловлен фармакологическими эффектами «Анандина», а именно способностью

индукции высоких титров эндогенного интерферона в больном организме, запускающего каскад выработки противовоспалительных цитокинов Содержание Грамицидина С в составе капель, позволило оказать быстрое и сильное бактерицидное действие, что также способствовало выздоровлению большинства пациентов к 10-му дню в этой группе

В группах, где применяли: «Софрадекс» к 10-му дню выздоровело 95% собак, «Аурикан» - 94%, «Отоферонол» - 64% Самый низкий лечебный эффект получен в 4-й опытной группе. Следовательно, одного интерфероногенного препарата недостаточно для исцеления от острого гнойного отита Залогом успешной терапии может быть лишь его сочетание с антибиотиками

Таким образом, по терапевтической эффективности новый отечественный лекарственный препарат - ушные капли «Анандин», не уступает препаратам-аналогам Аурикану и Софрадексу, превосходя Отоферонол, при лечении острого наружного отита у собак, являясь приемлемым по своей экономической стоимости для широкого круга потребителей

2.2.10. Обоснование рецепта ушных капель «Анандин плюс»

В международной ветеринарной практике для лечения животных, страдающих отодектозом, предложен целый ряд препаратов из разных химических групп. Однако наиболее перспективными лечебными средствами при отодектозе плотоядных считают пиретроиды в виду их высокой акарицидной способности и сравнительно низкой токсической активности.

Схема 3

Рецепт ушных капель «Анандин плюс» (1) Rp.: Sol Anandim 10% pro injectionibus - 1 ml Olei Ricini - 0,2 ml

Sol Gramycidini С spmtuosae 2% - 0,0125 ml Spintus isopropilici 9,8% - 3,75 ml

*Permetnm - 0,0025

Aquae destillatae ad 5 ml

M D. S. Капли ушные.

Нами был модифицирован рецепт ушных капель «Анандин» включением синтетических пиретроидов перметрина или циперметри-на, тем самым, обеспечив препарату бактерицидные, регенерирующие и акарицидные свойства.

Схема 4

Рецепт ушных капель «Анандин плюс» (2) Rp.: Sol. Anandim 10% pro injectionibus - 1 mi Olei Rxcini - 0,2 mi

Sol Gramycidim С spmtuosae 2% - 0,0125 mi Spintus isopropilici 9,8% - 3,75 mi

* Cipermetrini - 0,0015

Aquae destillatae ad 5 mi

M. D. S Капли ушные

Циперметрин обладает более сильными акарицидными свойствами (примерно в 2 раза) по сравнению с перметрином, поэтому его количество в рецепте уменьшено на 0,001 г, что составляет около 40%

2.2.11. Клинические испытания ушных капель «Анандин плюс» при отодектозе кошек

Терапевтическую эффективность капель «Анандин плюс» изучали в сравнении с двумя препаратами, наиболее часто используемыми в практике ветеринарного врача мазью «Акаробор» и «Неостомозаном».

Клинические испытания ушных капель «Анандин плюс» проводили на 120 кошках, различных пород, с массой тела 2,5-5,5 кг Перед началом испытаний проводили клинический осмотр животных и по принципу аналогов формировали опытные группы по 20 кошек в каждой Методом микроскопии у животных был подтвержден диагноз отодектоз Каждый препарат применяли в 2-х группах- в одной - кошки, страдающие отодектозом, в другой - животные с симптомокомплексом отита и отодектоза Всего было 6 групп.

Животным из 1-й группы назначали ушные капли «Анандин плюс» на 1-й, 2-й дни, а затем двукратно 1 раз в 5 дней, в дозе 3 капли в каждое ухо. Предварительно проводили тщательную обработку ушей Кошкам из 4-й группы с симптомокомплексом отита и отодектоза тоже назначали «Анандин плюс» по аналогичной схеме Во 2-й и 5-й группах опытным животным назначали мазь «Акаробор» по схеме: тонким слоем на 1-й, 2-й, 7-й, 12-й день, после обработки ушной раковины и слухового прохода Кошкам из 3-й и 6-й групп назначали 0,1%-ный раствор

«Неостомозана» в дозе 3 капли в каждое ухо по схеме аналогичной в 14-й группах. За животными вели наблюдение на протяжении двух недель Учитывали характер изменения симптомов болезни, общее состояние кошек, скорость купирования патологического процесса. На 15-й день с момента начала лечения проводили повторную микроскопию материала, взятого с внутренней поверхности наружного уха и слухового прохода, на предмет обнаружения возбудителей СИоёеЛез супоив.

Из таблицы 2 видно, что ушные капли «Анандин плюс» являются эффективным акарицидным средством, по своей терапевтической активности не уступают эталону - мази «Акаробор» и могут быть рекомендованы для широкого применения в ветеринарии при отодектозе кошек. В тех случаях, когда течение отодектоза осложнял отит, выздоровление животных было медленнее Особое внимание обращали на возможности препаратов оказывать не только этиотропное, но и патогенетическое и симптоматическое действие.

Применение политропных лекарственных средств при микст-болезнях, бесспорно является более эффективным, чем применение этиотропных препаратов, поскольку они, обладают сразу несколькими лечебными свойствами Они удобны с практической и экономической точек зрения, а также доставляют меньше беспокойства больному животному.

Таблица 2

Терапевтическая эффективность ушных капель «Анандин плюс», «Акаробор» и «Неостомозан»

Группа Препарат Диагноз Количество

здоровых кошек

на 15-й день, %

1 «Анандин плюс» Отодектоз 95

4 «Анандин плюс» Отодектоз + 100

отит 90

2 «Акаробор» Отодектоз 95

5 «Акаробор» Отодектоз + 100

отит 90

3 «Неостомозан» Отодектоз 90

6 «Неостомозан» Отодектоз + 80

отит 50

Ушные капли «Анандин плюс» являются эффективным средством для лечения отодектоза и при его осложнении. При этом они не уступают по лечебному эффекту мази «Акаробор» и превосходят «Неосто-мозан» (на 5-20%%)

2.2.12. Клинические испытания ушных капель «Анандин плюс» при отодектозе собак

Клинические испытания проводили на 60 собаках, различных пород, с массой тела 10,0-52,5 кг На основании клинических признаков, с учетом эпизоотической ситуации и лабораторного подтверждения животным был поставлен диагноз отодектоз, в отдельных случаях осложненный отитом. Для лечения животных использовали три лекарственных препарата: ушные капли «Анандин плюс», мазь «Акаробор» и ушные капли «Отоферонол плюс» Условно формировали 6 групп по 10 голов в каждой

Собакам из 1-й опытной группы с диагнозом отодектоз, назначали ушные капли «Анандин плюс» в дозе 4-5 капель в каждое ухо 1 раз в 5 дней, трехкратно. Животным из 2-й опытной группы, с диагнозом отодектоз осложненный отитом, также назначали капли «Анандин плюс» по ананлогичной схеме. Собакам из 3-й опытной группы, с диагнозом отодектоз и из 4-й опытной группы с диагнозом отодектоз осложненный отитом, назначали тонким слоем в каждое ухо мазь «Акаробор» 1 раз в 5 дней, трехкратно. Животным из 5-й опытной группы, с диагнозом отодектоз и из 6-й опытной группы с диагнозом отодектоз осложненный отитом, назначали ушные капли «Отоферонол плюс» из расчета 4-5 капель в каждое ухо, 1 раз в 5 дней, трехкратно. На протяжении двух недель за животными вели наблюдение, учитывали время исчезновения симптомов болезни. На 14-й день с момента начала эксперимента проводили повторное обследование методом микроскопии на предмет обнаружения возбудителей Ои>с1ес1е8 супоив в биоптате, взятом от каждой больной собаки

В результате, проведенного лечения, в 1-й опытной группе выздоровели 9 собак из 10, во 2-й группе - 8; в 3-й группе - 9, в 4 и 5-й - по 8, в 6-й - 7 собак Таким образом, ушные капли «Анандин плюс» являются эффективным терапевтическим средством при отодектозе (в том числе, осложненном отитом), не уступающим по своей акарицидной активности мази «Акаробор» и превосходящей ушные капли «Отоферонол плюс» на 10%

2.2.13. Обоснование рецепта мази «Анандин»

Лекарственную композицию подбирали, руководствуясь следующими мотивами. Базисное лекарственное вещество анандин (глюками-нопропилакридон) — стимулирует выработку эндогенного интерферона в больном организме, повышает функциональную активность Т-лимфоцитов и макрофагов, что является важным для формирования антибактериального и противогрибкового иммунитета Вспомогательные лекарственные вещества калия салицилат и масло касторовое обеспечивают противовоспалительное и регенерирующее действие Лекарственная форма длительное время хорошо удерживается на поверхности кожи благодаря основе - вазелину. Растворитель - дистиллированная вода.

Схема 5

Рецепт мази «Анандин»

Rp : Glucaminopropilacndoni - 20,0

Kaln salicylate - 1,0

Olei Ricini - 50,0

Vaselini - 800,0

Aquae destillatae ad 1000,0

M f unguentum D.S Наружное

2.2.14. Изучение местного раздражающего действия 2%-ной мази «Анандин»

Широкий спектр мазей и часто встречающиеся случаи медикаментозных дерматитов предопределяют необходимость установления не только высоких терапевтических свойств нового лекарственного средства в сравнении с аналогами, но и тщательного изучения его безвредности

Местное действие мази изучали на морских свинках с массой тела 250-300 г, и кроликах-альбиносах с массой тела 2,0-2,5 кг. Для каждого вида животных формировали опытную и контрольную группы: по 10 морских свинок и по 5 кроликов, в каждой группе. Степень токсического действия мази определяли методом многократных эпикутанных ап-

пликаций Животным из опытных групп на неповрежденную кожу с шерстным покровом в межлопаточной области наносили мазь «Анан-дин» (тонким слоем) 2 раза в день, в течение 2 недель Для животных из контрольных групп использовали вазелин медицинский очищенный, аналогично. На протяжении всего опыта за животными вели клиническое наблюдение.

Согласно, полученным данным констатировали отсутствие воспалительной реакции на месте аппликации мази, зуда (расчесов), изъязвлений, пигментации, аллопеций, толщина кожной складки не изменялась. Следовательно, 2%-ная мазь «Анандин» не обладает местным токсическим и раздражающим действием

2.2.15. Определение аллергенных свойств анапдиновой мази

Аллергеность анандиновой мази изучали в трех концентрациях (0,5%; 2% и 5%) методом эпикутанных аппликаций Опыты проводили на морских свинках с массой тела 260-300 г и кроликах-альбиносах с массой тела 2-3 кг.

2.2.15.1. Опыт на морских свинках

Для проведения эксперимента было сформировано 4 группы по 10 лабораторных животных в каждой. Всем морским свинкам предварительно выстригали волосы на участке в области спины размером 2x3 см Аппликации мази делали в направлении от задней трети спины к голове. Животных сенсибализировали путем многократных аппликаций мази на один и тот же участок кожи. Количество аппликаций составляло тридцать (2 раза в день, в течение 15-ти дней). Мази наносили в количестве 0,1-0,3 г, выдерживали 4 часа и удаляли стерильным ватным тампоном. Животным из 1-й опытной группы применяли 0,5%-ную анандино-вую мазь, из 2-й группы - 2%-ную мазь, из 3-й группы - 5%-ную мазь Морские свинки из 4-й группы служили контролем, им апплицировали вазелин медицинский очищенный.

Через 14 дней с момента последней аппликации на кожу свеже выстриженного участка спины наносили разрешающую дозу мази, соответствующей концентрации для каждой группы животных, через 24 часа анализировали место аппликации мази у лабораторных животных и учитывали наличие или отсутствие аллергической реакции. В результате

проведенных манипуляций на месте приложения мази не было обнаружено инфильтрации, эритемы, изъязвления и некроза тканей. Таким образом, на морских свинках было показано, что анандиновая мазь, индифферентно концентраций- 0,5%, 2% или 5%, не обладает аллергенными свойствами.

2.2.15.2. Опыт на кроликах-альбиносах

Было сформировано 4 группы по 10 кроликов в каждой. Животных сенсибилизировали аппликациями мазей по следующей схеме: 2 раза в день, 10 суток подряд Лабораторных животных из 1-ой опытной группы обрабатывали 0,5%-ной анандиновой мазью, из 2-й опытной группы -2%-ной анандиновой мазью, из 3-й опытной группы — 5%-ной анандиновой мазью, из 4-й контрольной группы - вазелином медицинским очищенным Мази наносили в количестве 0,3-0,5 г на предварительно выстриженный участок кожи спины в межлопаточной области размером 4x4 см. Аппликации делали в направлении от шеи к хвосту, мазь выдерживали 4 часа и удаляли стерильным ватным тампоном. Через 14 дней спустя с момента последней аппликации вновь эпилировали кожу на участке сенсибилизации и наносили разрешающую дозу изучаемого препарата, соответствующей концентрации Через 24 часа учитывали клинико-морфологические изменения.

Согласно полученным данным, можно говорить о том, что мази на основе анандина не обладают выраженными аллергенными свойствами, но возможна индивидуальная повышенная к ней чувствительность Так, у одного кролика из 1-й опытной (0,5% мазь) и у одного кролика из 3-й (5% мазь) опытной группы была эритема на месте приложения мази При этом признаков инфильтрации, изъязвления и некроза тканей не было обнаружено ни у этих двух особей, ни у остальных животных. В виду того, что аллергическая реакция наблюдалась у лабораторных животных-альбиносов из групп, где применяли анандиновую мазь с минимальной и максимальной концентрацией базисного лекарственного вещества, можно предположить, что аллергическая реакция была обусловлена не самим анандином, а другими ингредиентами

2.2.16, Изучение антимикотической активности «Анандина для инъекций» на модели генерализованного кандидоза у белых мышей

Всего в опыте использовали 60 лабораторных животных с массой тела 18-20 г Для получения модели генерализованного кандидоза животным внутривенно инъецировали взвесь Candida albicans в дозе 15 млн. клеток гриба на мышь, что в 5 раз превышает минимальную смертельную дозу для этого вида животных при данном способе введения препарата Для выявления антикандидозной активности препарата мышам из опытных групп 10%-ный раствор «Анандина для инъекций» вводили внутримышечно в дозах 10 мг/кг и 100 мг/кг массы тела животных в течение 5 дней после заражения. Ввиду того, что критериями эффективности антимикотической терапии могут быть количество погибших животных и сроки их гибели, то результаты опыта оценивали по средней продолжительности жизни экспериментальных животных и выживаемости мышей.

Наиболее эффективной при лечении генерализованного кандидоза явилась доза «Анандина для инъекций» - 10 мг/кг массы тела. Так, в ходе опыта отметили гибель 45% лабораторных животных в 1-й опытной группе и 80% - во 2-й группе, тогда как в контрольной группе наблюдали 100%-ный летальный исход белых мышей. Благодаря иммуно-модулирующим эффектам «Анандина для инъекций», в 1-й группе выжило 55% экспериментальных животных, а во 2-й группе - лишь 20%, то есть разница составила 35% Продолжительность жизни белых мышей в контрольной группе была 4,85 суток. В группе, где терапевтическая доза «Анандина для инъекций» была увеличена в 10 раз, продолжительность жизни белых мышей составила 8,71 суток У лабораторных животных получавших внутримышечно «Анандин для инъекций» в дозе 10 мг/кг массы тела - 11,28 суток, т.е. в первом случае, в 1,7 раза, а во втором - 2,3 раза больше, чем в контроле

Результаты эксперимента подтвердили, что 10%-ный раствор «Анандина для инъекций» обладает антимикотической активностью в отношении Candida albicans. Наибольший эффект отметили при применении препарата в терапевтической дозе 10 мг/кг массы тела мыши

2.2.17. Изучение антифунгального действия 2%-ной мази «Анандин» на экспериментальной модели поверхностного кандидоза у лабораторных животных

Для изучения химиотерапевтической эффективности противогрибковых препаратов в эксперименте на модельных инфекциях необходимо для каждого конкретного случая подбирать восприимчивых животных. Руководствуясь этим правилом для получения локального инфекционного процесса на коже, спровоцированного Candida albicans в эксперименте были задействованы белые крысы и кролики-альбиносы.

2.2.17.1. Эксперимент на крысах

Опыт проводили на 20 клинически здоровых белых крысах, с массой тела 200-250 г. В опытной и контрольной группах было по 10 крыс За 24 часа до заражения животным внутримышечно вводили 0,3 мл/гол официнальной суспензии кортизона ацетата Перед заражением выстригали шерсть на коже спины, размером 1,5x2 см и обрабатывали бесшерстный участок 70° этиловым спиртом. Затем эпилированную кожу осторожно скарифицировали Заражение проводили эпикутанным способом взвесью двухсуточной культуры гриба Candida albicans (концентрация 500 млн кл /мл), предварительно растертой в ступке с кусочками агара Сабуро В течение семи дней вели наблюдение за экспериментальными животными. Уже через сутки с момента заражения на контактной поверхности отмечали гиперемию, позднее образовывались корочки с эрозивной поверхностью под ними. По периферии поражения на 5-6-й дни возникали мелкие пузырьки. При посеве патологического материала, взятого на границе участка поражения от каждого животного, на агаре Сабуро наблюдали активный рост колоний гриба Candida albicans.

С 7-го дня белым крысам из опытной группы назначали 2%-ную мазь «Анандин» Курс лечения был следующим: ежедневно в течение пяти суток, 2 раза в день на пораженный участок наносили испытуемую мазь. Лабораторных животных из контрольной группы лечению не подвергали. На 14-й день с момента начала эксперимента констатировали полное клиническое выздоровление белых крыс в опытной группе Микроскопия биоптата на границе локуса заражения подтвердила достоверность сделанных выводов. При этом в изолированных соскобах наблюдали единичные скопления дрожжеподобных клеток, но мицели-альные нити отсутствовали (сапрофитная форма гриба).

Одновременно у животных в контрольной группе процесса заживления и регенерации тканей на участке заражения не было К 21-му дню регистрировали спонтанное выздоровление восьми из десяти белых крыс У 2-х крыс по-прежнему отмечали образование мелких пузырьков, десквамацию эпителия и зуд в области места заражения Микроскопия эпидермиса с границы зоны поражения показала скопление дрож-жеподобных клеток и единичных мицелиальных нитей, что свидетельствовало о развитии патологического процесса в коже, спровоцированного грибом Candida albicans

На основании полученных данных можно сделать вывод о том, что применение 2%-ной мази «Анандин» для лечения крыс с кандидозным поражением кожи было эффективным позволило купировать сроки выздоровления животных в среднем на 10-12 дней, по сравнению с контрольными особями, а также способствовало активной регенерации пораженной ткани

2.2.17.2. Эксперимент на кроликах

Опыт ставили на 20 кроликах-альбиносах с массой тела 2,5-3 кг Каждому животному в межлопаточной области спины выстригали шерсть на участке размером 2x3 см и эпилированную область обрабатывали 70° этиловым спиртом Заражение проводили методом подкожной инъекции двухсуточной культуры гриба Candida albicans, из которой готовили суспензию с концентрацией 500 млн кл /мл Каждому кролику инъецировали по 5 мл взвеси, подтитрованной 100 000 ЕД бензилпени-циллина-натриевой соли.

Было сформировано две группы опытная и контрольная, по 10 голов Через сутки с момента заражения наблюдали воспалительную реакцию на коже большинства лабораторных животных из обеих групп Воспаление кожи характеризовалось активной гиперемией, отечностью и зудом На 2-3-й дни отмечали десквамацию эпителия и образование корочек-наложений, при удалении которых открывались эрозивно-язвенные участки По периферии эпилированного прямоугольника кожи обнаруживали мелкие пузырьки с мутным экссудатом. В соскобах патологического материала с пораженных участков обнаруживали дрожже-подобные клетки и единичные нити псевдомицелия, что подтверждало развитие поверхностного кандидоза у кроликов.

С 4-го дня от момента заражения в опытной группе для лечения животных применяли 2%-ную мазь «Анандин» по схеме: 2 раза в сутки, в течение 5 дней, ежедневно. Кроликов из контрольной группы не лечи-

ли. На 2-й день с момента заражения у большинства кроликов отмечали гиперемию, отек и зуд контактной поверхности, у всех животных была выявлена десквамация эпителия кожи. К 3-4-му дню все перечисленные симптомы воспаления кожи сохранялись, у некоторых животных наблюдали эрозивно-язвенные поражения

После начала применения испытуемой мази у кроликов отмечали улучшение клинического состояния и исчезновение характерных признаков К 8-му дню все неблагоприятные симптомы у животных из опытной группы исчезали. Наблюдение продолжали до 15-го дня. Рецидивов не отмечали Повторная микроскопия биоптата на предмет обнаружения активных форм гриба Candida albicans показала лишь отдельные дрожжеподобные клетки и отсутствие мицелиальных нитей, что свидетельствовало о сапрофитном состоянии гриба и выздоровлении животных.

У контрольных животных все неблагоприятные симптомы наблюдали с момента заражения по 10-й день включительно С 11-го дня отмечали спонтанное выздоровление некоторых кроликов К 15-му дню регистрировали спонтанное выздоровление семи животных, повторная микроскопия биоптата с локуса заражения у 3-х животных из 10 показала наличие дрожжеподобных клеток и единичных нитей мицелия, что свидетельствовало о продолжении инфекционного процесса в коже.

Таким образом, было показано, что 2%-ная мазь «Анандин» способствует купированию смоделированного процесса поверхностного кандидоза у кроликов-альбиносов и сокращает сроки выздоровления в среднем в 2 раза.

2.2.18. Клинические испытания 2%-ной мази «Анандин» при питироспорозе и поверхностном кандидозе кожи у собак

Malassezia pahydermatis и Candida albicans являются условно-патогенными микромицетами. Они провоцируют болезни кожи у собак на фоне сниженной резистентности организма, что может быть вызвано иммуносупрессивной терапией (применением цитостатиков, глюкокор-тикоидов), длительным назначением антибиотиков по поводу первичного заболевания, что приводит к снижению резистентности и нарушению соотношения нормальной микрофлоры кожи. Кроме того, влажные, теплые условия в сочетании с плохой вентиляцией способствуют развитию у животных микозов, протекающих совместно со стафилококковыми инфекциями кожи. Современный подход к терапии микозов - назначе-

ние противогрибковых лекарственных препаратов и иммуномодулято-ров, которые позволяют организму справиться самостоятельно с инфекцией, вызванной условно-патогенными грибами за счет собственных резервов

Руководствуясь вышеизложенным, была изучена терапевтическая активность 2%-ной мази «Анандин» и «Анандина для инъекций» при питироспорозе и поверхностном кандидозе у собак В эксперименте было задействовано 60 собак разных пород в возрасте от 3 до 7 лет. Условно их разделили на 5 групп. В группы с 1-ой по 4-ую входили по 9 собак с питироспорозом и по 3 животных с поверхностно-очаговым кандидо-зом. Пятая группа объединяла 12 клинически здоровых животных, которые были зарезервированы для контроля. Из анамнеза больных поверхностным кандидозом пациентов следовало, что каждое животное подвергалось длительной антибиотической и/или гормональной терапии по поводу первичного заболевания У всех собак из опытных групп регистрировали иммунодефицитный синдром

Диагноз ставили комплексно с учетом анамнеза, клинических признаков и лабораторного подтверждения У больных питироспорозом собак очаговые поражения кожи были в области туловища, подмышек, паха, межпальцевых пространств Эти локусы были покрасневшими, с аллопециями и шелушением кожи У некоторых собак отмечали жирную экссудацию и зуд. При этом у вислоухихих собак был отит, обусловленный Макввегт раЬуёегтайз.

Клиническая картина у собак, больных поверхностным кандидозом была представлена локализованными сыпями различной морфологии в области морды, туловища, естественных складок кожи и между пальцами лап Поражения кожи характеризовались наличием пустул и папул, наполненных серозной жидкостью, после вскрытия которых образовывались эрозии. Десквамация эпителия характеризовалась наличием белесоватых и сероватых корочек, отмечали выпадение шерсти и зуд Также регистрировали гиперемию и отечность губ и брылей с мелкими эрозиями и шелушением

Животным из 1-й опытной группы назначали для местного лечения 2%-ную мазь «Анандин». Обработку пораженных участков кожи проводили 2 раза в день, ежедневно в течение 14 дней, после предварительной санации 0,05%-ным раствором хлоргексидина. Животных из 2-й опытной группы дополнительно однократно, вводили подкожно или внутримышечно 10%-ный раствор «Анандина для инъекций» в дозе 10 мг/кг массы тела Животным из 3-й и 4-й опытных групп назначали

«Нистатиновую мазь» и 1%-ный крем «Клотримазола» соответственно и согласно принятых наставлений.

Уровни миелопероксидазы и лизосомных катионных белков на фоне рНкожи, дают косвенное представление о резистентности организма и способности кожи проявлять адекватное фунгицидное и бактерицидное действие. До начала лечения рН кожи собак из опытных групп была повышена по сравнению с клинически здоровыми животными и составляла в среднем - 6,10±0,09 (Р < 0,001), против 5,68±0,07, в контроле Уровень лизосомных катионных белков и миелопероксидазы нейтрофилов капиллярной крови, напротив, был достоверно ниже у животных в опытных группах по сравнению с контрольными. Так, уровень лизосомных катионных белков в среднем по опытным группам составлял 1,39±0,05 ед (Р <0,002), против 1,61 ±0,03 в контроле, а миелопероксидазы - 0,77±0,03 ед. (Р < 0,001) , против - 1,37±0,04, в контрольной группе После лечения у собак из опытных групп значение рН кожи было максимально приближено к показателям у клинически здоровых животных и составляло в среднем 5,85±0,05 (Р< 0,05), при этом адекватным контрольному значению был показатель рН кожи у собак из 2-ой опытной группы - 5,68±0,09 (Р<0,01) Содержание миелопероксидазы было достоверно выше, однако, по-прежнему, уступало этому показателю у здоровых животных. Однако во 2-ой опытной группе, где применяли лекарственные формы анандина этот показатель был выше, чем в других опытных группах и составлял 1,31 ±0,03 ед (Р < 0,001) Одним из основных факторов, характеризующих фунгицидные свойства кожи, является способность нейтрофилов капиллярной крови высвобождать лизосом-ные катионные белки, как было показано ранее. Их уровень до начала лечения у больных собак был достоверно ниже, чем у клинически здоровых, а после курса терапии - повышался. Максимально приближенными к контрольному уровню были результаты, полученные в 1-й и 2-й опытных группах: 1,60±0,03 ед. (Р < 0,001) и 1,62±0,02 ед (Р < 0,001), соответственно. Полученные данные свидетельствовали о том, что применение 2%-ной мази «Анандин» благотворно влияет на состояние кожи и ферментные системы нейтрофилов капиллярной крови

Исследование крови чрезвычайно важно при диагностике внутренних болезней Для исключения возможной системной патологии было проведено гематологическое обследование собак. У животных, страдающих микозами, отмечали эритроцитопению, лейкоцитопению и ге-моглобинемию на фоне увеличения скорости оседания эритроцитов (хотя и в пределах границ физиологических нормативов) Однако, назначенное лечение обеспечивало оптимизацию всех перечисленных показа-

телей При этом лучшие результаты наблюдали в 1-й и 2-й опытных группах, где применяли для лечения больных собак 2%-ную мазь «Анандин» и 10%-ный раствор «Анандина для инъекций»

Изменения в лейкограмме у собак с поверхностными микозами нехарактерны. Снижение количества сегментоядерных нейтрофилов отмечали у собак, страдающих поверхностными микозами, по сравнению с клинически здоровыми Количество лимфоцитов было несколько выше у собак из опытных групп, чем в контроле Уровень моноцитов был значительно выше у опытных животных по сравнению с контрольными значениями.

Наиболее характерными были изменения показателей специфического и неспецифического иммунитета и ферментных систем у собак до и после лечения. Так, фагоцитарная активность у животных из 1-й опытной группы до начала лечения была на 19% ниже, чем у клинически здоровых животных. По окончании лечения разница с контролем была 5% Наименьшую фагоцитарную активность крови до лечения констатировали у собак из 2-й опытной группы - на 19,5% ниже, чем у контрольных особей. Однако, в группе где сочетанно применяли 2%-ную мазь «Анандин» с «Анандином для инъекций» был самый высокий показатель фагоцитарной активности крови у животных - 72,02 ± 2,64% (Р < 0,001), против 72,44±1,15 у здоровых животных. У собак из 3-й и 4-й опытных групп фагоцитарная активность крови была в среднем на 18,5% ниже по сравнению с контролем К концу лечения разница составляла 7,3%

Количество иммуноглобулинов в среднем по опытным группам было 13,18 ± 0,49 г/л (Р < 0,001) Разница до начала лечения составляла 26,7% По окончании лечения этот показатель в 1-й и 2-й опытных группах у собак составил 17,91 ± 0,24 г/л и 18,01 ± 0,27 г/л (Р < 0,001), что вполне адекватно контролю - 17,97±0,54.

Общепризнано ведущее значение нарушений Т-системы иммунитета в патогенезе микопатий Уровень Т-лимфоцитов до начала лечения в опытных группах был приблизительно в 2 раза ниже, чем у клинически здоровых животных, составляя в среднем по опытным группам 23,63±1,29 % (Р < 0,001), против - 41,25±1,05 % По окончании лечения у животных из опытных группы процентное содержание Т-лимфоцитов повышалось Максимально приближенным к контрольному значению был уровень Т-лимфоцитов у собак из опытных групп, где назначали лекарственные формы анандина, а именно в 1-ой группе - 39,11±2,08 %, во 2-ой группе - 41,24±1,10% (Р <0,001). У животных из 3-й и 4-й

опытных групп этот показатель был ниже, чем в контроле в среднем на 22,1%.

Процентное содержание В-лимфоцитов у животных из опытных групп до начала лечения было существенно ниже по сравнению с клинически здоровыми собаками, составляя в среднем по опытным группам 9,99±0,54 % (Р < 0,001), против 23,04±1,17 %, в контроле По окончании курса лечения наблюдали увеличение процента В-лимфоцитов по сравнению с первоначальным уровнем. При этом уровень В-лимфоцитов повышался адекватно контрольному значению этого показателя у собак в 1-й и 2-й опытных группах- 21,56±1,44% и 23,01±1,19% (Р < 0,001), соответственно. В 3-й и 4-й группах этот показатель составил: 15,12±1,61 % (Р <0,01) и 12,17±1,95%, соответстенно Уровень О-лимфоцитов до начала лечения в среднем по опытным группам превышал контрольный в 1,9 раза. Количество О-лимфоцитов на момент окончания лечения у собак из 1-ой и 2-й опытных групп было максимально приближено к таковому у клинически здоровых животных. У собак из 3-й и 4-й опытных групп этот показатель по-прежнему был выше контрольного в 1,5 раза. При этом прослеживалась следующая закономерность- у здоровых животных сумма Т- и В-лимфоцитов была больше количества О-лимфоцитов, а у больных микозами - наоборот-число О-клеток было больше суммы Т- и В-клеток

Таким образом, можно сделать вывод о том, что 2% мазь «Анан-дин» обладает высокой антимикотической и иммуностимулирующей активностью, а также регенерирующими свойствами, которые позволяют купировать патологический процесс, спровоцированный возбудителями Malassezia pahydermatis и Candida albicans в течение 10-14 дней, что свидетельствует о преимуществе указанной лекарственной формы анандина перед «Нистатиновой мазью» и 1%-ным кремом «Клотримазо-ла», на ранних стадиях поверхностных микозов. При этом сочетанное применение мази «Анандин» с парэнтеральным, однократным введением 10%-ного раствора «Анандина для инъекций» позволяет повысить терапевтическую эффективность. Это выражается в сокращении сроков купирования патологического процесса и подтверждается результатами микологических исследований. Следовательно, 2%-ную мазь «Анандин» можно рекомендовать в качестве высокоактивного альтернативного фармакологического средства для лечения собак, страдающих поверхностным кандидозом и питироспорозом, в тех случаях, когда поражение кожи локализовано на ограниченных участках и как средство вспомогательной терапии при обширных поражениях.

ВЫВОДЫ

1 Включение иммуномодулятора «Анандин®» - 1,2 5,6-ди-о-изопропилиден-а-0-глгакофураноза-3-0-(М,Ы-диметиламинопропил) 10-метиленкарбоксилат-9-акридон - в структуру лекарственных форм для наружного применения позволило расширить спектр фармакологической активности последних и повысить их терапевтическую эффективность.

2. Глазные-интраназальные капли «Анандин» не обладают местным раздражающим действием, аллергенными свойствами и не вызывают болевых ощущений при инсталляции

3. Глазные-интраназальные капли «Анандин» оказывают эффективное противовирусное действие при конъюнктивите, сопровождающем инфекционный ринотрахеит кошек, а также терапевтически активны в 80% случаев острых конъюнктивитов различного генеза у кошек

4. Оптимальная схема применения глазных-интраназальных капель «Анандин» при конъюнктивите кошек. 1-2 капли/глаз, 3-4 раза в день, 7-10 дней

5. Ушные капли «Анандин» не обладают местным раздражающим действием и аллергенными свойствами, проявляют противовоспалительное (за счет анандина), антимикробное (благодаря грамицидину С), регенирирующее (обусловленное маслом касторовым), действие при остром наружном отите у собак

6. Оптимальная схема применения ушных капель «Анандин» при остром наружном отите у собак- 2-4 капли/ухо, 2 раза в день 7-10 дней

7. Ушные капли «Анандин плюс» не оказывают местного раздражающего и аллергенного действия, обладают противовоспалительным, антимикробным, регенирирующим и акарицидным (за счет циперметри-на/перметрина) действием при отодектозе кошек и собак, а также ото-дектозе, осложненном отитом

8 Применение ушных капель «Анандин плюс» при отодектозе кошек также эффективно, как и применение мази «Акаробор» и эффективнее на 20% по сравнению с применением «Неостомазана» при лечении отодектоза и на 40% при лечении отодектоза, осложненного отитом По своим фармакологическим свойствам и терапевтической активности при отодектозе собак ушные капли «Анандин плюс» не уступают мази «Акаробор» и превосходят ушные капели «Отоферонол®» на 10 %

9. Оптимальная схема применения ушных капель «Анандин плюс» для кошек: 2-3 капли/ухо, 1 раз в 3-5 дней, в течение 2-3 недель Опти-

мальная схема применения ушных капель «Анандин плюс» для собак. 45 капель/ухо, 1 раз в 5 дней, 3-х кратно.

10. Применение «Анандина для инъекций» на модели генерализованного кандидоза у белых мышей в дозе 10 мг/кг, в течение 5 дней после заражения увеличивает продолжительность жизни белых мышей в 2,3 раза

11. Мазь «Анандин» не обладает местным раздражающим действием и аллергенными свойствами, оказывает противогрибковое и заживляющее действие на экспериментальной модели поверхностного кандидоза у морских свинок, купируя сроки выздоровления, по сравнению со спонтанным исцелением, на 10-12 дней.

12. На экспериментальной модели поверхностного кандидоза у кроликов-альбиносов 2%-ная мазь «Анандин» оказывает противогрибковое и заживляющее действие, купируя сроки выздоровления, по сравнению со спонтанным исцелением, на 8 дней

13. Мазь «Анандин» обладает высокой антимикотической, противовоспалительной и регенерирующей активностью при питироспорозе и поверхностно-очаговом кандидозе кожи у собак, купируя патологический процесс в течение 10-14 дней.

14. Эффективность противогрибковой терапии повышается при сочетанном применение 2%-ной мази «Анандин» и однократного внутримышечного введения «Анандина для инъекций» из расчета 10 мг/кг массы тела собаки

15. Под действием сочетанного применения 2%-ной мази «Анандин» и «Анандина для инъекций» по сравнению с изолированным применением «Нистатиновой мази» и 1%-ного крема «Клотримазола» более эффективно происходит нормализация рН кожи до уровня 5,68±0,09 (Р< 0,0*1), повышение уровня миелопероксидазы до уровня 1,31 ±0,03 (Р< 0,001) и лизосомных катионных белков до уровня 1,62±0,02

а также восстановление показателей лейкограммы у больных

собак

16 Под действием 2%-ной мази «Анандин» и «Анандина для инъекций» по сравнению с изолированным применением нистатиновой мази и 1%-ного крема клотримазола уровень Т- и В-лимфоцитов в крови больных собак достоверно повышается до такового у клинически здоровых животных. Так, уровень Т-лимфоцитов составил 41,24±1,10% (Р< 0,001), уровень В-лимфоцитов - 23,01±1,19 % (Р< 0,001).

17. Оптимальная схема применения 2%-ной мази «Анандин» при дерматомикозах, спровоцированных Макввеиа раЬуйеттайз и Сап-

dida albicans- аппликация тонким слоем на пораженный участок, 2 раза в день в течение 10-14 дней

18. Фармакологическая и терапевтическая эффективность новых лекарственных форм «Анандина» наглядно демонстрирует научно-практическую целесообразность их разработки и перспективность внедрения политропных лекарственных средств с включением в рецептуру этих препаратов иммуномодулирующих веществ

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Разработаны и внедрены в производство четыре новых лекарственных формы анандина для наружного применения.

2. Разработаны и утверждены в Департаменте Ветеринарии Инструкции по применению капель глазных-интраназальных «Анандин», двух видов ушных капель: «Анандин» и «Анандин плюс» и мази «Анандин».

3. ТУ 9337-003-46913214-00 Капли глазные-интраназалыше «Анандин».

4 ТУ 9337-004-46913214-00 Капли ушные «Анандин».

5. ТУ 9337-005-46913214-00 Капли ушные «Анандин плюс».

6. ТУ 9337-002-46913214-00 Мазь «Анандин».

7 Аттестат ФГУ ВГНКИ, удостоверяющий соответствие и наличие условий для промышленного производства четырех новых лекарственных форм «Анандина» для наружного применения

8 Патент «Способ лечения отодектоза у кошек»

9. Учебное пособие «Новые лекарственные формы индуктора эндогенного интерферона - анандина Опыт применения в ветеринарии» (2006). Гриф Министерства сельского хозяйства Российской Федерации

10. Материалы диссертации внедрены в учебный проце<Лг вузов Минсельхоза России

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1.Соколов В Д. Клиническая фармакология и фармакотерапия учеб. пособие / В Д Соколов, Н Л Андреева, 3 Н Черкай. - СПб - 1999 - С.75-93.

2.Мухина 3 Н Низкомолекулярные супериндукторы интерферона / 3 Н.Мухина, К.А.Кузьмина / Актуальные проблемы ветеринарной меди-

цины мелких домашних животных // матер, конф Санкт-Петербург, 2526 нояб 1999 г. - Санкт-Петербург, 1999 - С 82.

3.Moukhina ZN Comparative analysis of uiterferogenic activité of Anandinum and Virus of Newcasle Disease m vitro / Z.N. Moukhina // World's poultry congress 2000. - Montréal, Canada. - 20-25 august, 2000. -P. 107.

4 Мухина 3 H. К вопросу лечения собак, страдающих болезнями кожи / 3 H Мухина // Новые фармакологические средства в ветеринарии : матер. 13-й научно-практич конф — Санкт-Петербург, 2001. — С.91-92.

5.Мухина 3 H Лекарственные формы анандина - препараты выбора при лечении мелких домашних животных / З.Н Мухина // Новые фармакологические средства в ветеринарии : матер 13-й научно-практич. конф - Санкт-Петербург, 2001. - С.93-94.

6.Соколов В Д. Клиническая фармакология и фармакотерапия Учебное пособие, 2-е изд, перераб. и доп. / В.Д Соколов, H Л.Андреева, З.Н Черкай. - Санкт-Петербург, 2002.-С.80-100.

7.Мухина, 3 H Обоснование перспектив использования индукторов интерферона в составе комбинированных лекарственных препаратов / 3 H Мухина // Новые фармакологические средства в ветеринарии : матер. 14-й научно-практич. конф - Санкт-Петербург, 2002. - С.78-79.

8 Мухина З.Н. Теоретическое обоснование перспективности создания комбинированных лекарственных средств на примере продукции научно-исследовательского общества «Медитэр» / З.Н.Мухина // Матер, научн конф профес.-препод состава, научн. сотруд. и аспир. СПбГАВМ. - Санкт-Петербург, 2002. - С.58-59.

9 Черкай 3 Н.Краткий фармакологический анализ структуры некоторых препаратов НИО «Медитэр» и результаты их использования в ветеринарии / 3 НЛеркай // Петербургский зоокурьер. - 2003. - № 2. -С.11.

10. Черкай 3 Н. Теоретическое обоснование включения в рецептуру капель ушных «Анандин» грамицидина С / 3 Н.Черкай // Матер. 57-й научн. конф молоых ученых и студентов СПбГАВМ, посвящ. 300-летию Санкт-Петербурга. - Санкт-Петербург, 2003. - С 79-80.

11 Черкай ЗН Фармакологическое обоснование рецепта ушных капель «Анандин» / 3 Н.Черкай // Новые фармакологические средства в ветеринарии : матер. 15-й научно-практич. конф., посвящ. 300-летию Санкт-Петербурга. - Санкт-Петербург, 2002. - С.47-48.

12. Черкай З.Н. Фармакокоррекция и диетотерапия пищевой аллергии у собак / З.Н.Черкай // Современные проблемы ветеринарной диетологии и нутрициологии : матер. 2-го междунар. симпозиума,

Санкт-Петербурга, 22-24 апр 2003 г - Санкт-Петербург. - 2003. - С. 43-45.

13. Черкай З.Н Капли глазные-интраназальные «Анандин» (рецептура, безвредность, результаты применения и внедрения в ветеринарии) / 3 Н.Черкай // Международный вестник ветеринарии - 2004 - № 2 -69-73

Н.Черкай З.Н. Фармакологическое обоснование перспектив использования в ветеринарии индуктора эндогенных цитокинов «Ананди-на» в составе лекарственных форм для наружного применения / 3 НЛеркай // Ветеринарная клиника Екатеринбург, 2004 - № 3 (22). -С.21-23

15. Семенов С А., Результаты применения препарата «Римолан» при лечении онкопатологии собак / С А Семенов, Е.А Быкова, Д Спруджа, 3 Н Черкай, Л Иванова, Л Обушева, Н В Мухина // Медицинская иммунология -2004 - С 17-18

16. Черкай 3 Н Перспективы применения «Анандина» в ветеринарии / 3 Н.Черкай // Исследования, результаты : сб тр Казахского нац аграр унив.-2005 - №3 -С.79-81

17. Черкай З.Н Фармакологический анализ препаратов, содержащих анандин. Опыт применения в ветеринарии / 3 Н.Черкай // Зооинду-стрия - 2005. - № 8-9. - С 8-9

18. Черкай З.Н Новые лекарственные формы индуктора эндогенного интерферона - анандина Опыт применения в ветеринарной медицине: учеб пособие / 3 Н.Черкай - Санкт-Петербург, 2006 - 92 с

19. Черкай 3 Н. К вопросу лечения вирусных конъюнктивитов у кошек / З.Н.Черкай // Ветеринария Зоотехния Комбикорма тез докл междунар специализир конгресса-выставки - Санкт-Петербург, 28-31 авг. 2006 г. - Санкт-Петербург, 2006 - С 257-258

20. Черкай З.Н Основные принципы коррекции здоровья животных / 3 Н Черкай // Ветеринария Зоотехния. Комбикорма тез докл междунар специализир конгресса-выставки - Санкт-Петербург, 28-31 авг. 2006 г. - Санкт-Петербург, 2006 - С 258-259

21. Черкай ЗН. Лекарственные формы анандина в патогенетической терапии дерматомикозов у собак / 3 Н Черкай // Зооиндустрия -2006 - № 9 - С.5-6

22. Черкай 3 Н Эффективность капель «Анандин» при вирусных болезнях кошек / З.Н.Черкай // Ветеринария. - 2006 - № 7 - С 57-59

23. Черкай 3 Н Эффективные лекарственные формы в ветеринарной дерматологии / 3 Н.Черкай // Ветеринария - 2006 - № 12 - С 5658.

24. Черкай 3 Н К вопросу лечения вирусных конъюнктивитов у кошек / З.Н.Черкай // Актуальные проблемы ветеринарной медицины : тез. докл. междунар. научно-практич. конгр Санкт-Петербург, 28-29 авг. 2006 г. - Санкт-Петербург, 2006. - С. 254-258.

25. Черкай З.Н. Основные принципы коррекции здоровья животных / З.Н.Черкай //Актуальные проблемы ветеринарной медицины : тез докл. междунар научно-практич. конгр Санкт-Петербург, 28-29 авг. 2006 г. - Санкт-Петербург, 2006 - С. 258-259

26 Мухина Н В. Ветеринарная диетология как основа коррекции здоровья животных / Н В.Мухина, 3 Н.Черкай // Ветеринария и кормление.- 2006.-№3.-С 12-13.

27. Мухина Н.В. К вопросу профилактики вирусных инфекций / Н.В Мухина, Ю А.Бойков, 3 Н.Черкай // Матер.научн сессии СЗНМЦ РАСХН и ВНИВИП, Санкт-Петербург - Ломоносов, 29-30 мая 2006 г. -Санкт-Петербург, 2006 - С. 170-173

28. Семенов С А. Результаты исследования показателей врожденного иммунитета у собак / СА.Семенов, Е.А.Быкова, ЛР.Хемий, Н В.Мухина, З.Н.Черкай // Актуальные проблемы ветеринарной медицины : тез. докл. междунар. научно-практ. конгр. - Санкт-Петербург, 2831 авг. 2006 г. - Санкт-Петербург . ЛЕНЭКСПО, 2006. - С 217-220.

29. Черкай З.Н. К вопросу о создании новых эффективных препаратов для лечения отитов у собак / 3 Н.Черкай // Ветеринарная медицина домашних животных : сб. ст. - Казань- Печатный двор, 2006 - С. 133 -136.

30 Черкай З.Н. Сравнительная эффективность анандина при поверхностной микопатии у собак / 3 Н.Черкай // Ветеринарная медицина домашних животных сб ст. - Казань- Печатный двор, 2006 - С. 136 -139.

31 Черкай 3 Н Опыт применения ушных капель «Анандин плюс» при отодектозе кошек / 3 Н Черкай // Ветеринария и кормление - 2006 -№6 -С 27.

32. Черкай 3 Н. Новая форма «Анандина» - капли глазные-интраназальные / 3 Н.Черкай // Ветеринарная практика - 2006 - №4 -С 11-14.

33. Черкай З.Н. Способ лечения отодектоза у кошек / 3 НЛеркай // Решение о выдаче патента на изобретение. - 26 06.2006.

34. Черкай 3 Н Ушные капли «Анандин» при бактериальных отитах у собак / 3 Н Черкай // Ветеринария - 2007. - №3. - С 59-60.

35. Черкай ЗН. Использование капель глазных-интраназальных «Анандин» при конъюнгтивитах / 3 Н Черкай // Доклады Российской

академии сельскохозяйственных наук : научно-теоретический журнал 2007 -№2-С47-49.

36. Черкай 3 Н. Применение капель с «Анандином» при конъюнктивите кошек / 3 Н.Черкай // Ветеринария - 2007 - №5. - С 57-58.

37. Черкай 3 Н Генерализованный кандидоз у белых мышей / 3 Н Черкай//Ветеринарная практика - 2007 - №2 - С 11-14

38 Черкай 3 Н Лекарственные формы анандина в патогенетической терапии дерматомикозов у собак / ЗН Черкай // Ветеринарная практика. - 2007. - №3. - С 12-15

39. Черкай ЗН Эффективность ушных капель «Анандин» при отитах у собак / З.Н.Черкай // Новые фармакологические средства в ветеринарии матер 19-й международной научно-практич конф - Санкт-Петербург, 2007. - С 22

40. Черкай 3 Н Объединение двух видов лекарственных форм в одну / 3 Н Черкай // Ветеринария и кормление - 2007 - № 3 - С 28-29

Автор выражает благодарность:

1 Ректору ФГОУ ВПО «СПбГАВМ», доктору ветеринарных наук, профессору, члену-корреспонденту РАСХН, Заслуженному деятелю науки РФ А А Стекольникову 2.Проректору по науке ФГОУ ВПО «СПбГАВМ»,

доктору ветеринарных наук, профессору А.А.Сухинину. 3 Научному консультанту, доктору ветеринарных наук,

профессору, Заслуженному деятелю науки РФ, В Д.Соколову.

4. Заведующей кафедрой фармакологии и токсикологии,

доктору биологических наук, профессору Н.Л.Андреевой

5.Дирсктору НИО «Медитэр», кандидату химических наук О.В.Травкину.

6. Ветеринарным специалистам лечебных учреждений Санкт-Петербурга, Калининграда, Ярославля, Мурманска и Смоленска.

Лицензия ПЛД № 69-217 от 22. 10. 1997 г.

Подписано в печать 02.07.2007 Тираж 100 экз Заказ № 120

Отпечатано с готового оригинала-макета

в типографии ООО «Полигон» 198096, Санкт-Петербург, пр. Стачек, 82 тел: 784-13-35

Лекарственные средства являются важной составной частью практической и теоретической ветеринарной медицины. За последние десятилетия существенно расширились возможности фармакотерапии. Это связано, прежде всего, с бурным развитием химико-фармацевтической промышленности и введением в терапевтическую практику новых лекарственных веществ. Кроме того, достижения фундаментальных медико-биологических дисциплин позволяют на молекулярном уровне выявлять новые важные аспекты патогенеза распространенных заболеваний и определять характер воздействия лекарственных препаратов, что существенно влияет на развитие ветеринарной фармакологии (Соколов В.Д. и др., 1989-2005; Шахтместер И.Я., ТенцоваИ.Я., Ажги-хин И.С.,2000; Бацанов Н.П., Булгаков Р.И., Алиев A.A., 2001; Карпенко Л.Ю., Бахта A.A., 2005; Калишин Н.М., Федорова H.A., 2005).

В последние годы, проблема лечения животных, страдающих кожными и офтальмическими болезнями, является особенно актуальной. Поскольку инфекционные заболевания обычно возникают в условиях микробных ассоциаций, связанных с постоянным присутствием разнообразных микроорганизмов на коже и слизистых оболочках глаз. Среди многообразия факторов, способствующих развитию патологического процесса, на первом месте стоят нарушения специфической и неспецифической резистентности организма животных. При этом немаловажное значение имеют: несбалансированное кормление, неадекватное содержание и уход, климатическая нестабильность, особенно, в Северо-Западном регионе (Даричева H.H., Ермолаев В.А., 2001; Мухина Н.В. и др., 2006; Топурия Л.Ю, 2006). Определенное значение имеет влияние ятроген-ных факторов, в частности, широкое, часто немотивированное применение лекарственных препаратов, обладающих иммуносупрессивным действием (антибиотики, цитостатики, глюкокортикостероиды и др.).

Учитывая вышесказанное, особый научный и практический интерес представляет создание комплексных (сложных) фармацевтических препаратов. Перспективность тенденции синтеза таких лекарств определяет их фармакологическая способность одновременно оказывать этиотропное, патогенетическое, компенсаторное и регенерирующее влияние (Соколов В.Д., 1997; Цепков A.C., Девяткина И.А., Данилевская Н.В., 2001; Смирнов П.Н. и др., 2005; Мила-ев В.Б., Шабалина Е.В., Милаева О.Н., 2006).

В мировой литературе имеются многочисленные подтверждения целесообразности использования индукторов эндогенного интерферона при вирусных и бактериальных инфекциях, а также в качестве противоопухолевых и имму-номодулирующих лекарственных средств (Ершов Ф.И., 1996; Романцов М.Г., 1998; Фрейдлин И.С., 1998; Анников В.В., ХапроваТ.С., 2006; ТопурияЛ.Ю., 2006; Stites D.P., Terr F.I., 1991; Bikova J., Keisha A., Barene I., 2003).

Связано это с тем, что с иммунобиологической точки зрения, интерферо-ны рассматриваются, прежде всего, как иммуномодуляторы, влияющие на процессы дифференцирования и функциональную активность эффекторных клеток иммунной системы (Т-лимфоцитов, макрофагов/моноцитов). Под действием интерферона повышается эффективность иммунного распознавания антигена и усиливается фагоцитарная и цитолитическая функции, направленные на элиминацию возбудителя и/или антигенно измененных клеток (Карпенко Л.Ю., 1997; Фрейдлин И.С., 1998; Кузнецова Е.С., 2002; Лямжапо-ва Г.П., 2005; Gaskell R.M., Gaskell С .J., 1988; Arlian L.G., 2003).

Наиболее перспективными в клиническом отношении среди многообразия интерфероногенных препаратов следует признать низкомолекулярные производные акридонуксусной кислоты (10-карбоксиметилен-9-акридона). Эта группа соединений отличается целым рядом положительных фармакологических свойств, приближающих их к созданию "идеального" индуктора интерферона, сочетающего высокую биологическую активность с низкой токсичностью и отсутствием аллергенного, мутагенного и эмбриотоксического действия на организм животных. Наконец, существенным достоинством дериватов акридонуксусной кислоты является отсутствие их метаболического расщепления в печени и кумуляции в организме (Коновалова В.Н., Гринявичус И.Е., Ду-денасР.З., 1979; Травкин О.В., Шведов О.Г., Яковлева Е.В.,1995; Гринберг Г.И., Этингова Н.И., Андреева Н.Р., 1995; Ершов Ф.И., 1999).

Наиболее известны в настоящее время и применяются в ветеринарной практике «Циклоферон» и «Анандин» (Мухина З.Н., Травкин О.В., 1997, Черкай З.Н., 2005-2006).

Анандин для инъекций» не обладает побочным действием, хорошо сочетается с традиционными терапевтическими средствами. Перечисленные эффекты предполагают актуальность комбинации анандина с другими фармакологически активными веществами (антибиотиками, пиретроидами и др.) в составе одного лекарственного препарата. Поскольку такой альянс позволил бы одновременно целенаправленно влиять как на причину (возбудителя) болезни, так и ингибировать и/или компенсировать развивающиеся нарушения на клеточном и тканевом уровне.

Из этого положения вытекает, по меньшей мере, четыре проблемы для научного и практического решения: расширить арсенал препаратов, применяемых в ветеринарной дерматологии и офтальмологии; обосновать целесообразность разработки и внедрения в ветеринарную медицину комплексных (сложных) лекарственных средств для наружного применения; разработать технологию комплексных лекарственных форм с анан-дином для наружного применения и провести их полный фармако-токсикологический анализ; доказать терапевтическую активность и конкурентоспособность разработанных лекарственных форм и внедрить их в широкую ветеринарную практику.

С учетом важности решения проблем, как в теоретическом, так и в практическом плане и проведено настоящее исследование. В нем на основании анализа банка литературных данных, с учетом опыта зарубежных коллег и собственных исследований, определены наиболее перспективные пути, ведущие к снятию дефицита отечественных лекарственных препаратов в области ветеринарной дерматологии и офтальмологии; разработаны рецепты четырех новых лекарственных форм, содержащих анандин; доказана их лечебно-профилактическая активность при соответствующих болезнях собак и кошек; показана целесообразность и перспективность создания и внедрения в ветеринарную практику новых эффективных отечественных лекарственных средств (лекарств).

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЙ

Кожа и глаза являются источником ряда специальных проблем для терапевта. При болезнях кожи и глаз особенно показана местная терапия, хотя некоторые дерматологические заболевания в той же степени или даже лучше реагируют на препараты, назначаемые системно.

Лекарственные препараты для местного применения обычно состоят из активных ингредиентов добавленных к основе, которая упрощает кожную аппликацию или глазную инстилляцию. Однако, разработка таких лекарственных форм, требует специальных знаний, тщательного соблюдения правил их приготовления и контроля качества, поскольку применение лекарств врачами должно основываться на убежденности в высокой терапевтической активности и безопасности препарата для пациента.

Учитывая вышеизложенное, была сформулирована общая цель настоящей работы: разработать теоретическое, экспериментальное и клиническое обоснование перспективности создания лекарственных форм для наружного применения с анандином и внедрить их в ветеринарную практику в качестве лечебно-профилактических средств и препаратов выбора для ветеринарных специалистов на отечественном рынке.

Реализация поставленной цели требовала решения конкретных задач:

1. Разработать и обосновать рецептуру капель глазных-интраназальных с анандином.

2. Изучить безвредность анандиновых глазных-интраназальных капель на лабораторных животных.

3. Разработать нормативно-техническую документацию для капель глаз-ных-интраназальных «Анандин» и определить условия контроля качества препарата в соответствии с требованиями, предъявляемыми к глазным каплям.

4. Провести клинические испытания глазных-интраназальных капель «Анандин» и определить их терапевтическую активность при конъюнктивитах и инфекционном ринотрахеите кошек.

5. Разработать и обосновать лекарственную формулу ушных капель с анандином, обладающих противовоспалительным, антимикробным и регенерирующим действием (ушные капли «Анандин»).

6. Разработать и обосновать рецептуру ушных капель с анандином, обладающих противовоспалительным, антимикробным, регенерирующим и акари-цидным действием (ушные капли «Анандин-плюс»).

7. Изучить безвредность и терапевтическую активность ушных капель «Анандин» и «Анандин-плюс» на лабораторных и мелких домашних животных (собаках и кошеках).

8. Установить методы контроля качества ушных капель с анандином. Разработать нормативно-техническую документацию на ушные капли «Анандин» и «Анандин-плюс».

9. Изучить фунгистатические и фунгицидные свойства «Анандина для инъекций» in vitro и in vivo в эксперименте.

11

10. Разработать и обосновать рецептуру мази поверхностного действия с анандином (2%-ная мазь «Анандин»).

11. Провести биотестирование мази «Анандин» и определить ее безвредность на лабораторных животных.

12. Установить терапевтическую активность мази «Анандин» при дерматитах у собак.

13. Разработать нормативно-техническую документацию и методы контроля качества лекарственной формы - мазь «Анандин».

14. В сравнительном аспекте изучить лечебно-профилактическую активность и состоятельность (конкурентоспособность) новых лекарственных форм с анандином и препаратов-аналогов.

Для решения поставленных задач была составлена программа исследований.

ПРОГРАММА НАУЧНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Впервые разработаны и предложены фармацевтической промышленности рецепты следующих лекарственных форм с анандином:

Капли глазные-интраназальные «Анандин»;

Мазь «Анандин»;

Капли ушные «Анандин»;

Капли ушные «Анандин-плюс».

Дано теоретическое и практическое обоснование их лекарственных формул. В сравнительном аспекте детально изучены фармако-токсикологические свойства новых лекарственных форм.

Установлена безвредность капель глазных-интраназальных «Анандин» на лабораторных животных и соответствие их качества жестким требованиям, предъявляемым Государственной фармакопеей X к глазным лекарственным формам (ст. 319). Разработаны чувствительные и воспроизводимые методики количественного определения лекарственного вещества (анандина) в глазных каплях, позволяющие осуществить контроль их качества. На основании клинических исследований показана терапевтическая эффективность капель глазных-интраназальных «Анандин» при конъюнктивитах и ринитах у собак и кошек, инфекционном ринотрахеите кошек.

Впервые изучены фунгицидные и фунгистатические свойства анандина in vitro и in vivo. Выяснены фармако-токсикологические свойства 2%-ной мази «Анандин». На основании разностороннего биотестирования установлена целесообразность применения и лечебно-профилактическая активность мази «Анандин» при поверхностном кандидозе у лабораторных животных и пити-роспорозе собак.

Впервые разработаны рецепты отечественных ушных капель «Анандин» и «Анандин-плюс» политропного действия.

Изучены: безвредность для животных, противовоспалительная и антимикробная активность ушных капель «Анандин». Отработаны схемы применения препарата при отитах у собак.

Исследованы аллергенные свойства и акарицидная активность ушных капель «Анандин-плюс». Апостериорно доказана целесообразность включения в рецептуру ушных капель синтетических пиретроидов, расширяющих спектр фармакологического действия и терапевтической активности ушных капель «Анандин-плюс». Разработана оптимальная схема их применения при отодек-тозе у кошек и собак. Предложена воспроизводимая методика количественного определения анандина и других лекарственных веществ, входящих в состав ушных капель, позволяющая контролировать их качество.

Теоретически обоснована и экспериментально доказана стратегия создания сложных лекарственных форм для наружного применения с целью достижения многопланового коррегирующего (терапевтического) действия (антимикробного, противовирусного, противогрибкового, противовоспалительного, регенерирующего и т.д.).

Приоритет проведенных исследований подтвержден техническими условиями, регистрационными удостоверениями и сертификатами соответствия на каждый вид лекарственной формы с анандином, а также патентом «Способ лечения отодектозау кошек».

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ И РЕАЛИЗАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ РАБОТЫ

Для использования (применения) в ветеринарно-медицинской практике при работе с мелкими домашними животными (собаки и кошки) предложены новые конкурентоспособные лекарственные формы: капли глазные-интраназальные «Анандин», мазь «Анандин», ушные капли «Анандин» и ушные капли «Анандин-плюс», имеющие ряд преимуществ. Разработаны эффективные схемы применения новых лекарственных препаратов с лечебнопрофилактической целью для собак и кошек. Обоснована новая оригинальная концепция включения в рецептуру лекарственных форм для наружного применения веществ обладающих иммуномодулирующей и интерфероноген-ной активностью.

На основании данных, полученных в ходе экспериментальных исследований, научно обоснованы рациональные составы и технология глазных-интраназальных капель «Анандин», ушных капель «Анандин» и «Анандин-плюс», мази «Анандин».

Изучена их стабильность и определены сроки годности. Разработана технологическая схема их производства. Многолетние научно-практические испытания лекарственных форм с анандином завершены созданием и утверждением четырех видов технических условий, введенных в мае 2000 года без ограничения срока действия:

ТУ 9337-002-46913214-00 «Мазь "Анандин"»;

ТУ 9337-003-46913214-00 «Капли глазные-интраназальные «Анандин»;

ТУ 9337-004-46913214-00 «Капли ушные "Анандин"»;

ТУ 9337-005-46913214-00 «Капли ушные "Анандин-плюс"».

Кроме того, на все лекарственные формы в Департаменте Ветеринарии Министерства сельского хозяйства Российской Федерации нами получены Регистрационные удостоверения (РУ):

РУ № Р078-2-2.0-0940 на препарат капли ушные "Анандин";

РУ № Р078-2-2.0-0941 на препарат капли ушные "Анандин-плюс";

РУ № Р078-2-2.0-0942 на препарат капли глазные-интраназальные

Анандин";

РУ № Р078-2-2.0-0943 на препарат мазь "Анандин".

Обобщенные данные наиболее ценных научно-практических результатов представлены в монографии «Новые лекарственные формы индуктора эндогенного интерферона - анандина. Опыт применения в ветеринарной медицине» (2006) и внедрены в ветеринарных клиниках Северо-Западного и Центрального региона Российской Федерации (Санкт-Петербурге, Мурманске, Калининграде, Ярославле и Смоленской области) в терапевтических целях для собак и кошек.

Результатом тщательных фармако-токсикологических и клинических исследований стало получение сертификата соответствия № РОСС RU. ПР15.В.12549 (срок действия с 12.10.2005 по 12.10.2007), per. № РОСС RU. 0001.11ПР15 на серийный выпуск продукции «Ветпрепараты на основе Анандина» согласно приложения № 1142784: 10%-ный раствор анандина, капли глазные-интраназальные "Анандин", мазь "Анандин", капли ушные для собак и кошек " Анандин" и "Анандин-плюс".

На основе объективных научно-практических данных разработаны и утверждены Временные наставления по применению «Ветеринарных препаратов на основе анандина» (1998), которые заменены в настоящее время Инструкциями по применению на следующие лекарственные формы:

Капли глазные-интраназальные «Анандин» (2006); мазь «Анандин» (2006);

Ушные капли «Анандин» (2006);

Ушные капли «Анандин-плюс» (2006).

В 2006 году нами получен Аттестат ФГУ Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов, удостоверяющий соответствие требованиям, предъявляемым к производству ветеринарных препаратов, и наличие условий для выпуска: капель глазных-интраназальных «Анан-дин», 2%-ной мази «Анандин», ушных капель «Анандин» и «Анандин-плюс».

Репрезентативная информация о научно-исследовательской работе использована при проведении лекционных и лабораторно-практических занятий со студентами и ветеринарными врачами в Санкт-Петербургской Государственной академии ветеринарной медицины и других высших учебных заведениях страны.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Основные положения диссертационной работы доложены и одобрены на ежегодных заседаниях Ученого совета ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины (ФГОУ ВПО «СПбГАВМ»), научных конференциях профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников, молодых ученых и аспирантов ФГОУ ВПО «СПбГАВМ» (1995 - 2003 гг.); X-XVI Международных межвузовских научно-практических конференциях «Новые фармакологические средства в ветеринарии» (Санкт-Петербург, 1998 - 2004 гг.); конференции Ассоциации практикующих ветеринарных врачей «Актуальные проблемы ветеринарной медицины мелких домашних животных» (Санкт-Петербург, 1999 г.), Международных симпозиумах «Современные проблемы ветеринарной диетологии и нутри-циологии» (2001 - 2005 гг.), Международных научно-практических конгрессах «Ветеринария. Зоотехния» (2001 - 2006 гг.). Ряд выступлений отмечены Почетными дипломами.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

В результате проведенных научных исследований, клинических испытаний и внедрения разработаны и выносятся на защиту следующие основные положения.

1. Результаты теоретических и экспериментальных исследований по разработке рецептуры и технологии новых лекарственных препаратов на основе анандина (3 вида капель и мазь).

2. Результаты фармакотоксикологического анализа безвредности четырех новых сложных лекарственных форм анандина.

3. Результаты клинических испытаний по изучению терапевтической активности глазных-интраназальных капель «Анандин» при конъюнктивитах и инфекционном ринотрахеите кошек.

4. Результаты клинических испытаний по изучению терапевтической эффективности ушных капель «Анандин» при отитах у собак и кошек.

5. Результаты клинических испытаний по изучению терапевтической активности ушных капель «Анандин плюс» при отодектозе кошек и собак.

6. Результаты изучения антимикотической активности «Анандина для инъекций».

7. Результаты клинических испытаний 2%-ной мази «Анандин» при питироспорозе и поверхностном кандидозе у собак.

ПУБЛИКАЦИИ

По теме диссертации опубликовано 40 научных работ, 10 из них - в рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК России, 10 - в материалах международных и российских конференций, 3 учебных пособия, в том числе «Новые лекарственные формы индуктора эндогенного интерферона - анандина. Опыт применения в ветеринарии» (Гриф МСХ РФ, 2006).

ВНЕДРЕНИЕ

Материалы диссертации используются в ветеринарной практике клиник Российской Федерации и учебном процессе ветеринарных факультетов высших учебных заведений Министерства сельского хозяйства РФ.

ВЫВОДЫ

Включение иммуномодулятора «Анандин®» - 1,2:5,6-ди-о-изопропилиден-а-0-глюкофураноза-3-0-(К,Ы-диметиламинопропил)-10-мети-ленкарбоксилат-9-акридон - в структуру лекарственных форм для наружного применения позволило расширить спектр фармакологической активности последних и повысить их терапевтическую активность.

2. Глазные-интраназальные капли «Анандин» не обладают местным раздражающим действием, аллергенными свойствами и не вызывают болевых ощущений при инсталляции.

3. Глазные-интраназальные капли «Анандин» оказывают эффективное противовирусное действие при конъюнктивите, сопровождающем инфекционный ринотрахеит кошек, а также терапевтически активны в 80% случаев острых конъюнктивитов различного генеза у кошек.

4. Оптимальная схема применения глазных-интраназальных капель «Анандин» при конъюнктивите кошек: 1-2 капли/глаз, 3-4 раза в день, 7-10 дней.

5. Ушные капли «Анандин» не обладают местным раздражающим действием и аллергенными свойствами, проявляют противовоспалительное (за счет анандина), антимикробное (благодаря грамицидину С), регенирирующее (обусловленное маслом касторовым), действие при остром наружном отите у собак.

6. Оптимальная схема применения ушных капель «Анандин» при остром наружном отите у собак: 2-4 капли/ухо, 2 раза в день 7-10 дней.

7. Ушные капли «Анандин плюс» не оказывают местного раздражающего и аллергенного действия, обладают противовоспалительным, антимикробным, регенирирующим и акарицидным (за счет циперметрина/перметрина) действием при отодектозе кошек и собак, а также отодектозе, осложненном отитом.

8. Применение ушных капель «Анандин плюс» при отодектозе кошек также эффективно, как и применение мази «Акаробор» и эффективнее на 20% по сравнению с применением «Неостомазана» при лечении отодектоза и на 40% при лечении отодектоза, осложненного отитом. По своим фармакологическим свойствам и терапевтической активности при отодектозе собак ушные капли «Анандин плюс» не уступают мази «Акаробор» и превосходят ушные капели «Отоферонол®» на 10 %.

9. Оптимальная схема применения ушных капель «Анандин плюс» для кошек: 2-3 капли/ухо, 1 раз в 3-5 дней, в течение 2-3 недель. Оптимальная схема применения ушных капель «Анандин плюс» для собак: 4-5 капель/ухо, 1 раз в 5 дней, 3-х кратно.

10. Применение «Анандина для инъекций» на модели генерализованного кандидоза у белых мышей в дозе 10 мг/кг, в течение 5 дней после заражения увеличивает продолжительность жизни белых мышей в 2,3 раза.

11. Мазь «Анандин» не обладает местным раздражающим действием и аллергенными свойствами, оказывает противогрибковое и заживляющее действие на экспериментальной модели поверхностного кандидоза у морских свинок, купируя сроки выздоровления, по сравнению со спонтанным исцелением, на 10-12 дней.

12. На экспериментальной модели поверхностного кандидоза у кроликов-альбиносов 2%-ная мазь «Анандин» оказывает противогрибковое и заживляющее действие, купируя сроки выздоровления, по сравнению со спонтанным исцелением, на 8 дней.

13. Мазь «Анандин» обладает высокой антимикотической, противовоспалительной и регенерирующей активностью при питироспорозе и поверхностно-очаговом кандидозе кожи у собак, купируя патологический процесс в течение 10-14 дней.

14. Эффективность противогрибковой терапии повышается при сочетан-ном применение 2%-ной мази «Анандин» и однократного внутримышечного введения «Анандина для инъекций» из расчета 10 мг/кг массы тела собаки.

15. Под действием сочетанного применения 2%-ной мази «Анандин» и «Анандина для инъекций» по сравнению с изолированным применением «Нистатиновой мази» и 1%-ного крема «Клотримазола» более эффективно происходит нормализация рН кожи до уровня 5,68±0,09 (Р< 0,05), повышение уровня миелопероксидазы до уровня 1,31±0,03 (Р< 0,001) и лизосомных катионных белков до уровня 1,62±0,02 (Р< 0,05), а также восстановление показателей лей-кограммы у больных собак.

16. Под действием 2%-ной мази «Анандин» и «Анандина для инъекций» по сравнению с изолированным применением нистатиновой мази и 1%-ного крема клотримазола уровень Т- и В-лимфоцитов в крови больных собак достоверно повышается до такового у клинически здоровых животных. Так, уровень Т-лимфоцитов составил 41,24±1,10% (Р< 0,001), уровень В-лимфоцитов - 23,01± 1,19 % (Р< 0,001).

17. Оптимальная схема применения 2%)-ной мази «Анандин» при дер-матомикозах, спровоцированных Malassezia pahydermatis и Candida albicans: аппликация тонким слоем на пораженный участок, 2 раза в день в течение 1014 дней.

18. Фармакологическая и терапевтическая эффективность новых лекарственных форм «Анандина» наглядно демонстрирует научно-практическую целесообразность их разработки и перспективность внедрения политропных лекарственных средств, с включением в рецептуру этих препаратов иммуномо-дулирующих веществ.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Разработаны и внедрены в производство четыре новых лекарственных формы анандина для наружного применения.

2. Разработаны и утверждены в Департаменте Ветеринарии Инструкции по применению для глазных-интраназальных, двух видов ушных капель и мази с анандином.

3. ТУ 9337-003-46913214-00 Капли глазные-интраназальные «Анан-дин» без ограничения срока.

4. ТУ 9337-004-46913214-00 Капли ушные «Анандин» без ограничения срока.

5. ТУ 9337-005-46913214-00 Капли ушные «Анандин плюс» без ограничения срока.

6. ТУ 9337-002-46913214-00 Мазь «Анандин» без ограничения срока.

7. Аттестат ФГУ ВГНКИ, удостоверяющий соответствие и наличие условий для промышленного производства четырех новых лекарственных форм анандина для наружного применеия.

8. Патент РФ «Способ лечения отодектоза у кошек».

9. Новые лекарственные формы индуктора эндогенного интерферона - анандина. Опыт применения в ветеринарии: Учебное пособие / З.Н.Черкай. - СПб., 2006, - 93 с.

10. Материалы диссертационной работы внедрены в учебный процесс ветеринарных факультетов высших учебных заведений Министерства сельского хозяйства Российской Федерации.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В результате проведенных исследований были разработаны и обоснованы в научно-теоретическом и практическом плане рецепты четырех новых лекарственных форм анандина: глазные-интраназальные капли «Анандин», ушные капли «Анандин», ушные капли «Анандин плюс» и 2%-ная анандиновая мазь.

В ходе работы была установлена безвредность и фармакологическая активность новых лекарственных средств, изучены терапевтические возможности новых препаратов при болезнях собак и кошек. Отработаны схемы применения: глазных-интраназальных капель «Анандин» при конъюнктивитах и инфекционном ринотрахеите кошек; ушных капель «Анандин» при острых наружных отитах у собак; ушных капель «Анандин плюс» при отодектозе, в том числе, осложненном отитом у кошек и собак; 2%-ной анандиновой мази при питироспорозе и поверхностном кандидозе кожи.

В результате, проделанной диссертационной работы фармацевтической промышленности и ветеринарным специалистам предложены четыре новые лекарственные формы анадина для наружного применения.

На разработанные лекарственные препараты была подготовлена и утверждена в Департаменте Ветеринарии, ФГУ «ВГНКИ», Госстандарте России нормативно-техническая документация: технические условия, регистрационные удостоверения и сертификаты соответствия. Получен аттестат ФГУ ВГНКИ, разрешающий выпуск новых лекарственных форм анандина промышленным способом. Получен патент РФ «Способ лечения отодектоза у кошек».