Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.06) на тему:Ветеринарно-гигиеническая оценка применения Анандина при выращивании телят

02-4

1506-9

На правах рукописи

Тройский Константин Александрович Ветеринарно-гигиеническая оценка применения Анандина при выращивании телят

16.00.06 - ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза

АВТОРЕФЕРАТ ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА ВЕТЕРИНАРНЫХ НАУК

САНКТ-ПЕТЕРБУРГ 2002

Работа выполнена на кафедре зоогигиены Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины.

Научный руководитель - доктор ветеринарных наук,

профессор, заслуженный деятель науки РФ

Кузнецов Анатолий Федорович Официальные оппоненты - доктор ветеринарных наук, профессор

Мухина Нина Васильевна доктор биологических наук, профессор Сердюк Григорий Николаевич

Ведущая организация - Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина

Защита диссертации состоится «Ь » ^ 2002 г.

в _часов на заседании диссертационного совета Д 220.059.02. при

Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины по адресу: 196084, Санкт-Петербург, улица Черниговская, дом 5.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины.

Автореферат разослан « » ¡¿С& 2002 г,

Ученый секретарь

диссертационного совета Сафронов Е. Н.

и \ АЧ I ИНАЯ

I 1 |„\

Актуальность темы. Глобальное загрязнение окружающей среды, несоблюдение ветеринарно-санитарных и гигиенических условий содержания животных и кормления, активное применение лекарственных средств, наличие стресс-факторов и использование интенсивных технологий часто приводит к снижению реактивности организма животного. Влияние различных антропогенных факторов вызывает глубокие изменения и проявление определенных системных патологий. В такой ситуации организм животного оказывается неспособным к адекватному ответу, что особенно актуально в условиях современного животноводства.

В настоящие время проводится большая работа по созданию оптимальных условий содержания и выращивания животных и поиск новых решений, направленных на повышение естественной резистентности, сохранения здоровья и получение высокой продуктивности.

Практический интерес, в данной ситуации, представляет стимулирующие средства, моделирующие иммунные реакции организма. К наиболее перспективной, успешно развивающейся группе иммуностимуляторов относятся синтетические фармакологические средства.

Из них, наибольший интерес представляют низкомолекулярные синтетические соединения, среди которых особенно выделяются производные акридонуксусной кислоты. Кроме специфического воздействия на организм -корректирование иммунодефицитных состояний - эти препараты оказывают целый ряд позитивных биолого-хозяйственных эффектов ( В.Д. Соколов, Н.Л. Андреева, А.Ф. Кузнецов, Н.В. Мухина, З.Н. Мухина,Травкин О.В., Яковлева Е.В., и др.).

Универсальным представителем этого класса средств, является сравнительно новый синтезированный препарат Анандин. Препарат зарекомендовал себя как эффективное противовирусное и иммуностимулирующее средство. Поэтому мы решили применить Анандин в качестве иммуностимулятора в критические периоды жизни телят - сразу после рождения, в возрасте 10 и 30 суток.

Дель и задачи исследований. Целью настоящей работы, было, изучение возможности применения Анандина в качестве иммуностимулирующего средства у новорожденных телят в выше указанные критические периоды их развития.

В связи с этим, дня решения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Изучить влияние препарата Анандин (однократное введение доза 0,2 мг/кг массы тела) на организм телят неонатального возраста(1-3 суток, 10-12 суток и 30 суток):

- клиническое состояние организма животных, включая копрограмму;

- морфологические и биохимические показатели крови телят;

- иммунологические показатели сыворотки крови телят;

- активность ферментов лимфоцитов в сыворотке крови телят;

- лизоцимную активность сыворотки крови телят;

- бактерицидную активность сыворотки крови телят.

2. Определить наиболее эффективную схему введения препарата Анандин телятам в критические периоды.

Научная новизна. Впервые определена эффективность применения телятам неонатального возраста препарата Анандин, в качестве иммуностимулирующего средства в дозе 0,2 мг/кг массы тела внутримышечно.

Изучены и представлены данные по влиянию Анандина на факторы неспецифической защиты организма телят: лизоцимная и бактерицидная активность сыворотки крови.

Впервые получены и обработаны иммунологические показатели сыворотки крови телят по НСТ-тесту ( тест восстановления нитросинего тетразолия) и ЛКТ-тесту (лизосомально-катионный тест), которые указывают на кислородзависимую и кислороднезависимую стадии фагоцитоза; ЦИК (циркулирующие иммунные комплексы) и РТМЛ (реакция торможения миграции лейкоцитов) отражающих функциональное состояние гуморального и клеточного иммунитета.

С целью изучения динамики метаболических реакций проведены исследования активности ферментов лимфоцитов ЛДГ(лактат дегидрогеназа),СДГ (сукцинат дегидрогеназа), оксиредуктазы: НАДФ

(никотинамидадениндинуклеотидфосфат) и НАД (никотинамидаденин-динуклеотид) , Г-бф-ДГ (глюкозо- 6 фосфат дегидрогеназа), а-Гф-ДГ (альфа-глицерофосфат дегидрогеназа), показывающих интенсивность обменных процессов иа уровне клетки, обеспечивающих гомеостаз естественной резистентности животных.

Практическое значение работы. Отработаны схемы применения Анандина у телят в критические периоды их жизни: после рождения на 1-3, 10-12 и 30 сутки. Результаты проведенных исследований позволяют предложить Анандин в качестве эффективного иммуностимулятора в дозе 0,2 мг/кг массы тела внутримышечно, однократное введение его, повышает резистентность и сопротивляемость организма, укрепляет иммунную систему, повышенная реактивность которой сохраняется не менее 30 суток.

Апробация работы.

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на конференции профессорского-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов (Санкт-Петербург, СПбГАВМ, 2000, 2001 г.г.);на конференциях молодых ученых и студентов (Санкт-Петербург, СПбГАВМ, 2000,2001 г.г.).

Публикации.

Основные положения диссертации опубликованы в 3-х печатных работах. Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 127 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждение полученных результатов, списка использованной литературы и приложения.

Работа содержит 14 таблиц, 8 рисунков.

Список литературы включает 254 наименований, в том числе 71 иностранных авторов.

Вопросы выносимые на защиту.

1. Изменение клинических, гематологических показателей у телят при применении Анандина,

2. Изменение иммунологических показателей у телят после применения Анандина.

3. Влияние Анандина на производственные показатели телят.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы, условия и методы проведения исследований

Работа выполнена на основании плана научно-исследовательской работы кафедры зоогигиены Санкт-Петербургской Государственной академии ветеринарной медицины по теме № 16 в период с 1999 по 2001 г.г.

Для проведения исследования использовали препарат Анаидин изготовленный фирмой «Медитэр» (патент № 2080108).

Исследования были проведены в зимне-весенний и летний период года в профилактории и в помещении первого периода выращивания телят на ферме «Бугры» в ЗАО «Верево». В помещения подается воздух по воздуховодам, а удаление - естественное с использованием вытяжных шахт. В холодное время года подогрев осуществляется с использованием электрокапорифера. В качестве подстилочного материала в индивидуальных клетках применяли солому, а в групповых станках опилки.

Для определения эффективности влияния Анандина, мы провели серию из трех экспериментов с использованием данного препарата. Нами было сформировано 3 группы опытные и 3 контрольные по 10 телят в каждой.

Анандин вводили однократно в дозе 0,2 мг/кг массы тела, кровь на исследования брали перед каждым следующим введением.

В первом опыте препарат применили на 10 суточных телятах, во - втором опыте - в месячном возрасте, а в третьем сразу же после рождения, в 10 дневном возрасте и на 30 сутки. Для отслеживания динамики и создание наиболее оптимальной схемы применения Анандина в критические периоды жизни телят окончательный результат действия препарата проверяли на 60 сутки.

Кормление в подопытных и контрольных группах было идентичным. Рацион обеспечен по своей питательности в соответствии с нормами ВИЖа.

Перечень исследований, проведенных в результате эксперимента на телятах, а также показатели по которым они осуществлялись, изложены в таблице.

Таблица

Схема опытов, проведенных в результате научно-производственного __эксперимента на телятах.__

Название этапов эксперимента Название исследований Показатели, по которым осуществлялись исследования

Климатические условия эксперимента Метеорологическое исследование Температура воздуха, относительная влажность, скорость движения воздуха, наличие вреднодействующих газов (аммиак, сероводород, диоксид углерода)

Влияние Амандина на организм 30 суточных телят Клинические Масса тела, температура, дыхание, пульс, окраска слизистых оболочек, состояние волосяного покрова, подвижность, реакция на внешние раздражители, гюедаемость корма.

Копрологические Консистенция, цвет, запах, наличие растительной клетчатки, рН, жир, жирные кислоты, крахмал, детрит, растворимый белок, билирубин, стеркобилин.

Клинико-гематологические Количество эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, лейкоформула

Биохимические, сыворотка крови Общий белок, кльций, фосфор, каротин, альбумины, а, (5, у - глобулины, резервная щелочность

Иммунологические РТМЛ с ФГА, РТМЛ с КонА, НСТ-баз, НСТ-стим, ЛКТ, ЦИК

Метаболизм лимфоцитов (активность, ферментов - дегид-рогеназ') ЛДГ, Г-б-ф-ДГ, СДГ, а-Гф-ДГ, НАД- и НАДФ-оксиредуотазм

Производственно- хозяйственные показатели Прирост массы тела

Название этапов эксперимента Название исследований Показатели, по которым осуществлялись исследования

Влияние Анан-дина на организм 60 суточных телят Клинические Те же показатели, что и у 30 суточных телят.

Копрологические Те же показатели, что и у 30 суточных телят, при применении Амандина

Юшнико-гематологические Количество эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, лейкоформула

Биохимические, сыворотка кропи Общий белок, кльций, фосфор, каротин, альбумины, а, р, у - глобулины, резервная щелочность

Иммунологические РТМЛ с ФГА, РТМЛ с КонА, НСТ-баз, НСТ-стим, ЛКТ, ЦИК

Метаболизм лимфоцитов (активность, ферментов - дегид-рогеназ) ЛДГ, Г-6-ф-ДГ, СДГ, а-Гф-ДГ, НАД- и НАДФ-оксиредуктазы

Производственно- хозяйственные показатели Прирост массы тела

Для определения показателей микроклимата: температуры, относительной влажности, скорости движения воздуха, наличия вреднодействугащих газов (аммиак, сероводород, диоксид углерода) в животноводческих помещениях, были использованы общепринятые методики.

Температуру и влажность измеряли аспирационным психрометром МВ-4м, динамику этих показателей контролировали недельным термографом М-16 и гигрографом М-21.

Скорость движения воздуха определяли шаровым кататермометром Хилла.

Содержания аммиака, сероводорода и диоксида углерода определяли с помощью газоанализатора УГ-2.

Все показатели микроклимата определяли ежедекадно в 3 смежных дня, три раза в сутки, в трех точках: в торцах, на двух уровнях - 0,5 и 1,5 м от пола и в центре помещения; параметры микроклимата, в течении суток регистрировали непосредственно в зоне нахождения животных в 8-9, 14-15, и 20-21 час.

При проведении клинических исследований были применены методы визуальной и инструментальной оценки для определения общефункционального состояния телят. Учитывали следующие показатели: масса тела, температура, дыхание, пульс, окраска слизистых оболочек, состояние волосяного покрова, подвижность, реакция на внешние раздражители, поедаемость корма.

Для определения состояния естественной резистентности и иммунобиологической реактивности организма животных были использованы методики клинических, морфологических, биохимических и иммунобиологических исследований. Кровь для исследований брали из яремной вены в первые сутки, а затем, каждый раз перед введением очередной дозы препарата. Стабилизировали кровь гепарином производства фирмы «Реанал» (Венгрия) концентрация которого 5000 МЕ. в 1мл,

Количество эритроцитов и лейкоцитов в крови определяли традиционным способом в счетной камере Горяева с использованием меланжеров для разведения крови (И.М.Беляков и другие, 1992). Содержание гемоглобина крови определяли гемоглобин-цианидным методом по Л.М. Пименовой и Г.В. Дервиза (1974).

Содержание общего белка определяли рефрактометром «РЛУ», белковые фракции методом электрофореза на бумаге. Фракционирование сывороточных белков проводили на аппарате УДФ, предназначенном для разделения белков и других высокомолекулярных соединений. В исследованиях применяли вероналовый буфер с рН 8,6.

Для определения неспецифической реактивности организма телят использовали следующие тесты:

1) лизоцимная активность сыворотки крови

2) бактерицидная активность сыворотки крови

Лизоцимную активность сыворотки крови определяли нефелометрическим методом в модификации А.Ф. Кузнецова (1975). Суточную агаровую культуру М. ЬуБОс1есиси8 использовали в качестве тест культуры.

Бактерицидную активность определяли по методу О.В. Смирновой и Т.А. Кузьминой (1966). В качестве тест - микроба использовали суточную бульонную культуру Б. ЛЛИп, штамм 23а/5.

Иммунологические исследования сыворотки крови телят осуществляли на базе кафедры биохимии Военно-медицинской академии под руководством доктора медицинских наук Пастушенкова В.Л.

Полученные данные статистически обработаны.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Во время проведения научно-производственного опыта осуществлялся мониторинг микроклимата в помещении профилактория и телятника.

За весь зимний период существенных изменений показателей микроклимата не отмечено. Даже в самые морозные дни в секциях профилактория, температура воздуха не снижалась ниже 14,2°С. Средняя температура воздуха составила 15,3 С. В весенний период , температура воздуха в секциях профилактория колебалась в пределах 14,0-18,1°С, составила в среднем 16,6°С. В летнее время года была отмечена температура на уровне 16,5-21 С, а средняя составила 18,2 °С.

При снижении температуры воздуха отмечали изменение влажности. Чем ниже спускалась температура, тем выше становились показатели влажности. Относительная влажность воздуха в помещении, в зимний период была наивысшей и колебалась в пределах от 61 до 75%. В весенний период она составила 72,15%, а в летний период она изменялась от 53,4% до 61,7%

Клинические наблюдения за животными после введения Анандина показали, что общее состояние животных оставалось удовлетворительным, изменений в поведении и координации движений не отмечали. Цвет слизистых оболочек имел бледно-розовую окраску и оставался без изменений в течении всего эксперимента. Телосложение телят было крепким и пропорциональным. Особенно эти признаки отмечали у телят которым была проведен курс стимуляции препаратом Анандин. Реакция на тактильные, звуковые и световые раздражители была адекватной. Тонус мышц у телят был нормальным, судороги отсутствовали. Заметных изменений температуры тела, частоты пульса и дыхательных движений животных обнаружено не было.

Анализируя полученные данные можно сделать следующие заключение, что применение препарата Анандин не оказывало отрицательного влияния на клиническое состояние телят.

По результатам копрологических исследований у 30 и 60 суточных телят отмечали выделение слизи в небольшом количестве, жирные кислоты отсутствовали, мыла обнаруживались в небольшом количестве по сравнению с контрольной группой животных. В кале которых отмечали увеличение содержания жиров, повышенное содержание жирных кислот.

Показатель рН в опытной группе был несколько выше чем у контрольных животных, что можно объяснить изменение состава микрофлоры желудочно-кишечного тракта телят. Остальные показатели билирубин, стеркобилин существенных различий не имели, как в сравнении с контрольной группой, так и в динамике эксперимента.

Рассматривая результаты можно сделать вывод, что применение Анандина не нарушало физиологическую деятельность желудочного кишечного тракта.

Влияние препарата Анандин на морфологию и биохимию крови выражалось в следующих показателях: количество эритроцитов в наших исследованиях количество у 30 суточных телят было выше на 9,6%, у 60 суточных на 8,4%, чем у телят контрольной группы, уровень гемоглобина под действием Анандина возрастал у 30 суточных и 60 суточных телят на 3,2% и на 4,2% соответственно. Количество лейкоцитов повышалось у 30 суточных телят на 32,6%, у 60 суточных на 12,5%. Это увеличение количества лейкоцитов находилось в пределах физиологических норм, способствует укреплению естественной резистентности телят.

Анализируя данные лейкограммы у 30 суточных телят' можно отметить увеличение количества лимфоцитов на 4,9%, повышенное количество палочкоядерных нейтрофилов 1,7% по отношению к контрольной группе 0,7% и снижение эозинофилов на 41,8%, сегментоядеряых нейтрофилов на 20,3% соответственно. Увеличение количества лимфоцитов свидетельствует об усилении гуморального и тканевого иммунитета. Преобладание палочкоядерных нейтрофилов над сегментоядерными, хотя их количество находилось в пределах нормы может говорить о некоторой незрелости организма телят.

Лейкограмма 60 суточных телят показала увеличение лимфоцитов на 6,16%, сегментоядерных нейтрофилов иа 11,2%, снижение эозинофилов на 43,4%, нейтрофилов палочкоядерных на 29,7% по отношению к контрольной группе животных.

Рассматривая в динамике изменение лейкограммы телят можем отметить, что количество лимфоцитов осталось на высоком уровне 73-74%. С возрастом поменялось отношение палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов. У 60 суточных телят преобладают сегментоядерные нейтрофилы. Соотношение составило 3,3% к 19,7%.

Резюмируя полученные данные, можно сделать следующие выводы. Количество эозинофилов и моноцитов у опытных телят находилось в пределах физиологических норм. Отсутствие молодых и юных нейтрофилов, и нормативное количество палочкоядерных, сегментоядерных нейтрофилов указывает на отсутствие реактивных процессов. Увеличение лимфоцитов способствует повышению защитных сил организма животных.

Биохимические исследования сыворотки крови телят показали, что уровень кальция в сыворотке крови увеличивался в опытных группах по отношению к контролю - у 30 суточных телят на 3%, у 60 суточных - на 20,4%. Уровень фосфора в опытных группах был выше (на 28 и 35%), по сравнению с контрольными группами, однако эти значения находились в пределах

физиологических норм. Также было отмечено увеличение количество каротина у 60 суточных телят на 20% по отношению к контрольной группе.

Резервная щелочность крови у 30 и 60 суточных телят которым вводили Анандин была выше на 31,7% и 1,5% по отношению к контролю. Но это увеличение не превышало физиологические нормы.

Уровень общего белка у 30 суточных телят опытной группы был ниже на 8,6%чем в контрольной группе. У 60 суточных телят содержание общего белка также снижалось на 25,6% по отношению к контролю. Таким образом, понижение содержания общего беяка у телят опытных групп, может указывать на более активный обмен веществ в организме, на повышение синтетических процессов.

Содержание общего белка и его фракций не является стабильным, они зависят от физиологического состояния организма. Поэтому определение концентрации общего белка сыворотки крови еще не дает ответа на вопрос о том, концентрации каких именно белков сыворотки крови изменяются после введения иммуномодулятора. В наших исследованиях установлено, что после применения Анандина количество альбуминов у 30 суточных телят понижалось на 8,6%, а у 60 суточных на 15,3% по отношению к контрольной группе, из фракции глобулинов у 30 и 60 суточных телят отмечали увеличение альфа-глобулинов на 7,7% и 9,1% по отношению к контролю; содержание бета-глобулинов увеличивалось на 8,2% и 21,7%, а доля гамма-глобулинов была выше на 17,5% и 35,8%, в сравнении с контролем. По всей вероятности, факт повышения уровня гамма-глобулинов и изменение отношения альбуминов и глобулинов в крови опытных животных объясняется активизацией механизма синтеза защитных белков.

Изучение показателей естественной резистентности показало, что применение Анандина 30 и 60 суточным телятам способствует повышению уровня лизогдимной активности сыворотки крови на 5,4% и 10%, бактерицидной активности сыворотки крови на 11,9% и 5,6% по сравнению с контрольной группой.

Таким образом, можем отметить, что применение препарата Анандин оказало существенное влияние на бактерицидную и лизоцимную активность сыворотки крови, способствовало повышению естественной резистентности организма телят.

Реакция торможения миграции лейкоцитов с митогенами ФГА и КонА отражает функциональное состояние клеточного (Т- системы) иммунитета. При применении Анандина показатели РТМЛ с ФГА и Кона у 30 суточных телят увеличивались на 3,92% и на 2,83% по отношению к контрольной группе, что свидетельствует о некотором снижении реактивности функционального состояния Т- лимфоцитов, но не выходящим за границы физиологических норм.

Определение уровня циркулирующих иммунных комплексов указывает на состояние гуморального иммунитета (В - системы). В нашем эксперименте показатель уровня ДИК в опытной группе был ниже на 7,9%, чем в контроле. Это показывает на отсутствие в организме телят какого-либо иммунопатологического процесса.

Показателями фагоцитоза в организме является тест восстановления нитросинего тетразолия (НСТ - базальный и НСТ - стимулированный) и лизосомальнокатионный тест (ЛКТ). При применении Анандина тесты с кислородзависимой биоцидностью НСТ - базальный и НСТ - стимулированный повышаются на 25% и на 21% по отношению к контролю. Увеличение этих показателей говорит об усилении функции фагоцитоза в организме опытных животных, расхождение показателей НСТ - теста по отношению к друг к другу, указывает на положительную активность кислороднезависимой стадии фагоцитоза, что является физиологической нормой.

В наших исследованиях показатели ЛКТ при применении Анандина телятам не изменялись.

Таким образом, применение препарата Анандин способствовало изменению активности Т- и В- систем иммунитета и не оказывало отрицательного влияния на состояние неспецифической резистентности организма телят.

Активность ЛДГ снижена на 16,6% в опытной группе по отношению к контрольной. Активность СДГ в опытной группе повышалась на 25%. Возрастание активности ферментов СДГ при снижении активности ферментов ЛДГ свидетельствует о регуляции метаболизма лимфоцита на основе эффекта Пастера

При введении телятам Анандина активность Г-6-ФДГ снижалась на 9,5%, что указывает на снижение активности процессов пентозного цикла.

Активность фермента а-ГФДГ повышалась в опытной группе на 10,5% по сравнению с контрольной группой, а активность НАДФ- оксиредуктазы снижалась на 8,3% в группе телят которым вводили Анандин,

Изучая иммунологический статус 60 суточных телят после введения Анандина можно сделать вывод, что применение препарата, достоверно снижает показатели РТМЛ с ФГА на 11,7%, РТМЛ с КонА на 8,3 %, что свидетельствует о повышении функционального состояния Т- лимфоцитов. Показатели НСТ - теста базального и стимулированного также повышаются на 26,6% и на 36,3% соответственно.

Уровень циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови опытных телят был ниже на 4,3% по отношению к контрольной группе.

Отмечено также снижение активности ЛДГ на 9,5% по отношению контролю, увеличение СДГ на 21%, а-ГФ-ДГ на 31,5%, Г-6-ФДГ на 24%, НАД-окс на 50%, НАДФ-окс на 18% соответственно. Полученные данные показывают высокую ферментативную активность лимфоцитов у телят опытной группы, что способствует активации функций клеток иммунной системы.

Нами были проведены иммуно-биохимическис исследования сыворотки крови телят после последовательного однократного введения Анандина на 1, 10 и 30 сутки, в динамике на одних и тех же телятах. Полученные данные говорят о достоверном увеличении ряда иммунологических показателей реактивности лейкоцитов - РТМЛ с ФГА и РТМЛ с КонА; НСТб и НСТст; СДГ; ЦИК соответственно: 28%; 10,7%; 38,8%; 8,7%. Высокий уровень показателей сохранялся в течение 30 суток. Таким образом можно предположить, что применение Анандина способствует изменению активности функций иммунных клеток, положительно влияет на функциональные показатели Т- и В- систем иммунитета и способствует укреплению состояния неспецифической резистентности организма телят.

Повышение естественной резистентности телят, в свою очередь, способствовало улучшению производственно-хозяйственных показателей. В опытной группе животных прирост массы тела был выше на 10,3% по сравнению с контрольной группой.

Таким образом, все приведенные выше данные подтверждают факт о целесообразности применения препарата Анандин для повышения естественной резистентности организма телят.

5. ВЫВОДЫ

1. Препарат Анандин при парентеральном введении телятам в дозе 0,2 мг/кг однократно не обладает местнораздражающим действием и не оказывает отрицательного влияния на физиологическое состояние животных. Применение Анандина обеспечивало 100% сохранность опытного поголовья телят. Слизистые оболочки ротовой полости имели бледно-розовую окраску. Телосложение телят было крепким и пропорциональным. Телята живо реагировали на внешние раздражители. Тонус мышц у телят был нормальным.

2. Копрологические исследования у опытных групп телят показали наличие слизи и мыла в небольшом количестве, жирные кислоты отсутствовали, мыла обнаруживались в небольшом количестве по сравнению с контрольной группой животных. Показатель рН кала в опытной группе был несколько выше чем у контрольных животных. Остальные показатели билирубин, стеркобилин

существенных различий не имели, как в сравнении с контрольной группой так и в динамике эксперимента.

3. Применение Анандина телятам оказывало благоприятное влияние на морфологические и биохимические показатели крови. Количество эритроцитов у 10 суточных телят, которым вводили Анандин было выше на 9,6%, у 30 суточных - на 8,4%, чем у телят контрольной группы. Уровень гемоглобина возрастал на 3,2% и на 4,2% соответственно. Количество лейкоцитов повышалось у 10 суточных телят на 32,6%, у 30 суточных - на 12,5%. Показатели Ca, Р (неорганический), резервной щелочи и каротина существенных изменений не претерпели.

4. Содержание общего белка в сыворотке крови телят опытной группы несколько уменьшалось; количество альбуминов у 10 суточных телят понижалось на 8,6%, а у 30 суточных на 15,3% по отношению к контрольной груше, из фракции глобулинов у 10 и 30 суточных телят отмечали увеличение алфа-глобулинов на 7,7% и 9,1% по отношению к контролю; содержание бета-глобулинов увеличивалось на 8,2% и 21,7%, а доля гамма-глобулинов была выше на 17,5% и 35,8%, в сравнении с контролем.

5. Использование Анандина способствовало активизации факторов неспецифической защиты организма посредством повышения уровня бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови. У 10 и 30 суточных телят при применении Анандина бактерицидная активность сыворотки крови была выше - на 11,9% и 5,6%, а лизоцимная активность выше - на 5,4% и 10%, по отношению к контрольной группе.

6. Показатели фагоцитоза с кислородзависимой биоцидностью HCT- теста базального и стимулированного повышались на 26,6% и на 36,3% соответственно, в опытной группе телят по отношению к контрольной. Показатели PTMJI (реакции торможения миграции лейкоцитов) увеличивались на 11,7%, уровень циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови опытных телят был ниже на 4,3% по отношению к контрольной группе, что свидетельствует о повышении функционального состояния Т- и В - систем иммунитета.

7. Активность ферментов лимфоцитов у 10 суточных телят при применении Анандина изменялась следующим образом: активность ЛДГ была ниже на 16,6% в опытной группе по отношению к контрольной, СДГ в опытной группе выше на 25%, что свидетельствует о регуляции метаболизма лимфоцита на основе эффекта Пастера. Активность Г-6-ФДГ снижалась на 9,5%.

При введении Анандина 30 суточным телятам отмечали снижение активности ЛДГ на 9,5% по отношению контролю, увеличение СДГ на 21%, а-ГФ-ДГ на 31,5%, Г-6-ФДГ на 24%, НАД-окс на 50%, НАДФ-окс на 18%

ГФ-ДГ на 31,5%, Г-6-ФДГ на 24%, НАД-окс на 50%, НАДФ-окс на 18% соответственно. Полученные данные показывают высокую ферментативную активность лимфоцитов у телят опытной группы, что способствует активации функций клеток иммунной системы.

8. Однократное введение Анандина в динамике, телятам, на 1, 10 и 30 сутки их жизни вызывало достаточно сильное увеличение ряда иммунологических показателей реактивности лейкоцитов - РТМЛ с ФГА и РТМЛ с КонА; НСТб' и' НСТст; СДГ; ЦИК соответственно: 28%; 10,7%; 38,8%; 8,7%. Высокий уровень этих показателей сохранился в течение 30 суток.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Препарат Анандин рекомендуется как иммуностимулятор для повышения естественной резистентности и профилактики иммунодефицитного состояния организма телят в возрасте 1-3, 10-12, 30 суток.

2. Для успешного применения препарата Анандин рекомендовать его использование в дозе 0,2 мг/кг массы тела внутримышечно.

7. СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Гронский К.А. Влияние Анандина на биохимические показатели крови телят // Материалы 54-й научн. конф. молодых ученых и студентов/ СПбГАВМ.- С-Пб., 2000 г. С. 20.

2. Гронский К.А. Иммунологические показатели крови у телят после введения Анандина / Актуальные проблемы ветеринарной медицины: /Сб. научн. тр. СПбГАВМ.-. С-Пб., 2001 г.- N 133,- С. 37.

3. Гронский К.А. Влияние Анандина на организм телят // Материалы 55-й научн. конф. молодых ученых и студентов/ СПбГАВМ.- С-Пб., 2001 г. С. 19 .

Подписано в печать 01.11.2002 г, Формат 60x84/16. Бумага офсетная. Объем 1,5 п.л. Тираж 100 экз. Зак. 115, ООО "Репринт", С.-Петербург, ул. М, Говорова, 8А

Актуальность темы. Глобальное загрязнение окружающей среда, несоблюдение ветеринарно-сашггарных я гигиенических условий содержания животных и кормления, активное применение лекарственных средств, наличие стресс-факторов и использование интенсивных технологий часто приводит к снижению реактивности организма животного. Влияние различных антропогенных факторов вызывает глубокие изменения и проявление определенных системных патологий. В такой ситуации организм животного оказывается неспособным к адекватному ответу, что особенно актуально в условиях современного животноводства.

В настоящие время проводится большая работа по созданию оптимальных условий содержания и выращивания животных и поиск новых решений, направленных на повышение естественной резистентности, сохранения здоровья и получение высокой продуктивности.

Практический интерес, в данной ситуации, представляют стимулирующие средства, моделирующие иммунные реакции организма. К наиболее перспективной, успешно развивающейся группе иммуностимуляторов, относятся синтетические фармакологические средства.

Из них, наибольший интерес представляют низкомолекулярные синтетические соединения, среди которых особенно выделяются производные акридонуксусной кислоты. Кроме специфического воздействия на организм - корректирования иммунодефицитных состояний - эти препараты оказывают целый ряд позитивных биолого-хозяйственных эффектов ( В.Д. Соколов, Н.Л. Андреева, А.Ф. Кузнецов, Н.В. Мухина, З.Н. Мухина,Травкин О.В., Яковлева Е.В., и др.).

Универсальным представителем этого класса средств является сравнительно новый синтезированный препарат «Анандин». Препарат зарекомендовал себя как эффективное противовирусное и иммуностимулирующее средство. Поэтому мы решили применить

Анандин» в качестве иммуностимулятора в критические периоды жизни телят - сразу после рождения, в возрасте 10 и 30 суток.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы было изучение возможности применения анандина в качестве иммуностимулирующего средства у новорожденных телят в вышеуказанные критические периоды их развития.

В связи с этим, для решения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Изучить влияние препарата «Анандин» (однократное введение, доза 0,2 мг/кг массы тела) на организм телят неонатального возраста (1-3 суток, 10-12 суток и 30 суток):

- клиническое состояние организма животных, включая исследование копрограммы;

- морфологические и биохимические показатели крови телят;

- иммунологические показатели сыворотки крови телят;

- активность ферментов лимфоцитов в сыворотке крови телят;

- лизоцимную активность сыворотки крови телят;

- бактерицидную активность сыворотки крови телят.

2. Определить наиболее эффективную схему введения препарата «Анандин» телятам в критические периоды.

Научная новизна. Впервые определена эффективность применения телятам неонатального возраста препарата «Анандин» в качестве иммуностимулирующего средства в дозе 0,2 мг/кг массы тела внутримышечно.

Изучены и представлены данные по влиянию анандина на факторы неспецифической защиты организма телят: лизоцимную и бактерицидную активность сыворотки крови.

Впервые получены и обработаны иммунологические показатели сыворотки крови телят по НСТ-тесту ( тест восстановления нитросинего тетразолия) и ЛКТ-тесту (л изосомал ьно-катионный тест), которые указывают на кислородзависимую и кислороднезависимую стадии фагоцитоза; ЦИК (циркулирующие иммунные комплексы) и РТМЛ (реакция торможения миграции лейкоцитов), отражающие функциональное состояние гуморального и клеточного иммунитета.

С целью изучения динамики метаболических реакций проведены исследования активности ферментов лимфоцитов ЛДГ(лактат дегидрогеназа), С Д Г (сукцинат дегидрогеназа), оксиредуктазы: НАДФ (никотинамидадениндинуклеотидфосфат) и НАД (никотинамидаденин-динуклеотид), Г-бф-ДГ (глюкозо- 6 фосфат дегидрогеназа), а-Гф-ДГ (альфа-глицерофосфат дегидрогеназа), показывающих интенсивность обменных процессов на уровне клетки, обеспечивающих гомеостаз естественной резистентности животных.

Практическое значение работы. Отработаны схемьг применения анандина у телят в критические периоды их жизни: после рождения на 1-3, 10-12 и 30 сутки. Результаты проведенных исследований позволяют предложить «Анандин» в качестве эффективного иммуностимулятора в дозе 0,2 мг/кг массы тела внутримышечно. Его однократное введение повышает резистентность и сопротивляемость организма, укрепляет иммунную систему, повышенная реактивность которой сохраняется не менее 30 суток.

Апробация работы.

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на конференции профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов (Санкт-Петербург, СПбГАВМ, 2000, 2001, 2002 г.г.); на конференциях молодых ученых и студентов (Санкт-Петербург, СПбГАВМ, 2000, 2001, 2002 г.г.).

Публикацни.

Основные положения диссертации опубликованы в 3-х печатных работах.

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 127 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, списка использованной литературы и приложения. Работа содержит 14 таблиц, 8 рисунков. Список литературы включает 254 наименований, в том числе 71 - иностранных авторов.

выводы

1. Препарат «Анандин» при парентеральном введении телятам в дозе 0,2 мг/кг однократно не обладал местнораздражающим действием и не оказывал отрицательного влияния на физиологическое состояние животных. Применение анандина обеспечивало 100% сохранность опытного поголовья телят. Слизистые оболочки ротовой полости имели бледно-розовую окраску. Телосложение телят было крепким и пропорциональным. Телята живо реагировали на внешние раздражители. Тонус мышц у телят был нормальным.

2. Копрологические исследования у телят опытных групп показали наличие слизи и мыла в небольшом количестве по сравнению с таковым в контрольной группе животных; отсутствие жирных кислот. Показатель рН кала в опытной группе был несколько выше, чем у контрольных животных. Остальные показатели - билирубин, стеркобилин - существенных различий не имели, как в сравнении с показателями контрольной группы, так и в динамике эксперимента.

3. Применение анандина телятам оказывало благоприятное влияние на морфологические и биохимические показатели крови. Количество эритроцитов у 10-суточных телят, которым вводили анандин, было выше на 9,6%; у 30-суточных - на 8,4%, чем у телят контрольной группы. Уровень гемоглобина возрастал на 3,2% и на 4,2% соответственно. Количество лейкоцитов повышалось у 10-суточных телят на 32,6%, у 30-суточных - на 12,5%. Показатели Са, Р (неорганический), резервной щелочи и каротина существенных изменений не претерпели.

4. Содержание общего белка в сыворотке крови телят опытной группы несколько уменьшалось; количество альбуминов у 10-суточных телят понижалось на 8,6%, а у 30-суточных - на 15,3% по отношению к показателям контрольной группы; из фракции глобулинов у 10- и 30-суточных телят отмечали увеличение алфа-глобулинов на 7,7% и 9,1% по отношению к показателям контроля; содержание бета-глобулинов увеличивалось на 8,2% и 21,7%, а дом гамма-глобулинов была выше на 17,5% и 35,8%>, в сравнении с данными контроля.

5. Использование анандина способствовало активизации факторов неспецифической защиты организма посредством повышения уровня бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови. У 10- и 30-суточных телят при применении анандина бактерицидная активность сыворотки крови была выше на 11,9% и 5,6%, а лизоцимная активность - на 5,4% и 10%, по отношению к данным в контрольной группе.

6. Показатели фагоцитоза с кислородзависимой биоцидностью НСТ-теста базального и НСТ-стимулированною повышались в опытной группе телят по отношению к контрольной на 26,6% и 36,3% соответственно. Показатели РТМЛ (реакции торможения мшрации лейкоцитов) увеличивались на 11,7%; уровень циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови опытных телят был ниже на 4,3% по отношению к уровню в контрольной группе, что свидетельствует о повышении функционального состояния Т- и В-сист ем иммунитета.

7. Активность ферментов лимфоцитов у 10-суточных геляг при применении анандина изменялась следующим образом: активность ЛДГ была ниже на 16,6%) в опытной группе по отношению к контрольной, СДГ в опытной группе выше на 25%, что свидетельствует о регуляции метаболизма лимфоцита на основе эффекта Пастера. Активность Г-6-ФДГ снижалась на 9,5%.

При введении анандина 30-суточным телятам отмечали снижение активности ЛДГ на 9,5% по отношению к активности в контроле, увеличение СДГ на 21%, а-ГФ-ДГ на 31,5%, Г-6-ФДГ на 24%, НАД-окс на 50%, НАДФ-окс на 18% соответственно. Полученные данные показывают высокую ферментативную активность лимфоцитов у телят опытной группы, что способствует активации функций клеток иммунной системы.

8. Однократное введение анандина в динамике телятам на 1, 10 и 30 сутки их жизни вызывало достаточно сильное увеличение ряда иммунологических показателей реактивности лейкоцитов - РТМЛ с ФГА и РТМЛ с КонА; НСТб и НСТст; СДГ; ЦИК соответственно на 28%; 10,7%; 38,8%: 8,7%. Высокий уровень этих показателей сохранился в течение 30 суток.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Препарат «Анандин» рекомендуется как иммуностимулятор для повышения естественной резистентности и профилактики иммунодефицитного состояния организма телят в возрасте 1-3, 10-12, 30 суток.

2. Для успешного применения препарата «Анандин» рекомендовать его использование в дозе 0,2 мг/кг массы тела внутримышечно.

- 106